JP7427286B2 - ＩＬ－２ＲβγＣ結合化合物 - Google Patents

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Description

本出願は、参照によりその全体が組み込まれる、２０１９年１１月５日に出願された米国仮特許出願第６２／９３０，７５８号の米国特許法第１１９条（ｅ）に基づく利益を主張する。
本開示は、ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物に関する。ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物は、ＩＬ－２Ｒアゴニストまたは部分的ＩＬ－２Ｒアゴニストとして作用し得る。２０２０年１１月１６日に作成された当該ＡＳＣＩＩコピーは、６２ＡＪ－０００４１０ＰＣ－３２０３９１＿ＳＬ．ｔｘｔという名称であり、７３９，５２９バイトのサイズである。
配列表
本出願は、本出願に含まれる配列表を含み、配列表のコピーは、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出され、参照によりその全体が組み込まれる。
組換えヒトインターロイキン－２（ＩＬ－２）は、臨床で研究された最初の免疫腫瘍剤のうちの１つであり、いくつかの特に困難ながん、黒色腫および腎がんなどに対して使用するために１９９０年代にＦＤＡによって承認された。ＩＬ－２は効果的であり、これらの腫瘍を有する患者の１０％までで持続的な応答をもたらすが、その有用性は、非常に深刻な用量制限毒性によって制限される。加えて、Ｔ細胞媒介性抗腫瘍応答を誘導するＩＬ－２の有効性は、Ｔ細胞抑制系のＩＬ－２駆動の同時上方調節によって損なわれる。ＩＬ－２療法の毒性を低減し、抗腫瘍活性に対する免疫抑制的制限を回避するための戦略が継続的に模索されてきた。これまで、この強力な生物学的製剤の全身曝露、したがって毒性を制御するために、適度に有効な戦略が開発されてきた。ＩＬ－２の複雑な生物学の解明は、腫瘍毒性および抑制のバランスを改変するための天然ＩＬ－２分子の修飾をもたらした。しかしながら、これらのアプローチは、天然ＩＬ－２を鋳型として使用することによって制限され、したがって、親分子の望ましくない構造駆動型バイオ活性の要素を保持する。
ＩＬ－２は、その抗腫瘍特性にとって重要であり、ＮＫおよび細胞傷害性ＣＤ８＋Ｔ細胞に強力な刺激効果を発揮する。しかしながら、抗腫瘍効果は、抗腫瘍免疫応答を効果的に鈍化させるＴ制御性細胞（Ｔｒｅｇ）のＩＬ－２指向性刺激によって矛盾的に抑制される。ＩＬ－２のこの二重効果は、免疫恒常性を担う様々な細胞上で発現するＩＬ－２受容体（ＩＬ－２Ｒ）サブユニットの性質によって大きく制御される。ＩＬ－２は、多くの種類の免疫細胞上で差次的かつ条件的に発現する３つの受容体サブユニットの組み合わせによって認識される。ＩＬ－２Ｒβ（β）およびＩＬ－２Ｒγ共通（γｃ）として知られる２つのシグナル伝達サブユニットは、ＩＬ－２に結合することによって正しい方向で並置がもたらされるときにシグナル伝達を開始する。ＩＬ－２は、約１ｎＭのＩＣ５０でＩＬ－２Ｒβγｃに結合して、活性三元複合体を形成する。ほとんどの免疫細胞は、様々なレベルで、ＩＬ－２ＲβおよびＩＬ－２Ｒγｃサブユニットを発現する。免疫細胞のサブセット、特にＴｒｅｇ上で発現する、第３の非シグナル伝達ＩＬ－２Ｒサブユニット、ＩＬ－２Ｒα（ＣＤ２５）も存在する。ＩＬ－２Ｒαβγｃの複合体は、ＩＬ－２に対して非常に高い親和性（約１０ｐＭ）を有し、したがって、３つすべてのサブユニットを発現する細胞は、ＩＬ－２に対してはるかに感受性が高い。腫瘍に対するＩＬ－２Ｒアゴニストの有効性を改善するための一般的で十分に支持されている戦略は、ＩＬ－２Ｒ選択性を操作してＩＬ－２ＲαサブユニットへのＩＬ－２の結合を低減しながら、ＩＬ－２Ｒβγｃの結合およびシグナル伝達を維持して、腫瘍部位におけるＴｒｅｇよりも細胞傷害性エフェクターＴ細胞（Ｔｅｆｆ細胞）の浸潤および刺激を有利にすることを伴う。
臨床環境におけるＩＬ－２毒性の原因はあまりよく理解されていないが、炎症性サイトカインの過剰な放出を伴うＩＬ－２Ｒβγｃ発現Ｔ細胞の誇張末梢免疫刺激の結果であると考えられる。毒性は、天然サイトカインの短い半減期のために、適切な腫瘍曝露を維持するために必要な高用量のＩＬ－２の頻繁な投与によって誘導される。
有用な免疫腫瘍療法としてのＩＬ－２の制限に対処するための戦略は、免疫調節物質の複雑な生物学を改変するために、変異体、融合タンパク質、または化学修飾ＩＬ－２を利用する。しかしながら、臨床前および臨床開発中に修飾ＩＬ－２の選択的ＩＬ－２Ｒβγｃ結合およびシグナル伝達を最適化することは困難である。これは、複数の新しい特性を付与するための出発点としての生物活性ＩＬ－２タンパク質の使用を制限する。
本発明によれば、ＩＬ－２Ｒβリガンドであって、式（１）～（１ｄ）、式（２）～（２ｄ）、式（３）～（３ｅ）、および式（４）～（４ｆ）のうちのいずれか１つのアミノ酸配列、配列番号８０５～９０３、９１１～９３０、２５７５～２６５５、２６６１～２８９１、２９００～２９２６、および２９２９～２９３９のうちのいずれか１つのアミノ酸配列、前述のうちのいずれかの切断アミノ酸配列、前述のうちのいずれかの置換アミノ酸配列、隣接アミノ酸を有する前述のアミノ酸配列のうちのいずれか、および前述のうちのいずれかと６０％超の配列類似性を有するアミノ酸配列を含む、ＩＬ－２Ｒβリガンド。
本発明によれば、ＩＬ－２Ｒγｃリガンドであって、式（５）～（５ｅ）のうちのいずれか１つのアミノ酸配列、配列番号９４４～１０２８、１０３２～１０６０、および１６０１～１６１３のうちのいずれか１つのアミノ酸配列、前述のうちのいずれかの切断アミノ酸配列、前述のうちのいずれかの置換アミノ酸配列、隣接アミノ酸を有する前述のアミノ酸配列のうちのいずれか、および前述のうちのいずれかと６０％超の配列類似性を有するアミノ酸配列を含む、ＩＬ－２Ｒγｃリガンド。
本発明によれば、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、本発明によるＩＬ－２Ｒβリガンドと、本発明によるＩＬ－２Ｒγｃリガンドと、を含む。
本発明によれば、ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物は、本発明によるＩＬ－２Ｒβリガンドと、本発明によるＩＬ－２Ｒγｃリガンドと、を含む。
本発明によれば、ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物は、本発明によるＩＬ－２Ｒβγｃリガンドを含む。
本発明によれば、医薬組成物は、本発明によるＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物を含む。
本発明によれば、患者において疾患を治療する方法であって、治療有効量の、本発明によるＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物、または本発明による医薬組成物を、このような治療を必要とする患者に投与することを含む、方法。
本発明によれば、免疫細胞を増殖させる方法であって、エクスビボまたはインビボで免疫細胞の集団を、有効量の、本発明によるＩＬ－２Ｒβリガンド、本発明によるＩＬ－２Ｒγｃリガンド、または本発明によるＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物と接触させることを含む、方法。
本発明によれば、細胞療法の方法は、細胞を操作して、本発明によるＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物を発現させることを含む。
本発明によれば、ワクチンを増強する方法は、ワクチンおよび治療有効量の、本発明によるＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物、または本発明による医薬組成物を患者に投与することを含む。
本発明によれば、免疫応答を修正する方法は、有効量の、本発明によるＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物、または本発明による医薬組成物を患者に投与することを含む。
本発明によれば、核酸は、本発明によるＩＬ－２Ｒβリガンド、本発明によるＩＬ－２Ｒγｃリガンド、本発明によるＩＬ－２ＲβγｃリガンドＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物、または本発明によるＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物をコードする。
本明細書に記載される図面は、例示のみを目的としている。図面は、本開示の範囲を限定することを意図しない。
ＩＬ－２ＲβリガンドおよびＩＬ－２Ｒγｃリガンドの異なるＣ／Ｎ配向を有するＩＬ－２Ｒβγｃリガンドの例を示す。 異なるＣ／Ｎ配向および異なるリガンドリンカー長を有する異なるＩＬ－２ＲβおよびＩＬ－２Ｒγｃリガンドを有する様々なＩＬ－２Ｒβγｃリガンドに曝露されたＴＦ－１β細胞におけるＳＴＡＴ５リン酸化を示す。 Ｃ／Ｃ配向を有し、同じＩＬ－２Ｒβγｃリガンドリンカーを有する異なるＩＬ－２ＲβおよびＩＬ－２Ｒγｃリガンドを有する様々なＩＬ－２Ｒβγｃリガンドに曝露されたＮＫ－９２細胞におけるＳＴＡＴ５リン酸化を示す。 異なるＣ／Ｎ配向を有する、配列番号８６５（ＢＬ４）を有するＩＬ－２Ｒβリガンドおよび配列番号９６５（ＧＬ２）のＩＬ－２Ｒγｃリガンドを有するＩＬ－２Ｒβγｃリガンドに曝露されたＮＫ－９２細胞におけるＳＴＡＴ５リン酸化を示す。 Ｃ／Ｎ配向を有し、同じＩＬ－２Ｒβγｃリガンドリンカーを有する異なるＩＬ－２ＲβおよびＩＬ－２Ｒγｃリガンドを有するＩＬ－２Ｒβγｃリガンドに曝露されたＴＦ－１β細胞におけるＳＴＡＴ５リン酸化を示す。図５Ａにおいて、ＩＬ－２Ｒβリガンドは、（ＢＬ４）（配列番号８６５）であり、異なるＩＬ－２Ｒγｃリガンドに結合される。図５Ｂにおいて、ＩＬ－２Ｒγｃリガンドは、（ＧＬ２）（配列番号９６５）であり、異なるＩＬ－２Ｒβリガンドに結合される。 配列番号８６５（ＢＬ４）を有するＩＬ－２Ｒβリガンドおよび配列番号９６５（ＧＬ２）のＩＬ－２Ｒγｃリガンドを有し、－ＧＧＧＧＳ－（Ｇ４Ｓ）（配列番号９３９５）アミノ酸リンカー（ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド（ＢＧＬ２１））またはクリックケミストリー由来トリアゾール含有リンカー（ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド（ＢＧＬ２０））のいずれかを有するＩＬ－２Ｒβγｃリガンドに曝露されたＮＫ－９２細胞におけるＳＴＡＴ５リン酸化を示す。 ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド（ＢＧＬ２１）またはＩＬ－２のいずれかへの曝露後の、ＮＫ－９２細胞におけるＳＴＡＴ５リン酸化、ＮＫ－９２細胞におけるＡＫＴリン酸化、およびＮＫ－９２細胞におけるＥＲＫ１／２リン酸化をそれぞれ示す。 ＩＬ－２またはＩＬ－２Ｒβγｃリガンド（ＢＧＬ２１）のいずれかへの曝露後のＮＫ－９２細胞の増殖を、それぞれ、生存細胞数またはＫｉ－６７＋細胞％の観点から示す。 ＩＬ－２またはＩＬ－２Ｒβγｃリガンド（ＢＧＬ２１）のいずれかへの曝露後の、静止ＣＤ８＋Ｔ細胞、Ｔｒｅｇ細胞、またはＣＤ４＋Ｔ細胞におけるＳＴＡＴ５リン酸化をそれぞれ示す。 ＩＬ－２またはＩＬ－２Ｒβγｃリガンド（ＢＧＬ２１）のいずれかへの曝露後のＮＫ－９２細胞の増殖を、それぞれ、Ｋｉ－６７＋細胞％および蛍光強度中央値の観点から示す。 ＰＢＭＣ、およびＩＬ－２またはＩＬ－２Ｒβγｃリガンド（ＢＧＬ２１）のいずれかとの共培養後の、Ａ５４９腫瘍細胞におけるＰＤ－Ｌ１発現の上方制御を示す。 ＰＢＭＣ、およびＩＬ－２またはＩＬ－２Ｒβγｃリガンド（ＢＧＬ２１）のいずれかとの共培養後の、ＬＳ１８０細胞における細胞傷害性％、およびＣＯＬＯ２０５細胞における細胞傷害性％をそれぞれ示す。 ＩＬ－２または様々なＩＬ－２Ｒβγｃリガンド（ＢＧＬ２１）融合タンパク質への曝露後のＴＦ－１β細胞におけるＳＴＡＴ５リン酸化を示す。 ＩＬ－２または異なるＩＬ－２Ｒβγｃリガンドを有する様々なＩＬ－２Ｒβγｃリガンド－Ｆｃ融合タンパク質への曝露後のＴＦ－１β細胞におけるＳＴＡＴ５リン酸化を示す。 異なるＩｇＧアイソタイプに由来する様々なＩＬ－２Ｒβγｃリガンド（ＢＧＬ２１）－Ｆｃ融合タンパク質への曝露後のＴＦ－１β細胞におけるＳＴＡＴ５リン酸化を示す。 異なるＦｃリンカーを有するＩＬ－２Ｒβγｃリガンド（ＢＧＬ２１）－Ｆｃ融合タンパク質への曝露後のＴＦ－１β細胞におけるＳＴＡＴ５リン酸化を示す。 異なるＦｃリンカーを有するＩＬ－２Ｒβγｃリガンド（ＢＧＬ２１）またはＩＬ－２Ｒβγｃリガンド（ＢＧＬ２１）－Ｆｃ融合タンパク質への曝露後のＴＦ－１β細胞におけるＳＴＡＴ５リン酸化（図１６Ａ）またはＮＫ－９２細胞におけるＫｉ－６７活性％（図１６Ｂ）を示す。 抗ＰＤ－１抗体（ペムブロリズマブまたはセミプリマブ）、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド（ＢＧＬ２１）－Ｆｃ融合タンパク質（ＦＰ１）（配列番号１２１２）、またはＩＬ－２Ｒβγｃリガンド（ＢＧＬ２１）－抗ＰＤ－１抗体（ＦＰ８）（配列番号１２１９）および（ＦＰ１０）（配列番号１２２１）への曝露後のＴＦ－１β細胞におけるＳＴＡＴ５リン酸化（図１７Ｂおよび１７Ｄ）によって決定されるＰＤ－１結合親和性（図１７Ａおよび１７Ｃ）およびＩＬ－２Ｒアゴニスト活性を示す。 ＩＬ－２、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド（ＢＧＬ２１）、またはＰＥＧ化ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド（ＢＧＬ２１）への曝露後のＮＫ－９２細胞におけるＳＴＡＴ５リン酸化を示す。 本開示によって提供される特定のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドについてのアミノ酸配列およびリンカー構造を示す。図１９Ａ～１９Ｃに示すように、ＩＬ－２Ｒβリガンドは、リンカー構造（Ｌ）を介してＩＬ－２Ｒγｃリガンドに結合される。例えば、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド（ＢＧＬ１）において、配列番号５８を有するＩＬ－２ＲβリガンドのＣ末端は、構造（Ｌ２）を有するリンカーを介して配列番号２２４を有するＩＬ－２ＲγｃリガンドのＣ末端に結合される。記載されるように、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド（ＢＧＬ１）は、配列番号５８を有するＩＬ－２Ｒβリガンドを、Ｎ末端上のＨ２Ｎ－基およびＣ末端上のアルキン部分（ＡＬ１）と、配列番号２２４を有するＩＬ－２Ｒγｃリガンドを、Ｎ末端上のＨ２Ｎ－基およびＣ末端上のアジド部分（ＡＺ１）と反応させることによって合成される。 本開示によって提供される特定のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド融合タンパク質についてのアミノ酸配列を示す。 図２０Ａ～２０Ｊに提供されるＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物についてのサブ構造の概要を提供する。図２１Ａ～Ｃは、（Ｇ４Ｓ） ２ を配列番号９３９６として、（Ｇ４Ｓ） ３ を配列番号９３９７として、（ＧＳ） １０ を配列番号９４０７として、（ＰＡ） １０ を配列番号９４２８として、（Ｇ４Ｓ） １ を配列番号９３９５として、（ＧＧＳ） １ を配列番号９４０２として、（Ｇ４Ｓ） ４ を配列番号９３９８として、（Ｇ） ２ を配列番号９３９９として、（Ｇ） ５ を配列番号９４０１として、（ＰＡ） ５ を配列番号９４２６として、また（ＰＡ） ７ を配列番号９４２７として開示する。 本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃリガンドｆｃ断片融合タンパク質の様々な構成の例を示す。 本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃリガンド免疫グロブリン融合タンパク質の様々な構成の例を示す。 ｐＨ６．０およびｐＨ７．５でのｐＨバイアスＩＬ－２Ｒβγｃリガンドへの曝露後のＮＫ－９２細胞におけるＳＴＡＴ５リン酸化を示す。 ｐＨ６．０およびｐＨ７．４でのｐＨバイアスＩＬ－２Ｒβγｃリガンドの、ＩＬ－２Ｒβサブユニットへの競合的結合のための正規化されたＥＬＩＳＡシグナルを示す。 マウスへの投与後のＰＥＧ－ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物（ＰＥＧ－１）のＰＫプロファイルを示す。 それぞれ、ＰＥＧ－ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物ＰＥＧ－１～ＰＥＧ－７の例を示す。ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、配列番号１２６３を有する。
２つの文字または記号の間にないダッシュ（「－」）は、部分または置換基の結合点を示すために使用される。例えば、－ＣＯＮＨ２は炭素原子を通して結合され、－Ｘ１－Ｘ２－は、単結合を通して共有結合したアミノ酸Ｘ１およびＸ２を示す。
「アルキル」は、親アルカン、アルケン、またはアルキンの単一炭素原子から１つの水素原子を除去することによって誘導される飽和の、分枝鎖状または直鎖状の、一価炭化水素ラジカルを指す。アルキル基の例としては、メチル、エタニル、エテニル、およびエチニルなどのエチル、プロパン－１－イル、プロパン－２－イル、プロパ－１－エン－１－イル、プロパ－１－エン－２－イル、プロパ－２－エン－１－イル（アリル）、プロパ－１－イン－１－イル、プロパ－２－イン－１－イルなどのプロピル、ブタン－１－イル、ブタン－２－イル、２－メチルプロパン－１－イル、２－メチルプロパン－２－イル、ブタ－１－エン－１－イル、ブタ－１－エン－２－イル、２－メチル－プロパ－１－エン－１－イル、ブタ－２－エン－１－イル、ブタ－２－エン－２－イル、ブタ－１，３－ジエン－１－イル、ブタ－１，３－ジエン－２－イル、ブタ－１－イン－１－イル、ブタ－１－イン－３－イル、ブタ－３－イン－１－イルなどのブチルなどが挙げられる。「アルキル」という用語は、任意の飽和度またはレベルを有する基、すなわち、排他的に炭素－炭素単結合を有する基、１つ以上の炭素－炭素二重結合を有する基、１つ以上の炭素－炭素三重結合を有する基、ならびに炭素－炭素単結合、二重結合、および三重結合の組み合わせを有する基を含むことが特に意図される。特定の飽和レベルが意図される場合、アルカニル、アルケニル、およびアルキニルという用語が使用される。ある特定の実施形態では、アルキル基は、Ｃ１－６アルキル、Ｃ１－５アルキル、Ｃ１－４アルキル、Ｃ１－３アルキルであり、ある特定の実施形態では、エチルまたはメチルである。
「シクロアルキル」は、飽和または部分的に不飽和の環状アルキルラジカルを指す。ある特定の実施形態では、シクロアルキル基は、Ｃ３－６シクロアルキル、Ｃ３－５シクロアルキル、Ｃ５－６シクロアルキル、シクロプロピル、シクロペンチルであり、ある特定の実施形態では、シクロヘキシルである。ある特定の実施形態では、シクロアルキルは、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、およびシクロヘキシルから選択される。
「ヘテロシクロアルキル」自体または別の置換基の一部としては、１つ以上の炭素原子（および特定の結合した水素原子）が独立して同じもしくは異なるヘテロ原子で置き換えられる飽和もしくは不飽和環状アルキルラジカルを指すか、または１つ以上の炭素原子（および特定の結合した水素原子）が独立して同じもしくは異なるヘテロ原子で置き換えられ、その環系がハッケル規則に違反する親芳香族環系を指す。炭素原子を置き換えるためのヘテロ原子の例としては、Ｎ、Ｐ、Ｏ、Ｓ、およびＳｉが挙げられる。ヘテロシクロアルキル基の例は、エポキシド、アジリン、チイラン、イミダゾリジン、モルホリン、ピペラジン、ピペリジン、ピラゾリジン、ピロリジン、キヌクリジンなどに由来する基を含む。ある特定の実施形態では、ヘテロシクロアルキルは、Ｃ５ヘテロシクロアルキルであり、ピロリジニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチオフェニル、イミダゾリジニル、オキサゾリジニル、チアゾリジニル、ドキソラニル、およびジチオラニルから選択される。ある特定の実施形態では、ヘテロシクロアルキルは、Ｃ６ヘテロシクロアルキルであり、ピペリジニル、テトラヒドロピラニル、ピペリジニル、オキサジニル、ジチアニル、およびジオキサニルから選択される。ヘテロシクロアルキル基は、Ｃ３－６ヘテロシクロアルキル、Ｃ３－５ヘテロシクロアルキル、Ｃ５－６ヘテロシクロアルキルであり得、ある特定の実施形態では、Ｃ５ヘテロシクロアルキルまたはＣ６ヘテロシクロアルキルであり得る。ヘテロ原子基は、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＮＨ－、－Ｎ（－ＣＨ３）－、－ＳＯ－、および－ＳＯ２－から選択され得、ある特定の実施形態では、ヘテロ原子基は、－Ｏ－および－ＮＨ－から選択され、ある特定の実施形態では、ヘテロ原子基は、－Ｏ－または－ＮＨ－である。
「結合親和性」は、単一の生体分子と、そのリガンド／結合パートナーとの間の結合相互作用の強度を指す。親和性はＩＣ５０として表される。
「アゴニスト」は、その相補的な生物学的に活性な受容体もしくはサブユニットに結合し、受容体によって媒介される生物学的応答を引き起こすか、または受容体によって媒介される既存の生物活性を増強するために受容体を活性化する生物学的に活性なリガンドを指す。
「部分的アゴニスト」は、例えば、最大活性化の７５％未満、最大活性化の５０％未満、２５％未満、１０％未満、または１％未満である活性化のレベルを提供する化合物を指す。部分的ＩＬ－２Ｒアゴニストは、ＩＬ－２によって提供される活性化のレベルよりも低い活性化のレベルを示す。例えば、部分的ＩＬ－２Ｒアゴニストは、ＩＬ－２によって提供される活性化のレベル未満の活性化レベルを示し、部分的ＩＬ－２Ｒアゴニストは、ＩＬ－２によって提供される活性化のレベル未満の活性化のレベルを示す。
「アンタゴニスト」は、その相補的受容体またはサブユニットに結合し、受容体の生物学的応答を遮断または低減する生物学的に活性なリガンドまたは化合物を指す。例えば、ＩＬ－２Ｒアンタゴニストは、ＩＬ－２Ｒに１００μＭ未満のＩＣ５０で結合し、例えば、実施例に開示される機能アッセイのうちのいずれかを使用して決定して、ＩＬ－２の機能活性を阻害する。例えば、ＩＬ－２Ｒアンタゴニストは、ＩＬ－２Ｒに１００μＭ未満のＩＣ５０で結合し、例えば、実施例に開示される機能アッセイのうちのいずれかを使用して決定して、ＩＬ－２の機能活性を阻害する。
アミノ酸残基は、以下のように略される：アラニンはＡｌａまたはＡであり、アルギニンはＡｒｇまたはＲであり、アスパラギンはＡｓｎまたはＮであり、アスパラギン酸はＡｓｐまたはＤであり、システインはＣｙｓまたはＣであり、グルタミン酸はＧｌｕまたはＥであり、グルタミンはＧｌｎまたはＱであり、グリシンはＧｌｙまたはＧであり、ヒスチジンはＨｉｓまたはＨであり、イソロイシンはＩｌｅまたはＩであり、ロイシンはＬｅｕまたはＬであり、リジンはＬｙｓまたはＫであり、メチオニンはＭｅｔまたはＭであり、フェニルアラニンはＰｈｅまたはＦであり、プロリンはＰｒｏまたはＰであり、セリンはＳｅｒまたはＳであり、スレオニンはＴｈｒまたはＴであり、トリプトファンはＴｒｐまたはＷであり、チロシンはＴｙｒまたはＹであり、バリンはＶａｌまたはＶである。
「非天然アミノ酸」としては、例えば、β－アミノ酸、ホモ－アミノ酸、プロリンおよびピルビン酸誘導体、イミダゾール環に結合したアルキルまたはヘテロ原子部分を有するヒスチジン誘導体、ピリジン含有側鎖を有するアミノ酸、３置換アラニン誘導体、グリシン誘導体、環置換フェニルアラニンおよびチロシン誘導体、ならびにＮ－メチルアミノ酸が挙げられる。
大きな疎水性側鎖を有するアミノ酸には、イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、バリン（Ｖ）、フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、およびトリプトファン（Ｗ）が挙げられる。
小さな疎水性側鎖を有するアミノ酸には、アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、プロリン（Ｐ）、セリン（Ｓ）、およびトレオニン（Ｔ）が挙げられる。
塩基性側鎖を有するアミノ酸としては、アルギニン（Ｒ）、リジン（Ｋ）、およびヒスチジン（Ｈ）が挙げられる。
酸性側鎖を有するアミノ酸としては、アスパラギン酸（Ｄ）およびグルタミン酸（Ｅ）が挙げられる。
極性／中性側鎖を有するアミノ酸には、ヒスチジン（Ｈ）、アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、およびチロシン（Ｙ）が挙げられる。
芳香族側鎖を有するアミノ酸としては、フェニルアラニン（Ｆ）、ヒスチジン（Ｈ）、トリプトファン（Ｗ）、およびチロシン（Ｙ）が挙げられる。
ヒドロキシル側鎖を有するアミノ酸には、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、およびチロシン（Ｙ）が挙げられる。
「保存的アミノ酸置換」とは、以下の基のそれぞれのアミノ酸が、群内の別のアミノ酸で置換され得ることを意味する：アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、プロリン（Ｐ）、セリン（Ｓ）、およびトレオニン（Ｔ）を含む小さな疎水性側鎖を有するアミノ酸；セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、およびチロシン（Ｙ）を含むヒドロキシル含有側鎖を有するアミノ酸；アスパラギン酸（Ｄ）およびグルタミン酸（Ｅ）を含む酸性側鎖を有するアミノ酸；ヒスチジン（Ｈ）、アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、およびチロシン（Ｙ）を含む極性中性側鎖を含むアミノ酸；アルギニン（Ｒ）、リジン（Ｋ）、およびヒスチジン（Ｈ）を含む塩基性側鎖を有するアミノ酸；イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、バリン（Ｖ）、フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）およびトリプトファン（Ｗ）を含む大きな疎水性側鎖を有するアミノ酸；ならびにフェニルアラニン（Ｆ）、ヒスチジン（Ｈ）、トリプトファン（Ｗ）、およびチロシン（Ｙ）を含む芳香族側鎖を有するアミノ酸。
「ＰＥＧ」、「ポリエチレングリコール」、および「ポリ（エチレングリコール）」は、任意の好適な非ペプチド性水溶性ポリ（エチレンオキシド）を指す。ＰＥＧは、構造－（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ－を含み得、式中、ｎは、例えば、１～４，０００の整数である。ＰＥＧは、末端酸素が、例えば、合成変換中に置換されたか否かに応じて、－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ－ＣＨ２ＣＨ２－および／または－（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎＯ－などの部分も含むことができる。ＰＥＧは、好適な末端基でキャップ形成することができる。ＰＥＧの反復サブユニットの少なくとも５０％は、構造－ＣＨ２ＣＨ２－を有することができる。ＰＥＧは、分枝鎖状、直鎖状、フォーク状、または多官能性などの任意の好適な分子量、構造、および／または幾何学形状を有することができる。
「生理学的に切断可能な」または「加水分解可能な」または「分解可能な」結合は、生理学的条件下で水と反応する（すなわち、加水分解される）結合である。水中で加水分解する結合の傾向は、２つの中心原子を連結する結合の一般的な種類だけでなく、これらの中心原子に結合する置換基にも依存するであろう。好適な加水分解不安定または弱い結合として、カルボキシレートエステル、リン酸エステル、無水物、アセタール、ケタール、アシルオキシアルキルエーテル、イミン、オルトエステル、ペプチド、およびオリゴヌクレオチドが挙げられる。
「酵素分解性結合」は、１つ以上の酵素によって分解または切断され得る化学結合を指す。
「加水分解的に安定な」結合または結合は、化学結合が生理学的条件下で任意の顕著な程度で長期間にわたって加水分解を受けないように、水中で実質的に安定している共有結合などの化学結合を指す。加水分解的に安定な結合の例には、以下が含まれるが、これらに限定されない：炭素－炭素結合（例えば、脂肪族鎖中）、エーテル、アミド、ウレタンなど。一般に、加水分解的に安定な結合は、生理学的条件下で１日当たり約１％～２％未満の加水分解速度を示す結合である。
「ＩＬ－２Ｒαリガンド」は、１００μＭ未満のＩＣ５０で、ヒトＩＬ－２受容体などの哺乳動物ＩＬ－２受容体のＩＬ－２Ｒαサブユニットに結合することができるペプチドを指す。
「ＩＬ－２Ｒβリガンド」は、１００μＭ未満のＩＣ５０で、ヒトＩＬ－２受容体などの哺乳動物ＩＬ－２受容体のＩＬ－２Ｒβサブユニットに結合することができるペプチドを指す。
「ＩＬ－２Ｒβリガンド」または「本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβリガンド」は、例えば、配列番号８０５～９０３、９１１～９３０、２５７５～２６５５、２６６１～２８９１、２９００～２９８６、および２９８９～２９３９のうちのいずれか１つのアミノ酸配列、配列番号８０５～９０３、９１１～９３０、２５７５～２６５５、２６６１～２８９１、２９００～２９８６、および２９８９～２９３９に基づく切断アミノ酸配列、配列番号８０５～９０３、９１１～９３０、２５７５～２６５５、２６６１～２８９１、２９００～２９８６、および２９８９～２９３９を有するアミノ酸配列、ならびに隣接アミノ酸、１つ以上の保存もしくは非保存的アミノ酸置換を有する配列番号８０５～９０３、９１１～９３０、２５７５～２６５５、２６６１～２８９１、２９００～２９８６、および２９８９～２９３９に基づくアミノ酸配列、配列番号８０５～９０３、９１１～９３０、２５７５～２６５５、２６６１～２８９１、２９００～２９８６、および２９８９～２９３９を有する１つ以上のアミノ酸配列を組み込んでいる化合物、または前述のうちのいずれかの組み合わせを含む。
「ＩＬ－２Ｒγｃリガンド」は、１００μＭ未満のＩＣ５０で、ヒトＩＬ－２受容体などの哺乳動物ＩＬ－２受容体のＩＬ－２Ｒγｃサブユニットに結合することができるペプチドを指す。
「ＩＬ－２Ｒγｃリガンド」または「本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒγｃリガンド」は、例えば、配列番号９４４～１０２８、１０３２～１０６０、および１６０１～１６１３のうちのいずれか１つのアミノ酸配列、配列番号９４４～１０２８、１０３２～１０６０、および１６０１～１６１３に基づく切断アミノ酸配列、配列番号９４４～１０２８、１０３２～１０６０、および１６０１～１６１３ならびに隣接アミノ酸を有するアミノ酸配列、１つ以上の保存もしくは非保存的アミノ酸置換を有する配列番号９４４～１０２８、１０３２～１０６０、および１６０１～１６１３に基づくアミノ酸配列、配列番号９４４～１０２８、１０３２～１０６０、および１６０１～１６１３を有する１つ以上のアミノ酸配列を組み込んでいる化合物、または前述のうちのいずれかの組み合わせを有するペプチドを含む。
「ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド」または本開示により提供されるＩＬ－２Ｒβγｃリガンド」は、例えば、本開示により提供される少なくとも１つのＩＬ－２Ｒβリガンドおよび本開示により提供される少なくとも１つのＩＬ－２Ｒγｃリガンドを含む。
配列番号を有するアミノ酸配列を含むリガンドは、配列番号によって識別されたアミノ酸配列、配列番号に基づく切断アミノ酸配列、配列番号および隣接アミノ酸を有するアミノ酸配列、１つ以上の保存または非保存的アミノ酸置換を有する配列番号に基づくアミノ酸配列、配列番号を有する１つ以上のアミノ酸配列を組み込んでいる化合物、または前述のうちのいずれかの組み合わせを指す。
「ｈＩＬ－２Ｒβサブユニット」は、ヒト（ホモサピエンス）インターロイキン－２受容体サブユニットβ前駆体ＮＣＢＩ参照配列ＮＰ＿０００６８９．１を指す。
「ｈＩＬ－２Ｒγｃサブユニット」は、ヒト（ホモサピエンス）インターロイキン－２受容体サブユニットγ前駆体ＮＣＢＩ参照配列ＮＰ＿０００１９７．１を指す。
「ｃｙａｎｏ－ＩＬ－２Ｒβサブユニット」は、カニクイザルインターロイキン－２受容体サブユニットβ前駆体ＮＣＢＩ参照配列ＮＰ＿００１２４４９８９．１を指す。
「ｃｙａｎｏ－ＩＬ－２Ｒγｃサブユニット」は、カニクイザルインターロイキン－２受容体サブユニットα前駆体ＮＣＢＩ参照配列ＸＰ＿００５５９３９４９を指す。
組換え「リガンド融合タンパク質」は、哺乳動物ＩＬ－２受容体のリガンドの翻訳リーディングフレームが、別のタンパク質、すなわち、ＩＬ－２Ｒリガンド融合パートナーのものに融合されて、単一の組換えポリペプチドを産生する、組換えＤＮＡ技術によって作製されたタンパク質を指す。リガンド融合タンパク質は、ＩＬ－２ＲβリガンドおよびＩＬ－２Ｒγｃリガンド、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド、ならびに／またはタンデムＩＬ－２Ｒβγｃリガンドを含み得る。融合パートナーは、ＩＬ－２ＲβγｃリガンドがＦｃ構造の２つのＣ末端に結合している、ＩｇＧ分子のＦｃドメインであり得る。リガンド融合タンパク質は、ＩＬ－２Ｒリガンドと、融合タンパク質を含む融合タンパク質パートナーとの間に位置するアミノ酸配列などのペプチジルリンカーを含み得、その結果、ペプチジルリンカーアミノ酸配列は、ＩＬ－２Ｒリガンドまたは融合タンパク質パートナーのいずれにも由来しない。ペプチジルリンカーは、スペーサーとして融合タンパク質に組み込まれ、コンポーネントタンパク質部分の適切なタンパク質フォールディングおよび安定性を促進し、タンパク質発現を改善し、および／または２つの融合パートナーのより良い生物活性を可能にすることができる。ペプチジルリンカーは、例えば、可撓性ペプチドまたは剛性ペプチドを含み得る。
「ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド」は、１つ以上のＩＬ－２Ｒβリガンドおよび１つ以上のＩＬ－２Ｒγｃリガンドからなるか、またはそれらを含む化合物を指す。１つ以上のＩＬ－２Ｒβリガンドおよび１つ以上のＩＬ－２Ｒγｃリガンドは、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドリンカーに結合することができる。ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、２つ以上のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドを含むタンデムＩＬ－２Ｒβγｃリガンドを含むことができるか、またはそれは、ＩＬ－２ＲβサブユニットおよびＩＬ－２Ｒγｃサブユニットの両方に同時に結合する単一のリガンドを含むことができる。ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、ＩＬ－２ＲβサブユニットおよびＩＬ－２ＲのＩＬ－２Ｒγｃサブユニットに、１００μＭ未満のＩＣ５０で結合することができる。
「ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物」は、構築パートナーに結合した１つ以上のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドを含む化合物を指す。ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物はまた、１つ以上のＩＬ－２Ｒβリガンドおよび１つ以上のＩＬ－２Ｒγｃリガンドが構築パートナーに結合している化合物を含む。
「ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物」は、ＩＬ－２ＲβおよびＩＬ－２Ｒγｃサブユニットの両方に結合することができる化合物を指し、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド、タンデムＩＬ－２Ｒβγｃリガンド、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物、ならびにＩＬ－２ＲβリガンドおよびＩＬ－２Ｒγｃリガンドを含む構築物を含む。ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物は、ＩＬ－２ＲβサブユニットおよびＩＬ－２Ｒγｃサブユニットの両方に、例えば、１０μＭ未満、１μＭ未満、または０．１μＭ未満などの１００μＭ未満のＩＣ５０で結合することができる。
バイオアイソスターは、アイソスターの最も広範な定義に適合する原子または分子である。バイオイソステリズムの概念は、化学的および物理的類似性を有する単一原子、基、部分、または全分子が同様の生物学的効果を生じるという概念に基づく。親化合物のバイオアイソスターは、依然としてその適切な標的によって認識および受容され得るが、その機能は、親分子と比較して改変される。バイオアイソステリック置換によって影響を受けるパラメータには、例えば、サイズ、立体構造、誘導および中量体効果、偏光性、静電相互作用能力、電荷分布、Ｈ結合形成能力、ｐＫａ（酸性）、溶解性、疎水性、親油性、親水性、極性、効力、選択性、反応性、または化学的および代謝的安定性、ＡＤＭＥ（吸収、分布、代謝、および***）が含まれる。医薬品において一般的であるが、親分子中のカルボキシル基またはカルボン酸官能基（－ＣＯ２Ｈ）は、１つ以上のカルボキシル基またはカルボン酸官能基（－ＣＯ２Ｈ）を有する親分子の所望の特質を保持しながら、化学的または生物学的欠点を克服するために好適な代替物または（バイオ）アイソスターに置き換えることができる。ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃリガンドのバイオアイソスターを含む。
「アイソスター」または「アイソスター置換」は、特定のアミノ酸と同様の生化学的および／または構造的特性を有する任意のアミノ酸または他の類似部分を指す。アミノ酸の「アイソスター」または「好適なアイソスター」は、同じクラスの別のアミノ酸であり、アミノ酸は、水のように極性溶媒と接触する側鎖の傾向に基づいて、以下のクラスに属する：疎水性（水と接触する傾向が低い）、極性または荷電性（水とのエネルギー的に良好な接触）。荷電アミノ酸残基の例としては、リジン（＋）、アルギニン（＋）、アスパラギン酸（－）、およびグルタミン酸（－）が挙げられる。極性アミノ酸の例としては、セリン、トレオニン、アスパラギン、グルタミン、ヒスチジン、およびチロシンが挙げられる。例示的な疎水性アミノ酸としては、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、システイン、およびメチオニンが挙げられる。アミノ酸グリシンは側鎖を有さず、上記クラスの１つに割り当てることが困難である。しかしながら、グリシンはしばしばタンパク質の表面、しばしばループ内に見出され、これらの領域に高い柔軟性を提供し、アイソスターは同様の特徴を有し得る。プロリンは反対の効果を有し、ポリペプチド鎖のセグメントに特定のねじれ角を加えることによって、タンパク質構造に剛性を提供する。アイソスターは、アミノ酸の誘導体、例えば、参照アミノ酸と比較して１つ以上の修飾側鎖を有する誘導体であり得る。ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃリガンドのアイソスターを含む
「環化」とは、ペプチドまたはポリペプチド分子の１つの部分がペプチドまたはポリペプチド分子の別の部分に連結され、例えば、ジスルフィド架橋または他の類似の結合、例えば、ラクタム結合を形成することによって閉鎖環を形成する反応を指す。特定の実施形態では、本明細書に記載のペプチド単量体化合物またはペプチド二量体化合物の単量体サブユニットは、ペプチド単量体または単量体サブユニットに存在する２つのアミノ酸残基間の分子内結合を介して環化される。ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドなどのペプチドは、ジスルフィド結合を介して一緒に結合され、それによって、環化されたＩＬ－２Ｒβγｃリガンドであるシステインを含むことができる。
「患者」は、哺乳動物、例えば、ヒトを指す。
「ペプチド」は、単量体がアミド結合を介して一緒に結合したアミノ酸を含むポリマーを指す。ペプチドは、例えば、２００個未満のアミノ酸、１００個未満のアミノ酸、５０個未満のアミノ酸、４０個未満のアミノ酸、３０個未満のアミノ酸、または２０個未満のアミノ酸を含むことができる。ペプチドは、天然に存在するアミノ酸、天然に存在しないアミノ酸、またはそれらの組み合わせを含むことができる。
天然に存在するアミノ酸のみからなるペプチドに加えて、ペプチド模倣体またはペプチド類似体も提供される。治療上有用なペプチドと構造的に類似したペプチド模倣体を使用して、同等または増強された治療または予防効果をもたらし得る。一般に、ペプチド模倣体は、当該技術分野で既知の方法によって、パラダイムペプチド、例えば、天然に存在する受容体結合ペプチドなどの生物学的または薬理学的活性を有するが、任意選択で－ＣＨ２－ＮＨ－、－ＣＨ２－Ｓ－、－ＣＨ２－ＣＨ２－、－ＣＨ＝ＣＨ－（シスおよびトランス）、－ＣＯＣＨ２－、－ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２－、および－ＣＨ２ＳＯ－などの結合によって置き換えられる１つ以上のペプチド結合を有するペプチドと構造的に類似する。
コンセンサス配列の１つ以上のアミノ酸の、Ｌ－リジンの代わりにＤ－リジンなどの同じ種類のＤ－アミノ酸での置換は、より安定したペプチドを生成するために使用され得る。加えて、コンセンサス配列または実質的に同一のコンセンサス配列変異を含む拘束ペプチドは、当該技術分野で既知の方法によって、例えば、ペプチドを環化する分子内ジスルフィド架橋を形成することができる内部システイン残基を付加することによって生成され得る。
合成または天然に存在しないアミノ酸とは、インビボでは天然には存在しないが、それでも本開示によって提供されるペプチドリガンドに組み込むことができるアミノ酸を指す。合成アミノ酸の好適な例としては、天然に存在するＬ－α－アミノ酸のＤ－α－アミノ酸、ならびに式Ｈ２ＮＣＨＲ５ＣＯＯＨで表される天然に存在しないＤ－およびＬ－α－アミノ酸が挙げられ、式中、Ｒ５は、Ｃ１－６アルキル、Ｃ３－８シクロアルキル、Ｃ３－８ヘテロシクロアルキル；ヒドロキシル、低級アルコキシ、アミノ、およびカルボキシルから選択される芳香族核上に１～３個の置換基を任意に有する６～１０個の炭素原子の芳香族残基；－アルキレン－Ｙ（式中、アルキレンは１～７個の炭素原子のアルキレン基であり、Ｙはヒドロキシル、アミノ、シクロアルキル、および３～７個の炭素原子を有するシクロアルケニルから選択される）；ヒドロキシル、低級アルコキシ、アミノおよびカルボキシルから選択される芳香族核上の１～３個の置換基などの６～１０個の炭素原子のアリール；３～７個の炭素原子ならびに酸素、硫黄、および窒素から選択される１～２個のヘテロ原子の複素環式；－Ｃ（Ｏ）Ｒ２（式中、Ｒ２が水素、ヒドロキシ、低級アルキル、低級アルコキシ、および－ＮＲ３Ｒ４から選択され、式中、Ｒ３およびＲ４のそれぞれが、独立して、水素および低級アルキルから選択される）；－Ｓ（Ｏ）ｎＲ６（式中、ｎは１または２であり、Ｒ６はＣ１－６アルキルであり、但し、Ｒ６は天然に存在するアミノ酸の側鎖を定義しない）である。
他の合成アミノ酸の例としては、アミノ酸が挙げられ、アミノ基は、β－アラニンおよびγ－アミノ酪酸などの１つを超える炭素原子によってカルボキシル基から分離される。
好適な合成アミノ酸の例としては、天然に存在するＬ－アミノ酸のＤ－アミノ酸、Ｌ－１－ナフチル－アラニン、Ｌ－２－ナフチルアラニン、Ｌ－シクロヘキシルアラニン、Ｌ－２－アミノイソ酪酸、メチオニンのスルホキシドおよびスルホン誘導体、すなわち、ＨＯＯＣ－（Ｈ２ＮＣＨ）ＣＨ２ＣＨ２－Ｓ（Ｏ）ｎＲ（式中、ｎおよびＲは上で定義されるとおりである）、ならびにメチオニンの低級アルコキシ誘導体、すなわち、ＨＯＯＣ－（Ｈ２ＮＣＨ）ＣＨ２ＣＨ２ＯＲ（式中、Ｒは上で定義されるとおりである）が挙げられる。
「Ｎ末端」は、カルボキシル酸基を有するカルボキシル末端とは対照的に、アミノ基を有する、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物、ＩＬ－２Ｒβリガンド、またはＩＬ－２ＲγｃリガンドのＮ末端などの、ペプチドまたはポリペプチドの末端を指す。
「Ｃ末端」は、アミノ基を有するアミノ末端とは対照的に、カルボン酸基を有する、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物、ＩＬ－２Ｒβリガンド、またはＩＬ－２ＲγｃリガンドのＣ末端などの、ペプチドまたはポリペプチドの末端を指す。ある特定の合成ペプチドにおいて、Ｎ末端はアミノ基を有さず、かつ／またはＣ末端はカルボキシル基を有しない。このような場合、命名法は、ペプチド骨格の方向を指す。
「薬学的に許容される」とは、動物、より具体的にはヒトにおいて使用するために、連邦または州政府の規制当局によって承認または承認されたもの、または米国薬局方または他の一般に認められている薬局方に列挙されたものを指す。
「薬学的に許容される塩」は、親化合物の所望の薬理活性を有する化合物の塩を指す。そのような塩には、無機酸、ならびに親化合物内の一級、二級、または三級アミンなどの１つ以上のプロトン化可能な官能基で形成される酸付加塩が含まれる。無機酸の例としては、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、およびリン酸が挙げられる。塩は、有機酸、例えば、酢酸、プロピオン酸、ヘキサン酸、シクロペンタンプロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、乳酸、マロン酸、コハク酸、リンゴ酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、３－（４－ヒドロキシベンゾイル）安息香酸、桂皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、１，２－エタンジスルホン酸、２－ヒドロキシエタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、４－クロロベンゼンスルホン酸、２－ナフタレンスルホン酸、４－トルエンスルホン酸、カンファースルホン酸、４－メチルビシクロ［２．２．２］－オクタ－２－エン－１－カルボン酸、グルコヘプトン酸、３－フェニルプロピオン酸、トリメチル酢酸、三級ブチル酢酸、ラウリルスルホン酸、グルコン酸、グルタミン酸、ヒドロキシナフトエ酸、サリチル酸、ステアリン酸、またはムコン酸によって形成され得る。親化合物中に存在する１つ以上の酸性プロトンが、金属イオン、例えば、アルカリ金属イオン、アルカリ土類イオン、もしくはアルミニウムイオン、またはそれらの組み合わせによって置き換えられるとき、またはエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、もしくはＮ－メチルグルカミンなどの有機塩基と配位結合するとき、塩が形成され得る。薬学的に許容される塩は、塩酸塩であり得る。薬学的に許容される塩は、ナトリウム塩であり得る。化合物は、２つ以上のイオン性基を有することができ、薬学的に許容される塩は、二塩（ｂｉ－ｓａｌｔ）、例えば、二塩酸塩などの１つ以上の対イオンを含むことができる。
「薬学的に許容される塩」は、水和物および他の溶媒和物、ならびに結晶形態または非結晶形態の塩を含む。特定の薬学的に許容される塩が開示される場合、特定の塩（例えば、塩酸塩）は塩の一例であり、当業者に知られている技法を用いて他の塩が形成され得ることを理解されたい。加えて、当該技術分野で一般に周知の技術を使用して、対応する化合物、遊離塩基および／または遊離酸に薬学的に許容される塩。また、Ｓｔａｈｌ ａｎｄ Ｗｅｒｍｕｔｈ，Ｃ．Ｇ．（Ｅｄｉｔｏｒｓ），Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ，Ｗｉｌｅｙ－ＶＣＨ，Ｗｅｉｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ，２００８を参照されたい。
「薬学的に許容されるビヒクル」とは、薬学的に許容される希釈剤、薬学的に許容されるアジュバント、薬学的に許容される賦形剤、薬学的に許容される担体、または前述のうちのいずれかの組み合わせを指し、それらとともに、本開示によって提供される化合物を患者に投与することができ、その薬理活性を破壊せず、治療有効量の化合物を提供するのに十分な用量で投与される場合に無毒である。
「溶媒和物」は、化学量論または非化学量論量の１つ以上の溶媒分子を有する化合物の分子複合体を指す。そのような溶媒分子は、医薬品の技術分野一般に使用されるものであり、患者に無害であることが知られている、例えば、水、エタノールなどである。化合物または化合物の部分と溶媒との分子複合体は、例えば、静電力、ファン・デル・ワールス力、または水素結合などの非共有分子内力によって安定化され得る。「水和物」という用語は、１つ以上の溶媒分子が水である溶媒和物を指す。
「医薬組成物」は、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドなどの、本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物またはその薬学的に許容される塩、およびＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物またはその薬学的に許容される塩、およびＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物またはその薬学的に許容される塩とともに患者に投与される少なくとも１つの薬学的に許容されるビヒクルを指す。
「予防すること」または「予防」は、例えば、疾患の臨床症状のうちの少なくとも１つが、疾患にさらされ得るか、または疾患にかかりやすいが、まだ疾患の症状を経験または表示しない患者において発症しないようにすることなどの、疾患または障害を獲得するリスクの低減を指す。いくつかの実施形態では、「予防すること」または「予防」は、化合物を予防的な様式で服用することによって疾患の症状を低減することを指す。
「治療有効量」は、疾患、または疾患の臨床症状のうちの少なくとも１つを治療するために対象に投与されるときに、疾患またはその症状を治療するのに十分な化合物の量を指す。「治療有効量」は、例えば、化合物、疾患および／または疾患の症状、疾患の重症度および／または疾患もしくは障害の症状、治療される患者の年齢、体重、および／または健康、ならびに処方医の判断に応じて変化し得る。任意の所与の事例における適切な量は、当業者によって確認され得るか、または日常的な実験によって決定することができる。
「治療有効用量」は、患者の疾患または障害の有効な治療を提供する用量を指す。治療有効用量は、化合物によって、および患者間で異なり得、患者の状態および送達経路などの因子に依存し得る。治療有効用量は、当業者に周知の日常的な薬理学的手順に従って決定され得る。
疾患の「治療すること」または「治療」は、疾患または疾患もしくは障害の臨床症状の少なくとも１つを停止または緩和すること、疾患もしくは疾患の臨床症状の少なくとも１つを獲得するリスクを低減すること、疾患もしくは疾患の臨床症状の少なくとも１つの発症を低減すること、または疾患もしくは疾患の臨床症状の少なくとも１つを発症するリスクを減少させるかまたは低減することを指す。「治療すること」または「治療」はまた、疾患を物理的に（例えば、識別可能な症状の安定化）、生理学的に（例えば、物理的パラメータの安定化）、またはその両方のいずれかで阻害すること、ならびに患者に識別可能であり得る、または識別不可能であり得る少なくとも１つの物理的パラメータまたは徴候を阻害することを指す。特定の実施形態では、「治療すること」または「治療」とは、その患者がまだ疾患の症状を経験していないか、または示していないにもかかわらず、疾患または障害にさらされ得るかまたはそうなりやすい患者における疾患またはその少なくとも１つ以上の症状の発症を遅らせることを指す。
「Ｔｒｅｇ」または「Ｔｒｅｇ細胞」とは、制御性Ｔ細胞を指す。制御性Ｔ細胞は、他の免疫細胞の活性を抑制するＴ細胞のクラスであり、細胞マーカー表現型ＣＤ４＋／ＣＤ２５＋／ＦＯＸＰ３＋、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｌｏ、またはＣＤ４＋／ＣＤ２５＋／ＦＯＸＰ３＋／ＣＤ１２７ｌｏによってフローサイトメトリーを使用して定義される。ＦＯＸＰ３は細胞内タンパク質であり、染色のために細胞固定および透過を必要とするため、細胞表面表現型ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｌｏ－は、生きたＴｒｅｇを定義するために使用することができる。Ｔｒｅｇには、ｔＴｒｅｇ（胸腺由来）およびｐＴｒｅｇ（末梢由来、末梢におけるナイーブＴ細胞から分化）などの様々なＴｒｅｇサブクラスも含まれる。Ｔｒｅｇは、腫瘍によって発現されるものを含む、抗原に対する末梢自己耐性の誘導および維持に重要な役割を果たす。「ＣＤ４＋Ｔ細胞」は、マクロファージ、Ｂリンパ球（Ｂ細胞）、ＣＤ８リンパ球（ＣＤ８細胞）などの他の免疫細胞を刺激することによって免疫応答を調整して感染と戦うように機能するリンパ球の種類である。ＣＤ４＋Ｔ細胞は、抗原提示細胞上で見出される、ＭＨＣクラスＩＩ分子上で提示されるペプチドを認識する。
ＣＤ４＋Ｔ細胞と同様に、「ＣＤ８＋（細胞傷害性）Ｔ細胞」は胸腺内で生成され、Ｔ細胞受容体を発現する。細胞傷害性Ｔ細胞は、典型的には１つのＣＤ８αおよび１つのＣＤ８β鎖を含む二量体共受容体ＣＤ８を発現する。ＣＤ８＋Ｔ細胞は、ほとんどの核化細胞上に見出されるＭＨＣクラス１分子によって提示されるペプチドを認識する。ＣＤ８ヘテロ二量体は、Ｔ細胞／抗原提示細胞相互作用中にＭＨＣクラス１の保存的部分に結合する。ＣＤ８＋Ｔ細胞（細胞傷害性Ｔリンパ球、またはＣＴＬ）は、ウイルスおよび細菌を含む細胞内病原体に対する免疫防御、ならびに腫瘍監視に重要である。
「ＮＫ（ナチュラルキラー）細胞」は、先天性免疫系のリンパ球であり、グループＩ先天性リンパ球（ＩＬＣ）として分類される。ＮＫ細胞は、ウイルス感染細胞を死滅させること、ならびにがんの初期兆候の検出および制御によることを含む、多様な病理学的課題に応答する。
「細胞の機能的活性化」は、例えば、Ｔ細胞およびＮＫ細胞などの細胞におけるＩＬ－２媒介性応答を指す。細胞の機能的活性化のためのアッセイとしては、ｐＳＴＡＴ５の刺激、細胞増殖または増殖マーカー（Ｋｉ６７など）、免疫細胞型比の変化、およびエフェクタータンパク質のレベルの刺激が挙げられる。
「エフェクター細胞」は、ヘルパー（ＣＤ４＋細胞）および細胞傷害（ＣＤ８＋およびＮＫ細胞）効果を媒介するリンパ球の集団を指す。エフェクター細胞としては、ＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞、ＮＫ細胞、リンホカイン活性化キラー（ＬＡＫ）細胞、およびマクロファージ／単球などのエフェクターＴ細胞が挙げられる。
「ナイーブＴ細胞」は、骨髄で分化しており、胸腺での中枢選択の正および負のプロセスを経たＴ細胞を指す。ナイーブＴ細胞には、ナイーブ形態のヘルパーＴ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞）およびナイーブ細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＤ８＋Ｔ細胞）が含まれる。ナイーブＴ細胞は、Ｌ－セレクチン（ＣＤ６２Ｌ）およびＣ－Ｃケモカイン受容体７型（ＣＣＲ７）の表面発現、ならびにＩＬ－７Ｒ（ＣＤ１２７）の発現、および活性化マーカーＣＤ２５、ＣＤ４４、およびＣＤ６９の不在を一般に特徴としている。
「メモリーＴ細胞」は、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋の両方を含むＴリンパ球のサブセットである。メモリーＴ細胞の主要な機能は、関連する抗原または病原体を体内に再導入することによって、それらの細胞の再活性化後の急速な増強された免疫応答である。
「抗原結合部分」は、抗原性決定基に特異的に結合するポリペプチド分子を指す。抗原結合部分は、例えば、サイトカインまたは第２の抗原結合部分などの、その抗原結合部分が結合される実体を、標的部位、例えば、抗原決定基を有する特定の型の腫瘍細胞または腫瘍間質に誘導することができる。抗原結合部分には、抗体およびその断片が含まれる。抗原結合部分の例としては、抗体重鎖可変領域および抗体軽鎖可変領域を含む抗体の抗原結合ドメインが挙げられる。抗原結合部分は、抗体定常領域を含むことができる。有用な重鎖定常領域は、α、δ、ε、ｙ、またはμの５つのアイソタイプのいずれかを含むことができる。有用な軽鎖定常領域は、２つのアイソタイプＫおよびＡのいずれかを含むことができる。
「ポリペプチド」は、アミド結合（ペプチド結合としても知られる）によって直鎖状に連結された単量体（アミノ酸）から構成される分子を指す。「ポリペプチド」という用語は、２つ以上のアミノ酸の任意の鎖を指し、生成物の特定の長さを指すものではない。したがって、ペプチド、ジペプチド、トリペプチド、オリゴペプチド、「タンパク質」、「アミノ酸鎖」、または２つ以上のアミノ酸の鎖を指すために使用される任意の他の用語が、「ポリペプチド」の定義に含まれ、「ポリペプチド」という用語は、これらの用語のいずれかの代わりに、またはそれらと互換的に使用され得る。「ポリペプチド」という用語はまた、例えば、グリコシル化、アセチル化、リン酸化、アミド化、既知の保護／遮断基による誘導体化、タンパク質分解切断、および／または非天然アミノ酸による修飾を含む、ポリペプチドの発現後修飾の生成物を指すことが意図される。ポリペプチドは、天然の生物学的供給源に由来してもよいし、組換え技術によって産生されてもよいが、必ずしも指定された核酸配列から翻訳されるとは限らない。ポリペプチドは、組換え方法または化学合成によることを含む、任意の方法で生成され得る。ポリペプチドは、例えば、１００個超のアミノ酸、２００個超のアミノ酸、５００個超のアミノ酸、１，０００個超のアミノ酸、または２，０００個超のアミノ酸を含むことができる。ポリペプチドは、必ずしもそのような構造を有さないが、定義された三次元構造を有し得る。定義された三次元構造を有するポリペプチドは、フォールディングと称され、定義された三次元構造を有しないが、むしろ多数の異なる立体配座を採用することができるポリペプチドは、アンフォールディングと称される。
「ポリヌクレオチド」は、単離された核酸分子または構築物、例えば、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、ウイルス由来ＲＮＡ、またはプラスミドＤＮＡ（ｐＤＮＡ）を指す。ポリヌクレオチドは、ペプチド核酸（ＰＮＡ）に見られるような、従来のホスホジエステル結合またはアミド結合などの非従来的な結合を含んでもよい。
「核酸分子」は、ポリヌクレオチドに存在するＤＮＡまたはＲＮＡ断片などの、任意の１つ以上の核酸セグメントを指す。
「ベクター」または「発現ベクター」は、「発現構築物」と同義であり、標的細胞内でそれが作動可能に会合している特定の遺伝子の発現を導入および誘導するために使用されるＤＮＡ分子を指す。ベクターは、自己複製核酸構造、ならびにそれが導入された宿主細胞のゲノムに組み込まれたベクターであり得る。発現ベクターは、発現カセットを含むことができる。発現ベクターは、大量の安定したｍＲＮＡの転写を可能にする。発現ベクターが標的細胞内に入ると、遺伝子によってコードされるリボ核酸分子またはタンパク質が、細胞転写および／または翻訳機構によって産生される。発現ベクターは、本開示によって提供されるＩＬ－２ＲβγｃリガンドまたはＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物などの本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物をコードするポリヌクレオチド配列を含む発現カセットを含むことができる。
「宿主細胞」、「宿主細胞株」、および「宿主細胞培養」は、そのような細胞の子孫を含む、外因性核酸が導入された細胞を指す。宿主細胞は、例えば、「形質転換体」および「形質転換細胞」を含み、これは、一次形質転換細胞および継代数に関係なく、一次形質転換細胞に由来する子孫を含む。
最も広い意味での「抗体」は、例えば、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、二重特異性抗体などの多重特異性抗体、および望ましい抗原結合活性を示す抗体断片を含む、様々な抗体構造を包含する。「抗体」という用語は、Ｆａｂまたは抗ファージＡｂの発現などで「ａｂ」と略すことができる。
「全長抗体」、「インタクトな抗体」、および「全抗体」は、天然抗体構造と実質的に同様の構造を有するか、またはＦａｂおよびＦｅ領域の両方を含有する重鎖を有する抗体を指す。
「抗体断片」は、インタクトな抗体が結合する抗原に結合するインタクトな抗体の一部を含むインタクトな抗体以外の分子を指す。抗体断片の例には、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、ダイアボディ、線形抗体、ｓｃＦｖなどの一本鎖抗体分子、および抗体断片から形成された多重特異性抗体が含まれる。ダイアボディは、二価または二重特異性であり得る、２つの抗原結合部位を有する抗体断片である。抗体断片は、インタクトな抗体のタンパク質分解消化、ならびにＥ．ｃｏｌｉまたはファージなどの組換え宿主細胞による産生を含むが、これらに限定されない、様々な技術によって作製され得る。
「Ｆａｂ」または「Ｆａｂ領域」は、ＶＨ、ＣＨＩ、ＶＬ、およびＣＬ免疫グロブリンドメインを含むポリペプチドを指し、一般に、２つの異なるポリペプチド鎖、例えば、一方の鎖にＶＨ－ＣＨｌ、および他方の鎖にＶＬ－ＣＬがある。Ｆａｂは、単離したこの領域、または二重特異性抗体との関連でのこの領域を指し得る。Ｆａｂの文脈において、Ｆａｂは、ＣＨＩドメインおよびＣＬドメインに加えて、Ｆｖ領域を含む。
「Ｆｖ」または「Ｆｖ断片」または「Ｆｖ領域」は、ＡＢＤのＶＬおよびＶＨドメインを含むポリペプチドを指す。Ｆｖ領域は、Ｆａｂ（一般に、定常領域も含む２つの異なるポリペプチド）およびｓｃＦｖの両方としてフォーマットすることができ、ｖｉドメインおよびｖｈドメインは、（一般に論じられるようにリンカーと）組み合わせてｓｃＦｖを形成する。
「一本鎖Ｆｖ」または「ｓｃＦｖ」は、一般に本明細書で論じられるようにｓｃＦｖリンカーを使用して、可変軽鎖ドメインと共有結合し、ｓｃＦｖまたはｓｃＦｖドメインを形成する、可変重鎖ドメインを指す。ｓｃＦｖドメインは、ポリペプチドのＮ末端またはＣ末端にあるＶＬドメインといずれの配向であってもよく、逆にＶＨドメインについてであってもよい。
「エフェクター機能」は、抗体Ｆｃ領域とＦｃ受容体またはリガンドとの相互作用から生じる生化学的事象を指す。エフェクター機能としては、例えば、抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）、および補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）が挙げられる。
「Ｆｃ」または「Ｆｃ領域」または「Ｆｃ鎖」は、抗体の定常領域を含むポリペプチドを指し、場合によっては、第１の定常領域免疫グロブリンドメイン（例えば、ＣＨＩ）またはその一部の全部または一部を除外し、場合によっては、ヒンジの全部または一部をさらに除外する。したがって、Ｆｃは、ｌｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＧの最後の２つの定常領域免疫グロブリンドメイン（例えば、ＣＨ２およびＣＨ３）、ＩｇＥおよびＩｇＭの最後の３つの定常領域免疫グロブリンドメイン、ならびに任意選択で、これらのドメインに対する可撓性ヒンジＮ末端のすべてまたは一部を指し得る。ＩｇＡおよびＩｇＭについては、Ｆｃは、Ｊ鎖を含み得る。ＩｇＧについては、Ｆｃ鎖は、免疫グロブリンドメインＣＨ２およびＣＨ３（Ｃｙ２およびＣｙ３）、ならびに任意選択で、ＣＨＩ（Ｃｙｌ）とＣＨ２（Ｃｙ２）との間のヒンジ領域の全部または一部を含む。Ｆｃ領域の境界は異なり得るが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、通常、そのカルボキシル末端に残基Ｅ２１６、Ｃ２２６、またはＡ２３１を含むものと定義され、番号付けは、Ｋａｂａｔにおけるものと同様のＥＵインデックスに従う。例えば、１つ以上のＦｃｙＲまたはＦｃＲｎへの結合を変化させるために、Ｆｃ領域に対してアミノ酸修飾を行うことができる。ヒトＩｇＧ１のＥＵ番号付けでは、ＣＨ２－ＣＨ３ドメインはアミノ酸２３１～４４７を含み、ヒンジは２１６～２３０である。したがって、Ｆｃ鎖の定義は、アミノ酸２３１～４４７（ＣＨ２－ＣＨ３）もしくは２１６～４４７（ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３）の両方、またはそれらの断片を含む。Ｆｃ断片は、一般にサイズ（例えば、非変性クロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィーなど）に基づいて、標準的な方法を使用して検出することができるように、別のＦｃ鎖またはＦｃ断片を有する二量体を形成する能力を保持する、Ｎ末端およびＣ末端のいずれかまたは両方からのより少ないアミノ酸を含有することができる。ヒトＩｇＧ Ｆｃ鎖は特に有用であり、ヒトＩｇＧｌ、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４由来のＦｃ鎖であり得る。
「重定常領域」は、可変重ドメインを除く、抗体またはその断片のＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３部分を指し、ヒトＩｇＧｌのＥＵ番号付けでは、アミノ酸１１８～４４７などである。
「重鎖定常領域断片」は、別の重鎖定常領域と二量体を形成する能力を保持する、Ｎ末端およびＣ末端のいずれかまたは両方からのより少ないアミノ酸を含有する重鎖定常領域を指す。
「免疫グロブリン」は、天然に存在する抗体の構造を有するタンパク質を指す。例えば、ＩｇＧクラスの免疫グロブリンは、約１５０，０００Ｄａのヘテロ四量体糖タンパク質であり、２本の軽鎖および２本の重鎖から構成され、これらはジスルフィド結合を介してともに結合される。Ｎ末端からＣ末端まで、各重鎖は、可変重ドメインまたは重鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＨ）、続いて、重鎖定常領域とも呼ばれる３つの定常ドメイン（ＣＨＩ、ＣＨ２、およびＣＨ３）を有する。同様に、Ｎ末端からＣ末端まで、各軽鎖は、可変軽ドメインまたは軽鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＬ）、続いて、軽鎖定常領域とも呼ばれる定常軽（ＣＬ）ドメインを有する。免疫グロブリンの重鎖は、α（ＩｇＡ）、Ｉｉ（ＩｇＤ）、Ｅ（ＩｇＥ）、ｙ（ＩｇＧ）、またはμ（ＩｇＭ）と呼ばれる５つのクラスのうちの１つに割り当てられ得、そのうちのいくつかは、サブクラス、例えば、γ１（ＩｇＧ１）、γ２（ＩｇＧ２）、γ３（ＩｇＧ３）、γ４（ｇＧ４）、α１（ＩｇＡ１）、およびα２（ＩｇＡ２）にさらに分けられ得る。免疫グロブリンの軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（ｋ）またはラムダ（Ｌ）の２つのタイプのうちの１つに割り当てられ得る。免疫グロブリンは、基本的に、免疫グロブリンヒンジ領域を介して連結された２つのＦａｂ分子およびＦｃ鎖からなる。
「免疫複合体」は、少なくとも１つのＩＬ－２Ｒβγｃリガンドおよび少なくとも１つの抗原結合部分を含むポリペプチド分子を指す。免疫複合体は、少なくとも１つのＩＬ－２Ｒβγｃリガンド、および少なくとも２つの抗原結合部分を含むことができる。免疫複合体は、少なくとも１つのＩＬ－２Ｒβγｃリガンドと、１つ以上のリンカー配列によって結合された２つの抗原結合部分と、を含むことができる。抗原結合部分は、様々な相互作用によって、および様々な構成で、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドに結合することができる。例えば、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、リンカーを介して抗原結合部分に結合することができる。
「リンカー」は、ある化合物を別の化合物に結合させる部分を指す。リンカーとしては、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドリンカー、タンデムＩＬ－２Ｒβγｃリガンドリンカー、およびＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築リンカーを挙げることができる。リンカーは、合成リンカーであり得る。リンカーは、アミノ酸リンカーであり得る。例えば、本開示によって提供されるリンカーは、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドが、ＩＬ－２Ｒと相互作用し、低いＩＣ５０でＩＬ－２Ｒに結合し、かつ／またはＩＬ－２Ｒを活性化する能力を促進することができる。リンカーは、ペプチドまたは非ペプチドを含むことができる。非ペプチドリンカーとしては、例えば、アルキンおよびアジド官能基のＣｕ（Ｉ）触媒反応に由来するトリアゾール部分を含有するものが挙げられる。ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドリンカーは、ＩＬ－２Ｒβリガンドおよび／またはＩＬ－２Ｒγｃリガンドなどの少なくとも１つのＩＬ－２Ｒリガンドを、別のＩＬ－２Ｒリガンドに結合する部分を指す。リンカーは、同じＩＬ－２Ｒリガンドまたは異なるＩＬ－２Ｒリガンドであり得る別のＩＬ－２Ｒリガンドに結合することができる。リンカーはまた、所望の生理学的機能を提供する１つ以上の追加の部分に結合することができる。リンカーは、二価または多価であり得る。リンカーは、加水分解的に安定であってもよく、または生理学的に加水分解可能もしくは酵素分解可能もしくは切断可能な結合を含んでもよい。リンカーは、ＩＬ－２Ｒリガンドに結合して、二量体、三量体、または高次マルチリガンドペプチド（ヘテロマー）および化合物を形成することができる。
「可撓性リンカー」は、グリシンおよびセリンなどの可撓性アミノ酸を含むペプチジルリンカーを指す。可撓性リンカーは、例えば、１～１００個のアミノ酸、例えば、１～５０個、１～４０個、１～３０個、１～２０個、１～１０個、または１～５個のアミノ酸を含むことができ、各アミノ酸は、独立して、グリシンおよびセリンから選択される。可撓性リンカーの例としては、（Ｇ）ｎ（配列番号９３８０）、（ＧＳ）ｎ（配列番号９３８１）、（ＧＧＳ）ｎ（配列番号９３８２）、（ＧＧＧＳ）ｎ（配列番号９３８３）、もしくは（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号９３８４）が挙げられ、ｎは、１～２０の整数であり得る；（Ｇ）ｎ（配列番号９３８５）、（ＧＳ）ｎ（配列番号９３８６）、（ＧＧＳ）ｎ（配列番号９３８７）、（ＧＧＧＳ）ｎ（配列番号９３８８）、もしくは（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号９３８９）が挙げられ、ｎは、１～１０の整数であり得る；または（Ｇ）ｎ（配列番号９３９０）、（ＧＳ）ｎ（配列番号９３９１）、（ＧＧＳ）ｎ（配列番号９３９２）、（ＧＧＧＳ）ｎ（配列番号９３９３）、もしくは（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号９３９４）が挙げられ、ｎは、１～５の整数であり得る。（可撓性リンカーは、アミノ酸配列、例えば、（ＧＧＧＧＳ）（配列番号９３９５）、（ＧＧＧＧＳ）２（配列番号９３９６）、（ＧＧＧＧＳ）３（配列番号９３９７）、（ＧＧＧＧＳ）４（配列番号９３９８）、（ＧＧ）（配列番号９３９９）、（ＧＧＧ）（配列番号９４００）、（ＧＧＧＧＧ）（配列番号９４０１）、（ＧＧＳ）（配列番号９４０２）、（ＧＧＧＳ）（配列番号９４０３）、（ＧＧＧＧＳＧＧ）（配列番号９４０４）、（ＧＧＳ）２（配列番号９４０５）、（Ｇ）５（配列番号９４０６）、または（ＧＳ）１０（配列番号９４０７）を有することができる。
「剛性リンカー」は、プロリンリッチであり、アラニン、リジン、および／またはグルタミン酸などの他のアミノ酸を含み得るペプチジルリンカーを指す。剛性リンカーは、例えば、１～１００個のアミノ酸、例えば、１～５０個、１～４０個、１～３０個、１～２０個、１～１０個、または１～５個のアミノ酸を含むことができ、各アミノ酸は、独立して、プロリン、アラニン、リジン、およびグルタミン酸から選択される。剛性リンカーは、例えば、１～１００個のアミノ酸、例えば、１～５０個、１～４０個、１～３０個、１～２０個、１～１０個、または１～５個のアミノ酸を含むことができ、各アミノ酸は、独立して、プロリンおよびアラニンから選択される。剛性リンカーは、配列（Ｐ）ｎ（配列番号９４２０）または（ＰＡ）ｎ（配列番号９４２１）を有することができ、ｎは、１～２０の整数である。剛性リンカーは、配列（Ｐ）ｎ（配列番号９４２２）または（ＰＡ）ｎ（配列番号９４２３）を有することができ、ｎは、１～１０の整数である。剛性リンカーは、配列（Ｐ）ｎ（配列番号９４２４）または（ＰＡ）ｎ（配列番号９４２５）を有することができ、ｎは、１～５の整数である。剛性リンカーは、配列（ＰＡ）５（配列番号９４２６）、（ＰＡ）７（配列番号９４２７）、または（ＰＡ）１０（配列番号９４２８）を有することができる。
「タンパク質」は、タンパク質、ポリペプチド、オリゴペプチド、およびペプチドを含む、少なくとも２つの共有結合したアミノ酸を指す。さらに、抗体を構成するポリペプチドには、１つ以上の側鎖または末端の合成誘導体化、グリコシル化、ＰＥＧ化、環状順列、環化、他の分子へのリンカー、タンパク質またはタンパク質ドメインへの融合、およびペプチドタグまたは標識の付加が含まれ得る。生物学的に機能的な分子が２つ以上のタンパク質を含む場合、各タンパク質は、「モノマー」または「サブユニット」または「ドメイン」と称されてもよく、生物学的に機能的な分子は、「複合体」と称されてもよい。
「結合親和性」は、単一の生体分子と、そのリガンド／結合パートナーとの間の結合相互作用の強度を指す。結合親和性はＩＣ５０として表される。例えば、ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物の結合親和性は、例えば、実施例に記載の方法を使用して決定されるＩＣ５０を指す。
「アミノ酸配列類似性」は、アミノの１つ以上のアミノ酸が化学的に類似したアミノ酸に置き換えられたアミノ酸配列を指す。化学的に類似したアミノ酸の例には、（ａ）アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、プロリン（Ｐ）、セリン（Ｓ）、またはトレオニン（Ｔ）などの小さな疎水性側鎖を有するアミノ酸；（ｂ）セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、またはチロシン（Ｙ）などのヒドロキシル含有側鎖を有するアミノ酸；（ｃ）アスパラギン酸（Ｄ）、またはグルタミン酸（Ｅ）などの酸性側鎖を有するアミノ酸；（ｄ）ヒスチジン（Ｈ）、アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、またはチロシン（Ｙ）などの極性中性側鎖を有するアミノ酸；（ｅ）アルギニン（Ｒ）、リジン（Ｋ）、またはヒスチジン（Ｈ）などの塩基性側鎖を有するアミノ酸；（ｆ）イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、バリン（Ｖ）、フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、またはトリプトファン（Ｗ）などの大きな疎水性側鎖を有するアミノ酸；および（ｇ）フェニルアラニン（Ｆ）、ヒスチジン（Ｈ）、トリプトファン（Ｗ）、またはチロシン（Ｙ）を含む芳香族側鎖を有するアミノ酸が挙げられる。化学的に類似したアミノ酸は、天然に存在するアミノ酸または非天然アミノ酸を含み得る。
「配列類似性パーセント（％）」は、対象のリガンドおよび参照リガンドにおいて同じであるアミノ酸の数を比較することによって決定される。本開示によって提供されるリガンドは、例えば、参照リガンドとの７０％超、８０％超、または９０％超の配列類似性を含むことができる。例えば、配列番号９００１を有する参照リガンドに基づいて、配列番号９００２～９００７を有するリガンドは、参照リガンドのアミノ酸が、アミノ酸であるアラニンで置換または置き換えられた１、２、３、４、または５個のアミノ酸のいずれかを有する。配列番号９００２～９００７を有するリガンドは、それぞれ、参照リガンドに対する９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、または７０％の配列類似性を特徴とする。
例えば、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドなどの本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物、または例えば、参照アミノ酸配列の１～１０個のアミノ酸もしくは１～５個のアミノ酸が別のアミノ酸で置換されたアミノ酸配列を有することができる。
例えば、参照結合化合物に由来する結合化合物は、１～５個のアミノ酸置換、１～４個、１～３個、または１～２個のアミノ酸置換を有することができる。例えば、参照結合化合物に由来する結合化合物は、１個のアミノ酸置換、２個のアミノ酸置換、３個のアミノ酸置換、４個のアミノ酸置換、または５個のアミノ酸置換を有することができる。
アミノ酸置換は、他のアミノ酸置換とは独立していてもよい。
各アミノ酸置換は、独立して、保存的アミノ酸置換または非保存的アミノ酸置換であり得る。
例えば、参照リガンドは、配列番号９０１１のアミノ酸配列を有することができる。配列番号９０１２～９０１６を有するリガンドは、配列番号９０１１を有する参照リガンドが、それぞれ、１～５個の保存的アミノ酸置換で置換された置換リガンドを表す。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物などのＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物は、例えば、本開示によって提供される特定の配列番号によって特定されるＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物などのＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物と、８０％超、８５％超、９０％超、９５％超、９６％超、９８％超、または９９％超の配列類似性を有することができる。
ＩＬ－２Ｒβリガンド、ＩＬ－２Ｒγｃリガンド、およびＩＬ－２Ｒβγｃリガンドなどの本開示によって提供されるリガンドは、切断リガンドを含み得る。「切断リガンド」は、例えば、１～１０個または１～５個のアミノ酸が、対応する参照リガンドのＮ末端、Ｃ末端、またはＮ末端およびＣ末端の両方から独立して除去されているリガンドを指す。対応する参照リガンドに由来する切断リガンドは、独立して、例えば１～４個のアミノ酸、１～３個のアミノ酸、または１～２個のアミノ酸などの１～５個のアミノ酸を、参照リガンドのＮ末端、Ｃ末端、またはＮ末端およびＣ末端の両方から独立して除去することができる。対応するリガンドに由来する切断リガンドは、独立して、例えば、参照リガンドのＮ末端、Ｃ末端、またはＮ末端およびＣ末端の両方から除去された、１個のアミノ酸、２個のアミノ酸、３個のアミノ酸、４個のアミノ酸、または５個のアミノ酸を有することができる。
例えば、参照リガンドは、配列番号９０２１のアミノ酸配列を有することができる。配列番号９０２１を有する参照リガンドに由来する切断リガンドの例としては、配列番号９０２２～９０２９のアミノ酸配列を有する切断リガンドが挙げられる。
配列番号９０２２～９０２４の切断リガンドは、それぞれ、参照リガンドのＮ末端から１～３個のアミノ酸を除去し、配列番号９０２５～９０２７を有する切断結合化合物リガンドは、それぞれ、参照リガンドのＣ末端から１～３個のアミノ酸を除去し、配列番号９０２８および９０２９を有する切断リガンドは、参照リガンドのＮ末端およびＣ末端の両方からアミノ酸を除去した。
別の例として、参照リガンドは、式（Ａ）のアミノ酸配列を含み得る。

