JPH01202291A - ダクチロサイクリンａおよびダクチロサイクリンｂ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はダクチロサイクリン（ｄａｃｔｙｌｏｃｙｃｌ
ｉｎｅ　）Ａおよびデクチロサイクリン８１更に詳しく
は、ダクチロスポランギウム（Ｄａｃｔｙｌｏｓｐｏｒ
ａｎｇｉｕｍ　）属微生物（Ａ、Ｔ、ｃ、ｃ、ｋ・アメ
リカン・タイプ・カルチャー・コレクション）Ａ５３６
９３）の菌株の培養によって得られる抗生物質ＥＭＳ　
５８６に含まれる新規で有用な両成分に関する。

本発明によれば、Ａ、Ｔ、Ｃ，Ｃ，に寄託しているダク
チロスポランギウム属微生物（Ａ、Ｔ、Ｃ，Ｃ，Ａ　５
３６９３）の菌株の培養により、抗生物質ＥＭＳ　５８
６が得られる。このＥＭＳ　５８６は、これを分析する
と、４つの成分で構成されることがわかった。これらの
成分の２つは、７−クロロ−４−ジメチルアミノ−８−
メトキシ−１，４，４ａ　、５．５ａ　、６゜１１．１
２ａ　　−オクタヒトｏ−３，４ａ、６．１０．１２゜
１２ａ−ヘキサヒドロキシ−６−メチル−１，１１−ジ
オキソ−２−ナフタセンカルボキサミド（以下、４ａ−
ヒドロキシ−８−メトキシ−ＣＴＣと称す）と、ＰＣＴ
出願公開第ＷＯ３７１００８３２号（１９８７年２月１
２日公開）に記載の化合物である。他の２つの成分はダ
クチロサイクリンＡおよびダクチロサイクリンＢであっ
て、これらはダラム陽性菌（テトラサイクリン−耐性菌
を含む）に対して活性を有する。

本発明に係るダクチロサイクリンＡおよびダクチロサイ
クリンＢの分析結果は、添付図面に示されている。

第１図は、ダクチロサイクリンＡの臭化カリウムの赤外
スペクトル、 第２Ａ〜Ｃ図は、ダクチロサイクリンＡの陽イオンモー
ドの速原子衝撃マススヘクト／Ｌ／　（ｆａｓｔａｔｏ
ｍ　ｂｏｍｂａｒｄｍｅｎｔ　ｍａｓｓ　ｓｐｅｃｔｒ
ｕｍ　）、第３Ａ〜Ｃ図は、ダクチロサイクリンＡの陰
イオンモードの速原子衝撃マススペクトル、第４Ａ、Ｂ
図は、ダクチロサイタリンＡのシュウチリウム置換メタ
ノール中の６７．５ＭＨｚ、　　Ｃ−ＮＭＲスペクトル
、 第５図は、ダクチロサイクリンＡのシュウチリウム置換
メタノール中の４００　ＭＨｚ、　Ｈ−ＮＭＲスペクト
ル、 第６図は、ダクチロサイクリンＢの臭化カリウムの赤外
スペクトル、 第７Ａ〜Ｃ図は、ダクチロサイクリンＢの陽イオンモー
ドの速原子衝撃マススペクトル１、第８Ａ〜Ｃ図は、ダ
クチロサイクリンＢの陰イオンモードの速原子衝撃マス
スペクトル、および第９図は、ダクチロサイクリンＢの
シュウチリウム置換メタノール中の４００ＭＨｚ、’Ｈ
−ＮＭＲスペクトルである。

本発明において、抗生物質ＥＭＳ　５８６の製造に用い
る微生物は、沼地水に見られる腐葉物から単離したダク
チロスポランギウムの菌株である。

この微生物の二次培養は、メリーランド州、ロックビル
のＡ、Ｔ、Ｃ，Ｃ，の永久保存コレクションから入手し
うる。この寄託番号は、Ａ、Ｔ、Ｃ，Ｃ，Ａ　５３６９
３である。この微生物以外に、該微生物の変異菌株（た
とえばＸ線、紫外線照射、遺伝操作またはナイトロジエ
ン・マスタードの使用によって得られる変異菌株）も使
用でき、これを培養することによりＥＭＳ　５８６を製
造する。

