JPH01128933A - ヒアルロニダーゼ阻害剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、新規なヒアルロニターゼ阻害剤に関する。さ
らに詳しくは、化膿、炎症、■型アレルギーのヒアルロ
ニターゼに起因する疾患を予防、防止するための新規か
つ安全性の高いヒアルロニターゼ阻害剤に関する。

〔従来の技術〕

従来、人体におけるヒアルロニターゼは皮膚表層に常在
するプロピオニバクテリウム　アクネス（Ｐｒｏｐｉｏ
ｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ａｃｎｅｓ　）や皮膚上の一
過性の菌であるスタフィロコッカス　アウレウス（Ｓｔ
ａｐｈｙｒｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ　）などがそ
の活性を有していることが知られている（Ａｐｐｌ、　
Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ。

ｇｙ　　ｑ、１４３４〜１４３６．１９６Ｂ）。スタフ
ィロコッカスアウレウスは化膿する際の原因菌として知
られているが、それが起こる際に菌がヒアルロニターゼ
を放出して皮膚組織のヒアルロニターゼを分解し増殖を
用意にしているという報告がある（Ｂｒｉｔ。

Ｊ、Ｅｘｐ、Ｐａｔｈ、２６．１２４．１９４５）。

一方菌体由来以外の人体のヒアルロニターゼは生体内の
さまざまな組織中に、通常不活性な状態で存在するが、
Ｎａ＋、Ｋ＋、Ｃａ＋、Ｍｇ２＋などの生体内金属イオ
ンおよびスペルミンや、スペルミジンなどの生体内有機
塩基により活性化される。

人体におけるヒアルロニターゼの生理学的意義は未だ不
明な点が多いが、毛細血管の透過性を光道させる起炎酵
素であること（Ｊ、Ｄｅｎｔａｌ　Ｒｅ５ｔ、３３゜１
１４．１９５８）などから、炎症と関係深い酵素である
ことがいわれている（Ａｒｃｈ、　Ｐａｔｈｏｌ、、８
５，２７２゜１９６８）。またクロモグリク酸ナトリウ
ムなどのＩ型抗アレルギー剤が本酵素を阻害することな
どから、■型アレルギーにおける本酵素の関与が示唆さ
れている（Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍ、、２．１３９．１
９８０）。

以上のように化膿時の悪化、炎症、Ｉ型アレルギーにヒ
アルロニターゼの関与が示唆されておりヒアルロニター
ゼを阻害すればこれらの疾患が軽減すると考えられる。

現在までにヒアルロニターゼを阻害する抗炎症剤（イン
ドメタシン、アスピリン、メフェナム酸など）や、抗ア
レルギー剤（クロモグリク酸ナトリウム、トラニラスト
、トラキサノックス、バイカレインホスフエイト、ケト
チフェン、アゼラスチン、シアニダノール、オキサトラ
イドなど）が報告されている（Ｐｈｙｓｉｏｌ、　Ｒｅ
ｖ、　２７．４３６．１９４７゜炎症と抗炎症療法、医
歯薬出版、７．４１１．１９８２）。

生薬については、甘草成分のりクイリチゲニンやイソリ
クイリチゲニン、黄募成分のパイカリン、バイカレイン
などに強いヒアルロニターゼ阻害が認められている。

、しかしこれらの物質はほかの配合成分との関係からヒ
アルロニターゼ阻害効果を発揮できなかったり、局所適
用における安全性有効性の点で必ずしも満足しえない。

〔発明が解決しようとする問題点〕

本発明は、現存するヒアルロニターゼ阻害剤の満足でき
ない点を考慮し、安全性が高く真にヒアルロニターゼ阻
害効果に優れた薬剤を得るべく鋭意研究を重ねた結果、
現在地の用途に使用されている数多くの生薬抽出エキス
にヒアルロニターゼ■害作用があるという全く新規な事
実を見出しこの知見にもとづいて本発明を完成するに至
った。

〔問題を解決するための手段〕

すなわち本発明は、シャクヤク、オオレン、オオバク、
ボタンピ、ゲンノショウコ、茶、クジン、シボタンツル
、オドリコソウ、サルビア、西洋ネズ、ハマメリスおよ
びバーチからなる群の１種または２種以上から選ばれる
生薬、または上記群の１種または２種以上から選ばれた
植物の溶媒抽出エキスを有効成分とするヒアルロニター
ゼ阻害剤を提供するものである。

以下本発明について詳しく説明する。

本発明における生薬とは植物体を乾燥し、粉砕したもの
であり、溶媒抽出エキスとは、特に明記しない限り次の
方法によって得られる上記植物またはその生薬抽出液、
その希釈液、その濃縮エキスあるいはその乾燥床を意味
するものとする。

溶媒抽出エキスは、上記植物または生薬乾燥床を、水も
しくは有機溶媒（石油エーテル、シクロヘキサン、四塩
化炭素、トルエン、ベンゼン、ジクロルメタン、クロロ
ホルム、エーテル、酢酸エチル、ブタノール、アセトン
、ｎ−プロパツール、エタノール、メタノール、ピリジ
ン、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール）
あるいはそれらを一定の比率で混合した溶媒、たとえば
、水性アルコールを用い、通常３℃〜７０℃で抽出処理
して得られる。以上の生薬、溶媒抽出は、そのまま、ま
たは希釈あるいは濃縮し、もしくは凍結乾燥した後、粉
末またはペースト状に調製し所望により適宜製剤化しヒ
アルロニターゼ阻害剤として用いることができる。

〔発明の効果〕ｌ１−ｔＡ・“〔費穂ｏｔり本発明のヒ
アルロニターゼ阻害剤は以下に説明する実施例から分か
るように、ヒアルロニターゼを強力かつ有効に抑制する
。さらに皮膚に対する刺激やホルモン様副作用を全く与
えないので皮膚に対して非常に安全である。

（実施例１） （１）　　ヒアルロニターゼの調製 ヒアルロニターゼ（牛畢丸由来シグマ社製）を最終濃度
が３４０　ＮＦｕｎｉｔ　／　ｍｌとなるように０．１
Ｍ酢酸緩衝液ＰＨ３，５調製した。

（２）溶媒抽出エキス試料の調製 乾燥し粉砕した生薬１〜１０ｇに１０倍量の水、メタノ
ールまたはこれらの混液を加え、振盪抽出するかまたは
、加熱還流下に抽出した後上漬と沈渣に分離した。上清
を減圧下に濃縮乾固して生薬抽出エキスを得、必要に応
じてこれを水またはメタノールで希釈して生薬抽出エキ
ス試料とした。

（３）　　ヒアルロニターゼ活性測定法ヒアルロニター
ゼ活性測定は、モルガンーエルソン（Ｍｏｒｇａｎ−Ｅ
ｌｓｏｎ）法を応用する方法に従って行った（ｉｂｉｄ
、、２４２，４３７．１９６７　）。

′酵素の緩衝溶液０．１ｍｌに、酵素の活性化剤の緩衝
液０．２ｍｌずつを加え、３７℃で２０分間放置し酵素
を活性化した。次に（２）溶媒抽出エキス試料の調製で
調製した溶媒抽出エキス試料の緩衝液あるいは炭酸ナト
リウム中和水溶液０．２ｍｌずつを加え、３７℃で２０
分間放置した。対象として用いる酵素溶液には、試料の
緩衝溶液あるいは炭酸ナトリウム中和水溶液０．２ｍｌ
のかわりに、緩衝液あるいは水０．２ｍｌずつを加えた
。その後ヒアルロン酸カリウム緩衝液０．５ｍｌを加え
、３７℃で４０分間反応させた。

０．４Ｎ水酸化ナトリウム０．２ｎ＋１を加えて反応を
停止した後、モルガンーエルフン法により発色させ５８
５ｍｍにおける吸光度を測定した。

Ｏモルガンーエルフン法 各反応液にホウ酸カリ溶液を加え、水溶中で３分間加熱
した後、流水中で冷却し、Ｐ−ジメチルアミノベンズア
ルデヒド試薬６．０ＬＩｌｌを加えた。

直ちに振盪した後、３７℃で２０分間発色させ５８５ｍ
ｍにおける吸光度を測定した。

（ホウ酸カリ溶液：　　０，８Ｍホウ酸水溶液１００＋
ａｌに水酸化カリウム２．２４ｇを加え溶解した。

Ｐ−ジメチルアミノベンズアルデヒド：Ｐ−ジメチルア
ミノベンズアルデヒド１０ｇを酢酸８７　、５ｍ　ｌお
よびＩＯＮ塩酸１２．５ｍｌに溶解した。本試薬は通常
冷蔵保存しておき、用時酢酸で１０倍希釈した。

阻害率は、式（１）により算出した。

ｃｏｍｐｏｕｎｄ４８／　８０　（シグマ社製）の最終
濃度が、それぞれ２．５ｎ＋Ｍ、０．１５Ｍおよび０．
１ｍｇ／ｍｌとなるように調製した緩衝溶液を用いた。

その結果を表−１に示した。

（比較例１） （１）　　ヒアルロニターゼの調製 実施例１の（１）ヒアルロニターゼの調製と同様に調製
した。

（２）　　ヒアルロニターゼ阻害剤の調製ヒアルロニタ
ーゼ阻害効果のある薬剤として知られているトラニラス
ト、クロルモノグリフ酸ナトリウム、シアニダノールの
試料を調製した。

（３）　　ヒアルロニターゼ活性の測定法実施例１　、
（３）ヒアルロニターゼ活性の測定法に準じて操作した
。

その結果を表−１に示した。

表−１各種生薬抽出エキスのヒアルロニターゼ阻害効果
とヒアルロニターゼ表−１から明らかなように本発明に
係るヒアルロニターゼ阻害剤は、生薬抽出エキス試料が
反応系中に０．００１〜０．１％存在する場合、２０％
〜８５％のヒアルロニターゼ阻害作用を示すことがわか
る。

さらにヒアルロニターゼ阻害剤として知られているトラ
ニラスト、クロルモノグリフ酸ナトリウム、シアニダノ
ールは、反応系中に０．１％存在しても、クロルモノグ
リフ酸トリウム以外は５０％以下のヒアルロニターゼ阻
害作用しかないことがわかった。

特許出願人　　株式会社　資生堂

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. シャクヤク、オオレン、オオバク、ボタンピ、ゲンノシ
   ョウコ、茶、クジン、シボタンツル、オドリコソウ、サ
   ルビア、西洋ネズ、ハマメリス、およびバーチからなる
   群の１種または２種以上から選ばれる生薬、または上記
   群の一種または２種以上から選ばれた植物の溶媒抽出エ
   キスを有効成分とするヒアルロニターゼ阻害剤