式中、各－Ｘ－は、独立して、アミノ酸を表す。式（Ａ１）～（Ａ５）のアミノ酸配列は、式（Ａ）のアミノ酸配列を含む参照リガンドに由来する切断リガンドの例を表す。
本開示によって提供されるリガンドは、例えば、グリシンなどの１～３個の隣接アミノ酸が、独立して、参照リガンドのＮ末端、Ｃ末端、またはＮ末端およびＣ末端の両方に結合したアミノ酸配列を含み得る。
例えば、参照リガンドは、配列番号９０３１を有することができる。配列番号９０３２～９０３４を有するリガンドは、それぞれ、参照リガンドのＮ末端に結合した１～３個のグリシンを有し、配列番号９０３５～９０３７を有するリガンドは、それぞれ、参照リガンドのＣ末端に結合した１～３個のグリシンを有し、配列番号９０３８および９０３９を有するリガンドは、参照リガンドのＮ末端およびＣ末端の両方に結合した１～２個のグリシンを有する。
本開示によって提供されるリガンドは、例えば、それぞれのリガンドのＮ末端および／またはＣ末端上の隣接グリシン基などの、例えば、１つ以上の隣接アミノ酸を含むことができる。例えば、リガンドは、配列番号９３８０～９４０７および９４２０～９４２８のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を有する１つ以上の隣接アミノ酸を含むことができる。
「ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物」は、本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃリガンド、本開示によって提供されるタンデムＩＬ－２Ｒβγｃリガンド、本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物、ならびに本開示によって提供される少なくとも１つのＩＬ－２Ｒβリガンドおよび少なくとも１つのＩＬ－２Ｒγｃリガンドを含む構築物を指す。ＩＬ－２Ｒβ結合化合物は、ＩＬ－２ＲβサブユニットおよびＩＬ－２Ｒγｃサブユニットの両方に、例えば、１００μＭ未満、１０μＭ未満、１μＭ未満、０．１μＭ未満、または０．０１μＭ未満のＩＣ５０で結合することができる。
ＩＬ－２Ｒ、ＩＬ－２Ｒβサブユニット、およびＩＬ－２Ｒγｃサブユニットは、それぞれ、ヒトＩＬ－２Ｒ、ヒトＩＬ－２Ｒβサブユニット、およびヒトＩＬ－２Ｒγｃサブユニットなどの、哺乳動物ＩＬ－２Ｒ、ＩＬ－２Ｒβサブユニット、およびＩＬ－２Ｒγｃサブユニットをそれぞれ指す。
「少なくとも１つ」という表現は、「１つ以上」を指す。例えば、「少なくとも１つ」という表現は、１～１０、１～８、１～６、１～５、１～４、１～３、または１～２を指すことができる。例えば、「少なくとも１つ」という表現は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０を指すことができる。
ここで、化合物、組成物、および方法の特定の実施形態を詳細に参照する。開示される実施形態は、特許請求の範囲を限定することを意図するものではない。それとは反対に、特許請求の範囲は、すべての代替物、修正物、および同等物を包含することが意図されている。
インターロイキン－２（ＩＬ－２）は、免疫刺激機能および免疫調節機能の両方を有することによって、免疫応答を調節し、末梢自己耐性を維持する上で重要な役割を果たす。ＩＬ－２は、主に、Ｔ細胞増殖因子として作用し、Ｔ細胞の増殖および生存ならびにエフェクターおよびメモリーＴ細胞の生成に不可欠である。ＩＬ－２は、ＩＬ－４、ＩＬ－７、ＩＬ－９、ＩＬ－１５、およびＩＬ－２１を含む構造的に関連するサイトカインのファミリーに属する４つのαヘリックスバンドルサイトカインである。ＩＬ－２は、抗原刺激に応答して活性化ＣＤ４＋Ｔ細胞によって産生され、ＣＤ８＋Ｔ細胞ならびに活性化樹状細胞（ＤＣ）およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞などの先天性免疫細胞によって産生され得る。
ＩＬ－２は、様々な形態のＩＬ－２受容体（ＩＬ－２Ｒ）、特に単量体、二量体、および三量体形態に結合する。単量体ＩＬ－２Ｒは、膜関連ＩＬ－２Ｒα（ＣＤ２５）鎖からなり、これは可溶性形態でも存在するが、ＩＬ－２Ｒαは、シグナル伝達事象を誘導することはできない。三量体ＩＬ－２Ｒは、ＩＬ－２Ｒα、ＩＬ－２Ｒβ（ＣＤ１２２）、およびＩＬ－２Ｒγｃからなり、共通のγ鎖（γｃ）またはＣＤ１３２としても知られ、ＩＬ－２サイトカインファミリーのすべてのメンバーによって共有される。二量体ＩＬ－２Ｒは、ＩＬ－２ＲγｃおよびＩＬ－２Ｒβサブユニットを含む。単量体ＩＬ－２Ｒとは対照的に、二量体ＩＬ－２Ｒおよび三量体ＩＬ－２Ｒの両方の活性化は、ＩＬ－２結合時に下流シグナル伝達カスケードをもたらす。ＩＬ－２は、三量体ＩＬ－２Ｒに対して高い親和性で結合するが、二量体ＩＬ－２Ｒに対して低～中程度の親和性で結合し、ＩＬ－２に対する細胞の感受性を変化させる。さらに、ＩＬ－２は、ＩＬ－２ＲβおよびＩＬ－２Ｒγｃサブユニットの両方を発現する抗原特異的ナイーブＴ細胞およびＮＫ細胞を含む隣接細胞へのトランス提示のために、活性化樹状細胞の表面上で発現されるＩＬ－２Ｒαに結合することができる。ＩＬ－２のこのトランス提示は、ＩＬ－２を産生するためにプライムナイーブＴ細胞への免疫応答の早期に必要とされる初期高親和性ＩＬ－２シグナル伝達を促進することが示されている。
ＩＬ－２はまずＩＬ－２Ｒαによって捕捉され、ＩＬ－２に立体構造変化をもたらし、ＩＬ－２Ｒβに対するその親和性を増加させる。ＩＬ－２とＩＬ－２Ｒβγｃサブユニットとの会合は、ＩＬ－２ＲβおよびＩＬ－２Ｒγｃの細胞質尾部におけるシグナル伝達モチーフの二量体化を誘導し、ヤヌスキナーゼ、ＪＡＫ１およびＪＡＫ３のリン酸化／活性化をもたらし、次いで、ＩＬ－２Ｒβサブユニットの尾部の主要なチロシン残基にキナーゼ活性を発揮する。
下流シグナル伝達は、３つの主要な経路、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ経路、ホスホイノシチド３－キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）－ＡＫＴ経路、およびマイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）経路を介して生じる。これらの経路は、アダプタータンパク質Ｓｈｃおよび転写因子ＳＴＡＴ５の動員を通じて、ＩＬ－２依存的生物学的作用に寄与する標的遺伝子の転写をもたらす。ＩＬ－２シグナル伝達の標的遺伝子としては、サイクリンＤ２、ｂｃｌ－２、ｆａｓＬ、ｃｄ２５（ＩＬ－２Ｒαをコードする）、ｓｏｃｓ１－２、および転写因子ＢＬＩＭＰ１をコードするＩＬ－２サイレンシング遺伝子ｐｒｄｍ１が挙げられる。ＩＬ－２の負の調節因子ＢＬＩＭＰ１の産生は、免疫恒常性に重要なエフェクターＴ細胞とＴｒｅｇ細胞との間のバランスを維持する。
ＩＬ－２は、Ｔ細胞の増殖および分化を刺激することによって、ならびに免疫抑制性Ｔｒｅｇ細胞の集団を維持および拡大することによって、Ｔ細胞活性化において二重の役割を果たす。ナイーブＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞は二量体ＩＬ－２Ｒを発現するため、それらの初期増殖を誘導するために高濃度のＩＬ－２を必要とする。活性化されると、これらのＴ細胞は高親和性三量体ＩＬ－２Ｒを発現し、Ｔ細胞のエフェクター（Ｔｅｆｆ）またはメモリー細胞のいずれかへの分化を促進する。この分化は、ＩＬ－２シグナルの強度および持続時間に依存する。
低～中レベルのＩＬ－２の存在下でのＣＤ８＋Ｔ細胞の一次拡大の間、ＣＤ８＋Ｔ細胞のサブセットは、メモリーＴ細胞に分化する。細胞は、再感染時の二次応答に関連する受容体である、ＣＤ２５を下方制御し、ＣＤ１２７（ＩＬ－７Ｒ）およびＣＤ６２（Ｌ－セレクチン）を上方制御することによって、これを行う。急性感染の間、高レベルのＩＬ－２の持続は、ＣＤ２５の急速な上方制御およびＣＤ８＋細胞の細胞傷害性エフェクター細胞への分化をもたらす。上方制御は、死受容体ｆａｓおよびｆａｓＬのＩＬ－２駆動発現を誘導し、病原体クリアランス時に活性化誘導細胞死（ＡＩＣＤ）を引き起こす。ＣＤ４＋Ｔ細胞について、ＩＬ－２によるＳＴＡＴ５シグナル伝達の活性化は、各応答について適切な受容体の発現を調節することによって、Ｔｈ１、Ｔｈ２、およびＴｈ１７を含む複数のヘルパーＴ細胞集団へのそれらの分化に影響を与える。
ＩＬ－２の恒常的またはバックグラウンドレベルは、ＦＯＸＰ３およびＣＤ２５の発現を維持することによって、Ｔｒｅｇ細胞の生存および機能に重要である。Ｔｒｅｇ細胞は、自然に胸腺内で発生し、自己ペプチドと接触すると活性化される。さらに、Ｔｒｅｇ細胞は、末梢リンパ系器官における抗原と相互作用する際の従来のＣＤ４＋Ｔ細胞の刺激によって生成することができる。Ｔｒｅｇ細胞はＩＬ－２を産生しないため、Ｔｒｅｇ細胞は、従来のＴ細胞などのＩＬ－２産生細胞に依存する。それらのＩＬ－２Ｒα（ＣＤ２５）の高い発現により、Ｔｒｅｇは、ＩＬ－２の全身濃度を消費し、制限することができ、免疫バランスの調節を確実にする。ＩＬ－２が存在しない場合、Ｔｒｅｇ細胞の数は減少し、エフェクターＴ細胞の数は増加し、自己免疫および炎症性障害に対する感受性の向上をもたらす。したがって、ＣＤ４＋またはＣＤ８＋Ｔ細胞を活性化しない低レベルのＩＬ－２でのＴｒｅｇ細胞の独自の活性化は、自己免疫疾患および炎症疾患における有望な治療剤としてのＩＬ－２の発達を可能にした。
免疫系の両アームからのＩＬ－２の産生は、感染の初期、ならびに二次適応免疫応答におけるこのサイトカインの重要性を強調する。さらに、保護免疫および免疫耐性の両方におけるＩＬ－２の二重機能により、ＩＬ－２は、がんおよび自己免疫疾患のために、それぞれ、免疫刺激剤および免疫抑制剤の両方として、一見対照的な療法における潜在的な治療剤であることが可能になる。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、ＩＬ－２Ｒβリガンド、ＩＬ－２Ｒγｃリガンド、ならびにＩＬ－２ＲβおよびＩＬ－２Ｒγｃリガンドを結合するＩＬ－２Ｒβγｃリガンドリンカーを含む。ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、ＩＬ－２Ｒアゴニスト、部分的ＩＬ－２Ｒアゴニスト、またはＩＬ－２Ｒアンタゴニストであり得る。ＩＬ－２ＲβγｃリガンドがＩＬ－２Ｒαに結合しないため、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、優先的にＴｒｅｇを活性化せず、より低い受容体媒介性クリアランスの可能性を有し、低下した毒性を示すことができる。
本開示によって提供されるタンデムＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、１つ以上のタンデムリンカーによってともに結合された２つ以上のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドを含む。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃ構築物は、例えば、ポリマー、タンパク質、Ｆｃ断片、免疫グロブリン断片、または抗体などの構築パートナーと称される別の分子に結合された少なくとも１つのＩＬ－２Ｒβγｃリガンドを含むことができる。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃ構築物は、ポリマー、タンパク質、Ｆｃ断片、免疫グロブリン断片、または抗体などの構築パートナーと称される別の分子に結合された少なくとも１つのＩＬ－２Ｒβリガンドおよび少なくとも１つのＩＬ－２Ｒγｃを含むことができる。
ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、ＩＬ－２Ｒβリガンドを含むことができる。好適なＩＬ－２Ｒβリガンドの例は、参照によりその全体が組み込まれる米国特許出願公開第２０２０／００４００３４Ａ１号に開示されている。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβリガンドは、ヒトＩＬ－２Ｒβサブユニットに、例えば、１００μＭ未満、１０μＭ未満、１μＭ未満、０．１μＭ未満、または０．０１μＭ未満のＩＣ５０で結合することができる。
ＩＬ－２Ｒβリガンドは、ヒトＩＬ－２Ｒβサブユニットに、例えば、１ｐＭ～１００μＭ、１０ｐＭ～１０μＭ、１００ｐＭ～１μＭ、０．００１μＭ～１μＭ、または０．０１μＭ～１μＭのＩＣ５０で結合することができる。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβリガンドは、哺乳動物ＩＬ－２Ｒβサブユニットに、１００μＭ未満、１０μＭ未満、１μＭ未満、０．１μＭ未満、または０．０１μＭ未満のＩＣ５０で結合することができる。
ＩＬ－２Ｒβリガンドは、哺乳動物ＩＬ－２Ｒβサブユニットに、例えば、１ｐＭ～１００μＭ、１０ｐＭ～１０μＭ、１００ｐＭ～１μＭ、０．００１μＭ～１μＭ、または０．０１μＭ～１μＭのＩＣ５０で結合することができる。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβリガンドは、ヒトＩＬ－２ＲβサブユニットおよびヒトＩＬ－２Ｒγｃサブユニットのそれぞれに、例えば、１００μＭ未満、１０μＭ未満、１μＭ未満、０．１μＭ未満、または０．０１μＭ未満のＩＣ５０で結合することができる。
ＩＬ－２βリガンドは、式（１）（配列番号８０５）、式（１ａ）（配列番号８０６）、式（１ｂ）（配列番号８０７）、式（１ｃ）（配列番号８０８）、および／または式（１ｄ）（配列番号８０９）のアミノ酸配列を含み得る。