腐葉物に存在するダクチロスポランギウム属微生物（Ａ
、Ｔ、Ｃ，Ｃ，悪５３６９３）を単離するには、先ず腐
葉物を殺菌希釈剤（たとえば０．０１％のゼラチンを含
有する緩衝食塩水）に懸濁し、７０℃で２０分間培養す
ることにより行うことができる。次いで懸濁液を栄養培
地に塗りつけ、シクロヘキシイミドを補給する。培地の
組成は、以下の通りである。

組成分　　　　　　　　　　　　　　　　　　ＪＫ２Ｈ
ＰＯ４０，７ Ｋ　Ｈ２Ｐ　０４　　　　　　　　　　　　　　　　０
．３Ｍｇ　ＳＯ４・７　Ｈ２００，２１ ＦｅＳＯ４”　７　Ｈ２Ｏ０，Ｏｌ ＺｎＳＯ４”　７　Ｈ２Ｏ０，０２ ＭｎＣ６２・４　Ｈ２Ｏ２，００１５ 寒天　　　　　　　　　　　　　　　　２０米 コロイドキチン　（１，２５％溶液）　　　　４０ｍｆ
ｆ１蒸留水　　　　　　　　　　　　　　９６０ｄシク
ロヘキシイミド００．１ 往来〕　メツカー・Ｎ、　Ｓ、およびＴ、クロスのＪ、
Ａｐｐｌ。

Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、、５２　：　２０９〜２１８頁、
１９８２年の記載に準じて製造する 未来）濾過殺菌を行い、予め１２１℃で３０分間殺菌し
た培地へ加える ２８℃で８日間の培養後、平板サンプルからダクチロス
ポランギウム属微生物（Ａ、Ｔ、Ｃ，Ｃ，Ａ　５３６９
３）のコロニーを単離し、下記組成からなる寒天培地に
移す。

組成分　　　　　　　　　　　　　　　　　Ｌグルコー
ス　　　　　　　　　　　　　　　　　ｌ可溶スターチ
　　　　　　　　　　　　　　２４ビーフエキス　　　
　　　　　　　　　　　　３トリプトン　　　　　　　
　　　　　　　　　　　５酵母エキス　　　　　　　　
　　　　　　　５ＣａＣＯ３４ 水道水　　　　　　　　　　　　　　　　　１ｅ次に、
培地を１２１℃のオートクレーブで２０分間殺菌する。

このダクチロスポランギウム属微生物（Ａ、Ｔ、Ｃ。

Ｃ，＆　５３６９３　）は、寒天表面の植物性菌糸から
直接、小さな指状の胞子のうの発生によって特徴づけら
れる。胞子のうは、リンゴ酸カルシウム寒天（ワックス
マン・Ｓ、Ａ、の「放射菌：最新情報の要約（Ｔｈｅ　
Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ　：　ａ　Ｓｕｍｍａｒｙ
　ｏｆ　ＣｕｒｒｅｎｔＫｎｏｗｌｅｄｇｅ　）　　Ｊ
、ロナルド・プレス、ニュー　Ｅｌ　−り州、１９６７
年）および土壌抽出寒天（ワックスマン−Ｓ＝Ａ、の［
放射菌（Ｔｈｅ　Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ　）］、
Ｖｏ１．ＩＩ、属および種の分類、同定および解説、ウ
ィリアムズ・アンド・ウィルキンズ・カンパニー、ボル
チモア州、１９６１年）で豊富に生産される。各胞子の
うば、運動能力のあるまっすぐＩＣｔ２／ｖり３〜４つ
の胞子を含有する。また培養によって、植物性菌糸の横
側に産生ずる球状体が得られる。これらの球状体の顕微
鏡試験によって、その中の無定形集団が胞子の中へ発育
しないことが明らかである。真性胞子はリンゴ酸カルシ
ウム寒天や土壌抽出寒天において優勢で、これらの媒地
に幾つかの球状体が見られる。

