JP7444886B2 - 補体関連疾患のための融合タンパク質構築物 - Google Patents
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Description
本出願は、2018年12月11日に出願された米国仮出願第62/778,014号の利益を主張するものであり、参照によりこの全体を本明細書に援用する。
本出願は、ASCII形式で電子提出された配列表を含有し、これをもって参照によりその全体を援用する。上記ASCIIコピーは2019年12月11日に作成され、名前が53542_707_601_SL.txtであり、サイズが950,242バイトである。
本明細書中で言及される全ての刊行物、特許、特許出願及びNCBI受託番号は、各個の刊行物、特許または特許出願について具体的かつ個別に参照により援用することを示すのと同じ程度に、及びそれらの全体を示すのと同じ程度に、参照により本明細書に援用される。本明細書中で使用される用語と、援用される参考文献の中で定義されている用語との間に対立がある場合、本開示の定義が優先される。
補体系は体液性免疫及び自然免疫の主要なエフェクターである。補体系は、補体活性化の3つの独立した経路を有する:古典経路、代替経路及びレクチン経路。これら3つの経路はどれも、開始事象に関しては異なっているが、3つの経路は全て、補体成分C3の切断に収束する。補体系の活性の鍵となるのは、血清タンパク質に由来するプロセシングされたタンパク質断片である補体C3及び/またはC4と、補体活性化の組織部位との、共有結合による結合である。この独特な特性はC3にチオエステル結合が存在しているためであり、それはC3活性化中に切断されるとC3をC3bと呼称される形態に変換し、これが後にエステルまたはアミド結合を利用して細胞及び組織結合分子と繋がり得る。C3bが共有結合で結合した時点でそれは速やかにiC3b、C3dg及びC3d形態にプロセシングされ、これらの各々は標的組織部位に共有結合で結合したままとなる。このプロセスは、当該組織を炎症性損傷または他の補体に関係するプロセスが進行中であるものとして「標示すること」をもたらす。
多価構築物の標的指向性部分は、作用の部位、例えば補体活性化の部位への補体系の調節剤の指向的送達を担い得る。補体調節剤は、補体活性化を特異的に阻害することなどの治療活性を有し得る。したがって、本明細書に記載の多価構築物は全体的には、本明細書に記載の抗体によって認識されるエピトープに結合することと補体活性化の阻害によって治療活性を及ぼすこととの二重の機能を有する。標的指向性部分は、ヒト、マウス、ヒト化またはラクダ化抗体、またはその抗原結合性断片であり得る。
標的指向性部分及び補体調節剤を含む融合タンパク質構築物は、標的指向性部分として抗体またはその抗原結合性断片を含み得る。標的指向性部分の例としては、モノクローナル抗体または抗体断片、ダイアボディ、キメラ化またはキメラ抗体または抗体断片、ヒト化抗体または抗体断片、脱免疫化ヒト抗体または抗体断片、完全ヒト抗体または抗体断片、二重特異性抗体または抗体断片、一価抗体または抗体断片、一本鎖抗体、免疫グロブリンG1(IgG1)重鎖、一本鎖可変断片(すなわちscFv)、sc(fv)2、タンデムscFv、ダイアボディ、VHHドメイン、VHドメイン、Fv、Fd、Fab重鎖、Fab軽鎖、Fab、Fab’、及びFab’軽鎖、Fab’重鎖、及びF(ab’)2が挙げられるが、これらに限定されない。標的指向性部分を形成する抗体または抗原結合性断片は、ヒト抗体、ヒト化抗体、マウス抗体であり得る。融合タンパク質構築物は、標的に対して特異的な抗体またはその抗原結合性断片を各標的指向性部分が含んでいるような、1つ以上の標的指向性部分を含み得る。加えて、融合タンパク質構築物が1つより多くの補体調節剤を含むということもあり得る。融合タンパク質構築物が1つより多くの補体調節剤を含む場合、それは同じ補体調節剤の分子を複数個含んでいてもよいし、またはそれは別個な種類の補体調節剤を含んでいてもよい。同様に、複数の標的指向性部分を有する融合タンパク質構築物は、同じ種類の標的指向性部分の分子をいくつか含んでそれによって標的指向性部分に関して多価となっていてもよいし、または別個な種類の標的指向性部分の分子をいくつか含んでそれによって標的指向性部分に関して多価となっていてもよい。融合タンパク質構築物の標的は、例えば、補体タンパク質もしくはその断片、哺乳動物アネキシンタンパク質のドメイン、またはリン脂質であり得る。融合タンパク質構築物は1つより多くの標的に特異的に結合する能力を有し得るため、いくつかの例において上記標的の少なくとも2つが本明細書に記載の融合タンパク質構築物によって特異的に結合され得るということが考えられる。したがって、融合タンパク質構築物は二重特異的、三重特異的、四重特異的などになり得る。さらに、融合タンパク質構築物を多価、例えば、二価、三価、四価などとすることが可能である。例えば、二重特異性である融合タンパク質構築物の標的指向性部分は、標的、例えば、哺乳動物アネキシンのドメイン、リン脂質またはC3補体タンパク質断片(例えばC3d)に対して特異的であり得、融合タンパク質構築物の補体調節剤は、補体経路の中の別のタンパク質に対して特異的であり得る。四価融合タンパク質構築物は、二価である標的指向性部分、例えば、標的タンパク質に対する2つの結合領域を有する二価抗体またはその抗原結合性断片と、2分子の補体調節剤とを有し得る。さらには、融合タンパク質構築物を、標的指向性部分が二価抗体またはその抗原結合性断片及び抗体の定常ドメイン(Fc)を含んでおり補体調節剤が当該二価抗体または当該Fcドメインに融合している、二重特異性三価タンパク質とすることが可能である。
融合タンパク質構築物は、ドメインを各々含有しており例えば1つ以上のジスルフィド結合を介して連結されている、1つ以上のポリペプチドを含む。例えば、ある場合には、融合タンパク質構築物は、ドメインA、ドメインB、ドメインC、ドメインD及びドメインRを含む第1ポリペプチド鎖を含み得、ドメインAが重鎖可変領域アミノ酸配列(VH)またはその抗原結合性断片を含み、ドメインBが重鎖CH1定常領域アミノ酸配列を含み、ドメインCが重鎖CH2定常領域アミノ酸配列を含み、ドメインDが重鎖CH3定常領域アミノ酸配列を含み、ドメインRが補体調節剤ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ドメインB、C及びDのうちの1つ以上は任意選択である。第1ポリペプチドはさらにヒンジ領域を含み得、さらに第1ポリペプチドは、軽鎖可変領域アミノ酸配列(VL)またはその抗原結合性断片を含むドメインE、及び軽鎖定常領域アミノ酸配列(CL1)を含む任意選択のドメインFなどの、さらなるドメインを含む第2ポリペプチドに連結され得る。第1ポリペプチドと第2ポリペプチドとの間の連結は、ドメインBとドメインFとの間で1つ以上のジスルフィド結合によって行われ得る。いくつかの例では、上記の第1及び第2ポリペプチドは、様々な配向を用いて組み合わされて、単量体型、三価ホモ二量体型、三価ホモ二量体型、四価ホモ二量体型、四価ヘテロ二量体型などの融合タンパク質構築物を作り出す。
本明細書に記載の融合タンパク質構築物のドメインAは、VHアミノ酸配列、例えば、抗体重鎖可変ドメイン配列を含み得る。典型的な抗体構成では、天然のもの及び本明細書に記載の融合タンパク質構築物のどちらにおいても、特定のVHアミノ酸配列は特定のVLアミノ酸配列と会合して抗原結合部位を形成し得る。様々な例において、VHアミノ酸配列は、ヒト配列を含めた哺乳動物配列、及び合成配列、または非ヒト哺乳動物、哺乳動物及び合成の配列の組合せである。様々な例において、VHアミノ酸配列は、所望の抗原結合親和性を保持するのに十分なCDR配列を保持している、天然に存在する配列の突然変異配列であり得る。いくつかの例では、VH配列は、IgA1、IgA2、IgD、IgE、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4またはIgMアイソタイプからのものであり得る。いくつかの例では、VH配列はIgG1アイソタイプからのものであり得る。
本明細書に記載の融合タンパク質構築物のドメインEは、VLアミノ酸配列、例えば抗体軽鎖可変ドメイン配列を含み得る。典型的な構成では、天然の抗体及び本明細書に記載の融合タンパク質構築物のどちらにおいても、特定のVLアミノ酸配列は特定のVHアミノ酸配列と会合して抗原結合部位を形成し得る。様々な例において、VLアミノ酸配列は、ヒト配列を含めた哺乳動物配列、合成配列、またはヒト、非ヒト哺乳動物、哺乳動物及び合成の配列の組合せであり得る。様々な例において、VLアミノ酸配列は、少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%またはそれ以上のアミノ酸同一性を保持している、天然に存在する配列の突然変異配列であり得る。特定の例では、VLアミノ酸配列はラムダ(λ)軽鎖可変ドメイン配列であり得る。特定の例では、VLアミノ酸配列はカッパ(κ)軽鎖可変ドメイン配列であり得る。いくつかの例では、VL配列は、IgA1、IgA2、IgD、IgE、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4またはIgMアイソタイプからのものであり得る。いくつかの例では、VL配列はIgG1アイソタイプからのものであり得る。
本明細書に記載の融合タンパク質構築物のCH1アミノ酸配列は、N末端からC末端に向かって見たとき抗体重鎖の第2ドメインの配列であり得る。特定の例では、CH1配列は、内在性配列、または少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%もしくはそれ以上のアミノ酸同一性を保持しているその突然変異配列であり得る。いくつかの例では、CH1配列は、限定されないがマウス、ラット、ハムスター、ウサギ、ラクダ、ロバ、ヤギ及びヒトの配列を含めた哺乳動物配列であり得る。いくつかの例では、CH1配列はヒト配列であり得る。いくつかの例では、CH1配列は、IgA1、IgA2、IgD、IgE、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4またはIgMアイソタイプからのものであり得る。いくつかの例では、CH1配列はIgG1アイソタイプからのものであり得る。いくつかの例では、CH1配列はIgG4アイソタイプからのものであり得る。
本明細書に記載の融合タンパク質構築物のCLアミノ酸配列は、抗体軽鎖定常ドメイン配列であり得る。特定の例では、CL配列は、内在性配列、または少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%もしくはそれ以上のアミノ酸同一性を保持しているその突然変異配列であり得る。いくつかの例では、CL配列は、限定されないがマウス、ラット、ハムスター、ウサギ、ラクダ、ロバ、ヤギ及びヒトの配列を含めた哺乳動物配列であり得る。いくつかの例では、CL配列はヒト配列であり得る。いくつかの例では、CLアミノ酸配列はラムダ(λ)軽鎖定常ドメイン配列であり得る。いくつかの例では、CLアミノ酸配列はヒトラムダ軽鎖定常ドメイン配列であり得る。特定の実施形態では、CLアミノ酸配列はカッパ(κ)軽鎖定常ドメイン配列である。好ましい実施形態では、CLアミノ酸配列はヒトカッパ(κ)軽鎖定常ドメイン配列である。
本明細書に記載の融合タンパク質構築物において、ドメインCは、CH2アミノ酸配列を有し得る。CH2配列は、内在性配列、または少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%もしくはそれ以上のアミノ酸同一性を保持しているその突然変異配列であり得る。いくつかの例では、CH2配列は、限定されないがヒト配列を含めた哺乳動物配列であり得る。いくつかの例では、CH2アミノ酸配列は、ドメインCをドメインBに連結している、例えば、ドメインB(CL1配列)のC末端をドメインC(CH2配列)のN末端に連結しているN末端ヒンジ領域を有し得る。いくつかの例では、CH2配列は、IgA1、IgA2、IgD、IgE、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4またはIgMアイソタイプからのものであり得る。いくつかの例では、CH2配列はIgG1アイソタイプからのものであり得る。いくつかの例では、CH2配列はIgG4アイソタイプからのものであり得る。
本明細書に記載の融合タンパク質構築物において、ドメインDは、定常領域アミノ酸配列、例えばCH3アミノ酸配列を含み得る。CH3配列は、内在性配列、または少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%もしくはそれ以上のアミノ酸同一性を保持しているその突然変異配列であり得る。いくつかの例では、CH3配列は、限定されないがヒト配列を含めた哺乳動物配列であり得る。いくつかの例では、ドメインDは、ノブ-ホール直交的突然変異;アイソアロタイプ突然変異;及び直交的突然変異を含有するCH3ドメインとの操作型ジスルフィド架橋を形成するS354CかY349Cかのどちらかの突然変異、またはその任意の組合せを含むCH3配列である定常領域配列を含み得る。いくつかの例では、アイソアロタイプ突然変異と組み合わせたノブ-ホール直交的突然変異は、以下の突然変異による変化を含み得る:D356E、L358M、T366S、L368A及びY407V。いくつかの例では、CH3配列は、IgA1、IgA2、IgD、IgE、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4またはIgMアイソタイプからのものであり得る。いくつかの例では、CH3配列はIgG1アイソタイプからのものであり得る。いくつかの例では、CH3配列はIgG4アイソタイプからのものであり得る。これらの例のいずれかにおいて、CH1、CH2及びCH3配列は、同じアイソタイプ、例えばIgG1またはIgG3からのものであり得る。
本明細書に記載の様々な融合タンパク質構築物のVH(ドメインA)及びVL(ドメインF)アミノ酸配列は、「相補性決定領域」(CDR)と称される高度に可変な配列、典型的な3つのCDR(CDR1、CD2及びCDR3)を含み得る。様々な例において、CDRは、限定されないがマウス、ラット、ハムスター、ウサギ、ラクダ、ロバ、ヤギ及びヒトの配列を含めた哺乳動物配列であり得る。いくつかの例では、CDRはヒト配列であり得る。いくつかの例では、CDRは天然に存在する配列であり得る。いくつかの例では、CDRは、突然変異して特定の抗原またはエピトープに対する抗原結合部位の結合親和性が変化した天然に存在する配列であり得る。特定の例では、天然に存在するCDRは、親和性成熟及び体細胞超突然変異によって宿主の生体内で突然変異したものであり得る。特定の例では、CDRは、PCR突然変異誘発及び化学的突然変異誘発を含むがこれらに限定されない方法によって試験管内で突然変異したものであり得る。様々な例において、CDRは、ランダム配列CDRライブラリー及び合理的に設計されたCDRライブラリーから得たCDRを含むがこれらに限定されない合成配列を含み得る。
VH及びVLアミノ酸配列は、「フレームワーク領域」(FR)配列をさらに含み得る。FRは大抵、散在するCDRのための足場としての役割を果たすことができ典型的には(N末端からC末端に向かって)FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4の配置になっている保存された配列領域であり得る。様々な例において、FRは、限定されないがマウス、ラット、ハムスター、ウサギ、ラクダ、ロバ、ヤギ及びヒトの配列を含めた哺乳動物配列であり得る。いくつかの例では、FRはヒト配列であり得る。様々な例において、FRは天然に存在する配列であり得る。様々な例において、FRは、限定されないが合理的に設計された配列を含めた合成配列であり得る。
本明細書に記載の融合タンパク質構築物において、2つのドメインDは会合して二量体型構築物を形成し得る。様々な例において、全てのドメインDのアミノ酸配列は同一である。特定の例では、ドメインDは内在性CH3配列を含む。いくつかの例では、融合タンパク質構築物がヘテロ二量体である、またはヘテロ二量体型である場合、異なるアミノ酸配列を有する2つのドメインDは、会合できるものであり、別個にそれぞれ内在性CH3配列中に直交的修飾を含んでおり、1つのドメインDは、異なる配列を有するもう1つのドメインと相互作用するものであり、2つのドメインはどちらも、直交的修飾がない別のドメインD(CH3ドメイン)とはあまり相互作用しない。
例示的な単量体型融合タンパク質構築物は図2~3に示されており、第1及び第2ポリペプチドを含み、第1ポリペプチドは以下のドメイン:ドメインA、ドメインB及びドメインRを含み、第2ポリペプチドは以下のドメイン:ドメインE及びドメインFを含む。図2に示されている融合タンパク質構築物では、ドメインAは重鎖可変領域アミノ酸配列(VH)またはその抗原結合性断片を含み、ドメインBは重鎖CH1定常領域アミノ酸配列を含み、ドメインRは補体調節剤ポリペプチドを含み、ドメインEは軽鎖可変領域アミノ酸配列(VL)またはその抗原結合性断片を含み、ドメインFは軽鎖定常領域アミノ酸配列(CL1)を含む。さらには、第1及び第2ポリペプチドのドメインBとドメインFとがそれぞれ1つ以上のジスルフィド結合を介して繋がっていてもよい。第1ポリペプチドのドメインはN末端からC末端に向かってA-B-Rの配向またはR-A-Bの配向で並んでおり、第2ポリペプチドのドメインはN末端からC末端に向かってE-Fの配向で並んでいる。図2に示される例では、単量体型融合タンパク質構築物はドメインAとドメインRとの間にリンケージ、例えば化学的リンケージまたはペプチドリンカーを含む。さらなる例では、図3に示すように、ドメインRとドメインBとの間にリンケージを含む単量体型融合タンパク質構築物が提供される。
例示的な四価ホモ二量体型融合タンパク質構築物は図5~6に示されており、2つのポリペプチドを含み、その各々は、ドメインA、ドメインB、ヒンジ領域、ドメインC、ドメインD及びドメインRを含む第1ポリペプチド;ドメインE及びドメインFを含む第2ポリペプチドを含むものであり、第1ポリペプチドは、N末端からC末端に向かって、A-B-ヒンジドメイン-C-D-Rの配向で並んでおりドメインDとドメインRとの間にリンケージを含み;またはR-A-B-ヒンジ領域-C-Dの配向で並んでおりドメインRとドメインAとの間にリンケージを含む。第1ポリペプチド及び第2ポリペプチドのドメインBとドメインFとが1つ以上のジスルフィド結合を介して繋がっていてもよい。第2ポリペプチドは、N末端からC末端に向かってE-Fの配向で並んでいてもよい。2つの第1ポリペプチドは、ヒンジ領域において1つ以上のジスルフィド結合を介して繋がり合っていてもよい。さらなる例示的な四価ホモ二量体型融合タンパク質構築物は、2つのポリペプチドを含み、その各々は、ドメインA、ドメインB、ヒンジ領域、ドメインC及びドメインRを含む第1ポリペプチド;ドメインE及びドメインFを含む第2ポリペプチドを含むものであり、第1ポリペプチドは、N末端からC末端に向かって、A-B-ヒンジドメイン-C-Rの配向で並んでおりドメインDとドメインRとの間にリンケージを含み;またはR-A-B-ヒンジ領域-Cの配向で並んでおりドメインRとドメインAとの間にリンケージを含む。第1ポリペプチド及び第2ポリペプチドのドメインBとドメインFとが1つ以上のジスルフィド結合を介して繋がっていてもよい。第2ポリペプチドは、N末端からC末端に向かってE-Fの配向で並んでいてもよい。2つの第1ポリペプチドは、ヒンジ領域において1つ以上のジスルフィド結合を介して繋がり合っていてもよい。
例示的な三価ヘテロ二量体型融合タンパク質構築物は図7~8に示されており、第1ポリペプチド、第2ポリペプチド、第3ポリペプチド及び第4ポリペプチドを含み、第1ポリペプチドは、ドメインA、ドメインB、ヒンジ領域、ドメインC、ドメインD及びドメインRを含むものであり、これらはN末端からC末端に向かって(図8のように)R-A-B-ヒンジ領域-C-Dの配向で並んでドメインAとドメインRとの間にリンケージを含んでいるか、または(図7のように)A-B-ヒンジ領域-C-D-Rの配向で並んでドメインDとドメインRとの間にリンケージを含んでおり;第2ポリペプチドは、N末端からC末端に向かってE-Fの配向で並んだドメインE及びドメインFを含むものであり;第3ポリペプチドは、N末端からC末端に向かってA-B-ヒンジ領域-C-Dの配向で並んだドメインA、ドメインB、ヒンジ領域、ドメインC及びドメインDを含むものであり;第4ポリペプチドは、N末端からC末端に向かってE-Fの配向で並んだドメインE及びドメインFを含むものである。第1ポリペプチド及び第2ポリペプチドのドメインBとドメインFとが1つ以上のジスルフィド結合を介して繋がっていてもよく、第3及び第4ポリペプチドのドメインBとドメインFとが1つ以上のジスルフィド結合を介して繋がっていてもよい。第1及び第3ポリペプチドは、ヒンジ領域において1つ以上のジスルフィド結合を介して繋がり合っていてもよい。
図9に示されるさらなる例示的な四価ホモ二量体型融合タンパク質構築物は2つのポリペプチドを含み、その各々は、第1ポリペプチド及び第2ポリペプチドを含むものであり、第1ポリペプチドは、ドメインA、ドメインB、ヒンジ領域、ドメインC及びドメインDを含み、第2ポリペプチドは、ドメインE、ドメインF及びドメインRを含み、第1ポリペプチドは、N末端からC末端に向かってA-B-ヒンジドメイン-C-Dの配向で並んでおり、第2ポリペプチドは、N末端からC末端に向かって(図9に示すように)E-F-Rの配向で並んでドメインFとドメインRとの間にリンケージを含んでいてもよく、または(図10に示すように)R-E-Fの配向で並んでドメインEとドメインRとの間にリンケージを含んでいてもよい。第1ポリペプチド及び第2ポリペプチドのドメインBとドメインFとが1つ以上のジスルフィド結合を介して繋がっていてもよい。2つの第1ポリペプチドは、ヒンジ領域において1つ以上のジスルフィド結合を介して繋がり合っていてもよい。
第1ポリペプチド、第2ポリペプチド及び第3ポリペプチドを含み、第1ポリペプチドが、ドメインR、ヒンジ領域、ドメインC及びドメインDを含むものであり、第2ポリペプチドが、ドメインA、ドメインB、ヒンジ領域、ドメインC及びドメインDを含むものであり、第3ポリペプチドが、ドメインE及びドメインFを含むものであり、第1ポリペプチドがN末端からC末端に向かってR-ヒンジ領域-C-Dの配向で並んでドメインRとヒンジ領域との間にリンケージを含んでいてもよく、第2ポリペプチドがN末端からC末端に向かってA-B-ヒンジ領域-C-Dの配向で並んでおり、第3ポリペプチドがN末端からC末端に向かってE-Fの配向で並んでいてもよい、図13に示される例示的な融合タンパク質を本明細書に提供する。第2ポリペプチド及び第3ポリペプチドのドメインBとドメインFとがそれぞれ1つ以上のジスルフィド結合を介して繋がっていてもよい。第1ポリペプチドと第2ポリペプチドとがヒンジ領域において1つ以上のジスルフィド結合を介して繋がり合っていてもよい。いくつかの例では、融合タンパク質は補体調節剤と定常領域との間にリンケージを含んでおり、補体調節剤は、例えば2つのCH3ドメイン、2つのCH2ドメイン及びヒンジ領域を含む免疫グロブリン分子の定常領域に連結されたCR1(1-10)、CR1(1-17)、H因子、MCPまたはDAFであり得る。