式中、Ｘ２１１は、アミノ酸から選択することができ、Ｘ２１２は、芳香族側鎖を含むアミノ酸から選択することができ、Ｘ２１３は、大きな疎水性側鎖または芳香族側鎖を含むアミノ酸から選択することができ、Ｘ２１４は、Ｐであることができ、Ｘ２１５は、芳香族側鎖を含むアミノ酸から選択することができ、Ｘ２１６は、大きな疎水性側鎖を含むアミノ酸から選択することができ、Ｘ２１７は、Ａであることができ、Ｘ２１８は、塩基性側鎖または極性／中性側鎖を含むアミノ酸から選択することができ、Ｘ２１９は、大きな疎水性側鎖を含むアミノ酸から選択することができ、Ｘ２２０は、Ｇであることができ、Ｘ２２１は、酸性側鎖または極性／中性側鎖を含むアミノ酸から選択することができ、Ｘ２２２は、Ｌであることができ、Ｘ２２３はＤであることができ、Ｘ２２４は、大きな疎水性側鎖を含むアミノ酸から選択することができ、Ｘ２２５は、酸性側鎖を含むアミノ酸から選択することができる。
式（１）、（１ａ）、（１ｂ）、（１ｃ）、および／または（１ｄ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ２１１は、アミノ酸から選択することができ、Ｘ２１２は、Ｆ、Ｈ、Ｗ、およびＹから選択することができ、Ｘ２１３は、Ｆ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｖ、Ｗ、およびＹから選択することができ、Ｘ２１４は、Ｐであることができ、Ｘ２１５は、Ｆ、Ｈ、Ｗ、およびＹから選択することができ、Ｘ２１６は、Ｆ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｖ、Ｗ、およびＹから選択することができ、Ｘ２１７は、Ａであることができ、Ｘ２１８は、Ｋ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、およびＹから選択することができ、Ｘ２１９は、Ｆ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｖ、Ｗ、およびＹから選択することができ、Ｘ２２０は、Ｇであることができ、Ｘ２２１は、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、およびＹから選択することができ、Ｘ２２２は、Ｌであることができ、Ｘ２２３は、Ｄであることができ、Ｘ２２４は、Ｆ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｖ、Ｗ、およびＹから選択することができ、Ｘ２２５は、ＤおよびＥから選択することができる。
式（１）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ２１１はアミノ酸から選択され得る。
式（１）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ２１１は、Ｈ、Ｋ、およびＲから選択され得る。
式（１）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ２１１は、ＨおよびＲから選択され得る。
式（１）～（１ａ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ２１２は、Ｆ、Ｈ、Ｗ、およびＹから選択され得る。
式（１）～（１ａ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ２１２はＷであり得る。
式（１）～（１ｂ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ２１３は、Ｆ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｖ、Ｗ、およびＹから選択され得る。
式（１）～（１ｂ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ２１３はＬであり得る。
式（１）～（１ｂ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ２１３はＹであり得る。
式（１）～（１ｃ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ２１４はＰであり得る。
式（１）～（１ｄ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ２１５は、Ｆ、Ｈ、Ｗ、およびＹから選択され得る。
式（１）～（１ｄ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ２１５はＷであり得る。
式（１）～（１ｄ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ２１６は、Ｆ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｖ、Ｗ、およびＹから選択され得る。
式（１）～（１ｄ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ２１６はＭであり得る。
式（１）～（１ｄ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ２１７はＡであり得る。
式（１）～（１ｄ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ２１８は、Ｋ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、およびＹから選択され得る。
式（１）～（１ｄ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ２１８は、ＫおよびＲから選択され得る。
式（１）～（１ｄ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ２１８はＱであり得る。
式（１）～（１ｄ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ２１９は、Ｆ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｖ、Ｗ、およびＹから選択され得る。
式（１）～（１ｄ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ２１９はＬであり得る。
式（１）～（１ｄ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ２２０はＧであり得る。
式（１）～（１ｄ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ２２１は、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、およびＹから選択され得る。
式（１）～（１ｄ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ２２１はＥであり得る。
式（１）～（１ｄ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ２２２はＬであり得る。
式（１）～（１ｃ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ２２３はＤであり得る。
式（１）～（１ｂ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ２２４は、Ｆ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｖ、Ｗ、およびＹから選択され得る。
式（１）～（１ｂ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ２２４はＬであり得る。
式（１）～（１ａ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ２２５は、ＤおよびＥから選択され得る。
式（１）、（１ａ）、（１ｂ）、（１ｃ）、および／または（１ｄ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ２１１は、Ｈ、Ｋ、およびＲから選択することができ、Ｘ２１２は、Ｗであることができ、Ｘ２１３は、Ｙであることができ、Ｘ２１４は、Ｐであることができ、Ｘ２１５は、Ｗであることができ、Ｘ２１６は、Ｍであることができ、Ｘ２１７は、Ａであることができ、Ｘ２１８は、ＮおよびＱから選択することができ、Ｘ２１９は、ＬおよびＶから選択することができ、Ｘ２２０は、Ｇであることができ、Ｘ２２１は、Ｅ、Ｄ、およびＱから選択することができ、Ｘ２２２は、Ｌであることができ、Ｘ２２３は、Ｄであることができ、Ｘ２２４は、ＬおよびＭから選択することができ、Ｘ２２５は、ＤおよびＥから選択することができる。
式（１）、（１ａ）、（１ｂ）、（１ｃ）、および／または（１ｄ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ２１１は、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、およびＶから選択することができ、Ｘ２１２は、Ｃ、Ｆ、Ｗ、およびＹから選択することができ、Ｘ２１３は、Ｆ、Ｈ、Ｋ、Ｌ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｗ、およびＹから選択することができ、Ｘ２１４は、Ｐであることができ、Ｘ２１５は、ＷおよびＹから選択することができ、Ｘ２１６は、Ｆ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、およびＶから選択することができ、Ｘ２１７は、Ａであることができ、Ｘ２１８は、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｋ、Ｌ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、およびＹから選択することができ、Ｘ２１９は、Ｌ、Ｐ、およびＶから選択することができ、Ｘ２２０は、Ｇ、Ｈ、およびＷから選択することができ、Ｘ２２１は、Ｄ、Ｅ、およびＱから選択することができ、Ｘ２２２は、ＬおよびＭから選択することができ、Ｘ２２３は、Ｄであることができ、Ｘ２２４は、Ｌ、Ｍ、Ｑ、およびＶから選択することができ、Ｘ２２５は、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｌ、Ｑ、Ｎ、Ｔ、およびＶから選択することができる。
式（１）、（１ａ）、（１ｂ）、（１ｃ）、および／または（１ｄ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ２１１は、ＨおよびＲから選択することができ、Ｘ２１２は、ＦおよびＷから選択することができ、Ｘ２１３は、Ｆ、Ｌ、Ｗ、およびＹから選択することができ、Ｘ２１４は、Ｐであることができ、Ｘ２１５は、ＷおよびＹから選択することができ、Ｘ２１６は、Ｆ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、およびＶから選択することができ、Ｘ２１７は、Ａであることができ、Ｘ２１８は、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｎ、Ｑ、およびＲから選択することができ、Ｘ２１９は、ＬおよびＶから選択することができ、Ｘ２２０は、Ｇであることができ、Ｘ２２１は、Ｄ、Ｅ、およびＱから選択することができ、Ｘ２２２は、ＬおよびＭから選択することができ、Ｘ２２３は、Ｄであることができ、Ｘ２２４は、Ｌ、Ｍ、およびＶで選択することができ、Ｘ２２５は、ＤおよびＥから選択することができる。
式（１）、（１ａ）、（１ｂ）、（１ｃ）、および／または（１ｄ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ２１１はＨおよびＲから選択することができ、Ｘ２１２はＷであることができ、Ｘ２１３はＹであることができ、Ｘ２１４はＰであることができ、Ｘ２１５はＷであることができ、Ｘ２１６はＭであることができ、Ｘ２１７はＡであることができ、Ｘ２１８はＱであることができ、Ｘ２１９はＬであることができ、Ｘ２２０はＧであることができ、Ｘ２２１はＱであることができ、Ｘ２２２は、Ｌであることができ、Ｘ２２３はＤであることができ、Ｘ２２４はＬであることができ、Ｘ２２５は、ＤおよびＥから選択することができる。
式（１）、（１ａ）、（１ｂ）、（１ｃ）、および／または（１ｄ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ２１１は、ＨおよびＲから選択することができ、Ｘ２１２はＷであることができ、Ｘ２１３はＬであることができ、Ｘ２１４はＰであることができ、Ｘ２１５はＷであることができ、Ｘ２１６はＭであることができ、Ｘ２１７はＡであることができ、Ｘ２１８はＱであることができ、Ｘ２１９はＬであることができ、Ｘ２２０はＧであることができ、Ｘ２２１はＱであることができ、Ｘ２２２はＬであることができ、Ｘ２２３はＤであることができ、Ｘ２２４はＬであることができ、Ｘ２２５はＤおよびＥから選択することができる。
式（１）、（１ａ）、（１ｂ）、（１ｃ）、および／または（１ｄ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ２１１はＨおよびＲから選択することができ、Ｘ２１２はＷであることができ、Ｘ２１３はＹであることができ、Ｘ２１４はＰであることができ、Ｘ２１５はＷであることができ、Ｘ２１６はＭであることができ、Ｘ２１７はＡであることができ、Ｘ２１８はＫおよびＲから選択することができ、Ｘ２１９はＬであることができ、Ｘ２２０はＧであることができ、Ｘ２２１はＱであることができ、Ｘ２２２はＬであることができ、Ｘ２２３はＤであることができ、Ｘ２２４はＬであることができ、Ｘ２２５はＤおよびＥから選択することができる。
ＩＬ－２Ｒβリガンドは、配列番号８１０～９０３のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含み得る。

ＩＬ－２Ｒβリガンドは、配列番号８０５～９０３のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含み得、アミノ酸配列は、Ｎ末端上、Ｃ末端上、またはＮ末端およびＣ末端の両方上の１つ以上のアミノ酸で終端し得る。例えば、アミノ酸配列は、末端グリシンおよび／またはセリンを含み得る。例えば、ＩＬ－２Ｒβリガンドは、Ｎ末端上、Ｃ末端上、またはＮ末端およびＣ末端の両方に－Ｇ－Ｇ－部分（配列番号９３９９）を含み得る。
ＩＬ－２Ｒβリガンドは、配列番号８０５～９０３のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含み得、各アミノ酸が、独立して、以下の保存的置換：アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、プロリン（Ｐ）、セリン（Ｓ）、またはトレオニン（Ｔ）を含む小さな疎水性側鎖を有するアミノ酸；セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、またはチロシン（Ｙ）を含むヒドロキシル含有側鎖を有するアミノ酸；アスパラギン酸（Ｄ）、またはグルタミン酸（Ｅ）を含む酸性側鎖を有するアミノ酸；ヒスチジン（Ｈ）、アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、またはチロシン（Ｙ）を含む極性中性側鎖を有するアミノ酸；アルギニン（Ｒ）、リジン（Ｋ）、またはヒスチジン（Ｈ）を含む塩基性側鎖を有するアミノ酸；イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、バリン（Ｖ）、フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、またはトリプトファン（Ｗ）を含む大きな疎水性側鎖を有するアミノ酸；ならびにフェニルアラニン（Ｆ）、ヒスチジン（Ｈ）、トリプトファン（Ｗ）、またはチロシン（Ｙ）を含む芳香族側鎖を有するアミノ酸のうちの１つ以上を含む。
配列番号８０５～９０３のＩＬ－２Ｒβリガンドは、１００μＭ未満のＩＣ５０でヒトＩＬ－２Ｒβサブユニットに結合することができる。
Ａｎ－ＩＬ－２Ｒβリガンドは、配列番号８０５～９０３のうちのいずれか１つのアミノ酸配列に対して、６０％超、７０％超、７５％超、８０％超、８５％超、９０％超、または９５％超のアミノ酸配列類似性を含み得る。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβリガンドは、配列番号８０５～９０３のうちのいずれか１つの切断アミノ酸配列を含み得る。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβリガンドは、配列番号８０５～９０３のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列、または配列番号８０５～９０３のうちのいずれか１つの切断アミノ酸配列を含み得、アミノ酸配列は、独立して、Ｎ末端上、Ｃ末端上、またはＮ末端およびＣ末端の両方上に１～４個のグリシン（Ｇ）（配列番号９４２９）を含み得る。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβリガンドは、配列番号８０５～９０３のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列、または配列番号８０５～９０３のうちのいずれか１つの切断アミノ酸配列を含み得、アミノ酸配列は、１～５個のアミノ酸置換などの、１つ以上のアミノ酸置換を含む。アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換を含み得る。
ＩＬ－２Ｒβリガンドは、配列番号８０５～９０３のうちのいずれか１つのアミノ酸配列、または配列番号８０５～９０３のうちのいずれか１つの切断アミノ酸配列に対して、６０％超、７０％超、７５％超、８０％超、８５％超、９０％超、または９５％超のアミノ酸配列類似性を有するアミノ酸配列を含み得る。
配列番号８０５～９０３のうちのいずれか１つのＩＬ－２Ｒβリガンドは、ファージＥＬＩＳＡ競合アッセイを使用して決定して、１０μＭ未満のＩＣ５０でｈＩＬ－２Ｒβサブユニットに結合することができる。
配列番号８０５～９０３のうちのいずれか１つのＩＬ－２Ｒβリガンド、配列番号８０５～９０３のうちのいずれか１つの切断ＩＬ－２Ｒβリガンド、または配列番号８０５～９０３のうちのいずれか１つの置換ＩＬ－２Ｒβリガンドは、ファージＥＬＩＳＡ競合アッセイを使用して決定して、１００μＭ未満または１０μＭ未満のＩＣ５０でｈＩＬ－２Ｒβサブユニットに結合することができる。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβリガンドは、式（２）のアミノ酸配列（配列番号２５７５）、式（２ａ）のアミノ酸配列（配列番号２５７６）、式（２ｂ）のアミノ酸配列（配列番号２５７７）、式（２ｃ）のアミノ酸配列（配列番号２５７８）、または式（２ｄ）のアミノ酸配列（配列番号２５７９）を含み得る。

式中、
Ｘ１は、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｒ、Ｓ、Ｗ、およびＹから選択され得、
Ｘ２は、Ｆ、Ｈ、Ｋ、Ｌ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、およびＹから選択され得、
Ｘ３は、Ｅ、Ｇ、Ｌ、Ｐ、およびＳから選択され得、
Ｘ４は、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｗ、およびＹから選択され得、
Ｘ５は、Ｅ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、およびＶから選択され得、
Ｘ６は、Ａ、Ｄ、Ｇ、およびＹから選択され得、
Ｘ７は、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｋ、Ｌ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、およびＴから選択され得、
Ｘ８は、Ｄ、Ｆ、Ｌ、Ｍ、Ｐ、Ｒ、およびＶから選択され得、
Ｘ９は、Ｇ、Ｒ Ｗ、およびＹから選択され得、
Ｘ１０は、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｑ、Ｗ、およびＹから選択され得、
Ｘ１１は、Ｉ、Ｌ、Ｑ、Ｖ、およびＹから選択され得、
Ｘ１２は、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｖ、およびＹから選択され得、
Ｘ１３は、Ｄ、Ｆ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、およびＶから選択され得、
Ｘ１４は、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｋ、Ｌ、Ｎ、Ｑ、Ｖ、およびＷから選択され得る。
式（２）～（２ｄ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ１は、Ｓ、Ｗ、およびＹから選択され得る。
式（２）～（２ｄ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ１はＷであり得る。
式（２）～（２ｄ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ２は、Ｋ、Ｌ、Ｗ、およびＹから選択され得る。
式（２）～（２ｄ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ３は、Ｐであり得る。
式（２）～（２ｄ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ４は、Ｗであり得る。
式（２）～（２ｄ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ５は、Ｉ、Ｌ、およびＭから選択され得る
式（２）～（２ｄ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ６は、Ａであり得る。
式（２）～（２ｄ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ７は、Ｑであり得る。
式（２）～（２ｄ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ８は、Ｌであり得る
式（２）～（２ｄ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ９は、Ｇであり得る。
式（２）～（２ｄ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ１０は、ＤおよびＥから選択され得る。
式（２）～（２ｄ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ１１は、Ｌであり得る。
式（２）～（２ｄ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ１２は、ＤおよびＥから選択され得る。
式（２）～（２ｄ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ１３は、Ｌであり得る。
式（２）～（２ｄ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ１４は、ＤおよびＥから選択され得る。
式（２）～（２ｄ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、ＩＬ－２Ｒβリガンドは、直前の１６段落で定義されるように、Ｘ１～Ｘ１４の任意の組み合わせによって定義され得る。
式（２）～（２ｄ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、
Ｘ１は、Ｓ、Ｗ、およびＹから選択され得、
Ｘ２は、Ｋ、Ｌ、Ｗ、およびＹから選択され得、
Ｘ３は、Ｐであり得、
Ｘ４は、Ｗであり得、
Ｘ５は、Ｉ、Ｌ、およびＭから選択され得、
Ｘ６は、Ａであり得、
Ｘ７は、Ｑであり得、
Ｘ８は、Ｌであり得、
Ｘ９は、Ｇであり得、
Ｘ１０は、ＤおよびＥから選択され得、
Ｘ１１は、Ｌであり得、
Ｘ１２は、ＤおよびＥから選択され得、
Ｘ１３は、Ｌであり得、
Ｘ１４は、ＤおよびＥから選択され得る。
式（２）～（２ｄ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、
Ｘ１は、Ｗであり得、
Ｘ２は、Ｋ、Ｌ、Ｗ、およびＹから選択され得、
Ｘ３は、Ｐであり得、
Ｘ４は、Ｗであり得、
Ｘ５は、Ｉ、Ｌ、およびＭから選択され得、
Ｘ６は、Ａであり得、
Ｘ７は、Ｑであり得、
Ｘ８は、Ｌであり得、
Ｘ９は、Ｇであり得、
Ｘ１０は、ＤおよびＥから選択され得、
Ｘ１１は、Ｌであり得、
Ｘ１２は、ＤおよびＥから選択され得、
Ｘ１３は、Ｌであり得、
Ｘ１４は、ＤおよびＥから選択され得る。
ＩＬ－２Ｒβリガンドは、配列番号２５８０～２６５５のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含み得る。

本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβリガンドは、配列番号２５７５～２６５５のうちのいずれか１つの切断アミノ酸配列を含み得る。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβリガンドは、配列番号２５７５～２６５５のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列、または配列番号２５７５～２６５５のうちのいずれか１つの切断アミノ酸配列を含み得、アミノ酸配列は、独立して、Ｎ末端上、Ｃ末端上、またはＮ末端およびＣ末端の両方上に１～４個のグリシン（配列番号９４２９）を含み得る。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβリガンドは、配列番号２５７５～２６５５のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列、または配列番号２５７５～２６５５のうちのいずれか１つの切断アミノ酸配列を含み得、アミノ酸配列は、１～５個のアミノ酸置換などの、１つ以上のアミノ酸置換を含む。アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換を含み得る。
ＩＬ－２Ｒβリガンドは、配列番号２５７５～２６５５のうちのいずれか１つのアミノ酸配列、または配列番号２５７５～２６５５のうちのいずれか１つの切断アミノ酸配列に対して、６０％超、７０％超、７５％超、８０％超、８５％超、９０％超、または９５％超のアミノ酸配列類似性を有するアミノ酸配列を含み得る。
配列番号２５７５～６５５のうちのいずれか１つのＩＬ－２Ｒβリガンド、配列番号２５７５～２６５５のうちのいずれか１つの切断ＩＬ－２Ｒβリガンド、または配列番号２５７５～２６５５のうちのいずれか１つの置換ＩＬ－２Ｒβリガンドは、ファージＥＬＩＳＡ競合アッセイを使用して決定して、１００μＭ未満または１０μＭ未満のＩＣ５０でｈＩＬ－２Ｒβサブユニットに結合することができ、１００μＭ未満または１０μＭ未満のＩＣ５０でｃｙＩＬ－２Ｒβサブユニットに結合することができる。
ファージＥＬＩＳＡ競合アッセイを使用して決定して、１００μＭ未満のＩＣ５０でｈＩＬ－２Ｒβサブユニットに結合した、配列番号２５８０～２６５５のうちのいずれか１つのＩＬ－２Ｒβリガンド。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβリガンドは、式（３）のアミノ酸配列（配列番号２６６１）、式（３ａ）のアミノ酸配列（配列番号２６６２）、式（３ｂ）のアミノ酸配列（配列番号２６６３）、式（３ｃ）のアミノ酸配列（配列番号２６６４）、式（３ｄ）のアミノ酸配列（配列番号２６６５）、式（３ｅ）のアミノ酸配列（配列番号２６６６）を含み得る。

式中、
Ｘ１は、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、およびＹから選択され得、
Ｘ２は、Ｃ、Ｄ、Ｆ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｒ、Ｓ、Ｖ、Ｗ、およびＹから選択され得、
Ｘ３は、Ａ、Ｄ、Ｆ、Ｈ、Ｋ、Ｌ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、およびＹから選択され得、
Ｘ４は、Ａ、Ｄ、Ｆ、Ｌ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、およびＷから選択され得、
Ｘ５は、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｌ、Ｍ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｗ、およびＹから選択され得、
Ｘ６は、Ａ、Ｆ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｖ、Ｗ、およびＹから選択され得、
Ｘ７は、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｉ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、およびＷから選択され得、
Ｘ８は、Ａ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｋ、Ｌ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｖ、Ｗ、およびＹから選択され得、
Ｘ９は、Ａ、Ｅ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｐ、Ｑ Ｖ、およびＷから選択され得、
Ｘ１０は、Ｆ、Ｇ、およびＶから選択され得、
Ｘ１１は、Ｄ、Ｅ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｓ、Ｖ、Ｗ、およびＹから選択され得、
Ｘ１２は、Ｄ、Ｆ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、およびＷから選択され得、
Ｘ１３は、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｌ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、およびＶから選択され得、
Ｘ１４は、Ａ、Ｅ、Ｆ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｑ、Ｒ Ｓ、Ｔ Ｖ、およびＷから選択され得、
Ｘ１５は、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、およびＹから選択され得、
Ｘ１６は、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、およびＹから選択され得、
Ｘ１７は、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、およびＹから選択され得る。
式（３）～（３ｅ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ１は、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、およびＷから選択され得る。
式（３）～（３ｅ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ１は、Ｇ、Ｒ、およびＷから選択され得る。
式（３）～（３ｅ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ２は、Ｆ、Ｌ、Ｓ、Ｖ、Ｗ、およびＹから選択され得る
式（３）～（３ｅ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ２は、ＦおよびＷから選択され得る。
式（３）～（３ｅ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ３は、Ｆ、Ｈ、Ｋ、Ｌ、Ｎ、Ｑ、Ｗ、およびＹから選択され得る。
式（３）～（３ｅ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ３は、Ｆ、Ｈ、Ｌ、Ｗ、およびＹから選択され得る。
式（３）～（３ｅ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ４は、ＤおよびＰから選択され得る。
式（３）～（３ｅ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ５は、Ｆ、Ｌ、Ｓ、Ｗ、およびＹから選択され得る。
式（３）～（３ｅ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ５は、Ｆ、Ｗ、およびＹから選択され得る。
式（３）～（３ｅ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ６は、Ｆ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｒ、およびＶから選択され得る。
式（３）～（３ｅ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ６は、Ｉ、Ｌ、およびＭから選択され得る。
式（３）～（３ｅ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ７は、Ａであり得る。
式（３）～（３ｅ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ８は、Ｈ、Ｋ、Ｌ、Ｑ、Ｒ、およびＳから選択され得る。
式（３）～（３ｅ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ８は、Ｑであり得る。
式（３）～（３ｅ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ９は、Ｉ、Ｌ、およびＶから選択され得る。
式（３）～（３ｅ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ９は、ＬおよびＶから選択され得る。
式（３）～（３ｅ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ１０は、Ｇであり得る。
式（３）～（３ｅ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ１１は、ＤおよびＥから選択され得る。
式（３）～（３ｅ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ１１は、Ｅであり得る。
式（３）～（３ｅ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ１２は、ＬおよびＶから選択され得る。
式（３）～（３ｅ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ１２は、Ｌであり得る。
式（３）～（３ｅ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ１３は、ＤおよびＥから選択され得る。
式（３）～（３ｅ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ１３は、Ｄであり得る。
式（３）～（３ｅ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ１４は、Ｆ、Ｉ、Ｌ、およびＭから選択され得る。
式（３）～（３ｅ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ１４は、Ｌであり得る。
式（３）～（３ｅ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ１５は、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、およびＶから選択され得る。
式（３）～（３ｅ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ１５は、Ｄ、Ｅ、Ｆ、およびＧから選択され得る。
式（３）～（３ｅ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ１６は、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｋ、Ｐ、Ｖ、およびＷから選択され得る。
式（３）～（３ｅ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ１６は、Ｇであり得る。
式（３）～（３ｅ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ１７は、Ａ、Ｅ、Ｇ、Ｐ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、およびＷから選択され得る。
式（３）～（３ｅ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ１７はＧであり得る。
式（３）～（３ｅ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、ＩＬ－２Ｒｂリガンドは、直前の３１段落で定義されるように、Ｘ１～Ｘ１７の任意の組み合わせによって定義され得る。
式（３）～（３ｅ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、
Ｘ１は、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、およびＷから選択され得、
Ｘ２は、Ｆ、Ｌ、Ｓ、Ｖ、Ｗ、およびＹから選択され得、
Ｘ３は、Ｆ、Ｈ、Ｋ、Ｌ、Ｎ、Ｑ、Ｗ、およびＹから選択され得、
Ｘ４は、ＤおよびＰから選択され得、
Ｘ５は、Ｆ、Ｌ、Ｓ、Ｗ、およびＹから選択され得、
Ｘ６は、Ｆ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｒ、およびＶから選択され得、
Ｘ７は、Ａであり得、
Ｘ８は、Ｈ、Ｋ、Ｌ、Ｑ、Ｒ、およびＳから選択され得、
Ｘ９は、Ｉ、Ｌ、およびＶから選択され得、
Ｘ１０は、Ｇであり得、
Ｘ１１は、Ｄ、およびＥから選択され得、
Ｘ１２は、ＬおよびＶから選択され得、
Ｘ１３は、ＤおよびＥから選択され得、
Ｘ１４は、Ｆ、Ｉ、Ｌ、およびＭから選択され得、
Ｘ１５は、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、およびＶから選択され得、
Ｘ１６は、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｋ、Ｐ、Ｖ、およびＷから選択され得、
Ｘ１７は、Ａ、Ｅ、Ｇ、Ｐ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、およびＷから選択され得る。
式（３）～（３ｅ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、
Ｘ１は、Ｇ、Ｒ、およびＷから選択され得、
Ｘ２は、ＦおよびＷから選択され得、
Ｘ３は、Ｆ、Ｈ、Ｌ、Ｗ、およびＹから選択され得、
Ｘ４は、ＤおよびＰから選択され得、
Ｘ５は、Ｆ、Ｗ、およびＹから選択され得、
Ｘ６は、Ｉ、Ｌ、およびＭから選択され得、
Ｘ７は、Ａであり得、
Ｘ８は、Ｑであり得、
Ｘ９は、ＬおよびＶから選択され得、
Ｘ１０は、Ｇであり得、
Ｘ１１は、Ｅであり得、
Ｘ１２は、Ｌであり得、
Ｘ１３は、Ｄであり得、
Ｘ１４は、Ｌであり得、
Ｘ１５は、Ｄ、Ｅ、Ｆ、およびＧから選択され得、
Ｘ１６は、Ｇであり得、
Ｘ１７は、Ｇであり得る。
ＩＬ－２Ｒβリガンドは、配列番号２６６７～２８９１のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含み得る。





本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβリガンドは、配列番号２６６１～２８９１のうちのいずれか１つの切断アミノ酸配列を含み得る。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβリガンドは、配列番号２６６１～２８９１のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列、または配列番号２６６１～２８９１のうちのいずれか１つの切断アミノ酸配列を含み得、アミノ酸配列は、独立して、Ｎ末端上、Ｃ末端上、またはＮ末端およびＣ末端の両方上に１～４個のグリシン（Ｇ）（配列番号９４２９）を含み得る。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβリガンドは、配列番号２６６１～２８９１のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列、または配列番号２６６１～２８９１のうちのいずれか１つの切断アミノ酸配列を含み得、アミノ酸配列は、１～５個のアミノ酸置換などの、１つ以上のアミノ酸置換を含む。アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換を含み得る。
ＩＬ－２Ｒβリガンドは、配列番号２６６１～２８９１のうちのいずれか１つのアミノ酸配列、または配列番号２６６１～２８９１のうちのいずれか１つの切断アミノ酸配列に対して、６０％超、７０％超、７５％超、８０％超、８５％超、９０％超、または９５％超のアミノ酸配列類似性を有するアミノ酸配列を含み得る。
配列番号２６６１～２８９１のうちのいずれか１つのＩＬ－２Ｒβリガンド、配列番号２６６１～２８９１のうちのいずれか１つの切断ＩＬ－２Ｒβリガンド、または配列番号２６６１～２８９１のうちのいずれか１つの置換ＩＬ－２Ｒβリガンドは、ファージＥＬＩＳＡ競合アッセイを使用して決定して、１００μＭ未満または１０μＭ未満のＩＣ５０でｈＩＬ－２Ｒβサブユニットに結合することができ、１００μＭ未満または１０μＭ未満のＩＣ５０でｃｙｎｏＩＬ－２Ｒβサブユニットに結合することができる。
ファージＥＬＩＳＡ競合アッセイを使用して決定して、１００μＭ未満のＩＣ５０でｈＩＬ－２Ｒβサブユニットに結合した、配列番号２６６７～２８９１のうちのいずれか１つのＩＬ－２Ｒβリガンド。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβリガンドは、式（４）のアミノ酸配列（配列番号２９００）、式（４ａ）のアミノ酸配列（配列番号２９０１）、式（４ｂ）のアミノ酸配列（配列番号２９０２）、式（４ｃ）のアミノ酸配列（配列番号２９０３）、式（４ｄ）のアミノ酸配列（配列番号２９０４）、式（４ｅ）のアミノ酸配列（配列番号２９０５）、または式（４ｆ）のアミノ酸配列（配列番号２９０６）を含むことができる。

式中、
Ｘ１は、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、およびＴから選択され得、
Ｘ２は、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｓ、Ｗ、およびＹから選択され得、
Ｘ３は、Ｆ、Ｉ、Ｌ、およびＶから選択され得、
Ｘ４は、Ｈ．Ｋ、Ｌ、Ｐ、Ｒ、Ｖ、およびＹから選択され得、
Ｘ５は、Ｄであり得、
Ｘ６は、Ｆ、Ｌ、およびＹから選択され得、
Ｘ７は、Ｆ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｖ、およびＷから選択され得、
Ｘ８は、ＡおよびＶから選択され得、
Ｘ９は、Ｋ、Ｌ、Ｎ、Ｑ、およびＲから選択され得、
Ｘ１０は、ＡおよびＶから選択され得、
Ｘ１１は、Ｇであり得、
Ｘ１２は、ＤおよびＥから選択され得、
Ｘ１３は、Ｌ、Ｔ、およびＶから選択され得、
Ｘ１４は、Ｄ、Ｅ、Ｓ、およびＶから選択され得、
Ｘ１５は、Ｆ、Ｉ、Ｋ、およびＬから選択され得、
Ｘ１６は、ＦおよびＷから選択され得、
Ｘ１７は、Ｄ、Ｆ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｎ、Ｐ、Ｖから選択され得、
Ｘ１８は、Ｄ、Ｇ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ Ｖ、およびＷから選択され得る。
式（４）～（４ｅ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ２は、Ｗであり得る。
式（４）～（４ｅ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ６は、Ｆであり得る。
式（４）～（４ｅ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ７は、ＦおよびＬから選択され得る
式（４）～（４ｅ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ８は、Ａであり得る。
式（４）～（４ｅ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ９は、Ｋであり得る。
式（４）～（４ｅ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ１０は、Ｖであり得る。
式（４）～（４ｅ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ１３は、Ｌであり得る。
式（４）～（４ｅ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ１４は、Ｄであり得る。
式（４）～（４ｅ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ１５は、Ｌであり得る。
式（４）～（４ｅ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ１６は、Ｆであり得る。
式（４）～（４ｅ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ１７は、Ｌであり得る。
式（４）～（４ｅ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、Ｘ１８は、Ｗであり得る。
式（４）～（４ｅ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、ＩＬ－２Ｒｂリガンドは、直前の１２段落［２７３］～［２８６］で定義されるように、Ｘ１～Ｘ１８の任意の組み合わせによって定義され得る。
ＩＬ－２Ｒβリガンドは、配列番号２９０７～２９２６のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含み得る。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβリガンドは、配列番号２９００～２９２６のうちのいずれか１つの切断アミノ酸配列を含み得る。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβリガンドは、配列番号２９００～２９２６のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列、または配列番号２９００～２９２６のうちのいずれか１つの切断アミノ酸配列を含み得、アミノ酸配列は、独立して、Ｎ末端上、Ｃ末端上、またはＮ末端およびＣ末端の両方上に１～４個のグリシン（Ｇ）（配列番号９４２９）を含み得る。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβリガンドは、配列番号２９００～２９２６のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列、または配列番号２９００～２９２６のうちのいずれか１つの切断アミノ酸配列を含み得、アミノ酸配列は、１～５個のアミノ酸置換などの、１つ以上のアミノ酸置換を含む。アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換を含み得る。
ＩＬ－２Ｒβリガンドは、配列番号２９００～２９２６のうちのいずれか１つのアミノ酸配列、または配列番号２９００～２９２６のうちのいずれか１つの切断アミノ酸配列に対して、６０％超、７０％超、７５％超、８０％超、８５％超、９０％超、または９５％超のアミノ酸配列類似性を有するアミノ酸配列を含み得る。
配列番号２９００～２９２６のうちのいずれか１つのＩＬ－２Ｒβリガンド、配列番号２９００～２９２６のうちのいずれか１つの切断ＩＬ－２Ｒβリガンド、または配列番号２９００～２９２６のうちのいずれか１つの置換ＩＬ－２Ｒβリガンドは、ファージＥＬＩＳＡ競合アッセイを使用して決定して、１００μＭ未満または１０μＭ未満のＩＣ５０でｈＩＬ－２Ｒβサブユニットに結合することができる。
ファージＥＬＩＳＡ競合アッセイを使用して決定して、１００μＭ未満のＩＣ５０でｈＩＬ－２Ｒβサブユニットに結合した、配列番号２９０７～２９２６のうちのいずれか１つのＩＬ－２Ｒβリガンド。
配列番号２５７５～２６５５、２６６１～２８９１、２９００～２９８６、および２９２９～２９３９を有する特定のＩＬ－２Ｒβリガンドは、ファージＥＬＩＳＡ競合アッセイを使用して決定して、１００μＭ未満のＩＣ５０でｈＩＬ－２Ｒβサブユニットに結合し、１００μＭ未満のＩＣ５０でｃｙｎｏ－ＩＬ－２Ｒβサブユニットに結合した。
ＩＬ－２Ｒβリガンドは、配列番号９１１～９３０、２９２９～２９３９、９３０１および９３０８のうちのいずれかのアミノ酸配列を有することができる。

表１に示すように、ＩＬ－２Ｒβリガンドは、ＩＬ－２Ｒβリガンド（ＢＬ１）～（ＢＬ１２）のうちのいずれか１つから選択され得、配列番号６１２、６６４、６７１、８６５、８５６、８５８、８６４、８６９、８７０、８７４、８７５、または９０１を有し得る。
ＩＬ－２Ｒβリガンドは、配列番号６１２、６６４、６７１、８６５、８５６、８５８、８６４、８６９、８７０、８７４、８７５、および９０１のうちのいずれか１つのアミノ酸配列に対して、６０％超、７０％超、７５％超、８０％超、８５％超、９０％超、または９５％超のアミノ酸配列類似性を有するアミノ酸配列を含み得る。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβリガンドは、配列番号６１２、６６４、６７１、８６５、８５６、８５８、８６４、８６９、８７０、８７４、８７５、および９０１のうちのいずれか１つの切断アミノ酸配列を含み得る。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβリガンドは、配列番号６１２、６６４、６７１、８６５、８５６、８５８、８６４、８６９、８７０、８７４、８７５、および９０１のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列、または配列番号６１２、６６４、６７１、８６５、８５６、８５８、８６４、８６９、８７０、８７４、８７５、および９０１のうちのいずれか１つの切断アミノ酸配列を含み得、アミノ酸配列は、独立して、Ｎ末端上、Ｃ末端上、またはＮ末端およびＣ末端の両方上に１～４個のグリシン（Ｇ）（配列番号９４２９）を含み得る。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβリガンドは、配列番号６１２、６６４、６７１、８６５、８５６、８５８、８６４、８６９、８７０、８７４、８７５、および９０１のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列、または配列番号６１２、６６４、６７１、８６５、８５６、８５８、８６４、８６９、８７０、８７４、８７５、および９０１のうちのいずれか１つの切断アミノ酸配列を含み得、アミノ酸配列は、１～５個のアミノ酸置換などの、１つ以上のアミノ酸置換を含む。アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換を含み得る。
ＩＬ－２Ｒβリガンドは、配列番号６１２、６６４、６７１、８６５、８５６、８５８、８６４、８６９、８７０、８７４、８７５、および９０１のうちのいずれか１つのアミノ酸配列、または配列番号６１２、６６４、６７１、８６５、８５６、８５８、８６４、８６９、８７０、８７４、８７５、および９０１のうちのいずれか１つのアミノ酸配列に対して、６０％超、７０％超、７５％超、８０％超、８５％超、９０％超、または９５％超のアミノ酸配列類似性を有するアミノ酸配列を含み得る。
配列番号６１２、６６４、６７１、８６５、８５６、８５８、８６４、８６９、８７０、８７４、８７５、および９０１のうちのいずれか１つのＩＬ－２Ｒβリガンドは、ファージＥＬＩＳＡ競合アッセイを使用して決定して、１０μＭ未満のＩＣ５０でｈＩＬ－２Ｒβサブユニットに結合することができる。
配列番号６１２、６６４、６７１、８６５、８５６、８５８、８６４、８６９、８７０、８７４、８７５、および９０１のうちのいずれか１つのＩＬ－２Ｒβリガンド、配列番号６１２、６６４、６７１、８６５、８５６、８５８、８６４、８６９、８７０、８７４、８７５、および９０１のうちのいずれか１つの切断ＩＬ－２Ｒβリガンド、または配列番号６１２、６６４、６７１、８６５、８５６、８５８、８６４、８６９、８７０、８７４、８７５、および９０１のうちのいずれか１つの置換ＩＬ－２Ｒβリガンドは、ファージＥＬＩＳＡ競合アッセイを使用して決定して、１００μＭ未満または１０μＭ未満のＩＣ５０でｈＩＬ－２Ｒβサブユニットに結合することができる。
本開示によって提供される特定のＩＬ－２Ｒβリガンドは、ＩＬ－２が結合するｈＩＬ－２Ｒβサブユニット上のｈＩＬ－２Ｒβ結合部位とは異なる、ｈＩＬ－２Ｒβサブユニット上の特異的結合部位に結合することができる。
これらのＩＬ－２Ｒβリガンドは、ＩＬ－２との特異的ＩＬ－２結合部位への結合について競合せず、ｈＩＬ－２Ｒγｃサブユニットへの検出可能な結合を有さず、１０μＭ未満のＩＣ５０でｈＩＬ－２Ｒβサブユニットに結合する。
ｈＩＬ－２Ｒβサブユニット上の特異的結合部位は、少なくとも以下の特性によって特徴付けられ得る。（１）ＩＬ－２Ｒβリガンドの群は、１０μＭ未満のＩＣ５０でＩＬ－２Ｒβサブユニット上の特異的結合部位に結合する；（２）群内の各ＩＬ－２Ｒβリガンドは、群内の他のＩＬ－２Ｒβリガンドのそれぞれと、ＩＬ－２Ｒβサブユニット上の特異的結合部位に競合的に結合する；（３）配列番号１０４４のアミノ酸配列を有するペプチドは、ＩＬ－２Ｒβリガンドの群内のペプチドと、ＩＬ－２Ｒβサブユニット上の特異的結合部位への結合について競合しない；かつ（４）配列番号５８、１６９、および１０４２を有するＩＬ－２Ｒβリガンドは、ＩＬ－２Ｒβに結合するＩＬ－２と競合的に結合せず、このＩＬ－２Ｒβリガンド結合部位は、ＩＬ－２のものとは異なることを示す。
ＩＬ－２Ｒβリガンドの群は、配列番号５８、８３、１４２、１６９、１７０、および６６３のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を有する少なくともＩＬ－２Ｒβリガンドを含む。
配列番号２２４のアミノ酸配列を有するＩＬ－２Ｒγｃリガンドは、特異的結合部位への結合についてＩＬ－２Ｒβリガンドの群と競合しない。
ＩＬ－２Ｒβリガンドの群が結合するＩＬ－２Ｒβサブユニット上のこの特異的結合部位は、例えば、実施例２７および２８に記載されるように、競合結合アッセイを使用して特徴付けることができる。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβリガンドは、ｐＨバイアスＩＬ－２Ｒβリガンドであり得る。
ｐＨバイアスＩＬ－２Ｒβリガンドは、ＩＬ－２Ｒβサブユニットに、ｐＨ７．５でのＩＬ－２Ｒβサブユニットへの結合についてのＩＣ５０より少なくとも１０％低い、ｐＨ６でのＩＣ５０で結合することができる。
例えば、ｐＨ６．０でのヒトＩＬ－２Ｒβリガンドの結合についてのＩＣ５０は０．５μＭであり得、ｐＨ７．５での同じＩＬ－２Ｒβリガンドの結合についてのＩＣ５０は１μＭであり得る。ｐＨバイアスＩＬ－２Ｒβリガンドは、ｐＨ７．５でのヒトＩＬ－２Ｒβサブユニットへの結合についてのＩＣ５０より少なくとも１０％低い、ｐＨ７．５でのヒトＩＬ－２Ｒβサブユニットへの結合についてのＩＣ５０より少なくとも２５％低い、少なくとも５０％低い、少なくとも１００％低い、または少なくとも２００％低いＩＣ５０で、ｐＨ６．０でＩＬ－２Ｒβサブユニットに結合することができる。
ｐＨバイアス結合親和性（ＩＣ５０）は、実施例２４～２７に記載されるように決定され得る。
ｐＨバイアスＩＬ－２Ｒβリガンドは、例えば、５～３０個のアミノ酸を含み得る。
ｐＨバイアスＩＬ－２Ｒβリガンドは、例えば、１ｐＭ～１００μＭのＩＣ５０で、ｐＨ６．０でヒトＩＬ－２Ｒβサブユニットに結合することができ、ｐＨ７．５で１００μＭより大きいＩＣ５０でヒトＩＬ－２Ｒβサブユニットに結合することができる。
ｐＨバイアスＩＬ－２Ｒβリガンドは、例えば、０．１μＭ～５０μＭのＩＣ５０で、ｐＨ６．０でヒトＩＬ－２Ｒβサブユニットに結合することができ、ｐＨ７．５で１００μＭより大きいＩＣ５０でヒトＩＬ－２Ｒβサブユニットに結合することができる。
ｐＨバイアスＩＬ－２Ｒβリガンドは、例えば、１００μＭ未満のＩＣ５０で、ｐＨ６．０でヒトＩＬ－２Ｒβサブユニットに結合することができ、例えば、ｐＨ７．５で１００μＭより大きいＩＣ５０でヒトＩＬ－２Ｒβサブユニットに結合することができる。
ｐＨバイアスＩＬ－２Ｒβリガンドは、例えば、１００μＭ未満のＩＣ５０で、ｐＨ６．０で哺乳動物ＩＬ－２Ｒβサブユニットに結合することができ、ｐＨ７．５で１００μＭより大きいＩＣ５０でヒトＩＬ－２Ｒβサブユニットに結合することができる。
ｐＨバイアスＩＬ－２Ｒβリガンドは、実施例２３および２４に記載される方法を使用して同定され得る。酸性バイアス親和性選択に基づくこれらの方法は、固形腫瘍微小環境と同等のｐＨ６．５未満のｐＨで増加した結合親和性を有し、正常組織の微小環境と同等のｐＨ７．０より大きいｐＨで減少した結合親和性を有するＩＬ－２Ｒβリガンドを同定するために使用されている。
ＩＬ－２Ｒγｃリガンドは、参照によりその全体が組み込まれる、米国特許出願公開第２０２０／００４００３６Ａ１号に開示されているＩＬ－２Ｒγｃリガンドを含み得る。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒγｃリガンドは、ヒトＩＬ－２Ｒγｃサブユニットに、１００μＭ未満、１０μＭ未満、１μＭ未満、０．１μＭ未満、または０．０１μＭ未満のＩＣ５０で結合することができる。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒγｃリガンドは、１ｐＭ～１００μＭ、１０ｐＭ～１０μＭ、１００ｐＭ～１μＭ、０．００１μＭ～１μＭ、または０．０１μＭ～１μＭのＩＣ５０でヒトＩＬ－２Ｒγｃサブユニットに結合することができる。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒγｃリガンドは、哺乳動物ＩＬ－２Ｒγｃサブユニットに、例えば、１００μＭ未満、１０μＭ未満、１μＭ未満、０．１μＭ未満、または０．０１μＭのＩＣ５０で結合することができる。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒγｃリガンドは、哺乳動物ＩＬ－２Ｒγｃサブユニットに、例えば、１ｐＭ～１００μＭ、１０ｐＭ～１０μＭ、１００ｐＭ～１μＭ、０．００１μＭ～１μＭ、または０．０１μＭ～１μＭのＩＣ５０で結合することができる。
ＩＬ－２Ｒγｃリガンドは、式（５）（配列番号９４４）、式（５ａ）（配列番号９４５）、式（５ｂ）（配列番号９４６）、式（５ｃ）（配列番号９４７）、式（５ｄ）（配列番号９４８）、および／または式（５ｅ）（配列番号９４９）のアミノ酸配列を含み得る。