全細胞の酸加水分解物は、メソ−ジアミノピメリン酸お
よびグリシンを含有し、これらは細胞壁から発生する。

キシロースおよびアラビノースは、細胞壁の優勢な糖成
分である。この組成は、レチャバリアーおよびレチャバ
リアーのｒ　ｒｎｔｅｒｎ。

Ｊ、　５ｙｓｔ、　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ　Ｊ　、　２０
　：　４３５〜４４３頁、１９７０年に記載の、タイプ
■細胞壁を示すものである。

この形態学的特徴、すなわち、指状胞子のうおよび球状
体がタイプ■細胞壁に結合して産生ずることは、この微
生物がチーマン・Ｊ、、Ｈ，パガニおよびＧ、バレッタ
のｒ　Ａｒｃｈｉｖ、　ｆｕｒ　Ｍｉｋｒｏｂｉｏｌ、
　Ｊ　。

５８：４２−５２頁、１９６７年に記載の属の解説に従
って、ダクチロスポランギウム属のアクチノプラーネス
（Ａｃｔｉｎｏｐｌａｎａｃｅａｅ　）科の一員に分類
される。

抗生物質ＥＭＳ　５８６は、ダクチロスポランギウム属
微生物（Ａ、Ｔ、Ｃ，Ｃ，Ａ　５３６９３　）を、同化
性炭素源および同化性窒素源を含む水性栄養培地におい
て、好気性深部培養条件下で２８℃付近にて培養するこ
とにより製造することができる。所望の抗生物質の実質
的な生成が起るまで、通常約１２０〜１４４時間にわた
って発酵を行う。これは、プロティン合成の抑制、すな
わち、ペニシリンＧによる誘発に基づくβ−ラクタマー
ゼの再合成の抑制を判定するアッセイによって決定する
ことができる。また後に行う単離操作も、この方法で監
視することができる。

ダクチロサイクリンＡおよびダクチロサイクリンＢは、
通常の方法によって、ブロス上澄液および細胞群の両方
から、それらの遠心分離後に単離することができる。ブ
ロス上澄液から抗生物質を回収するため、ｐＨを約５に
調整し、次いで酢酸エチルで活性物を抽出する。この有
機抽出物を減圧濃縮して油状残渣とし、次いでこれをカ
チオンおよびアニオン交換樹脂で精製した後、向流遠心
クロマトグラフィーを行い、純粋なＥＭＳ５８６成分（
ダクチロサイクリンＡおよびダクチロサイクリンＢ）を
得る。なお、最初の樹脂収着工程でＢｉｏ−Ｒａｄ　　
ＡＧＭＰ　−５０’カチオン交換樹脂（−一型）を用い
る。

注＊−）　　Ｂｉｏ　−Ｒａｄ　　ＡＧＭＰ　−５０：
キャリホルニア州、リッチモンド市のビオ−ラッド・ラ
ボ＋ ラドリーズの−ＣＨ２Ｎ　　（ＣＨ３）３　基が結合し
た高分子網状スチレン−ジビニルベンゼン共重合体樹脂 このカチオン交換樹脂から、活性成分をピリジン／アセ
トニトリル／水で溶離する。次いで活性溶出液をアニオ
ン交換樹脂Ｂｉｏ−Ｒａｄ　　Ａ　Ｇ　Ｍ　Ｐ　−一米 １　（Ｃｌ　型）　に収着せしめ、酢酸／アセトニトリ
ル／水で溶離する。次いで、５ｅｐｈａｄｅｘ　Ｌ　Ｈ
−２０門こてアセトニトリル／水／トリフルオロ酢酸を
用いるクロマトグラフィーに付し、ＥＭＳ５８６成分の
ダクチロサイクリンＡ１ダクチロサイクリンＢおよびダ
クチロサイクリンＣと、公知化合物の４ａ−ヒドロキシ
−８−メトキシ−ＣＴＣを分離する。

往来）　　Ｂｉｏ−Ｒａｄ　　ＡＧＭＰ−１：キャリホ
／Ｌ／−ア州、リッチモンド市のビオ−ラッド・ラボラ
トリーズの−Ｓ０３基が結合した高分子網状スチレン−
ジビニルベンゼン共重合体樹脂 材）　５ｅｐｈａｄｅｘ　Ｌ　Ｈ−２０：　スウェーデ
ン国、アブサラのファーマシア・ファイン・ケミカル・
ＡＢのアルキル化架橋型デキストランゲルビーズ 次に、下相のクロロホルム／メタノール／水で遠心性対
向流クロマトグラフィ、−を行い、新規化合物のダクチ
ロサイクリンＡ１ダクチロサイクリンＢおよびダクチロ
サイクリンＣを分離する。

またダクチロサイクリンＡ１ダクチロサイクリンＢおよ
びダクチロサイクリンＣは、細胞群のメタノールによる
抽出によっても得為ことができる。すなわち、メタノー
ル抽出物を減圧濃縮し、得られる水溶液をｐＨ５に調整
し、酢酸エチルで抽出して活性を回復せしめる。次いで
、上述のカチオンおよびアニオン交換樹脂におけるクロ
マトグラフィー、ＬＨ２０クロマトグラフィーおよび向
流遠心クロマトグラフィーによって、精製を行う。

ダクチロサイクリンＡおよびダクチロサイクリンＢは、
ダラム陽性菌（テトラサイクリン−耐性菌を含む）に対
して活性で、それぞれ、たとえばヒトなどの咽乳動物の
グラム陽性菌感染の治療に用いることができる。

次に挙げる実施例は、本発明の具体例である。

実施例１ ダクチロサイクリンＡおよびダクチロサイクリンＢの製
造ニー 水道水中のオートミール２％およびトマトペースト２％
からなる斜面寒天に、ダクチロスポランギウム属微生物
（Ａ、Ｔ、Ｃ，Ｃ，五５３６９３　）を播種し、２８℃
で１４日間培養する。得られる発育物ヲ用い、５００ｍ
Ｑのエルシンマイヤーフラスコ中で１００ｍＱ部の水性
培地を接種する。発芽培地の組成は、以下の通りである
。

組成分　　　　　　　　　　　　　　　　　−！＝ニブ
ルコース　　　　　　　　　　　　　　　　１可溶スタ
ーチ　　　　　　　　　　　　　　２４ビーフエキス　
　　　　　　　　　　　　　　　３トリプトン　　　　
　　　　　　　　　　　　５酵母エキス　　　　　　　
　　　　　　　　５ＣａＣＯ３４ 冷水道水（全体を１００１００Ｏ この培地の使用に先立ち、ｐＨ７，０に調整し、１２１
℃で３０分間殺菌する。

このように接種した発芽試験フラスコを回転振とう機に
て、２８℃で９６時間培養する。振とう機は２−インチ
偏心距離で回転速度３００　ｒｐｍ、にて作動させる。

２００ｍＱ、５００ｍｆｆ１のエルレンマイヤーフラス
コに入った新しい１００ｍＱ部の同培地に対し、発芽フ
ラスコから１％の移行を行う。接種したフラスコを、２
−インチ偏心距離、回転速度３００ｒｐｍで作動する回
転振とう機にて、２８℃で１４４時間培養する。β−ラ
クタマーゼなどの再プロティン合成の抑制を判定するア
ッセイによって、生活性の量を測定する。このアッセイ
において、被試験サンプル（２５０μｌ）を、殺菌チュ
ーブ内の２ｄのアンチビオティック・アッセイ・ブロス
（Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ　Ａｓ５ａｙ　Ｂｒｏｔｈ　）
　（メリーランド州、カカイスビルのＢＢＬラボラトリ
ーズ）に加える。また、スクイブ・カルチュア・コレク
ション（５ｑｕｉｂｂ　Ｃｕ１ｔｕｒｅ　Ｃｏ１１ｅｃ
ｔｉｏｎ　）から入手したバチルス属すチェニホルミス
（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）Ｓ
Ｃ９２６２のＡｎｔｉｂｉｏｔｉｃ　Ａｓ５ａｙ　Ｂｒ
ｏｔｈに、０゜５　＋ｎ（！の一夜培養物および１００
μｇのペニシリンＧ溶液（１００μｇ／ｍＱ）を加える
。３７℃で２．５時間培養後、色素生成性セファロスポ
リンである（６Ｒ−トランス）−３−［２−（２，４−
ジニトロフェニル）エチニル）−８−オ＋ソー７−Ｃ（
フェニルアセチル）アミノコ−５−チア−１−アザビシ
クロ［４，２，０］オクト−２−エン−２−カルボン酸
５０〜を５ｍＱのジメチルスルホキシドに溶解し、９５
ｍＱの５０ミリＭ−リン酸塩緩衝液（ｐＨ７，０）で希
釈した溶液３０μｇを加える。黄色からピンク色への急
な色変化は、誘発酵素β−ラクタマーゼによる色素生成
性セファロスポリンの加水分解を意味する。かかる色変
化の抑制は、本発明の抗生物質の生成の目安であり、こ
こに該抗生物質は酵素β−ラクタマーゼの生成を抑制す
るっ収穫時、フラスコの内容物をプールし、このプ＼ 一ルしたブロスを遠心分離して、約１６１の上澄液と５
．５　ｋｑの湿った細胞を得る。上澄液のｐＨを約５に
調整し、６．７ｅ部の酢酸エチルで３回抽出する。トー
タル５４４のブロス上澄液から得た抽出物をコンバイン
し、減圧濃縮して面状固体とする（３．４６ｇ）。固体
をアセトニトリル／水（１：１）７０ｍ（！に溶解し、
同溶剤中に詰めた２００〜４００メツシユのＡＧＭＰ−
５０樹脂（Ｈ＋型）のカラム（１，５Ｘ１３（７））に
適用する。カラムを１８０ｍ（！の溶剤で洗った後、抗
生物質をピリジン／アセトニトリル／水（８：４６：４
６）溶剤２１５ｍＱで溶離する。溶出液を、アセトニト
リル／水（１：１）中に詰めた１００〜２００メッシｊ
−のＡＧＭＰ−１樹脂（（Ｊ’−型）（７）力ｊム（１
，５ｘ１０口）に通す。最初に該樹脂を２２５ｍＱの同
溶剤で洗浄後、酢酸／アセトニトリル／水（２：４９：
４９）溶剤で抗生物質を溶離する。活性溶出液を減圧濃
縮して、褐色固体とする（０．２８．９）。

０．１４．ｐ部の固体を２ｍｆｆ１のアセトニトリル／
水／トリフルオロ酢酸（６６：３３：０．１）に溶解し
、これを同溶剤混合物中に詰めたＳ　ｅｐｈａｄｅｘ　
ＬＨ−２０のカラム（２，５ｘ４（１＋ｓ）にてクロマ
トグラフィーに付す。最初の活性画分を集め、プールし
、減圧濃縮して３７Ｍ＋９のダクチロサイクリン複合体
を得る。溶離する第２活性ピークも集め、減圧濃縮して
７５〜の公知化合物である４ａ−ヒドロキシ−８−メト
キシ−ＣＴＣを得る。

上記で得たダ久チロサイクリン複合体（１１５’Ｚ　）
　ヲ、クロロホルム／メタノール／水（７：１３：８）
の二相溶剤混合物４ｍＱに溶解し、これを分離抽出器（
Ｉｔｏ　Ｍｕｌｔｉ　−Ｌａｙｅｒ　Ｃｏ１１５ｅｐａ
ｒａｔｏｒ−Ｅｘｔｒａｃｔｏｒ、Ｐ、Ｃ−インコーホ
１／イテツド、メリーランド州、ポトマツク）にて、同
溶剤系でクロマトグラフィーに付し、この場合分離抽出
器の作動は、３３０ｍＱ容量の多層テフロンチューブ（
内径１．６　ａｍ　）コイルを用い、８００　ｒｐｍで
行う。上相の移動と共に溶離を終える。５６５ｍ（！の
移動相を集めた後、下相を回収し、バイオアッセイに従
って両分をコンバインする。４つの活性ピークを回収す
る。３つはダクチロサイクリンＡ、ダクチロサイクリン
ＢおよびダクチロサイクリンＣで、４つ目は残った４ａ
−ヒドロキシ−８−メトキシ−ＣＴＣである。回収の順
番および量は、ダクチロサイクリンＣ（２，７＃、１１
０〜１１５ｍＱ）、ダクチロサイクリンＡ（２６，３Ｍ
９．１２５〜１５０　ｍＱ　）、４ａ−ヒドロキシ−８
−メトキシ−ＣＴＣ（１１＃、３５５〜４８５ｍｆｆ１
）およびダクチロサイクリンＢ（１３，７！Ｉｔｇ、７
８５〜８８５ｍ（りである。

ダクチロサイクリンＡは、末端吸収以外に３６９（１６
０）、２６１（１７０）および２３８（２００）ｎｍに
メタノール中の紫外線吸収最大値（Ｅ”）を有する。吸
収最大値のシフトは、酸の添加時に検出することができ
ない。吸収最大値は、塩基の添加時に３８６（１５０）
、２７９（１７０）および２４３　（２１０）　ｎｍに
移動する。

ダクチロサイクリンＡの臭化カリウムの赤外スペクトル
を第１図に示す。ピークは１６７７．１６０９．１３８
４．１２４１．１２０４および１１３６１　に顕著であ
る。第２Ａ〜Ｃ図に、ジメチルスルホキシド／ジチオス
レイトール／ジチオエリスリトール／グリ、セロール（
以下、ＤＤＤＧと称す）における陽イオンモードの速原
子衝撃（ＦＡＢ）マススペクトルを示す。第３Ａ〜Ｃ図
に、ＤＤＤＧにおける陰イオンモードのＦＡＢマススペ
クトルを示す。Ｍ＋Ｈイオンの高分解質量測定により、
６９８．２２８２ダルトンの質量が得られる。第４Ａ、
Ｂ図にダクチロサイクリンＡのシュウチリウム置換メタ
ノール中の６７．５ＭＨｚ、　　Ｃ−ＮＭＲスペクトル
、を示す。第５図にシュウチリウム置換メタノール中の
４００　ＭＨｚ、　Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す。ダク
チロサイクリンＡはメタノール、アセトニトリル／水混
合物およびジメチルスルホキシドに可溶であるが、アセ
トニトリル、クロロホルム、ベンゼンまたは水には実質
的に溶解しない。

ダクチロサイクリンＡは、逆相薄層平板（ウオットマン
（Ｗｈａｔｍａｎ　）　Ｋ　ＣＩＢ、２００μ）にて、
ジメチルホルムアミド／アセトニトリル／ｐＨ４，２緩
衝液（３：４：３）溶剤を用いるクロマトグラフィーに
付した場合、０．３３のＲｆ値を有する。緩衝液の組成
は、エチレンジアミンテトラ酢酸ジナトリウム塩０．５
　ｍＭ　、クエン酸１５ｍＭ、クエン酸ナトリウム２０
ｍＭおよび硝酸カリウム５０ｍＭである。ダクチロサイ
クリンＡは、Ｗａｔｅｒｓ　　μＢ　ｏｎｄａｐａｋフ
ェニルカラム（０，４５ｘ３０ｃｒｌＩ）にて流速１ｍ
ｌ！／分のＨＰＬＣでクロマトグラフィーに付した場合
、３．２８分の保留時間を有する。このシステムで、薄
層クロマトグラフィー分析の場合に記載した同じ溶剤を
用いる。

ダクチロサイクリンＢは、末端吸収以外に３７３（１９
０）、２６２（２００）および２３８（２５０）　ｎｍ
にメタノール中の紫外線吸収最大値＜　Ｅ　１％）を有
する。酸の添加時の吸収最大値は３６８（１８０）、２
６１（２，２０）および２３８（２４０）ｎｍに移動す
る。塩基の添加時の吸収最大値は、３８５（１８０）、
２８１（２００）および２４３（２６０）ｎｍに移動す
る。ダクチロサイクリンＢの臭化カリウムの赤外スペク
トルを第６図に示す。ピークは１７２５．１６０６．１
５４６．１３８２．１２４０．１１０２および９９３α
　に顕著である。第７Ａ〜Ｃ図に、ダクチロサイクリン
ＢのＤＤＤＧにおける陽イオンモー　Ｉ’（７）Ｆ　Ａ
　Ｂマススペクトルを示す。第８Ａ〜Ｃ図に、ダクチロ
サイクリンＢのＤＤＤＧにおける陰イオンモードのＦＡ
Ｂマススペクトルを示ス。

Ｍ＋Ｈイオンの高分解質量測定により、７１２．２１６
５ダルトンの質量が得られる。第９図にダクチロサイク
リンＢのシュウチリウム置換メタノール中の４００　Ｍ
Ｈｚ　、　’Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す。

ダクチロサイクリンＢは、逆相薄層平板（Ｗｈａｔ−ｍ
ａｎ　Ｋ　ＣＩＢ、２００μ）にて、ジメチルホルムア
ミド／アセトニトリル／ｐＨ４，２緩衝液（３：４：３
）溶剤を用いるクロマトグラフィーに付した場合、０．
１１のＲｆ値を有する。緩衝液の組成は、エチレンジア
ミンテトラ酢酸ジナトリウム塩０．５ｍＭ、クエン酸１
５ｍＭ、クエン酸ナトリウム２０　ｍＭおよび硝酸カリ
ウム５０ｍＭである。

ダクチロサイクリンＢは、Ｗａｔｅｒｓ　ｐ　Ｂｏｎｄ
ａｐａｋフェニルカラム（０，４５Ｘ３０α）にて流速
１ｍｆｆ１／分のＨＰＬＣでクロマトグラフィーに付し
た場合、４．８５分の保留時間を有する。このシステム
で、薄層クロマトグラフィー分析の場合に記載した同じ
溶剤を用いる。

ダクチロサイクリンＣは、末端吸収以外に３８１（１２
０）および２７５（１７０）ｎｍにメタノール中の紫外
線吸収最大値（Ｅ１％）を有する。

生物学的活性 本発明化合物の最小阻止濃度（以下、ＭＩＣと称す）を
測定するため、下記の方法を採用する。

すなわち、試験微生物を２０ｄのアンチビオティック・
アッセイ・ブロス（デイフコ）中で発育せしめるのに、
チューブ中のブロスに、斜面寒天ＢＨ１（デイフコ）か
らの輪状の生体を接種する。

接種したチューブを３７℃で１８〜２４時間培養する。

これらの培養物には、１０　コロニー形成単位（ＣＦＵ
）／ｍＱが含まれていることが推定される。培養物を１
００倍に希釈して、最終接種剤濃度１０７ＣＦＵを得る
。なお、希釈にはイースト・ビーフ・ブロス（Ｙｅａｓ
ｔ　Ｂｅｅｆ　Ｂｒｏｔｈ　）　（デイフコ）を用いる
。試験化合物を適当な希釈剤に１０００μｐ／ｒｎＱの
濃度で溶解する。イースト・ビーフ・ブロス（デイフコ
）において２倍希釈を行い、１０００〜０．５μｇ／ｍ
Ｑの範囲とする。１．５ｍＱ部の各希釈液を個々のベト
１皿に入れ、これに１３．５ｍＭのに一１０寒天を加え
る。Ｋ−１０寒天は以下の通りである。

組成分　　　　　　　　　　　　　　　　Ｊビーフエキ
ス　　　　　　　　　　　　　　　１．５イーストエキ
ス　　　　　　　　　　　　　３．０ペプトン　　　　
　　　　　　　　　　　６．０デキストロース　　　　
　　　　　　　　　　１・０寒天　　　　　　　　　　
　　　　　１５．０蒸留水（全体を１ｅに） 寒天中の最終薬物濃度は、１００〜０．０５μｙ／ｍ（
、の範囲となる。寒天のみを含有する微生物発育対照平
板を作成し、試験平板の前後に接種する。各平板の寒天
表面に、デンリイ・マルチポイント（Ｄｅｎｌｙ　Ｍｕ
ｌｔｉｐｏｉｎｔ　）接種器で微生物を適用して、寒天
表面に約１０’ＣＦＵを配分する。

各平板を３７℃で１８時間培養し、ＭＩＣ値を測定する
。なお、ＭＩＣ値とは、微生物発育を阻止する化合物の
最小濃度である。

本実験で選んだ試験微生物は、テトラサイクリン−感受
性菌株とテトラサイクリン−耐性菌株の対である。結果
を下記表１に示すが、これによると、本発明化合物とテ
トラサイクリン間で交叉耐性の無いことが認められる。

表１ テトラサ　　ダクチロサ　ダクチロサ （ＳＣ１００１６）　　　１°０　　６．３　　３°１
（ＳＧＢ　４２）　　　０°２１°６３°１（ｓ６４５
）１００３・１３・１ （ＳＣ９０５２） （ｓｃ９ｏ８□）５０．３・１３・１ （ＳＣ９７□６）＞１００　　２５　　６・３注杓　　
これら微生物の全ては、ニューシャーシー州、プリンス
トンのイー・アール・スクイブ・アンド・サンズ・イン
コーホレイテッドのスクイブ・カルチュアー・コレクシ
ョンかう入手未来）　　５ｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ
　　ａｕｒｅｕｓ１来）　　５ｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃ
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未来ｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　　ｆａｅｃａｌｉｓ

【図面の簡単な説明】

第１図〜第５図は、ダクチロサイクリンＡの分析結果を
示すチャート、および第６図〜第９図はダクチロサイク
リンＢの分析結果を示すチャートである。 特許出願人　　イー・アール・スクイブ・アンド・サン
ズ・インコーホレイテッド

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、第１図に示す臭化カリウムの赤外スペクトル、第２
   Ａ〜Ｃ図に示す陽イオンモードの速原子衝撃マススペク
   トル、第３Ａ〜Ｃ図に示す陰イオンモードの速原子衝撃
   マススペクトル、第４Ａ、Ｂ図に示す６７．５ＭＨｚ、
   ＾１＾３Ｃ−ＮＭＲスペクトル、および第５図に示す４
   ００ＭＨｚ、＾１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを有するダクチ
   ロサイクリンＡ。 ２、第６図に示す臭化カリウムの赤外スペクトル、第７
   Ａ〜Ｃ図に示す陽イオンモードの速原子衝撃マススペク
   トル、第８Ａ〜Ｃ図に示す陰イオンモードの速原子衝撃
   スペクトル、および第９図に示す４００ＭＨｚ、＾１Ｈ
   −ＮＭＲスペクトルを有するグクチロサイクリンＢ。 ３、ダクチロスポランギウム属微生物（Ａ、Ｔ、Ｃ、Ｃ
   、Ｎｏ．５３６９３）を培養することを特徴とする第１
   図に示す臭化カリウムの赤外スペクトル、第２Ａ〜Ｃ図
   に示す陽イオンモードの速原子衝撃マススペクトル、第
   ３Ａ〜Ｃ図に示す陰イオンモードの速原子衝撃マススペ
   クトル、第４Ａ、Ｂ図に示す６７．５ＭＨｚ、＾１＾３
   Ｃ−ＮＭＲスペクトル、および第５図に示す４００ＭＨ
   ｚ、＾１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを有するダクチロサイク
   リンＡの製造法。 ４、ダクチロスポランギウム属微生物（Ａ、Ｔ、Ｃ、Ｃ
   、Ｎｏ．５３６９３）を培養することを特徴とする第６
   図に示す臭化カリウムの赤外スペクトル、第７Ａ〜Ｃ図
   に示す陽イオンモードの速原子衝撃マススペクトル、第
   ８Ａ〜Ｃ図に示す陰イオンモードの速原子衝撃スペクト
   ル、および第９図に示す４００ＭＨｚ、＾１Ｈ−ＮＭＲ
   スペクトルを有するダクチロサイクリンＢの製造法。