融合タンパク質構築物の特定の例には、補体調節剤CR1(1-10)、CR1(1-17)、及びC2抗体またはその抗原結合性断片との融合体、例えば、C2scFv-CR1 1-10、C2scFv-CR1 1-17、C2scFv-Crry、C2 IgG1重鎖-CR1 1-10、C2 IgG1重鎖-CR1 1-17、C2 IgG1重鎖(ホール)-CR1 1-10[ノブを含有するFcドメインとの対]、C2 IgG1重鎖(ホール)-CR1 1-17[ノブを含有するFcドメインとの対]、C2 IgG1重鎖(ノブ)[ホールを含有するFcドメインとの対)]、C2 IgG1 Fab重鎖-Crry、C2 IgG1 Fab重鎖-CR1 1-10、C2 IgG1 Fab重鎖-CR1 1-17、CR1 1-10-IgG1 Fc(ホール)[ノブを含有するFcドメインとの対]、CR1 1-17-IgG1 Fc(ホール)[ノブを含有するFcドメインとの対]、CR1 1-10-C2 IgG1重鎖(ホール)[ノブを有するFcドメインを含む構築物との対]、CR1 1-17-C2 IgG1重鎖(ホール)[ノブを有するFcドメインを含む構築物との対]、CR1 1-10-C2 IgG1 Fab重鎖、CR1 1-17-C2 IgG1 Fab重鎖、CR1 1-10-C2カッパ軽鎖、CR1 1-17-C2カッパ軽鎖を含む、図30に示される構築物;補体調節剤H因子、及び抗C3d抗体(3d29)またはその抗原結合性断片との融合体、例えば、3d29カッパ軽鎖、3d29 Fab重鎖マウスIgG1、3d29 Fab重鎖マウスIgG1-Crry、3d29 Fab重鎖マウスIgG1-CR1 1-10、3d29 Fab重鎖マウスIgG1-CR1 1-17、3d29 Fab重鎖マウスIgG1-fH1-5、3d29重鎖マウスIgG1(ノブ)、3d29重鎖マウスIgG1(ホール)-fH1-5、3d29重鎖マウスIgG1-fH1-5を含む、図31に示される構築物;抗C3d抗体(3d8b)またはその抗原結合性断片との融合体、3d8b Fab重鎖マウスIgG1-Crry、3d8b Fab重鎖マウスIgG1-CR1 1-10、3d8b Fab重鎖マウスIgG1-fH1-5、3d8b重鎖マウスIgG1、3d8bカッパ軽鎖-CR1 1-10、3d8bカッパ軽鎖-CR1 1-17、3d8b重鎖マウスIgG1(ホール)と対形成した3d8b重鎖マウスIgG1(ノブ)、3d8b重鎖マウスIgG1-CR1 1-10、3d8b重鎖マウスIgG1-CR1 1-17、3d8b重鎖マウスIgG1(ノブ)と対形成した3d8b重鎖マウスIgG1(ホール)-fH1-5、3d8b重鎖マウスIgG1-fH1-5、CR1 1-10-3d8b重鎖マウスIgG1、CR1 1-10-3d8bカッパ軽鎖、CR1 1-17-3d8bカッパ軽鎖、3d29重鎖マウスIgG1-CR1 1-10、3d29重鎖マウスIgG1-CR1 1-10+Hisタグ、3d29重鎖マウスIgG1(ノブ)-CR1 1-10+Hisタグ、3d29重鎖マウスIgG1(ホール)、3d29重鎖マウスIgG1-CR1 1-17、3d29重鎖マウスIgG1-CR1 1-17+Hisタグ、3d29重鎖マウスIgG1(ノブ)-CR1 1-17+Hisタグ、3d29重鎖マウスIgG1(ホール)、fH1-5-3d8b重鎖マウスIgG1、3d8bカッパ軽鎖-fH1-5、及びfH1-5-3d8bカッパ軽鎖、CR1 1-10-マウスIgG1 Fc(ノブ)、3d8b重鎖マウスIgG1(ホール)、3d8bカッパ軽鎖(マウス)、fH1-5-マウスIgG1 Fc(ノブ)、3d8b Fab重鎖マウスIgG1-CR1 1-17、3d8b重鎖マウスIgG1(ホール)-CR1 1-17、3d8b重鎖マウスIgG1(ノブ)、3d8b重鎖マウスIgG1-CR1 1-17、3d8b重鎖マウスIgG1、3d8bカッパ軽鎖-CR1 1-17、CR1 1-17-3d8b重鎖マウスIgG1、CR1 1-17-3d8bカッパ軽鎖を含む、図32に示される構築物が含まれ得るが、これらに限定されない。例示的な構築物のアミノ酸配列は配列番号103~149に示されており、図30~35はその例示的な図を示す。
本明細書に記載の融合タンパク質構築物のいずれかにおいて、第1ポリペプチドは、(i)配列番号11、12及び13のアミノ酸配列を有する3つの重鎖CDR、または(ii)配列番号11、12もしくは13の1つ以上の中に1つ、2つもしくは3つの保存的アミノ酸置換があるという点で異なっているアミノ酸配列を有する3つの重鎖CDRを含み得;第2ポリペプチドは、(i)配列番号14、15及び16のアミノ酸配列を有する3つの軽鎖CDR、または(ii)配列番号14、15もしくは16の1つ以上の中に1つ、2つもしくは3つの保存的アミノ酸置換があるという点で異なっているアミノ酸配列を有する3つの軽鎖CDRを含み得る。いくつかの実施形態では、CDRの1つ以上の中に単一の保存的アミノ酸置換が存在する。他の実施形態では、CDRの中に1つ、2つ、3つまたは4つの付加的なヒスチジン置換が存在する。
標的指向性部分と補体調節剤との間のリンケージは、(1)2つのタンパク質配列の直接的な融合による結合体化、または(2)介在するリンカー/リンカー配列/スペーサー/テザー形成配列による融合を含み得る。本明細書中で使用する場合、「リンカー」、「リンカー配列」、「スペーサー」または「テザー形成配列」という用語は、2つの分子を連結し、多くの場合2つの分子を好ましい配置にする役割を果たす、分子または分子群(例えばモノマーまたはポリマー)を意味し得る。分子同士を共有結合で繋ぎ合わせるために複数の方策が用いられ得る。これらとしては、タンパク質またはタンパク質ドメインのN末端とC末端との間のポリペプチドリンケージ、ジスルフィド結合を介したリンケージ、及び化学架橋試薬を介したリンケージが挙げられるが、これらに限定されない。一態様において、リンカーは、組換え技術またはペプチド合成によって生成されたペプチド結合である。
本明細書に記載の融合タンパク質構築物は、様々な技術を用いて製造され得る。例えば、本明細書に記載の融合タンパク質構築物をコードする核酸を、例えばプロモーター配列、リボソーム結合部位、転写開始及び停止配列、翻訳開始及び停止配列、転写終結シグナル、ポリアデニル化シグナル、ならびにエンハンサーまたは活性化配列を含めた転写及び翻訳調節配列を含有する発現ベクターに挿入してもよい。調節配列は、プロモーター、ならびに転写開始及び停止配列を含む。加えて、発現ベクターは、その管理を2つの異なる生物で、例えば、発現のためには哺乳動物または昆虫細胞で、また、クローニング及び増幅のためには原核生物宿主で行えるような、1つより多くの複製システムを含み得る。
本明細書に記載の融合タンパク質構築物を含む医薬製剤も、本開示に提供される。本開示の融合タンパク質構築物の医薬製剤は、薬学的に許容される非経口ビヒクルと共に非経口投与、すなわちボーラス、静脈内、腫瘍内、皮下注射のために単位注射剤形として調製されるのが典型的である。融合タンパク質構築物は任意選択的に、凍結乾燥製剤または水溶液の形態で薬学的に許容される希釈剤、担体、賦形剤または安定化剤(Remington’s Pharmaceutical Sciences(1980)16th edition,Osol,A.Ed.)と混合され得る。許容される希釈剤、担体、賦形剤及び安定化剤は、採用される投薬量及び濃度でレシピエントに対して無毒なものであり、これには、緩衝剤、例えばリン酸塩、クエン酸塩及び他の有機酸;アスコルビン酸及びメチオニンを含めた酸化防止剤;保存剤(例えば、塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム;塩化ヘキサメトニウム;塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム;フェノール、ブチルまたはベンジルアルコール;アルキルパラベン、例えばメチルまたはプロピルパラベン;カテコール;レゾルシノール;シクロヘキサノール;3-ペンタノール;及びm-クレゾール);低分子量(約10残基未満の)ポリペプチド;タンパク質、例えば血清アルブミン、ゼラチンもしくは免疫グロブリン;親水性ポリマー、例えばポリビニルピロリドン;アミノ酸、例えばグリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニンもしくはリジン;単糖類、二糖類及び他の炭水化物、例えばグルコース、マンノースもしくはデキストリン;キレート剤、例えばEDTA;糖、例えばスクロース、マンニトール、トレハロースもしくはソルビトール;塩形成対イオン、例えばナトリウム;金属錯体(例えば、Zn-タンパク質複合体);非イオン性界面活性剤、例えばTWEEN(商標)、PLURONICS(商標)もしくはポリエチレングリコール(PEG)、またはその任意の組合せが含まれる。
本明細書に記載の融合タンパク質構築物は、様々な補体関連障害、例えば、限定されないが、虚血再灌流障害、関節リウマチ(RA);狼瘡腎炎;虚血再灌流障害;非典型溶血性***症候群(aHUS);典型的または感染性溶血性***症候群(tHUS);デンスデポジット病(DDD);発作性夜間ヘモグロビン尿症(PNH);多発性硬化症(MS);黄斑変性症(例えば、加齢黄斑変性症(AMD)、地図状萎縮(萎縮性加齢黄斑変性症または進行乾燥型AMDとしても知られる);溶血・肝酵素上昇・低血小板(HELLP)症候群;敗血症;皮膚筋炎;糖尿病網膜症;血栓性血小板減少性紫斑病(TTP);自発性流産;微量免疫血管炎;表皮水疱症;習慣性流産;多発性硬化症(MS);及び外傷性脳損傷を治療するために使用され得る。
本明細書中で特に定義されていない限り、本開示に関連して使用される科学技術用語は、当業者に通常理解される意味を有することとする。用語の意味及び範囲は明確でなければならないが、何らかの曖昧さが潜んでいる場合には、いかなる辞書または外部の定義よりも本明細書中に示された定義が優先される。さらに、文脈が特に求めていない限り、単数形の用語は複数を含むこととし、複数形の用語は単数を含むこととする。本出願において、「または」の使用は、特に明記されない限り「及び/または」を意味する。さらに、「含んでいる」という用語ならびに他の形式、例えば「含む」及び「含まれる」の使用は、限定をするものではない。
例示的なリン脂質結合性免疫グロブリン配列(例えばC2抗体)をハイブリドーマから得た。組換えDNA技術を用いて可変領域をマウスIgG1フレームワーク上に融合させてC2-IgG1(配列番号51)及び様々な抗原結合性断片、例えばC2-scFv、C2-Fabを作り出した。表2は、例示的なC2抗体またはその抗原結合性断片の一覧を示す。そのような例示的なC2抗体または抗原結合性構築物を使用して、例えば補体調節剤タンパク質(またはその断片)をC2抗体またはその抗原結合性断片に繋げることによって、融合タンパク質構築物を作り出した。表3は、C2-補体調節剤融合タンパク質構築物を作り出すために使用した例示的な補体調節剤の一覧を示す。表4は、例示的なC2抗体またはその抗原結合性断片を例示的な補体調節剤に繋げるために使用した例示的なリンカーを示す。C2抗体またはその抗原結合性断片のN末端またはC末端に対する融合タンパク質の配向を探索した。コドン最適化及び合成の後、標準的な方法を用いて各DNA構築物を無血清培地に一過的にトラスフェクトした。培養物上清を採取した後、タンパク質構築物をそのタンパク質構造に関して好適な方法で精製した。任意選択的にリンカー(例示的な配列を表4に示す)で連結されて補体調節剤(例示的な配列を表3に示す)に融合したリン脂質結合配列またはその断片(例示的な配列を表2に示す)を含む作り出されたC2構築物のいくつかの例を本明細書に記載する。構築物の具体例としては例えば以下が挙げられる:C2 scFv-CR1(1-10)は、C2 scFvの軽鎖可変領域に連結されたCR1(1-10)補体調節剤タンパク質を含む単量体型融合タンパク質構築物であり、C2 scFv-Crryは、C2 scFvの軽鎖可変領域に連結されたCrry補体調節剤タンパク質を含む単量体型融合タンパク質構築物であり、C2 Fab-Crryは、C2-FabのCH1ドメインに連結されたCrry補体調節剤タンパク質を含む単量体型融合タンパク質構築物であり、C2 Fab-CR1(1-10)は、C2-FabのCH1ドメインに連結されたCR1(1-10)補体タンパク質を含む単量体型融合タンパク質であり、C2 Fab-CR1(1-17)は、C2-FabのCH1ドメインに連結されたCR1(1-17)補体タンパク質を含む単量体型融合タンパク質であり、CR1(1-10)-C2 Fabは、C2-FabのVHドメインに連結されたCR1(1-10)補体タンパク質を含む単量体型融合タンパク質であり、CR1(1-17)-C2 Fabは、C2-FabのVHドメインに連結されたCR1(1-17)補体タンパク質を含む単量体型融合タンパク質であり、C2-IgG1-CR1(1-10),HC C-term x2は、C2-IgG1の重鎖に各々連結された2つのCR1(1-10)補体調節剤タンパク質を含む四価ホモ二量体型融合タンパク質であり、C2-IgG1-CR1(1-10),HC C-term x1は、C2-IgG1の重鎖に連結された1つのCR1(1-10)補体調節剤タンパク質を含む三価ヘテロ二量体型融合タンパク質であり、二重特異性C2-CR1は、C2 IgG1断片のヒンジ領域に連結されたCR1補体調節剤タンパク質を含む融合タンパク質であり、C2-IgG1-CR1(1-10),HC N-term x1は、C2 IgG1のVHドメインに連結されたCR1(1-10)補体タンパク質を含む三価ヘテロ二量体型融合タンパク質であり、C2-IgG1-CR1(1-10),LC N-term x1は、C2 IgG1のVLドメインに連結されたCR1(1-10)を含む三価ヘテロ二量体型融合タンパク質であり、C2-IgG1-CR1(1-10),HC N-term x2は、C2 IgG1のVHドメインに各々連結された2つのCR1(1-10)補体タンパク質を含む四価ホモ二量体型融合タンパク質構築物であり、C2-IgG1-CR1(1-10),LC N-term x2は、C2 IgG1のVLドメインに各々連結された2つのCR1(1-10)補体調節剤タンパク質を含む四価ホモ二量体型融合タンパク質である。図14は、本実施例に記載のいくつかの例示的なC2融合タンパク質構築物の構造を示す。本明細書に記載の補体調節剤(例えば、MCP、DAF、H因子、CD59)を使用してさらなる構築物が作製され得ることを企図する。
例示的な抗C3d配列をハイブリドーマから得た。組換えDNA技術を用いて重軽鎖の可変領域をマウスIgG1カッパ定常ドメインフレームワークにそれぞれライゲートした。例示的なクローン、例えば、C3d8b、C3d29完全長抗体またはその抗原結合性断片を作り出した。表5は、例示的な抗C3d抗体またはその抗原結合性断片の一覧を示す。そのような例示的な抗C3d抗体または抗原結合性構築物を使用して、例えば補体調節剤タンパク質(またはその断片)を抗C3d抗体またはその抗原結合性断片に繋げることによって融合タンパク質構築物を作り出した。表6は、抗C3d-補体調節剤融合タンパク質構築物を作り出すために使用した例示的な補体調節剤の一覧を示す。表7は、例示的な抗C3d抗体またはその抗原結合性断片を例示的な補体調節剤に繋げるために使用した例示的なリンカーを示す。C3d抗体またはその抗原結合性断片のN末端またはC末端に対する融合タンパク質の配向を探索した。コドン最適化及び合成の後、標準的な方法を用いて各DNA構築物を無血清培地に一過的にトラスフェクトした。培養物上清を採取した後、タンパク質構築物をそのタンパク質構造に関して好適な方法で精製した。任意選択的にリンカー(例示的な配列を表7に示す)で連結されて補体調節剤(例示的な配列を表6に示す)に融合したC3d結合配列またはその断片(例示的な配列を表5に示す)を含む作り出されたC3d構築物のいくつかの例を本明細書に記載する。作り出された抗C3d構築物の具体例を本明細書に記載するが、例えば、3d29-Fab-Crryは、抗C3d Fabを含んでおりそのCH1ドメインが補体調節剤タンパク質Crryに連結されている、単量体型融合タンパク質構築物である。3d29 Fab-CR1 1-10は、抗C3d Fabを含んでおりそのCH1ドメインが補体調節剤タンパク質断片CR1(1-10)に連結されている、単量体型融合タンパク質構築物である。3d29-IgG1-CR1(1-10),HC C-term x1は、抗C3d IgG1のCH3ドメインに連結されたCR1(1-10)を含む三価ヘテロ二量体型融合タンパク質構築物である。3d29-IgG1-CR1(1-10),HC C-term x1,KIHは、抗C3d IgG1のCH3ドメインに連結されたCR1(1-10)を含んでおり抗C3d IgG1のFc領域がノブ・イントゥ・ホール構造を含む、三価ヘテロ二量体型融合タンパク質構築物である。3d29-IgG1-CR1(1-10),HC C-term x2は、抗C3d IgG1の重鎖に各々連結された2つのCR1(1-10)補体調節剤タンパク質を含む、四価ホモ二量体型融合タンパク質である。3d8b-Fab-Crryは、抗C3d Fabを含んでおりそのCH1ドメインが補体調節剤タンパク質Crryに連結されている、単量体型融合タンパク質構築物である。3d8b-Fab-CR1(1-10)は、抗C3d Fabを含んでおりそのCH1ドメインが補体調節剤タンパク質断片CR1(1-10)に連結されている、単量体型融合タンパク質構築物である。3d8b Fab-fH1-5は、抗C3d Fabを含んでおりそのCH1ドメインが補体調節剤タンパク質断片H因子(1-5)に連結されている、単量体型融合タンパク質構築物である。3d8b-IgG1-CR1(1-10),HC C-term x1,KIHは、抗C3d IgG1のCH3ドメインに連結されたCR1(1-10)を含んでおり抗C3d IgG1のFc領域ノブ・イントゥ・ホール構造を含む、三価ヘテロ二量体型融合タンパク質構築物である。3d8b-IgG1-CR1(1-10),HC C-term x2は、抗C3d IgG1の重鎖に各々連結された2つのCR1(1-10)補体調節剤タンパク質を含む、四価ホモ二量体型融合タンパク質である。3d8b-IgG1-CR1(1-10),HC N-term x2は、抗C3d IgG1の重鎖のVHドメインに各々連結された2つのCR1(1-10)補体調節剤タンパク質を含む、四価ホモ二量体型融合タンパク質である。3d8b-IgG1-CR1(1-10),LC N-term x2は、抗C3d IgG1の重鎖のVLドメインに各々連結された2つのCR1(1-10)補体調節剤タンパク質を含む、四価ホモ二量体型融合タンパク質である。二重特異性3d8b-IgG1-CR1(1-10)は、抗C3d IgG1断片のヒンジ領域に連結されたCR1補体調節剤タンパク質を含んでおり抗C3d IgG1のFc領域がノブ・イントゥ・ホール構造を含む、融合タンパク質である。3d8b-IgG1-fH(1-5),HC C-term x1,KIHは、抗C3d IgG1のCH3ドメインに連結されたH因子(1-5)を含んでおり抗C3d IgG1のFc領域がノブ・イントゥ・ホール構造を含む、三価ヘテロ二量体型融合タンパク質構築物である。3d8b-IgG1-fH(1-5),HC C-term x2は、抗C3d IgG1の重鎖に各々連結された2つのH因子(1-5)補体調節剤タンパク質を含む、四価ホモ二量体型融合タンパク質である。3d8b-IgG1-fH(1-5),LC C-term x2は、抗C3d IgG1の軽鎖に各々連結された2つのH因子(1-5)補体調節剤タンパク質を含む、四価ホモ二量体型融合タンパク質である。3d8b-IgG1-fH(1-5),HC N-term x2は、抗C3d IgG1の重鎖のVHドメインに各々連結された2つのH因子(1-5)補体調節剤タンパク質を含む、四価ホモ二量体型融合タンパク質である。3d8b-IgG1-fH(1-5),LC N-term x2は、抗C3d IgG1の軽鎖のVLドメインに各々連結された2つのH因子(1-5)補体調節剤タンパク質を含む、四価ホモ二量体型融合タンパク質である。二重特異性3d8b-IgG1-fH(1-5)は、抗C3d IgG1断片のヒンジ領域に連結されたH因子(1-5)補体調節剤タンパク質を含んでおり抗C3d IgG1のFc領域がノブ・イントゥ・ホール構造を含む、融合タンパク質である。図15~18は、本実施例に記載される例示的な抗C3d融合タンパク質構築物のいくつかの構造を示す。図15~18に示された融合タンパク質構築物の型の例を、溶血アッセイ、LPS活性化アッセイ、補体活性化産物(例えばC3、C4)の沈着を測定するアッセイ、定量的発色アッセイを用いるC1阻害剤試験、個々の補体成分についての免疫化学アッセイ(例えばELISA、ウェスタンブロッティング)を含めたいくつかのアッセイで試験し、各融合タンパク質構築物は補体調節剤タンパク質単独と同程度の活性を呈する。
例示的なアネキシンドメイン結合配列(例えばB4抗体またはその断片)をハイブリドーマから得る。組換えDNA技術を用いて重軽鎖の可変領域をマウスIgG1カッパ定常ドメインフレームワークにそれぞれライゲートして例示的なB4完全長抗体及びその抗原結合性断片を作り出した。表8は、例示的なB4抗体またはその抗原結合性断片の一覧を示す。そのような例示的なB4抗体または抗原結合性構築物を使用して、例えば補体調節剤タンパク質(またはその断片)をB4抗体またはその抗原結合性断片に繋げることによって融合タンパク質構築物を作り出す。表9は、B4補体調節剤融合タンパク質構築物を作り出すために使用される例示的な補体調節剤の一覧を示す。表10は、例示的なB4抗体またはその抗原結合性断片を例示的な補体調節剤に繋げるために使用される例示的なリンカーを示す。B4抗体またはその抗原結合性断片のN末端またはC末端に対する融合タンパク質の配向を探索する。
図13に示されるCR1(1-10)補体調節剤ポリペプチドに連結された例示的な抗C3d抗体(3d8b)を含む例示的な融合タンパク質構築物を設計した。以下の例示的な設計において言及されるアミノ酸位置の付番はKabatのEUインデックスに従う。抗C3d抗体は、配列番号69中の配列を含む軽鎖(ドメインVL及びCK)、ノブを有するFc領域を形成するアミノ酸置換Thr366Trpを含む第2重鎖(ヒンジ-CH2-CH3のドメイン)Fc領域と対形成するホールを含むFc領域を形成するアミノ酸置換Thr366Ser、Met368Ala及びTyr407Valを含む第1重鎖(配列番号89中の配列にあるようなドメインVH-ヒンジ-CH1-CH2-CH3)を含み、第2重鎖は配列番号90の配列にみられるようにヒンジ領域においてリンカー(G4SG4S)(配列番号242)を介してCR1(1-10)補体調節剤ポリペプチドに連結されている。
補体調節剤ポリペプチド、例えばCR1(1-10)CR1(1-17)、H因子(1-5)、MCP(1-4)、DAFまたはCD59に連結された例示的な抗C3d抗体(3d8b)を含む例示的なmAb融合タンパク質構築物を設計した。図19に示される例では、完全長の例示的な抗C3d抗体C3d8bは、そのCH3ドメインの一方を介して第1の例示的な補体調節剤ポリペプチド(例えばH因子(1-5)断片)に連結されており、もう一方のCH3ドメインを介して第2の例示的な補体調節剤ポリペプチド(例えばCR(1-10)断片)に連結されている。以下の例示的な設計において言及されるアミノ酸位置の付番はKabatのEUインデックスに従う。例示的な抗C3d抗体は、配列番号69中の配列を含む軽鎖(ドメインVL及びCK)、ノブを有するFc領域を形成するアミノ酸置換Thr366Trpを含む第2重鎖(ドメインVH-ヒンジ-CH1-CH2-CH3)Fc領域と対形成するホールを含むFc領域を形成するアミノ酸置換Thr366Ser、Met368Ala及びTyr407Valを含む第1重鎖(ドメインVH-CH1-ヒンジ-CH2-CH3)を含み、第1重鎖は配列番号139の配列にみられるようにCH3領域においてリンカー(G4SG4S)(配列番号242)を介してH因子に連結されており、第2重鎖は配列番号140の配列にみられるようにCH3領域においてリンカー(G4SG4S)(配列番号242)を介してCR1(1-10)補体調節剤ポリペプチドに連結されている。
例示的な補体調節剤ポリペプチド(例えば崩壊促進因子DAF(1-4))に連結された例示的な抗C3d抗体(3d8b)を含む例示的なmAb融合タンパク質構築物を設計した。以下の例示的な設計において言及されるアミノ酸位置の付番はKabatのEUインデックスに従う。抗C3d抗体は、配列番号69中の配列を含む軽鎖(ドメインVL及びCK)、及び重鎖(ドメインVH-CH1-ヒンジ-CH2-CH3)を含む。重鎖は配列番号141の配列にみられるようにCH3領域においてリンカー(G4SG4S)(配列番号242)を介してDAF(1-4)に連結されている。
抗C3d抗体3d8b及びその補体調節剤融合体の結合性を酵素結合免疫吸着アッセイ(ELISA)結合アッセイによって測定した。Biacoreを使用した表面プラズモン共鳴によって構築物の結合親和性を測定した。
0.1%のウシ血清アルブミン(BSA)を含有する1X PBSを媒体としてマウスIgG1 Fc、ヒトIgG4 Fc、His6エピトープタグ(配列番号296)を含有する抗体断片、またはCR1融合パートナー含有構築物を調製した。
Wieslab(登録商標)代替及び古典経路ELISA’s(ALPCO)を製造業者の指示事項に従って実施した。手短に述べると、補体保存ヒト血清(CompTech)を、代替または古典キットのために提供された適切な希釈用緩衝液でそれぞれ1:18または1:101に希釈した。試験類縁体をPBS(Gibco)で希釈し、試験類縁体をPBSで2~4倍に希釈することによって用量応答を生成した。その後、希釈された試験類縁体を25xで希釈ヒト血清に添加した。96ウェル平底Wieslabプレートを37℃で1時間インキュベートし(Thermo)、キットによって提供された洗浄用緩衝液で3回洗浄した。その後、抗体結合体を添加し、プレートを30分間インキュベートし、続いて2度目の洗浄を行った。最後に基質を添加し、プレートをもう30分間インキュベートし、吸光度を405nmで読み取った。PRISMソフトフェアを使用してIC50曲線を作成した。
赤血球の調製
45mlのダルベッコリン酸緩衝生理食塩水(Ca2+もMg2+も含まない)(dPBS、Life Technologies)を50mL容の円錐チューブに入った0.5mlのウサギ全血(BioIVT)に添加した。細胞懸濁液を4℃で10分間、2000RPMで遠心分離に掛けた。上清及びバッフィーコートをデカントすることによって除去した。細胞ペレットを0.5mlのdPBSで再懸濁させた。
全ての試薬は4℃に維持した。全てのチューブ、プレート及び溶液は氷上で維持した。0.25mLの1MのMgCl2(Boston BioProducts)と0.5mLの0.5MのEGTA(Boston BioProducts)とをpH7.4で混合することによって新鮮なMg-EGTAの溶液を調製した。0.45mLのMg-EGTAと0.55mLのdPBSとを混合することによって希釈されたMg-EGTA溶液を調製した。10ulの希釈Mg-EGTAをアッセイプレートの各試料ウェルに加えた。ヒト血清(BioIVT)を37℃の水浴中で解凍した。このアッセイに必要とされる基準及び対照は、陽性対照、血清バックグラウンド、及びCAPブロック対照である。適切な濃度で溶液を調製し、別個のプレートで希釈した。2反復で100μLの各対照を試験プレート上の対応するウェルに移した。
20μLの0.5MのEDTA(Corning)を380μLの水(1:20)に添加することによって25mMのEDTAの水溶液(EDTA-H2O)を調製した。400μLの0.5MのEDTAを7.6mLのdPBS(1:20)に添加することによって25mMのEDTAのdPBS溶液(EDTA-PBS)を調製した。
ヘモリシンによるヒツジ赤血球(SRBC)の感作
2mLのSRBC(BioIVT)を3mLのGVB++緩衝液(Boston BioProducts)に添加し、穏やかに混合した。SRBC懸濁液を4℃で5分間、2000RPMで遠心分離に掛けた。上清をデカントし、ペレットをGVB++緩衝液中に再懸濁させた。SRBC懸濁液を4℃で5分間、2000RPMで遠心分離に掛けた。上清を再びデカントした。9mLのGVB++緩衝液をペレットに添加して10%細胞懸濁液を調製した。ヘモリシン(Rockland)を、2mLのmilliQ水に乾燥粉末を再懸濁させることによって調製し、-20℃で保存し、推定濃度は約80mg/mLであった(製造業者の指示事項に従って凍結乾燥粉末を2mLで再構成した)。等しい(10%SRBC懸濁液の体積と等しい)体積のヘモリシンを、GVB++緩衝液でヘモリシン原液を1:100に希釈することによって調製した。希釈されたヘモリシンを10%SRBC懸濁液に滴加し、旋回によって穏やかに混合した。溶液を水浴中で30℃で30分間インキュベートし、15分ごとに旋回した。感作されたSRBCを4℃で一晩保存した。
阻害剤アッセイに用いるための血漿の最適濃度を、CH50試験を用いて決定した。GVB++緩衝液でヒト血清の1:2希釈系列を調製した。血清をまずGVB++緩衝液で1:4に希釈した(300μLのGVB++に100μLの血清)。200μLの希釈血清を希釈系列チューブに加えた。血清希釈液の生成後、200μLの感作ヒツジSRBC(sSRBC)を各希釈血清チューブに加えた。200μLの水を添加して100%溶解対照として役立てた。sRBCを血清なしのGVB++に添加することによって陰性対照を調製した。試料を37℃の水浴中でインキュベートした。試料を2000RPMで5分間遠心分離に掛けてsSRBCをペレットにした。100μLの上清を96ウェルマイクロタイタープレートに移し、100μLの水を各ウェルに加えた。吸光度を541nmで測定した。溶解%を血清希釈に対してプロットすることによって50%溶解(CH50)を算出した。
試験構築物を2X ヒト血清で希釈した。全ての試験構築物を10μMに希釈した。2X ヒト血清で希釈することによる試験構築物の12点の1:2希釈系列。100μLの試料を新鮮なチューブに移した。100μLのGVB++緩衝液を各チューブに加えた。100μLのsSRBCを各チューブに加えた。適切な100%溶解及びGVB++緩衝液対照を調製した。試料を水浴中で37℃で30分間インキュベートした。試料を2000RPMで10分間遠心分離に掛けた。100μLの上清を96ウェルマイクロタイタープレートに移した。100μLのdiH2Oを各ウェルに加え、吸光度を541nmで測定した。
被覆用緩衝液(100%溶解エタノール)(Sigma)を媒体とする50μLのカルジオリピン(Sigma)で96ウェルプレート(Thermofisher)を被覆した。プレートをエタノールの蒸発を可能にするためにゆるく蓋(USA Scientific)をして一晩インキュベートした。被覆されたプレートを300μLのEchelon注文製ブロッキング用緩衝液(Echelon)でブロッキングし、室温で少なくとも2時間インキュベートした。ウェルを吸引し、Echelon注文製緩衝液で希釈された試料100μLを各ウェルに加えた。ウェルを室温で少なくとも90分間インキュベートした。プレートをPBSで3回洗浄し、ペーパータオルで乾燥させた。PBSで希釈された二次抗体100μLを適切なウェルに加えた。C2-IgMの検出のためにはヤギ抗マウスIgM(Southern Biotech)を1:5,000に希釈した。C2 IgG1(マウス)の検出のためにはウサギ抗マウス軽鎖カッパ(Abcam)を1:10,000に希釈した。C2-IgG1(ヒト)の検出のためにはマウス抗ヒトpFc’(Abcam)を1:20,000に希釈した。His6エピトープタグ(配列番号296)を有するC2断片の検出のためにはヤギ抗6XHis(Abcam)を1:5,000に希釈した。二次抗体の添加及びインキュベートの後、プレートをPBSで3回洗浄した。プレートを100μLのBioFx超高感度TMB(Surmodics)の添加によって発色させた。プレートを暗所にて15分間インキュベートした。100μLの停止溶液(Surmodics)の添加によって反応を停止し、吸光度を450nmで測定した。
96ウェルプレートを、50μLの0.1mg/mlゼラチンベースコーティング溶液(Cell Biologic)を添加して少なくとも5分経過させるすることによってコラーゲンで被覆した。HMEC細胞懸濁液を完全培養培地中に320,000細胞/mLの細胞密度で調製した。ゼラチン溶液を除去し、200μLの細胞懸濁液をTrueLine細胞培養プレート(MedSupply Partners)の各ウェル内に分注した。播種された細胞を標準的な培養条件で少なくとも48時間、またはコンフルエンシーに達するまでインキュベートした。HBSS培地(Fisher Scientific)中に0.1%のデキストロース(Sigma)、28mMのトリズマ塩基(Sigma)、0.5%のBSA(Jackon Imm.Research)を含んだpH7.3の溶液を混合することによって試験培地を調製した。30%のH2O2を試験培地で1:100に希釈することまたは10μMのADP(Chrono)によって100mMのH2O2の溶液を調製した。単層が完全なまま残ることを確保しつつ残存する培養培地を除去するために、HMEC単層を試験培地で穏やかに3回洗浄した。洗浄後、100mMのH2O2または10μMのADPを50μL添加し、プレートを37℃で5%のCO2を補充して正確に10分間インキュベートした。50μLの100mMのH2O2または10μMのADPを除去し、HMEC単層を試験培地で穏やかに3回洗浄した。C3断片(C3b/iC3b)沈着を評価するために、(融合タンパク質と予め混合されている、またはいない)試験培地で希釈された25%のヒト血清(CompTec)をウェルに50μL加えた。プレートを37℃で5%のCO2を補充して60分間インキュベートした。残存する血清を除去するために細胞を試験培地で3回洗浄した。
処置から72時間後のcfh-/-マウスにおける補体阻害剤の影響
3~4月齢の雌のcfh-/-マウスを以下のもので処置した:1)PBS、n=6;2)3d8b-CR11-17、n=5;3)3d8b-hfH1-5、n=5;4)可溶性CR11-17(sCR1-17)、n=5;または5)可溶性H因子(sfH1-5)、n=5。処置群には単回の静脈内(IV)注射を施し、72時間後に屠殺した。4月齢の雌のcfh-/-(n=4)の対照群には可溶性3d8b-G1のIV注射を1回施し、72時間後に屠殺した。未処置で年齢が一致する野生型マウスも、同じ期間中に試験に従うことによって対照として使用した。
4~5月齢の雄のcfh-/-マウスを以下のもので処置した(どの群もn=3):1)3d8b-CR11-17、2)3d8b-mfH1-5、3)3d8b-Crry、または4)3d8b。化合物を1日目及び3日目にIV注射によって投与した。9日目にマウスを屠殺した。血清中C3レベルをベースライン時(処置前)及び試験の最後にELISAによって測定した。血漿中のアミノ基転移酵素(ALT及びAST)をReflotron(登録商標)試験で測定した。屠殺時に腎臓及び肝臓を採取し、C3沈着物をIFによって測定した。
試験デザイン
98匹の雄の8~20gのBalb/cマウス(Charles River Laboratories,Wilmington,MA)に自由に食餌と水を採らせ、温度21+/-5℃及び相対湿度50%+/-30%の濾過された空気が供給された部屋に収容した。部屋には、薄明かりのない12時間の点灯と12時間の消灯との明暗周期のための自動タイマーをセットした。寝床のためにShepherd’s(登録商標)1/4’’プレミアムトウモロコシ穂軸を使用し、Ancare提供のNesletsを2片と、crink’l Nest(商標)とを各ケージに入れた。動物にLab Diet(登録商標)5001を餌として与えた。水は無制限に与えた。ケージ1つあたり4~5匹の動物を収容した。各々8~10匹のマウスから構成された9つの実験群をこの試験に使用した。
外科手術は全て無菌技術を用いて実施した。中大脳動脈閉塞(MCAO)の前に感染を防止するためにセファゾリン(40mg/kg、Hospira)を腹腔内(IP)投与した。MCAOの前に鎮痛剤としてブプレノルフィン(約0.1mg/kg、Par Pharmaceuticals)を皮下(SC)に与えた。外科手術の前に塩化ナトリウム高浸透圧眼用軟膏(Muro128無菌眼用5%軟膏)を眼に塗布した。
急性脳卒中のモデルであるMCAO再灌流モデルをこの試験に使用した。N2O:O2(2:1)で2~3%のイソフルランを使用してマウスに麻酔を掛け、仰臥位で1.5~2.5%のイソフルランを呼吸チューブによって維持した。首の中央部を電気バリカンで剃り、Hibiclens及びアルコールの複数回塗布によって清浄にした。無菌技術を用いて右総頚動脈(CCA)の上から皮膚切開を行い、筋肉を引き込め、CCA分岐点を露出させた。CCAを結紮し、外頚動脈(ECA)の遠位部分を一時的に締め付けた。その後、ナイロン縫合糸をCCAから挿入して内頚動脈(ICA)の中に8~9mmの所定距離だけ進めた。この手順を用いると縫合糸のシリコーンで被覆された先端部が脳内のMCAの起点に閉塞し、MCA領域に血流の欠如を引き起こす。その後、ECAのクリップ/縫合糸を取り除いた。皮膚切開部を外科用ステープルで閉じ、動物を麻酔から覚醒させ、元のケージに戻した。60分の虚血期間の後に動物に再び麻酔を掛け、創傷部を再び開き、血管内の縫合糸をVVAから取り除いた。皮膚創傷部を再び閉じ、動物を完全に麻酔から覚醒するまで監視し、その時点でそれらを元のケージに戻した。麻酔の時間中は中核温を37+/-1℃に維持するために直腸温度計に自動調節温熱パッドを接続した。
偽MCAO手術も実施した。N2O:O2(2:1)で2~3%のイソフルランを使用してマウスに麻酔を掛け、仰臥位で1.5~2.5%のイソフルランを呼吸チューブによって維持した。首の中央部を電気バリカンで剃り、Hibiclens及びアルコールの複数回塗布によって清浄にした。無菌技術を用いて右総頚動脈(CCA)の上から皮膚切開を行い、筋肉を引き込め、CCA分岐点を露出させた。CCA、ECA及びICAを孤立させ、その後、皮膚切開部を外科用ステープルで閉じた。動物を麻酔から覚醒させ、元のケージに戻した。麻酔の時間中は中核温を37+/-1℃に維持するために直腸温度計に自動調節温熱パッドを接続した。
全ての投薬溶液は使用するときまで4℃で保存した。再灌流から60分後にMCAO動物にPBS、C3d mAb、またはC3d-CR11-17をIV尾静脈注射によって与えた。偽手術動物には手術時刻から60分後にPBSを与えた。
外科手術を実施しなかった異なる個人が、外科手術後の各動物に処置を無作為に振り分けた。投薬溶液の処置を各日に等しく分配した。
MCAOから48時間後にケタミン/キシラジン混合物(約100/10mg/kg)を使用してマウスを屠殺し、氷冷ヘパリン処理PBSで満たし、続いて氷冷4%パラホルムアルデヒド(PFA)で満たした。その後、脳を取り出し、冷蔵庫内で24時間、4%PFA中で後固定した。
4%PFAによる後固定から24時間後に脳を30%スクロース溶液に換え、冷蔵庫内でもう3日間保った。その後、マウス脳マトリックスを使用して各脳から厚み1mmの5つの頭部切片(ブレグマと比較してそれぞれ1.1、-0.9、-1.9、-2.9)を切り出し、標準的なCryoMold内でTissue-Tek(登録商標)O.C.T化合物に包埋した。その後、ドライアイスと合わせた2-メチルブタンで満たされたトレイに型を入れた。OCT化合物を冷凍し、試料をすぐさまジップロック袋の中に密封し、組織学研究所に送る時まで-80℃で保存した。
顕微鏡に固定したデジタルカメラを使用して画像をSPOTソフトウェアを使用して取り込んだ。ImageJ(NIHソフトウェア)を使用して梗塞領域の体積解析を実施した。手描きツールを使用して同側(右側)半球の非梗塞組織及び対側(左側)半球の組織の領域の外形をなぞった。無傷の対側半球の面積から同側半球の非梗塞面積を差し引くことによって梗塞面積を算出した。その後、面積に切片厚み(1mm)を乗じること及び各サンプリング(5)間で切片の数を足し合わせることによって各半球の体積を算出した。梗塞体積を無傷の半球体積に対する百分率として表した。
表33は、MCAO研究で試験したタンパク質をまとめたものである。図34は、試験において算出された梗塞領域の百分率を示す。データは全て平均+/-標準誤差として表した。データは一元配置ANOVAによって解析した。
0日目に雄のBALB/c OLAマウスにアドリアマイシン(11mg/kg)を静脈内に尾静脈を介して与えた。8日目にマウスを代謝ケージに入れ、16時間かけて尿を採取した。Cobas c111分析器を使用して尿試料をアルブミン及びクレアチニンについて分析した。全てのマウスは8日目までに、尿中アルブミン:クレアチニン比(uACR)によって判定される腎不全を呈した。マウスを無作為にuACRに基づいて群に分けた。10日目に、PBS(n=14)か、完全マウス融合タンパク質C3d mAb-Crry(n=14、50mg/kg)か、C3d mAb-fH1-5(n=13、50mg/kg)か、fH1-5またはCrryタンパク質を含有する非標的指向化対照かのいずれかの単回用量IVをマウスに施した。マウスを再び代謝ケージに入れて22日目の尿を16時間かけて採取し、尿中アルブミン及びクレアチニンを決定した(図35)。
目的:この試験の目的は、補体媒介性疾患または障害、例えば単なる例示のための進行性補体3(C3)糸球体腎炎を有する患者における例示的な抗C3d抗体-補体調節剤融合タンパク質構築物による治療の有効性、安全性及び忍容性を評価することである。
体温での腎臓における虚血再灌流(I/R)障害は、循環血液量減少性ショック、腎動脈閉塞及び遮断手技を含めたいくつかの臨床症状との関連性を有する。
加齢黄斑変性症(AMD)は工業化世界において55歳以降の失明の主因である。AMDは主に2つの形態で発生する:新生血管型(湿潤型)AMD及び萎縮型(乾燥型)AMD。AMDを有する個人のうちの約20%しか湿潤型を発症しないにもかかわらず、新生血管型(湿潤型)はAMD関連の重度視力低下の90%を占める。AMDの臨床特徴としては、複数のドルーゼン、地図状萎縮、及び脈絡膜血管新生(CNV)が挙げられる。2004年12月にFDAは、湿潤型(新生血管型)のAMDの治療のために、血管内皮成長因子(VEGF)の作用を特異的に標的として遮断する新しい部類の眼科用薬であるマクジェン(ペガプタニブ)を承認した(Ng et al.,Nat Rev.Drug Discov 5:123-32(2006))。マクジェンは、AMD患者の小群のための有望な新規治療選択肢に相当するが、この複雑な疾患に対するさらなる治療法を開発する差し迫った必要性が未だ存在している。複数の独立した系統の研究が、AMDの発病における補体活性化の中心的役割を暗示している。AMDの最も重篤な形態である脈絡膜血管新生(CNV)の発病には補体経路の活性化が関与している可能性がある。
非典型溶血性***症候群(aHUS)は、溶血性貧血、血小板減少症、ならびに腎臓及び他の臓器の微小循環における血小板血栓を原因とする腎不全を特徴とする。aHUSは、不完全な補体調節に関連しており、孤発性か家族性かのどちらかであり得る。aHUSは、補体H因子、膜補助因子B及びI因子、ならびに補体H因子関連1(CFHR1)及び補体H因子関連3(CFHR3)を含めた補体活性化をコードする遺伝子における突然変異に関連している。Zipfel,P.F.,et al.,PloS Genetics 3(3):e41(2007)。
ペプチド間で14アミノ酸が重複した線形重複15アミノ酸ペプチドとして翻訳されるC3dg延長型に対して、及び追加の15ペプチドに対して、マウスIgG1抗体のPEPperMAP(登録商標)線形エピトープマッピングを実施した。二次ヤギ抗マウスIgG(H+L)DyLight680抗体(1:5000)でC3dgペプチドマイクロアレイの事前染色を実施して、主となるアッセイに干渉する可能性がある線形C3dgペプチドとのバックグラウンド相互作用を決定した。C3dgペプチドマイクロアレイを、インキュベート用緩衝液(例えばブロッキング用緩衝液を10%含む洗浄用緩衝液)中1μg/ml、10μg/mlまたは100μg/mlの濃度の例示的な抗C3dマウスIgG1抗体3d29、3d8b、3d9aと共にインキュベートし、続いて二次ヤギ抗マウスIgG(H+L)DyLight680抗体(1:5000)及び対照マウスモノクローナル抗HA(12CA5)DyLight800抗体(1:2000)で染色した。CI試料を陰性対照として使用した。インキュベート工程は140rpmで振盪しながら4℃で16時間実施した。二次抗体及び対照抗体による染色をインキュベート用緩衝液中で45分間、室温(RT)で実施した。LI-COR Odyssey撮像システムでの読出しを7/7(赤/緑)のスキャン強度で行った。次に、ペプチドマイクロアレイのフレームを構成している追加のHAペプチドを内部品質対照として染色して、アッセイ品質、及びペプチドマイクロアレイの完全性を確認した。表34に材料及び方法をより詳しく記載する。
補体関連抗原に結合する単量体型融合タンパク質構築物であって、
a)N末端からC末端に向かってA-Bの配向で並んだドメインA及びドメインBを含む第1ポリペプチド、
b)N末端からC末端に向かってE-Fの配向で並んだドメインE及びドメインFを含む第2ポリペプチド
を含み、前記ドメインA、前記ドメインB、前記ドメインEまたは前記ドメインFの少なくとも1つがドメインRに結合体化されており、
(i)前記ドメインAが、重鎖可変領域アミノ酸配列(VH)またはその抗原結合性断片を含むものであり、
(ii)前記ドメインBが、重鎖CH1定常領域アミノ酸配列を含むものであり、
(iii)前記ドメインRが、補体調節剤ポリペプチドを含むものであり、
(iv)前記ドメインEが、軽鎖可変領域アミノ酸配列(VL)またはその抗原結合性断片を含むものであり、
(v)前記ドメインFが、軽鎖定常領域アミノ酸配列(CL1)を含むものであり、
前記第1ポリペプチドの前記ドメインBと前記第2ポリペプチドの前記ドメインFとが1つ以上のジスルフィド結合を介して繋がっている、前記単量体型融合タンパク質構築物。
[態様2]
前記第1ポリペプチドが前記ドメインA、前記ドメインB及び前記ドメインRを含み、前記第1ポリペプチドの前記ドメインがN末端からC末端に向かってR-A-Bの配向で並んでおり、前記ドメインRと前記ドメインAとが結合体化している、請求項1に記載の単量体型融合タンパク質構築物。
[態様3]
前記第1ポリペプチドが前記ドメインA、前記ドメインB及び前記ドメインRを含み、前記第1ポリペプチドの前記ドメインがN末端からC末端に向かってA-B-Rの配向で並んでおり、前記ドメインBと前記ドメインRとが結合体化している、請求項1に記載の単量体型融合タンパク質構築物。
[態様4]
前記第2ポリペプチドが前記ドメインE、前記ドメインF及び前記ドメインRを含み、前記第2ポリペプチドの前記ドメインがN末端からC末端に向かってR-E-Fの配向で並んでおり、前記ドメインEと前記ドメインRとが結合体化している、請求項1に記載の単量体型融合タンパク質構築物。
[態様5]
前記第2ポリペプチドが前記ドメインE、前記ドメインF及び前記ドメインRを含み、前記第2ポリペプチドの前記ドメインがN末端からC末端に向かってE-F-Rの配向で並んでおり、前記ドメインFと前記ドメインRとが結合体化している、請求項1に記載の単量体型融合タンパク質構築物。
[態様6]
第2補体調節ポリペプチドをさらに含み、前記第2補体調節ポリペプチドと前記ドメインRとが同じであるかまたは異なっている、請求項2、3、4または5に記載の単量体型融合タンパク質構築物。
[態様7]
補体関連抗原に結合する融合タンパク質構築物であって、第1ポリペプチド及び第2ポリペプチドを含み、
a)前記第1ポリペプチドが、ドメインA、ドメインB、ドメインR、ヒンジ領域、ドメインC及びドメインDを含むものであり、
前記第1ポリペプチドの前記ドメインA、B、ヒンジ領域、C及びDがN末端からC末端に向かってA-B-ヒンジ領域-C-Dの配向で並んでおり、
(i)前記ドメインAが、重鎖可変領域アミノ酸配列(VH)またはその抗原結合性断片を含むものであり、
(ii)前記ドメインBが、重鎖CH1定常領域アミノ酸配列を含むものであり、
(iii)前記ドメインCが、重鎖CH2定常領域アミノ酸配列を含むものであり、
(iv)前記ドメインDが、重鎖CH3定常領域アミノ酸配列を含むものであり、
(v)前記ドメインRが、補体調節剤ポリペプチドを含むものであり、
(1)前記ドメインAと前記ドメインRとが結合体化しているかまたは(2)前記ドメインDと前記ドメインRとが結合体化しており、
b)前記第2ポリペプチドが、ドメインE及びドメインFを含むものであり、
前記第2ポリペプチドの前記ドメインE及びFがN末端からC末端に向かってE-Fの配向で並んでおり、
(i)前記ドメインEが、軽鎖可変領域アミノ酸配列(VL)またはその抗原結合性断片を含むものであり、
(ii)前記ドメインFが、軽鎖定常領域アミノ酸配列(CL1)を含むものであり、
前記第1ポリペプチドの前記ドメインBと前記第2ポリペプチドの前記ドメインFとが1つ以上のジスルフィド結合を介して繋がっている、前記融合タンパク質構築物。
[態様8]
2つの前記第1ポリペプチドと2つの前記第2ポリペプチドとを含む四価ホモ二量体型融合タンパク質構築物であり、前記第1ポリペプチドの少なくとも1つにおいて前記ドメインDと前記ドメインRとが結合体化しており、前記2つの第1ポリペプチドが前記ヒンジ領域において1つ以上のジスルフィド結合を介して繋がり合っている、請求項7に記載の融合タンパク質構築物。
[態様9]
2つの前記第1ポリペプチドと2つの前記第2ポリペプチドとを含む四価ホモ二量体型融合タンパク質構築物であり、前記第1ポリペプチドの少なくとも1つにおいて前記ドメインAと前記ドメインRとが結合体化しており、前記2つの第1ポリペプチドが前記ヒンジ領域において1つ以上のジスルフィド結合を介して繋がり合っている、請求項7に記載の融合タンパク質構築物。
[態様10]
ドメインR1をさらに含み、前記ドメインR1が第2補体調節ポリペプチドを含み、前記ドメインR1と前記ドメインRとが同じであるかまたは異なっている、り、
前記第1及び第3ポリペプチドが前記ヒンジ領域において1つ以上のジスルフィド結合を介して繋がり合っている、
四価ヘテロ二量体型融合タンパク質構築物である、請求項7に記載の融合タンパク質構築物。
[態様14]
前記第1ポリペプチドにおいて前記ドメインDと前記ドメインRとが結合体化している、請求項13に記載の融合タンパク質構築物。
[態様15]
前記第1ポリペプチドにおいて前記ドメインAと前記ドメインRとが結合体化している、請求項13に記載の融合タンパク質構築物。
[態様16]
ドメインR1をさらに含み、前記ドメインR1が第2補体調節ポリペプチドを含み、前記ドメインR1と前記ドメインRとが同じであるかまたは異なっている、請求項14または請求項15に記載の融合タンパク質構築物。
[態様17]
前記ドメインR1が前記第1ポリペプチドに結合体化されている、請求項16に記載の融合タンパク質構築物。
[態様18]
前記ドメインR1が前記第2ポリペプチドに結合体化されている、請求項16に記載の融合タンパク質構築物。
[態様19]
前記ドメインR1が前記第3ポリペプチドに結合体化されている、請求項16に記載の融合タンパク質構築物。
[態様20]
前記ドメインR1が前記第4ポリペプチドに結合体化されている、請求項16に記載の融合タンパク質構築物。
[態様21]
補体関連抗原に結合する融合タンパク質構築物であって、第1ポリペプチド及び第2ポリペプチドを含み、
a)前記第1ポリペプチドが、ドメインA、ドメインB、ドメインR、ヒンジ領域及びドメインCを含むものであり、
前記第1ポリペプチドの前記ドメインA、B、ヒンジ領域及びCがN末端からC末端に向かってA-B-ヒンジ領域-Cの配向で並んでおり、
(i)前記ドメインAが、重鎖可変領域アミノ酸配列(VH)またはその抗原結合性断片を含むものであり、
(ii)前記ドメインBが、重鎖CH1定常領域アミノ酸配列を含むものであり、
(iii)前記ドメインCが、重鎖CH2定常領域アミノ酸配列を含むものであり、
(iv)前記ドメインRが、補体調節剤ポリペプチドを含むものであり、
(1)前記ドメインAと前記ドメインRとが結合体化しているかまたは(2)前記ドメインCと前記ドメインRとが結合体化しており、
b)前記第2ポリペプチドが、ドメインE及びドメインFを含むものであり、
前記ドメインE及びFがN末端からC末端に向かってE-Fの配向で並んでおり、
(i)前記ドメインEが、軽鎖可変領域アミノ酸配列(VL)またはその抗原結合性断片を含むものであり、
(ii)前記ドメインFが、軽鎖定常領域アミノ酸配列(CL1)を含むものであり、
前記第1ポリペプチドの前記ドメインBと前記第2ポリペプチドの前記ドメインFとが1つ以上のジスルフィド結合を介して繋がっている、前記融合タンパク質構築物。
[態様22]
2つの前記第1ポリペプチドと2つの前記第2ポリペプチドとを含む四価ホモ二量体型融合タンパク質構築物であり、前記第1ポリペプチドの少なくとも1つにおいて前記ドメインCと前記ドメインRとが結合体化しており、前記2つの第1ポリペプチドが前記ヒンジ領域において1つ以上のジスルフィド結合を介して繋がり合っている、請求項21に記載の融合タンパク質構築物。
[態様23]
2つの前記第1ポリペプチドと2つの前記第2ポリペプチドとを含む四価ホモ二量体型融合タンパク質構築物であり、前記第1ポリペプチドの少なくとも1つにおいて前記ドメインAと前記ドメインRとが結合体化しており、前記2つの第1ポリペプチドが前記ヒンジ領域において1つ以上のジスルフィド結合を介して繋がり合っている、請求項21に記載の融合タンパク質構築物。
[態様24]
ドメインR1をさらに含み、前記ドメインR1が第2補体調節ポリペプチドを含み、前記ドメインR1と前記ドメインRとが同じであるかまたは異なっている、請求項21に記載の融合タンパク質構築物。
[態様25]
前記ドメインAと前記ドメインRとが結合体化しており、前記ドメインCと前記ドメインR1とが結合体化している、請求項24に記載の融合タンパク質構築物。
[態様26]
前記ドメインCと前記ドメインRとが結合体化しており、前記ドメインAと前記ドメインR1とが結合体化している、請求項24に記載の融合タンパク質。
[態様27]
c)(i)ドメインA、ドメインB、ヒンジ領域、ドメインC及びドメインD、(ii)ドメインA、ドメインB、ヒンジ領域及びドメインC、または(iii)ドメインA、ドメインB及びヒンジ領域を含む、第3ポリペプチド
をさらに含み、前記第3ポリペプチドの前記ドメインA、B、ヒンジ領域、C及びDがN末端からC末端に向かってA-B-ヒンジ領域-C-Dの配向で並んでおり、また、
d)ドメインE及びドメインFを含む第4ポリペプチド
をさらに含み、前記第4ポリペプチドの前記ドメインE及びFがN末端からC末端に向かってE-Fの配向で並んでおり、
前記第3ポリペプチドの前記ドメインBと前記第4ポリペプチドの前記ドメインFとが1つ以上のジスルフィド結合を介して繋がっており、
前記第1及び第3ポリペプチドが前記ヒンジ領域において1つ以上のジスルフィド結合を介して繋がり合っている、
四価ヘテロ二量体型融合タンパク質構築物である、請求項21に記載の融合タンパク質構築物。
[態様28]
前記第1ポリペプチドにおいて前記ドメインCと前記ドメインRとが結合体化している、請求項27に記載の融合タンパク質構築物。
[態様29]
前記第1ポリペプチドにおいて前記ドメインAと前記ドメインRとが結合体化している、請求項27に記載の融合タンパク質構築物。
[態様30]
ドメインR1をさらに含み、前記ドメインR1が第2補体調節ポリペプチドを含み、前記ドメインR1と前記ドメインRとが同じであるかまたは異なっている、請求項28または請求項29に記載の融合タンパク質構築物。
[態様31]
前記ドメインR1が前記第1ポリペプチドに結合体化されている、請求項30に記載の融合タンパク質構築物。
[態様32]
前記ドメインR1が前記第2ポリペプチドに結合体化されている、請求項30に記載の融合タンパク質構築物。
[態様33]
前記ドメインR1が前記第3ポリペプチドに結合体化されている、請求項30に記載の融合タンパク質構築物。
[態様34]
前記ドメインR1が前記第4ポリペプチドに結合体化されている、請求項30に記載の融合タンパク質構築物。
[態様35]
補体関連抗原に結合する融合タンパク質構築物であって、第1ポリペプチド及び第2ポリペプチドを含み、
a)前記第1ポリペプチドが、ドメインA、ドメインB、ドメインR及びヒンジ領域を含むものであり、
前記第1ポリペプチドの前記ドメインA、B及びヒンジ領域がN末端からC末端に向かってA-B-ヒンジ領域の配向で並んでおり、
(i)前記ドメインAが、重鎖可変領域アミノ酸配列(VH)またはその抗原結合性断片を含むものであり、
(ii)前記ドメインBが、重鎖CH1定常領域アミノ酸配列を含むものであり、
(iii)前記ドメインRが、補体調節剤ポリペプチドを含むものであり、
(1)前記ドメインAと前記ドメインRとが結合体化しているかまたは(2)前記ヒンジ領域と前記ドメインRとが結合体化しており、
b)前記第2ポリペプチドが、ドメインE及びドメインFを含むものであり、
前記ドメインE及びFがN末端からC末端に向かってE-Fの配向で並んでおり、
(i)前記ドメインEが、軽鎖可変領域アミノ酸配列(VL)またはその抗原結合性断片を含むものであり、
(ii)前記ドメインFが、軽鎖定常領域アミノ酸配列(CL1)を含むものであり、
前記第1ポリペプチドの前記ドメインBと前記第2ポリペプチドの前記ドメインFとが1つ以上のジスルフィド結合を介して繋がっている、前記融合タンパク質。
[態様36]
2つの前記第1ポリペプチドと2つの前記第2ポリペプチドとを含む四価ホモ二量体型融合タンパク質構築物であり、前記第1ポリペプチドの少なくとも1つにおいて前記ドメインAと前記ドメインRとが結合体化しており、前記2つの第1ポリペプチドが前記ヒンジ領域において1つ以上のジスルフィド結合を介して繋がり合っている、請求項35に記載の融合タンパク質構築物。
[態様37]
2つの前記第1ポリペプチドと2つの前記第2ポリペプチドとを含む四価ホモ二量体型融合タンパク質構築物であり、前記第1ポリペプチドの少なくとも1つにおいて前記ヒンジ領域と前記ドメインRとが結合体化しており、前記2つの第1ポリペプチドが前記ヒンジ領域において1つ以上のジスルフィド結合を介して繋がり合っている、請求項35に記載の融合タンパク質構築物。
[態様38]
ドメインR1をさらに含み、前記ドメインR1が第2補体調節ポリペプチドを含み、前記ドメインR1と前記ドメインRとが同じであるかまたは異なっている、請求項36または請求項37に記載の融合タンパク質構築物。
[態様39]
前記ドメインAと前記ドメインRとが結合体化しており、前記ヒンジドメインと前記ドメインR1とが結合体化している、請求項38に記載の融合タンパク質構築物。
[態様40]
前記ヒンジドメインと前記ドメインRとが結合体化しており、前記ドメインAと前記ドメインR1とが結合体化している、請求項38に記載の融合タンパク質。
[態様41]
c)(i)ドメインA、ドメインB、ヒンジ領域、ドメインC及びドメインD、(ii)ドメインA、ドメインB、ヒンジ領域及びドメインC、または(iii)ドメインA、ドメインB及びヒンジ領域を含む、第3ポリペプチド
をさらに含み、前記第3ポリペプチドの前記ドメインA、B、ヒンジ領域、C及びDがN末端からC末端に向かってA-B-ヒンジ領域-C-Dの配向で並んでおり、また、
d)ドメインE及びドメインFを含む第4ポリペプチド
をさらに含み、前記第4ポリペプチドの前記ドメインE及びFがN末端からC末端に向かってE-Fの配向で並んでおり、
前記第3ポリペプチドの前記ドメインBと前記第4ポリペプチドの前記ドメインFとが1つ以上のジスルフィド結合を介して繋がっており、
前記第1及び第3ポリペプチドが前記ヒンジ領域において1つ以上のジスルフィド結合を介して繋がり合っている、
四価ヘテロ二量体型融合タンパク質構築物である、請求項35に記載の融合タンパク質構築物。
[態様42]
前記第1ポリペプチドにおいて前記ヒンジドメインと前記ドメインRとが結合体化している、請求項41に記載の融合タンパク質構築物。
[態様43]
前記第1ポリペプチドにおいて前記ドメインAと前記ドメインRとが結合体化している、請求項41に記載の融合タンパク質構築物。
[態様44]
ドメインR1をさらに含み、前記ドメインR1が第2補体調節ポリペプチドを含み、前記ドメインR1と前記ドメインRとが同じであるかまたは異なっている、請求項42または請求項43に記載の融合タンパク質構築物。
[態様45]
前記ドメインR1が前記第1ポリペプチドに結合体化されている、請求項44に記載の融合タンパク質構築物。
[態様46]
前記ドメインR1が前記第2ポリペプチドに結合体化されている、請求項44に記載の融合タンパク質構築物。
[態様47]
前記ドメインR1が前記第3ポリペプチドに結合体化されている、請求項44に記載の融合タンパク質構築物。
[態様48]
前記ドメインR1が前記第4ポリペプチドに結合体化されている、請求項44に記載の融合タンパク質構築物。
[態様49]
補体関連抗原に結合する三価ヘテロ二量体型融合タンパク質構築物であって、第1ポリペプチド、第2ポリペプチド、第3ポリペプチド及び第4ポリペプチドを含み、
a)前記第1ポリペプチドが、ドメインA、ドメインB、ヒンジ領域、ドメインC、ドメインD及びドメインRを含むものであり、
前記第1ポリペプチドの前記ドメインA、B、ヒンジ領域、C及びDがN末端からC末端に向かってA-B-ヒンジ領域-C-Dの配向で並んでおり、
(1)前記ドメインAと前記ドメインRとが結合体化しているかまたは(2)前記ドメインDと前記ドメインRとが結合体化しており、
b)前記第2ポリペプチドが、ドメインE及びドメインFを含むものであり、
前記第2ポリペプチドの前記ドメインE及びFがN末端からC末端に向かってE-Fの配向で並んでおり、
c)前記第3ポリペプチドが、(i)ドメインA、ドメインB、ヒンジ領域、ドメインC及びドメインD、(ii)ドメインA、ドメインB、ヒンジ領域及びドメインC、または(iii)ドメインA、ドメインB及びヒンジ領域を含むものであり、
前記第3ポリペプチドの前記ドメインA、B、ヒンジ領域、C及びDがN末端からC末端に向かってA-B-ヒンジ領域-C-Dの配向で並んでおり、
d)前記第4ポリペプチドが、ドメインE及びドメインFを含むものであり、
前記第4ポリペプチドの前記ドメインE及びFがN末端からC末端に向かってE-Fの配向で並んでおり、
前記第1ポリペプチドの前記ドメインBと前記第2ポリペプチドの前記ドメインFとが1つ以上のジスルフィド結合を介して繋がっており、
前記第3ポリペプチドの前記ドメインBと前記第4ポリペプチドの前記ドメインFとが1つ以上のジスルフィド結合を介して繋がっており、
前記第1及び第3ポリペプチドが前記ヒンジ領域において1つ以上のジスルフィド結合を介して繋がり合っており、
(i)前記ドメインAが、重鎖可変領域アミノ酸配列(VH)またはその抗原結合性断片を含むものであり、
(ii)前記ドメインBが、重鎖CH1定常領域アミノ酸配列を含むものであり、
(iii)前記ドメインRが、補体調節剤ポリペプチドを含むものであり、
(iv)前記ドメインCが、重鎖CH2定常領域アミノ酸配列を含むものであり、
(v)前記ドメインDが、重鎖CH3定常領域アミノ酸配列を含むものであり、
(vi)前記ドメインEが、軽鎖可変領域アミノ酸配列(VL)またはその抗原結合性断片を含むものであり、
(vii)前記ドメインFが、軽鎖定常領域アミノ酸配列(CL1)を含むものである、
前記三価ヘテロ二量体型融合タンパク質構築物。
[態様50]
前記第1ポリペプチドの前記ドメインAと前記ドメインRとが結合体化している、請求項49に記載の三価ヘテロ二量体型融合タンパク質構築物。
[態様51]
前記第1ポリペプチドの前記ドメインDと前記ドメインRとが結合体化している、請求項49に記載の三価ヘテロ二量体型融合タンパク質構築物。
[態様52]
補体関連抗原に結合する三価ヘテロ二量体型融合タンパク質構築物であって、第1ポリペプチド、第2ポリペプチド、第3ポリペプチド及び第4ポリペプチドを含み、
a)前記第1ポリペプチドが、ドメインA、ドメインB、ヒンジ領域、ドメインC及びドメインRを含むものであり、
前記第1ポリペプチドの前記ドメインA、B、ヒンジ領域及びCがN末端からC末端に向かってA-B-ヒンジ領域-Cの配向で並んでおり、
(1)前記ドメインAと前記ドメインRとが結合体化しているかまたは(2)前記ドメインCと前記ドメインRとが結合体化しており、
b)前記第2ポリペプチドが、ドメインE及びドメインFを含むものであり、
前記第2ポリペプチドの前記ドメインE及びFがN末端からC末端に向かってE-Fの配向で並んでおり、
c)前記第3ポリペプチドが、(i)ドメインA、ドメインB、ヒンジ領域、ドメインC及びドメインD、(ii)ドメインA、ドメインB、ヒンジ領域及びドメインC、または(iii)ドメインA、ドメインB及びヒンジ領域を含むものであり、
前記第3ポリペプチドの前記ドメインA、B、ヒンジ領域、C及びDがN末端からC末端に向かってA-B-ヒンジ領域-C-Dの配向で並んでおり、
d)前記第4ポリペプチドが、ドメインE及びドメインFを含むものであり、
前記第4ポリペプチドの前記ドメインE及びFがN末端からC末端に向かってE-Fの配向で並んでおり、
前記第1ポリペプチドの前記ドメインBと前記第2ポリペプチドの前記ドメインFとが1つ以上のジスルフィド結合を介して繋がっており、
前記第3ポリペプチドの前記ドメインBと前記第4ポリペプチドの前記ドメインFとが1つ以上のジスルフィド結合を介して繋がっており、
前記第1及び第3ポリペプチドが前記ヒンジ領域において1つ以上のジスルフィド結合を介して繋がり合っており、
(i)前記ドメインAが、重鎖可変領域アミノ酸配列(VH)またはその抗原結合性断片を含むものであり、
(ii)前記ドメインBが、重鎖CH1定常領域アミノ酸配列を含むものであり、
(iii)前記ドメインRが、補体調節剤ポリペプチドを含むものであり、
(iv)前記ドメインCが、重鎖CH2定常領域アミノ酸配列を含むものであり、
(v)前記ドメインEが、軽鎖可変領域アミノ酸配列(VL)またはその抗原結合性断片を含むものであり、
(vi)前記ドメインFが、軽鎖定常領域アミノ酸配列(CL1)を含むものである、
前記三価ヘテロ二量体型融合タンパク質構築物。
[態様53]
前記第1ポリペプチドにおいて前記ドメインAと前記ドメインRとが結合体化している、請求項52に記載の三価ヘテロ二量体型融合タンパク質構築物。
[態様54]
前記第1ポリペプチドにおいて前記ドメインCと前記ドメインRとが結合体化している、前記請求項52に記載の三価ヘテロ二量体型融合タンパク質構築物。
[態様55]
補体関連抗原に結合する三価ヘテロ二量体型融合タンパク質構築物であって、第1ポリペプチド、第2ポリペプチド、第3ポリペプチド及び第4ポリペプチドを含み、
a)前記第1ポリペプチドが、ドメインA、ドメインB、ヒンジ領域及びドメインRを含むものであり、
前記第1ポリペプチドの前記ドメインA、B及びヒンジ領域がN末端からC末端に向かってA-B-ヒンジ領域の配向で並んでおり、
(1)前記ドメインAと前記ドメインRとが結合体化しているかまたは(2)前記ヒンジ領域と前記ドメインRとが結合体化しており、
b)前記第2ポリペプチドが、ドメインE及びドメインFを含むものであり、
前記第2ポリペプチドの前記ドメインE及びFがN末端からC末端に向かってE-Fの配向で並んでおり、
c)前記第3ポリペプチドが、(i)ドメインA、ドメインB、ヒンジ領域、ドメインC及びドメインD、(ii)ドメインA、ドメインB、ヒンジ領域及びドメインC、または(iii)ドメインA、ドメインB及びヒンジ領域を含むものであり、
前記第3ポリペプチドの前記ドメインA、B、ヒンジ領域、C及びDがN末端からC末端に向かってA-B-ヒンジ領域-C-Dの配向で並んでおり、
d)前記第4ポリペプチドが、ドメインE及びドメインFを含むものであり、
前記第4ポリペプチドの前記ドメインE及びFがN末端からC末端に向かってE-Fの配向で並んでおり、
前記第1ポリペプチドの前記ドメインBと前記第2ポリペプチドの前記ドメインFとが1つ以上のジスルフィド結合を介して繋がっており、
前記第3ポリペプチドの前記ドメインBと前記第4ポリペプチドの前記ドメインFとが1つ以上のジスルフィド結合を介して繋がっており、
前記第1及び第3ポリペプチドが前記ヒンジ領域において1つ以上のジスルフィド結合を介して繋がり合っており、
(i)前記ドメインAが、重鎖可変領域アミノ酸配列(VH)またはその抗原結合性断片を含むものであり、
(ii)前記ドメインBが、重鎖CH1定常領域アミノ酸配列を含むものであり、
(iii)前記ドメインRが、補体調節剤ポリペプチドを含むものであり、
(iv)前記ドメインEが、軽鎖可変領域アミノ酸配列(VL)またはその抗原結合性断片を含むものであり、
(v)前記ドメインFが、軽鎖定常領域アミノ酸配列(CL1)を含むものである、
前記三価ヘテロ二量体型融合タンパク質構築物。
[態様56]
前記第1ポリペプチドにおいて前記ドメインAと前記ドメインRとが結合体化している、請求項55に記載の三価ヘテロ二量体型融合タンパク質構築物。
[態様57]
前記第1ポリペプチドにおいて前記ヒンジ領域と前記ドメインRとが結合体化している、請求項55に記載の三価ヘテロ二量体型融合タンパク質構築物。
[態様58]
補体関連抗原に結合する融合タンパク質構築物であって、第1ポリペプチド及び第2ポリペプチドを含み、
a)前記第1ポリペプチドが、ドメインA、ドメインB、ヒンジ領域、ドメインC及びドメインDを含むものであり、
前記ドメインA、B、ヒンジ領域、C及びDがN末端からC末端に向かってA-B-ヒンジ領域-C-Dの配向で並んでおり、
(i)前記ドメインAが、重鎖可変領域アミノ酸配列(VH)またはその抗原結合性断片を含むものであり、
(ii)前記ドメインBが、重鎖CH1定常領域アミノ酸配列を含むものであり、
(iii)前記ドメインCが、重鎖CH2定常領域アミノ酸配列を含むものであり、
(iv)前記ドメインDが、重鎖CH3定常領域アミノ酸配列を含むものであり、
b)前記第2ポリペプチドが、ドメインE、ドメインF及びドメインRを含むものであり、
前記ドメインE及びFがN末端からC末端に向かってE-Fの配向で並んでおり、
(1)前記ドメインEと前記ドメインRとが結合体化しているかまたは(2)前記ドメインFと前記ドメインRとが結合体化しており、
(i)前記ドメインEが、軽鎖可変領域アミノ酸配列(VL)またはその抗原結合性断片を含むものであり、
(ii)前記ドメインFが、軽鎖定常領域アミノ酸配列(CL1)を含むものであり、
前記第1ポリペプチドの前記ドメインBと前記第2ポリペプチドの前記ドメインFとが1つ以上のジスルフィド結合を介して繋がっている、前記融合タンパク質構築物。
[態様59]
2つの前記第1ポリペプチドと2つの前記第2ポリペプチドとを含む四価ホモ二量体型融合タンパク質構築物であり、前記第2ポリペプチドの少なくとも1つにおいて前記ドメインEと前記ドメインRとが結合体化しており、前記2つの第1ポリペプチドが前記ヒンジ領域において1つ以上のジスルフィド結合を介して繋がり合っている、請求項58に記載の融合タンパク質構築物。
[態様60]
2つの前記第1ポリペプチドと2つの前記第2ポリペプチドとを含む四価ホモ二量体型融合タンパク質構築物であり、前記第2ポリペプチドの少なくとも1つにおいて前記ドメインFと前記ドメインRとが結合体化しており、前記2つの第1ポリペプチドが前記ヒンジ領域において1つ以上のジスルフィド結合を介して繋がり合っている、請求項58に記載の融合タンパク質構築物。
[態様61]
ドメインR1をさらに含み、前記ドメインR1が第2補体調節ポリペプチドを含み、前記ドメインR1と前記ドメインRとが同じであるかまたは異なっている、請求項58または請求項59に記載の融合タンパク質構築物。
[態様62]
前記ドメインEと前記ドメインRとが結合体化しており、前記ドメインFと前記ドメインR1とが結合体化している、請求項61に記載の融合タンパク質構築物。
[態様63]
前記ドメインFと前記ドメインRとが結合体化しており、前記ドメインEと前記ドメインR1とが結合体化している、請求項61に記載の融合タンパク質。
[態様64]
c)(i)ドメインA、ドメインB、ヒンジ領域、ドメインC及びドメインD、(ii)ドメインA、ドメインB、ヒンジ領域及びドメインC、または(iii)ドメインA、ドメインB及びヒンジ領域を含む、第3ポリペプチド
をさらに含み、前記第3ポリペプチドの前記ドメインA、B、ヒンジ領域、C及びDがN末端からC末端に向かってA-B-ヒンジ領域-C-Dの配向で並んでおり、また、
d)ドメインE及びドメインFを含む第4ポリペプチド
をさらに含み、前記第4ポリペプチドの前記ドメインE及びFがN末端からC末端に向かってE-Fの配向で並んでおり、
前記第3ポリペプチドの前記ドメインBと前記第4ポリペプチドの前記ドメインFとが1つ以上のジスルフィド結合を介して繋がっており、
前記第1及び第3ポリペプチドが前記ヒンジ領域において1つ以上のジスルフィド結合を介して繋がり合っている、
四価ヘテロ二量体型融合タンパク質構築物である、請求項58に記載の融合タンパク質構築物。
[態様65]
前記第1ポリペプチドにおいて前記ドメインEと前記ドメインRとが結合体化している、請求項64に記載の融合タンパク質構築物。
[態様66]
前記第1ポリペプチドにおいて前記ドメインFと前記ドメインRとが結合体化している、請求項64に記載の融合タンパク質構築物。
[態様67]
ドメインR1をさらに含み、前記ドメインR1が第2補体調節ポリペプチドを含み、前記ドメインR1と前記ドメインRとが同じであるかまたは異なっている、請求項65または請求項66に記載の融合タンパク質構築物。
[態様68]
前記ドメインR1が前記第1ポリペプチドに結合体化されている、請求項67に記載の融合タンパク質構築物。
[態様69]
前記ドメインR1が前記第2ポリペプチドに結合体化されている、請求項67に記載の融合タンパク質構築物。
[態様70]
前記ドメインR1が前記第3ポリペプチドに結合体化されている、請求項67に記載の融合タンパク質構築物。
[態様71]
前記ドメインR1が前記第4ポリペプチドに結合体化されている、請求項67に記載の融合タンパク質構築物。
[態様72]
補体関連抗原に結合する融合タンパク質構築物であって、第1ポリペプチド及び第2ポリペプチドを含み、
a)前記第1ポリペプチドが、ドメインA、ドメインB、ヒンジ領域及びドメインCを含むものであり、
前記ドメインA、B、ヒンジ領域及びCがN末端からC末端に向かってA-B-ヒンジ領域-Cの配向で並んでおり、
(i)前記ドメインAが、重鎖可変領域アミノ酸配列(VH)またはその抗原結合性断片を含むものであり、
(ii)前記ドメインBが、重鎖CH1定常領域アミノ酸配列を含むものであり、
(iii)前記ドメインCが、重鎖CH2定常領域アミノ酸配列を含むものであり、
b)前記第2ポリペプチドが、ドメインE、ドメインF及びドメインRを含むものであり、
前記ドメインE及びFがN末端からC末端に向かってE-Fの配向で並んでおり、
(1)前記ドメインEと前記ドメインRとが結合体化しているかまたは(2)前記ドメインFと前記ドメインRとが結合体化しており、
(i)前記ドメインEが、軽鎖可変領域アミノ酸配列(VL)またはその抗原結合性断片を含むものであり、
(ii)前記ドメインFが、軽鎖定常領域アミノ酸配列(CL1)を含むものであり、
前記第1ポリペプチドの前記ドメインBと前記第2ポリペプチドの前記ドメインFとが1つ以上のジスルフィド結合を介して繋がっている、前記融合タンパク質構築物。
[態様73]
2つの前記第1ポリペプチドと2つの前記第2ポリペプチドとを含む四価ホモ二量体型融合タンパク質構築物であり、前記第2ポリペプチドの少なくとも1つにおいて前記ドメインEと前記ドメインRとが結合体化しており、前記2つの第1ポリペプチドが前記ヒンジ領域において1つ以上のジスルフィド結合を介して繋がり合っている、請求項72に記載の融合タンパク質構築物。
[態様74]
2つの前記第1ポリペプチドと2つの前記第2ポリペプチドとを含む四価ホモ二量体型融合タンパク質構築物であり、前記第2ポリペプチドの少なくとも1つにおいて前記ドメインFと前記ドメインRとが結合体化しており、前記2つの第1ポリペプチドが前記ヒンジ領域において1つ以上のジスルフィド結合を介して繋がり合っている、請求項72に記載の融合タンパク質構築物。
[態様75]
ドメインR1をさらに含み、前記ドメインR1が第2補体調節ポリペプチドを含み、前記ドメインR1と前記ドメインRとが同じであるかまたは異なっている、請求項73または請求項74に記載の融合タンパク質構築物。
[態様76]
前記ドメインEと前記ドメインRとが結合体化しており、前記ドメインFと前記ドメインR1とが結合体化している、請求項75に記載の融合タンパク質構築物。
[態様77]
前記ドメインFと前記ドメインRとが結合体化しており、前記ドメインEと前記ドメインR1とが結合体化している、請求項75に記載の融合タンパク質。
[態様78]
c)(i)ドメインA、ドメインB、ヒンジ領域、ドメインC及びドメインD、(ii)ドメインA、ドメインB、ヒンジ領域及びドメインC、または(iii)ドメインA、ドメインB及びヒンジ領域を含む、第3ポリペプチド
をさらに含み、前記第3ポリペプチドの前記ドメインA、B、ヒンジ領域、C及びDがN末端からC末端に向かってA-B-ヒンジ領域-C-Dの配向で並んでおり、また、
d)ドメインE及びドメインFを含む第4ポリペプチド
をさらに含み、前記第4ポリペプチドの前記ドメインE及びFがN末端からC末端に向かってE-Fの配向で並んでおり、
前記第3ポリペプチドの前記ドメインBと前記第4ポリペプチドの前記ドメインFとが1つ以上のジスルフィド結合を介して繋がっており、
前記第1及び第3ポリペプチドが前記ヒンジ領域において1つ以上のジスルフィド結合を介して繋がり合っている、
四価ヘテロ二量体型融合タンパク質構築物である、請求項72に記載の融合タンパク質構築物。
[態様79]
前記第1ポリペプチドにおいて前記ドメインEと前記ドメインRとが結合体化している、請求項78に記載の融合タンパク質構築物。
[態様80]
前記第1ポリペプチドにおいて前記ドメインFと前記ドメインRとが結合体化している、請求項78に記載の融合タンパク質構築物。
[態様81]
ドメインR1をさらに含み、前記ドメインR1が第2補体調節ポリペプチドを含み、前記ドメインR1と前記ドメインRとが同じであるかまたは異なっている、請求項79または請求項80に記載の融合タンパク質構築物。
[態様82]
前記ドメインR1が前記第1ポリペプチドに結合体化されている、請求項81に記載の融合タンパク質構築物。
[態様83]
前記ドメインR1が前記第2ポリペプチドに結合体化されている、請求項81に記載の融合タンパク質構築物。
[態様84]
前記ドメインR1が前記第3ポリペプチドに結合体化されている、請求項81に記載の融合タンパク質構築物。
[態様85]
前記ドメインR1が前記第4ポリペプチドに結合体化されている、請求項81に記載の融合タンパク質構築物。
[態様86]
補体関連抗原に結合する融合タンパク質構築物であって、第1ポリペプチド及び第2ポリペプチドを含み、
a)前記第1ポリペプチドが、ドメインA、ドメインB及びヒンジ領域を含むものであり、
前記ドメインA、B及びヒンジ領域がN末端からC末端に向かってA-B-ヒンジ領域の配向で並んでおり、
(i)前記ドメインAが、重鎖可変領域アミノ酸配列(VH)またはその抗原結合性断片を含むものであり、
(ii)前記ドメインBが、重鎖CH1定常領域アミノ酸配列を含むものであり、
(iii)前記ドメインCが、重鎖CH2定常領域アミノ酸配列を含むものであり、
b)前記第2ポリペプチドが、ドメインE、ドメインF及びドメインRを含むものであり、
前記ドメインE及びFがN末端からC末端に向かってE-Fの配向で並んでおり、
(1)前記ドメインEと前記ドメインRとが結合体化しているかまたは(2)前記ドメインFと前記ドメインRとが結合体化しており、
(i)前記ドメインEが、軽鎖可変領域アミノ酸配列(VL)またはその抗原結合性断片を含むものであり、
(ii)前記ドメインFが、軽鎖定常領域アミノ酸配列(CL1)を含むものであり、
前記第1ポリペプチドの前記ドメインBと前記第2ポリペプチドの前記ドメインFとが1つ以上のジスルフィド結合を介して繋がっている、前記融合タンパク質構築物。
[態様87]
2つの前記第1ポリペプチドと2つの前記第2ポリペプチドとを含む四価ホモ二量体型融合タンパク質構築物であり、前記第2ポリペプチドの少なくとも1つにおいて前記ドメインEと前記ドメインRとが結合体化しており、前記2つの第1ポリペプチドが前記ヒンジ領域において1つ以上のジスルフィド結合を介して繋がり合っている、請求項86に記載の融合タンパク質構築物。
[態様88]
2つの前記第1ポリペプチドと2つの前記第2ポリペプチドとを含む四価ホモ二量体型融合タンパク質構築物であり、前記第2ポリペプチドの少なくとも1つにおいて前記ドメインFと前記ドメインRとが結合体化しており、前記2つの第1ポリペプチドが前記ヒンジ領域において1つ以上のジスルフィド結合を介して繋がり合っている、請求項86に記載の融合タンパク質構築物。
[態様89]
ドメインR1をさらに含み、前記ドメインR1が第2補体調節ポリペプチドを含み、前記ドメインR1と前記ドメインRとが同じであるかまたは異なっている、請求項87または請求項88に記載の融合タンパク質構築物。
[態様90]
前記ドメインEと前記ドメインRとが結合体化しており、前記ドメインFと前記ドメインR1とが結合体化している、請求項89に記載の融合タンパク質構築物。
[態様91]
前記ドメインFと前記ドメインRとが結合体化しており、前記ドメインEと前記ドメインR1とが結合体化している、請求項89に記載の融合タンパク質。
[態様92]
c)(i)ドメインA、ドメインB、ヒンジ領域、ドメインC及びドメインD、(ii)ドメインA、ドメインB、ヒンジ領域及びドメインC、または(iii)ドメインA、ドメインB及びヒンジ領域を含む、第3ポリペプチド
をさらに含み、前記第3ポリペプチドの前記ドメインA、B、ヒンジ領域、C及びDがN末端からC末端に向かってA-B-ヒンジ領域-C-Dの配向で並んでおり、また、
d)ドメインE及びドメインFを含む第4ポリペプチド
をさらに含み、前記第4ポリペプチドの前記ドメインE及びFがN末端からC末端に向かってE-Fの配向で並んでおり、
前記第3ポリペプチドの前記ドメインBと前記第4ポリペプチドの前記ドメインFとが1つ以上のジスルフィド結合を介して繋がっており、
前記第1及び第3ポリペプチドが前記ヒンジ領域において1つ以上のジスルフィド結合を介して繋がり合っている、
四価ヘテロ二量体型融合タンパク質構築物である、請求項86に記載の融合タンパク質構築物。
[態様93]
前記第1ポリペプチドにおいて前記ドメインEと前記ドメインRとが結合体化している、請求項92に記載の融合タンパク質構築物。
[態様94]
前記第1ポリペプチドにおいて前記ドメインFと前記ドメインRとが結合体化している、請求項92に記載の融合タンパク質構築物。
[態様95]
ドメインR1をさらに含み、前記ドメインR1が第2補体調節ポリペプチドを含み、前記ドメインR1と前記ドメインRとが同じであるかまたは異なっている、請求項93または請求項94に記載の融合タンパク質構築物。
[態様96]
前記ドメインR1が前記第1ポリペプチドに結合体化されている、請求項95に記載の融合タンパク質構築物。
[態様97]
前記ドメインR1が前記第2ポリペプチドに結合体化されている、請求項95に記載の融合タンパク質構築物。
[態様98]
前記ドメインR1が前記第3ポリペプチドに結合体化されている、請求項95に記載の融合タンパク質構築物。
[態様99]
前記ドメインR1が前記第4ポリペプチドに結合体化されている、請求項95に記載の融合タンパク質構築物。
[態様100]
補体関連抗原に結合する三価ヘテロ二量体型融合タンパク質構築物であって、第1ポリペプチド、第2ポリペプチド、第3ポリペプチド及び第4ポリペプチドを含み、
a)前記第1ポリペプチドが、ドメインA、ドメインB、ヒンジ領域、ドメインC及びドメインDを含むものであり、
前記第1ポリペプチドの前記ドメインA、B、ヒンジ領域、C及びDがN末端からC末端に向かってA-B-ヒンジ領域-C-Dの配向で並んでおり、
b)前記第2ポリペプチドが、ドメインE、ドメインF及びドメインRを含むものであり、
前記ドメインE及びFがN末端からC末端に向かってE-Fの配向で並んでおり、
(1)前記ドメインEと前記ドメインRとが結合体化しているかまたは(2)前記ドメインFと前記ドメインRとが結合体化しており、
c)前記第3ポリペプチドが、(i)ドメインA、ドメインB、ドメインC、ドメインD及びヒンジ領域、(ii)ドメインA、ドメインB、ドメインC及びヒンジ領域、または(iii)ドメインA、ドメインB及びヒンジ領域を含むものであり、
前記第3ポリペプチドの前記ドメインA、B、ヒンジ領域、C及びDがN末端からC末端に向かってA-B-ヒンジ領域-C-Dの配向で並んでおり、
d)前記第4ポリペプチドが、ドメインE及びドメインFを含むものであり、
前記第4ポリペプチドの前記ドメインE及びFがN末端からC末端に向かってE-Fの配向で並んでおり、
前記第1ポリペプチドの前記ドメインBと前記第2ポリペプチドの前記ドメインFとが1つ以上のジスルフィド結合を介して繋がっており、
前記第3ポリペプチドの前記ドメインBと前記第4ポリペプチドの前記ドメインFとが1つ以上のジスルフィド結合を介して繋がっており、
前記第1及び第3ポリペプチドが前記ヒンジ領域において1つ以上のジスルフィド結合を介して繋がり合っており、
(i)前記ドメインAが、重鎖可変領域アミノ酸配列(VH)またはその抗原結合性断片を含むものであり、
(ii)前記ドメインBが、重鎖CH1定常領域アミノ酸配列を含むものであり、
(iii)前記ドメインCが、重鎖CH2定常領域アミノ酸配列を含むものであり、
(iv)前記ドメインDが、重鎖CH3定常領域アミノ酸配列を含むものであり、
(v)前記ドメインRが、補体調節剤ポリペプチドを含むものであり、
(vi)前記ドメインEが、軽鎖可変領域アミノ酸配列(VL)またはその抗原結合性断片を含むものであり、
(vii)前記ドメインFが、軽鎖定常領域アミノ酸配列(CL1)を含むものである、
前記三価ヘテロ二量体型融合タンパク質構築物。
[態様101]
前記第2ポリペプチドの前記ドメインEと前記ドメインRとが結合体化している、請求項100に記載の三価ヘテロ二量体型融合タンパク質構築物。
[態様102]
前記第2ポリペプチドの前記ドメインFと前記ドメインRとが結合体化している、請求項100に記載の三価ヘテロ二量体型融合タンパク質構築物。
[態様103]
補体関連抗原に結合する三価ヘテロ二量体型融合タンパク質構築物であって、第1ポリペプチド、第2ポリペプチド、第3ポリペプチド及び第4ポリペプチドを含み、
a)前記第1ポリペプチドが、ドメインA、ドメインB、ヒンジ領域及びドメインCを含むものであり、
前記第1ポリペプチドの前記ドメインA、B、ヒンジ領域及びCがN末端からC末端に向かってA-B-ヒンジ領域-Cの配向で並んでおり、
b)前記第2ポリペプチドが、ドメインE、ドメインF及びドメインRを含むものであり、
前記ドメインE及びFがN末端からC末端に向かってE-Fの配向で並んでおり、
(1)前記ドメインEと前記ドメインRとが結合体化しているかまたは(2)前記ドメインFと前記ドメインRとが結合体化しており、
c)前記第3ポリペプチドが、(i)ドメインA、ドメインB、ドメインC、ドメインD及びヒンジ領域、(ii)ドメインA、ドメインB、ドメインC及びヒンジ領域、または(iii)ドメインA、ドメインB及びヒンジ領域を含むものであり、
前記第3ポリペプチドの前記ドメインA、B、ヒンジ領域、C及びDがN末端からC末端に向かってA-B-ヒンジ領域-C-Dの配向で並んでおり、
d)前記第4ポリペプチドが、ドメインE及びドメインFを含むものであり、
前記第4ポリペプチドの前記ドメインE及びFがN末端からC末端に向かってE-Fの配向で並んでおり、
前記第1ポリペプチドの前記ドメインBと前記第2ポリペプチドの前記ドメインFとが1つ以上のジスルフィド結合を介して繋がっており、
前記第3ポリペプチドの前記ドメインBと前記第4ポリペプチドの前記ドメインFとが1つ以上のジスルフィド結合を介して繋がっており、
前記第1及び第3ポリペプチドが前記ヒンジ領域において1つ以上のジスルフィド結合を介して繋がり合っており、
(i)前記ドメインAが、重鎖可変領域アミノ酸配列(VH)またはその抗原結合性断片を含むものであり、
(ii)前記ドメインBが、重鎖CH1定常領域アミノ酸配列を含むものであり、
(iii)前記ドメインCが、重鎖CH2定常領域アミノ酸配列を含むものであり、
(iv)前記ドメインRが、補体調節剤ポリペプチドを含むものであり、
(v)前記ドメインEが、軽鎖可変領域アミノ酸配列(VL)またはその抗原結合性断片を含むものであり、
(vi)前記ドメインFが、軽鎖定常領域アミノ酸配列(CL1)を含むものである、
前記三価ヘテロ二量体型融合タンパク質構築物。
[態様104]
前記第2ポリペプチドの前記ドメインEと前記ドメインRとが結合体化している、請求項103に記載の三価ヘテロ二量体型融合タンパク質構築物。
[態様105]
前記第2ポリペプチドの前記ドメインFと前記ドメインRとが結合体化している、請求項103に記載の三価ヘテロ二量体型融合タンパク質構築物。
[態様106]
補体関連抗原に結合する三価ヘテロ二量体型融合タンパク質構築物であって、第1ポリペプチド、第2ポリペプチド、第3ポリペプチド及び第4ポリペプチドを含み、
a)前記第1ポリペプチドが、ドメインA、ドメインB及びヒンジ領域を含むものであり、
前記第1ポリペプチドの前記ドメインA、B及びヒンジ領域がN末端からC末端に向かってA-B-ヒンジ領域の配向で並んでおり、
b)前記第2ポリペプチドが、ドメインE、ドメインF及びドメインRを含むものであり、
前記ドメインE及びFがN末端からC末端に向かってE-Fの配向で並んでおり、
(1)前記ドメインEと前記ドメインRとが結合体化しているかまたは(2)前記ドメインFと前記ドメインRとが結合体化しており、
c)前記第3ポリペプチドが、(i)ドメインA、ドメインB、ドメインC、ドメインD及びヒンジ領域、(ii)ドメインA、ドメインB、ドメインC及びヒンジ領域、または(iii)ドメインA、ドメインB及びヒンジ領域を含むものであり、
前記第3ポリペプチドの前記ドメインA、B、ヒンジ領域、C及びDがN末端からC末端に向かってA-B-ヒンジ領域-C-Dの配向で並んでおり、
d)前記第4ポリペプチドが、ドメインE及びドメインFを含むものであり、
前記第4ポリペプチドの前記ドメインE及びFがN末端からC末端に向かってE-Fの配向で並んでおり、
前記第1ポリペプチドの前記ドメインBと前記第2ポリペプチドの前記ドメインFとが1つ以上のジスルフィド結合を介して繋がっており、
前記第3ポリペプチドの前記ドメインBと前記第4ポリペプチドの前記ドメインFとが1つ以上のジスルフィド結合を介して繋がっており、
前記第1及び第3ポリペプチドが前記ヒンジ領域において1つ以上のジスルフィド結合を介して繋がり合っており、
(i)前記ドメインAが、重鎖可変領域アミノ酸配列(VH)またはその抗原結合性断片を含むものであり、
(ii)前記ドメインBが、重鎖CH1定常領域アミノ酸配列を含むものであり、
(iii)前記ドメインRが、補体調節剤ポリペプチドを含むものであり、
(iv)前記ドメインEが、軽鎖可変領域アミノ酸配列(VL)またはその抗原結合性断片を含むものであり、
(v)前記ドメインFが、軽鎖定常領域アミノ酸配列(CL1)を含むものである、
前記三価ヘテロ二量体型融合タンパク質構築物。
[態様107]
前記第2ポリペプチドにおいて前記ドメインEと前記ドメインRとが結合体化している、請求項106に記載の三価ヘテロ二量体型融合タンパク質構築物。
[態様108]
前記第2ポリペプチドにおいて前記ドメインFと前記ドメインRとが結合体化している、請求項106に記載の三価ヘテロ二量体型融合タンパク質構築物。
[態様109]
補体関連抗原に結合する融合タンパク質構築物であって、第1ポリペプチド、第2ポリペプチド及び第3ポリペプチドを含み、
a)前記第1ポリペプチドが、ドメインR、ヒンジ領域、ドメインC及びドメインDを含むものであり、
前記ドメインR、ヒンジ領域、C及びDがN末端からC末端に向かってR-ヒンジ-C-Dの配向で並んでおり、
(i)前記ドメインRが、補体調節剤ポリペプチドを含むものであり、
(ii)前記ドメインCが、重鎖CH2定常領域アミノ酸配列を含むものであり、
(iii)前記ドメインDが、重鎖CH3定常領域アミノ酸配列を含むものであり、
前記ドメインRと前記ヒンジ領域とが結合体化しており、
b)前記第2ポリペプチドが、ドメインA、ドメインB、ヒンジ領域、ドメインC及びドメインDを含むものであり、
前記ドメインA、B、ヒンジ領域、C及びDがN末端からC末端に向かってA-B-ヒンジ-C-Dの配向で並んでおり、
(i)前記ドメインAが、重鎖可変領域アミノ酸配列(VH)またはその抗原結合性断片を含むものであり、
(ii)前記ドメインBが、重鎖CH1定常領域アミノ酸配列を含むものであり、
c)前記第3ポリペプチドが、ドメインE及びドメインFを含むものであり、
前記ドメインがN末端からC末端に向かってE-Fの配向で並んでおり、
(i)前記ドメインEが、軽鎖可変領域アミノ酸配列(VL)またはその抗原結合性断片を含むものであり、
(ii)前記ドメインFが、軽鎖定常領域アミノ酸配列(CL1)を含むものであり、
前記第2ポリペプチドの前記ドメインBと前記第3ポリペプチドの前記ドメインFとが1つ以上のジスルフィド結合を介して繋がっており、
前記第1及び第2ポリペプチドが前記ヒンジ領域において1つ以上のジスルフィド結合を介して繋がり合っている、前記融合タンパク質構築物。
[態様110]
補体関連抗原に結合する単量体型融合タンパク質構築物であって、
a)N末端からC末端に向かってA-B-ヒンジの配向で並んだドメインA、ドメインB及びヒンジ領域を含む、第1ポリペプチド、
b)N末端からC末端に向かってE-Fの配向で並んだドメインE及びドメインFを含む、第2ポリペプチド
を含み、前記ドメインA、前記ヒンジドメイン、前記ドメインEまたは前記ドメインFの少なくとも1つがドメインRに結合体化されており、
(i)前記ドメインAが、重鎖可変領域アミノ酸配列(VH)またはその抗原結合性断片を含むものであり、
(ii)前記ドメインBが、重鎖CH1定常領域アミノ酸配列を含むものであり、
(iii)前記ドメインRが、補体調節剤ポリペプチドを含むものであり、
(iv)前記ドメインEが、軽鎖可変領域アミノ酸配列(VL)またはその抗原結合性断片を含むものであり、
(v)前記ドメインFが、軽鎖定常領域アミノ酸配列(CL1)を含むものであり、
前記第1ポリペプチドの前記ドメインBと前記第2ポリペプチドの前記ドメインFとが1つ以上のジスルフィド結合を介して繋がっている、前記単量体型融合タンパク質構築物。
[態様111]
前記第1ポリペプチドが前記ドメインA、前記ドメインB、前記ヒンジドメイン及び前記ドメインRを含み、前記第1ポリペプチドの前記ドメインがN末端からC末端に向かってR-A-B-ヒンジの配向で並んでおり、前記ドメインRと前記ドメインAとが結合体化している、請求項110に記載の単量体型融合タンパク質構築物。
[態様112]
前記第1ポリペプチドが前記ドメインA、前記ドメインB、前記ヒンジドメイン及び前記ドメインRを含み、前記第1ポリペプチドの前記ドメインがN末端からC末端に向かってA-B-ヒンジ-Rの配向で並んでおり、前記ヒンジドメインと前記ドメインRとが結合体化している、請求項110に記載の単量体型融合タンパク質構築物。
[態様113]
前記第2ポリペプチドが前記ドメインE、前記ドメインF及び前記ドメインRを含み、前記第2ポリペプチドの前記ドメインがN末端からC末端に向かってR-E-Fの配向で並んでおり、前記ドメインEと前記ドメインRとが結合体化している、請求項110に記載の単量体型融合タンパク質構築物。
[態様114]
前記第2ポリペプチドが前記ドメインE、前記ドメインF及び前記ドメインRを含み、前記第2ポリペプチドの前記ドメインがN末端からC末端に向かってE-F-Rの配向で並んでおり、前記ドメインFと前記ドメインRとが結合体化している、請求項110に記載の単量体型融合タンパク質構築物。
[態様115]
第2補体調節ポリペプチドをさらに含み、前記第2補体調節ポリペプチドと前記ドメインRとが同じであるかまたは異なっている、請求項111、112、113または114に記載の単量体型融合タンパク質構築物。
[態様116]
補体関連抗原に結合する単量体型融合タンパク質構築物であって、
a)N末端からC末端に向かってA-B-ヒンジ-C領域の配向で並んだドメインA、ドメインB、ヒンジ領域及びドメインCを含む、第1ポリペプチド、
b)N末端からC末端に向かってE-Fの配向で並んだドメインE及びドメインFを含む、第2ポリペプチド
を含み、前記ドメインA、前記ドメインC,前記ドメインEまたは前記ドメインFの少なくとも1つがドメインRに結合体化されており、
(i)前記ドメインAが、重鎖可変領域アミノ酸配列(VH)またはその抗原結合性断片を含むものであり、
(ii)前記ドメインBが、重鎖CH1定常領域アミノ酸配列を含むものであり、
(iii)前記ドメインCが、重鎖CH2定常領域アミノ酸配列を含むものであり、
(iv)前記ドメインRが、補体調節剤ポリペプチドを含むものであり、
(v)前記ドメインEが、軽鎖可変領域アミノ酸配列(VL)またはその抗原結合性断片を含むものであり、
(vi)前記ドメインFが、軽鎖定常領域アミノ酸配列(CL1)を含むものであり、
前記第1ポリペプチドの前記ドメインBと前記第2ポリペプチドの前記ドメインFとが1つ以上のジスルフィド結合を介して繋がっている、前記単量体型融合タンパク質構築物。
[態様117]
前記第1ポリペプチドが前記ドメインA、前記ドメインB、前記ヒンジドメイン、前記ドメインC及び前記ドメインRを含み、前記第1ポリペプチドの前記ドメインがN末端からC末端に向かってR-A-B-ヒンジ-Cの配向で並んでおり、前記ドメインRと前記ドメインAとが結合体化している、請求項116に記載の単量体型融合タンパク質構築物。
[態様118]
前記第1ポリペプチドが前記ドメインA、前記ドメインB、前記ヒンジドメイン、前記ドメインC及び前記ドメインRを含み、前記第1ポリペプチドの前記ドメインがN末端からC末端に向かってA-B-ヒンジ-C-Rの配向で並んでおり、前記ドメインCと前記ドメインRとが結合体化している、請求項116に記載の単量体型融合タンパク質構築物。
[態様119]
前記第2ポリペプチドが前記ドメインE、前記ドメインF及び前記ドメインRを含み、前記第2ポリペプチドの前記ドメインがN末端からC末端に向かってR-E-Fの配向で並んでおり、前記ドメインEと前記ドメインRとが結合体化している、請求項116に記載の単量体型融合タンパク質構築物。
[態様120]
前記第2ポリペプチドが前記ドメインE、前記ドメインF及び前記ドメインRを含み、前記第2ポリペプチドの前記ドメインがN末端からC末端に向かってE-F-Rの配向で並んでおり、前記ドメインFと前記ドメインRとが結合体化している、請求項116に記載の単量体型融合タンパク質構築物。
[態様121]
第2補体調節ポリペプチドをさらに含み、前記第2補体調節ポリペプチドと前記ドメインRとが同じであるかまたは異なっている、請求項117、118、119または120に記載の単量体型融合タンパク質構築物。
[態様122]
補体関連抗原に結合する単量体型融合タンパク質構築物であって、
a)N末端からC末端に向かってA-B-ヒンジ-C-D領域の配向で並んだドメインA、ドメインB、ヒンジ領域、ドメインC及びドメインDを含む、第1ポリペプチド、
b)N末端からC末端に向かってE-Fの配向で並んだドメインE及びドメインFを含む、第2ポリペプチド
を含み、前記ドメインA、前記ドメインD、前記ドメインEまたは前記ドメインFの少なくとも1つが前記ドメインRに結合体化されており、
(i)前記ドメインAが、重鎖可変領域アミノ酸配列(VH)またはその抗原結合性断片を含むものであり、
(ii)前記ドメインBが、重鎖CH1定常領域アミノ酸配列を含むものであり、
(iii)前記ドメインCが、重鎖CH2定常領域アミノ酸配列を含むものであり、
(iv)前記ドメインDが、重鎖CH3定常領域アミノ酸配列を含むものであり、
(v)前記ドメインRが、補体調節剤ポリペプチドを含むものであり、
(vi)前記ドメインEが、軽鎖可変領域アミノ酸配列(VL)またはその抗原結合性断片を含むものであり、
(vii)前記ドメインFが、軽鎖定常領域アミノ酸配列(CL1)を含むものであり、
前記第1ポリペプチドの前記ドメインBと前記第2ポリペプチドの前記ドメインFとが1つ以上のジスルフィド結合を介して繋がっている、前記単量体型融合タンパク質構築物。
[態様123]
前記第1ポリペプチドが前記ドメインA、前記ドメインB、前記ヒンジドメイン、前記ドメインC、前記ドメインD及び前記ドメインRを含み、前記第1ポリペプチドの前記ドメインがN末端からC末端に向かってR-A-B-ヒンジ-C-Dの配向で並んでおり、前記ドメインRと前記ドメインAとが結合体化している、請求項116に記載の単量体型融合タンパク質構築物。
[態様124]
前記第1ポリペプチドが前記ドメインA、前記ドメインB、前記ヒンジドメイン、前記ドメインC、前記ドメインD及び前記ドメインRを含み、前記第1ポリペプチドの前記ドメインがN末端からC末端に向かってA-B-ヒンジ-C-D-Rの配向で並んでおり、前記ドメインCと前記ドメインRとが結合体化している、請求項116に記載の単量体型融合タンパク質構築物。
[態様125]
前記第2ポリペプチドが前記ドメインE、前記ドメインF及び前記ドメインRを含み、前記第2ポリペプチドの前記ドメインがN末端からC末端に向かってR-E-Fの配向で並んでおり、前記ドメインEと前記ドメインRとが結合体化している、請求項116に記載の単量体型融合タンパク質構築物。
[態様126]
前記第2ポリペプチドが前記ドメインE、前記ドメインF及び前記ドメインRを含み、前記第2ポリペプチドの前記ドメインがN末端からC末端に向かってE-F-Rの配向で並んでおり、前記ドメインFと前記ドメインRとが結合体化している、請求項116に記載の単量体型融合タンパク質構築物。
[態様127]
第2補体調節ポリペプチドをさらに含み、前記第2補体調節ポリペプチドと前記ドメインRとが同じであるかまたは異なっている、請求項117、118、119または120に記載の単量体型融合タンパク質構築物。
[態様128]
前記結合体化が、
2つのドメインをペプチドリンカーで繋げること、リンカーなしで繋げること、酵素的結合体化、化学的結合体化、またはその組合せ
を含む、請求項1~120のいずれか1項に記載の融合タンパク質構築物。
[態様129]
前記補体関連抗原が、C3d、iC3b、C3dg、またはその断片、またはその変異体である、請求項1~128のいずれか1項に記載の融合タンパク質構築物。
[態様130]
C3及びC3bに対して、C3dに対するよりも低い親和性で結合する、請求項129に記載の融合タンパク質構築物。
[態様131]
C3及びC3bに約10-3M以上のKD親和性で結合する、請求項130に記載の融合タンパク質構築物。
[態様132]
iC3b、C3dgまたはその両方に10-8M以下のKD親和性で結合する、請求項130に記載の融合タンパク質構築物。
[態様133]
前記融合タンパク質構築物または前記融合タンパク質構築物を含む医薬組成物を対象に投与した時に前記対象における代替補体活性を調節する、請求項1~132のいずれか1項に記載の融合タンパク質構築物。
[態様134]
前記融合タンパク質構築物または前記融合タンパク質構築物を含む医薬組成物を対象に投与した時に前記対象における古典的補体活性を調節する、請求項1~132のいずれか1項に記載の融合タンパク質構築物。
[態様135]
前記融合タンパク質構築物または前記融合タンパク質構築物を含む医薬組成物を対象に投与した時に前記対象におけるレクチン補体活性を調節する、請求項1~132のいずれか1項に記載の融合タンパク質構築物。
[態様136]
前記融合タンパク質構築物が哺乳動物アネキシンタンパク質のドメインに結合する、請求項1~135のいずれか1項に記載の融合タンパク質構築物。
[態様137]
前記融合タンパク質構築物が哺乳動物アネキシンタンパク質のドメインに10-8M以下のKD親和性で結合する、請求項136に記載の融合タンパク質構築物。
[態様138]
前記ドメインがアネキシンコアドメインである、請求項136に記載の融合タンパク質。
[態様139]
前記アネキシンコアドメインがアルファヘリカルドメインを含む、請求項138に記載の融合タンパク質構築物。
[態様140]
前記アネキシンコアドメインがカルシウム結合部位及び膜結合部位を含む、請求項139に記載の融合タンパク質構築物。
[態様141]
前記アネキシンコアドメインが少なくとも1つのアネキシンリピートを含む、請求項139または請求項140に記載の融合タンパク質構築物。
[態様142]
前記融合タンパク質構築物が前記ドメイン中のアネキシンリピート配列に結合する、請求項141に記載の融合タンパク質構築物。
[態様143]
前記融合タンパク質構築物がリン脂質に結合する、請求項1~135のいずれか1項に記載の融合タンパク質構築物。
[態様144]
前記融合タンパク質構築物がリン脂質に10-8M以下のKD親和性で結合する、請求項143に記載の融合タンパク質構築物。
[態様145]
前記リン脂質が、ホスファチジルエタノールアミン(PE)、カルジオリピン(CL)、ホスファチジルコリン(PC)、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルセリン及びホスファチジン酸及びマロンジアルデヒド(MDA)からなる群から選択される、請求項143に記載の融合タンパク質構築物。
[態様146]
前記補体調節剤ペプチドが、補体受容体1(CR1)タンパク質のドメインA、またはドメインAの少なくとも3つのショートコンセンサスリピート(SCR)を保持しているその断片を含む、請求項1~145のいずれか1項に記載の融合タンパク質構築物。
[態様147]
前記CR1タンパク質のドメインB、またはドメインBの少なくとも3つのSCRを保持しているその断片をさらに含む、請求項146に記載の融合タンパク質構築物。
[態様148]
前記CR1タンパク質のドメインC、またはドメインCの少なくとも3つのSCRを保持しているその断片をさらに含む、請求項146または請求項147に記載の融合タンパク質構築物。
[態様149]
前記CR1のドメインD、またはドメインDの少なくとも3つのSCRを保持しているその断片をさらに含む、請求項146、147または148に記載の融合タンパク質構築物。
[態様150]
前記補体調節剤ポリペプチドが、前記CR1タンパク質のドメインAの最初の3つのSCR、ドメインBの最初の3つのSCR及びドメインCの最初の3つのSCRを含む、請求項1~145のいずれか1項に記載の融合タンパク質構築物。
[態様151]
前記補体調節剤ポリペプチドがCR1-10である、請求項1~145のいずれか1項に記載の融合タンパク質構築物。
[態様152]
前記補体調節剤ポリペプチドがCR1-17である、請求項1~145のいずれか1項に記載の融合タンパク質構築物。
[態様153]
前記補体調節剤ペプチドが、
配列番号41もしくは配列番号91のアミノ酸配列、または
少なくとも85%同一であるアミノ酸配列を有するその変異体
を含む、請求項151に記載の融合タンパク質構築物。
[態様154]
前記補体調節剤ポリペプチドが、
配列番号42もしくは配列番号92のアミノ酸配列、または
少なくとも85%同一であるアミノ酸配列を有するその変異体
を含む、請求項152に記載の融合タンパク質構築物。
[態様155]
前記補体調節剤ペプチドが崩壊促進因子(DAF)またはその生理活性断片である、請求項1~145のいずれか1項に記載の融合タンパク質構築物。
[態様156]
前記DAFがヒトDAFである、請求項153に記載の融合タンパク質構築物。
[態様157]
ヒトDAFの前記生理活性断片が、完全長ヒトDAFのショートコンセンサスリピート(SCR)ドメイン及びO-グリコシル化セリン/スレオニンリッチドメインのうちの少なくとも1つを含む、請求項155または請求項156に記載の融合タンパク質構築物。
[態様158]
DAFの前記生理活性断片が、完全長ヒトDAFのSCR1~4またはSCR2~4を含む、請求項155または請求項156に記載の融合タンパク質構築物。
[態様159]
DAFの前記生理活性断片が、
配列番号184のアミノ酸配列、
または少なくとも85%同一であるアミノ酸配列を有するその変異体
を含む、請求項155に記載の融合タンパク質構築物。
[態様160]
前記補体調節剤ペプチドがH因子またはその生理活性断片である、請求項1~145のいずれか1項に記載の融合タンパク質構築物。
[態様161]
前記H因子がヒトH因子である、請求項160に記載の融合タンパク質構築物。
[態様162]
前記ヒトH因子の前記生理活性断片が、
完全長ヒトH因子のSCR1~20、SCR1~2、SCR2~3、SCR3~4、SCR4~5、SCR5~6、SCR6~7、SCR7~8、SCR8~9、SCR9~10、SCR10~11、SCR11~12、SCR12~13、SCR13~14、SCR14~15、SCR15~16、SCR16~17、SCR17~18、SCR19~20、または任意のSCR1~20の組合せ
を含むショートコンセンサスリピート(SCR)の群を1つ以上含む、請求項161に記載の融合タンパク質構築物。
[態様163]
前記ヒトH因子の前記生理活性断片が、完全長ヒトH因子のSCR1~4またはSCR1~5を含む、請求項161に記載の融合タンパク質構築物。
[態様164]
前記ヒトH因子の前記生理活性断片が、
配列番号9のアミノ酸21~266、アミノ酸21~320、アミノ酸21~509もしくはアミノ酸19~1106からなる群から選択される一続きのアミノ酸、または
前記一続きのアミノ酸と少なくとも85%同一であるアミノ酸配列を有するその変異体
を含む、請求項161に記載の融合タンパク質構築物。
[態様165]
前記H因子またはその生理活性断片が、
配列番号72もしくは配列番号108のアミノ酸配列、または
少なくとも85%同一であるアミノ酸配列を有するその変異体
を含む、請求項160に記載の融合タンパク質構築物。
[態様166]
前記補体調節剤ペプチドがMCPまたはその生理活性断片である、請求項1~145のいずれか1項に記載の融合タンパク質構築物。
[態様167]
前記MCPがヒトMCPである、請求項166に記載の融合タンパク質構築物。
[態様168]
前記ヒトMCPの前記生理活性断片が、完全長ヒトMCPのショートコンセンサスリピート(SCR)ドメインの少なくとも1つを含む、請求項167に記載の融合タンパク質構築物。
[態様169]
前記ヒトMCPの前記生理活性断片が前記完全長ヒトMCPのSCR3~4を含む、請求項168に記載の融合タンパク質構築物。
[態様170]
前記MCPが、
配列番号187のアミノ酸配列、または
少なくとも85%同一であるアミノ酸配列を有するその変異体
を含む、請求項166に記載の融合タンパク質構築物。
[態様171]
前記補体調節剤ペプチドがMap44またはその生理活性断片である、請求項1~145のいずれか1項に記載の融合タンパク質構築物。
[態様172]
前記Map44がヒトMap44である、請求項171に記載の融合タンパク質構築物。
[態様173]
前記Map44が、
配列番号186のアミノ酸配列、または
少なくとも85%同一であるアミノ酸配列を有するその変異体
を含む、請求項171に記載の融合タンパク質構築物。
[態様174]
前記補体調節剤ペプチドがCD59またはその生理活性断片である、請求項1~145のいずれか1項に記載の融合タンパク質構築物。
[態様175]
前記CD59がヒトCD59である、請求項174に記載の融合タンパク質構築物。
[態様176]
前記CD59が、
配列番号185のアミノ酸配列、または
少なくとも85%同一であるアミノ酸配列を有するその変異体
を含む、請求項174に記載の融合タンパク質構築物。
[態様177]
前記融合タンパク質構築物がヒト抗体またはその抗原結合性断片を含む、請求項1~176のいずれか1項に記載の融合タンパク質構築物。
[態様178]
前記融合タンパク質構築物がヒト化抗体またはその抗原結合性断片を含む、請求項1~177のいずれか1項に記載の融合タンパク質構築物。
[態様179]
前記第1及び第3ポリペプチドが各々、ホモ二量体と比較してヘテロ二量体の形成に有利に働く少なくとも1つの直交的修飾を含む、請求項49~57または請求項100~108のいずれか1項に記載の融合タンパク質構築物。
[態様180]
前記第1ポリペプチドがノブ修飾を含み前記第3ポリペプチドがホール修飾を含むか、または前記第3ポリペプチドがノブ修飾を含み前記第1ポリペプチドがホール修飾を含む、請求項179に記載の三価融合タンパク質構築物。
[態様181]
前記第1及び第3ポリペプチドが、電荷または表面の相補性をもたらす修飾を含む、請求項180に記載の三価融合タンパク質構築物。
[態様182]
a)前記第1ポリペプチドが、
(i)配列番号11、12及び13;17、18及び19;23、24及び25;29、30及び31;35、36及び37;147、148及び149;188、189及び190;196、197及び198;204もしくは343、205及び206;212、213及び214;220、221及び222;228、229及び230;29、259及び31;または29、260及び31のアミノ酸配列を有する3つの重鎖相補性決定領域(CDR)、あるいは
(ii)配列番号11、12及び13;17、18及び19;23、24及び25;29、30及び31;35、36及び37;147、148及び149;188、189及び190;196、197及び198;204もしくは343、205及び206;212、213及び214;220、221及び222;228、229及び230;29、259及び31;または29、260及び31の1つの中に単一の保存的アミノ酸置換があるという点で異なっているアミノ酸配列を有する3つの重鎖CDR
を含み、
b)前記第2ポリペプチドが、
(i)配列番号14、15及び16;20、21及び22;26、27及び28;32、33及び34;38、39及び40;150、151及び152;191、192及び193;199、200及び201;207、208及び209;215、216及び217;223、224及び225;もしくは231、232及び233のアミノ酸配列を有する3つの軽鎖相補性決定領域(CDR)、または
(ii)配列番号14、15及び16;20、21及び22;26、27及び28;32、33及び34;38、39及び40;150、151及び152;191、192及び193;199、200及び201;207、208及び209;215、216及び217;223、224及び225;もしくは231、232及び233の1つの中に単一の保存的アミノ酸置換があるという点で異なっているアミノ酸配列を有する3つの軽鎖CDR
を含む、請求項179~181のいずれか1項に記載の融合タンパク質構築物。
[態様183]
少なくとも1つのアミノ酸リンカーをさらに含み、前記少なくとも1つのリンカーが、配列番号138、配列番号161、配列番号162、配列番号163、配列番号164、配列番号165、配列番号166、配列番号167、配列番号168、配列番号169、配列番号170、配列番号171、配列番号172、配列番号173、配列番号174、配列番号175、配列番号176、配列番号177、配列番号178、配列番号179、配列番号180、配列番号181、配列番号182、配列番号183、配列番号241または配列番号242のいずれかのアミノ酸配列を含む、請求項1~182のいずれか1項に記載の融合タンパク質構築物。
[態様184]
前記融合タンパク質構築物が、
配列番号43、配列番号44、配列番号46、配列番号47、配列番号48、配列番号49、配列番号50、配列番号52、配列番号53、配列番号55、配列番号56、配列番号57、配列番号60、配列番号61、配列番号63、配列番号65、配列番号66、配列番号69、配列番号70、配列番号71、配列番号75、配列番号76、配列番号77、配列番号78、配列番号79、配列番号80、配列番号82、配列番号83、配列番号84、配列番号85、配列番号86、配列番号87、配列番号88、配列番号90、配列番号93、配列番号94、配列番号95、配列番号96、配列番号97、配列番号98、配列番号99、配列番号100、配列番号101、配列番号102、配列番号103、配列番号104、配列番号105、配列番号106、配列番号107、配列番号109、配列番号110、配列番号111、配列番号113、配列番号114、配列番号115、配列番号116、配列番号117、配列番号118、配列番号119、配列番号120、配列番号121、配列番号122、配列番号123、配列番号124、配列番号125、配列番号126、配列番号127、配列番号128、配列番号129、配列番号130、配列番号131、配列番号132、配列番号133、配列番号134、配列番号135、配列番号136、配列番号137、配列番号140、配列番号141、配列番号142、配列番号143及び配列番号144
のうちの少なくとも1つのアミノ酸配列を含む、請求項1~183のいずれか1項に記載の融合タンパク質構築物。
[態様185]
前記第1ポリペプチドが、配列番号41、42及び72からなる群から選択される配列(ドメインR)を含む補体調節剤ポリペプチドに結合体化された配列番号282の配列(ドメインA、ドメインB、ドメインC及びドメインD)を含み、前記第2ポリペプチドが配列番号279の配列(ドメインE及びドメインF)を含む、請求項1~181のいずれか1項に記載の融合タンパク質構築物。
[態様186]
前記第1ポリペプチドが配列番号282の配列(ドメインA、ドメインB、ドメインC及びドメインD)を含み、前記第2ポリペプチドが、配列番号72からなる群から選択される配列(ドメインR)を含む補体調節剤ポリペプチドに結合体化された配列番号279の配列(ドメインE及びドメインF)を含む、請求項1~181のいずれか1項に記載の融合タンパク質構築物。
[態様187]
請求項1~186のいずれか1項に記載の融合タンパク質構築物を含む医薬組成物。
[態様188]
請求項1~186のいずれか1項に記載の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド。
[態様189]
治療的有効量の請求項186に記載の医薬組成物を対象に提供することを含む治療方法。
[態様190]
前記対象が補体媒介性疾患または補体媒介性炎症に罹患している、請求項189に記載の方法。
[態様191]
前記融合タンパク質構築物がC3dに特異的に10-8M以下のKD親和性で結合し、前記対象が補体媒介性疾患に罹患しており、前記補体媒介性疾患がC3dの増加した沈着を特徴とする、請求項189または請求項190に記載の方法。
[態様192]
前記融合タンパク質構築物がC2抗体反応性リン脂質に特異的に10-8M以下のKD親和性で結合し、前記対象が補体媒介性疾患に罹患しており、前記補体媒介性疾患がC2抗体反応性リン脂質の増加した沈着を特徴とする、請求項189または請求項190に記載の方法。
[態様193]
前記対象が前記補体媒介性炎症に罹患しており、前記補体媒介性炎症が炎症性線維性疾患を含み、前記炎症性線維性疾患が、巣状分節性糸球体硬化症、原発性硬化性胆管炎または膜性増殖性糸球体腎炎を含む、請求項190に記載の方法。
[態様194]
前記対象が、関節リウマチ、全身性紅斑性狼瘡、狼瘡腎炎または尋常性天疱瘡を含む補体媒介性自己免疫疾患に罹患している、請求項190に記載の方法。
[態様195]
前記対象が、膜性増殖性糸球体腎炎または補体3糸球体症を含む補体媒介性腎疾患に罹患している、請求項190に記載の方法。
[態様196]
前記対象が補体媒介性心血管疾患に罹患している、請求項190に記載の方法。
[態様197]
前記心血管疾患がアテローム性動脈硬化症または血栓症を含む、請求項196に記載の方法。
[態様198]
前記対象が補体媒介性皮膚疾患に罹患している、請求項190に記載の方法。
[態様199]
前記皮膚疾患が、乾癬、反対型ざ瘡、紅斑性狼瘡、皮膚小型血管炎、蕁麻疹、蕁麻疹様血管炎、水疱性類天疱瘡を含む、請求項198に記載の方法。
[態様200]
前記対象が前記補体媒介性炎症に罹患しており、前記補体媒介性炎症が、虚血/再灌流障害、熱傷、内毒素血症及び敗血症性ショック、成人呼吸窮迫症候群、心肺バイパス、血液透析、アナフィラキシーショック、喘息、血管浮腫、クローン病、鎌状赤血球貧血、糸球体腎炎、膜性腎炎、膵炎、移植片拒絶反応、超急性異種移植片拒絶反応、習慣性流産、子癇前症、薬物アレルギー、IL-2誘発性血管漏出症候群、X線造影剤アレルギー、重症筋無力症、アルツハイマー病、多発性硬化症、関節リウマチ、全身性紅斑性狼瘡、インスリン依存型真性糖尿病、急性散在性脳脊髄炎、アジソン病、抗リン脂質抗体症候群、自己免疫性肝炎、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、橋本病、特発性血小板減少性紫斑病、天疱瘡、シェーグレン症候群、高安動脈炎、心筋梗塞、脳卒中、急性呼吸窮迫症候群、敗血症、血漿浄化、血小板フェレーシス、白血球除去、体外式膜型人工肺、ヘパリン体外LDL沈澱、腸炎症、蕁麻疹様及び血管炎、ならびに狼瘡腎炎からなる群から選択される症状または疾患に関連するものである、請求項190に記載の方法。
[態様201]
前記対象が、虚血再灌流障害、関節リウマチ(RA)、狼瘡腎炎、虚血再灌流障害、非典型溶血性***症候群(aHUS)、典型的または感染性溶血性***症候群(tHUS)、デンスデポジット病(DDD)、発作性夜間ヘモグロビン尿症(PNH)、多発性硬化症(MS)、黄斑変性症、溶血・肝酵素上昇・低血小板(HELLP)症候群、敗血症、皮膚筋炎、糖尿病網膜症、血栓性血小板減少性紫斑病(TTP)、自発性流産、微量免疫血管炎、表皮水疱症、習慣性流産、多発性硬化症(MS)、外傷性脳損傷、心血管障害、心筋炎、脳血管障害、末梢血管障害、腎血管障害、腸間膜/腸血管障害、移植片及び/または再植片に対する血管再生、血管炎、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病性腎炎、全身性紅斑性狼瘡関連血管炎、関節リウマチに関連する血管炎、免疫複合体性血管炎、高安病、毛細血管漏出症候群、拡張型心筋症、糖尿病性血管障害、胸腹部大動脈瘤、川崎病(関節炎)、静脈ガス塞栓症(VGE)、及びステント留置後の再狭窄、回転粥腫切除術、経皮的冠動脈形成術(PTCA)、重症筋無力症、寒冷凝集素症(CAD)、発作性寒冷ヘモグロビン尿症(PCH)、皮膚筋炎、強皮症、温式自己免疫性溶血性貧血、グレーブス病、橋本甲状腺炎、I型糖尿病、乾癬、天疱瘡、自己免疫性溶血性貧血(AIHA)、突発性血小板減少性紫斑病(ITP)、グッドパスチャー症候群、抗リン脂質症候群(APS)、デゴス病、ならびに劇症型APS(CAPS)からなる群から選択される症状または疾患に罹患している、請求項189に記載の方法。
[態様202]
前記対象が、加齢黄斑変性症(AMD)、II型膜性増殖性糸球体腎炎(MPGN II)、溶血性***症候群(HUS)、喘息、アミロイドーシス及び血栓性血小板減少性紫斑病からなる群から選択される症状または疾患に罹患している、請求項189に記載の方法。
[態様203]
前記溶血性***症候群(HUS)が非典型溶血性***症候群(aHUS)である、請求項202に記載の方法。
[態様204]
前記対象が、ドルーゼン関連疾患、またはドルーゼンに関係する疾患に罹患している、請求項189に記載の方法。
[態様205]
前記ドルーゼンに関係する疾患が、アミロイドーシス、弾性線維症、デンスデポジット病、糸球体腎炎、アテローム性動脈硬化症、またはドルーゼンに関係する眼疾患である、請求項204に記載の方法。
[態様206]
補体活性を調節するための四価融合タンパク質構築物を含む医薬組成物であって、前記四価融合タンパク質構築物が、
a)補体関連抗原に結合する抗体またはその抗原結合性断片、ならびに
b)第1補体調節剤ペプチド及び第2補体調節剤ペプチド
を含むものであり、前記第1及び第2補体調節剤ポリペプチドが同じであるかまたは異なっている、前記医薬組成物。
[態様207]
前記第1及び第2補体調節剤ペプチドの少なくとも1つがリンカーによって前記抗体または抗原結合性断片に結合体化されている、請求項206に記載の医薬組成物。
[態様208]
補体活性を調節するための三価融合タンパク質構築物を含む医薬組成物であって、前記四価融合タンパク質構築物が、
a)補体関連抗原に結合する抗体またはその抗原結合性断片、ならびに
b)1つの補体調節剤ペプチド
を含むものである、前記医薬組成物。
[態様209]
前記抗体またはその抗原結合性断片と前記補体調節剤ペプチドとがリンカーによって結合体化している、請求項208に記載の医薬組成物。
[態様210]
補体活性を調節するための三価融合タンパク質構築物を含む医薬組成物であって、前記三価融合タンパク質構築物が、
a)補体関連抗原に結合するFab、
b)抗体Fcドメイン、及び
c)前記Fabまたは前記Fcドメインに結合体化された補体調節剤ペプチド
を含むものである、前記医薬組成物。
[態様211]
前記Fabまたは前記Fcドメインと、前記補体調節剤ペプチドとがリンカーによって結合体化している、請求項210に記載の医薬組成物。
[態様212]
a)抗体のCH2またはCH3ドメインを含む第1ポリペプチド単量体
を含み、前記ドメインが、ホモ二量体と比較してヘテロ二量体の形成に有利に働く少なくとも1つの直交的修飾を有するものであり;
b)抗体のCH2またはCH3ドメインを含む第2ポリペプチド単量体
を含み、前記ドメインが、ホモ二量体と比較して前記第1ポリペプチド単量体とのヘテロ二量体の形成に有利に働く少なくとも1つの直交的修飾を有するものである、
三価融合タンパク質構築物
を含む医薬組成物であって、前記第1及び第2ポリペプチドのうちの1つが補体調節剤ペプチドをさらに含み、前記三価融合タンパク質構築物が補体関連抗原に結合する、前記医薬組成物。
[態様213]
前記第1ポリペプチドがノブ修飾を含み、前記第2ポリペプチドがホール修飾を含む、請求項212に記載の医薬組成物。
[態様214]
前記第1及び第2ポリペプチドが、電荷または表面の相補性をもたらす修飾を含む、請求項212に記載の医薬組成物。
[態様215]
前記補体調節剤ペプチドがアミノ酸リンカーによって前記第1及び第2ポリペプチドのうちの1つに連結されている、請求項212~214のいずれか1項に記載の医薬組成物。
[態様216]
a)配列番号11、12及び13;17、18及び19;23、24及び25;29、30及び31;35、36及び37;147、148及び149;188、189及び190;196、197及び198;204もしくは343、205及び206;212、213及び214;220、221及び222;228、229及び230;29、259及び31;または29、260及び31のアミノ酸配列を有する3つの重鎖相補性決定領域(CDR)、あるいは
b)配列番号11、12及び13;17、18及び19;23、24及び25;29、30及び31;35、36及び37;147、148及び149;188、189及び190;196、197及び198;204もしくは343、205及び206;212、213及び214;220、221及び222;228、229及び230;29、259及び31;または29、260及び31の1つの中に単一の保存的アミノ酸置換があるという点で異なっているアミノ酸配列を有する3つの重鎖CDR;ならびに
c)配列番号14、15及び16;20、21及び22;26、27及び28;32、33及び34;38、39及び40;150、151及び152;191、192及び193;199、200及び201;207、208及び209;215、216及び217;223、224及び225;もしくは231、232及び233のアミノ酸配列を有する3つの軽鎖相補性決定領域(CDR)、または
d)配列番号14、15及び16;20、21及び22;26、27及び28;32、33及び34;38、39及び40;150、151及び152;191、192及び193;199、200及び201;207、208及び209;215、216及び217;223、224及び225;もしくは231、232及び233の1つの中に単一の保存的アミノ酸置換があるという点で異なっているアミノ酸配列を有する3つの軽鎖CDR
を含む抗体またはその抗原結合性断片;ならびに
補体調節剤ペプチド
を含む融合タンパク質構築物を含む医薬組成物。
[態様217]
a)配列番号54、58、67、73、74、81、88、89、98、99、112、145、153、194、202、210、218、226、234、238、243、244、246、247、248、249、250、251、252、253、254、255、261、262、263、264、265、270、271、272、273、274、280、281、282、283、284、285、286、288、290及び342のうちの少なくとも1つのアミノ酸配列を含む重鎖、ならびに
b)配列番号45、59、68、195、203、211、219、227、235、256、257、258、266、267、268、269、275、276、277、278、279、287及び289のうちの少なくとも1つのアミノ酸配列を含む軽鎖
を含む、または
c)配列番号54、58、67、73、74、81、88、89、98、99、112、145、153、194、202、210、218、226、234、238、243、244、246、247、248、249、250、251、252、253、254、255、261、262、263、264、265、270、271、272、273、274、280、281、282、283、284、285、286、288、290及び342のうちの少なくとも1つの中に1つ以上の保存的アミノ酸置換があるという点で異なっているアミノ酸配列を含む重鎖、ならびに
d)配列番号45、59、68、195、203、211、219、227、235、256、257、258、266、267、268、269、275、276、277、278、279、287及び289のうちの少なくとも1つの中に1つ以上の保存的アミノ酸置換があるという点で異なっているアミノ酸配列を含む軽鎖
を含む抗体またはその抗原結合性断片を含む融合タンパク質構築物を含む医薬組成物。
[態様218]
配列番号45、51、54、58、59、62、64、67、68、73、74、79、81、88、89、98、99、112、194、195、202、203、210、211、218、219、226、227、234、235、238、239、240、243、244、246、247、248、249、250、251、252、253、254、255、256、257、258、261、262、263、264、265、266、267、268、269、270、271、272、273、274、275、276、277、278、279、280、281、282、283、284、285、286、287、288、289、290及び342からなる群から選択される配列、ならびに
補体調節剤ペプチド
を含む融合タンパク質構築物を含む医薬組成物。
[態様219]
前記補体調節剤ペプチドがアミノ酸リンカーによって前記抗体またはその抗原結合性断片に連結されている、請求項216または請求項217に記載の医薬組成物。
[態様220]
前記アミノ酸リンカーが、配列番号138、配列番号161、配列番号162、配列番号163、配列番号164、配列番号165、配列番号166、配列番号167、配列番号168、配列番号169、配列番号170、配列番号171、配列番号172、配列番号173、配列番号174、配列番号175、配列番号176、配列番号177、配列番号178、配列番号179、配列番号180、配列番号181、配列番号182、配列番号183、配列番号241または配列番号242のいずれかのアミノ酸配列を含む、請求項207、209、211、215または218に記載の医薬組成物。
[態様221]
前記抗原結合性断片を含み、前記抗原結合性断片がFv断片、Fab、Fab’、F(ab’)2またはscFvを含む、請求項206~212または請求項214~219のいずれか1項に記載の医薬組成物。
[態様222]
前記医薬組成物を対象に投与した時に前記融合タンパク質構築物が前記対象における代替補体活性を調節する、請求項206~220のいずれか1項に記載の医薬組成物。
[態様223]
前記抗体もしくはその抗原結合性断片、または前記Fabが、哺乳動物アネキシンタンパク質のドメインに結合する、請求項206~222のいずれか1項に記載の医薬組成物。
[態様224]
前記抗体もしくはその抗原結合性断片、または前記Fabが、哺乳動物アネキシンタンパク質のドメインに10-8M以下のKD親和性で結合する、請求項206~223のいずれか1項に記載の医薬組成物。
[態様225]
前記ドメインがアネキシンコアドメインである、請求項223または請求項224に記載の医薬組成物。
[態様226]
前記アネキシンコアドメインがアルファヘリカルドメインを含む、請求項225に記載の医薬組成物。
[態様227]
前記アネキシンコアドメインがカルシウム結合部位及び膜結合部位を含む、請求項224または請求項225に記載の医薬組成物。
[態様228]
前記アネキシンコアドメインが少なくとも1つのアネキシンリピート配列を含む、請求項223~227のいずれか1項に記載の医薬組成物。
[態様229]
前記抗体もしくはその抗原結合性断片、または前記Fabが、前記少なくとも1つのアネキシンリピート配列に結合する、請求項228に記載の医薬組成物。
[態様230]
前記補体関連抗原がリン脂質を含み、前記抗体もしくはその抗原結合性断片、または前記Fabが、前記リン脂質に結合する、請求項206~221のいずれか1項に記載の医薬組成物。
[態様231]
前記抗体もしくはその抗原結合性断片、または前記Fabが、リン脂質に10-8M以下のKD親和性で結合する、請求項206~222または請求項230のいずれか1項に記載の医薬組成物。
[態様232]
前記リン脂質が、ホスファチジルエタノールアミン(PE)、カルジオリピン(CL)、ホスファチジルコリン(PC)及びマロンジアルデヒド(MDA)からなる群から選択される、請求項231に記載の医薬組成物。
[態様233]
前記補体関連抗原がC3補体タンパク質またはその断片を含み、前記抗体もしくはその抗原結合性断片、または前記Fabが、前記C3補体タンパク質またはその断片に結合する、請求項206~222のいずれか1項に記載の医薬組成物。
[態様234]
前記抗体もしくはその抗原結合性断片、または前記Fabが、前記C3補体タンパク質またはその断片に10-8M以下のKD親和性で結合する、請求項206~222または請求項233のいずれか1項に記載の医薬組成物。
[態様235]
前記C3補体タンパク質断片がC3dである、請求項234に記載の医薬組成物。
[態様236]
前記補体調節剤ペプチドが補体受容体1(CR1)タンパク質を含む、請求項206~235のいずれか1項に記載の医薬組成物。
[態様237]
前記補体調節剤ペプチドが、前記CR1タンパク質のドメインA、またはドメインAの少なくとも3つのショートコンセンサスリピート(SCR)を保持しているその断片を含む、請求項236に記載の医薬組成物。
[態様238]
前記補体調節剤ペプチドが、前記CR1タンパク質のドメインB、またはドメインBの少なくとも3つのSCRを保持しているその断片を含む、請求項236または請求項237に記載の医薬組成物。
[態様239]
前記補体調節剤ペプチドが前記CR1タンパク質のドメインC、またはドメインCの少なくとも3つのSCRを保持しているその断片を含む、請求項236~238のいずれか1項に記載の医薬組成物。
[態様240]
前記CR1タンパク質のドメインD、またはドメインDの少なくとも3つのSCRを保持しているその断片をさらに含む、請求項236~239のいずれか1項に記載の医薬組成物。
[態様241]
前記補体調節剤ペプチドが、前記CR1タンパク質のドメインAの最初の3つのSCR、ドメインBの最初の3つのSCR及びドメインCの最初の3つのSCRを含む、請求項240に記載の医薬組成物。
[態様242]
前記CR1タンパク質がヒトCR1タンパク質である、請求項236~241のいずれか1項に記載の医薬組成物。
[態様243]
前記補体調節剤ポリペプチドがCR1(1-10)である、請求項206~242のいずれか1項に記載の医薬組成物。
[態様244]
前記補体調節剤ポリペプチドがCR1(1-17)である、請求項206~242のいずれか1項に記載の医薬組成物。
[態様245]
前記CR1(1-10)が、
配列番号41もしくは配列番号91のアミノ酸配列、または
少なくとも85%同一であるアミノ酸配列を有するその変異体
を含む、請求項244に記載の医薬組成物。
[態様246]
前記CR1(1-17)が、
配列番号42もしくは配列番号92のアミノ酸配列、または
少なくとも85%同一であるアミノ酸配列を有するその変異体
を含む、請求項244に記載の医薬組成物。
[態様247]
前記補体調節剤ペプチドが、崩壊促進因子(DAF)またはその生理活性断片である、請求項206~242のいずれか1項に記載の医薬組成物。
[態様248]
前記DAFがヒトDAFである、請求項247に記載の医薬組成物。
[態様249]
ヒトDAFの前記生理活性断片が、完全長ヒトDAFのショートコンセンサスリピート(SCR)ドメイン及びO-グリコシル化セリン/スレオニンリッチドメインのうちの少なくとも1つを含む、請求項247または請求項248に記載の医薬組成物。
[態様250]
ヒトDAFの前記生理活性断片が完全長ヒトDAFのSCR1~4またはSCR2~4を含む、請求項248または請求項249に記載の医薬組成物。
[態様251]
ヒトDAFの前記生理活性断片が、
配列番号184のアミノ酸配列、または
少なくとも85%同一であるアミノ酸配列を有するその変異体
を含む、請求項247~250のいずれか1項に記載の医薬組成物。
[態様252]
前記補体調節剤ペプチドがH因子またはその生理活性断片である、請求項206~242のいずれか1項に記載の医薬組成物。
[態様253]
前記H因子がヒトH因子である、請求項252に記載の医薬組成物。
[態様254]
前記ヒトH因子の前記生理活性断片が、
配列番号9のアミノ酸21~266、アミノ酸21~320、アミノ酸21~509もしくはアミノ酸19~1106からなる群から選択される一続きのアミノ酸、または
前記一続きのアミノ酸と少なくとも85%同一であるアミノ酸配列を有するその変異体
を含む、請求項253に記載の医薬組成物。
[態様255]
前記ヒトH因子の前記生理活性断片が、
完全長ヒトH因子のSCR1~20、SCR1~2、SCR2~3、SCR3~4、SCR4~5、SCR5~6、SCR6~7、SCR7~8、SCR8~9、SCR9~10、SCR10~11、SCR11~12、SCR12~13、SCR13~14、SCR14~15、SCR15~16、SCR16~17、SCR17~18、SCR19~20、または任意のSCR1~20の組合せ
を含むショートコンセンサスリピート(SCR)の群を1つ以上含む、請求項253に記載の医薬組成物。
[態様256]
前記ヒトH因子の前記生理活性断片が完全長ヒトH因子のSCR1~4を含む、請求項253に記載の医薬組成物。
[態様257]
前記ヒトH因子の前記生理活性断片が完全長ヒトH因子のSCR1~5を含む、請求項253に記載の医薬組成物。
[態様258]
前記ヒトH因子の前記生理活性断片が、
配列番号72もしくは配列番号108のアミノ酸配列、または
少なくとも85%同一であるアミノ酸配列を有するその変異体
を含む、請求項252~257のいずれか1項に記載の医薬組成物。
[態様259]
前記補体調節剤ペプチドがMCPまたはその生理活性断片である、請求項206~242のいずれか1項に記載の医薬組成物。
[態様260]
前記MCPがヒトMCPである、請求項259に記載の医薬組成物。
[態様261]
前記ヒトMCPの前記生理活性断片が完全長ヒトMCPのショートコンセンサスリピート(SCR)ドメインの少なくとも1つを含む、請求項260に記載の医薬組成物。
[態様262]
前記ヒトMCPの前記生理活性断片が前記完全長ヒトMCPのSCR3~4を含む、請求項261に記載の医薬組成物。
[態様263]
前記ヒトMCPの前記生理活性断片が、
配列番号187のアミノ酸配列、または
少なくとも85%同一であるアミノ酸配列を有するその変異体
を含む、請求項261または請求項262に記載の医薬組成物。
[態様264]
前記補体調節剤ペプチドがMap44またはその生理活性断片である、請求項206~242のいずれか1項に記載の医薬組成物。
[態様265]
前記Map44がヒトMap44である、請求項264に記載の医薬組成物。
[態様266]
前記Map44が、
配列番号186のアミノ酸配列、または
少なくとも85%同一であるアミノ酸配列を有するその変異体
を含む、請求項265に記載の医薬組成物。
[態様267]
前記補体調節剤ペプチドがCD59またはその生理活性断片である、請求項206~242のいずれか1項に記載の医薬組成物。
[態様268]
前記CD59がヒトCD59である、請求項267に記載の医薬組成物。
[態様269]
前記CD59が、
配列番号185のアミノ酸配列、または
少なくとも85%同一であるアミノ酸配列を有するその変異体
を含む、請求項267または請求項268に記載の医薬組成物。
[態様270]
前記抗体またはその抗原結合性断片がヒト抗体またはその抗原結合性断片である、請求項206~269のいずれか1項に記載の医薬組成物。
[態様271]
前記抗体またはその抗原結合性断片がヒト化抗体またはその抗原結合性断片である、請求項206~269のいずれか1項に記載の医薬組成物。
[態様272]
請求項206~271のいずれか1項の中で記載される融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド。
[態様273]
治療的有効量の請求項206~271のいずれか1項に記載の医薬組成物を対象に提供することを含む治療方法。
[態様274]
前記対象が補体媒介性炎症に罹患している、請求項269に記載の方法。
[態様275]
前記補体媒介性炎症が炎症性線維性疾患を含み、前記炎症性線維性疾患が、巣状分節性糸球体硬化症、原発性硬化性胆管炎または膜性増殖性糸球体腎炎を含む、請求項274に記載の方法。
[態様276]
前記対象が、関節リウマチ、全身性紅斑性狼瘡、狼瘡腎炎または尋常性天疱瘡を含む補体媒介性自己免疫疾患に罹患している、請求項275に記載の方法。
[態様277]
前記対象が、膜性増殖性糸球体腎炎または補体3糸球体症を含む補体媒介性腎疾患に罹患している、請求項275に記載の方法。
[態様278]
前記対象が補体媒介性心血管疾患に罹患している、請求項275に記載の方法。
[態様279]
前記心血管疾患がアテローム性動脈硬化症または血栓症を含む、請求項278に記載の方法。
[態様280]
前記対象が補体媒介性皮膚疾患に罹患している、請求項275に記載の方法。
[態様281]
前記皮膚疾患が、乾癬、反対型ざ瘡、紅斑性狼瘡、皮膚小型血管炎、蕁麻疹、蕁麻疹様血管炎、水疱性類天疱瘡を含む、請求項280に記載の方法。
[態様282]
前記補体媒介性炎症が、虚血/再灌流障害、熱傷、内毒素血症及び敗血症性ショック、成人呼吸窮迫症候群、心肺バイパス、血液透析、アナフィラキシーショック、喘息、血管浮腫、クローン病、鎌状赤血球貧血、糸球体腎炎、膜性腎炎、膵炎、移植片拒絶反応、超急性異種移植片拒絶反応、習慣性流産、子癇前症、薬物アレルギー、IL-2誘発性血管漏出症候群、X線造影剤アレルギー、重症筋無力症、アルツハイマー病、多発性硬化症、関節リウマチ、全身性紅斑性狼瘡、インスリン依存型真性糖尿病、急性散在性脳脊髄炎、アジソン病、抗リン脂質抗体症候群、自己免疫性肝炎、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、橋本病、特発性血小板減少性紫斑病、天疱瘡、シェーグレン症候群、高安動脈炎、心筋梗塞、脳卒中、急性呼吸窮迫症候群、敗血症、血漿浄化、血小板フェレーシス、白血球除去、体外式膜型人工肺、ヘパリン体外LDL沈澱、腸炎症、蕁麻疹様及び血管炎、ならびに狼瘡腎炎からなる群から選択される症状または疾患に関連するものである、請求項274に記載の方法。
[態様283]
前記対象が、虚血再灌流障害、関節リウマチ(RA)、狼瘡腎炎、虚血再灌流障害、非典型溶血性***症候群(aHUS)、典型的または感染性溶血性***症候群(tHUS)、デンスデポジット病(DDD)、発作性夜間ヘモグロビン尿症(PNH)、多発性硬化症(MS)、黄斑変性症、溶血・肝酵素上昇・低血小板(HELLP)症候群、敗血症、皮膚筋炎、糖尿病網膜症、血栓性血小板減少性紫斑病(TTP)、自発性流産、微量免疫血管炎、表皮水疱症、習慣性流産、多発性硬化症(MS)、外傷性脳損傷、心血管障害、心筋炎、脳血管障害、末梢血管障害、腎血管障害、腸間膜/腸血管障害、移植片及び/または再植片に対する血管再生、血管炎、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病性腎炎、全身性紅斑性狼瘡関連血管炎、関節リウマチに関連する血管炎、免疫複合体性血管炎、高安病、毛細血管漏出症候群、拡張型心筋症、糖尿病性血管障害、胸腹部大動脈瘤、川崎病(関節炎)、静脈ガス塞栓症(VGE)、及びステント留置後の再狭窄、回転粥腫切除術、経皮的冠動脈形成術(PTCA)、重症筋無力症、寒冷凝集素症(CAD)、発作性寒冷ヘモグロビン尿症(PCH)、皮膚筋炎、強皮症、温式自己免疫性溶血性貧血、グレーブス病、橋本甲状腺炎、I型糖尿病、乾癬、天疱瘡、自己免疫性溶血性貧血(AIHA)、突発性血小板減少性紫斑病(ITP)、グッドパスチャー症候群、抗リン脂質症候群(APS)、デゴス病、ならびに劇症型APS(CAPS)からなる群から選択される症状または疾患に罹患している、請求項273に記載の方法。
[態様284]
前記対象が、加齢黄斑変性症(AMD)、II型膜性増殖性糸球体腎炎(MPGN II)、溶血性***症候群(HUS)、喘息、アミロイドーシス及び血栓性血小板減少性紫斑病からなる群から選択される症状または疾患に罹患している、請求項273に記載の方法。
[態様285]
前記溶血性***症候群(HUS)が非典型溶血性***症候群(aHUS)である、請求項284に記載の方法。
[態様286]
前記対象が、ドルーゼン関連疾患、またはドルーゼンに関係する疾患に罹患している、請求項283に記載の方法。
[態様287]
前記ドルーゼンに関係する疾患が、アミロイドーシス、弾性線維症、デンスデポジット病、糸球体腎炎、アテローム性動脈硬化症、またはドルーゼンに関係する眼疾患である、請求項286に記載の方法。
[態様288]
補体関連抗原に結合する単量体型融合タンパク質構築物であって、
a)N末端からC末端に向かってA-Bの配向で並んだドメインA及びドメインBを含む第1ポリペプチド、
b)N末端からC末端に向かってE-Fの配向で並んだドメインE及びドメインFを含む第2ポリペプチド
を含み、前記ドメインA及び前記ドメインEのうちの少なくとも1つがドメインRに結合体化されており、
(i)前記ドメインAが、重鎖可変領域アミノ酸配列(VH)またはその抗原結合性断片を含むものであり、
(ii)前記ドメインBが、重鎖CH1定常領域アミノ酸配列を含むものであり、
(iii)前記ドメインRが、補体調節剤ポリペプチドを含むものであり、
(iv)前記ドメインEが、軽鎖可変領域アミノ酸配列(VL)またはその抗原結合性断片を含むものであり、
(v)前記ドメインFが、軽鎖定常領域アミノ酸配列(CL1)を含むものである、
前記単量体型融合タンパク質構築物。
[態様289]
前記第1ポリペプチドが前記ドメインA、前記ドメインB及び前記ドメインRを含み、前記第1ポリペプチドの前記ドメインがN末端からC末端に向かってR-A-Bの配向で並んでおり、前記ドメインRと前記ドメインAとが結合体化している、請求項288に記載の単量体型融合タンパク質構築物。
[態様290]
前記第2ポリペプチドが前記ドメインE、前記ドメインF及び前記ドメインRを含み、前記第2ポリペプチドの前記ドメインがN末端からC末端に向かってR-E-Fの配向で並んでおり、前記ドメインEと前記ドメインRとが結合体化している、請求項288に記載の単量体型融合タンパク質構築物。
[態様291]
融合タンパク質構築物であって、
a)補体タンパク質3d(c3d)に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片、及び
b)2分子の補体調節剤ポリペプチド
を含み、前記補体調節剤ポリペプチドの各分子が、CR1、DAF、MCP、Crry、MAp44、MAp19、CD59及びH因子からなる群から選択される補体タンパク質の生理活性断片を含むものであり、
補体アッセイでの半数阻害濃度が、前記抗体を含まないこと以外は同一である対照タンパク質構築物のそれに比べて低い、
前記融合タンパク質構築物。
[態様292]
前記補体調節剤ポリペプチドの前記各分子が前記抗体の重鎖またはその抗原結合性断片に結合体化されている、請求項291に記載の融合タンパク質構築物。
[態様293]
前記補体調節剤ポリペプチドの前記各分子が前記重鎖のC末端に複合体化している、請求項292に記載の融合タンパク質構築物。
[態様294]
前記抗体またはその抗原結合性断片が第1ポリペプチド及び第2ポリペプチドを含み、
a)前記第1ポリペプチドが、配列番号54、配列番号58、配列番号60、配列番号61、配列番号64、配列番号65、配列番号67、配列番号69、配列番号70、配列番号71、配列番号73、配列番号74、配列番号75、配列番号76、配列番号78、配列番号80、配列番号81、配列番号82、配列番号85、配列番号87、配列番号88、配列番号132、配列番号133、配列番号134、配列番号243、配列番号282、配列番号284、配列番号285及び配列番号286のうちの少なくとも1つのアミノ酸配列を含む重鎖配列を含み、
b)前記第2ポリペプチドが、配列番号59、配列番号68、配列番号77、配列番号79、配列番号84、配列番号86、配列番号135及び配列番号279のうちの少なくとも1つのアミノ酸配列を含む軽鎖配列を含む、
請求項291に記載の融合タンパク質構築物。
[態様295]
前記第1ポリペプチドが、配列番号54、配列番号58、配列番号60、配列番号61、配列番号64、配列番号65、配列番号67、配列番号69、配列番号70、配列番号71、配列番号73、配列番号74、配列番号75、配列番号76、配列番号78、配列番号80、配列番号81、配列番号82、配列番号85、配列番号87、配列番号88、配列番号132、配列番号133、配列番号134、配列番号243、配列番号282、配列番号284、配列番号285及び配列番号286からなる群から選択される少なくとも2つのアミノ酸配列を含み、前記第2ポリペプチドが、配列番号59、配列番号68、配列番号77、配列番号79、配列番号84、配列番号86、配列番号135及び配列番号279からなる群から選択される少なくとも2つのアミノ酸配列を含む、請求項294に記載の融合タンパク質構築物。
[態様296]
前記第1ポリペプチドの前記少なくとも2つのアミノ酸配列が同じアミノ酸配列であり、前記第2ポリペプチドの前記少なくとも2つのアミノ酸配列が同じアミノ酸配列である、請求項295に記載の融合タンパク質構築物。
[態様297]
前記第1ポリペプチドの前記少なくとも2つのアミノ酸配列が配列番号282または配列番号285であり、前記第2ポリペプチドの前記少なくとも2つのアミノ酸配列が配列番号279である、請求項296に記載の融合タンパク質構築物。
[態様298]
前記融合タンパク質がリンカーをさらに含む、請求項291に記載の融合タンパク質構築物。
[態様299]
前記リンカーが、配列番号138、配列番号161、配列番号162、配列番号163、配列番号164、配列番号165、配列番号166、配列番号167、配列番号168、配列番号169、配列番号170、配列番号171、配列番号172、配列番号173、配列番号174、配列番号175、配列番号176、配列番号177、配列番号178、配列番号179、配列番号180、配列番号181、配列番号182、配列番号183、配列番号241または配列番号242のいずれかのアミノ酸配列を含む、請求項298に記載の融合タンパク質構築物。
[態様300]
前記補体タンパク質がH因子またはその生理活性断片である、請求項291に記載の融合タンパク質構築物。
[態様301]
前記H因子またはその生理活性断片が、
配列番号72もしくは配列番号108のアミノ酸配列、または
少なくとも85%同一であるアミノ酸配列を有するその変異体
を含む、請求項300に記載の融合タンパク質構築物。
[態様302]
前記補体タンパク質がCR1またはその断片である、請求項291に記載の融合タンパク質構築物。
[態様303]
前記補体タンパク質が、
配列番号41、配列番号42、配列番号91もしくは配列番号92のアミノ酸配列、または
少なくとも85%同一であるアミノ酸配列を有するその変異体
を含む、請求項302に記載の融合タンパク質構築物。
[態様304]
前記融合タンパク質構築物が、配列番号41、配列番号42、配列番号43、配列番号44、配列番号46、配列番号47、配列番号48、配列番号49、配列番号50、配列番号52、配列番号53、配列番号54、配列番号55、配列番号56、配列番号57、配列番号60、配列番号61、配列番号63、配列番号65、配列番号66、配列番号69、配列番号70、配列番号71、配列番号72、配列番号75、配列番号76、配列番号77、配列番号78、配列番号79、配列番号80、配列番号82、配列番号83、配列番号84、配列番号85、配列番号86、配列番号87、配列番号88、配列番号90、配列番号93、配列番号94、配列番号95、配列番号96、配列番号97、配列番号98、配列番号99、配列番号100、配列番号101、配列番号102、配列番号103、配列番号104、配列番号105、配列番号106、配列番号107、配列番号109、配列番号110、配列番号111、配列番号113、配列番号114、配列番号115、配列番号116、配列番号117、配列番号118、配列番号119、配列番号120、配列番号121、配列番号122、配列番号123、配列番号124、配列番号125、配列番号126、配列番号127、配列番号128、配列番号129、配列番号130、配列番号131、配列番号132、配列番号133、配列番号134、配列番号135、配列番号136、配列番号137、配列番号138、配列番号140、配列番号141、配列番号142、配列番号143、配列番号144、配列番号279、配列番号282及び配列番号285のうちの少なくとも1つのアミノ酸配列を含む、請求項291に記載の融合タンパク質構築物。
[態様305]
融合タンパク質構築物であって、
a)補体関連抗原に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片
を含み、前記抗体が、第1ポリペプチド及び第2ポリペプチドを含むものであり、前記第1ポリペプチド及び前記第2ポリペプチドの各々が、重鎖及び軽鎖を含むものであり;さらに、
b)補体調節剤ポリペプチドの第1分子及び第2分子
を含み、前記第1分子及び前記第2分子の各々が、CR1、DAF、MCP、Crry、MAp44、MAp19、CD59及びH因子からなる群から選択される補体タンパク質の生理活性断片を含むものであり、
疾患を有する対象に前記融合タンパク質構築物を投与した時に、前記疾患を有する前記対象からの尿試料のアルブミン対クレアチニン比が、同等の融合タンパク質構築物を投与された対象からの尿試料のアルブミン対クレアチニン比よりも低く、前記同等の融合タンパク質構築物が、抗体またはその抗原結合性断片を含まないこと以外は同一のものである、前記融合タンパク質構築物。
[態様306]
前記疾患が補体媒介性腎疾患である、請求項305に記載の融合タンパク質構築物。
[態様307]
前記補体媒介性腎疾患が膜性増殖性糸球体腎炎または補体3糸球体症である、請求項306に記載の融合タンパク質構築物。
[態様308]
前記疾患を有する前記対象からの前記尿試料の前記アルブミン対クレアチニン比が少なくとも約1%、2%、3%、5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%低い、請求項305に記載の融合タンパク質構築物。
[態様309]
a)配列番号54、58、60、61、64、65、67、69、70、71、73、74、75、76、78、80、81、82、85、87、88、89、98、99、112、132、133、134、145、153、194、202、210、218、226、234、238、243、244、246、247、248、249、250、251、252、253、254、255、261、262、263、264、265、270、271、272、273、274、280、281、282、283、284、285、286、288、290及び342のうちの少なくとも1つのアミノ酸配列を含む重鎖、ならびに
b)配列番号45、59、68、77、79、84、86、135、195、203、211、219、227、235、256、257、258、266、267、268、269、275、276、277、278、279、287及び289のうちの少なくとも1つのアミノ酸配列を含む軽鎖
を含む、または
c)配列番号54、58、60、61、64、65、67、69、70、71、73、74、75、76、78、80、81、82、85、87、88、89、98、99、112、132、133、134、145、153、194、202、210、218、226、234、238、243、244、246、247、248、249、250、251、252、253、254、255、261、262、263、264、265、270、271、272、273、274、280、281、282、283、284、285、286、288、290及び342のうちの少なくとも1つの中に1つ以上の保存的アミノ酸置換があるという点で異なっているアミノ酸配列を含む重鎖、ならびに
d)配列番号45、59、68、77、79、84、86、135、195、203、211、219、227、235、256、257、258、266、267、268、269、275、276、277、278、279、287及び289のうちの少なくとも1つの中に1つ以上の保存的アミノ酸置換があるという点で異なっているアミノ酸配列を含む軽鎖
を含む抗体またはその抗原結合性断片を含む融合タンパク質構築物。
[態様310]
前記融合タンパク質構築物が補体調節剤ポリペプチドをさらに含み、前記補体調節剤ポリペプチドが、補体受容体1(CR1)タンパク質、DAF、MCP、Crry、MAp44、MAp19、CD59、H因子及びその生理活性断片のうちの少なくとも1つを含む、請求項309に記載の融合タンパク質構築物。
Claims (15)
- 融合タンパク質構築物であって、以下:
(i)補体タンパク質3d(c3d)に特異的に結合する抗体であって、該抗体が以下:
(a)第1重鎖および第2重鎖であって、該第1および第2重鎖の各々が、配列番号254のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(HCVR)を含む、第1重鎖および第2重鎖、および
(b)第1軽鎖および第2軽鎖であって、該第1および第2軽鎖の各々が、配列番号258のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(LCVR)を含む、第1軽鎖および第2軽鎖
を含む、抗体、ならびに
(ii)補体タンパク質またはその生理活性断片を含む補体調節剤ポリペプチドであって、該補体タンパク質が、H因子、CR1、DAF、MCP、Crry、MAp44、MAp19、およびCD59からなる群から選択される、補体調節剤ポリペプチド
を含み、
ここで該第1および第2重鎖の各々のC末端が、1つの該補体調節剤ポリペプチド分子に連結されている、
前記融合タンパク質構築物。 - 前記補体タンパク質が、H因子またはその生理活性断片である、請求項1に記載の融合タンパク質構築物。
- 前記補体調節剤ポリペプチドが、配列番号72または配列番号108のアミノ酸配列を含む、請求項2に記載の融合タンパク質構築物。
- 前記補体タンパク質が、CR1またはその生理活性断片である、請求項1に記載の融合タンパク質構築物。
- 前記補体調節剤ポリペプチドが、配列番号41、配列番号42、配列番号91、または配列番号92のアミノ酸配列を含む、請求項4に記載の融合タンパク質構築物。
- 前記第1および第2重鎖が、各々配列番号284のアミノ酸配列を含み、前記第1および第2の軽鎖が、各々配列番号279のアミノ酸配列を含む、請求項1~5のいずれか一項に記載の融合タンパク質構築物。
- 前記第1および第2重鎖が、各々配列番号282のアミノ酸配列を含む、請求項6に記載の融合タンパク質構築物。
- 前記第1および第2重鎖が、各々配列番号285のアミノ酸配列を含む、請求項6に記載の融合タンパク質構築物。
- 前記第1および第2重鎖の各々のC末端が、アミノ酸リンカーによって前記1つの補体調節剤ポリペプチド分子に連結されている、請求項1~8のいずれか一項に記載の融合タンパク質構築物。
- 前記アミノ酸リンカーが、配列番号138、配列番号161、配列番号162、配列番号163、配列番号164、配列番号165、配列番号166、配列番号167、配列番号168、配列番号169、配列番号170、配列番号171、配列番号172、配列番号173、配列番号174、配列番号175、配列番号176、配列番号177、配列番号178、配列番号179、配列番号180、配列番号181、配列番号182、配列番号183、配列番号241、または配列番号242のいずれかのアミノ酸配列を含む、請求項9に記載の融合タンパク質構築物。
- 前記アミノ酸リンカー配列が、配列番号138である、請求項9に記載の融合タンパク質構築物。
- 前記融合タンパク質構築物が、以下:
(1)2つの重鎖含有ポリペプチドであって、その各々が、N末端からC末端に向かって、配列番号282のアミノ酸配列、配列番号138のアミノ酸配列、および配列番号41のアミノ酸配列を含む、2つの重鎖含有ポリペプチド;および、2つの軽鎖含有ポリペプチドであって、その各々が、N末端からC末端に向かって、配列番号279のアミノ酸配列を含む、2つの軽鎖含有ポリペプチド;
(2)2つの重鎖含有ポリペプチドであって、その各々が、N末端からC末端に向かって、配列番号285のアミノ酸配列、配列番号138のアミノ酸配列、および配列番号41のアミノ酸配列を含む、2つの重鎖含有ポリペプチド;および、2つの軽鎖含有ポリペプチドであって、その各々が、N末端からC末端に向かって、配列番号279のアミノ酸配列を含む、2つの軽鎖含有ポリペプチド;
(3)2つの重鎖含有ポリペプチドであって、その各々が、N末端からC末端に向かって、配列番号282のアミノ酸配列、配列番号138のアミノ酸配列、および配列番号42のアミノ酸配列を含む、2つの重鎖含有ポリペプチド;および2つの軽鎖含有ポリペプチドであって、その各々が、N末端からC末端に向かって、配列番号279のアミノ酸配列を含む、2つの軽鎖含有ポリペプチド;
(4)2つの重鎖含有ポリペプチドであって、その各々が、N末端からC末端に向かって、配列番号285のアミノ酸配列、配列番号138のアミノ酸配列、および配列番号42のアミノ酸配列を含む、2つの重鎖含有ポリペプチド;および2つの軽鎖含有ポリペプチドであって、その各々が、N末端からC末端に向かって、配列番号279のアミノ酸配列を含む、2つの軽鎖含有ポリペプチド;
(5)2つの重鎖含有ポリペプチドであって、その各々が、N末端からC末端に向かって、配列番号282のアミノ酸配列、配列番号138のアミノ酸配列、および配列番号72のアミノ酸配列を含む、2つの重鎖含有ポリペプチド;および2つの軽鎖含有ポリペプチドであって、その各々が、N末端からC末端に向かって、配列番号279のアミノ酸配列を含む、2つの軽鎖含有ポリペプチド;
(6)2つの重鎖含有ポリペプチドであって、その各々が、N末端からC末端に向かって、配列番号285のアミノ酸配列、配列番号138のアミノ酸配列、および配列番号72のアミノ酸配列を含む、2つの重鎖含有ポリペプチド;および2つの軽鎖含有ポリペプチドであって、その各々が、N末端からC末端に向かって、配列番号279のアミノ酸配列を含む、2つの軽鎖含有ポリペプチド
からなる群から選択される、請求項1に記載の融合タンパク質構築物。 - 前記融合タンパク質構築物が、以下:
1)2つの第1ポリペプチド分子であって、その各々が、配列番号138のリンカーアミノ酸配列によって配列番号72の補体調節剤アミノ酸配列に連結されている配列番号282の重鎖アミノ酸配列を含む、2つの第1ポリペプチド分子、および
2)2つの第2ポリペプチド分子であって、その各々が、配列番号279の軽鎖アミノ酸配列を含む、2つの第2ポリペプチド分子
を含む、請求項1に記載の融合タンパク質構築物。 - 請求項1~13のいずれか一項に記載の融合タンパク質構築物を含む、医薬組成物。
- 請求項13に記載の融合タンパク質構築物を含む、請求項14に記載の医薬組成物。
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