式中、Ｘ１７１は、塩基性側鎖を含むアミノ酸から選択することができ、Ｘ１７２は、ヒドロキシル含有側鎖を含むアミノ酸から選択することができ、Ｘ１７３は、酸性側鎖または大きな疎水性側鎖を含むアミノ酸から選択することができ、Ｘ１７４は、大きな疎水性側鎖を含むアミノ酸から選択することができ、Ｘ１７５は、酸性側鎖または大きな疎水性側鎖を含むアミノ酸から選択することができ、Ｘ１７６は、酸性側鎖または極性／中性側鎖を含むアミノ酸から選択することができ、Ｘ１７７は、酸性側鎖を含むアミノ酸から選択することができ、Ｘ１７８は、大きな疎水性側鎖または芳香族側鎖を含むアミノ酸から選択することができ、Ｘ１７９は、酸性側鎖または極性／中性側鎖を含むアミノ酸から選択することができ、Ｘ１８０はＧであることができ、Ｘ１８１はＶであることができ、Ｘ１８２はＥであることができ、Ｘ１８３はＬであることができ、Ｘ１８４はＷであることができ、Ｘ１８５は、大きな疎水性側鎖を含むアミノ酸から選択することができ、Ｘ１８６はＥであることができ、Ｘ１８７は、アミノ酸から選択することができ、Ｘ１８８は、酸性側鎖を含むアミノ酸から選択することができる。
式（５）、（５ａ）、（５ｂ）、（５ｃ）、（５ｄ）、および／または（５ｅ）のＩＬ－２Ｒγｃリガンドにおいて、Ｘ１７１は、Ｈ、Ｋ、およびＲから選択することができ、Ｘ１７２は、Ｓ、Ｔ、およびＹから選択することができ、Ｘ１７３は、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｖ、Ｗ、およびＹから選択することができ、Ｘ１７４は、Ｆ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｖ、Ｗ、およびＹから選択することができ、Ｘ１７５は、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｖ、Ｗ、およびＹから選択することができ、Ｘ１７６は、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、およびＹから選択することができ、Ｘ１７７は、ＤおよびＥから選択することができ、Ｘ１７８は、Ｆ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｖ、Ｗ、およびＹから選択することができ、Ｘ１７９は、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、およびＹから選択することができ、Ｘ１８０は、Ｇであることができ、Ｘ１８１は、Ｖであることができ、Ｘ１８２は、Ｅであることができ、Ｘ１８３は、Ｌであることができ、Ｘ１８４は、Ｗであることができ、Ｘ１８５は、Ｆ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｖ、Ｗ、Ｙ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、およびＴから選択することができ、Ｘ１８６は、Ｅであることができ、Ｘ１８７は、アミノ酸から選択することができ、Ｘ１８８は、ＤおよびＥから選択することができる。
式（５）、（５ａ）、（５ｂ）、（５ｃ）、（５ｄ）、および／または（５ｅ）のＩＬ－２Ｒγｃリガンドにおいて、Ｘ１７１は、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｋ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、およびＴから選択することができ、Ｘ１７２は、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、およびＹから選択することができ、Ｘ１７３は、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｉ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、およびＹから選択することができ、Ｘ１７４は、Ａ、Ｉ、Ｅ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、およびＶから選択することができ、Ｘ１７５は、Ａ、Ｅ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、およびＶから選択することができ、Ｘ１７６は、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｌ、Ｑ、Ｒ、およびＶから選択することができ、Ｘ１７７は、Ｄ、Ｅ、Ｎ、Ｔ、およびＶから選択することができ、Ｘ１７８は、Ｆ、Ｓ、Ｗ、およびＹから選択することができ、Ｘ１７９は、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｋ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、およびＹから選択することができ、Ｘ１８０は、ＧおよびＲから選択することができ、Ｘ１８１はＶであることができ、Ｘ１８２は、Ｄ、Ｅ、およびＹから選択することができ、Ｘ１８３は、Ｆ、Ｉ、およびＬから選択することができ、Ｘ１８４はＷであることができ、Ｘ１８５は、Ｃ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｐ、Ｑ、Ｔ、Ｖ、およびＹから選択することができ、Ｘ１８６は、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｍ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、およびＶから選択することができ、Ｘ１８７は、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｉ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、およびＹから選択することができ、Ｘ１８８は、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、およびＶから選択することができる。
式（５）、（５ａ）、（５ｂ）、（５ｃ）、（５ｄ）、および／または（５ｅ）のＩＬ－２Ｒγｃリガンドにおいて、Ｘ１７１は、Ｈ、Ｋ、およびＲから選択することができ、Ｘ１７２は、Ｓ、Ｔ、およびＹから選択することができ、Ｘ１７３は、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｉ、およびＶから選択することができ、Ｘ１７４は、ＩおよびＶから選択することができ、Ｘ１７５は、Ｅ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、およびＶから選択することができ、Ｘ１７６は、Ｄ、Ｅ、およびＱから選択することができ、Ｘ１７７は、ＤおよびＥから選択することができ、Ｘ１７８は、ＦおよびＷから選択することができ、Ｘ１７９は、Ｄ、Ｅ、Ｎ、およびＱから選択することができ、Ｘ１８０は、Ｇであることができ、Ｘ１８１は、Ｖであることができ、Ｘ１８２は、ＤおよびＥから選択することができ、Ｘ１８３は、Ｌであることができ、Ｘ１８４は、Ｗであることができ、Ｘ１８５は、Ｉ、Ｌ、Ｑ、およびＶから選択することができ、Ｘ１８６は、ＤおよびＥから選択することができ、Ｘ１８７は、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｉ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、およびＷ、およびＹから選択することができ、Ｘ１８８は、Ｄ、Ｅ、Ｎ、およびＱから選択することができる。
式（５）、（５ａ）、（５ｂ）、（５ｃ）、（５ｄ）、および／または（５ｅ）のＩＬ－２Ｒγｃリガンドにおいて、Ｘ１７１は、ＫおよびＲから選択することができ、Ｘ１７２は、Ｓ、Ｔ、およびＹから選択することができ、Ｘ１７３は、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｉ、およびＶから選択することができ、Ｘ１７４は、Ｖであることができ、Ｘ１７５は、Ｅ、Ｌ、Ｍ、およびＶから選択することができ、Ｘ１７６は、Ｑであることができ、Ｘ１７７は、ＤおよびＥから選択することができ、Ｘ１７８はＷであることができ、Ｘ１７９、Ｄ、Ｅ、Ｎ、およびＱから選択することができ、Ｘ１８０は、Ｇであることができ、Ｘ１８１は、Ｖであることができ、Ｘ１８２は、Ｅであることができ、Ｘ１８３は、Ｌであることができ、Ｘ１８４は、Ｗであることができ、Ｘ１８５は、Ｉ、Ｌ、Ｑ、およびＶから選択することができ、Ｘ１８６は、ＤおよびＥから選択することができ、Ｘ１８７は、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｉ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、およびＹから選択することができ、Ｘ１８８は、Ｄ、Ｅ、Ｎ、およびＱから選択することができる。
式（５）のＩＬ－２Ｒγｃリガンドでは、Ｘ１７１は、Ｈ、Ｋ、およびＲから選択され得る。
式（５）～（５ａ）のＩＬ－２Ｒγｃリガンドにおいて、Ｘ１７２は、Ｓ、Ｔ、およびＹから選択され得る。
式（５）～（５ｂ）のＩＬ－２Ｒγｃリガンドにおいて、Ｘ１７３は、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｖ、Ｗ、およびＹから選択され得る。
式（５）～（５ｂ）のＩＬ－２Ｒγｃリガンドにおいて、Ｘ１７３は、ＤおよびＥから選択され得る。
式（５）～（５ｂ）のＩＬ－２Ｒγｃリガンドにおいて、Ｘ１７３は、Ｆ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｖ、Ｗ、およびＹから選択され得る。
式（５）～（５ｃ）のＩＬ－２Ｒγｃリガンドにおいて、Ｘ１７４は、Ｆ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｖ、Ｗ、およびＹから選択され得る。
式（５）～（５ｃ）のＩＬ－２Ｒγｃリガンドにおいて、Ｘ１７４は、Ｖであり得る。
式（５）～（５ｄ）のＩＬ－２Ｒγｃリガンドにおいて、Ｘ１７５は、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｖ、Ｗ、およびＹから選択され得る。
式（５）～（５ｄ）のＩＬ－２Ｒγｃリガンドにおいて、Ｘ１７５は、ＤおよびＥから選択され得る。
式（５）～（５ｄ）のＩＬ－２Ｒγｃリガンドにおいて、Ｘ１７５は、Ｆ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｖ、Ｗ、およびＹから選択され得る。
式（５）～（５ｅ）のＩＬ－２Ｒγｃリガンドにおいて、Ｘ１７６は、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、およびＹから選択され得る。
式（５）～（５ｅ）のＩＬ－２Ｒγｃリガンドにおいて、Ｘ１７６は、ＥおよびＱから選択され得る。
式（５）～（５ｅ）のＩＬ－２Ｒγｃリガンドにおいて、Ｘ１７７は、ＤおよびＥから選択され得る。
式（５）～（５ｅ）のＩＬ－２Ｒγｃリガンドにおいて、Ｘ１７８は、Ｆ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｖ、Ｗ、およびＹから選択され得る。
式（５）～（５ｅ）のＩＬ－２Ｒγｃリガンドにおいて、Ｘ１７８は、Ｆ、Ｈ、Ｗ、およびＹから選択され得る。
式（５）～（５ｅ）のＩＬ－２Ｒγｃリガンドにおいて、Ｘ１７８は、Ｗであり得る。
式（５）～（５ｅ）のＩＬ－２Ｒγｃリガンドにおいて、Ｘ１７９は、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、およびＹから選択され得る。
式（５）～（５ｅ）のＩＬ－２Ｒγｃリガンドにおいて、Ｘ１７９は、Ｄ、Ｅ、およびＱから選択され得る。
式（５）～（５ｅ）のＩＬ－２Ｒγｃリガンドにおいて、Ｘ１８０は、Ｇであり得る。
式（５）～（５ｅ）のＩＬ－２Ｒγｃリガンドにおいて、Ｘ１８１は、Ｖであり得る。
式（５）～（５ｅ）のＩＬ－２Ｒγｃリガンドにおいて、Ｘ１８２は、Ｅであり得る。
式（５）～（５ｅ）のＩＬ－２Ｒγｃリガンドにおいて、Ｘ１８３は、Ｌであり得る。
式（５）～（５ｄ）のＩＬ－２Ｒγｃリガンドにおいて、Ｘ１８４は、Ｗであり得る。
式（５）～（５ｃ）のＩＬ－２Ｒγｃリガンドにおいて、Ｘ１８５は、Ｆ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｖ、Ｗ、およびＹから選択され得る。
式（５）～（５ｃ）のＩＬ－２Ｒγｃリガンドにおいて、Ｘ１８５は、Ｌであり得る。
式（５）～（５ｂ）のＩＬ－２Ｒγｃリガンドにおいて、Ｘ１８６は、Ｅであり得る。
式（５）～（５ａ）のＩＬ－２Ｒγｃリガンドにおいて、Ｘ１８７は、アミノ酸から選択され得る。
式（５）のＩＬ－２Ｒγｃリガンドにおいて、Ｘ１８８は、ＤおよびＥから選択され得る。
式（５）、（５ａ）、（５ｂ）、（５ｃ）、（５ｄ）、および／または（５ｅ）のＩＬ－２Ｒγｃリガンドにおいて、Ｘ１７１は、Ｈ、Ｋ、およびＲから選択することができ、Ｘ１７２は、Ｓ、Ｔ、およびＹから選択することができ、Ｘ１７３は、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｖ、Ｗ、およびＹから選択することができ、Ｘ１７４は、Ｆ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｖ、Ｗ、およびＹから選択することができ、Ｘ１７５は、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｖ、Ｗ、およびＹから選択することができ、Ｘ１７６は、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、およびＹから選択することができ、Ｘ１７７は、ＤおよびＥから選択することができ、Ｘ１７８は、Ｆ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｖ、Ｗ、およびＹから選択することができ、Ｘ１７９は、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、およびＹから選択することができ、Ｘ１８０は、Ｇであることができ、Ｘ１８１は、Ｖであることができ、Ｘ１８２は、Ｅであることができ、Ｘ１８３は、Ｌであることができ、Ｘ１８４は、Ｗから選択することができ、Ｘ１８５は、Ｆ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｖ、Ｗ、およびＹから選択することができ、Ｘ１８６は、Ｅであることができ、Ｘ１８７は、アミノ酸から選択することができ、Ｘ１８８は、ＤおよびＥから選択することができる。
式（５）、（５ａ）、（５ｂ）、（５ｃ）、（５ｄ）、および／または（５ｅ）のＩＬ－２Ｒγｃリガンドにおいて、Ｘ１７１は、Ｈ、Ｋ、およびＲから選択することができ、Ｘ１７２は、Ｓ、Ｔ、およびＹから選択することができ、Ｘ１７３は、ＤおよびＥから選択することができ、Ｘ１７４は、Ｖであることができ、Ｘ１７５は、ＤおよびＥから選択することができ、Ｘ１７６は、ＥおよびＱから選択することができ、Ｘ１７７は、ＤおよびＥから選択することができ、Ｘ１７８は、Ｆ、Ｈ、Ｗ、およびＹから選択することができ、Ｘ１７９は、Ｄ、Ｅ、およびＱから選択することができ、Ｘ１８０は、Ｇであることができ、Ｘ１８１は、Ｖであることができ、Ｘ１８２は、Ｅであることができ、Ｘ１８３は、Ｌであることができ、Ｘ１８４は、Ｗであることができ、Ｘ１８５は、Ｆ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｖ、Ｗ、Ｙ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、およびＴから選択することができ、Ｘ１８６は、Ｅであることができ、Ｘ１８７は、アミノ酸から選択することができ、Ｘ１８８は、ＤおよびＥから選択することができる。
式（５）、（５ａ）、（５ｂ）、（５ｃ）、（５ｄ）、および／または（５ｅ）のＩＬ－２Ｒγｃリガンドにおいて、Ｘ１７１は、Ｈ、Ｋ、およびＲから選択することができ、Ｘ１７２は、Ｓ、Ｔ、およびＹから選択することができ、Ｘ１７３は、Ｆ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｖ、Ｗ、およびＹから選択することができ、Ｘ１７４は、Ｖであることができ、Ｘ１７５は、Ｆ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｖ、Ｗ、およびＹから選択することができ、Ｘ１７６は、ＥおよびＱから選択することができ、Ｘ１７７は、ＤおよびＥから選択することができ、Ｘ１７８は、Ｆ、Ｈ、Ｗ、およびＹから選択することができ、Ｘ１７９は、Ｄ、Ｅ、およびＱから選択することができ、Ｘ１８０は、Ｇであることができ、Ｘ１８１は、Ｖであることができ、Ｘ１８２は、Ｅであることができ、Ｘ１８３は、Ｌであることができ、Ｘ１８４は、Ｗであることができ、Ｘ１８５は、Ｆ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｖ、Ｗ、Ｙ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、およびＴから選択することができ、Ｘ１８６は、Ｅであることができ、Ｘ１８７は、アミノ酸から選択することができ、Ｘ１８８は、ＤおよびＥから選択することができる。
式（５）、（５ａ）、（５ｂ）、（５ｃ）、（５ｄ）、および／または（５ｅ）のＩＬ－２Ｒγｃリガンドでは、Ｘ１７１は、Ｈ、Ｋ、およびＲから選択することができ、Ｘ１７２は、Ｓ、Ｔ、およびＹから選択することができ、Ｘ１７３は、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｖ、Ｗ、およびＹから選択することができ、Ｘ１７４は、Ｖであることができ、Ｘ１７５は、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｖ、Ｗ、およびＹから選択することができ、Ｘ１７６は、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、およびＹから選択することができ、Ｘ１７６は、ＥおよびＱから選択することができ、Ｘ１７７は、ＤおよびＥから選択することができ、Ｘ１７８は、Ｗであることができ、Ｘ１７９は、Ｄ、Ｅ、およびＱから選択することができ、Ｘ１８０は、Ｇであることができ、Ｘ１８１は、Ｖであることができ、Ｘ１８２は、Ｅであることができ、Ｘ１８３は、Ｌであることができ、Ｘ１８４は、Ｗであることができ、Ｘ１８５は、Ｆ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｖ、Ｗ、Ｙ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、およびＴから選択することができ、Ｘ１８６は、Ｅであることができ、Ｘ１８７は、アミノ酸から選択することができ、Ｘ１８８は、ＤおよびＥから選択することができる。
ＩＬ－２Ｒγｃリガンドは、配列番号９５０～１０２８のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含み得る。

ＩＬ－２Ｒγｃリガンドは、配列番号９４４～１０２８のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含み得、アミノ酸配列は、Ｎ末端上、Ｃ末端上、またはＮ末端およびＣ末端の両方上の－Ｇ－Ｇ（配列番号９３９９）などの隣接アミノ酸で終端し得る。
ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、配列番号９４４～１０２８のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含み得、アミノ酸配列は、Ｎ末端上、Ｃ末端上、またはＮ末端およびＣ末端の両方上の１つ以上のアミノ酸で終端し得る。例えば、アミノ酸配列は、末端グリシンおよび／またはセリンを含み得る。例えば、ＩＬ－２Ｒγｃリガンドは、Ｎ末端上、Ｃ末端上、またはＮ末端およびＣ末端の両方上に－Ｇ－Ｇ－部分（配列番号９３９９）を含み得る。
ＩＬ－２Ｒγｃリガンドは、配列番号９４４～１０２８のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含み得、各アミノ酸が、独立して、以下の保存的置換：アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、プロリン（Ｐ）、セリン（Ｓ）、またはトレオニン（Ｔ）を含む小さな疎水性側鎖を有するアミノ酸；セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、またはチロシン（Ｙ）を含むヒドロキシル含有側鎖を有するアミノ酸；アスパラギン酸（Ｄ）、またはグルタミン酸（Ｅ）を含む酸性側鎖を有するアミノ酸；ヒスチジン（Ｈ）、アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、またはチロシン（Ｙ）を含む極性中性側鎖を有するアミノ酸；アルギニン（Ｒ）、リジン（Ｋ）、またはヒスチジン（Ｈ）を含む塩基性側鎖を有するアミノ酸；イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、バリン（Ｖ）、フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、またはトリプトファン（Ｗ）を含む大きな疎水性側鎖を有するアミノ酸；ならびにフェニルアラニン（Ｆ）、ヒスチジン（Ｈ）、トリプトファン（Ｗ）、またはチロシン（Ｙ）を含む芳香族側鎖を有するアミノ酸のうちの１つ以上を含む。
配列番号９４４～１０２８のＩＬ－２Ｒγｃリガンドは、１００μＭ未満のＩＣ５０でヒトＩＬ－２Ｒγｃサブユニットに結合する。
ＩＬ－２Ｒγｃリガンドは、配列番号９４４～１０２８のうちのいずれか１つのアミノ酸配列に対して、６０％超、７０％超、７５％超、８０％超、８５％超、９０％超、または９５％超のアミノ酸類似性を有するアミノ酸配列を含み得る。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒγｃリガンドは、配列番号９４４～１０２８のうちのいずれか１つの切断アミノ酸配列を含み得る。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒγｃリガンドは、配列番号９４４～１０２８のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列、または配列番号９４４～１０２８のうちのいずれか１つの切断アミノ酸配列を含み得、アミノ酸配列は、独立して、Ｎ末端上、Ｃ末端上、またはＮ末端およびＣ末端の両方上に１～４個のグリシン（Ｇ）（配列番号９４２９）を含み得る。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒγｃリガンドは、配列番号９４４～１０２８のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列、または配列番号９４４～１０２８のうちのいずれか１つの切断アミノ酸配列を含み得、アミノ酸配列は、１～５個のアミノ酸置換などの、１つ以上のアミノ酸置換を含む。アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換を含み得る。
ＩＬ－２Ｒγｃリガンドは、配列番号９４４～１０２８のうちのいずれか１つのアミノ酸配列、または配列番号９４４～１０２８のうちのいずれか１つの切断アミノ酸配列に対して、６０％超、７０％超、７５％超、８０％超、８５％超、９０％超、または９５％超のアミノ酸配列類似性を有するアミノ酸配列を含み得る。
配列番号９４４～１０２８のうちのいずれか１つのＩＬ－２Ｒγｃリガンドは、ファージＥＬＩＳＡ競合アッセイを使用して決定して、１０μＭ未満のＩＣ５０でｈＩＬ－２Ｒγｃサブユニットに結合することができる。
配列番号９４４～１０２８のうちのいずれか１つのＩＬ－２Ｒγｃリガンド、配列番号９４４～１０２８のうちのいずれか１つの切断ＩＬ－２Ｒγｃリガンド、または配列番号９４４～１０２８のうちのいずれか１つの置換ＩＬ－２Ｒγｃリガンドは、ファージＥＬＩＳＡ競合アッセイを使用して決定して、１００μＭ未満または１０μＭ未満のＩＣ５０でｈＩＬ－２Ｒγｃサブユニットに結合することができる。
ＩＬ－２Ｒγｃリガンドは、配列番号９６５、９８０、９８１、９８５、１０２４、１０２６、および１０２８を有するＩＬ－２Ｒγｃリガンド（ＧＬ１）～（ＧＬ７）のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含み得る。これらのＩＬ－２Ｒγｃリガンドのアミノ酸配列を表２に示す。
ＩＬ－２Ｒγｃリガンドは、配列番号９６５、９８０、９８１、９８５、１０２４、１０２６、および１０２８のうちのいずれか１つのアミノ酸配列に対して、６０％超、７０％超、７５％超、８０％超、８５％超、９０％超、または９５％超のアミノ酸配列類似性を有するアミノ酸配列を含み得る。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒγｃリガンドは、配列番号９６５、９８０、９８１、９８５、１０２４、１０２６、および１０２８のうちのいずれか１つの切断アミノ酸配列を含み得る。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒγｃリガンドは、配列番号９６５、９８０、９８１、９８５、１０２４、１０２６、および１０２８のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列、または配列番号９６５、９８０、９８１、９８５、１０２４、１０２６、および１０２８のうちのいずれか１つの切断アミノ酸配列を含み得、アミノ酸配列は、独立して、Ｎ末端上、Ｃ末端上、またはＮ末端およびＣ末端の両方上に１～４個のグリシン（Ｇ）（配列番号９４２９）を含み得る。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒγｃリガンドは、配列番号９６５、９８０、９８１、９８５、１０２４、１０２６、および１０２８のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列、または配列番号９６５、９８０、９８１、９８５、１０２４、１０２６、および１０２８のうちのいずれか１つの切断アミノ酸配列を含み得、アミノ酸配列は、１～５個のアミノ酸置換などの、１つ以上のアミノ酸置換を含む。アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換を含み得る。
ＩＬ－２Ｒγｃリガンドは、配列番号９６５、９８０、９８１、９８５、１０２４、１０２６、および１０２８のうちのいずれか１つのアミノ酸配列、または配列番号９６５、９８０、９８１、９８５、１０２４、１０２６、および１０２８のうちのいずれか１つの切断アミノ酸配列に対して、６０％超、７０％超、７５％超、８０％超、８５％超、９０％超、または９５％超のアミノ酸配列類似性を有するアミノ酸配列を含み得る。
配列番号９６５、９８０、９８１、９８５、１０２４、１０２６、および１０２８のうちのいずれか１つのＩＬ－２Ｒγｃリガンドは、ファージＥＬＩＳＡ競合アッセイを使用して決定して、１０μＭ未満のＩＣ５０でｈＩＬ－２Ｒγｃサブユニットに結合することができる。
配列番号９６５、９８０、９８１、９８５、１０２４、１０２６、および１０２８のうちのいずれか１つのＩＬ－２Ｒγｃリガンド、配列番号９６５、９８０、９８１、９８５、１０２４、１０２６、および１０２８のうちのいずれか１つの切断ＩＬ－２Ｒγｃリガンド、または配列番号９６５、９８０、９８１、９８５、１０２４、１０２６、および１０２８のうちのいずれか１つの置換ＩＬ－２Ｒγｃリガンドは、ファージＥＬＩＳＡ競合アッセイを使用して決定して、１００μＭ未満または１０μＭ未満のＩＣ５０で、ｈＩＬ－２Ｒγｃサブユニットに結合することができる。
Ｒγｃリガンドは、配列番号１０３２、１０３４、１０４２、１０４４、１０５１～１０６０、および１６０１～１６１３のうちのいずれか１つを有することができる。

本開示によって提供されるＲγｃリガンドは、配列番号１０３２、１０３４、１０４２、１０４４、１０５１～１０６０、および１６０１～１６１３のうちのいずれか１つの切断アミノ酸配列を含み得る。
本開示によって提供されるＲγｃリガンドは、配列番号１０３２、１０３４、１０４２、１０４４、１０５１～１０６０、および１６０１～１６１３のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列、または配列番号１０３２、１０３４、１０４２、１０４４、１０５１～１０６０、および１６０１～１６１３のうちのいずれか１つの切断アミノ酸配列を含み得、アミノ酸配列は、独立して、Ｎ末端上、Ｃ末端上、またはＮ末端およびＣ末端の両方上に１～４個のグリシン（Ｇ）（配列番号９４２９）を含み得る。
本開示によって提供されるＲγｃリガンドは、配列番号１０３２、１０３４、１０４２、１０４４、１０５１～１０６０、および１６０１～１６１３のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列、または配列番号１０３２、１０３４、１０４２、１０４４、１０５１～１０６０、および１６０１～１６１３のうちのいずれか１つの切断アミノ酸配列を含み得、アミノ酸配列は、１～５個のアミノ酸置換などの、１つ以上のアミノ酸置換を含む。アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換を含み得る。
Ｒγｃリガンドは、配列番号１０３２、１０３４、１０４２、１０４４、１０５１～１０６０、および１６０１～１６１３のうちのいずれか１つのアミノ酸配列、または配列番号１０３２、１０３４、１０４２、１０４４、１０５１～１０６０、および１６０１～１６１３のうちのいずれか１つの切断アミノ酸配列に対して、６０％超、７０％超、７５％超、８０％超、８５％超、９０％超、または９５％超のアミノ酸配列類似性を有するアミノ酸配列を含み得る。
配列番号１０３２、１０３４、１０４２、１０４４、１０５１～１０６０、および１６０１～１６１３のうちのいずれか１つのＲγｃリガンド、配列番号１０３２、１０３４、１０４２、１０４４、１０５１～１０６０、および１６０１～１６１３のうちのいずれか１つの切断Ｒγｃリガンド、または配列番号１０３２、１０３４、１０４２、１０４４、１０５１～１０６０、および１６０１～１６１３のうちのいずれか１つの置換Ｒγｃリガンドは、ファージＥＬＩＳＡ競合アッセイを使用して決定して、１００μＭ未満または１０μＭ未満のＩＣ５０で、ｈＲγｃサブユニットに結合することができる。
配列番号１６０１～１６１３のうちのいずれか１つのＲγｃリガンドは、１００μＭ未満のＩＣ５０でｈＲγｃサブユニットに結合する。
本開示によって提供される特定のＩＬ－２Ｒγｃリガンドは、ＩＬ－２が結合するＩＬ－２Ｒγｃサブユニット上のＩＬ－２Ｒγｃ結合部位とは異なる、ＩＬ－２Ｒγｃサブユニット上の特異的結合部位に結合することができる。
これらのＩＬ－２Ｒγｃリガンドは、ＩＬ－２との特異的ＩＬ－２Ｒγｃ結合部位への結合について競合せず、ＩＬ－２Ｒβサブユニットへの検出可能な結合を有さず、１０μＭ未満のＩＣ５０でＩＬ－２Ｒγｃサブユニットに結合する。
ＩＬ－２Ｒγｃサブユニット上の特異的結合部位は、少なくとも以下の特性によって特徴付けられ得る。（１）ＩＬ－２Ｒγｃリガンドの群は、１０μＭ未満のＩＣ５０でｈＩＬ－２Ｒγｃサブユニット上の特異的結合部位に結合する；（２）群内のＩＬ－２Ｒγｃリガンドは、群内の他のＩＬ－２Ｒγｃリガンドと、ＩＬ－２Ｒγｃサブユニット上の特異的結合部位に競合的に結合する；かつ（３）群内のＩＬ－２Ｒγｃリガンドは、配列番号１０３２のアミノ酸配列を有するＩＬ－２Ｒγｃリガンドと、特異的結合部位への結合について競合しない。
配列番号５８のアミノ酸配列を有するＩＬ－２Ｒβリガンドは、結合部位への結合についてＩＬ－２Ｒγｃリガンドの群と競合しない。
ＩＬ－２Ｒγｃリガンドの群は、配列番号１９８、２０２、２２４、２３６、２４８、および２６６のアミノ酸配列を有するＩＬ－２Ｒγｃリガンド群を含む。
ＩＬ－２Ｒγｃリガンドの群内のＩＬ－２Ｒγｃリガンドは、１００μＭ未満のＩＣ５０でＩＬ－２Ｒγｃサブユニットに結合し、１００μＭ超のＩＣ５０でＩＬ－２Ｒβサブユニットに結合する。
これらのＩＬ－２ＲγｃリガンドについてのＩＬ－２Ｒβサブユニットの特異的結合部位は、例えば、実施例２４～２７に記載される競合結合アッセイを使用して特徴付けることができる。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒγｃリガンドは、ｐＨバイアスＩＬ－２Ｒγｃリガンドを含むことができる。
ｐＨバイアスＩＬ－２Ｒγｃリガンドは、ＩＬ－２Ｒγｃサブユニットに、ｐＨ７．５でのＩＬ－２Ｒγｃサブユニットへの同じＩＬ－２Ｒγｃリガンドの結合についてのＩＣ５０より低いＩＣ５０で、ｐＨ６で結合することができる。ｐＨバイアス結合親和性は、実施例２４～２７に記載されるように決定され得る。
ｐＨバイアスＩＬ－２Ｒγｃリガンドは、ｐＨ７．５でのヒトＩＬ－２Ｒγｃサブユニットへの結合についてのＩＣ５０より少なくとも少なくとも１０％低い、ｐＨ７．５でのヒトＩＬ－２Ｒγｃサブユニットへの結合についてのＩＣ５０より少なくとも２５％低い、少なくとも５０％低い、少なくとも１００％低い、または少なくとも２００％低いＩＣ５０で、ｐＨ６でヒトＩＬ－２Ｒγｃサブユニットに結合することができる。
ｐＨバイアスＩＬ－２Ｒγｃリガンドは、例えば、５～３０個のアミノ酸を含み得る。
ｐＨバイアスＩＬ－２Ｒγｃリガンドは、１ｐＭ～１００μＭのＩＣ５０で、ｐＨ６．０でヒトＩＬ－２Ｒγｃサブユニットに結合することができ、ｐＨ７．５で１００μＭより大きいＩＣ５０でヒトＩＬ－２Ｒγｃサブユニットに結合することができる。
ｐＨバイアスＩＬ－２Ｒγｃリガンドは、０．１μＭ～５０μＭのＩＣ５０で、ｐＨ６．０でヒトＩＬ－２Ｒγｃサブユニットに結合することができ、ｐＨ７．５で１００μＭより大きいＩＣ５０でヒトＩＬ－２Ｒγｃサブユニットに結合することができる。
ｐＨバイアスＩＬ－２Ｒγｃリガンドは、１００μＭ未満のＩＣ５０で、ｐＨ６．０でヒトＩＬ－２Ｒγｃサブユニットに結合することができる。
ｐＨバイアスＩＬ－２Ｒγｃリガンドは、１００μＭ未満のＩＣ５０でヒトＩＬ－２Ｒγｃサブユニットのそれぞれ、およびヒトＩＬ－２Ｒγｃサブユニットに結合することができ、ｐＨ７．５で１００μＭ超のＩＣ５０でヒトＩＬ－２Ｒγｃサブユニットに結合することができる。
ｐＨバイアスＩＬ－２Ｒγｃリガンドは、１００μＭ未満のＩＣ５０で、ｐＨ６．０で哺乳動物ＩＬ－２Ｒγｃサブユニットに結合することができ、ｐＨ７．５で１００μＭ超のＩＣ５０でヒトＩＬ－２Ｒγｃサブユニットに結合することができる。
ｐＨバイアスＩＬ－２Ｒγｃリガンドは、実施例２３および２４に記載される方法を使用して同定され得る。
ＩＬ－２Ｒβリガンド、ＩＬ－２Ｒγｃリガンド、およびＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、リガンドのＮ末端および／またはＣ末端に結合した任意の隣接アミノ酸を含まなくてもよい。
ＩＬ－２ＲβリガンドおよびＩＬ－２Ｒγｃリガンドは、リガンドのＮ末端および／またはＣ末端に結合した１つ以上の隣接アミノ酸を含み得る。
隣接アミノ酸は、ＩＬ－２Ｒと相互作用するリガンドの部分を、リガンド、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド、および／またはリガンド構築物の他の部分から分離することができる。
リガンドは、例えば、リガンドのＮ末端および／またはＣ末端に結合した、１～２０個のアミノ酸、１～１０個のアミノ酸、例えば、１～８個のアミノ酸、２～６個のアミノ酸、または２～４個のアミノ酸などの隣接アミノ酸を含み得る。
隣接アミノ酸は、任意の好適な天然または非天然アミノ酸を含み得る。
隣接アミノ酸は、セリンおよびセリンなどの可撓性アミノ酸から選択され得る。
リガンドは、例えば、それぞれのリガンドのＮ末端および／またはＣ末端上の末端グリシン基などの隣接アミノ酸を含み得る。例えば、リガンドは、配列番号９３８０～９４０７および９４２０～９４２８のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を有する隣接アミノ酸を含み得る。例えば、ＩＬ－２Ｒβリガンド、ＩＬ－２Ｒγｃリガンド、またはＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、独立して、１、２、または３個の末端グリシンなどの隣接アミノ酸を含み得る。
ＩＬ－２Ｒβリガンド、ＩＬ－２Ｒγｃリガンド、およびＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、例えば、ＩＬ－２ＲβおよびＩＬ－２ＲγｃリガンドのＮ末端および／またはＣ末端に結合した、１～２０個のアミノ酸、１～１０個のアミノ酸、例えば、１～８個のアミノ酸、２～６個のアミノ酸、または２～４個のアミノ酸を含み得る。
隣接アミノ酸は、任意の好適な天然または非天然アミノ酸を含み得る。
隣接アミノ酸は、グリシンおよびセリンなどの可撓性アミノ酸から選択され得る。ＩＬ－２Ｒβリガンドおよび／またはＩＬ－２Ｒγｃリガンドは、例えば、それぞれのリガンドのＮ末端および／またはＣ末端上の末端グリシン基を含み得る。例えば、ＩＬ－２ＲβおよびＩＬ－２Ｒγｃリガンドは、ｎが１～２０である、（Ｇ）ｎ個のグリシン基（配列番号９３８０）を含み得る。例えば、ＩＬ－２ＲβリガンドおよびＩＬ－２Ｒγｃリガンドのそれぞれは、独立して、１、２、または３個の末端グリシン基を含み得る。例えば、アミノ酸配列－Ｗ－Ｈ－Ｐ－Ｃ－Ｗ－Ｉ－Ａ－Ｑ－Ｌ－Ｇ－Ｅ－Ｌ－Ｃ－Ｄ－Ｌ－Ｅ－を有する、配列番号８７８を有するリガンドは、独立して、例えば、Ｎ末端およびＣ末端の両方上に１つ、２つ、または３つのグリシンを含み得るので、リガンドは、アミノ酸配列－Ｇ－Ｗ－Ｈ－Ｐ－Ｃ－Ｗ－Ｉ－Ａ－Ｑ－Ｌ－Ｇ－Ｅ－Ｌ－Ｃ－Ｄ－Ｌ－Ｅ－Ｇ－（配列番号１２０９）、－Ｇ－Ｇ－Ｗ－Ｈ－Ｐ－Ｃ－Ｗ－Ｉ－Ａ－Ｑ－Ｌ－Ｇ－Ｅ－Ｌ－Ｃ－Ｄ－Ｌ－Ｅ－Ｇ－Ｇ－（配列番号１２１０）、または－Ｇ－Ｇ－Ｇ－Ｗ－Ｈ－Ｐ－Ｃ－Ｗ－Ｉ－Ａ－Ｑ－Ｌ－Ｇ－Ｅ－Ｌ－Ｃ－Ｄ－Ｌ－Ｅ－Ｇ－Ｇ－Ｇ－（配列番号１２１１）をそれぞれ有し得る。
本開示によって提供される、ＩＬ－２Ｒβリガンド、ＩＬ－２Ｒγｃリガンド、およびＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、例えば、１～１０個のアミノ酸置換、１～８個、１～６個、１～４個、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のアミノ酸置換などのアミノ酸置換を含み得る。アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換であり得る。
リガンドは、切断アミノ酸配列を含み得る。
切断アミノ酸配列は、末端アミノ酸のうちの１つ以上を含まないアミノ酸配列を指す。例えば、切断ペプチドにおいて、１つ以上のアミノ酸が、Ｎ末端、Ｃ末端、またはＮ末端およびＣ末端の両方から除去される。本開示によって提供されるアミノ酸配列のＮ末端および／またはＣ末端から１つ以上のアミノ酸を除去することで、改善された特性がもたらされ得る。したがって、本開示によって提供されるＩＬ－２ＲβリガンドおよびＩＬ－２Ｒγｃリガンドなどのリガンドには、切断ＩＬ－２Ｒβリガンドおよび切断Ｒγｃリガンドが含まれる。
配列番号９３０１に基づく切断ＩＬ－２Ｒβリガンドの例には、配列番号９３０１～９３１４、８６５、および６１２のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を有するリガンドが含まれる。
配列番号９３４０に基づく切断ＩＬ－２Ｒγｃリガンドの例には、配列番号９３４０～９３５３および９６５のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を有するリガンドが含まれる。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβリガンドは、配列番号８０５～９０３のうちのいずれか１つに対して、６０％超、７０％超、７５％超、８０％超、８５％超、９０％超、または９５％超の配列類似性を有し得る。本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβリガンドは、配列番号８６５に対して、６０％超、７０％超、７５％超、８０％超、８５％超、９０％超、または９５％超の配列類似性を有し得る。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒγｃリガンドは、配列番号９４４～１０２８のうちのいずれか１つに対して、６０％超、７０％超、７５％超、８０％超、８５％超、９０％超、または９５％超の配列類似性を有し得る。本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒγｃリガンドは、配列番号９６５に対して、６０％超、７０％超、７５％超、８０％超、８５％超、９０％超、または９５％超の配列類似性を有し得る。
本開示によって提供される、ＩＬ－２Ｒβリガンド、ＩＬ－２Ｒγｃリガンド、およびＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、Ｎ末端上にアセチル末端基を含み得、Ｃ末端上にカルボキサミド基を含み得る。
ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドリンカーに結合した、ＩＬ－２ＲβリガンドおよびＩＬ－２Ｒγｃリガンドを含み得る。
ＩＬ－２ＲβリガンドおよびＩＬ－２Ｒγｃリガンドのそれぞれは、それぞれのリガンドのＮ末端またはＣ末端を介して、独立して、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドリンカーに共有結合することができる。例えば、ＩＬ－２Ｒβリガンドは、Ｎ末端を介してＩＬ－２Ｒβγｃリガンドリンカーに結合され得、ＩＬ－２Ｒγｃリガンドは、Ｎ末端を介してＩＬ－２Ｒβγｃリガンドリンカーに結合され得る；ＩＬ－２Ｒβリガンドは、Ｎ末端を介してＩＬ－２Ｒβγｃリガンドリンカーに結合され得、ＩＬ－２Ｒγｃリガンドは、Ｃ末端を介してＩＬ－２Ｒβγｃリガンドリンカーに結合され得る；ＩＬ－２Ｒβリガンドは、Ｃ末端を介してＩＬ－２Ｒβγｃリガンドリンカーに結合され得、ＩＬ－２Ｒγｃリガンドは、Ｎ末端を介してＩＬ－２Ｒβγｃリガンドリンカーに結合され得る；またはＩＬ－２Ｒβリガンドは、Ｃ末端を介してＩＬ－２Ｒβγｃリガンドリンカーに結合され得、ＩＬ－２Ｒγｃリガンドは、Ｃ末端を介してＩＬ－２Ｒβγｃリンカーに結合され得る。
ＩＬ－２ＲβおよびＩＬ－２Ｒγｃリガンドの様々な配向を有するＩＬ－２Ｒβγｃリガンドの例を図１に示す。図１に示すように、ＩＬ－２ＲβリガンドおよびＩＬ－２Ｒγｃリガンドの様々なＣ／Ｎ配向を有するＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、クリックケミストリーを使用して合成され得る。トリアゾール結合は、様々な化学部分を含み得、様々な長さおよび特性を有し得る、ＩＬ－２Ｒγｃリガンドリンカーの略図である。特定のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドリンカーの例を表３に示す。
ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドリンカーは、ＩＬ－２ＲのＩＬ－２ＲβサブユニットおよびＩＬ－２ＲγｃサブユニットへのＩＬ－２Ｒβγｃリガンドの結合を促進するように構成され得る。例えば、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドリンカーは、ＩＬ－２ＲβγｃリガンドによるＩＬ－２Ｒの活性化を促進するように構成され得る。例えば、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、ＴＦ－１β細胞およびＮＫ－９２細胞においてＩＬ－２Ｒ媒介性ＳＴＡＴ５リン酸化を誘導するように構成され得る。
ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドリンカーは、例えば、２Å～１００Å、２Å～８０Å、２Å～６０Å、２Å～４０Å、２Å～２０Å、４Å～１８Å、６Å～１６Å、または８Å～１４Åの長さを有し得る。リガンドリンカーは、例えば、１００Å未満、８０Å未満、６０Å未満、４０Å未満、２０Å未満、１５Å未満、または１０Å未満の長さを有し得る。
ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドリンカーは、例えば、２～５０個の結合、２～４５個の結合、２～４０個の結合、２～３５個の結合、２～３０個の結合、２～２５個の結合、２～２０個の結合、４～１８個の結合、６～１６個の結合、または８～１４個の結合を有する骨格を含み得る。ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドリンカーは、例えば、５０個未満の結合、４０個未満の結合、３０個未満の結合、２０個未満の結合、または１０個未満の結合を有する骨格を含み得る。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃリガンドリンカーは、ペプチジルＩＬ－２Ｒβγｃリガンドまたは化学的ＩＬ－２Ｒβγｃリンカーを含み得る。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃリガンドリンカーは、ペプチジルＩＬ－２Ｒβγｃリガンドリンカーを含み得る。
ペプチジルリガンドリンカーは、例えば、２～１００個のアミノ酸、２～８０個のアミノ酸、２～６０個のアミノ酸、２～４０個のアミノ酸、２～２０個のアミノ酸、５～１０個のアミノ酸、または２～５個のアミノ酸を含み得る。ペプチジルリガンドリンカーは、例えば、１００個未満のアミノ酸、８０個未満のアミノ酸、４０個未満のアミノ酸、２０個未満のアミノ酸、１５個未満のアミノ酸、１０個未満のアミノ酸、または５個未満のアミノ酸を含み得る。ペプチジルＩＬ－２Ｒβγｃリガンドリンカーを形成するアミノ酸は、天然のアミノ酸および／または非天然のアミノ酸を含み得る。
ペプチジルＩＬ－２Ｒβγｃリガンドリンカーは、例えば、グリシン、セリン、および／またはトレオニンなどの可撓性アミノ酸を含み得る。可撓性リンカーは、グリシンなどの小さな非極性アミノ酸またはセリンもしくはトレオニンなどの極性アミノ酸を含み得る。これらのアミノ酸の小さなサイズは、可撓性を提供し、接続する機能ドメインの移動性を可能にする。セリンまたはトレオニンの組み込みは、水溶液中のリンカーの安定性を、水分子との水素結合を形成することによって維持することができ、それによって、リンカーとタンパク質部分との間の好ましくない相互作用を減少させることができる。溶解性を向上させるために、リジンおよびグルタミン酸などのアミノ酸を含むことができる。ペプチジルＩＬ－２Ｒβγｃリンカーの長さは、ＩＬ－２ＲβリガンドとＩＬ－２Ｒγｃリガンドとの間の好適な分離を提供し、アゴニスト活性の増強などのＩＬ－２Ｒとの所望の相互作用を有利にするように選択され得る。可撓性リンカーの例としては、配列番号９３８０～９４０７のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を有するペプチドが挙げられる。
ペプチジルＩＬ－２Ｒβγｃリガンドリンカーは、剛性リンカーであり得る。剛性リンカーは、プロリンリッチであり得、アラニン、リジン、および／またはグルタミン酸などの他のアミノ酸を含み得る。剛性ペプチジルリガンドリンカーの例としては、配列番号９４２０～９４２８のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を有するペプチドが挙げられる。
ペプチジルＩＬ－２Ｒβγｃリガンドリンカーを含むＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、実施例１に記載される固相合成を使用することなどの非組換え方法を使用して合成され得るか、または組換えＤＮＡ技術を使用して合成され得る。
ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドリンカーは、合成化学的ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドリンカーを含み得る。合成化学的ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドリンカーは、化学的方法を使用して合成され、アミノ酸を含んでもよいか、またはアミノ酸を含まなくてもよいリンカーを指す。合成化学的ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドリンカーは、トリアゾール部分を含み得る。
合成化学リガンドリンカーは、例えば、表３に示される式（Ｌ２）～（Ｌ１３）の構造を有し得る。

ＩＬ－２Ｒγｃリガンドリンカー（Ｌ２）、（Ｌ４）～（Ｌ７）、（Ｌ１２）、およびＬ１３）において、ｍおよび／またはｎは、例えば、１～１０の整数であり得る。
化学的ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドリンカーは、クリックケミストリーを使用して合成されて、ＩＬ－２ＲβおよびＩＬ－２Ｒγｃリガンドの様々なＣ／Ｎ配向を有するＩＬ－２Ｒβγｃリガンドを得ることができる。Ｃ／Ｎ配向は、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドリンカーに結合される、ＩＬ－２ＲβおよびＩＬ－２Ｒγｃの末端を指す。例えば、Ｃ／Ｎ配向を有するＩＬ－２Ｒβγｃリガンドについて、ＩＬ－２ＲβリガンドのＣ末端は、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドリンカーに結合し、ＩＬ－２ＲγｃリガンドのＮ末端は、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドリンカーに結合する。別の例として、Ｎ／Ｃ配向を有するＩＬ－２Ｒβγｃリガンドについて、ＩＬ－２ＲβリガンドのＮ末端は、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドリンカーに結合し、ＩＬ－２ＲγｃリガンドのＣ末端は、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドリンカーに結合する。
合成リガンドリンカーを有するＩＬ－２Ｒβγｃリガンドを調製する方法の例を実施例２に記載する。
ＩＬ－２ＲβおよびＩＬ－２Ｒγｃリガンドは、標準的な固相ペプチド合成およびＦｍｏｃ保護アミノ酸を使用して調製することができる。腫脹した樹脂は、Ｆｍｏｃ－プロパルギルグリシンまたは２－（Ｆｍｏｃ－ＮＨ）－アジド－ペンタン酸の活性化溶液のいずれかで処理して、対応するＦｍｏｃ保護樹脂を得ることができる。アルキン含有部分およびアジド含有部分は、例えば、所望の長さ、剛性／可撓性、極性、親油性、および／または立体特性を有するように構成され得る。保護樹脂は、それぞれのＩＬ－２ＲβリガンドまたはＩＬ－２Ｒγｃリガンドを合成するために、ＨＡＴＵ活性化およびＦｍｏｃ除去を伴う、Ｆｍｏｃ－アミノ酸カップリングの反復サイクルに供され得る。ＩＬ－２ＲβまたはＩＬ－２Ｒγｃリガンドの最終アミノ酸からのＦｍｏｃ除去および末端アミン基のアシル化後、リガンドを樹脂から切断し、精製することができる。
アルキン含有部分およびアジド含有部分を、例えば、ＣｕＳＯ４および金属キレート剤の存在下で反応させて、合成化学的ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドリンカーを含むＩＬ－２Ｒβγｃリガンドを得ることができる。反応したアルキン含有部分およびアジド含有部分は、化学リガンドリンカーを形成する。例えば、表３～５を参照すると、表４の式（ＡＬ）のアルキン含有部分を、表５の式（ＡＺ）のアジド含有部分と反応させて、表３の式（Ｌ）の化学的ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドリンカーを得ることができる。
このクリックケミストリー法を使用して、異なるＮ末端およびＣ末端配向を有し、異なるリガンドリンカー長を有するＩＬ－２ＲβおよびＩＬ－２Ｒγｃリガンドを含むＩＬ－２Ｒβγｃリガンドを合成することができる。
アルキン含有部分の例が、表４に提供され、アジド含有部分の例が、表５に提供される。

ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、アミノペプチダーゼおよびカルボキシペプチダーゼによる分解を防止または最小限に抑えるためのＮ末端および／またはＣ末端修飾を含み得る。末端基の例としては、Ｎ末端上のアセチル基およびＣ末端上のカルボキサミド基が挙げられる。
ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、例えば、式（６）の構造を有する部分を含み得る。

式中、ＢＬは、ＩＬ－２Ｒβリガンドを含み、Ｌは、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドリンカーを含み、ＧＬは、ＩＬ－２Ｒγｃリガンドを含む。
式（６）の部分は、小さな化学部分において終端され得、例えば、１２，０００Ｄａ未満、１１，０００Ｄａ未満、１０，０００Ｄａ未満、９，０００Ｄａ未満、８，０００Ｄａ未満、７，０００Ｄａ未満、または６，０００Ｄａ未満の分子量を有し得る。ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、例えば、６，０００Ｄａ～１２，０００Ｄａ、７，０００Ｄａ～１１，０００Ｄａ、または８，０００Ｄａ～１０，０００Ｄａの分子量を有し得る。
式（６）のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドにおいて、ＢＬは、配列番号８０５～９０３のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を有するか、またはいずれか１つの配列番号８０５～９０３に対して、６０％超、７０％超、８０％超、８５％超、９０％超、もしくは９５％超の配列類似性を有するアミノ酸配列を有するＩＬ－２Ｒβリガンドを含み得；ＧＬは、配列番号９４４～１０２８のアミノ酸配列を有するか、または配列番号９４４～１０２８のうちのいずれか１つに対して、６０％超、７０％超、８０％超、８５％超、９０％超、もしくは９５％超の配列類似性を有するアミノ酸配列を有するＩＬ－２Ｒγｃリガンドを含み得；Ｌは、ペプチジルＩＬ－２Ｒβγｃリガンドリンカーまたは化学的ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドリンカーを含み得る。好適なペプチジルＩＬ－２Ｒβγｃリガンドリンカーの例は、図２１Ａ～２１Ｃに開示され、好適な化学リガンドリンカーの例は、表３に開示される。
式（６）のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドにおいて、ＩＬ－２ＲβリガンドのＮ末端またはＣ末端のいずれかは、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドリンカーに結合することができ、ＩＬ－２ＲγｃリガンドのＮ末端またはＣ末端のいずれかは、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドリンカーに結合することができる。例えば、ＩＬ－２Ｒβリガンド（ＢＬ）のＣ末端は、リンカー（Ｌ）に結合することができ、ＩＬ－２Ｒγｃリガンド（ＧＬ）のＮ末端は、リンカー（Ｌ）に結合することができる。
式（６）のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドにおいて、ＩＬ－２ＲβリガンドおよびＩＬ－２Ｒγｃリガンドのそれぞれは、独立して、リガンドのＮ末端および／またはＣ末端に結合した１つ以上の隣接アミノ酸を含み得る。例えば、ＩＬ－２ＲβリガンドのＮ末端およびＣ末端の両方は、（Ｇ）ｎ（配列番号９３８０）を含み得、ＩＬ－２ＲγｃリガンドのＮ末端およびＣ末端の両方は、－（Ｇ）ｎ（配列番号９３８０）を含み得る。隣接するアミノ酸は、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドリンカーに結合することができる。
式（６）のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、Ｎ末端上にアセチル末端基を含み得、Ｃ末端上にカルボキサミド基を含み得る。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、式（６ａ）の構造を含み得る。

式中、
各ｎは、独立して、０～１０の整数であり、
ＢＬは、
配列番号８０５～９０３のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列、
配列番号８０５～９０３のうちのいずれか１つに対して、６０％超、７０％超、８０％超、８５％超、または９０％超の配列同一性を有するアミノ酸配列、
配列番号８０５～９０３のうちのいずれか１つの切断アミノ酸配列、または
前述のうちのいずれかの組み合わせ、を含む、ＩＬ－２Ｒβリガンドであり、
ＧＬは、
配列番号９４４～１０２８のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列、
配列番号９４４～１０２８のうちのいずれか１つに対して、６０％超、７０％超、８０％超、８５％超、または９０％超の配列同一性を有するアミノ酸配列、
配列番号９４４～１０２８のうちのいずれか１つの切断アミノ酸配列、または
前述のうちのいずれかの組み合わせ、を含む、ＩＬ－２Ｒγｃリガンドであり、
各Ａは、独立して、アミノ酸から選択され、
Ｌは、１～５０個のアミノ酸を含むペプチジルリガンドリンカーである。
式（６ａ）のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドにおいて、ＩＬ－２ＲβリガンドのＣ末端は、ペプチジルリガンドリンカーに結合することができ、ＩＬ－２ＲγｃリガンドのＮ末端は、ペプチジルリガンドリンカーに結合することができる。
式（６ａ）のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドにおいて、各ｎは、例えば、０～８、０～６、０～４、または０～２の整数から独立して選択され得る。例えば、ｎは、０、１、２、または３であり得る。（Ａ）ｎは、隣接アミノ酸を表す。
各Ａは、独立して、天然または非天然アミノ酸から選択され得る。各Ａは、独立して、グリシンおよびセリンなどの可撓性アミノ酸から選択され得る。各Ａは、グリシンであり得る。
Ｌは、例えば、１～４０個のアミノ酸、１～３０個のアミノ酸、１～２０個のアミノ酸、１～１０個のアミノ酸、または１～５個のアミノ酸を含み得る。Ｌａは、ペプチジルリガンドリンカーから選択され得る。例えば、Ｌは、配列番号９３８０～９４０７および９４２０～９４２８のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を有するペプチジルリガンドリンカーであり得る。
化学的ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドリンカーを有するＩＬ－２Ｒβγｃリガンドの例を、図１９Ａ～１９Ｃに列挙する。
ペプチジルＩＬ－２Ｒβγｃリガンドリンカーを有するＩＬ－２Ｒβγｃリガンドの例を、図２１Ａ～２１Ｃに列挙する。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、ジスルフィド結合を含み得る。ＩＬ－２ＲβリガンドおよびＩＬ－２Ｒγｃリガンドは、少なくとも２つのシステインを含み得る。ＩＬ－２Ｒβリガンドの少なくとも２つのシステインは、ジスルフィド結合を介して結合することができ、ＩＬ－２Ｒγｃリガンドの少なくとも２つのシステインのそれぞれは、ジスルフィド結合を介して結合することができる。
ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドにおいて、ＩＬ－２Ｒβリガンドの２つのシステインは、ジスルフィド結合を介してともに結合することができ、かつ／またはＩＬ－２Ｒγｃリガンドの２つのシステインは、ジスルフィド結合を介してともに結合することができる。ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドにおいて、ＩＬ－２Ｒβリガンドのシステインは、ジスルフィド結合を介してＩＬ－２Ｒγｃリガンドのシステインに結合することができるか、またはＩＬ－２Ｒβリガンドの２つのシステインのそれぞれは、ＩＬ－２Ｒγｃリガンドのシステインに結合することができる。例えば、式（７）の構造を有するＩＬ－２Ｒβγｃリガンドにおいて、

式中、－Ｘ－Ｃ１－Ｘ－Ｃ２－Ｘ－は、配列番号８０５～９０３のうちのいずれか１つなどの２つのシステインを有するＩＬ－２Ｒβリガンドのアミノ酸配列を表し、各Ｘは、独立して、１つ以上のアミノ酸であり、－Ｙ－Ｃ３－Ｙ－Ｃ４－Ｙ－は、配列番号９４４～１０２８のうちのいずれか１つなどの２つのシステインを有するＩＬ－２Ｒγｃリガンドのアミノ酸配列を表し、各Ｙは、独立して、１つ以上のアミノ酸であり、－Ｌ－は、ＩＬ－２ＲβリガンドおよびＩＬ－２Ｒγｃリガンドを結合するＩＬ－２Ｒβγｃリガンドリンカーである。
式（７）のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドにおいて、Ｃ１はＣ２に結合することができ、Ｃ３はジスルフィド結合を介してＣ４に結合することができ、Ｃ１はＣ３に結合することができ、Ｃ２はジスルフィド結合を介してＣ４に結合することができ、またはＣ１はＣ４に結合することができ、Ｃ２はジスルフィド結合を介してＣ３に結合することができる。
ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、配列番号８０５～９０３、９１１～９３０、２５７５～２６５５、２６６１～２８９１、２９００～２９２６、および２９２９～２９３９のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列、本開示によって提供されるＩＬ－２ＲβリガンドのＩＬ－２Ｒβリガンドの置換アミノ酸配列、Ｎ末端および／またはＣ末端上に１～５個の隣接グリシン（配列番号９４３０）を有する本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβリガンドのアミノ酸配列、本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβリガンドにと６０％超の配列類似性を有するアミノ酸配列、または前述のうちのいずれかの組み合わせなどの本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβリガンド；ならびに配列番号９４４～１０２８、１０３２～１０６０、および１６０１～１６１３のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列、本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒγｃリガンドの置換アミノ酸配列、本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒγｃリガンドの切断アミノ酸配列、Ｎ末端および／またはＣ末端上に１～５個の隣接グリシン（配列番号９４３０）を有する本開示によって提供されるアミノ酸配列ＩＬ－２Ｒγｃリガンド、本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒγｃリガンドと６０％超の配列類似性を有するアミノ酸配列、または前述のうちのいずれかの組み合わせなどの本開示によって提供されるＲγｃリガンドを含み得る。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、配列番号８６５および９３０１～９３１４のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を有するＩＬ－２Ｒβリガンド．または配列番号８６５および９３０１～９３１４のうちのいずれか１つに対して、６０％超、７０％超、７５％超、８０％超、８５％超、９０％超、もしくは９５％超の配列類似性を有するアミノ酸配列：ならびに配列番号９６５および９３４０～９３５３のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を有するＩＬ－２Ｒγｃリガンド、または配列番号８６５および９３０１～９３１４のうちのいずれか１つに対して、６０％超、７０％超、７５％超、８０％超、８５％超、９０％超、もしくは９５％超の配列類似性を有するアミノ酸配列を含み得る。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、配列番号８６５を有するＩＬ－２Ｒβリガンド、または配列番号８６５に対して、６０％超、７０％超、７５％超、８０％超、８５％超、９０％超、もしくは９５％超の配列類似性を有するアミノ酸配列；ならびに配列番号９６５を有するＩＬ－２Ｒγｃリガンド、または配列番号９６５に対して、６０％超、７０％超、７５％超、８０％超、８５％超、９０％超、もしくは９５％超の配列類似性を有するアミノ酸配列を含み得る。
ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドにおいて、ＩＬ－２ＲβリガンドのＣ末端は、ＩＬ－２ＲγｃリガンドのＮ末端に連結され得る。
ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、配列番号８６５の切断アミノ酸配列を有するＩＬ－２Ｒβリガンドと、切断アミノ酸配列である配列番号９６５を有するＩＬ－２Ｒγｃリガンドとを含み得る。
ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、置換された配列番号８６５を有するＩＬ－２Ｒβリガンドと、置換された配列番号９６５を有するＩＬ－２Ｒγｃリガンドとを含み得、置換は、１～５個の保存的アミノ酸置換または非保存的アミノ酸置換、例えば、１～２個の保存的アミノ酸置換または非保存的アミノ酸置換を含み得る。
ＩＬ－２ＲβリガンドおよびＩＬ－２Ｒγｃリガンドのそれぞれは、独立して、１つ以上のグリシンなどの１つ以上の隣接アミノ酸を含み得る。例えば、ＩＬ－２ＲβリガンドおよびＩＬ－２ＲγｃリガンドのＮ末端およびＣ末端のそれぞれは、独立して、１～５個のグリシン（配列番号９４３０）を含み得る。
ＩＬ－２ＲβリガンドのＮ末端は、例えば、１～１０個のアミノ酸を含む可撓性リンカーを介してＩＬ－２ＲγｃリガンドのＣ末端に結合され得る。リンカーは、例えば、配列番号９３８０～９４０７および９４２０～９４２８のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を有するペプチジルリンカーであり得る。
ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、配列番号１２６３（－ＧＧＷＹＰＣＷＭＡＱＬＧＥＬＣＤＬＤＧＧＧＧＳＧＧＶＶＣＱＤＷＥＧＶＥＬＣＷＱＧＧ－）のアミノ酸配列、または配列番号１２６３に対して、６０％超、７０％超、７５％超、８０％超、８５％超、９０％超、もしくは９５％超の配列類似性を有するアミノ酸配列を含み得る。
ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、配列番号１２６４（－ＷＹＰＣＷＭＡＱＬＧＥＬＣＤＬＤＧＧＧＧＳＧＧＶＶＣＱＤＷＥＧＶＥＬＣＷＱ－）のアミノ酸配列、または配列番号１２６４に対して、６０％超、７０％超、７５％超、８０％超、８５％超、９０％超、もしくは９５％超の配列類似性を有するアミノ酸配列を含み得る。
ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、配列番号１２６５（－ＷＹＰＣＷＭＡＱＬＧＥＬＣＤＬＤＧＧ－Ｘ３００－ＧＧＶＶＣＱＤＷＥＧＶＥＬＣＷＱ－）のアミノ酸配列を含み得るか、または配列番号１２６５に対して、６０％超、７０％超、８０％超、８５％超、９０％超、もしくは９５％超のアミノ酸配列類似性を有するアミノ酸配列を含み得、Ｘ３００は、１～２０個のアミノ酸を含み得る。例えば、Ｘ３００は、配列番号９３８０～９４０７および９４２０～９４２８のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を有するペプチジルリンカーから選択され得る。Ｘ３００は、配列番号１２６３～１２６５のうちのいずれか１つのＩＬ－２Ｒβγｃリガンド、または配列番号１２６３～１２６５のうちのいずれか１つに対して、６０％超、７０％超、７５％超、８０％超、８５％超、９０％超、もしくは９５％超の配列類似性を有するアミノ酸配列が、ＩＬ－２Ｒについてのアゴニスト、またはＩＬ－２Ｒの部分アゴニストであるように選択され得る。
ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、配列番号１２６６（－ＷＹＰＣＷＭＡＱＬＧＥＬＣＤＬＤ－Ｘ３００ －ＶＶＣＱＤＷＥＧＶＥＬＣＷＱ－）のアミノ酸配列、または配列番号１２６６に対して、６０％超、７０％超、８０％超、８５％超、９０％超、もしくは９５％超のアミノ酸配列類似性を有するアミノ酸配列を含み得、Ｘ３００ は、１～３０個のアミノ酸を含む。Ｘ３００ は、配列番号１２６６のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド、または配列番号１２６６に対して、６０％超、７０％超、７５％超、８０％超、８５％超、９０％超、もしくは９５％超の配列類似性を有するアミノ酸配列が、ＩＬ－２Ｒについてのアゴニスト、またはＩＬ－２Ｒの部分アゴニストであるように選択され得る。
配列番号１２６３～１２７０のうちのいずれか１つのＩＬ－２Ｒβγｃリガンド、または配列番号１２６３～１２７０のうちのいずれか１つに対して、６０％超、７０％超、７５％超、８０％超、８５％超、９０％超、もしくは９５％超の配列類似性を有するアミノ酸配列において、ＩＬ－２Ｒβリガンドのシステインは、ジスルフィド結合を介してともに結合することができ、ＩＬ－２Ｒγｃリガンドのシステインは、ジスルフィド結合を介してともに結合することができる。特定のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドにおいて、ＩＬ－２Ｒβリガンドのシステインは、ＩＬ－２Ｒγｃリガンドのシステインに結合することができる。
ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、配列番号１２６３～１２７０のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列、配列番号１２６３～１２７０のうちのいずれか１つの置換アミノ酸配列、配列番号１２６３～１２７０のうちのいずれか１つの切断アミノ酸配列Ｎ末端および／もしくはＣ末端上に１～５個の隣接グリシン（配列番号９４３０）を有する配列番号１２６３～１２７０のうちのいずれか１つのアミノ酸配列、配列番号１２６３～１２７０のうちのいずれか１つと６０％超の配列類似性を有するアミノ酸配列、または前述のうちのいずれかの組み合わせを含み得る。
配列番号１２６５および１２７０のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を有するＩＬ－２Ｒβγｃリガンドにおいて、Ｘ３００は、１～２０個のアミノ酸を含み得る。例えば、Ｘ３００は、配列番号９３８０～９４０７のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を有することから選択され得る。例えば、Ｘ３００は、ＧＧＳ（配列番号９４０２）またはＧＧＧＧＳＧＧ（配列番号９４０４）であり得る。例えば、Ｘ３００は、配列番号９４２０～９４２８のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を有するペプチジルリンカーから選択され得る。
配列番号１２６６および１２７０を有するリガンドにおいて、各Ｘ３０１は、独立して、グリシンなどの隣接アミノ酸を含み得、各ｎは、独立して、０～５の整数である。
配列番号１２６３～１２７０のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を有するＩＬ－２Ｒβγｃリガンドであって、ＩＬ－２Ｒβリガンドのシステインは、ジスルフィド結合を介してともに結合され得、Ｒγｃリガンドのシステインは、ジスルフィド結合を介してともに結合され得る、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド。特定のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドにおいて、ＩＬ－２Ｒβリガンドのシステインは、Ｒγｃリガンドのシステインに結合され得る。
ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、配列番号１２６３～１２７０のうちのいずれか１つに対して、６０％超、７０％超、７５％超、８０％超、８５％超、９０％超、または９５％超の配列類似性を有し得る。
ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、配列番号４０７０～４０８５のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列、配列番号４０７０～４０８５のうちのいずれか１つの置換アミノ酸配列、配列番号４０７０～４０８５のうちのいずれか１つの切断アミノ酸配列、Ｎ末端および／もしくはＣ末端上に１～５個の隣接グリシン（配列番号９４３０）を有する配列番号４０７０～４０８５のうちのいずれか１つのアミノ酸配列、配列番号４０７０～４０８５のうちのいずれか１つと６０％超の配列類似性を有するアミノ酸配列、または前述のうちのいずれかの組み合わせを含み得る。
配列番号４０７０～４０８５のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を有するＩＬ－２Ｒβγｃリガンドであって、ＩＬ－２Ｒβリガンドのシステインは、ジスルフィド結合を介してともに結合され得、Ｒγｃリガンドのシステインは、ジスルフィド結合を介してともに結合され得る、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド。特定のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドにおいて、ＩＬ－２Ｒβリガンドのシステインは、Ｒγｃリガンドのシステインに結合され得る。
ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、配列番号４０７０～４０８５のうちのいずれか１つに対して、６０％超、７０％超、７５％超、８０％超、８５％超、９０％超、または９５％超の配列類似性を有し得る。
配列番号４０７０～４０８５を有するＩＬ－２Ｒβγｃリガンドにおいて、リガンドリンカーは、本明細書に開示されるリガンドリンカーのうちのいずれかなどの別のリガンドリンカーであり得る。
ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、配列番号４０９０～４０９４のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を有し得る。
配列番号４０９０～４０９４のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を有するＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、１００μＭ未満のＩＣ５０でｈＩＬ－２ＲβおよびｈＩＬ－２Ｒγｃサブユニットに結合することができる。
ＩＬ ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、配列番号４０９５～４０９９のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を有し得る。
配列番号４０９５～４０９９のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を有するＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、１００μＭ未満のＩＣ５０でｈＩＬ－２ＲβサブユニットおよびｈＩＬ－２Ｒγｃサブユニットに結合することができる。
配列番号１２６３～１２７０、４０７０～４０８５、および４０９０～４０９９のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を有する特定のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、１００μＭ未満のＩＣ５０で、ｈＩＬ－２Ｒβサブユニット、ｈＩＬ－２Ｒγｃサブユニット、ｃｙｎｏ－ＩＬ－２Ｒβサブユニット、およびｃｙｎｏ－ＩＬ－２Ｒγｃサブユニットに結合することができる。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、１ｐＭ～１００μＭ、１０ｐＭ～１０μＭ、１００ｐＭ～１μＭ、０．００１μＭ～１μＭ、または０．０１μＭ～１μＭのＩＣ５０でヒトＩＬ－２ＲなどのＩＬ－２Ｒに結合することができる。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、１００μＭ未満、１０μＭ未満、１μＭ未満、１００ｐＭ未満、１０ｐＭ未満、または１ｐＭ未満のＩＣ５０でヒトＩＬ－２ＲなどのＩＬ－２Ｒに結合することができる。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、１ｐＭ～１００μＭ、１０ｐＭ～１０μＭ、１００ｐＭ～１μＭ、０．００１μＭ～１μＭ、または０．０１μＭ～１μＭのＩＣ５０で、ＩＬ－２Ｒβサブユニットのそれぞれ、およびＩＬ－２Ｒγｃサブユニット、例えば、ヒトＩＬ－２Ｒβサブユニットのそれぞれ、およびヒトＩＬ－２Ｒγｃサブユニットに結合することができる。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、１００μｍ未満、１０μｍ未満、１μｍ未満、１００ｐＭ未満、１０ｐＭ未満、または１ｐＭ未満のＩＣ５０で、ＩＬ－２Ｒβサブユニットのそれぞれ、およびＩＬ－２Ｒγｃサブユニット、例えば、ヒトＩＬ－２Ｒβサブユニットのそれぞれ、およびヒトＩＬ－２Ｒγｃサブユニットに結合することができる。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒγｃリガンドは、ＴＦ－１β細胞および／またはＮＫ－９２細胞におけるＳＴＡＴ５リン酸化について、例えば、１００μＭ未満、１０μＭ未満、１μＭ未満、１００ｐＭ未満、１０ｐＭ未満、または１ｐＭ未満のＥＣ５０を示すことができる。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒγｃリガンドは、ＴＦ－１β細胞および／またはＮＫ－９２細胞におけるＳＴＡＴ５リン酸化について、例えば、１ｐＭ～１００μＭ、１０ｐＭ～１０μＭ、１００ｐＭ～１μＭ、０．００１μＭ～１μＭ、または０．０１μＭ～１μＭのＥＣ５０を示すことができる。
固形腫瘍は、正常な組織との代謝の差異を示す。固形腫瘍の糖分解代謝へのより大きな依存性は、より酸性の腫瘍微小環境を産生する。例えば、固形腫瘍微小環境は、ほとんどの正常組織のｐＨよりも１ｐＨ～２ｐＨ単位低いｐＨを有することができる。このｐＨの差異を利用して、正常末梢組織における活性と比較して固形腫瘍における治療剤の活性を高めることができる。
好適なｐＨ選択的スクリーニング方法を使用して、ＩＬ－２ＲβおよびＩＬ－２Ｒγｃリガンドは、中性ｐＨでの結合のためのＩＣ５０よりも低いＩＣ５０で、低いｐＨでＩＬ－２Ｒに結合することが識別され得る。例えば、６未満のｐＨで結合するためのＩＣ５０は、６より大きいｐＨで結合するためのＩＣ５０よりも少なくとも１０倍、または少なくとも１００倍低くなり得る。これらのｐＨバイアスＩＬ－２Ｒβおよび／またはＩＬ－２Ｒγｃリガンドは、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドに組み込まれて、ｐＨバイアスＩＬ－２Ｒβγｃリガンドを得ることができる。
ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、ｐＨバイアスＩＬ－２Ｒβリガンドおよび／またはｐＨバイアスＩＬ－２Ｒγｃリガンドを含むことができる。これらのｐＨバイアスＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、固形腫瘍を標的とする細胞傷害性の増加、および正常組織に対する毒性の低下に対して強化された治療指標を示すことができる。
ｐＨバイアスＩＬ－２Ｒβリガンドおよび／またはｐＨバイアスＩＬ－２Ｒβγｃリガンドを含むＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、ＩＬ－２Ｒβサブユニットおよび／またはＩＬ－２Ｒγｃサブユニットに対するｐＨバイアス結合親和性（ＩＣ５０）を示すことができる。
例えば、ｐＨバイアスＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、ｐＨ７．５での、ヒトＩＬ－２ＲなどのＩＬ－２Ｒへの結合についてのＩＣ５０より少なくとも少なくとも１０％低い、ｐＨ７．５での、ヒトＩＬ－２ＲなどのＩＬ－２Ｒへの結合についてのＩＣ５０より少なくとも２５％低い、少なくとも５０％低い、少なくとも１００％低い、または少なくとも２００％低い、ＩＣ５０で、ｐＨ６で、ヒトＩＬ－２ＲなどのＩＬ－２Ｒに結合することができる。
ｐＨバイアスＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、１ｐＭ～１００μＭのＩＣ５０で、ｐＨ６．０で、ヒトＩＬ－２ＲなどのＩＬ－２Ｒに結合することができ、ｐＨ７．５で１００μＭ超のＩＣ５０で、ヒトＩＬ－２ＲなどのＩＬ－２Ｒに結合することができる。
ｐＨバイアスＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、０．１μＭ～５０μＭのＩＣ５０で、ｐＨ６．０で、ヒトＩＬ－２ＲγｃなどのＩＬ－２Ｒγｃに結合することができ、ｐＨ７．５で１００μＭ超のＩＣ５０でヒトＩＬ－２ＲγｃなどのＩＬ－２Ｒγｃに結合することができる。
ｐＨバイアスＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、１００μＭ未満のＩＣ５０で、ｐＨ６．０で、ヒトＩＬ－２ＲβγｃなどのＩＬ－２Ｒγｃに結合することができ、ｐＨ７．５で１００μＭ超のＩＣ５０でヒトＩＬ－２ＲγｃなどのＩＬ－２Ｒγｃに結合することができる。
ｐＨバイアスＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、ｐＨ６で１００μＭ未満のＩＣ５０で、ＩＬ－２Ｒβサブユニットのそれぞれ、およびＩＬ－２Ｒγｃサブユニット、例えば、ヒトＩＬ－２Ｒβサブユニット、およびＩＬ－２Ｒγｃサブユニットに結合することができ、ｐＨ７．５で１００μＭ超のＩＣ５０で、ＩＬ－２Ｒβサブユニットのそれぞれ、およびＩＬ－２Ｒγｃサブユニット、例えば、ヒトＩＬ－２Ｒβサブユニット、およびＩＬ－２Ｒγｃサブユニットに結合することができる。
ｐＨバイアスＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、例えば、中性および高ｐＨ環境下の細胞と比較して、固形腫瘍などの低ｐＨ細胞環境においてＩＬ－２Ｒを発現する細胞を選択的に活性化するのに有用であり得る。
好適なｐＨ選択的スクリーニング方法を使用して、ｐＨバイアスＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、より低いｐＨでＩＬ－２Ｒに対して、より大きな結合親和性（より低いＩＣ５０）を有し、中性ｐＨで、より小さな結合親和性（より高いＩＣ５０）を有することが識別され得る。ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド、タンデムＩＬ－２Ｒγｃリガンド、およびＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物は、１つ以上のｐＨバイアスＩＬ－２Ｒβリガンドおよび／または１つ以上のｐＨバイアスＩＬ－２Ｒγｃリガンドを含み得る。これらのｐＨバイアスＩＬ－２Ｒβγｃリガンド、ｐＨバイアスタンデムＩＬ－２Ｒβγｃリガンド、およびｐＨバイアスＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物は、固形腫瘍を標的とするための細胞傷害性の増加を反映し、正常組織に対する毒性の低下を伴う、強化された治療指数を示すことができる。
同様に、ｐＨ選択的機能的スクリーニング方法を使用して、ＩＬ－２ＲβγｃリガンドおよびＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物は、ｐＨ７などのより高いｐＨと比較して、ｐＨ６などのより低いｐＨにおいて、ＩＬ－２Ｒアゴニスト活性の向上を示すように選択され得る。例えば、本開示によって提供されるｐＨバイアスＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、ｐＨ７．５での同じＩＬ－２ＲβγｃリガンドについてのＥＣ５０と比較して、ｐＨ６．０でのＴＦ－１β細胞および／またはＮＫ－９２細胞におけるＳＴＡＴ５リン酸化について、より低いＥＣ５０を提供することができる。このようなｐＨバイアスＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、低ｐＨで向上したＩＬ－２Ｒアゴニスト活性または部分的アゴニスト活性を示す。
例えば、ｐＨバイアスＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、ｐＨ６でのＴＦ－１βおよびＮＫ－９２細胞におけるＳＴＡＴ５リン酸化について、ｐＨ７．５でのＴＦ－１βおよびＮＫ－９２細胞におけるＳＴＡＴ５リン酸化についてのＥＣ５０より少なくとも少なくとも１０％低い、ｐＨ７．５でのＴＦ－１βおよびＮＫ－９２細胞におけるＳＴＡＴ５リン酸化についてのＥＣ５０より少なくとも２５％低い、少なくとも５０％低い、少なくとも１００％低い、または少なくとも２００％低い、ＥＣ５０を示すことができる。
実施例に記載されるものと同様のｐＨ選択的スクリーニング方法を使用して、他のｐＨバイアス機能的特性または正常な健康組織よりも高いｐＨ値での減少したＩＣ５０もしくはＥＣ５０などの、他のｐＨバイアスを有するｐＨバイアスＩＬ－２Ｒβリガンドおよび／またはＩＬ－２Ｒγｃリガンドを同定し、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドに組み込むことにより、さらなるバイアスＩＬ－２ＲβγｃリガンドおよびＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物を得ることができる。
本開示によって提供されるタンデムＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、２つ以上のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドを含むことができる。２つ以上のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、ともに結合されて、直鎖状または非直鎖状構造を形成することができる。例えば、タンデムＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、式（８ａ）または式（８ｂ）の構造を有することができる。

式中、
各ＢＧＬは、独立して、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドから選択され、
Ｌｔ１は、二価のタンデムリンカーであり、
Ｌｔ２は、ｐ価のタンデムリンカーであり、
ｎ１は、１～６の整数であり、
ｎ２は、０～６の整数であり、
ｐは、３～８の整数である。
式（８ａ）および（８ｂ）のタンデムＩＬ－２Ｒβγｃリガンドにおいて、各ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、同じであり得る。
式（８ａ）および（８ｂ）のタンデムＩＬ－２Ｒβγｃリガンドにおいて、少なくとも１つのＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、別のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドとは異なり得る。
式（８ａ）および（８ｂ）のタンデムＩＬ－２Ｒβγｃリガンドにおいて、各ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、独立して、それぞれのＩＬ－２ＲβγｃリガンドのＮ末端を介して、またはＣ末端を介してタンデムリンカーに結合することができる。
式（８ａ）および（８ｂ）のタンデムＩＬ－２Ｒβγｃリガンドにおいて、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドのそれぞれは、１つ以上の隣接アミノ酸を含み得る。
タンデムリンカー、Ｌｔ１およびＬｔ２は、ペプチジルタンデムリンカーであり得、例えば、１～５０個のアミノ酸、２～４０個のアミノ酸、または５～３０個のアミノ酸であり得る。
タンデムリンカーは、本開示によって提供されるトリアゾール含有リンカーなどの化学的リンカーを含み得る。
各二価タンデムリンカーＬｔ１は、他の二価タンデムリンカーのそれぞれと同じであり得るか、または二価タンデムリンカーのうちの少なくとも１つは、別のタンデムリンカーとは異なり得る。
式（８ａ）のタンデムＩＬ－２Ｒβγｃリガンドにおいて、ｎは、例えば、１、２、３、４、５、または６であり得る。
式（８ｂ）のタンデムＩＬ－２Ｒβγｃリガンドにおいて、各ｎは、独立して、０、１、２、３、４、５、または６から選択され得る。
式（８ｂ）のタンデムＩＬ－２Ｒβγｃリガンドにおいて、ｐは、例えば、３、４、５、６、７、または８であり得る。
ｐ価のタンデムリンカーは、任意の好適な多官能性化学部分を含み得る。例えば、式（８ａ）および（８ｂ）のタンデムＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、１０，０００Ｄａ未満、６，０００Ｄａ未満、２，０００Ｄａ未満、１，０００Ｄａ未満、または５００Ｄａ未満の分子量を有することができる。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、天然に存在するタンパク質または合成分子に結合して、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物を得ることができる。好適な構築パートナーの例には、ポリマー、タンパク質、Ｆｃ断片、免疫グロブリン断片、および抗体が挙げられる。
ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物は、所望の薬物動態特性を提供し、低減された免疫原性を提供し、特定の細胞集団を標的化し、かつ／または向上した治療効果を提供するように構成され得る。
ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、構築リンカーを介して構築パートナーに結合することができる。
ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物は、構築パートナーに結合した単一のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドまたは構築パートナーに結合した２つ以上のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドを含み得る。
構築パートナーに結合した２つ以上のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドのそれぞれは、同じであってもよく、またはＩＬ－２Ｒβγｃリガンドのうちの少なくとも１つは、構築パートナーに結合した他のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドのうちの少なくとも１つとは異なり得る。ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、例えば、ＩＬ－２Ｒβリガンド、ＩＬ－２Ｒγｃリガンド、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドリンカー、および／または隣接アミノ酸に対して異なり得る。
ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドのそれぞれは、独立して、それぞれの構築リンカーを介して、構築パートナーに結合することができる。それぞれの構築リンカーのそれぞれは、同じであってもよく、または構築リンカーのうちの少なくとも１つは、少なくとも１つの他の構築リンカーとは異なっていてもよい。構築リンカーは、例えば、長さおよび／または化学組成に関して異なっていてもよい。
ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドのそれぞれは、独立して、それぞれのＩＬ－２ＲβγｃリガンドのＮ末端またはＣ末端を介して、構築パートナーに結合することができる。
ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物は、構築パートナーに結合したタンデムＩＬ－２Ｒβγｃリガンドを含み得る。タンデムＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、構築リンカーを介して構築パートナーに結合することができる。
ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物は、構築パートナーに結合した単一のタンデムＩＬ－２Ｒβγｃリガンドまたは構築パートナーに結合した２つ以上のタンデムＩＬ－２Ｒβγｃリガンドを含み得る。
構築パートナーに結合した２つ以上のタンデムＩＬ－２Ｒβγｃリガンドのそれぞれは、同じであってもよく、またはタンデムＩＬ－２Ｒβγｃリガンドのうちの少なくとも１つは、構築パートナーに結合した他のタンデムＩＬ－２Ｒβγｃリガンドのうちの少なくとも１つとは異なり得る。タンデムＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、例えば、ＩＬ－２Ｒβリガンド、ＩＬ－２Ｒγｃリガンド、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドリンカー、タンデムリンカー、および／または隣接アミノ酸に対して異なり得る。
タンデムＩＬ－２Ｒβγｃリガンドのそれぞれは、それぞれの構築リンカーを介して、構築パートナーに結合することができる。それぞれの構築リンカーのそれぞれは、同じであってもよく、または構築リンカーのうちの少なくとも１つは、少なくとも１つの他の構築リンカーとは異なっていてもよい。構築リンカーは、例えば、長さおよび／または化学組成に関して異なっていてもよい。
タンデムＩＬ－２Ｒβγｃリガンドのそれぞれは、独立して、それぞれのタンデムＩＬ－２ＲβγｃリガンドのＮ末端またはＣ末端を介して、構築パートナーに結合することができる。
ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物は、構築パートナーに結合した少なくとも１つのＩＬ－２Ｒβリガンドおよび少なくとも１つのタンデムＩＬ－２Ｒγｃリガンドを含み得る。少なくとも１つのＩＬ－２Ｒβリガンドおよび少なくとも１つのＩＬ－２Ｒγｃリガンドのそれぞれは、独立して、構築リンカーを介して構築パートナーに結合することができる。例えば、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物は、本開示によって提供される１～１０個のＩＬ－２Ｒβリガンドおよび本開示によって提供される１～１０個のＩＬ－２Ｒγｃリガンドを含み得る。
ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物は、例えば、少なくとも１つのＩＬ－２Ｒβγｃリガンド、少なくとも１つのタンデムＩＬ－２Ｒβγｃリガンド、少なくとも１つのＩＬ－２Ｒβリガンド、および／または少なくとも１つのＩＬ－２Ｒγｃリガンドを含み得、但し、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、少なくとも１つのＩＬ－２Ｒβリガンドおよび少なくとも１つのＩＬ－２Ｒγｃリガンドを含むことを条件とする。
ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物は、ポリマーまたはタンパク質を形成するアミノ酸などの分子の側鎖に結合した１つ以上のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドを損ない得る。
ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物は、１つ以上のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドが、ポリマーまたはポリペプチドの骨格に組み込まれる、１つ以上のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドを損ない得る。したがって、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物は、１つ以上のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドが、ポリペプチドのＮ末端に結合され、ポリペプチドのＣ末端に結合され、ポリペプチドのアミノ酸側鎖に結合され、かつ／またはポリペプチドのアミノ酸配列に組み込まれる、１つ以上のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドを含み得る。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物は、融合タンパク質を含む。
好適な融合タンパク質パートナーの例としては、Ｆｃ断片、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、およびＩｇＧ４などの免疫グロブリン、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、およびＩｇＧ４断片などの免疫グロブリン断片、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）などの天然に存在するタンパク質、抗体、他のヒトタンパク質および変異体、ならびに／またはそれらのバリアント、タンパク質、およびポリペプチドが挙げられる。融合タンパク質パートナーは、天然に存在するタンパク質、修飾された天然に存在するタンパク質、または合成タンパク質であり得る。
融合パートナーは、望ましい薬物動態プロファイルを提供するために、細胞標的化のために、二重薬理のために、および／または治療効果を増強するために使用され得る。
例えば、本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドの循環半減期を増加させるタンパク質に融合され得る。治療用タンパク質とＩｇＧまたはＩｇＧ－Ｆｃ鎖との融合は、タンパク質の流体力学的半径を増加させることによって、したがって、腎クリアランスを低減させることによって、および融合タンパク質の新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）媒介性再循環を通じて、これを達成し、したがって、循環半減期を延長することができる。他の融合タンパク質は、薬物動態、生体分布、薬物力学、薬理学、細胞傷害性、選択性、および／または標的化などの特性を調整するように設計され得る。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃリガンド融合タンパク質は、融合タンパク質パートナーに結合した１つ以上のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドを含み得る。１つ以上のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドのそれぞれは、独立して、それぞれのＩＬ－２ＲβγｃリガンドのＮ末端を介して、またはＣ末端を介して、融合タンパク質パートナーに結合することができる。１つ以上のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドのそれぞれは、同じであり得る。１つ以上のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドのうちの少なくとも１つは、少なくとも１つの他のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドとは異なり得る。ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドと融合パートナータンパク質との間の接合部のアミノ酸配列は、２つのタンパク質配列の直接融合、または介在ペプチジル融合（構築）リンカーとの融合のいずれかであり得る。ペプチジルリンカーは、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドと融合パートナーとの間のスペーサーとして含めることができる。ペプチジルリンカーは、構成タンパク質および１つ以上のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドの適切なタンパク質折り畳みおよび安定性を促進し、タンパク質発現を改善し、かつ／またはＩＬ－２Ｒβγｃリガンドおよび／もしくは融合パートナーの生物活性を向上させることができる。
ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド融合タンパク質に使用されるペプチジルリンカーは、非構造化可撓性ペプチドであるように設計することができる。ペプチジルリンカーは、例えば、配列番号９３８０～９４０１のうちのいずれか１つを有するペプチジルリンカー（式中、ｎは１～１０の整数である）などの配列の反復など、例えば、グリシンおよびセリンが豊富であり得る。完全に伸長したβ鎖立体構造を有する可撓性ペプチジルリンカーは、例えば、残基当たり３．５Åの端から端までの長さを有することができる。したがって、５残基、１０残基、１５残基、または１０残基のペプチジルリンカーは、それぞれ、１７．５Å、３５Å、５２．５Å、７０Å、１４０Å、または１４０Å超の最大の完全に伸長した長さを有することができる。
ペプチジルリンカーは、プロリン、およびアラニン、リジンまたはグルタミン酸などの他のアミノ酸を含むリンカーなどの、剛性リンカーであり得る。例えば、剛性リンカーは、配列番号９４２０～９４２５のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を有することができる。ペプチジルリンカーは、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドの、ＩＬ－２ＲのＩＬ－２Ｒβサブユニットおよび／もしくはＩＬ－２Ｒγｃサブユニットとの係合を促進し、ＩＬ－２ＲβγｃリガンドのＩＬ－２Ｒへの結合を促進し、融合タンパク質の再循環を可能にし、ならびに／またはＩＬ－２Ｒβγｃリガンドの循環半減期を延長するために、個々の融合タンパク質部分の適切な立体構造および配向を提供することを促進し得る。
１つ以上のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドを含み、所望の生物活性および薬学的特徴を有するＩＬ－２Ｒβγｃ融合タンパク質を得るために選択することができる融合タンパク質の設計および構築のための複数の選択肢が存在する。設計選択肢としては、例えば、ＩＬ－２Ｒβリガンド、ＩＬ－２Ｒγｃリガンド、およびＩＬ－２Ｒβγｃリガンドリンカーの選択を含むＩＬ－２Ｒβγｃリガンド、融合パートナータンパク質結合部分、融合タンパク質中の融合パートナー結合部分の構成、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドを融合パートナーに結合するペプチジルリンカー、ならびに融合パートナータンパク質が挙げられる。
一般に、本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃリガンド融合タンパク質の調製は、例えば、ポリメラーゼ連鎖増幅反応（ＰＣＲ）、プラスミドＤＮＡの調製、制限酵素によるＤＮＡの切断、オリゴヌクレオチドの調製、ＤＮＡのライゲーション、ｍＲＮＡの単離、ＤＮＡの好適な細胞への導入、宿主の形質転換またはトランスフェクション、および宿主の培養を含む、認識された組換えＤＮＡ技術を使用して調製され得る。さらに、ＩＬ－２Ｒβγｃ融合タンパク質は、カオトロピー剤、ならびに周知の電気泳動法、遠心分離法、およびクロマトグラフィー法を使用して単離および精製することができる。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃリガンド融合タンパク質は、１つ以上の小ユビキチン関連修飾因子（ＳＵＭＯ）タンパク質を含み得る。ユビキチン様修飾因子ＳＵＭＯによる細胞タンパク質の修飾は、核輸送、シグナル伝達、およびタンパク質の安定化などの様々な細胞プロセスを調節することができる。細胞標的に共有結合すると、ＳＵＭＯは、タンパク質／タンパク質およびタンパク質／ＤＮＡ相互作用を調節するとともに、標的タンパク質を局在化および安定化する。
例えば、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、ＳＵＭＯタンパク質に結合した第１のリンカーに結合することができ、ＳＵＭＯタンパク質は、ＩｇＧまたはＦｃ断片などの融合パートナーにＳＵＭＯを結合する第２のリンカーにさらに結合する。ＳＵＭＯ融合物は、発現を増強し、溶解性を促進し、かつ／または最適化されたタンパク質折り畳みを促進することができる。融合パートナータンパク質のＮ末端またはＣ末端におけるユビキチンまたはＳＵＭＯのような高度に安定した構造の結合は、安定性を増加させることによって収率を増加させることができる。ユビキチンおよびユビキチン様タンパク質の可溶化効果は、ユビキチンおよびＳＵＭＯのコア構造の外側親水性および内側疎水性によっても部分的に説明することができ、別様の不溶性タンパク質に対して洗剤様効果を発揮する。
１つ以上のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、所望の薬物動態特性を提供する構築パートナーに結合することができる。例えば、１つ以上のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、体循環において延長された半減期を示す、合成ポリマーまたは天然タンパク質などのタンパク質に結合することができる。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、そのような半減期延長が、患者における副作用または有害事象の可能性または強度を増加させるリスクを増加させることなく、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドの血清半減期を延長する分子にコンジュゲートまたは融合され得る。延長された血清半減期ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドの投薬は、より低い全身最大曝露（Ｃｍａｘ）での延長された標的カバレッジを可能にすることができる。血清半減期の延長は、ＩＬ－２ＲβγｃリガンドまたはＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物のより少ない投与量および／または頻度の少ない投与レジメンの使用を可能にすることができる。
ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドの血清半減期は、任意の好適な方法によって延長することができる。このような方法は、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドを新生児Ｆｃ受容体に結合するペプチドに連結すること、またはＩｇＧ、ＩｇＧ Ｆｃ断片などの血清半減期が延長されたタンパク質にＩＬ－２Ｒβγｃリガンドを連結すること、またはヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）に連結することを含む。
ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド薬物動態構築物の例としては、（ａ）１つ以上のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドを、Ｆｃ融合、トランスフェリン融合もしくはアルブミン融合などの天然の半減期の長いタンパク質もしくはタンパク質ドメインに組換え融合すること；（ｂ）１つ以上のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドを、ＸＴＥＮ（登録商標）、ホモアミノ酸ポリマー（ＨＡＰ、ＨＡＰ化）、プロリン－アラニン－セリンポリマー（ＰＡＳ、ＰＡＳ化）、エラスチン様ペプチド（ＥＬＰ、ＥＬＰ化）、もしくはゼラチン様タンパク質ＧＬＫポリマーなどの不活性ポリペプチドに組換え融合すること；（ｃ）１つ以上のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドの、ＰＥＧ化もしくはヒアルロン酸などの反復化学部分への化学コンジュゲーションによる流体力学的半径の増加；（ｄ）ポリシアリル化による、またはカルボキシ末端ペプチド（絨毛性ゴナドトロピン（ＣＧ）β鎖のＣＴＰ）などの負電荷の高いシアリル化ペプチドへの融合による、１つ以上のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドの負電荷の増加；または（ｅ）１つ以上のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドの、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、トランスフェリンなどの通常の長い半減期タンパク質のペプチドもしくはタンパク質結合ドメインへのコンジュゲート、ヒト免疫グロブリンＩｇＧの定常断片Ｆｃ鎖への融合、もしくはＸＴＥＮ（登録商標）などの非天然ポリペプチドへの融合、が挙げられる。
１つ以上のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、合成ポリマーに結合され得る。
例えば、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）鎖にコンジュゲートされ得る（体循環におけるＩＬ－２Ｒβγｃリガンドの半減期を延長するため。ＰＥＧは、例えば、５ｋＤａ～１００ｋＤ、１０ｋＤａ～８０ｋＤａ、または２０ｋＤａ～６０ｋＤａの分子量を有することができる。
ＰＥＧ化は、化学的または酵素的に達成することができ、コンジュゲートの生物物理的および生化学的特性は、例えば、ＰＥＧ鎖の構造、サイズ、数および位置に依存し得る。ＰＥＧ化は、タンパク質分解性切断部位をマスキングすることによって、かつ／またはリガンドの有効な流体力学的半径を増加させることによって、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドの循環半減期を延長し、それによって腎クリアランスを低下させることができる。
ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、直鎖または分岐鎖モノメトキシポリエチレングリコール（ｍＰＥＧ）のいずれかにコンジュゲートされてもよく、その結果、分子量および流体力学的半径が増加し、腎臓による糸球体濾過の速度が低下する。ＰＥＧは、非常に可撓性の非荷電であり、ほとんどが非免疫原性、親水性、および非生分解性の分子であり、同等のサイズのタンパク質よりも大きな流体力学的半径を生じる。ＰＥＧ化は、薬理学的に活性な化合物の半減期を延長するために広く使用されている。
ＩｇＧと同様に、血清アルブミンは、非常に長い循環半減期を示す。これらの機能的および構造的に無関係なタンパク質の半減期の延長は、主にＦｃＲｎとの相互作用に由来する。ＨＳＡは、ＩｇＧとは異なる部位でＦｃＲｎに結合するが、両方の相互作用はｐＨ依存性であり、細胞異化からのＦｃＲｎ媒介性救出をもたらす。循環半減期を延長することができるＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物としては、例えば、ＨＳＡへの遺伝子融合、ＨＳＡ結合部分へのコンジュゲーション、およびＨＳＡ結合抗体または抗体断片への融合が挙げられる。
１つ以上のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、ＸＴＥＮ（登録商標）ポリペプチド（Ａｍｕｎｉｘ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ Ｉｎｃ．）に結合され得る。ＸＴＥＮ（登録商標）ポリペプチドは、一般に、２００個以上のアミノ酸の長さであり、ｓｃＦｖの抗原結合領域をマスクし、非構造化し、低い免疫原性を有するように設計されている。ＸＴＥＮ（登録商標）ポリペプチドは、治療剤の循環半減期を増加させることができる。１つ以上のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、ＸＰＡＴ（登録商標）ポリペプチド（Ａｍｕｎｉｘ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）に結合され得る。ＸＰＡＴ（登録商標）ポリペプチドは、プロテアーゼに対する基質を含み、１つ以上のプロテアーゼと活性であり、切断速度を選択し、特異性を付与するように設計することができる。
１つ以上のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドの血清トランスフェリン（Ｔｆ）への遺伝子融合は、増強された薬物動態をもたらし得る。血清トランスフェリンは、体循環から細胞および組織への鉄輸送を媒介する８０ｋＤａの糖タンパク質である。鉄イオンに結合すると、トランスフェリンは、ほとんどの細胞型の表面上に提示されるトランスフェリン受容体（ＴｆＲ）に対して高い親和性を提示する。相互作用すると、Ｔｆ／ＴｆＲ複合体は、受容体媒介エンドサイトーシスを介してエンドソーム内に内在化され、ここで鉄は放出され、Ｔｆ／ＴｆＲは次いで細胞表面に再循環される。ＴｆまたはＴｆＲ結合抗体へのタンパク質治療剤の融合は、半減期延長、ＴｆＲを過剰発現する悪性細胞の標的化、および血液脳関門を越えた治療剤の輸送のためのｒａｉ毛細血管内皮の標的化に使用され得る。
ＩＬ－２ＲβγｃリガンドのＩｇＧまたはＦｃへの融合は、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドのアビディティーの増加をもたらし、プロテインＧ．／Ａ親和性クロマトグラフィーを介した精製をもたらし、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドの循環半減期を延長することができる。
ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド／ＩｇＧ融合タンパク質の半減期の延長は、分子サイズの増加による腎クリアランスの低下、およびＦｃＲｎ媒介性再循環の組み合わせに起因する。
１つ以上のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４を含む任意の好適なＩｇＧに結合することができる。１つ以上のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、軽鎖ＶＬなどのＩｇＧの任意の好適な部分、もしくは重鎖ＶＨに結合することができ、Ｎ末端、Ｃ末端、アミノ酸側鎖を含むか、またはＩｇＧの軽鎖もしくは重鎖のアミノ酸配列に組み込むことができる。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物は、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド／ＩｇＧ構築物を含み得る。
ＩｇＧ構築物は、少なくとも１つの重鎖および少なくとも１つの軽鎖を含む。ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、重鎖のＮ末端、軽鎖のＮ末端、または重鎖のＮ末端、および軽鎖のＮ末端に結合することができる。
ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、重鎖のＣ末端、例えば、ＣＨ３ドメイン、重鎖のＮ末端、および／または軽鎖のＮ末端に結合することができる。
ＩｇＧ構築物において、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、一方もしくは両方の重鎖のＮ末端、一方もしくは両方の軽鎖のＮ末端、および／または重鎖の一方もしくは両方のＣ末端に結合することができる。
ＩｇＧ構築物において、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、ＩｇＧのアミノ酸側鎖に結合することができる。
ＩｇＧ構築物において、ＩｇＧ重鎖および／またはＩｇＧ軽鎖は、ＩｇＧ重鎖および／またはＩｇＧ軽鎖を形成するアミノ酸配列に組み込まれた１つ以上のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドを含み得る。
ＩＬ－２ＲβγｃリガンドＩｇＧ構築物の例を、図２０Ａ～２０Ｊに示す。
ＩＬ－２Ｒβγｃ構築物において、Ｉｌ－２ＲβγｃリガンドをＩｇＧに結合する各リンカーは、独立して、同じであり得るか、または異なり得る。
例えば、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、一方もしくは両方のＩｇＧ重鎖のＣ末端、一方もしくは両方のＩｇＧ軽鎖のＣ末端、一方もしくは両方のＩｇＧ重鎖のＮ末端、および／または一方もしくは両方のＩｇＧ軽鎖のＮ末端に結合することができる。ＩＬ－２ＲβγｃリガンドがＩｇＧ重鎖および／または軽鎖に結合しているＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物を示す例を、図２０Ａ～２０Ｊに示す。ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドのそれぞれは、好適な構築リンカーを介してＩｇＧに結合することができる。
１つ以上のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、単一の軽鎖ＶＬドメイン、単一の重鎖ＶＨドメインなどのＩｇＧ断片、またはＦｃ領域に結合することができる。断片は、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、またはＩｇＭなどの任意の好適な免疫グロブリンに由来し得る。断片は、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４などの任意の好適なＩｇＧに由来し得る。
１つ以上のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、Ｆｃ断片に結合することができる。Ｆｃ断片は、単量体であり得るか、二量体であり得るか、または修飾Ｆｃ断片であり得る。二量体Ｆｃ断片は、Ｎ末端上に１つ以上のジスルフィド結合を含むことができる。修飾の例は、免疫グロブリン重鎖の一方のＣＨ３ドメインにおけるノブ修飾および他方の免疫グロブリン重鎖におけるホール修飾を含むノブ・イントゥ・ホール（ｋｎｏｂ－ｉｎｔｏ－ｈｏｌｅ）修飾である。
本開示によって提供される構築物は、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド－Ｆｃ融合タンパク質を含む。Ｆｃ鎖は、ホモ二量体Ｆｃ鎖またはヘテロ二量体Ｆｃ鎖のいずれかに自己集合する２つの異なるポリペプチドを含み得る。融合タンパク質は、Ｆｃ鎖、１つ以上のＦｃ鎖リンカー、および１つ以上のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドを含み得る。Ｆｃ鎖リンカーは、本開示によって提供されるＩＬ－２ＲβγｃリガンドをＦｃ鎖に結合する。
Ｆｃ鎖は、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭ免疫グロブリンアイソタイプを含む任意の好適な免疫グロブリンアイソタイプのＦｃ鎖を含み得る。Ｆｃ断片は、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４を含む任意の好適なＩｇＧ免疫グロブリンに由来し得る。
ＩＬ－２ＲβγｃリガンドＦｃ融合タンパク質は、１つ以上のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドを含み得る。１つ以上のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドのそれぞれは、Ｆｃ鎖に結合した他のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドと同一であり得るか、または異なり得る。
ＩＬ－２ＲβγｃリガンドＦｃ断片構築物、すなわち、ＩＬ－２Ｒβγｃ Ｆｃ融合体は、１つのＦｃ鎖のＣ末端またはＦｃ断片の両方のＦｃ鎖のＣ末端に結合したＩＬ－２Ｒβγｃリガンドを含み得る。
ＩＬ－２ＲβγｃリガンドＦｃ融合体は、Ｆｃ断片のＮ末端に結合した１つのＩＬ－２Ｒβγｃリガンド、またはＦｃ断片のＮ末端に結合した２つのＩＬ－２Ｒβγｃリガンドを含み得る。
ＩＬ－２ＲβγｃリガンドＦｃ融合体は、Ｆｃ断片のＣ末端に結合した１つまたは２つのＩＬ－２Ｒβγｃリガンドを含むことができ、１つまたは２つのＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、Ｆｃ断片のＮ末端に結合することができる。
各ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、Ｆｃリンカーを介してＦｃ断片に共有結合することができる。ＩＬ－２ＲβγｃリガンドをＦｃ断片に結合する各Ｆｃリンカーは、同じであり得るか、または異なり得る。
各ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、独立して、ＩＬ－２ＲβγｃリガンドのＮ末端を介して、またはＣ末端を介して、Ｆｃリンカーに結合することができる。
ＩＬ－２ＲβγｃリガンドＦｃ断片構築物の例を、図２０Ａ～２０Ｊおよび２１Ａ～２１Ｃに示す。
ｈＩｇＧ１またはｈＩｇＧ２免疫グロブリンＦｃ断片に結合したＩＬ－２Ｒβγｃリガンドを含む構築物の例を、表６に提供する。



配列番号８０６１～８０８２を有するＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物の構成要素を表７に要約する。

Ｆｃ融合タンパク質は、融合ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドおよび任意選択によりＦｃリンカーを含むＦｃ鎖のうちの少なくとも１つを有する２つのＦｃ鎖を含み得る。二量体Ｆｃ融合タンパク質は、１つのＩＬ－２Ｒβγｃリガンドを有するように構成され得、これは、一価のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド－Ｆｃ融合と称され得、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、Ｆｃ鎖のうちの１つに共有結合され、他のＦｃ鎖は、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドに結合されない。二価のＩＬ－２ＲβγｃリガンドＦｃ融合において、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、各Ｆｃ鎖に融合される。
ホモ二量体の二価のＩＬ－２ＲβγｃリガンドＦｃ融合タンパク質に加えて、一価のＩＬ－２ＲβγｃリガンドＦｃ融合タンパク質において、１つのＦｃ鎖は空であってもよく、ヘテロ二量体化バリアントを使用して、２つのＦｃ鎖を一緒にすることができる。これらの実施形態は、自己集合してヘテロ二量体Ｆｃ鎖およびヘテロ二量体Ｆｅ融合タンパク質を形成することができる、２つの異なるバリアントＦｃ配列の使用に依存する。ヘテロ二量体を生成するために使用され得るいくつかの機構が存在する。さらに、これらの機構を組み合わせて、高度なヘテロ二量体化を確実にすることができる。ヘテロ二量体化バリアントは、ノブおよびホールまたはスキューバリアント、電荷対バリアント、およびｐＨバリアントなどの立体バリアントを含み得る。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物は、１つ以上のＩＬ－２Ｒβリガンドが構築パートナーに結合され、独立して、１つ以上のＩＬ－２Ｒγｃリガンドが構築パートナーに結合される構築物を含む。例えば、ＩＬ－２Ｒβリガンドは、Ｆｃ断片または免疫グロブリンのＣ末端に結合することができ、ＩＬ－２Ｒγｃリガンドは、Ｆｃ断片または免疫グロブリンのＮ末端に結合することができる。別の例として、ＩＬ－２Ｒβリガンドは、Ｆｃ断片または免疫グロブリンの一方の重鎖のＣ末端に結合することができ、ＩＬ－２Ｒγｃリガンドは、Ｆｃ断片または免疫グロブリンの他方の重鎖に結合することができる。
１つ以上のＩＬ－２Ｒβリガンドおよび／または１つ以上のＩＬ－２Ｒγｃリガンドを含む構築物は、構築パートナーに結合した１つ以上のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドを含み得る。図２２および２３は、それぞれ、リガンドが構築パートナーのＣ末端および／またはＮ末端に結合される、Ｆｃ断片および免疫グロブリンの例を示す。リガンドのそれぞれは、独立して、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド、ＩＬ－２Ｒβリガンド、またはＩＬ－２Ｒγｃリガンドから選択され得る。
タンパク質または合成ポリマーを含む構築物において、１つ以上のＩＬ－２Ｒβリガンド、１つ以上のＩＬ－２Ｒγｃリガンド、および／または１つ以上のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、構築パートナーに結合することができる。例えば、リガンドは、タンパク質のＣ末端およびＮ末端、もしくはポリマーの末端基、ならびに／または官能化側鎖に結合することができる。
１つ以上のＩＬ－２Ｒβリガンドおよび１つ以上のＩＬ－２Ｒγｃリガンドのそれぞれは、独立して、構築リンカーを介して構築パートナーに結合することができる。構築リンカーは、例えば、本明細書に開示される剛性または可撓性リンカーのいずれかであり得、ＩＬ－２Ｒとの所望の相互作用を促進するように選択され得る。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物は、ＩＬ－２ＲβγｃリガンドまたはタンデムＩＬ－２Ｒβγｃリガンドを、例えば、本明細書に開示されるペプチド、ポリマー、Ｆｃ断片、免疫グロブリン断片、および抗体のうちのいずれかを含む構築パートナーに共有結合する構築リンカーを含み得る。
構築リンカーは、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドの、ＩＬ－２Ｒ上の結合部位への結合を促進するように構成され得る。構築リンカーは、ＩＬ－２ＲβγｃリガンドによるＩＬ－２Ｒの活性化を促進するように構成され得る。
構築リンカーは、ペプチジル構築リンカーであり得る。ペプチジル構築リンカーは、例えば、２～３０個のアミノ酸、２～２５個のアミノ酸、２～２０個のアミノ酸、２～１５個のアミノ酸、または２～１０個のアミノ酸を含み得る。ペプチジル構築リンカーは、例えば、３０個未満のアミノ酸、２５個未満のアミノ酸、２０個未満のアミノ酸、１５個未満のアミノ酸、１０個未満のアミノ酸、または５個未満のアミノ酸を含み得る。ペプチジル構築リンカーは、例えば、２個超のアミノ酸、４個超のアミノ酸、８個超のアミノ酸、１２個超のアミノ酸、または１６個超のアミノ酸を含み得る。
ペプチジル構築リンカーは、例えば、５Å～５００Å、例えば、１０Å～４００Å、５０Å～３００Å、または１００Å～２００Åの長さを有することができる。ペプチジル構築リンカーは、例えば、５Å超、１０Å超、５０Å超、１００Å超、２００Å超、３００Å超、または４００Å超の長さを有することができる。
構築リンカーは、化学的構築リンカーであり得る。化学的構築リンカーは、例えば、５Å～５００Å、例えば、１０Å～４００Å、５Å～３００Å、または１００Å～２００Åの長さを有することができる。化学的リンカーは、例えば、５Å超、１０Ａ超、５０Å超、１００Å超、２００Å超、３００Å超、または４００Å超の長さを有することができる。
化学的構築リンカーは、例えば、３～１００個の結合、５～９０個の結合、１０～８０個の結合、または２０～６０個の結合を含む骨格を含み得る。化学的構築リンカーは、例えば、３個超の結合、５個超の結合、１０個超の結合、２０個超の結合、５０個超の結合、または１００個超の結合を含む骨格を含み得る。
好適なペプチジル構築リンカーの例には、配列番号９３８０～９４０１および９４２０～９４２５のうちのいずれか１つを有するペプチドが含まれ、ｎは、１～３０、例えば、２～２５、２～２０、２～１６、３～１２、４～１０、または６～８の整数であり得る。
ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、ＩＬ－２ＲβγｃリガンドのＮ末端を介して、またはＣ末端を介して、構築リンカーに結合することができる。
異なるリンカー構成を有するＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物の例を、図１９Ａ～１９Ｃに示す。
１つより多いＩＬ－２Ｒβγｃリガンドを有するＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物において、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドのそれぞれは、独立した構築物を介して構築パートナーに結合することができる。構築リンカーのそれぞれは、同じであり得るか、または構築リンカーのうちの少なくとも１つは、異なり得る。１つより多いＩＬ－２Ｒβγｃリガンドのそれぞれは、ＩＬ－２ＲβγｃリガンドのＮ末端を介して、またはＣ末端を介して、それぞれの構築パートナーに結合することができる。
構築リンカーは、切断可能な構築リンカーを含み得る。切断可能な構築リンカーは、インビボで、例えば、特定のｐＨの存在下で、酵素的に、または紫外線もしくは赤外線照射を含む電磁放射線の印加などのエネルギーの印加によって切断され得る。
ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物は、例えば、ペムブロリズマブおよびセミプリマブなどの抗体チェックポイント阻害剤を含む、ＰＤ－１チェックポイント阻害剤などのチェックポイント阻害剤に結合した１つ以上のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドを含み得る。
ＩＬ－２Ｒβγｃチェックポイント阻害剤構築物において、１つ以上のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、配列番号１２６３～１２７０のうちのいずれか１つのアミノ酸配列、または配列番号１２６３～１２７０のうちのいずれか１つに対して、６０％超、７０％超、８０％超、８５％超、９０％超、もしくは９５％超のアミノ酸配列類似性を有するアミノ酸配列を有することができる。
ＩＬ－２Ｒβγｃチェックポイント阻害剤抗体構築物において、１つ以上のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、配列番号１２６３～１２７０のうちのいずれか１つのアミノ酸配列、または１つの重鎖のＣ末端、両方の重鎖のＣ末端、１つの重鎖のＮ末端、両方の重鎖のＮ末端、軽鎖のＮ末端、両方の軽鎖のＮ末端、または前述のうちのいずれかの組み合わせに結合した配列番号１２６３～１２７０のうちのいずれか１つに対してアミノ酸配列類似性を有するＩＬ－２Ｒβγｃリガンドを有することができる。１つ以上のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドのそれぞれは、例えば、１～５０個のアミノ酸を含み得る、構築リンカーを介してチェックポイント阻害剤抗体に独立して結合することができる。
ＩＬ－２ＲβγｃリガンドのＮ末端は、構築リンカーを介してチェックポイント阻害剤抗体に結合することができる。
ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物は、軽鎖が、配列番号１２１８（ＦＰ７）のアミノ酸配列、または配列番号１２１８（ＦＰ７）に対して、６０％超、７０％超、８０％超、８５％超、９０％超、もしくは９５％超のアミノ酸配列類似性を有するアミノ酸配列を有し、重鎖が、配列番号１２１９（ＦＰ８））のアミノ酸配列、または配列番号１２１９（ＦＰ８）に対して、６０％超、７０％超、８０％超、８５％超、９０％超、もしくは９５％超のアミノ酸配列類似性を有するアミノ酸配列である、ペムブロリズマブ／ＩＬ－２Ｒβγｃ融合タンパク質であり得る。
ペムブロリズマブ／ＩＬ－２Ｒβγｃ融合タンパク質は、２つのペムブロリズマブ重鎖および２つのペムブロリズマブ軽鎖を含み得、配列番号１２６３～１２７０のうちのいずれか１つのアミノ酸配列、または配列番号１２６３～１２７０に対して、６０％超、７０％超、８０％超、８５％超、９０％超、もしくは９５％超のアミノ酸配列類似性を有するアミノ酸配列を有するＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、１つの重鎖のＣ末端、両方の重鎖のＣ末端、１つの重鎖のＮ末端、両方の重鎖のＮ末端、１つの軽鎖のＮ末端、両方の軽鎖のＮ末端、または前述のうちのいずれかの組み合わせに結合する。１つ以上のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドのそれぞれは、例えば、１～５０個のアミノ酸を含み得る、構築リンカーを介してペムブロリズマブ抗体に独立して結合することができる。
ＩＬ－２ＲβγｃリガンドのＮ末端は、構築リンカーを介してペムブロリズマブに結合することができる。
ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物は、軽鎖が、配列番号１２２０（ＦＰ９）のアミノ酸配列、または配列番号１２２０（ＦＰ９）に対して、６０％超、７０％超、８０％超、８５％超、９０％超、もしくは９５％超のアミノ酸配列類似性を有するアミノ酸配列を有し、重鎖が、配列番号１２２１（ＦＰ１０））のアミノ酸配列、または配列番号１２２１（ＦＰ１０）に対して、６０％超、７０％超、８０％超、８５％超、９０％超、もしくは９５％超のアミノ酸配列類似性を有するアミノ酸配列である、セミプリマブ／ＩＬ－２Ｒβγｃ融合タンパク質であり得る。
セミプリマブ／ＩＬ－２Ｒβγｃ融合タンパク質は、２つのセミプリマブ重鎖および２つのセミプリマブ軽鎖を含み得、配列番号１２６３～１２７０のうちのいずれか１つのアミノ酸配列、または配列番号１２６３～１２７０のうちのいずれか１つに対して、６０％超、７０％超、８０％超、８５％超、９０％超、もしくは９５％超のアミノ酸配列類似性を有するアミノ酸配列を有するＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、１つの重鎖のＣ末端、両方の重鎖のＣ末端、１つの重鎖のＮ末端、両方の重鎖のＮ末端、１つの軽鎖のＮ末端、両方の軽鎖のＮ末端、または前述のうちのいずれかの組み合わせに結合する。１つ以上のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドのそれぞれは、例えば、１～５０個のアミノ酸を含み得る、構築リンカーを介してセミプリマブ抗体に独立して結合することができる。
ＩＬ－２ＲβγｃリガンドのＮ末端は、構築リンカーを介してセミプリマブに結合することができる。
ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物は、ｈＩｇＧ２／ＩＬ－２Ｒβγｃ融合タンパク質であり得、ｈＩｇＧ２は、配列番号１２６８のアミノ酸配列、または配列番号１２６８に対して、６０％超、７０％超、８０％超、８５％超、９０％超、もしくは９５％超のアミノ酸配列類似性のアミノ酸配列を有し、配列番号１２６３～１２７０のうちのいずれか１つのアミノ酸配列、または配列番号１２６３～１２７０のうちのいずれか１つに対して、６０％超、７０％超、８０％超、８５％超、９０％超、もしくは９５％超のアミノ酸配列類似性のアミノ酸配列を有する１つ以上のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、ｈＩｇＧ２の１つのＣ末端、ｈＩｇＧ２の両方のＣ末端、ｈＩｇＧ２の１つのＮ末端、ｈＩｇＧ２の両方のＮ末端、または前述のうちのいずれかの組み合わせに結合する。１つ以上のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドのそれぞれは、例えば、１～５０個のアミノ酸を含み得る、構築リンカーを介してＩｇＧ２に独立して結合することができる。ＩｇＧ融合パートナーは、ｈＩｇＧ１またはｈＩｇＧ４であり得、１つ以上のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、ｈＩｇＧ２について記載したように、ｈＩｇＧ１またはｈＩｇＧ４融合パートナーに結合することができる。
ＩＬ－２ＲβγｃリガンドのＮ末端は、構築リンカーを介してｈＩｇＧ２に結合することができる。
ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド／免疫グロブリン融合タンパク質は、ｈＩｇＧ１、ｈＩｇＧ２、ｈＩｇＧ３、またはｈＩｇＧ４などの免疫グロブリンに結合した１つ以上のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドを含み得る。ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド／免疫グロブリン構築物の例を、図２３Ａ～２３Ｆに示し、免疫グロブリンは、重鎖２３１および軽鎖２３２、ならびに重鎖２３１および／または軽鎖２３２のＣ末端および／またはＮ末端のいずれかに結合したＩＬ－２Ｒβγｃリガンド２３３を含む。
ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物は、免疫グロブリンＦｃ断片に結合した１つ以上のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドを含み得る。１つ以上のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、配列番号１２６３～１２７０のうちのいずれか１つのアミノ酸配列、または配列番号１２６３～１２７０のうちのいずれか１つに対して、６０％超、７０％超、８０％超、８５％超、９０％超、もしくは９５％超のアミノ酸配列類似性を有するアミノ酸配列を有することができる。ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、Ｆｃ断片のＦｃ鎖のＣ末端および／またはＮ末端、ならびに一方または両方に結合することができる。図２２Ａ～２２Ｆに示すように、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド２２３は、Ｆｃ鎖２２１および２２２の一方または両方に結合することができる。
Ｆｃ断片は、例えば、ｈＩｇＧ１、ｈＩｇＧ２、ｈＩｇＧ３、またはｈＩｇＧ４などの任意の好適な免疫グロブリンに由来し得る。
ＩＬ－２ＲβγｃリガンドのＮ末端は、構築リンカーを介してＦｃ断片に結合することができる。構築リンカーは、例えば、配列番号９３８０～９４０７のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を有する構築リンカーから選択され得る。構築リンカーは、例えば、配列番号９４２０～９４２８のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を有するペプチジル構築リンカーから選択され得る。構築リンカーは、例えば、１～１００個のアミノ酸、例えば、１～５０個、１～２０個、１～１０個、または１～５個のアミノ酸を含み得、各アミノ酸は、ＳおよびＧから独立して選択される。構築リンカーは、例えば、１～１００個のアミノ酸、例えば、１～５０個、１～２０個、１～１０個、または１～５個のアミノ酸を含み得、各アミノ酸は、プロリン、アラニン、リジン、およびグルタミン酸から独立して選択される。構築リンカーは、例えば、（ＰＡ）ｎ（配列番号９４２１）を含み得、ｎは、例えば、１～２０の整数であり得る。各構築リンカーは、それが結合するＩＬ－２Ｒβγｃリガンドが、ＩＬ－２Ｒアゴニストであるように選択され得る。リンカーは、例えば、配列番号９３８４、９３８９、および９３９４～９３９８のうちのいずれか１つから選択されるペプチジルリンカーであり得る。
機能的には、本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物は、例えば、完全ＩＬ－２Ｒアゴニスト、部分的ＩＬ－２Ｒアゴニスト 診断試薬、撮像試薬、標的化化合物、細胞傷害性化合物、および／または二重薬理を示す化合物であり得る。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物は、治療有効性を増強する化合物に特性を付与する１つ以上の部分に結合することができる。特性の例としては、効力、水溶性、極性、親油性、薬物動態、標的化、バイオアベイラビリティ、ｐＨ依存性結合、バイオ活性、薬物動態、細胞活性、代謝、有効性、可逆的不能（ケージ）、選択性、または前述のうちのいずれかの組み合わせが挙げられる。
細胞特異的標的化部分は、受容体、タンパク質、またはエピトープなどの細胞の表面上の成分に対する親和性を有する部分を含むことができる。標的化部分は、例えば、細胞表面成分に対して親和性を有するリガンドまたは抗体を含むことができる。
標的化部分は、標的化部分によって標的化される細胞、細胞集団、または組織に、ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物を含む化合物を誘導し、濃縮することができる。
標的化部分は、標的化される細胞または細胞集団に対するＩＬ－２ＲアゴニズムまたはＩＬ－２Ｒアンタゴニズムの効力を増強することができる。
標的化部分は、標的化される細胞と、標的化部分によって標的化されていない細胞との間のＩＬ－２ＲアゴニズムまたはＩＬ－２Ｒアンタゴニズムに対する差次的応答を提供することができる。
標的化部分は、標的化成分の高い発現レベルを有する細胞と、標的化成分のより低い発現レベルを有する細胞との間で、ＩＬ－２ＲアゴニズムまたはＩＬ－２Ｒアンタゴニズムに対する差次的応答を提供することができる。
ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物は、生物活性部分または生物活性分子をさらに含み得る。ＩＬ－２Ｒβγｃ化合物を使用して、生体活性部分または生体活性分子を、ＩＬ－２ＲβサブユニットおよびＲγｃサブユニットを発現する細胞、細胞集団、または組織に送達することができる。
生体活性部分または分子は、切断不可能であり得、ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物に結合したときに生体活性を発揮することができる。
生体活性部分または分子は、切断可能であり得る。部分は、ｐＨ、酵素、熱、および／または電磁機構などの任意の好適な機構によって切断可能であり得る。電磁機構は、例えば、化合物を赤外線、可視光、または紫外線放射線に曝露することを含み、生体活性部分は、放射線によって切断されることができる感光性部分を通じて、リガンドを含む化合物に結合する。
生体活性分子は、切断不可能であるが、そうでなければ、例えば、電磁放射線への曝露によって活性化可能であるなど、活性化可能であることができる。
リガンドは、特定のｐＨでＩＬ－２Ｒβおよび／またはＲγｃサブユニットへの結合が増強されるように選択することができる。例えば、ｐＨ選択的リガンドは、固形腫瘍微小環境のものと同等の低ｐＨで、ＩＬ－２Ｒβおよび／またはＲγｃサブユニットに対してより高い結合親和性を有することができる。低ｐＨ選択的リガンドを含むＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物を使用して、健常な組織に関連する通常のｐＨ環境における細胞と比較して、ＩＬ－２ＲβサブユニットおよびＲγｃサブユニットを発現する低ｐＨ環境における細胞を優先的に活性化することができる。
したがって、ｐＨ選択的ＩＬ－２Ｒβおよび／またはＲγｃリガンドなどの選択的ＩＬ－２Ｒβおよび／またはＲγｃリガンドを含むＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物を、他のｐＨ選択的生物活性部分および分子とともに使用することができる。
生体活性部分または生体活性分子自体は、特定の細胞集団に対して選択的であり得る。例えば、生体活性部分または生体活性分子は、選択的リガンドによって標的とされる細胞において、より大きいまたはより小さい結合親和性、効力、および／または活性を示すことができる。例えば、生体活性部分または分子は、ｐＨ選択的リガンドによって標的化されるとき、低ｐＨ腫瘍微小環境においてより大きな生体活性を示すことができる。この例では、生体活性部分は、ｐＨ選択的リガンドによってＩＬ－２Ｒβサブユニットを発現する低ｐＨ腫瘍微小環境に位置する細胞を対象とする。したがって、ｐＨ選択的生体活性部分の活性は、低ｐＨ腫瘍の微小環境で増強される。
ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物は、細胞傷害性部分または細胞傷害性分子をさらに含み得る。そのような化合物を使用して、ＩＬ－２Ｒβγｃサブユニットを発現する細胞に細胞傷害性部分または化合物を送達することができる。細胞傷害性部分または分子は、化合物に結合したときに細胞傷害性を発揮することができるか、または切断可能であり得、部分または分子は、化合物から放出されたときに細胞傷害性であり得るか、または細胞傷害性部分は、電磁放射線によって活性化することができる。
細胞傷害性部分または分子を使用して、標的とされるＩＬ－２Ｒβサブユニットを発現する細胞を枯渇させることができる。
細胞傷害性ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物は、１つより多いＩｌ－２Ｒβγｃリガンドを有することができ、それにより、ＩＬ－２Ｒβサブユニットの発現レベルが低い細胞と比較して、ＩＬ－２Ｒβサブユニットを高度に発現する細胞、細胞集団、および組織に対して、より高い親和性および／または選択性を示すことができる。
細胞傷害性ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物は、細胞表面標的化成分をさらに含むことができる。そのような細胞傷害性化合物は、ＩＬ－２Ｒβサブユニットおよび表面標的成分を発現する細胞、細胞集団、および組織に対して強化された有効性を示すことができる。
好適な細胞傷害性分子の例としては、抗微小管剤、アルキル化剤、およびＤＮＡ小溝結合剤が挙げられる。
ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物は、ＩＬ－２受容体の活性化によって媒介されるもの以外の追加の薬理活性を有する部分を含むことができる。薬理活性は、ＩＬ－２Ｒアゴニストと相乗的な治療有効性を有する活性であり得るか、またはアンタゴニスト活性もしくは薬理活性は、ＩＬ－２Ｒアゴニストもしくはアンタゴニスト活性のものと相乗的でない治療有効性を有する活性であり得る。好適な薬理学的部分の例としては、チェックポイント分子の阻害剤である抗体および抗体断片、アポトーシス促進性分子および抗アポトーシス分子、細胞傷害性分子、ケモカインのアゴニスト、ケモカインのアンタゴニスト、サイトカイン、増殖因子および他の細胞表面受容体、ならびにインテグリンなどの細胞表面接着分子のリガンドおよび阻害剤が挙げられる。
本開示によって提供される１つ以上のリガンドは、患者における特定の組織または細胞に１つ以上のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドを標的化する能力を付与する標的化部分を含む分子に結合することができる。標的化部分は、標的組織または標的細胞の表面上に発現される細胞表面タンパク質または受容体に対する親和性を有することができ、それによって、二重リガンドを標的組織または細胞に導くことができる。標的化部分の例としては、細胞表面タンパク質、リガンド、生物学的受容体、および抗原に特異的な抗体およびその断片を含む抗原結合部分が挙げられる。
抗体は、標的細胞型の表面上で発現される抗原に結合することができる。抗体は、任意の有用または既知の有用な薬理学的機能を有しない場合があるが、標的化抗原を発現しないか、または標的化細胞型もしくは組織の発現レベルよりも低い標的化抗原の発現レベルを有する細胞型もしくは組織と比較して、ＩＬ－２Ｒβγｃ結合構築物が、細胞型または組織を優先的に標的化するように誘導する役割を果たす。抗体は、細胞表面抗原に結合したときに有用な薬理学的機能を有することができる。これらの構築物は、二重薬理ＩＬ－２Ｒβγｃ結合構築物と称される。
ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物は、例えば、腫瘍標的化部分、例えば、腫瘍特異的抗体、腫瘍特異的抗体断片、腫瘍特異的タンパク質、腫瘍特異的ペプチド、非ペプチジル腫瘍細胞リガンド、または前述のうちのいずれかの組み合わせなどを含むことができる。
ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物は、免疫細胞標的化部分、例えば、免疫細胞特異的抗体、免疫細胞特異的抗体断片、免疫細胞特異的タンパク質、免疫細胞特異的ペプチド、非ペプチジル免疫細胞リガンド、または前述のうちのいずれかの組み合わせなどを含むことができる。
１つ以上のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、１つ以上のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドを標的化する能力を患者の特定の組織または細胞に付与する標的化部分を含む分子に結合することができる。標的化部分は、標的組織または標的細胞の表面上に発現される細胞表面タンパク質または受容体に対する親和性を有することができ、それによってＩＬ－２Ｒβγｃリガンドを標的組織または細胞に導くことができる。標的化部分の例としては、細胞表面タンパク質、リガンド、生物学的受容体、および抗原に特異的な抗体およびその断片を含む抗原結合部分が挙げられる。
抗体は、標的細胞型の表面上で発現される抗原に結合することができる。抗体は、任意の有用または既知の有用な薬理学的機能を有しない場合があるが、標的化抗原を発現しないか、または標的化細胞型もしくは組織の発現レベルよりも低い標的化抗原の発現レベルを有する細胞型もしくは組織と比較して、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物が、細胞型または組織を優先的に標的化するように誘導する役割を果たす。抗体は、細胞表面抗原に結合したときに有用な薬理学的機能を有することができる。これらの構築物は、二重薬理ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物と称される。
ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド融合タンパク質は、１つ以上の抗原結合部分を含むことができる。さらに２つの抗原結合部分は、同じ抗原または異なる抗原に向けられ得る。
標的化部分は、抗原結合部分であり得、ＩＬ－２Ｒβγｃ融合タンパク質は、免疫複合体であり得る。免疫複合体は、細胞表面上、血清中の疾患細胞の表面上のウイルス感染細胞の表面上、および／または細胞外マトリックス中で発現される抗原に結合することができる１つ以上の抗原結合部分を含むことができる。
抗原結合部分は、抗体または抗体断片を含むことができる。抗原結合部分は、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４アイソタイプを含む、ＩｇＧクラスの免疫グロブリンなどの免疫グロブリン分子であり得る。ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、ＣＨ３ドメインのＣ末端などの重鎖の一方または両方に結合することができる。抗原結合部分は、Ｆａｂ分子、ｓｃＦｖ分子、またはペプチドであり得る。
抗原結合部分は、例えば、腫瘍細胞の表面上または腫瘍細胞環境において発現される抗原、免疫細胞上で発現される抗原、ＩＬ－２ＲのＩＬ－２ＲβおよびＩＬ－２Ｒγｃサブユニットを主に発現する細胞の表面上で発現される抗原などの任意の特定の抗原、例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、Ｔｒｅｇ、またはＮＫ細胞に向けられ得る。
腫瘍細胞上で発現される好適な抗原標的の例としては、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、テネイシン－ＣのＡ１ドメイン（ＴＮＣ Ａ１）、テネイシン－ＣのＡ２ドメイン（ＴＮＣ Ａ２）、フィブロネクチンのエクストラドメインＢ（ＥＤＢ）、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）、および黒色腫関連コンドロイチン硫酸プロテオグリカン（ＭＣＳＰ）が挙げられる。
標的化に使用することができる好適な腫瘍抗原の他の例としては、ＭＡＧＥ、ＭＡＲＴ－１／Ｍｅｌａｎ－Ａ、ｇｐｌＯＯ、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰＩＶ）、アデノシンデアミナーゼ結合タンパク質（ＡＤＡｂｐ）、シクロフィリンｂ、結腸直腸関連抗原（ＣＲＣ）－００１７－Ａ／ＧＡ７３３、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）ならびにその免疫原性エピトープＣＡＰ－１およびＣＡＰ－２、ｅｔｖ６、ａｍｌｌ、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）ならびにその免疫原性エピトープＰＳＡ－１、ＰＳＡ－２、およびＰＳＡ－３、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、Ｔ細胞受容体／ＣＤ３－ゼータ鎖、腫瘍抗原のＭＡＧＥファミリー（例えば、ＭＡＧＥ－Ａｌ、ＭＡＧＥ－Ａ２、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＭＡＧＥ－Ａ４、ＭＡＧＥ－ＡＳ、ＭＡＧＥ－Ａ６、ＭＡＧＥ－Ａ７、ＭＡＧＥ－ＡＳ、ＭＡＧＥ－Ａ９、ＭＡＧＥ－ＡｌＯ、ＭＡＧＥ－Ａｌｌ、ＭＡＧＥ－Ａ１２、ＭＡＧＥ－Ｘｐ２（ＭＡＧＥ－Ｂ２）、ＭＡＧＥ－Ｘｐ３（ＭＡＧＥ－Ｂ３）、ＭＡＧＥ－Ｘｐ４（ＭＡＧＥ－Ｂ４）、ＭＡＧＥ－Ｃｌ、ＭＡＧＥ－Ｃ２、ＭＡＧＥ－Ｃ３、ＭＡＧＥ－Ｃ４、ＭＡＧＥ－ＣＳ）、腫瘍抗原のＧＡＧＥファミリー、例えば、ＧＡＧＥ－Ｉ、ＧＡＧＥ－２、ＧＡＧＥ－３、ＧＡＧＥ－４、ＧＡＧＥ－５、ＧＡＧＥ－６、ＧＡＧＥ－７、ＧＡＧＥ－８、ＧＡＧＥ－９、ＢＡＧＥ、ＲＡＧＥ、ＬＡＧＥ－Ｉ、ＮＡＧ、ＧｎＴ－Ｖ、ＭＵＭ－１、ＣＤＫ４、チロシナーゼ、ｐ５３、ＭＵＣファミリー、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ｐ２１ｒａｓ、ＲＣＡＳ１、ａ－フェトプロテイン、Ｅ－カドヘリン、ａ－カテニン、－カテニンおよびｙ－カテニン、ｐ１２０ｃｔｎ、ｇｐｌＯＯ Ｐｍｅｌ１１７、ＰＲＡＭＥ、ＮＹ－ＥＳ０－１、ｃｄｃ２７、大腸腺腫症タンパク質（ＡＰＣ）、フォドリン、コネクシン３７、Ｉｇ－イディオタイプ、ｐ１５、ｇｐ７５、ＧＭ２およびＧＤ２ガングリオシド、ウイルス産物、例えば、ヒトパピローマウイルスタンパク質、腫瘍抗原のＳｍａｄファミリー、ｌｍｐ－１、ＰＩＡ、ＥＢＹ－コード核抗原（ＥＢＮＡ）－１、脳グリコーゲンホスホリラーゼ、ＳＳＸ－１、ＳＳＸ－２（ＨＯＭ－ＭＥＬ－４０）、ＳＳＸ－１、ＳＳＸ－４、ＳＳＸ－５、ＳＣＰ－１およびＣＴ－７、ならびにｃ－ｅｒｂＢ－２が挙げられる。
ウイルス抗原の例としては、インフルエンザウイルスヘマグルチニン、エプスタイン・バーウイルスＬＭＰ－１、Ｃ型肝炎ウイルスＥ２糖タンパク質、ＨＩＶ ｇｐ１６０、およびＨＩＶ ｇｐ１２０が挙げられる。
ＥＣＭ抗原の例としては、シンデカン、ヘパラナーゼ、インテグリン、オステオポンチン、リンク、カドヘリン、ラミニン、ラミニンＥＧＦ型、レクチン、フィブロネクチン、ノッチ、テネイシン、およびマトリキシンが挙げられる。
標的化ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド融合タンパク質は、例えば、ＦＡＰ、Ｈｅｒ２、ＥＧＦＲ、ＩＧＦ－ｌＲ、ＣＤ２（Ｔ細胞表面抗原）、ＣＤ３（ＴＣＲに関連するヘテロ多量体）、ＣＤ２２（Ｂ細胞受容体）、ＣＤ２３（低親和性ＩｇＥ受容体）、ＣＤ３０（サイトカイン受容体）、ＣＤ３３（骨髄細胞表面抗原）、ＣＤ４０（腫瘍壊死因子受容体）、ＩＬ－６Ｒ（ＩＬ６受容体）、ＣＤ２０、ＭＣＳＰ、およびＰＤＧＦＲ（血小板由来成長因子受容体）から選択される細胞表面抗原に結合するように構成され得る。
標的化ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物は、ＩＬ－２Ｒも発現する細胞によって細胞の表面上に発現される抗原または受容体に結合することができる抗原結合部分を含むことができる。ＩＬ－２Ｒを発現する細胞の例としては、例えば、Ｔｒｅｇ細胞、ＮＫ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞および活性化Ｔ細胞が挙げられる。
標的化ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物は、ＩＬ－２ＲのＩＬ－２ＲβおよびＩＬ－２Ｒγｃサブユニットを発現する細胞によって発現される抗原または受容体に結合することができる抗原結合部分を含むことができる。ＩＬ－２ＲのＩＬ－２ＲβおよびＩＬ－２Ｒγｃサブユニットを発現する細胞としては、例えば、ＮＫ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞の細胞、および活性化Ｔ細胞が挙げられる。
ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞の表面上で発現される抗原の例としては、ＣＤ４＋、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ４５ＲＯ－、ＣＣＲ７＋、およびＣＤ２５が挙げられる。
ＣＤ８＋Ｔ細胞の表面上で発現される抗原の例としては、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ８＋、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ４５Ｏ＋、ＣＣＲ７＋、およびＣＤ２８＋が挙げられる。
ＣＤ４＋Ｔ細胞の表面上で発現される抗原の例としては、ＣＤ４＋、ＣＸＣＲ３＋、ＣＣＲ５＋、およびＩＬ１２Ｒβ２＋などのＴｈ１細胞マーカー；ＣＤ４＋、ＣＣＲ４＋、およびＩＬ１２Ｒβ２＋などのＴｈ２細胞マーカー；ＣＤ４＋、ＣＣＲ３＋、およびＣＣＲ５＋などのＴｈ９細胞マーカー；ＣＤ４＋、ＣＣＲ６＋、ＣＣＲ４＋、およびＮＫ１．１＋などのＴｈ１７細胞マーカー；ＣＤ４＋、ＣＣＲ１０＋、ＣＣＲ４＋、およびＣＣＲ６＋などのＴｈ２２細胞マーカー；ＣＤ４＋、ＣＤ１２７＋、ＣＤ２４＋、およびＣＴＬＡ－４＋などのＴｒｅｇ細胞マーカー；ならびにＣＤ４＋、ＣＸＣＲ５＋、ＣＤ４０Ｌ＋、およびＩＣＯＳ＋などのＴｆｈ細胞マーカーが挙げられる。
細胞傷害性ＣＤ８＋Ｔ細胞の表面上に発現される抗原の例としては、ＣＤ８＋およびＣＣＲ７－が挙げられる。
メモリーＴ細胞抗原の例としては、ＣＣＲ５、ＣＣＲ７、ＣＤ１１ａ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ５７、および／ＣＤ６２が挙げられる。
ナイーブＴ細胞抗原の例としては、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＣＲ７、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ１２７、およびＣＤ１３２が挙げられる。
ＮＫ細胞の表面上で発現される抗原の例としては、ＴＲＡＩＬ、ＣＤ１６、ＮＫｐ３０ａｂ、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｄ、２Ｂ４、ＤＮＡＭ－１、ＮＫＨ２Ａ、ＫＩＲ、ＣＤ１３７、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＣＤ１６、ＣＤ５６、ＣＤ５７、およびＣＤ２７が挙げられる。
標的化ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物は、免疫応答を調節する役割を有する細胞の表面上に発現される抗原または受容体に結合することができる抗原結合部分を含むことができる。
免疫応答の調節に関連する細胞によって発現される抗原の例としては、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ－４、ＣＤ２０、およびＣＤ３０が挙げられる。
標的化ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物は、ＣＤ２５などのＴｒｅｇ細胞の表面上で発現される抗原または受容体に結合することができる抗原結合部分を含むことができる。例えば、Ｔｒｅｇ細胞標的化構築物は、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド／ダクリズマブ抗体融合物を含むことができる。
本開示によって提供される二重薬理ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物は、本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃリガンドと、薬理学的部分とを含むことができる。薬理学的部分は、ＩＬ－２Ｒを発現する細胞、またはＩＬ－２Ｒを発現する細胞以外の細胞に治療効果を及ぼすことができる。１つ以上のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、例えば、抗腫瘍剤、抗微生物剤、ホルモン、免疫調節剤、および抗炎症剤などの治療用化合物を含む生物学的剤に結合することができる。
二重薬理ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物は、例えば、抗体などのタンパク質を含むことができる。抗体は、ＩｇＡアイソタイプ、ＩｇＤアイソタイプ、ＩｇＥアイソタイプ、ＩｇＧアイソタイプ、またはＩｇＭアイソタイプであり得る。二重薬理ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物は、リンカーを介して薬理学的に活性な抗体と結合されたＩＬ－２Ｒβγｃリガンドを含むことができる。リンカーは、天然に存在する分子または合成分子であり得る。
二重薬理ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物は、抗原結合部分と、Ｆｃリンカーを介してＦｃ鎖に結合した１つ以上のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドとを有する抗体を含むことができる。
抗体は、細胞特異的抗原に向けられた抗体を含むことができる。細胞特異的抗原に向けられた抗体の例としては、アレムツズマブ（ＣＤ５２抗原）、トラスツズマブ（Ｈｅｒ２タンパク質）、イブリツモマブチウキセタン（ＣＤ２０抗原）、ブレンツキシマブベドチン（ＣＤ３０抗原）、アドトラスツズマブエムタンシン（Ｈｅｒ２タンパク質）、ブリナツモマブ（ＣＤ１９タンパク質およびＣＤ３タンパク質）が挙げられる。
二重薬理ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物は、がんの治療において有用であることが知られている部分を含むことができる。がんの治療に有用であることが知られているモノクローナル抗体の例としては、アレムツズマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、ベバシズマブ、ブレンツキシマブ、セミプリマブ、セツキシマブ、トラスツズマブ、デノスマブ、リツキシマブ、イピリムマブ、ニボルマブ、オビヌツズマブ、オファツムマブ、パニツムマブ、ペムブロリズマブ、ペルツズマブ、リツキシマブ、およびトラスツズマブが挙げられる。
二重薬理学ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物は、ＣＴＬＡ－４阻害剤、ＰＤ－１阻害剤、ＰＤ－Ｌ１、およびＰＤ－Ｌ２阻害剤などのチェックポイント阻害剤であることが知られている部分を含むことができる。
好適なＰＤ－１阻害剤の例としては、ニボルマブ、セミプリマブ、およびペムブロリズマブが挙げられ、ＣＴＬＡ－４阻害剤の例としては、イピリムマブが挙げられ、ＰＤ－Ｌ１阻害剤の例としては、アテゾリズマブおよびデュルバルマブが挙げられる。
自己免疫疾患および炎症性疾患の治療に有用なモノクローナル抗体の例としては、アブシキシマブ、アダリムマブ、アレファセプト、アレムツズマブ、バシリキシマブ、ベリムマブ、ベズロツクスマブ、カナキヌマブ、セルトリズマブ、ダクリズマブ、デノスマブ、エファリズマブ、ゴリムマブ、インフレクトラ、イピリムマブ、イキセキズマブ、ナトリズマブ、ニボルマブ、オララツマブ、アマリズマブ、パリビズマブ、パニツムマブ、ペムブロリズマブ、リツキシマブ、トシリズマブ、トラスツズマブ、セクキヌマブ、およびウステキヌマブが挙げられる。
二重薬理ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド抗体構築物は、チェックポイント阻害剤に対する抗体を含むことができる。チェックポイント阻害剤に対する抗体としては、ＣＴＬＡ－４遮断抗体、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、およびスパルタルズマブなどのＰＤ－１阻害剤、アレゾリズマブなどのＰＤ－Ｌ１阻害剤、ならびにＣＩＳＨなどの固有のチェックポイント遮断を標的とする他の抗体が挙げられる。
好適なＦＤＡ承認抗体チェックポイント阻害剤としては、イピリムマブ（ＣＴＬＡ－４）、ニボリウアブ（ＰＤ－１）、ペムブロリズマブ（ＰＤ－１）、アレゾルズマブ（ＰＤ－１）、アベルマブ（ＰＤ－１）、デュルバルマブ（ＰＤ－１）、およびセミプリマブ（ＰＤ－１）が挙げられる。
二重薬理ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物は、サイトカイン融合物を含むことができる。ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドサイトカイン構築物は、１つ以上のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドおよび天然に存在する分子または合成分子に結合した１つ以上のサイトカインを含むことができる。例えば、１つ以上のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドおよび１つ以上のサイトカインは、ポリペプチドまたはＩｇＧもしくはＦｃ断片などのタンパク質に結合することができる。サイトカインは、例えば、インターロイキン、ケモカイン、コロニー刺激因子、インターフェロン、形質転換成長因子、および腫瘍壊死因子から選択することができる。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃ結合構築物は、ウイルス学的構築物を含むことができる。ＩＬ－２Ｒβγｃ結合ウイルス学的構築物は、ウイルスの表面上に発現されるタンパク質に対して本開示によって提供されるリガンド、ウイルスによって標的とされる細胞の表面上に発現される抗原、ウイルスによって標的とされる細胞表面抗原、またはウイルス様粒子、またはワクチンを含むことができる。
本開示によって提供される特定のＩＬ－２ＲβγｃリガンドおよびＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物は、組換えＤＮＡ技術を使用して合成することができる。
本開示によって提供される特定のＩＬ－２ＲβγｃリガンドおよびＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物は、合成有機化学法を使用して合成することができる。
本開示によって提供されるＩＬ－２ＲβγｃリガンドおよびＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物は、ＩＬ－２Ｒのアゴニストである。
ＩＬ－２ＲβγｃリガンドおよびＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物は、ＩＬ－２ＲのＩＬ－２Ｒβサブユニットおよび／またはＩＬ－２Ｒγｃサブユニットに結合することができ、ＩＬ－２Ｒを活性化することができる。ＩＬ－２Ｒβサブユニットおよび／またはＩＬ－２Ｒγｃサブユニットに対するＩＬ－２ＲβγｃリガンドまたはＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物の結合親和性（ＩＣ５０）は、独立して、例えば、１００μＭ未満、１０μＭ未満、１μＭ未満、１００ｎＭ未満、１０ｎＭ未満、または１ｎＭ未満であり得る。
ＩＬ－２Ｒβサブユニットおよび／またはＩＬ－２Ｒγｃサブユニットに対するＩＬ－２ＲβγｃリガンドまたはＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物の結合親和性（ＩＣ５０）は、例えば、１００μＭ未満、１０μＭ未満、１μＭ未満、１００ｎＭ未満、１０ｎＭ未満、または１ｎＭ未満であり得る。ＩＬ－２ＲβγｃリガンドまたはＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物は、ＩＬ－２と競合的または非競合的に、ＩＬ－２Ｒβサブユニットおよび／またはＩＬ－２Ｒγｃサブユニットに結合することができる。
ＩＬ－２ＲβγｃリガンドまたはＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物は、ＩＬ－２ＲβサブユニットおよびＩＬ－２Ｒγｃサブユニットを発現する細胞をより強力に活性化するように構成され得、それによって、ある用量のＩＬ－２ＲβγｃリガンドアゴニストまたはＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物アゴニストを制御することによって、異なる細胞型の表面上で発現されるＩＬ－２Ｒを差次的に活性化する能力を促進する。例えば、ＩＬ－２ＲβγｃリガンドまたはＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物とインキュベートした場合、ＩＬ－２Ｒβγｃサブユニットを発現する初代ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）は、シグナル伝達性転写因子５（ＳＴＡＴ５）をリン酸化する。
ＩＬ－２ＲβγｃリガンドまたはＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物によって誘導されるＴＦ－１βまたはＮＫ－９２細胞におけるＳＴＡＴ５リン酸化についてのＥＣ５０は、例えば、１００μＭ未満、１０μＭ未満、１μＭ未満、１００ｎＭ未満、１０ｎＭ未満、または１ｎＭ未満であり得る。
ＩＬ－２ＲβγｃリガンドまたはＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物によって誘導されるＴＦ－１βまたはＮＫ－９２細胞におけるＳＴＡＴ５リン酸化についてのＥＣ５０は、例えば、１ｐＭ～１００μｍ、１０ｐＭ～１０μｍ、または１００ｐＭ～１μｍの範囲内であり得る。
本開示によって提供されるＩＬ－２ＲβγｃリガンドおよびＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物は、ＮＫ－９２細胞におけるＳＴＡＴ５リン酸化経路、ＡＫＴリン酸化経路、およびＥＲＫ１／２リン酸化経路を活性化することができる。
ＩＬ－２ＲβγｃリガンドまたはＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物は、ＩＬ－２Ｒを部分的に活性化することができる。部分的に活性化とは、例えば、最大活性化の７５％未満、最大活性化の５０％未満、２５％未満、１０％未満、または１％未満の活性化レベルを指す。ＩＬ－２Ｒの最大活性化（Ｅｍａｘ）は、高濃度ＩＬ－２などの高アゴニスト濃度で達成可能な細胞シグナル（活性化）の振幅を指す。部分的ＩＬ－２Ｒアゴニストは、ＩＬ－２Ｒを発現する異なる細胞型間のＩＬ－２ＲβおよびＩＬ－２Ｒγｃサブユニットの活性化に対するＩＬ－２Ｒの応答レベルの調節に有効であり得る。例えば、異なる細胞型は、ＩＬ－２Ｒサブユニット、ＩＬ－２Ｒα、ＩＬ－２Ｒβ、およびＩＬ－２Ｒγｃのそれぞれの発現レベルにおいて変化し、ＩＬ－２Ｒアゴニストに対する異なる感受性を示すことが知られている。
ＩＬ－２ＲβγｃリガンドまたはＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物は、修飾ＩＬ－２Ｒβリガンドおよび／またはＩＬ－２Ｒγｃリガンドを含むことができる。修飾ＩＬ－２ＲβおよびＩＬ－２Ｒγｃリガンドは、ＩＬ－２Ｒに結合して活性化するように選択または設計され得るが、ＩＬ－２Ｒに対する親和性および効力は低いかまたは中程度である。そのようなＩＬ－２ＲβγｃリガンドおよびＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物は、ＩＬ－２Ｒαを高度に発現する細胞と、低レベルのＩＬ－２Ｒα発現を有する細胞との間で、例えば、ＩＬ－２Ｒαの高発現を有するＴｒｅｇと、低発現レベルのＩＬ－２Ｒαを有するＴｅｆｆ細胞との間で、ＩＬ－２Ｒ活性化についてのより大きな差次的感受性を有することができる。
本開示によって提供されるＩＬ－２ＲβγｃリガンドおよびＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物は、完全ＩＬ－２Ｒアゴニスト、部分的ＩＬ－２Ｒアゴニスト、バイアスＩＬ－２Ｒアゴニスト、またはｐＨバイアスＩＬ－２Ｒアゴニストとして機能することができる。
実施例８に示すように、ＮＫ－９２細胞において、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド（ＢＧＬ２１）は、ＮＫ－９２細胞におけるＳＴＡＴ５リン酸化、ＡＫＴリン酸化およびＥＲＫ１／２リン酸化に関して、ＩＬ－２に匹敵する完全アゴニストとして機能する。
実施例３～６および対応する図２～５Ｂに示すように、本開示によって提供される他のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、ＴＦ－１β細胞において、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド（ＢＧＬ２１）よりも少ないＳＴＡＴ５リン酸化活性を示し、ＴＦ－１β細胞におけるＳＴＡＴ５リン酸化に関して部分的アゴニストとみなすことができる。
実施例９に示されるように、静止ＣＤ８Ｔ細胞、静止Ｔｒｅｇ細胞、および静止ＣＤ４Ｔ細胞におけるＳＴＡＴ５リン酸化に関して、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド（ＢＧＬ２１）は、異なる細胞型にわたって約１Ｅ－９（ＥＣ５０）の非選択的アゴニスト活性を示す。対照的に、ＩＬ－２についてのＥＣ５０は、約２桁の大きさで変化し、静止Ｔｒｅｇ細胞におけるＳＴＡＴ５リン酸化に対する高い選択性を示す。
ＴＦ－１β細胞におけるＳＴＡＴ５リン酸化によって決定されるアゴニスト活性が、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド、構築リンカー、構築パートナー、および構築パートナー上の結合位置に応じて修飾されたＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物についても、同様の効果が観察される。
本開示によって提供されるＩＬ－２ＲβγｃリガンドおよびＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物は、ＩＬ－２Ｒアンタゴニストとして機能することができる。本開示によって提供されるＩＬ－２ＲβγｃリガンドアンタゴニストおよびＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物アンタゴニストは、ＩＬ－２Ｒに、例えば１００μＭ未満、１０μＭ未満、１μＭ未満、０．１μＭ未満、または０．０１μＭ未満のＩＣ５０で結合することができ、例えば、ＳＴＡＴ５リン酸化アッセイなどの実施例に開示される機能的アッセイのうちのいずれかを使用して決定して、検出可能な機能活性を示さない。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物は、がん新抗原ワクチンを含む、特定のワクチンと組み合わせた場合に有用であり得る。腫瘍ＤＮＡの変異は、身体に対して異質である新しいタンパク質配列を産生する。ワクチンは、腫瘍特異的新抗原に関して患者の免疫系を特異的に活性化するように設計することができる。新抗原ワクチンと組み合わせて投与される場合、本開示により提供されるＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物は、腫瘍微小環境において新抗原特異的Ｔ細胞を拡大および増殖させることができ、それにより、がんの治療のためのワクチン誘導新抗原特異的Ｔ細胞の最大拡大を駆動する。
例えば、バイアスＩＬ－２Ｒβγｃアゴニストであることが報告されている、ベンペガルデスロイキン（ＮＫＴＲ－２１４）を、前臨床腫瘍モデルにおける新抗原ワクチンＶＢ１０．ＮＥＯと組み合わせた。新抗原特異的Ｔ細胞応答に対する相乗効果が観察された。相乗効果はまた、ＣＤ４およびＣＤ８ Ｔ細胞の両方においても観察され、ＣＤ８ Ｔ細胞に対する効果が最も顕著であった。ＮＫＴＲ－２１４および抗ＰＤ－１と併用した新抗原ワクチンＶＢ１０．ＮＥＯは、小腫瘍の迅速かつ持続的な腫瘍退縮および大腫瘍の長期的な安定化を誘導した。ＮＫＴＲ－２１４と新抗原ワクチンＶＢ１０．ＮＥＯの組み合わせは、現在、ヒトでの試験において研究されている。
別の例として、ＩＬ－２Ｒβγアゴニストであると報告されている、ＩＬ－１５変異体およびＩＬ－１５ＲのＩＬ－１５Ｒαサブユニット（ＡＬＴ－８０３）のＦｃ融合物の複合体は、発がん性物質誘発ラット非筋肉侵襲性膀胱がん（ＮＭＩＢＣ）モデルにおいて、免疫刺激剤である、カルメット・ゲラン桿菌（ＢＣＧ）、および結核ワクチンと血管内に同時投与された。単一の治療剤として、ＡＬＴ－８０３は、対照と比較して腫瘍負荷を３５％減少させたが、ＢＣＧのみは、腫瘍負荷を１５％減少させただけであった。ＡＬＴ－８０３およびＢＣＧの組み合わせは、対照と比較して腫瘍負荷を４６％減少させた。この組み合わせは、現在、ヒト臨床試験において研究されている。
したがって、本開示によって提供されるＩＬ－２ＲβγｃリガンドおよびＩＬ－２Ｒβγｃ構築物は、アジュバントとして使用することができる。アジュバントは、保護免疫に直接関与することなくワクチンの有効性を増強する化合物を指す。例えば、本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物は、がんワクチンと併用して使用することができる。
本開示によって提供されるＩＬ－２ＲβγｃリガンドおよびＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物は、ＩＬ－２Ｒβγｃサブユニットも発現する細胞の膜表面上で発現されるように操作される場合、細胞療法に有用であり得る。ＮＫ細胞を使用した、または再標的化されたキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を使用した養子免疫療法は、現在、腫瘍およびウイルス感染に対する治療として研究されている。これらの細胞療法に関する１つの課題は、注入された細胞の最適以下の持続生存である。
ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドが細胞の細胞外表面上で発現されるような方法で膜タンパク質に融合されたＩＬ－２ＲβγｃリガンドをコードするＤＮＡは、標準的な技術を使用して構築され得る。ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドを含む融合タンパク質が発現されると、細胞上のＩＬ－２受容体が活性化され、細胞の長期持続性をもたらす。
例として、ペプチジルリンカー（ＣＩＲＢ）を介して結合された、ＩＬ－２およびその受容体サブユニットであるＩＬ－２Ｒβの新規のキメラＩＬ－２／ＩＬ－２Ｒβ融合タンパク質が報告されている。ＣＩＲＢ（ＮＫ－９２ＣＩＲＢ）を発現するＮＫ－９２細胞を高度に活性化し、外因性ＩＬ－２なしで無制限に拡大した。ＩＬ－２分泌ＮＫ－９２細胞株と比較した場合、ＮＫ－９２ＣＩＲＢ細胞は、ＮＫ－９２細胞よりも活性化され、細胞傷害性が高く、成長阻害に耐性があった。がん細胞の存在下では、ＮＫ－９２ＣＩＲＢ細胞は、増強された細胞傷害性を示し、マウスにおける優れたインビボ抗腫瘍効果をもたらした。
別の例として、ＣＡＲおよび膜結合キメラＩＬ－１５（ｍｂＩＬ１５）の両方の共発現が報告されている。ＩＬ－１５は、ＩＬ－２Ｒβγｃを活性化することによって機能することが知られている。ｍｂＩＬ１５－ＣＡＲ Ｔ細胞は、ＣＡＲシグナル伝達に依存しないＴ細胞の持続性を示し、動物モデルにおいてＣＤ１９＋白血病の強力な拒絶を達成した。長寿Ｔ細胞は、メモリー様転写プロファイルを有していた。結果は、ＣＡＲ＋Ｔ細胞が、ｍｂＩＬ１５を通じてシグナル伝達することによって維持されるメモリー幹細胞表現型を用いて長期持続性を開発することができることを実証した。
ＩＬ－２ＲβγｃリガンドをコードするＤＮＡを細胞に組み込むことができ、本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃリガンドを生成するように構成することができる。ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、細胞から分泌することができ、分泌細胞（すなわち、自己分泌シグナル伝達）および／または分泌細胞の近傍の細胞（すなわち、パラクリンシグナル伝達）と相互作用することができる。本開示によって提供される分泌型ＩＬ－２ＲβγｃリガンドまたはＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物は、ＩＬ－２Ｒアゴニストであり得、分泌細胞の近くに局在するように設計することができる。
本開示によって提供されるＩＬ－２ＲβγｃリガンドまたはＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物は、患者内または生体試料内で非調節性Ｔ細胞を拡大するために使用することができる。Ｔｒｅｇ細胞に対する非調節性Ｔ細胞の比率を増加させる方法は、Ｔ細胞の集団を、有効量のＩＬ－２ＲβγｃリガンドまたはＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物と接触させることを含むことができる。この比率は、Ｔ細胞集団内のＣＤ３＋ＦＯＸＰ３＋細胞対ＣＤ３＋ＦＯＸＰ３－細胞の比率を決定することによって測定することができる。ヒト血液における典型的なＴｒｅｇ頻度は、総ＣＤ４＋ＣＤ３＋Ｔ細胞の５％～１０％であるが、特定の疾患では、この割合は、より低いまたはより高い場合がある。
ＩＬ－２ＲβγｃリガンドまたはＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物を使用して、ＮＫ細胞を拡大することができる。がん細胞を標的とする免疫細胞活性をリダイレクトする、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）で修飾されたＮＫ細胞は、改善された抗腫瘍応答を示すことが実証されている。ＣＡＲは、所望の腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）に結合し、細胞内シグナル伝達カスケードを引き起こして、標的細胞に対する免疫細胞を活性化する、抗体由来細胞外ドメインを含むことができる。
ＮＫ細胞は、膜結合型ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドを有するＮＫＧ２Ｄなどの１つ以上の腫瘍標的化受容体の発現増強のために遺伝子操作されてもよく、これにより、ＮＫ細胞の持続性および効力を延長することができる。
ＣＡＲ Ｔ細胞は、本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃリガンドのテザー形態を共発現させるように遺伝子操作されて、未成熟な分化状態のインビボでの持続性および維持を支持し、インビボでの抗腫瘍活性を示すことができる。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物、すなわち、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド、タンデムＩＬ－２Ｒβγｃリガンド、およびＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物は、皮膚内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外、口腔、経口、舌下、脳内、膣内、経皮、直腸、吸入、または局所を含む任意の適切な投与経路によって患者に投与される医薬組成物に組み込むことができる。本開示によって提供される医薬組成物は、注射可能な製剤であり得る。本開示によって提供される医薬組成物は、注射可能な静脈内製剤であり得る。本開示によって提供される医薬組成物は、経口製剤であり得る。経口製剤は、経口剤形であり得る。医薬組成物は、静脈内投与または皮下投与のために製剤化することができる。
本開示によって提供される医薬組成物は、患者に適切な投与のための組成物を提供するために、好適な量の１つ以上の薬学的に許容されるビヒクルとともに、治療有効量のＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物を含み得る。好適な薬学的ビヒクルおよび医薬組成物を調製する方法は、当該技術分野で説明されている。
治療に対する単一の患者の反応を評価し、患者を最適な治療法に認定することは、現代の医療における最大の課題の一つであり、パーソナライズされた医療の動向に関連している。ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物は、例えば、特定のがんおよび免疫細胞に対して標的選択性を有することができる。陽電子放射断層撮影（ＰＥＴ）または単一光子放射断層撮影（ＳＰＥＣＴ）のために放射線標識されたＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物を使用して、単一研究のケースバイケースの患者分析に基づいて治療の標的を予測することができるため、治療から利益を受けることが期待されない患者を除外する。ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物を使用したＰＥＴ／ＳＰＥＣＴスキャンは、一旦、濃度と相関すると、次いで、巨視的用量計算に使用することができる三次元分布マップを提供することができる。
したがって、療法のためにＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物および／またはその医薬組成物をアッセイおよび使用することは、当業者の能力の範囲内である。
ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物、および／またはその医薬組成物は、一般に、意図された目的を達成するのに有効な量で使用することができる。がん、自己免疫疾患または炎症性疾患などの疾患を治療するために使用するために、ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物および／またはその医薬組成物は、治療有効量で投与または適用され得る。
本明細書に開示される特定の障害または状態の治療に有効であろう、ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物、および／または前述のうちのいずれかの医薬組成物の量は、障害または状態の性質に部分的に依存し、当該技術分野で周知の標準的な臨床技法によって決定することができる。加えて、最適な用量範囲を特定するのに役立つように、インビトロアッセイまたはインビボアッセイを任意に用いてもよい。投与されるＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物および／または前述のうちのいずれかの医薬組成物の量は、とりわけ、治療される患者、患者の体重、苦痛の重症度、投与方法、および処方医師の判断に依存する。
ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物は、ヒトで使用する前に、所望の治療活性について、インビトロおよびインビボでアッセイすることができる。例えば、インビトロアッセイを使用して、特定の化合物または化合物の組み合わせの投与が好ましいかどうかを決定し得る。化合物はまた、動物モデル系を使用して有効かつ安全であることが実証され得る。
ある特定の実施形態では、治療有効用量のＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物および／または前述のうちのいずれかの医薬組成物は、実質的な毒性を引き起こすことなく治療的利益を提供する。ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物および／または前述のうちのいずれかの医薬組成物の毒性は、標準的な薬学的手順を使用して決定され得、当業者によって容易に確認され得る。毒性効果と治療効果との間の用量比は、治療指標である。ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物、および／または前述のうちのいずれかの医薬組成物は、疾患および障害を治療する際に特に高い治療指数を示す。ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物および／または前述のうちのいずれかの医薬組成物の用量は、最小限の毒性を有する有効用量を含む循環濃度の範囲内である。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物またはその医薬組成物を、治療目的のために患者に化合物を投与するために使用し得るキットに含めてもよい。キットは、患者への投与に好適な本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物を含む医薬組成物、および医薬組成物を患者に投与するための説明書を含むことができる。キットは、がんを治療するための、自己免疫疾患を治療するための、または炎症性疾患を治療するためのキットであり得る。患者においてがんを治療する際に使用するためのキットは、本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物、化合物を投与するための薬学的に許容されるビヒクル、および患者に化合物を投与するための説明書を含むことができる。
医薬組成物は、投与のための説明書とともに、容器、パック、またはディスペンサーに含めることができる。
キットとともに供給される使用説明書は、例えば、電子可読媒体、ビデオカセット、オーディオテープ、フラッシュメモリデバイスとして印刷および／もしくは供給されてもよく、またはインターネットウェブサイト上で公開されてもよく、または電子通信として患者および／もしくは医療提供者に配布されてもよい。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物は、がん新抗原ワクチンを含む、特定のワクチンと組み合わせた場合に有用であり得る。腫瘍ＤＮＡの変異は、身体に対して異質である新しいタンパク質配列を産生する。ワクチンは、腫瘍特異的新抗原に関して患者の免疫系を特異的に活性化するように設計することができる。新抗原ワクチンと組み合わせて投与される場合、本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物は、腫瘍微小環境において新抗原特異的Ｔ細胞を拡大および増殖させることができ、それにより、がんの治療のためのワクチン誘発新抗原特異的Ｔ細胞の最大拡大を駆動する。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物は、アジュバントとして使用することができる。アジュバントは、保護免疫に直接関与することなくワクチンの有効性を増強する化合物を指す。例えば、本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物は、がんワクチンまたはウイルスワクチンと併用して使用することができる。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物は、ＩＬ－２ＲβおよびＲγｃサブユニットも発現する細胞の膜表面上で発現されるように操作される場合、細胞療法に有用であり得る。ＮＫ細胞を使用した、または再標的化されたキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を使用した養子免疫療法は、現在、腫瘍およびウイルス感染に対する治療として研究されている。これらの細胞療法に関する１つの課題は、注入された細胞の最適以下の持続生存である。
ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物が細胞の細胞外表面上で発現されるような方法で膜タンパク質に融合されたリガンドをコードするＤＮＡは、標準的な技術を使用して構築され得る。ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドおよび／またはＩＬ－２Ｒβγｃリガンドを含む融合タンパク質が発現されると、細胞上のＩＬ－２受容体が活性化し、細胞の長期持続性をもたらす。
リガンドをコードするＤＮＡを細胞に組み込むことができ、本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物を生成するように構成することができる。ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物は、細胞から分泌され得、分泌細胞（すなわち、自己分泌シグナル伝達）および／または分泌細胞の近傍の細胞（すなわち、パラクリンシグナル伝達）と相互作用し得る。本開示によって提供される分泌型ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物は、ＩＬ－２Ｒアゴニストであり得、分泌細胞の近くに局在するように設計することができる。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物は、患者内または生体試料内のＴ細胞を拡大するために使用することができる。Ｔｒｅｇ細胞に対する非調節性Ｔ細胞の比率を増加させる方法は、Ｔ細胞集団を有効量のＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物と接触させることを含むことができる。この比率は、Ｔ細胞集団内のＣＤ３＋ＦＯＸＰ３＋細胞対ＣＤ３＋ＦＯＸＰ３－細胞の比率を決定することによって測定することができる。ヒト血液における典型的なＴｒｅｇ頻度は、総ＣＤ４＋ＣＤ３＋Ｔ細胞の５％～１０％であるが、特定の疾患では、この割合は、より低いまたはより高い場合がある。
Ｔ細胞を拡大するために、ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物を使用してもよい。がん細胞を標的とする免疫細胞活性をリダイレクトするキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）で修飾されたＴ細胞は、改善された抗腫瘍応答を示すことが実証されている。ＣＡＲは、所望の腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）に結合し、細胞内シグナル伝達カスケードを引き起こして、標的細胞に対する免疫細胞を活性化する、抗体由来細胞外ドメインを含むことができる。
表面に固定化されるＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物は、インビトロまたはエクスビボでＴ細胞集団に曝露されて、細胞集団の拡大を誘導することができる。患者に移す前に。ＣＡＲ－Ｔ細胞は、ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物の固定形態への曝露によって拡大することができる。固定化されたＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物は、ＣＡＲ－Ｔ細胞を患者に移す前に、ＣＡＲ－Ｔ細胞から分離することができる。
ＣＡＲ Ｔ細胞は、本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物のテザー形態を共発現させるように遺伝子操作されて、未成熟な分化状態のインビボでの持続性および維持を支持し、インビボでの抗腫瘍活性を示すことができる。
治療に対する単一の患者の反応を評価し、患者を最適な治療法に認定することは、現代の医療における最大の課題の一つであり、パーソナライズされた医療の動向に関連している。ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物は、例えば、特定のがんおよび免疫細胞に対して標的選択性を有することができる。陽電子放射断層撮影（ＰＥＴ）または単一光子放射断層撮影（ＳＰＥＣＴ）のために放射線標識されたＩＬ－２Ｒβγｃ化合物を使用して、単一研究のケースバイケースの患者分析に基づいて治療の標的を予測することができるため、治療から利益を受けることが期待されない対象を除外する。ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物を使用したＰＥＴ／ＳＰＥＣＴスキャンは、一旦、濃度と相関すると、次いで、用量計算に使用することができる三次元分布マップを提供することができる。
ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物は、１つ以上の撮像剤を含むことができる。ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物は、化合物を、ＩＬ－２Ｒを発現する細胞、細胞集団、および組織に方向付けおよび局在化することができる。撮像化合物は、放射線標識、蛍光標識、酵素標識、またはＰＥＴ撮像剤などの１つ以上の撮像剤を含むことができる。
撮像剤を使用して、ＩＬ－２Ｒを発現する細胞の数、ＩＬ－２Ｒを発現する細胞の発現レベル、またはＩＬ－２Ｒに対する特定のＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物の結合親和性などのＩＬ－２Ｒの特性を決定することができる。撮像剤は、例えば、ＩＬ－２ＲβサブユニットおよびＲγｃサブユニットを発現するがん細胞を評価するため、またはＴｒｅｇおよび／もしくはＴｅｆｆ細胞を評価するために使用することができる。
標識を検出して、患者における化合物の生体内分布を決定するか、または治療有効性の可能性を評価することができる。例えば、高レベルのＩＬ－２Ｒを発現する腫瘍は、本開示によって提供される治療用ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物にとって魅力的な標的であり得る。
撮像剤は、治療前、治療中、および／または治療後にＩＬ－２Ｒを発現する細胞を評価するために使用することができる。
リガンドを含む撮像剤は、細胞表面、特に細胞表面上で発現されたタンパク質に結合することができる部分をさらに含むことができる。タンパク質は、特定の細胞型を示すことができ、細胞表面マーカーと称される。リガンドおよび細胞表面マーカーの両方を含む撮像剤を使用して、ＩＬ－２Ｒおよび細胞表面マーカーを発現する細胞、細胞集団、および／または組織を評価することができる。評価は、ＩＬ－２Ｒおよび細胞表面マーカーを発現する細胞の数、ＩＬ－２Ｒおよび細胞表面マーカーの発現レベル、ならびに／またはＩＬ－２Ｒおよび／もしくは細胞表面マーカーに対する撮像剤の結合親和性を決定することを含むことができる。
撮像剤は、治療前、治療中、および／または治療後に、ＩＬ－２Ｒおよび細胞表面マーカーを発現する細胞を評価するために使用することができる。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物は、標識することができる。標識化合物は、診断に有用であり得る。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物は、検出可能なマーカーで標識することができる。標識を使用して、患者における化合物の生体分布を決定するか、または治療有効性の可能性を評価することができる。例えば、高レベルのＩＬ－２Ｒを発現する腫瘍は、本開示によって提供される選択的ＩＬ－２ＲアゴニストおよびＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物のための魅力的な標的であり得る。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物には、標識化合物が含まれる。標識化合物は、検出可能なマーカー、例えば、放射標識アミノ酸、またはポリペプチドへのビオチニル部分の結合であってもよく、結合したビオチニル部分は、マークされたアビジン（例えば、蛍光マーカーまたは光学法もしくは比色法によって検出され得る酵素活性を含有するストレプトアビジン）によって検出され得る。ポリペプチドおよび糖タンパク質を標識する様々な方法が当該技術分野で既知であり、使用され得る。ポリペプチドの標識の例としては、例えば、３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、１２５Ｉ、および１３１Ｉなどの放射性同位体、ＦＩＴＣ、ローダミン、およびランタニドリンなどの蛍光標識、西洋ワサビペルオキシダーゼ、β－ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ、およびアルカリホスファターゼなどの酵素標識、ビオチニル基、ロイシンジッパー対配列などの二次レポーターによって認識される所定のポリペプチドエピトープ、二次抗体の結合部位、金属リガンド、およびエピトープタグが挙げられる。標識は、潜在的な立体障害を低減するために、様々な長さのスペーサアームによって取り付けることができる。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物は、例えば、ＣＯＶＩＤ－１９などのウイルス性疾患を含む、がん、炎症性疾患、自己免疫疾患、免疫不全症、または感染性疾患などの疾患を治療するために使用することができる。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物および前述のうちのいずれかの医薬組成物は、臓器移植を治療するために患者に投与され得る。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物および前述のうちのいずれかの医薬組成物は、対象における炎症性疾患または自己免疫疾患を治療するための別の化合物とともに患者に投与され得る。少なくとも１つの他の治療剤は、本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物であり得る。ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物および少なくとも１つの他の治療剤は、相加的または相乗的に機能し得る。少なくとも１つの追加の治療剤は、ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物を含む同じ医薬組成物もしくはビヒクルに含まれ得るか、または別個の医薬組成物もしくはビヒクルに含まれ得る。したがって、本開示によって提供される方法は、ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物を投与することに加えて、炎症性疾患もしくは自己免疫疾患、または炎症性疾患もしくは自己免疫疾患とは異なる疾患、障害もしくは状態を治療するのに有効な１つ以上の治療剤を投与することをさらに含む。本開示によって提供される方法は、ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物および１つ以上の他の治療剤の投与を含むが、但し、併用投与が、ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物の治療有効性を阻害しない、かつ／または有害な併用効果を生じないことを条件とする。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物は、がん、炎症性疾患、または自己免疫疾患などの患者における疾患を治療することを含み、それを必要とする患者に、１００μＭ未満、１０μＭ未満、１μＭ未満、１００ｎＭ未満、または１０ｎＭ未満のＩＣ５０で、ＩＬ－２ＲのＩＬ－２Ｒβサブユニットおよび／またはＲγｃサブユニットの特異的結合部位に結合することができる治療有効量の化合物を投与することを含む。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物は、患者においてがんを治療するために使用され得る。がんは、例えば、固形腫瘍または転移であり得る。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物またはその医薬組成物は、ＩＬ－２Ｒの活性化によって治療されることが知られているがんを治療するために投与され得る。本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物またはその医薬組成物は、ＩＬ－２Ｒβγｃサブユニットの活性化によって治療されることが知られており、ＩＬ－２Ｒαサブユニットの同時活性化が治療有効性を損なう、かつ／または望ましくない副作用を誘導するがんを治療するために投与され得る。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物またはその医薬組成物は、例えば、以下のがんのうちの１つ以上を治療するために使用することができる：急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、副腎皮質がん、虫垂がん、星状細胞腫、非定型奇形性／横紋状腫瘍、基底細胞がん（非黒色腫）、Ｂ細胞リンパ腫、膀胱がん、骨がん、脳および脊髄腫瘍、脳幹がん、脳腫瘍、乳がん、気管支腫瘍、バーキットリンパ腫、がん性腫瘍、頭頸部がん、中枢神経系胚性腫瘍、小脳星状細胞腫、脳星状細胞腫／悪性神経膠腫、子宮がん、結節腫、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、結腸直腸がん、頭蓋咽頭腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、脱形成小丸細胞腫瘍、管がん、染料がん、内分泌膵臓腫瘍（膵島細胞腫瘍）、子宮内膜がん、腎盂芽細胞腫、食道がん、感覚神経芽細胞腫、ユーイングファミリー腫瘍、頭蓋外生殖細胞腫瘍、肝外胆道がん、胆嚢がん、胃がん、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍、妊娠性絨毛性腫瘍、膠芽細胞腫、神経膠腫、毛様細胞白血病、頭頸部がん、心臓がん、リンパ系統造血腫瘍、肝細胞がん、ホジキンリンパ腫、咽頭下がん、視床下部および視覚経路神経膠腫、ＩＤ関連リンパ腫、眼内黒色腫、膵細胞腫瘍、カポシ肉腫、腎臓がん、ランゲルハンス細胞刺激細胞、喉頭がん、白血病、***および口腔がん、男性乳がん、悪性線維性組織球腫、悪性生殖細胞腫瘍、悪性中皮腫、髄芽細胞腫、黒色腫、メルケル細胞がん、中皮腫、口腔がん、多発性内分泌新生物症候群、多発性骨髄腫、菌状息肉腫、骨髄異形成症候群、骨髄増殖性腫瘍、鼻腔および副鼻腔洞がん、鼻咽頭がん、神経芽芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、非小細胞肺がん、口腔がん、口咽頭がん、骨肉腫、卵巣がん、卵巣上皮がん、卵巣生殖細胞腫瘍、卵巣低悪性潜在性腫瘍、膵臓がん、膵臓神経内分泌腫瘍（島細胞腫瘍）、乳頭腫、副神経膠腫、副鼻腔および鼻腔がん、副甲状腺がん、陰茎がん、咽頭がん、末梢色素細胞がん、小脳胚葉細胞腫瘍、小脳腫瘍松葉芽細胞腫および腱上原始神経外胚葉腫瘍、下垂体腫瘍、形質細胞新生物／多発性骨髄腫、胸膜肺芽細胞腫、妊娠および乳がん、原発性中枢神経系リンパ腫、原発性肝臓がん、原発性転移性扁平上皮頸部がん（潜在的を含む）、前立腺がん、直腸がん、腎細胞がん、腎骨盤および尿管、呼吸器系がん、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺がん、肉腫、セザリー症候群、皮膚がん、小腸がん、軟組織肉腫、扁平上皮細胞がん（非黒色腫）、胃がん、腱上原始神経外胚葉腫瘍、Ｔ細胞リンパ腫、精巣がん、のどがん、胸腺腫および胸腺がん、甲状腺がん、移行細胞がん、尿道がん、子宮肉腫、膣がん、視経路および視床下部膠腫、外陰がん、ワルデンストロームマクログロブリン血症、ウィルムス腫瘍、ならびに前述のうちのいずれかの全身性および中枢性転移。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物またはその医薬組成物は、固形腫瘍を治療するために使用することができる。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物またはその医薬組成物は、腫瘍転移を治療するために使用することができる。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物またはその医薬組成物は、循環腫瘍細胞を治療するために使用することができる。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物またはその医薬組成物は、例えば、原発性成人および幼児の脳ならびに神経膠芽腫（ＧＢＭ）および星状細胞腫を含むＣＮＳがん、黒色腫を含む皮膚がん、小細胞肺がんを含む肺がん、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、ならびに大細胞肺がん、トリプルネガティブ乳がん（ＴＮＢＣ）を含む乳がん、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）を含む血液がん、多発性骨髄腫（ＭＭ）、ならびに急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、去勢抵抗性前立腺がん（ＣＲＰＣ）を含む前立腺がん、肝細胞がん（ＨＣＣ）を含む肝臓がん、食道がんおよび胃がん、ならびに前述のうちのいずれかの任意の全身性および中枢性転移から選択される、がんを治療するために使用することができる。
がんの治療に有効であろう本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物またはその医薬組成物の量は、疾患の性質に少なくとも部分的に依存し得、当該技術分野で周知の標準的な臨床技法によって決定され得る。加えて、最適な投与範囲を特定するのに役立つように、インビトロアッセイまたはインビボアッセイを用いてもよい。投与レジメンおよび投与間隔はまた、当業者に既知の方法によって判定され得る。投与される本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物の量は、とりわけ、治療される患者、患者の体重、疾患の重症度、投与経路、および処方医師の判断に依存し得る。
全身投与のために、治療有効用量は、最初にインビトロアッセイから推定され得る。初期用量はまた、当該技術分野で既知の技法を使用して、インビボデータ、例えば、動物モデルから推定され得る。そのような情報は、ヒトにおける有用な投与量をより正確に決定するために使用できる。当業者であれば、動物データに基づいてヒトへの投与を最適化してもよい。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物の用量および適切な投与間隔を選択して、特定の実施形態では、最小有害濃度を超えることなく、患者の血液中の、本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物の持続的な治療有効濃度を維持し得る。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物を含む医薬組成物は、例えば、１週間に１回、２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、５週間に１回、または６週間に１回投与され得る。投薬は、単独でまたは他の薬物と組み合わせて提供されてもよく、疾患の有効な治療に必要な限り継続してもよい。投薬はまた、一定の期間にわたって連続的または半連続的な投与を使用して行われ得る。投薬には、哺乳動物、例えばヒトに、給餌状態または絶食状態で医薬組成物を投与することが含まれる。
医薬組成物は、単一の剤形または複数の剤形で、または一定期間にわたって連続的もしくは累積的な用量として投与され得る。複数の剤形が使用される場合、複数の剤形のそれぞれに含まれる、本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物の量は、同じであっても、異なっていてもよい。
投与に好適な１日の投与量範囲は、例えば、キログラム体重当たり約２μｇ～約２００ｍｇの本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物の範囲であり得る。
投与に好適な１日用量範囲は、例えば、体表面１平方メートル（ｍ２）当たり、本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物の約１μｇ～約５０ｍｇの範囲であり得る。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物は、患者のがんを、例えば、０．００１ｍｇ／日～１００ｍｇ／日の量、または任意の他の適切な１日用量で治療するために投与され得る。用量は、例えば、０．０１μｇ／ｋｇ体重／週～１００μｇ／ｋｇ体重／週、または任意の他の好適な用量であり得る。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物を含む医薬組成物は、患者の血液または血漿中に、治療有効濃度の本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物を提供するように、患者におけるがんを治療するために投与され得る。患者の血液中の本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物の化合物の治療有効濃度は、例えば、０．０１μｇ／Ｌ～１，０００μｇ／Ｌ、０．１μｇ／Ｌ～５００μｇ／Ｌ、１μｇ／Ｌ～２５０μｇ／Ｌ、または約１０μｇ／Ｌ～約１００μｇ／Ｌであり得る。患者の血液中に本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物の治療有効濃度は、例えば、少なくとも０．０１μｇ／Ｌ、少なくとも０．１μｇ／Ｌ、少なくとも１μｇ／Ｌ、少なくとも約１０μｇ／Ｌ、または少なくとも１００μｇ／Ｌであり得る。患者の血液中のＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物の治療有効濃度は、例えば、恒常性に対する有害作用を含む許容できない有害作用を引き起こす量未満であり得る。患者の血液中のＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物の治療有効濃度は、患者において恒常性を回復および／または維持するのに十分な量であり得る。
ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物を含む医薬組成物は、例えば、少なくとも１日間、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも４週間、少なくとも５週間、または少なくとも６週間などの長期間にわたって、患者の血液中のＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物の治療有効濃度を提供するように、患者における疾患を治療するために投与することができる。
投与されるＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物の量は、治療レジメン中に変化し得る。
本開示によって提供される医薬組成物は、本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物に加えて、１つ以上の薬学的に活性な化合物をさらに含み得る。このような化合物は、例えば、ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物で治療されているがんを治療するため、またはＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物で治療されているがん以外の疾患、障害、もしくは状態を治療するため、ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物を投与することによって引き起こされる副作用を治療するため、ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物の有効性を増強するため、および／またはＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物の活性を調節するために提供され得る。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物は、少なくとも１つの他の治療剤と併用して使用され得る。ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物は、患者におけるがんを治療するための別の化合物とともに患者に投与され得る。少なくとも１つの他の治療剤は、第２の異なるＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物であり得る。ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物および少なくとも１つの他の治療剤は、相加的に、またはある特定の実施形態において、別のＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物と相乗的に機能し得る。少なくとも１つの追加の治療剤は、ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物を含む同じ医薬組成物もしくはビヒクルに含まれ得るか、または別個の医薬組成物もしくはビヒクルに含まれ得る。したがって、本開示によって提供される方法は、ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物を投与することに加えて、がんまたはがんとは異なる疾患、障害もしくは状態を治療するのに有効な１つ以上の治療剤を投与することをさらに含む。本開示によって提供される方法は、ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物および１つ以上の他の治療剤の投与を含むが、但し、併用投与が、ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物の治療有効性を阻害しない、かつ／または有害な併用効果を生じないことを条件とする。
ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物を含む医薬組成物は、ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物を含む医薬組成物と同じ医薬組成物の一部であり得るか、またはＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物を含む医薬組成物とは異なる医薬組成物であり得る別の治療剤の投与と同時に投与され得る。ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物は、別の治療剤の投与の前または後に投与され得る。ある特定の併用療法において、併用療法は、ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物と、例えば、特定の薬物に関連する有害な薬物効果を最小限に抑えるために、別の治療剤を含む組成物との間で交互に投与することを含み得る。ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物が、例えば、毒性を含む有害な薬物効果を潜在的に生じ得る別の治療剤と同時に投与される場合、他の治療剤は、有害な薬物反応が誘発される閾値を下回る用量で投与され得る。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物を含む医薬組成物は、例えば、ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物の放出、バイオアベイラビリティ、治療有効性、治療効力、および／または安定性を増強、調節、および／または制御するために、１つ以上の物質とともに投与され得る。例えば、ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物を含む医薬組成物は、ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物の治療効果を増強する薬理学的効果を有する活性剤と同時投与され得る。
ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物、またはその医薬組成物は、ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物で治療されている同じ疾患などの、患者におけるがん、自己免疫疾患、または炎症性疾患などの疾患の治療に有効であることが知られているか、または考えられている薬剤と併用して投与され得る。
ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物またはその医薬組成物は、細胞増殖を妨げることが知られているか、または考えられている薬剤と併せて投与され得る。
ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物またはその医薬組成物は、細胞代謝を妨げること、代謝拮抗剤であること、ＲＮＡ転写を妨げること、ＲＮＡ翻訳を妨げること、細胞タンパク質合成を妨げること、ＤＮＡ合成および複製のための前駆体の合成を妨げること、プリン合成を妨げること、ヌクレオシド合成を妨げること、ｍＴＯＲと相互作用すること、ｍＴＯＲ阻害剤であること、細胞周期チェックポイントを妨げることが知られているか、または考えられている薬剤と併せて投与され得る。
ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物またはその医薬組成物は、イピリムマブなどのＣＴＬＡ－４阻害剤、ペムブロリズマブおよびニボルマブなどのＰＤ－１阻害剤、ならびに／またはアテゾリズマブ、アベルマブ、およびデュルバルマブなどのＰＤ－ＬＩ阻害剤を含むチェックポイント阻害剤と併せて投与され得る。ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物またはその医薬組成物は、ＣＤ１３７／４－１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＹＲ、および／またはＯＣ４０などの免疫調節物質と併せて投与され得る。
ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物またはその医薬組成物は、細胞傷害性であること、ＤＮＡ損傷を引き起こすこと、細胞周期停止を引き起こすこと、または***期細胞死を引き起こすことが知られているか、または考えられている薬剤と併せて投与され得る。
ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物またはその医薬組成物は、グルタチオン濃度を調節すること、細胞内のグルタチオン濃度を調節すること、細胞内のグルタチオン濃度を低下すること、細胞内へのグルタチオン取り込みを低減すること、グルタチオン合成を低減すること、または細胞内のグルタチオン合成を低減することが知られているか、または考えられている薬剤と併せて投与され得る。
ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物またはその医薬組成物は、新生血管形成を妨げること、新生血管形成を低減すること、または新生血管形成を促進することが知られているか、または考えられている薬剤と併せて投与され得る。
ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物またはその医薬組成物は、ホルモン恒常性を妨げること、ホルモン合成を妨げること、ホルモン受容体結合を妨げること、またはホルモンシグナル伝達を妨げることが知られているか、または考えられている薬剤と併せて投与され得る。
ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物またはその医薬組成物は、成長因子恒常性を妨げること、成長因子受容体発現を妨げること、成長因子受容体への成長因子結合を妨げること、成長因子受容体シグナル伝達を妨げること、ヘッジホッグ（Ｈｈ）シグナル伝達を妨げること、ヘッジホッグ経路シグナル伝達を阻害すること、ＡＬＫ（未分化リンパ腫キナーゼ）経路シグナル伝達を阻害すること、または非相同末端結合（ＮＨＥＪ）経路を阻害することが知られているか、または考えられている薬剤と併せて投与され得る。
ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物またはその医薬組成物は、ＶＥＧＦＲ（血管内皮増殖因子受容体）阻害剤、ＲＴＫ（受容体チロシンキナーゼ）阻害剤、ナトリウムチャネル電流遮断剤、ａＦＡＫ（局所接着キナーゼ）阻害剤、ＧＬＩ（神経膠腫関連がん遺伝子）阻害剤、ＧＬＩ１阻害剤、ＧＬＩ２阻害剤、ＧＬＩ３阻害剤、ＭＡＰＫ（有糸***原活性化タンパク質キナーゼ）阻害剤、ＭＡＰＫ／ＥＲＫ経路（Ｒａｓ－Ｒａｆ－ＭＥＫ－ＥＲＫ経路としても知られている）阻害剤、ＭＥＫ１阻害剤、ＭＥＫ２阻害剤、ＭＥＫ５阻害剤、ＭＥＫ５／ＥＲＫ５阻害剤、ａＲＴＡ（腎管状アシドーシス）阻害剤、ＡＬＫ（無形成リンパ腫キナーゼ）阻害剤、Ａａ ＬＫキナーゼ阻害剤、核転座阻害剤、ＰＯＲＣＮ（ポルキュピン）阻害剤、５－ＡＲＩ（５α－還元酵素阻害剤）、トポイソメラーゼ阻害剤、Ｒａｓ（ラット肉腫）阻害剤、Ｋ－ｒａｓ阻害剤、ＣＥＲＫ（セラミドキナーゼ）阻害剤、ＰＫＢ（プロテインキナーゼＢ、別名ＡＫＴ）阻害剤、ＡＫＴ１阻害剤、ＥＺＨ２（ゼストホモログ２のエンハンサー）阻害剤、ＢＥＴ（ブロモドメインおよび末端外ドメインモチーフ）阻害剤、ＳＹＫ（脾臓チロシンキナーゼ）阻害剤、ＪＡＫ（ヤナスキナーゼ）阻害剤、ＳＹＫ／ＪＡＫ阻害剤、ＩＤＯ（インドールアミン－ピロール２，３－ジオキシゲナーゼ）阻害剤、ＩＤＯ１阻害剤、ＲＸＲ（レチノイン酸Ｘ受容体）活性化剤、選択的ＲＸＲ活性化剤、ｐ－糖タンパク質阻害剤、ＥＲＫ阻害剤、ＰＩ３Ｋ（ホスファチジルイノシトール－４，５－二リン酸３－キナーゼ）阻害剤、ＢＲＤ（ブロモドメイン含有タンパク質）阻害剤、ＢＲＤ２阻害剤、ＢＲＤ３阻害剤、ＢＲＤ４阻害剤、ＢＲＤＴ（ブロモドメイン精巣特異的タンパク質）阻害剤、逆転写酵素阻害剤、ＮＲＴ（ヌクレオシド類似体逆転写酵素）阻害剤、ＰＩＭ（モロニーウイルスのプロウイルス組み込み）阻害剤、ＥＧＦＲ（上皮増殖因子受容体）阻害剤、光増感剤、放射線増感剤、ＲＯＳ（がん原遺伝子、受容体チロシンキナーゼ）阻害剤、ＲＯＳ１（がん原遺伝子１）阻害剤、ＣＫ（カゼインキナーゼ）阻害剤、ＣＫ２阻害剤、Ｂｃｒ－Ａｂｌ（切断点クラスター領域－アベルソンがん原遺伝子）ダサチニブなどのチロシンキナーゼ阻害剤、微小管安定化剤、微小管脱重合／分解阻害剤、ＤＮＡインターカレーター、アンドロゲン受容体アンタゴニスト、化学保護剤、ＨＤＡＣ（ヒストンデアセチラーゼ）阻害剤、ＤＰＰ（ジペプチジルペプチダーゼ）阻害剤、ＤＰＰ－４阻害剤、ＢＴＫ（ブルトン型チロシンキナーゼ）阻害剤、イマチニブなどのキナーゼ阻害剤、ニロチニブなどのチロシンキナーゼ阻害剤、ＡＲＰ（ポリ（ＡＤＰ－リボース）ポリメラーゼ）阻害剤、ＣＤＫ（サイクリン依存性キナーゼ）阻害剤、ＣＤＫ４阻害剤、ＣＤＫ６阻害剤、ＣＤＫ４／６阻害剤、ＨＩＦ１α（低酸素誘導因子１－α）阻害剤、ＤＮＡリガーゼ阻害剤、ＤＮＡリガーゼＩＶ阻害剤、ＮＨＥＪ（非相同末端結合）阻害剤）、ＤＮＡリガーゼＩＶ、ＮＨＥＪ阻害剤ならびにＲＡＦ阻害剤、ＴＫＩおよびＲＡＦ阻害剤、ＴＫＩおよびＲＡＦ阻害剤、例えばソラフェニブ、ＰＤＴ（光力学療法）増感剤、ＡＴＲ（失調性細管拡張症およびＲａｄ３関連プロテインキナーゼ）阻害剤、または前述のうちのいずれかの組み合わせであることが知られているか、または考えられている１つ以上の薬剤と併せて投与され得る。
ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物またはその医薬組成物は、例えば、フルキンチニブ、モテサニブ／ＡＭＧ－７０６、バタラニブなどのＶＥＧＦＲ阻害剤、ポナチニブなどのＲＴＫ阻害剤、ＧＳ９６７などのナトリウムチャネル遮断剤、ＴＡＥ２２６などのＦＡＫ阻害剤、ＧＡＮＴ６１などのＧＬＩ１およびＧＬＩ２阻害剤、ビニメチニブなどのＭＥＫ阻害剤、リニファニブなどのＲＴＡ阻害剤、ブリグスチニブなどのＡＬＫ阻害剤、ブロモピルビン酸、チオテパなどのＤＮＡアルキル化剤、ＪＳＨ－２３などの核転座因子、Ｗｎｔ－Ｃ５９などのＰＯＲＣｎ阻害剤、デュタステリドなどの５α－還元酵素阻害剤、カルビシンなどのトポイソメラーゼ阻害剤、Ｋｏｂｅ００６５などのＲＡＳ阻害剤、ＮＶＰ－２３１などのＣｅｒＫ阻害剤、アップロセルチブなどのＡＫＴ阻害剤、ＧＳＫ－５０３などのＥＺＨ２阻害剤、ＯＴＸ０１５などのＢＥＴブロモドメイン阻害剤、ＢＩＸ０２１８９などのＭＥＫ５／ＥＲＫ５阻害剤、セルデュラチニブなどのＳｙｌ／ＪＡＫ阻害剤、ＮＬＧ９１９などのＩＤＯ１阻害剤、ベクスロテンなどのレチノイン酸Ｘ受容体活性化剤、アコチアミドまたはアクチアミドＨＣｌなどのＰＧＰ阻害剤、ＳＣＨ７７２９８４などのＥｒｋ阻害剤、ゲダトリシブなどのＰＩ３Ｋ阻害剤、ルキソリチニブなどのＪＡＫ阻害剤、アフレセルチブまたはアフレセルチブＨＣｌなどのＡＫＴ阻害剤、セリチニブなどのＡＬＫ１阻害剤、アベキシノスタットなどのＨＤＡＣ阻害剤、オアマリグリプチンなどのＤＰＰ阻害剤、ゲフィチニブなどのＥＧＦＲ阻害剤、ＧＳＫ１２６などのＥＺＨ２阻害剤、イブルチニブなどのＢＴＫ阻害剤、イマチニンＨＣｌなどのキナーゼ阻害剤、ＩＮＣＢ０２４３６０などのＩＤＯ阻害剤、マイトマイシンＣなどのＤＮＡ架橋剤、ニロチニブなどのチロシンキナーゼ阻害剤、オラパリブなどのＰＡＲＰ阻害剤、パクリタキセルなどのチューブリン安定化促進剤、パルボシクリブなどのＣＤＫ４／６阻害剤、スニチニブなどのＲＴＫ阻害剤、ｔｓｌｓｐｏｒｆｉｎなどのＰＤＴ増感剤、タリキダルなどのｐ－糖タンパク質阻害剤、ＶＥ－８２２などのＡＴＲ阻害剤、ＰＣＩ－２４７８１などのＨＤＡＣ阻害剤、オマリグリプチンなどのＤＰＰ阻害剤、ゲフィニブなどのＥＧＦＲ阻害剤、ＧＳＫ１２６などのＥＺＨ２阻害剤、イルブチニブなどのＢＴＫ阻害剤、ＩＮＣＢ０２４３６０などのＩＤＯ阻害剤、または前述のうちのいずれかの組み合わせなどの１つ以上の化学療法剤と併せて投与することができる。
例えば、ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物またはその医薬組成物は、例えば、Ｎ－アセチルシステイン（ＮＡＣ）、アドリアマイシン、アレムツズマブ、アミホスチン、三酸化ヒ素、アスコルビン酸、ベンダムスチン、ベバシズマブ、ボルテゾミブ、ブスルファン、ブチオニンスルホキシム、カーフィルゾミブ、カルムスチン、クロファラビン、シクロホスファミド、シクロスポリン、シタラビン、ダサチニブ、ダチノマイシン、デフィブロチド、デキサメタゾン、ドセタキセル、ドキソルビシン、エトポシド、フィルグラスチム、フロクスウリジン、フルダラビン、ゲムシタビン、インターフェロンアルファ、イピリムマブ、レナリドマイド、ロイコボリン、メルファラン、ミコフェノール酸モフェチル、パクリタキセル、パリフェルミン、パノビノスタット、ペグフィラスチム、プレドニゾロン、プレドニゾン、レブリミド、リツキシマブ、シロリムス、２－メルカプトエタンスルホン酸ナトリウム（ＭＥＳＮＡ）、チオ硫酸ナトリウム、タクロリムス、テモゾロミド、サリドマイド、チオグアニン、チオテパ、トポテカン、ベルケイド、または前述のうちのいずれかの組み合わせなどの別の化学療法剤と併用して投与することができる。
ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物またはその医薬組成物は、葉酸類似体などの１つ以上の代謝拮抗剤、フルオロウラシル、フロキサリジン、およびシトシンアラビノシドなどのピリミジン類似体、メルカプトプリン、チオグナイン、およびペントスタチンなどのプリン類似体、ビンブラスチン、ビンクリスチン、エトポシド、テルチポシド、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキサルビシン、ブレオマイシン、ミタマイシン、マイトマイシンＣ、Ｌ－アスパラギナーゼ、およびインターフェロンアルファなどの天然産物、シス－プラチナ、およびカルボプラチンなどの白金配位複合体、ミトキサントロン、ヒドロキシ尿素、プロカルバジン、プレドニゾン、ヒドロキシプロゲステロンカプロ酸塩、酢酸メドロキシプロゲステロン、酢酸メゲストロール、ジエチルスチルベストロール、エチニルエストラジオール、タモキシフェン、プロピオン酸テストステロン、フルオキシメステロン、フルタミド、およびリュープロリドなどのホルモンおよびアンタゴニスト、アンジオスタチン、レチノイン酸、パクリタキセル、エストラジオール誘導体、およびチアゾロピリミジン誘導体などの抗血管新生剤または阻害剤、アポトーシス防止剤、トリプトリド、コルヒチン、ルリコナゾール、放射線療法を含む、他の化学療法剤との併用療法において使用することができる。
ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物またはその医薬組成物は、例えば、Ｏ６－ベンジルグアニン（Ｏ６－ＢＧ）などのＤＮＡ修復を阻害する化合物と同時投与することができる。
ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物またはその医薬組成物は、１つ以上の化学療法剤、例えば、アバレリックス、アビラテロン、酢酸アビラテロン、ｎ－アセチルシステイン、塩酸アクラルビシン、アドリアマイシン、アデニン、アファチニブ、ジマレイン酸アファチニブ、アレムツズマブ、アレンドロン酸ナトリウム、アリトレチノイン、アロプリノールナトリウム、アルトレタミン、アミホスチン、アミノグルテチミド、アミノレブリン酸、アムルビシン、アムサクリン、アナストロゾール、アンギオスタチン、アプレミラスト、アプレピタント、三酸化ヒ素、アスコルビン酸、ｌ－アスパラギナーゼ、アザシチジン、アザチオプリンナトリウム、バゼドキシフェン（血清）、ベリノスタット、ベンダムスチンｈｃｌ、Ｏ６－ベンジルグアニン、ベバシズマブ、ベキサロテン、ビカルタミド、ビリコダール、ブレオマイシン硫酸塩、ボルテゾミブ、ボスチニブ、ブリブジン、ブセレリン、ブスルファン、ブチオニンスルホキシム、カバジタキセル、カボザンチニブ、カペシタビン、カルボプラチン、カルボクオン、カルフィルゾミブ、カルモフル、カルムスチン、セリチニブ、クロラムブシル、シスプラチン、クラドリビン、クロドロネート二ナトリウム、クロファラビン、クリゾチニブ、シクロホスファミド、シクロスポリン、シタラビン、シトシンアラビノシド、ダブラフェニブ、ダカルバジン、ダクチノマイシン、ダサチニブ、ダチノマイシン、ダウノルビシン、デシタビン、デフリブロチド、酢酸デガレリクス、デキサメタゾン、塩酸デクスラゾキサン、ジアジクオン、ジエチルスチルベストロール、ドセタキセル、ドキシフルリジン、塩酸ドキソルビシン、ドキソルビシン遊離塩基、プロピオン酸ドロスタノロン、デュタステリド、エルトロンボパグ、エンザルタミド、塩酸エピルビシン、メシル酸エリブリン、塩酸エルロチニブ、エストラムスチンリン酸ナトリウム、エチニルエストラジオール、エトポシドリン酸、エトポシド、エベロリムス、エキセメスタン、フェンタニル、フィルグラスチム、フィンゴリモド、フロクスウリジン、フルダラビンリン酸、フルオロウラシル、フルオキシメステロン、フルタミド、フォルメスタン、ホルミルメルファラン、ホスアプレピタント、フォテムスチン、フルベストラント、ゲフィチニブ、塩酸ゲムシタビン、ゲムシタビン遊離塩基、グルタチオン、グリシホスホルアミド、グリフォスフィン、酢酸ゴセレリン、塩酸グラニセトロン、ヘプタプラチン、５－アミノレブリン酸ヘキシル、酢酸ヒストレリン、ヒドロキシプロゲステロンカプロエート、ヒドロキシ尿素、イバンドロネートナトリウム、イブルチニブ、イコチニブ、イダルビシンＨＣｌ、イデラリシブ、イドクスウリジン、イホスファミド、インターフェロンアルファ、メシル酸イマチニブ、イミキモド、メブチン酸インゲノール、イピリムマブ、塩酸イリノテカン、イキサベピロン、酢酸ランレオチド、ラパチニブ遊離塩基、ラパチニブジトシレート、ラソフォキシフェン、レナリドマイド、レトロゾール、ロイコボリンカルシウム、酢酸ロイプロリド、塩酸レバミゾール、レボホリナートカルシウム、ヨーベングアン、ロバプラチン、ロムスチン、マロピタント、マソプロコール、塩酸メクロレタミン、酢酸メゲストロール、酢酸メドロキシプロゲステロン、塩酸メルファラン、メルカプトプリン、メルカプトエタンスルホン酸ナトリウム、メトトレキサート、メトキサレン、アミノレブリン酸メチル、メチレンブルー、メチルイソインジゴチン、ミファムルチド、ミルテフォシン、ミリプラチン、ミタマイシン、ミトブロニトール、マイトマイシンＣ、ミトタン、塩酸ミトキサントロン、ミコフェノール酸モフェチル、ナビキシモルス、ナファレリン、ナンドロロン、ネダプラチン、ネララビン、ネツピタント、ニロチニブ、ニルタミド、ニムスチン、ニンテダニブ、ノコダゾール、オクトレオチド、オラパリブ、オマセタキシンメペスクシネート、塩酸オンダンセトロン、オキサリプラチン、パクリタキセル、パルボシクリブ、パリフェルミン、塩酸パロノセトロン、パミドロネート二ナトリウム、パノビノスタット、パシレオチド、塩酸パゾパニブ、ペグフィラスチム、ペメトレキセド二ナトリウム、ペントスタチン、ペプロマイシン、ピポブロマン、ピラルビシン、プレリキサフォル、プリカマイシン、ポマリドミド、ポナチニブ、ポルフィマーナトリウム、ポルフィロマイシン、プララトレキサート、プレドニムスチン、プレドニゾロン、プレドニゾン、塩酸プロカルバジン、塩酸キナゴリド、ラロキシフェン、ラルチトレキセド、ラドチニブ、ラニムスチン、レチノイン酸、レブリミド、リツキシナブ、ロミデプシン、ルキソリチニブ、リン酸ルキソリチニブ、セムスチン、シロリムス、チオ硫酸ナトリウム、ソラフェニブ遊離塩基、ソラフェニブトシレート、ストレプトゾシン、スフェンタニル、スニチニブ、タクロリムス、タラポルフィンナトリウム、タミバロテン、クエン酸タモキシフェン、タペンタドール、テモポルフィン、テモゾロミド、テムシロリムス、テニポシド、テリフルノミド、テルチポシド、テストトラクトン、プロピオン酸テストステロン、サリドマイド、チオグアニン、チオテパ、チマルファシン、リン酸トセラニブ、塩酸トポテカン、クエン酸トレミフェン、トラベクテジン、トラメチニブ、トレチノイン、トリロスタン、トリプトレリン、トロピセトロン、ウラムスチン、バルルビシン、バンデタニブ、ベドチン、ベムラフェニブ、ベルテポルフィン、ビンブラスチン、硫酸ビンクリスチン、ビンクリスチン遊離塩基、ビンデシン、酒石酸ビノレルビン、ボリノスタット、およびゾレドロン酸と組み合わせて投与することができる。
ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物またはその医薬組成物は、例えば、アベマシクリブ、酢酸アビラテロン、ＡＢＶＤ、ＡＢＶＥ、ＡＢＶＥ－ＰＣ、ＡＣ、アカラブルチニブ、ＡＣ－Ｔ、ＡＤＥ、アドトラスツズマブエムタンシン、ジマレイン酸アファチニブ、アルデスロイキン、アレクチニブ、アレムツズマブ、アルペリシブ、アミホスチン、アミノレブリン酸塩酸塩、アナストロゾール、アパルタミド、アプレピタント、三酸化ヒ素、アスパラギナーゼｅｒｗｉｎｉａ ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｉ、アテゾリズマブ、アベルマブ、アキシカブタジーンシロロイセル、アキシチニブ、アザシチジン、ＢＥＡＣＯＰＰ、ベリノスタット、ベンダムスチン塩酸塩、ＢＥＰ、ベバシズマブ、ベキサロテン、ビカルタミド、ビニメチニブ、硫酸ブレオマイシン、ブリナツモマブ、ボルテゾミブ、ボスチニブ、ブレンツキシマブベドチン、ブリガチニブ、ＢｕＭｅｌ、ブスルファン、カバジタキセル、カボザンチニブ－ｓ－リンゴ酸、ＣＡＦ、カラスパルガーゼペゴル－ｍｋｎｌ、カペシタビン、カプラシタビン－ｙｈｄｐ、ＣＡＰＯＸ、カルボプラチン、カルボプラチン－タキソール、カルフィルゾミブ、カルムスチン、カルムスチンインプラント、ＣＥＭ、セミプリマブ－ｒｗｌｃ、セリチニブ、セツキシマブ、ＣＥＶ、クロラムブシル、クロラムブシル－プレドニゾン、ＣＨＯＰ、シスプラチン、クラドリビン、クロファラビン、ＣＭＦ、コビメチニブ、塩酸コパンリシブ、ＣＯＰＤＡＣ、ＣＯＰＰ、ＣＯＰＰ－ＡＢＶ、クリゾチニブ、ＣＶＰ、シクロホスファミド、シタラビン、シタラビンリポソーム、メシル酸ダブラフェニブ、ダカルバジン、ダコミチニブ、ダクチノマイシン、ダラツムマブ、ダルベポエチンα、ダサチニブ、塩酸ダウノルビシン、塩酸ダウノルビシンおよびシタラビンリポソーム、デシタビン、デフィブロチドナトリウム、デガレリクス、デニロイキン・ディフチトックス、デノスマブ、デキサメタゾン、塩酸デクスラゾキサン、ジヌツキシマブ、ドセタキセル、塩酸ドキソルビシン、塩酸ドキソルビシンリポソーム、デュルバルマブ、デュベリシブ、エロツズマブ、エルトロンボパグオラミン、エマパルマブ－ｌｚｓｇ、メシル酸エナシデニブ、エンコラフェニブ、エンザルタミド、塩酸エピルビシン、ＥＰＯＣＨ、エポエチンアルファ、エルダフィチニブ、メシル酸エリブリン、塩酸エルロチニブ、エトポシド、リン酸エトポシド、エベロリムス、エキセメスタン、ｆｅｃ、フィルグラスチム、リン酸フルダラビン、フルオロウラシル注射、フルオロウラシル－局所、フルタミド、フォルフィリ、フォルフィリ－ベバシズマブ、フォルフィリ－セツキシマブ、フォルフィリノックス、フォルフォックス、フォスタマチニブ二ナトリウム、ＦＵ－ＬＶ、フルベストラント、ゲフィチニブ、塩酸ゲムシタビン、ゲムシタビン－シスプラチン、ゲムシタビン－オキサリプラチン、ゲムツズマブオゾガマイシン、フマル酸ギルテリチニブ、マレイン酸グラスデギブ、グルカルピダーゼ、酢酸ゴセレリン、グラニセトロン、ＨＰＶ二価ワクチン、ＨＰＶ二価ワクチン、組換えＨＰＶ非価ワクチン、ＨＰＶ非価ワクチン、ＨＰＶ非価ワクチン組換え体、ＨＰＶ四価ワクチン、ＨＰＶ ｕａｄｒｉｖａｌｅｎｔワクチン組換え体、ヒドロキシ尿素、ｈｙｐｅｒ－ＣＶＡＤ、イブリツズマブチウキセタン、イブルチニブ、ＩＣＥ、塩酸イダルビシン、イデラリシブ、イホスファミド、メシル酸イマチニブ、イミキモド、イノツズマブオゾガマイシン、インターフェロンα－２ｂ組換え体、イオベングアン１３１Ｉ、イピリムマブ、塩酸イリノテカン、塩酸イリノテカンリポソーム、イボシデニブ、イキサベピロン、クエン酸イキサゾミブ、ＪＥＢ、酢酸ランレオチド、ジトシル酸ラパチニブ、硫酸ラロトレクチニブ、レナリドミド、メシル酸レンバチニブ、レトロゾール、ロイコボリンカルシウム、酢酸ロイプロリド、ロムスチン、ロラチニブ、ルテチウムＬｕ １７７－ｄｏｔａｔａｔｅ、塩酸メクロレタミン、酢酸メゲストロール、メルファラン、塩酸メルファラン、メルカプトプリン、メスナ、メトトレキサート、臭化メチルナルトレキソン、ミドスタウリン、マイトマイシンｃ、塩酸ミトキサントロン、モガムリズマブ－ｋｐｋｃ、モキセツモマブパスドトックス－ｔｄｆｋ、ＭＶＡＣ、ネシツムマブ、ネララビン、マレイン酸ネラチニブ、ネツピタントおよびパロノセトロン塩酸塩、ニロチニブ、ニルタミド、トシレートニラパリブ一水和物、ニボルマブ、オビヌツズマブ、ＯＥＰＡ、オファツムマブ、ＯＦＦ、オラパリブ、オララツマブ、オマセタキシンメペスクシネート、塩酸オンダンセトロン、ＯＰＰＡ、メシル酸オシメルチニブ、オキサリプラチン、パクリタキセル、パクリタキセルアルブミン安定化ナノ粒子製剤、ＰＡＤ、パルボシクリブ、パリフェルミン、塩酸パロノセトロン、塩酸パロノセトロンおよびネツピタント、パミドロネート二ナトリウム、パニツムマブ、パノビノスタット、塩酸パゾパニブ、ＰＣＶ、ＰＥＢ、ペグアスパラガーゼ、ペグフィルグラスチム、ペグインターフェロンα－２ｂ、ペムブロリズマブ、ペメトレキセド二ナトリウム、ペルツズマブ、プレリキサフォー、ポラツズマブベドチン－ｐｉｉｑ、ポマリドマイド、塩酸ポナチニブ、プララトレキサート、プレドニゾン、塩酸プロカルバジン、塩酸プロプラノロール、塩化ラジウム２２３、塩酸ラロキシフェン、ラムシルマブ、ラスブリカーゼ、ラブリズマブ－ｃｗｖｚ、Ｒ－ＣＨＯＰ、Ｒ－ＣＶＰ、組換えＨＰＶ二価ワクチン、組換えＨＰＶ非価ワクチン、組換えＨＰＶ四価ワクチン、組換えインターフェロンα－２ｂ、レゴラフェニブ、Ｒ－ＥＰＯＣＨ、リボシクリブ、Ｒ－ＩＣＥ、リツキシマブ、リツキシマブおよびヒアルロニダーゼヒト、塩酸ロラピタント、ロミデプシン、ロミプロスチム、ルカパリブカムシレート、リン酸ルキソリチニブ、シルツキシマブ、シプリューセル－ｔ、ソニチニブ、ソラフェニブトシレート、スタンフォードＶ、リンゴ酸スニチニブ、ＴＡＣ、ｔａｇｒａｘｏｆｕｓｐ－ｅｒｚｓ、タラゾパリブトシレート、タルク、タリモジェンラヘルパレプベック、クエン酸タモキシフェン、テモゾロミド、テムシロリムス、サリドマイド、チオグアニン、チオテパ、チサゲンレクルセル、トシリズマブ、塩酸トポテカン、トレミフェン、ＴＰＦ、トラベクテジン、トラメチニブ、トラスツズマブ、トラスツズマブおよびヒアルロニダーゼ－ｏｙｓｋ、トリフルリジンおよび塩酸チピラシル、トリ酢酸ウリジン、ＶＡＣ、バルルビシン、ＶＡＭＰ、バンデタニブ、ＶｅＩＰ、ベムラフェニブ、ベネトクラクス、硫酸ビンブラスチン、硫酸ビンクリスチンリポソーム、酒石酸ビノレルビン、ｖｉｐ、ビスモデギブ、ボリノスタット、ＸＥＬＩＲＩ、ＸＥＬＯＸ、Ｚｉｖ－アフリベルセプト、ゾレドロン酸、および前述のうちのいずれかの組み合わせなどの、１つ以上の化学療法剤と組み合わせて投与することができる。
がんを治療するためのＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物またはその医薬組成物を投与する有効性は、インビトロおよび動物研究ならびに臨床試験を使用して評価され得る。
がんの治療におけるＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物またはその医薬組成物の適合性は、当該技術分野に記載される方法によって決定され得る。例えば、腫瘍溶解剤の抗腫瘍活性を実証するために開発されたスクリーンは既知である（Ｍｉｌｌｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ，１９７７，２０（３），４０９－４１３、Ｓｗｅｅｎｅｙ，ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，１９７８，３８（９），２８８６－２８９１、およびＷｅｉｓｓ ａｎｄ Ｖｏｎ Ｈｏｆｆ，Ｓｅｍｉｎ Ｏｎｃｏｌ，１９８５，１２（３ Ｓｕｐｐｌ ４），６９－７４を参照されたい）。
ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物またはその医薬組成物は、炎症性疾患の治療に有用であり得る。
ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物またはその医薬組成物は、炎症性疾患を治療するために投与することができる。
炎症性疾患の例としては、アレルギー、アルツハイマー病、貧血、強直性脊椎炎、関節炎、アテローム性動脈硬化症、喘息、自閉症、関節炎、手根管症候群、セリアック病、大腸炎、クローン病、うっ血性心不全、皮膚炎、糖尿病、憩室炎、湿疹、線維筋痛、線維症、胆嚢疾患、胃食道逆流症、橋本甲状腺炎、心臓発作、肝炎、過敏性腸症候群、腎不全、狼炎、多発性硬化症、腎炎、神経障害、膵炎、パーキンソン病、乾癬、多発性筋痛、リウマチ、リウマチ性関節炎、硬化性皮膚炎、脳卒中、外科合併症、および潰瘍性大腸炎が挙げられる。
ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物またはその医薬組成物は、自己免疫疾患の治療に有用であり得る。自己免疫疾患は、免疫系が自身のタンパク質、細胞、および／または組織を攻撃するヒト疾患として定義され得る。自己免疫疾患の包括的なリストとレビューは、例えば、Ｔｈｅ Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ Ｄｉｓｅａｓｅｓ、Ｒｏｓｅ ａｎｄ Ｍａｃｋａｙ，２０１４，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓに見出させる。
ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物またはその医薬組成物は、自己免疫疾患を治療するために投与することができる。
自己免疫疾患の例としては、アジソン病、アガマグロブリン血症、脱毛症、アミロイドーシス、強直性脊椎炎、抗ＧＢＭ／抗ＴＢＮ腎炎、抗リン脂質症候群、自己免疫性血管浮腫、自己免疫不全症、自己免疫性脳炎、自己免疫性肝炎、自己免疫性内耳疾患、自己免疫性心筋炎、自己免疫性膵炎、自己免疫性網膜症、自己免疫性蕁麻疹、軸索神経障害、バロ病、ベーチェット病、良性粘膜天疱瘡、大疱瘡性天疱瘡、キャッスルマン病、セリアック病、シャーガス病、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー、慢性炎症性脱髄性多発性骨髄炎、Ｃｈｕｒｇ－Ｓｔｒａｕｓｓ、瘢痕性類天疱瘡、コーガン症候群、寒冷凝集素症、先天性心臓ブロック、コカクシー性心筋炎、クレスト症候群、クローン病、疱疹状皮膚炎、皮膚筋炎、デビック病、円板状エリテマトーデス、ドレスラー症候群、子宮内膜症、好酸球性食道炎、好酸球性筋膜炎、結節性紅斑、本質的な混合クリオグロブリン血症、エヴァンス症候群、線維筋痛症、線維化性肺胞炎、巨大細胞動脈炎、巨大細胞性心筋炎、糸球体腎炎、グッドパスチャーズ症候群、多発性血管炎を伴う肉芽腫症、グレイブス病、グレイン・バレ症候群、橋本甲状腺炎、溶血性貧血、ヘノシュ・ソンレイン紫斑病、ヘルペス妊娠または天疱瘡性妊娠、低ガンマグロブリン血症、ＩｇＡ腎症、ＩｇＧ４関連硬化症、免疫血小板減少性紫斑病、包含性体筋炎、間質性膀胱炎、若年性関節炎、若年性糖尿病、若年性筋炎、川崎病、ランバート・イートン症候群、白血球破砕性血管炎、扁平苔癬、硬化性苔癬、木質結膜炎、線状ＩｇＡ疾患、狼瘡、慢性ライム病、メニエール病、顕微鏡的多発血管炎、混合性結合組織病、ムーレン潰瘍、ムチャ・ハーバーマン病、多発性硬化症、重症筋無力症、筋炎、ナルコレプシー、視神経脊髄炎、視神経炎、好中球減少症、眼瘢痕性類天疱瘡、視神経炎、パリンドローム性リウマチ、ＰＡＮＤＡＳ、傍腫瘍性小脳変性症、発作性夜間ヘモグロビン尿症、パリーロンバーグ症候群、扁平上皮炎、パーソネージターナー症候群、ペンフィグス、末梢神経障害、静脈周囲脳脊髄炎、悪性貧血、ＰＯＥＭＳ症候群、結節性多発動脈炎、多発性腺症候群、リウマチ性筋痛、多発性筋炎、心筋梗塞後症候群、心膜切開後症候群、原発性胆汁性肝硬変、原発性硬化性胆管炎、プロゲステロン皮膚炎、乾癬、乾癬性関節炎、純粋な赤血球形成不全、ガングレノサム膿皮症、レイノー現象、反応性関節炎、反射***感神経性ジストロフィー、再発性多発性軟骨炎、落ち着きのない脚症候群、腹膜後線維症、リウマチ熱、関節リウマチ、肉腫症、シュミット症候群、硬化症、硬化性皮膚炎、シェーグレン症候群、***および精巣自己免疫、全身硬直症候群、亜急性細菌性心内膜炎、スザック症候群、交感神経性眼炎、高安動脈炎、側頭動脈炎、血小板減少性紫斑病、トロサハント症候群、横断性脊髄炎、１型糖尿病、潰瘍性大腸炎、未分化型結合組織疾患、ブドウ膜炎、血管炎、白斑、ならびにウェゲナー肉芽腫症が挙げられる。
ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物またはその医薬組成物は、例えば、狼瘡、移植片対宿主病、Ｃ型肝炎誘発性血管炎、Ｉ型糖尿病、多発性硬化症、妊娠の自然喪失、アトピー性疾患、および炎症性腸疾患などの自己免疫障害を治療するために使用され得る。
ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物は、自己免疫疾患を治療するための１つ以上の追加の治療剤とともに投与することができる。ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物またはその医薬組成物は、例えば、プレドニゾン、ブデソニド、およびプレドニゾロンなどのコルチコステロイド；トファシチニブなどのヤヌスキナーゼ阻害剤；シクロスポリンおよびタクロリムスなどのカルシニューリン阻害剤；シロリムスおよびエベロリムスなどのｍＴＯＲ阻害剤；アザチオプリン、レフルノマイド、およびミコフェノール酸塩などのＩＭＤＨ阻害剤；アバタセプトアダリムマブ、アナキンラ、セルトリズマブ、エタンルセプト、ゴリムマブ、インフリキシマブ、イキセキズマブ、ナタリズマブ、リツキシマブ、セクキヌマブ、トシリズマブ、ウステキヌマブ、およびベドリズマブを含む、１つ以上の免疫抑制剤；ならびにバシリキシマブおよびダクリズマブなどのモノクローナル抗体と併せて投与することができる。
ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物またはその医薬組成物は、Ｔ細胞の活性化、増殖、代謝、および／または分化と関連する疾患を治療するために患者に投与することができる。
ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物またはその医薬組成物は、臓器移植を治療するために患者に投与することができる。
ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物またはその医薬組成物は、増殖を妨げる、有糸***を妨げる、ＤＮＡ複製を妨げる、またはＤＮＡ修復を妨げることが知られているか、または考えられている薬剤と併せて投与することができる。
ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物またはその医薬組成物は、免疫不全疾患を治療するために患者に投与することができる。
原発性免疫不全疾患の例としては、自己免疫リンパ増殖性症候群、自己免疫多腺症候群１型、ＢＥＮＴＡ疾患、カスパーゼ８欠損状態、ＣＡＲＤ９欠損症、慢性肉芽腫性疾患、分類不能型免疫不全症、先天性好中球減少症候群、ＣＴＬＡ４欠損症、ＤＯＣＫ８欠損症、ＧＡＴＡ２欠損症、グリコシル化障害、高免疫グロブリンＥ症候群、高免疫グロブリンＭ症候群、インターフェロンγ、インターロイキン１２およびインターロイキン２３欠損症、白血球接着欠損症、ＬＲＢＡ欠損症、ＰＩ２キナーゼ疾患、ＰＬＣＧ２関連抗体欠損症および免疫調節障害、重症複合免疫不全症、ＳＴＡＴ３ドミナントネガティブ疾患、ＳＴＡＴ３機能獲得疾患、いぼ、低ガンマグロブリン血症、感染症、および骨髄性細胞貯留（ｍｙｅｌｏｋａｔｈｅｘｉｓ）症候群、ウィスコット・アルドリッチ症候群、Ｘ連鎖無ガンマグロブリン血症、Ｘ連鎖リンパ増殖症候群、およびＸＭＥＮ疾患が挙げられる。
続発性免疫不全疾患は、免疫系が、感染、化学療法、重度の火傷、または栄養不良などの環境要因に対して易感染性のときに生じる。続発性免疫不全疾患の例としては、新生児免疫不全症、例えば、未成熟リンパ器官、記憶免疫の欠如、母体ＩｇＧレベルの低下、好中球貯蔵プールの減少、好中球機能の低下、およびナチュラルキラー細胞活性の低下；抗原特異的細胞性免疫の低下、Ｔ細胞オリゴコーナリティ（ｏｌｉｇｏｃｏｎａｌｉｔｙ）、およびＢ細胞レパートリーの制限などの高齢関連免疫不全症；細胞性免疫応答の低下および週末粘膜障壁などの栄養不良関連免疫不全症；有糸***誘発性リンパ増殖の低下、欠陥食作用、および走化性の低下などの糖尿病関連免疫不全症；細胞性免疫応答の低下、記憶抗体応答の生成の低下、および走化性の低下などの慢性***関連免疫不全症；欠陥食作用、欠陥走化性、および抗原特異的免疫応答の可変欠陥などの遺伝的症候群；ならびに抗炎症性、免疫調節性、および免疫抑制性薬物療法関連免疫不全、例えば、リンパ球減少、細胞免疫応答およびアネルギーの低下、炎症促進性サイトカインの低下、食作用の低下、走化性の低下、好中球減少、および週末粘膜障壁；リンパ球アポトーシスの増加、寛容原性サイトカインの分泌の増加、血球減少、細胞性免疫およびアネルギーの低下、およびストレス誘発性非特異的免疫活性化などの環境条件；ならびにＴ細胞リンパ球減少、細胞性免疫応答およびアネルギーの低下、および抗原特異的抗体応答の欠損などの感染性疾患が挙げられる。
ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物またはその医薬組成物は、免疫不全患者における免疫応答を増加させるために患者に投与することができる。
ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物またはその医薬組成物は、患者の免疫応答を増加させるために患者に投与することができる。
ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物またはその医薬組成物は、感染性疾患を治療するために患者に投与することができる。
感染性疾患の例としては、アシネトバクター感染症、放線菌症、アフリカ睡眠病（アフリカトリパノソーマ症）、ＡＩＤＳ（後天性免疫不全症候群）、アメーバ症、アナプラズマ症、住血線虫症、アニサキス症、炭疽、Ａｒｃａｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｍ感染症、アルゼンチン出血熱、回虫症、アスペルギルス症、アストロウイルス感染症、バベシア症、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ感染症、細菌性髄膜炎、細菌性肺炎、細菌性膣症、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ感染症、バランチジウム症、バルトネラ症、Ｂａｙｌｉｓａｓｃａｒｉｓ感染症、ベジェル、梅毒、ＢＫウイルス感染症、黒色砂毛症（ｂｌａｃｋ ｐｉｅｄｒａ）、ブラストシストシス（ｂｌａｓｔｏｃｙｓｔｏｓｉｓ）、ブラストミセス症、ボリビア出血熱、ボツリヌス中毒（および乳児ボツリヌス中毒）、ブラジル出血熱、ブルセラ症、腺ペスト、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ感染症、ブルーリ潰瘍、カリシウイルス感染症（ノロウイルスおよびサポウイルス）、カンピロバクター症、カンジダ症（モニリア症；鵞口瘡）、毛細虫症、カリオン病、ネコひっかき病、蜂巣炎、シャーガス病（アメリカトリパノソーマ症）、軟性下疳、水痘、チクングニア、クラミジア、Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ感染症（台湾急性呼吸器因子またはＴＷＡＲ）、コレラ、黒色分芽菌症、ツボカビ症、肝吸虫症、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ大腸炎、コクシジオイデス症、コロラドダニ熱（ＣＴＦ）、感冒（急性ウイルス性鼻咽喉炎；急性コリーザ、コロナウイルス疾患２０１９（ＣＯＶＩＤ－１９）、クロイツフェルト・ヤコブ病（ＣＪＤ）、クリミア・コンゴ出血熱（ＣＣＨＦ）、クリプトコッカス症、クリプトスポリジウム症、皮膚幼虫移行症（ＣＬＭ）、シクロスポラ症、嚢虫症、サイトメガロウイルス感染症、デング熱、デスモデスムス感染症、二核アメーバ症、ジフテリア、裂頭条虫症、メジナ虫症、エボラ出血熱、エキノコックス症、エーリキア症、腸蟯虫症（蟯虫感染症）、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ感染症、エンテロウイルス感染症、発疹チフス、エプスタイン・バーウイルス感染症単核症（Ｍｏｎｏ）、伝染性紅斑（第五病）、急性発疹症（第六病）、肝蛭症、肥大吸虫症、致死性家族性不眠症（ＦＦＩ）、フィラリア症、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓによる食中毒、自由生息アメーバ感染症、Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ感染症、ガス壊疽（クロストリジウム性筋壊死）、ゲオトリクム症、ゲルストマン・シュトロイスラー・シャインカー症候群（ＧＳＳ）、ジアルジア症、鼻疽、顎口虫症、淋病、鼠径肉芽腫（鼠径リンパ肉芽腫症）、Ａ群連鎖球菌感染症、Ｂ群連鎖球菌感染症、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ感染症、手足口病（ＨＦＭＤ）、ハンタウイルス肺症候群（ＨＰＳ）、ハートランドウイルス病、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ感染症、溶血性***症候群（ＨＵＳ）、腎症候性出血熱（ＨＦＲＳ）、ヘンドラウイルス感染症、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、Ｄ型肝炎、Ｅ型肝炎、単純ヘルペス、ヒストプラスマ症、鉤虫感染症、ヒトボカウイルス感染症、ヒト・エウィンギー・エーリキア症（ｈｕｍａｎ ｅｗｉｎｇｉｉ ｅｈｒｌｉｃｈｉｏｓｉｓ）、ヒト顆粒球性アナプラズマ症（ＨＧＡ）、ヒトメタニューモウイルス感染症、ヒト単球性エーリキア症、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）感染症、ヒトパラインフルエンザウイルス感染症、条虫症、インフルエンザ（ｆｌｕ）、イソスポーラ症、川崎病、角膜炎、Ｋｉｎｇｅｌｌａ ｋｉｎｇａｅ感染症、クールー病、ラッサ熱、レジオネラ症（レジオネラ疾患）、リーシュマニア症、ハンセン病、レプトスピラ症、リステリア症、ライム病（ライムボレリア症）、リンパ管フィラリア症（象皮症）、リンパ球性脈絡髄膜炎、マラリア、マールブルグ出血熱（ＭＨＦ）、麻疹、類鼻疽（ホイットモア病）、髄膜炎、髄膜炎菌性病、メタゴニムス症、微胞子虫症、中東呼吸器症候群（ＭＥＲＳ）、伝染性軟属腫（ＭＣ）、サル痘、ムンプス、発疹熱（地方病性チフス（Ｅｎｄｅｍｉｃ ｔｙｐｈｕｓ））、菌腫、ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｇｅｎｉｔａｌｉｕｍ感染症、マイコプラズマ肺炎、ハエ幼虫症、新生児結膜炎（新生児眼炎）、ニパウイルス感染症、ノカルジア症、ノロウイルス（小児および乳児）、オンコセルカ症（河川盲目症）、オピストルキス症、パラコクシジオイデス症（南アメリカブラストミセス症）、肺吸虫症、パスツレラ症、頭部シラミ症（ｐｅｄｉｃｕｌｏｓｉｓ ｃａｐｉｔｉｓ）（アタマジラミ）、体部シラミ症（ｐｅｄｉｃｕｌｏｓｉｓ ｃｏｒｐｏｒｉｓ）（コロモジラミ）、ケジラミ症（陰部のシラミ、ケジラミ）、骨盤内炎症性疾患（ＰＩＤ）、百日咳（ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）（百日咳（ｗｈｏｏｐｉｎｇ ｃｏｕｇｈ））、ペスト、肺炎球菌性感染症、ニューモシスチス肺炎（ＰＣＰ）、肺炎、灰白髄炎、ポンティアック熱、Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ感染症、原発性アメーバ性髄膜脳炎（ＰＡＭ）、進行性多巣性白質脳症、オウム病、Ｑ熱、狂犬病、回帰熱、呼吸器多核体ウイルス感染症、リノスポリジウム症、ライノウイルス感染症、リケッチア感染症、リケッチア痘症、リフトバレー熱（ＲＶＦ）、ロッキー山紅斑熱（ＲＭＳＦ）、ロタウイルス感染症、風疹、サルモネラ症、ＳＡＲＳ（重症急性呼吸器症候群）、疥癬、猩紅熱、住血吸虫症、敗血症、赤痢菌感染症（細菌性赤痢）、帯状疱疹（帯状ヘルペス）、天然痘（痘瘡）、スポロトリクム症、ブドウ球菌性食中毒、黄色ブドウ球菌感染症、糞線虫症、亜急性硬化性全脳炎、条虫症、破傷風（開口障害）、白癬性毛瘡（かみそり負け（ｂａｒｂｅｒ’ｓ ｉｔｃｈ））、異型白癬（頭部白癬）、躯幹白癬（体部白癬）、股部白癬（頑癬）、手白癬（手の白癬）、黒癬、足白癬（水虫）、爪白癬（爪真菌症）、癜風（澱風）、トキソカラ症（眼幼虫移行症（ＯＬＭ））、トキソカラ症（内臓幼虫移行症（ＶＬＭ））、トキソプラスマ症、トラコーマ、旋毛虫症、トリコモナス症、鞭虫症（鞭虫感染症）、結核、野兎病、腸チフス熱、発疹チフス、Ｕｒｅａｐｌａｓｍａ ｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍ感染症、渓谷熱、ベネズエラウマ脳炎、ベネズエラ出血熱、腸炎ビブリオ性腸炎、ｖｉｂｒｉｏ ｖｕｌｎｉｆｉｃｕｓ感染症、ウイルス性肺炎、西ナイル熱、白砂毛症（白癬（ｔｉｎｅａ ｂｌａｎｃａ））、黄熱病、Ｙｅｒｓｉｎｉａ ｐｓｅｕｄｏｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染症、エルシニア症、ｚｅａｓｐｏｒａ症、ジカ熱、および接合菌症が挙げられる。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物は、単独でまたは組み合わせて、急性骨髄性白血病、Ｂ細胞リンパ腫、慢性骨髄性白血病、うつ病、歯肉不全、Ｃ型肝炎、ＨＩＶ感染症、ヒトパピローマウイルス、特発性ＣＤ４リンパ球減少症、臓器移植に続発する免疫不全、リポジストロフィー、カポジ肉腫リンパ腫、リンパ球減少症、マントル細胞リンパ腫、多発性硬化症、骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫、再発成人びまん性大細胞リンパ腫、再発濾胞性リンパ腫、関節リウマチ、敗血症、および２型糖尿病を含む疾患を治療するために使用することができる。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物は、転移性乳がん、乳がん、結腸がん、膀胱がん、転移性前立腺がん、ＩＶ期前立腺がん、去勢抵抗性前立腺がん、神経芽腫、黒色腫、腎臓がん、骨髄増殖性腫瘍、肉腫、および神経皮膚腫瘍などのがんを治療するために使用することができる。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物は、大膠芽腫に対するテモゾロミド、ＭＣＣ、Ｃ５ＣＣおよび黒色腫などの皮膚がんを治療するためのアテゾリズマブ、トリプルネガティブ乳がんを治療するためのペムブロリズマブと組み合わせて、ならびに小児急性リンパ芽球性白血病を治療するためのＣＡＲ－Ｔ療法と組み合わせて使用することができる。
ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物またはその医薬組成物は、患者における炎症性疾患または自己免疫疾患を治療するための別の化合物とともに患者に投与することができる。少なくとも１つの他の治療剤は、本開示によって提供される異なるＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物であり得る。ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物および少なくとも１つの他の治療剤は、相加的または相乗的に機能し得る。少なくとも１つの追加の治療剤は、ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物を含む同じ医薬組成物もしくはビヒクルに含まれ得るか、または別個の医薬組成物もしくはビヒクルに含まれ得る。したがって、本開示によって提供される方法は、ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物を投与することに加えて、炎症性疾患もしくは自己免疫疾患、または炎症性疾患もしくは自己免疫疾患とは異なる疾患、障害もしくは状態を治療するのに有効な１つ以上の治療剤を投与することをさらに含む。本開示によって提供される方法は、ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物および１つ以上の他の治療剤を投与することを含むが、但し、併用投与が、ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物の治療有効性を阻害しない、かつ／または有害な併用効果を生じないことを条件とする。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物は、ＩＬ－２の産生および受容体結合プロセスに影響を及ぼし、影響を受けると考えられる多くの要因の評価を含む、ＩＬ－２の生物学的役割を理解するためのツールとしてインビトロで有用であり得る。本化合物はまた、ＩＬ－２Ｒに結合し、ＩＬ－２Ｒを活性化する他の化合物の開発において有用である。なぜなら、本化合物は、そのような開発を促進するべき構造と活性との関係に関する有用な情報を提供するからである。
ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物はまた、新しいＩＬ－２受容体アゴニストおよびアンタゴニストをスクリーニングするためのアッセイにおいて競合結合剤として有用である。そのようなアッセイでは、ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物は、修飾なしで使用され得るか、または様々な方法で修飾され得る。例えば、検出可能なシグナルを直接または間接的に提供する部分を共有結合または非共有結合するなどの標識によって行うことができる。これらのアッセイのうちのいずれにおいても、それらの材料は、直接的または間接的のいずれかで標識され得る。直接標識の可能性としては、例えば、１２５Ｉなどの放射標識、ペルオキシダーゼおよびアルカリホスファターゼなどの酵素、ならびに蛍光強度、波長シフト、または蛍光偏光の変化を監視することができる蛍光標識などの標識基が挙げられる。間接標識の可能性としては、１つの成分のビオチン化、続いて上記標識基の１つに結合したアビジンへの結合が挙げられる。化合物は、化合物が固体支持体に結合する場合、スペーサーまたはリンカーも含んでもよい。
ＩＬ－２Ｒに結合するそれらの能力に基づいて、本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物は、ＩＬ－２Ｒを検出するための試薬として、例えば、生体細胞、固定細胞、生物学的流体中、組織ホモジネート中、精製された、および天然生物学的材料中で使用することができる。例えば、このようなペプチドを標識することにより、ＩＬ－２ＲβおよびＩＬ－２Ｒγｃサブユニットを発現する細胞を同定することができる。さらに、ＩＬ－２Ｒに結合するそれらの能力に基づいて、本開示のＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物は、例えば、インサイチュ染色、ＦＡＣＳ（蛍光活性化細胞選別）、ウェスタンブロッティング、およびＥＬＩＳＡに使用することができる。さらに、ＩＬ－２Ｒに結合するそれらの能力に基づいて、本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物は、受容体精製に、または細胞表面上（または透過細胞内）でＩＬ－２Ｒを発現する細胞の精製に使用することができる。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物は、様々な医学的研究および診断用途のための市販試薬としても利用することができる。そのような使用としては、例えば、（１）様々な機能アッセイにおける候補ＩＬ－２アゴニストの活性を定量するための較正標準としての使用、（２）ＩＬ－２依存性細胞株の増殖および成長を維持するための使用、（３）共結晶化によるＩＬ－２Ｒの構造解析での使用、（４）ＩＬ－２シグナル伝達／受容体活性化の機構を調査するための使用、ならびに（５）ＩＬ－２Ｒが活性化されるか、またはそのような活性化が既知量のＩＬ－２Ｒアゴニストに対して都合よく較正される他の研究および診断用途が挙げられる。
本発明の態様は、本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβリガンド、ＩＬ－２Ｒγｃリガンド、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド、タンデムＩＬ－２Ｒβγｃリガンド、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物、およびＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物をコードする核酸を含む。
本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβリガンド、ＩＬ－２Ｒγｃリガンド、およびＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物をコードする核酸／単離されたポリヌクレオチドは、ＩＬ－２Ｒβリガンド、ＩＬ－２Ｒγｃリガンド、およびＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物を生成するために使用される宿主細胞部分的に応じて、発現ベクターに組み込むことができる。一般に、核酸は、例えば、プロモーター、複製起点、選択可能なマーカー、リボソーム結合部位、および／または誘導因子などの任意の数の調節エレメントに作動可能に結合することができる。発現ベクターは、染色体外ベクターまたは組み込みベクターであり得る。
核酸および／または発現は、ＣＨＯ細胞などの哺乳動物細胞を用いて、哺乳動物、細菌、酵母、昆虫、および／または真菌細胞を含む任意の数の異なる種類の宿主細胞に形質転換することができる。
ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドをコードする核酸は、ＩＬ－２Ｒβリガンドをコードする第１の核酸配列と、ペプチジルリガンドリンカーをコードする第２の核酸配列と、ＩＬ－２Ｒγｃリガンドをコードする第３の核酸配列と、を含むことができる。
ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド融合タンパク質をコードする核酸は、本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃリガンドをコードする第１の核酸配列と、融合パートナーをコードする第２の核酸配列と、を含むことができる。ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド融合タンパク質をコードする核酸は、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドおよび融合パートナーをコードする核酸を含むことができる。ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド融合タンパク質をコードする核酸は、構築リンカーをコードする核酸セグメントをさらに含むことができ、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド融合タンパク質をコードする核酸は、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド、融合パートナー、および構築リンカーをコードする核酸を含むことができる。
融合パートナーは、例えば、ＨＳＡ、Ｆｃ断片、ＩｇＧ、細胞特異的抗原に向けられた抗体、および細胞特異的受容体に向けられた抗体を含むことができる。
ＩＬ－２Ｒβγｃ融合タンパク質をコードする核酸は、ペプチジルリンカーをコードする核酸をさらに含むことができ、ペプチジルリンカーは、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドを融合パートナーに結合させるように構成される。
本開示によって提供される核酸は、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドと、ＩＬ－２ＲβγｃリガンドのＣ末端をＨＳＡに結合するリンカーと、を含む融合タンパク質をコードすることができる。
本開示によって提供される核酸は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４の二量体Ｆｃ断片、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド、およびＩＬ－２ＲβγｃリガンドのＮ末端を二量体Ｆｃ断片の１つのＣＨ３ドメインのＣ末端に結合するリンカーを含む融合タンパク質をコードすることができる。
本開示によって提供される核酸は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４の二量体Ｆｃ断片、２つのＩＬ－２Ｒβγｃリガンド、および２つのＩＬ－２ＲβγｃリガンドのそれぞれのＮ末端を二量体Ｆｃ断片の各ＣＨ３ドメインのＣ末端に結合するリンカーを含む融合タンパク質をコードすることができる。
本開示によって提供される核酸は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４などの免疫グロブリン分子の重鎖、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド、およびＩＬ－２ＲβγｃリガンドのＮ末端をＦｃ領域のＣ末端に結合するＦｃリンカーを含む融合タンパク質をコードすることができる。
本開示によって提供される核酸は、本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物をコードする核酸と、ＲＮＡおよび／またはＤＮＡワクチンと、を含むことができる。
本開示によって提供される核酸は、ＩＬ－２Ｒβγｃ結合ワクチン構築物をコードする核酸を含むことができる。ワクチンは、例えば、がんワクチンまたはウイルスワクチンを含むことができる。
本開示によって提供される核酸は、ウイルス表面抗原を含むＩＬ－２Ｒβγｃ結合構築物をコードする核酸を含むことができる。
本開示によって提供される核酸は、ウイルス様粒子を含むＩＬ－２Ｒβγｃ結合構築物をコードする核酸を含むことができる。
本開示によって提供される核酸は、本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβリガンドをコードすることができるか、または本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβリガンドに対して、６０％超、７０％超、８０％超、８５％超、９０％超、もしくは９５％超の配列類似性を有するアミノ酸配列を含むアミノ酸配列をコードすることができる。
本開示によって提供される核酸は、配列番号６１２、６６４、６７１、８６５、８５６、８５８、８６４、８６９、８７０、８７４、８７５、および９０１のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むＩＬ－２Ｒβリガンドをコードすることができるか、または配列番号６１２、６６４、６７１、８６５、８５６、８６４、８５８、８６９、８７０、８７４、８７５、および９０１のうちのいずれか１つに対して、６０％超、７０％超、８０％超、８５％超、９０％超、もしくは９５％超の配列類似性を有するアミノ酸配列を含むアミノ酸配列をコードすることができる。
本開示によって提供される核酸は、本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒγｃリガンドをコードすることができるか、または本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒγｃリガンドに対して、６０％超、７０％超、８０％超、８５％超、９０％超、もしくは９５％超の配列類似性を有するアミノ酸配列を含むアミノ酸配列をコードすることができる。
本開示によって提供される核酸は、配列番号９６５、９８０、９８１、９８５、１０２４、１０２６、および１０２８のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むＩＬ－２Ｒγｃリガンドをコードすることができるか、または配列番号９６５、９８０、９８１、９８５、１０２４、１０２６、および１０２８のうちのいずれか１つに対して、６０％超、７０％超、８０％超、８５％超、９０％超、もしくは９５％超の配列類似性を有するアミノ酸配列を含むアミノ酸配列をコードすることができる。
本開示によって提供される核酸は、本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃリガンドをコードすることができるか、または本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃリガンドに対して、６０％超、７０％超、８０％超、８５％超、９０％超、もしくは９５％超の配列類似性を有するアミノ酸配列を含むアミノ酸配列をコードすることができる。
本開示によって提供される核酸は、配列番号１２６３～１２７０のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むＩＬ－２Ｒβγｃリガンドをコードすることができるか、または配列番号１２６３～１２７０のうちのいずれか１つに対して、６０％超、７０％超、８０％超、８５％超、９０％超、もしくは９５％超の配列類似性を有するアミノ酸配列を含むアミノ酸配列をコードすることができる。
本開示によって提供される核酸は、本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃリガンド融合タンパク質をコードすることができるか、または本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃリガンド融合タンパク質に対して、６０％超、７０％超、８０％超、８５％超、９０％超、もしくは９５％超の配列類似性を有するアミノ酸配列を含むアミノ酸配列をコードすることができる。
本開示によって提供される核酸は、配列番号１２１２～１２５２のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むＩＬ－２Ｒβγｃリガンド融合タンパク質をコードすることができるか、または配列番号１２１２～１２５２のうちのいずれか１つに対して、６０％超、７０％超、８０％超、８５％超、９０％超、もしくは９５％超の配列類似性を有するアミノ酸配列を含むアミノ酸配列をコードすることができる。
本開示によって提供される核酸は、配列番号８６５のアミノ酸配列、または配列番号８６５に対して、６０％超、７０％超、８０％超、８５％超、９０％超、もしくは９５％超の配列類似性を有するアミノ酸配列を含むアミノ酸配列を含むＩＬ－２Ｒβリガンドと、配列番号９６５のアミノ酸配列、または配列番号９６５に対して、６０％超、７０％超、８０％超、８５％超、９０％超、もしくは９５％超の配列類似性を有するアミノ酸配列を含むアミノ酸配列を含むＩＬ－２Ｒγｃリガンドと、を含む、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物をコードすることができる。
本開示によって提供される核酸は、本開示によって提供される２つ以上のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドを含むタンデムＩＬ－２Ｒβγｃリガンドをコードすることができる。
本発明の態様は、本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβリガンド、ＩＬ－２Ｒγｃリガンド、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド、タンデムＩＬ－２Ｒβγｃリガンド、またはＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物をコードする核酸を含む発現ベクターを含む。
本発明の態様は、本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβリガンド、ＩＬ－２Ｒγｃリガンド、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド、タンデムＩＬ－２Ｒβγｃリガンド、またはＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物をコードする核酸を含む発現ベクターを含む宿主細胞をさらに含む。
本開示によって提供される方法は、本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβリガンド、