JP7478443B2 - 少なくとも1つの微生物を、その染色反応速度に従って検出するための方法および装置、ならびに検出支持体 - Google Patents
少なくとも1つの微生物を、その染色反応速度に従って検出するための方法および装置、ならびに検出支持体 Download PDFInfo
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Description
したがって、フローサイトメトリーの技術が現在、サンプルに存在する微生物を検出し、カウントするために一般的に使用されている。
この固相サイトメトリー法は濾過可能な母材のみに適用可能であること、固体支持体上にサンプルを堆積させてから、固体支持体上に存在する微生物の列挙で結果が得られるまでに必要な時間が相対的に長く、必要とされる時間は、実際には少なくとも90分と見積もられ、用途によっては最大4時間に達する場合もあることにも留意されたい。
これは、用途の分野によっては、偽陽性であることが判明したサンプルがさらなる調査を必要とすることになり、時間の点でコストがかかり、とりわけ、調査の期間中、生産ライン(例えばバイオ医薬品など)を運転停止にする必要がある場合、重大な経済的影響を与える可能性がある限りにおいて、既存の方法の真の欠点を構成する。
a)分析すべきサンプルを固体検出支持体上に堆積させるステップと、
b)少なくとも1つの細胞マーカーを発現させる(reveal)ことができる光放射で検出支持体を少なくとも1回照射するステップと、
c)少なくとも10mmの長さ×少なくとも10mmの幅の視野を標的とする光学撮像装置を用いて、検出支持体の少なくとも一部でサンプルの第1のフェーズP0において少なくとも1つの画像I0を取得するステップと、
d)検出支持体を介して少なくとも1つの細胞マーカーの制御された放出を実行して、マーカーを微生物と接触させるステップと、
e)微生物の染色反応速度の変化に従って少なくとも1つの微生物を検出するように、光学装置を用いて、前記マーカーの制御された放出のステップの後、少なくとも1つの後続のフェーズPiにおいてP0で画像が取得された検出支持体の各部分の画像Ii(i≧1)を取得するステップと、
f)P0で取得された画像I0と少なくとも1つの後続のフェーズPiで取得された各画像Iiとの間で検出支持体の部分ごとに比較分析を実行し、サンプル中の少なくとも1つの微生物の存在または不在に関して結論を引き出すステップとをこの順序で含んでいる。
a1)分析すべきサンプルを固体検出支持体上に堆積させるステップと、
b1)少なくとも1つの細胞マーカーを発現させることができる光放射によって検出支持体を局所的に照射するステップと、
c1)照射ステップb1)と同時に、少なくとも10mmの長さ×少なくとも10mmの幅の視野を標的とする光学撮像装置を用いて、検出支持体の少なくとも一部でサンプルの第1のフェーズP0において少なくとも1つの画像I0、I´0を取得するステップと、
d1)検出支持体を介して少なくとも1つの細胞マーカーの制御された放出を実行して、マーカーを微生物と接触させるステップと、
e1)細胞マーカーの制御された放出のステップd1)の後の5秒未満の経過時間の範囲内で、少なくとも1つの細胞マーカーを発現させることができる光放射で検出支持体を局所的に照射するステップと、
f1)照射ステップe1)と同時に、光学装置を用いて、マーカーの制御された放出のステップ後、少なくとも1つの後続のフェーズP1においてP0で画像が取得された検出支持体の各部分の画像I1、I´1を取得するステップと、
g1)光放射で検出支持体を少なくとも1回局所的に再照射するステップと、
h1)照射ステップg1)と同時に、微生物の染色反応速度の変化に従って少なくとも1つの微生物を検出するために、光学装置を用いて、
少なくとも1つの第2の後続のフェーズP2でP0およびP1で画像が取得された検出支持体の各部分の画像I2、I´2を取得するステップと、
i1)P0で取得された画像I0、I´0と少なくとも2つの後続のフェーズP1およびP2で取得された画像I1、I´1;I2、I´2との間で検出支持体の部分ごとに比較分析を実行し、サンプル中の少なくとも1つの微生物の存在または不在に関して結論を引き出すステップとをこの順序で含んでいる。
-検出支持体は、検出支持体をn+1の部分に空間的に分割する目的で、別個の経路に沿ってn個の移動を受け、その画像は、少なくとも2つのフェーズP0およびPiで取得され、ここで、nは、20以下の整数である、
-少なくとも20メガピクセルに等しい、好ましくは100メガピクセルを超える解像度を有する光学撮像装置が画像取得ステップc)およびe)またはc1)、f1)およびh1)において使用される、
-ステップf)またはi1)において少なくとも1つの微生物がサンプル中に存在すると結論付けられる場合、サンプル中に存在する微生物の列挙が実行される、
-細胞マーカーは蛍光マーカーである、
-ステップd)またはd1)において制御された方法で放出された細胞マーカーは、例えば粉末の形態の固体形態のカプセル化手段にカプセル化され、検出支持体は、マーカーを溶解させるための溶媒を含む、
-細胞マーカーは、液体形態のカプセル化手段にカプセル化される、
-カプセル化手段は熱感受性であり、ステップd)またはd1)において、熱感受性カプセル化手段にカプセル化された細胞マーカーの制御された放出は、例えば、温度を周囲温度から最高温度45℃まで上昇させることによってカプセル化手段を、熱感受性カプセル化手段を溶融することができる温度上昇に曝すことによって実行される、
-液体溶液中の細胞マーカーは、制御された方法で、分析すべきサンプルを含む固体検出支持体まで運ばれる、
-分析すべきサンプルの10~2,000μLに含まれる容積が検出支持体上に直接堆積される、
-分析すべきサンプルは、0.2~0.45μmに含まれる、好ましくは0.3μmに等しいカットオフ閾値を有する濾過膜を通して濾過され、濾過膜は、検出支持体内に直接位置決めされる。
-各画像の取得後、検出された発光ピクセルまたはピクセルのクラスターの輝度を測定するステップと、
-異なる画像において検出された各発光ピクセルまたはピクセルのクラスターの輝度を比較するステップと、
-染色反応速度中で、少なくとも2つの連続する画像において実質的に変化しない輝度を有するピクセルまたはピクセルのクラスターを識別するステップと、
-染色反応速度中に変化する輝度を有するピクセルまたはピクセルのクラスターを分析およびカウントするステップとによって特徴付けられる。
本発明はさらに、本発明の検出方法を実施することが可能であり、分析すべきサンプル中に存在する細菌、酵母またはカビタイプの少なくとも1つの微生物を検出するための装置であって、少なくとも、
-少なくとも1つの微生物を含みやすい分析すべきサンプルを受け取ることが意図された固体検出支持体と、
-微生物の少なくとも1つの細胞マーカーを貯蔵する手段と、
-マーカーを分析すべきサンプルと接触させるための細胞マーカーの制御された放出のための手段と、
-検出支持体を照射する手段と、
-少なくとも10mmの長さ×少なくとも10mmの幅の視野を有する、検出支持体の少なくとも一部の画像を取得するための光学装置と、
-少なくとも1つの微生物の染色反応速度の変化に従ってサンプル中に潜在的に存在する少なくとも1つの微生物を検出するように、光学装置によって取得された画像をメモリに記憶し、比較し、分析するための手段とを備える装置に関する。
-固体検出支持体は、ガラス繊維支持ディスク上に載っている少なくとも1つの濾過膜を含む、
-細胞マーカーを貯蔵するための手段は、検出支持体内に含まれ、カプセル化手段にカプセル化された細胞マーカーによって形成されたマイクロカプセルの層で構成されており、マイクロカプセルの層は、ガラス繊維支持ディスクと濾過膜との間に配置され、そのような場合、細胞マーカーの制御された放出のための手段は、装置の内部で温度上昇を生じさせることができ、また細胞マーカーをカプセル化するカプセル化手段を溶融させることができる加熱手段と、温度制御および調節手段とを含む、
-細胞マーカー貯蔵手段は、検出支持体とは別個の液体細胞マーカー溶液の予備で構成され、検出装置は、細胞マーカーを貯蔵手段から検出支持体に運ぶための手段を備え、そのような場合、細胞マーカーの制御された放出のための前記手段は、少なくとも1つの制御された流れポンプを含むことができる、
-光学撮像装置は、0.5mmオーダーの、または0.5mmに等しい焦点深度を有する、
-光学撮像装置は、CMOSセンサカメラに基づいている、
-上記の光学撮像装置の視野は25mm*25mmである、
-光学撮像装置は、少なくとも20メガピクセルに等しく、好ましくは100メガピクセルを超える解像度を有する。
本発明の他の特徴および利点は、添付の図を参照して与えられる、本発明の非制限的な実施形態の以下の詳細な説明から明らかになるであろう。
サンプル3は、濾過膜上に少量が堆積している場合でも、検出装置14において自動化された方法で濾過することができる。
この例は図3Bに示される。
したがって、膜5に存在しやすい各微生物2は、本発明の方法によって発現されるであろう。
実際、図6および図7に示される1つの好ましい実施形態では、第1の後続のフェーズP1の間の画像I1、I´1の最初の取得後、数秒から数十秒ほどの、例えば10秒~30秒の間の可変の時間経過後に、フェーズP0およびP1の間に画像が取得された支持体1の各部分から画像I2、I´2が再度取得される。
言うまでもなく、各画像は、特に比較のために、後続の処理作業のために装置14によってメモリに格納される。
したがって、このアルゴリズム11は、特に、経時的に微生物2の挙動の変化を評価することによって、およびそれらを潜在的な人工物、特に塵から区別することによって、画像I1、I´1、I2、I´2などにおける微生物2の存在または不在を可能な限り正確に迅速に検出することを可能にする必要があり、そして次にこれらの微生物2を列挙することを可能にする必要がある。
マーカー4の制御された放出後、およびしたがってこのマーカー4が検出支持体上に潜在的に存在する微生物2と接触させられた後、それぞれ画像Iiが取得される前のそのような時間遅延は、微生物2がマーカー4を正しく同化したことを確実にすることを可能にする。
好ましくは、本発明の方法は、少なくとも以下のステップをこの順序で含むことに留意されたく、
a1)分析すべきサンプル3を固体検出支持体1、21上に堆積させるステップと、
b1)少なくとも1つの細胞マーカー4を発現させることができる光放射6によって検出支持体1、21を局所的に照射するステップと、
c1)照射ステップb1)と同時に、少なくとも20メガピクセルに等しい解像度および10mm以上の長さx10mm以上の幅の視野を有する光学撮像装置7を用いて、検出支持体1、21の少なくとも一部でサンプル3の第1のフェーズP0において少なくとも1つの画像I0、I´0を取得するステップと、
d1)検出支持体1、21を介して、細胞マーカー4の制御された放出、あるいは一連の細胞マーカー4または試薬の制御された放出を実行して、マーカー4を微生物2と接触させるステップと、
e1)細胞マーカー4の制御された放出のステップd1)の後の5秒未満の経過時間内に、少なくとも1つの細胞マーカー4を発現させることができる光放射6で検出支持体1、21を局所的に照射するステップと、
f1)照射ステップe1)と同時に、その画像I0、I´0が、マーカー4の制御された放出のステップ後の少なくとも1つの後続のフェーズP1においてP0で取得された検出支持体1、21の各部分の画像I1、I´1を取得するステップと、
g1)光放射6で検出支持体1、21を少なくとも1回局所的に再照射するステップと、
h1)照射ステップg1)と同時に、微生物2の染色反応速度の変化に従って少なくとも1つの微生物2を検出するために、その画像I0、I´0がP0で取得され、その画像I1、I´1が少なくとも1つの第2の後続フェーズP2におけるP1で取得された検出支持体1、21の各部分の画像I2、I´2を取得するステップと、
i1)検出支持体1、21の部分ごとに、P0で取得された画像I0、I´0と少なくとも2つの後続のフェーズP1およびP2で取得された画像I1、I´1;I2、I´2との間で比較分析を実行し、サンプル3における少なくとも1つの微生物2の存在または不在に関する結論を導き出すステップとを、この順序で含むことに留意されたい。
画像I2、I´2を取得するためのステップg1)およびh1)は、好ましくは、画像I1、I´1が取得されたステップf1)の後、20~300秒、好ましくは80~160秒の経過時間内に実施される。
説明において上記のステップa)~f)の代替の実施形態または好ましい例は、上記の段落に提示された方法の対応するステップa1)~i1)にも適用可能であることに留意されたい。
そのような方法は、一方で、以下の
-例えば、蛍光または生物発光を自然に放出し、細胞マーカー4の制御された放出のステップd1)の前に第1のフェーズP0において取得された画像I0、I´0に観察される不活性粒子または塵の最初のカテゴリ、
-自家蛍光ではない(したがって、画像I0、I´0において観察することはできない)が、制御された放出後に細胞マーカー4を急速に吸収する不活性粒子または塵であって、この塵は画像I1、I´1においてはっきりと観察することができる第2のカテゴリとの間の効果的な区別を可能にするため特に興味深い。
-分析すべき元のサンプル3に潜在的に存在し、画像I0、I´0において観察することができない1つまたは複数の微生物2は、低い光強度で画像I1、I´1に現れ始める場合があり、これは、その後、より高い光強度で、画像I2、I´2および潜在的な後続の画像においてはっきりと観察することができ、ステップg1)およびh1)は、後続のフェーズP2、P3の間に画像を取得するために必要な回数だけ繰り返すことができることが理解される。
-少なくとも1つの微生物2を含みやすい分析すべきサンプル3を受け取ることが意図された固体検出支持体1、21を少なくとも含む。この支持体1、21は、好ましくは、サンプル3が通過する少なくとも1つの濾過膜5、25、および膜5、25がその上に置かれる支持ディスク13、23で構成される。
図3Aおよび図3Bに示される実施形態では、検出支持体1は、保護カバー16によって、および支持体1のすべての要素を剛性支持プレート18上に保持するための手段によって補完することができ、保持手段は、フープの形態17を採ることが可能である。
・剛性であり、特にプラスチック材料で作成され、複数の円形の穿孔および/または長方形の穿孔の存在を通じて透過性である支持手段24であって、剛性支持手段24は、以下の説明においてドレイン24としても参照され、ドレインは、支持ディスク23および濾過膜25のものと類似の、または幾分類似した形状および寸法を有する支持手段24と、
・例えばプラスチック材料で作成された剛性ベース26であって、一方では、液体、この場合は細胞マーカー4を供給する供給ライン26aが中を通っており、ライン26aは、ベース26から突出し、ドレイン24に作成された第1のオリフィス24aおよび例えばガラス繊維で作成された支持ディスク23に作成された第2のオリフィス23aの中を通る通気孔26bによって延長されており、また一方では、液体用の吸引および排出ライン26cが中を通っており、このライン26cは、適切な手段によって、その後の処理またはその廃棄を目的として排出された残留液体を受け取るための容器に接続されている剛性ベース26と、
・検出支持体21のすべての構成要素を互いに一体になるように一緒に保持するクランプリング27であって、この目的のために、クランプリング27およびベース26は好ましくはねじ山を有し、検出支持体21のすべての構成要素を締め付けることができるクランプリング27と、
・検出支持体21の漏れ防止シーリングを保証するために追加することができるガスケット28と、によって補完される。
-少なくとも、微生物2の少なくとも1つの細胞マーカー4を貯蔵する手段。
-少なくとも、マーカー4を分析すべきサンプル3と接触させるための細胞マーカー4の制御された放出のための手段15。
-特にレーザービーム、またはさらにより好ましくは高出力発光ダイオードに基づいて、細胞マーカー4を発現させることができる、検出支持体1、21を照射する手段6と、
-検出支持体1、21の少なくとも一部の画像を取得し、この支持体1、21の上に位置決めされる光学装置7であって、好ましくは少なくとも20メガピクセルに等しい、より好ましくは少なくとも100メガピクセルに等しい解像度を有する光学装置7と、を含む。この光学装置7は、観察すべき検出支持体1の平面度に関する欠陥を克服するために、より好ましくは、0.5mmオーダーまたは0.5mmに等しい焦点深度を有する。それは、有利には、CMOSセンサを備えたカメラで構成され、特定の視野を有し、その寸法は、例えば、少なくとも10mmの長さ×少なくとも10mmの幅であり、さらにより好ましくは、25*25mmである。
-少なくとも1つの微生物2の染色反応速度の変化に従ってサンプル3に潜在的に存在する少なくとも1つの微生物2を検出するように、光学装置7によって取得された画像をメモリに記憶し、比較し、分析するための手段。そのような分析手段は、好ましくは、画像検出および処理アルゴリズム11で構成される。
そのような検出装置はまた、複数の円形の穿孔および/または長方形の穿孔を通して透過可能である剛性の支持手段24、またはドレイン24を備えている。濾過膜25の下に位置決めされたガラス繊維支持ディスク23は、このドレイン24上に載っている。したがって、これらの3つの要素、支持ディスク23、ドレイン24、および濾過膜25は、有利には、本質的に円形であり、同様のまたはいくらか同様の寸法である形状を有する。
Claims (28)
- 固体検出支持体(1、21)上で、分析すべきサンプル(3)中に存在し、少なくとも1つの細胞マーカー(4)によって発現する細菌、酵母またはカビタイプの少なくとも1つの微生物(2)を検出するための方法であって、少なくとも以下の、
a)分析すべき前記サンプル(3)を前記固体検出支持体(1、21)上に堆積させるステップと、
b)前記少なくとも1つの細胞マーカー(4)を発現させることができる光放射(6)で前記固体検出支持体(1)を少なくとも1回照射するステップと、
c)少なくとも10mmの長さ×少なくとも10mmの幅の視野を標的とする光学撮像装置(7)を用いて、前記固体検出支持体(1,21)の少なくとも一部で前記サンプル(3)の第1のフェーズP0において少なくとも1つの画像(I0)を取得するステップと、
d)固体検出支持体(1、21)を介して前記少なくとも1つの細胞マーカー(4)の制御された放出を実行して、前記少なくとも1つの細胞マーカー(4)を前記微生物(2)と接触させるステップと、
e)前記微生物(2)の染色反応速度の変化に従って前記微生物(2)を検出するように、前記光学撮像装置(7)を用いて、前記少なくとも1つの細胞マーカー(4)の前記制御された放出のステップの後、少なくとも1つの後続のフェーズPiにおいてP0で画像が取得された前記固体検出支持体(1、21)の各部分の画像(Ii)(i≧1)を取得するステップと、
f)P0で取得された前記画像(I0)と少なくとも1つの後続のフェーズPiで取得された各画像(Ii)との間で前記固体検出支持体(1、21)の部分ごとに比較分析を実行し、前記サンプル(3)中の少なくとも1つの前記微生物(2)の存在または不在に関して結論を引き出すステップと、をこの順序で含むことを特徴とする、検出するための方法。 - 前記固体検出支持体(1、21)は、P0、Piで画像が取得されるたびに光放射(6)で局所的に照射されることを特徴とする、請求項1に記載の検出方法。
- 固体検出支持体(1、21)上で、分析すべきサンプル(3)中に存在し、少なくとも1つの細胞マーカー(4)によって発現する細菌、酵母またはカビタイプの少なくとも1つの微生物(2)を検出するための方法であって、
少なくとも以下の、
a1)分析すべき前記サンプル(3)を前記固体検出支持体(1、21)の上に堆積させるステップと、
b1)前記固体検出支持体(1、21)を前記少なくとも1つの細胞マーカー(4)を発現させることができる光放射(6)によって局所的に照射するステップと、
c1)前記照射するステップb1)と同時に、少なくとも10mmの長さ×少なくとも10mmの幅の視野を標的とする光学撮像装置(7)を用いて、前記固体検出支持体(1、21)の少なくとも一部で前記サンプル(3)の第1のフェーズP0において少なくとも1つの微生物の微少コロニーを含む画像(I0、I´0)を取得するステップと、
d1)前記固体検出支持体(1、21)を介して前記少なくとも1つの細胞マーカー(4)の制御された放出を実行して、前記少なくとも1つの細胞マーカー(4)を前記微生物(2)と接触させるステップと、
e1)前記少なくとも1つの細胞マーカー(4)の前記制御された放出のステップd1)の後の5秒未満の経過時間の範囲内で、前記少なくとも1つの細胞マーカー(4)を発現させることができる前記光放射(6)で前記固体検出支持体(1、21)を局所的に照射するステップと、
f1)前記照射ステップe1)と同時に、前記光学撮像装置(7)を用いて、前記少なくとも1つの細胞マーカー(4)の前記制御された放出のステップの後、少なくとも1つの後続のフェーズP1においてP0で画像が取得された前記固体検出支持体(1、21)の微生物の微少コロニーを含む画像(I1、I´1)を取得するステップと、
g1)前記光放射(6)で前記固体検出支持体(1、21)を少なくとも1回局所的に再照射するステップと、
h1)前記再照射するステップg1)と同時に、前記微生物(2)の染色反応速度の変化に従って少なくとも1つの前記微生物(2)を検出するために、前記光学撮像装置(7)を用いて、少なくとも1つの第2の後続のフェーズP2でP0およびP1で画像が取得された前記固体検出支持体(1、21)の微生物の微少コロニーを含む画像(I2、I´2)を取得するステップと、
i1)P0で取得された前記画像(I0、I´0)と少なくとも2つの後続のフェーズP1およびP2で取得された前記画像(I1、I´1;I2、I´2)との間で前記固体検出支持体(1、21)の部分ごとに比較分析を実行し、前記サンプル(3)中の少なくとも1つの前記微生物(2)の存在または不在に関して結論を引き出すステップと、をこの順序で含むことを特徴とする、検出方法。 - 前記固体検出支持体(1、21)は、前記固体検出支持体(1、21)を空間的に異なる複数の部分を観察する目的で、別個の経路に沿ってn回の移動を受け、ここで、nは、20以下の整数であり、
前記固体検出支持体(1、21)全体の画像は、少なくとも2つのフェーズP0およびPiで取得される、
請求項1~3のいずれかに記載の検出方法。 - 光学撮像装置(7)が、少なくとも20メガピクセルで使用されることを特徴とする、請求項1~4のいずれかに記載の検出方法。
- 少なくとも1つの前記微生物(2)が前記サンプル(3)に存在すると結論付けられた場合、前記サンプル(3)中に存在する前記微生物(2)の列挙が実行されることを特徴とする、請求項1~5のいずれかに記載の検出方法。
- 前記少なくとも1つの細胞マーカー(4)が蛍光マーカーであることを特徴とする、請求項1~6のいずれかに記載の検出方法。
- 前記少なくとも1つの細胞マーカー(4)は、カプセル化手段(8)にカプセル化されていることを特徴とする、請求項1~7のいずれかに記載の検出方法。
- 前記少なくとも1つの細胞マーカー(4)は、粉末の形態の固体形態でカプセル化手段(8)にカプセル化されること、および前記固体検出支持体(1)は、前記少なくとも1つの細胞マーカー(4)を溶解するための溶媒を含むことを特徴とする、請求項8に記載の検出方法。
- 前記少なくとも1つの細胞マーカー(4)は液体の形態でカプセル化されていることを特徴とする、請求項8に記載の検出方法。
- 前記カプセル化手段(8)は熱感受性であり、
前記少なくとも1つの細胞マーカー(4)の制御された放出が、熱感受性の前記カプセル化手段(8)を、溶融することができる温度上昇に曝すことによって実行される、請求項8~10の一項に記載の検出方法。 - 感熱性の前記カプセル化手段(8)を溶融する温度は、最高温度45℃であることを特徴とする、請求項11に記載の検出方法。
- 液体溶液中の前記少なくとも1つの細胞マーカー(4)は、制御された方法で、分析すべき前記サンプル(3)を含む前記固体検出支持体(21)まで運ばれることを特徴とする、請求項1~7のいずれかに記載の検出方法。
- 分析すべき前記サンプル(3)の10~2000μLの間に含まれる容積が前記固体検出支持体(1、21)上に直接堆積されることを特徴とする、請求項1~13のいずれかに記載の検出方法。
- 分析すべき前記サンプル(3)は、0.2~0.45μmに含まれるカットオフ閾値、を有する濾過膜(5、25)を通して濾過され、前記濾過膜(5、25)は、前記固体検出支持体(1、21)内に位置していることを特徴とする、請求項1~13のいずれかに記載の検出方法。
- 分析すべき前記サンプルを受け取った前記固体検出支持体(1、21)上で微生物を塵から区別するために、以下のステップ、
-各画像の取得後、検出された発光ピクセルまたはピクセルのクラスターの輝度を測定するステップと、
-前記各画像において検出された各発光ピクセルまたはピクセルのクラスターの輝度を比較するステップと、
-前記染色反応速度中で、少なくとも2つの連続する画像において実質的に変化しない輝度を有するピクセルまたはピクセルのクラスターを識別するステップと、
-前記染色反応速度中で、変化する輝度を有するピクセルまたはピクセルのクラスターを分析およびカウントするステップと、が実施されることを特徴とする、請求項1~15のいずれかに記載の検出方法。 - 分析すべきサンプル(3)に存在する細菌、酵母またはカビタイプの少なくとも1つの微生物(2)を検出するためのものであり、請求項1~16のいずれかに記載の方法を実施することが可能な装置(14)であって、
少なくとも、
-少なくとも1つの前記微生物(2)を含みやすい分析すべき前記サンプル(3)を受け取ることが意図された固体検出支持体(1、21)と、
-前記微生物(2)の少なくとも1つの細胞マーカー(4)を貯蔵する貯蔵手段と、
-前記少なくとも1つの細胞マーカー(4)を分析すべき前記サンプル(3)と接触させるための前記少なくとも1つの細胞マーカー(4)の制御された放出のための手段(15)と、
-前記固体検出支持体(1、21)を照射する手段(6)と、
-前記固体検出支持体(1、21)の少なくとも一部の画像を取得するための光学撮像装置(7)であって、少なくとも10mmの長さ×少なくとも10mmの幅の視野を有する光学撮像装置(7)と、
-少なくとも1つの前記微生物(2)の染色反応速度の変化に従って、前記サンプル(3)中に潜在的に存在する少なくとも1つの前記微生物(2)を検出するために、前記光学撮像装置(7)によって取得された前記画像をメモリに記憶し、比較し、分析するための手段と、を備えることを特徴とする、検出するための検出装置(14)。 - 前記光学撮像装置(7)の下に前記固体検出支持体(1、21)を移動させるための手段を備えることを特徴とする、請求項17に記載の検出装置(14)。
- 前記固体検出支持体(1、21)が、ガラス繊維支持ディスク(13、23)上に載っている少なくとも1つの濾過膜(5、25)を含むことを特徴とする、請求項17または18のいずれかに記載の検出装置(14)。
- 前記少なくとも1つの細胞マーカー(4)を貯蔵する手段(19)が、固体検出支持体(1)に含まれ、カプセル化手段(8)にカプセル化された前記少なくとも1つの細胞マーカー(4)によって形成されたマイクロカプセル(9)の層で構成されており、マイクロカプセル(9)の前記層は、ガラス繊維支持ディスク(13)と濾過膜(5)との間に配置されることを特徴とする、請求項19に記載の検出装置(14)。
- 前記少なくとも1つの細胞マーカー(4)の制御された放出のための前記手段は、検出装置(14)の内部で温度上昇を生じさせることができ、また前記少なくとも1つの細胞マーカー(4)をカプセル化する前記カプセル化手段(8)を溶融させることができる加熱手段と、温度制御および調整手段とを含むことを特徴とする、請求項20に記載の検出装置(14)。
- 前記検出装置(14)は、前記少なくとも1つの細胞マーカー(4)を前記貯蔵手段から前記固体検出支持体(21)に運ぶための手段を備えることを特徴とする、請求項17~19のいずれかに記載の検出装置(14)。
- 前記少なくとも1つの細胞マーカー(4)の制御された放出のための前記手段(15)は、少なくとも1つの制御された流れポンプを含むことを特徴とする、請求項22に記載の検出装置(14)。
- 前記光学撮像装置(7)は、0.5mmの焦点深度を有することを特徴とする、請求項17~23のいずれかに記載の検出装置(14)。
- 前記光学撮像装置(7)は、CMOSセンサカメラである請求項17~24のいずれかに記載の検出装置(14)。
- 前記光学撮像装置(7)は25mm*25mmの視野を有することを特徴とする、請求項17~25のいずれかに記載の検出装置(14)。
- 前記光学撮像装置(7)は、少なくとも20メガピクセルに等しい、解像度を有することを特徴とする、請求項17~26のいずれかに記載の検出装置(14)。
- 請求項1~15のいずれかに記載の検出方法において使用されるか、または請求項17~27のいずれかに記載の検出装置(14)に含まれる固体検出支持体(21)であって、少なくとも1つの液体供給ライン(26a)および少なくとも1つの液体吸引および排出ライン(26c)が中を通る剛性ベース(26)で少なくとも構成されており、
前記供給ライン(26a)は、前記ベース(26)から突出し、一方では、前記ベース(26)の上の剛性で透過性の支持手段(24)の中に作成された第1のオリフィス(24a)の中を通り、他方では、ガラス繊維で作成された可撓性の支持ディスク(23)内に作成された第2のオリフィス(23a)の中を通る通気孔(26b)によって延長されており、前記ディスク(23)は、前記剛性で透過性の支持手段(24)上に位置し、0.2~0.45μmの間に含まれるカットオフ閾値を有し、かつ微生物(2)を保持することが可能な濾過膜(25)を支持しており、前記固体検出支持体(21)は、それが前記ベース(26)と一体になるように固定され、前記ベース(26)、前記剛性で透過性の支持手段(24)、前記支持ディスク(23)および前記濾過膜(25)を一緒に保持するクランプリング(27)をさらに備えることを特徴とする、固体検出支持体(21)。
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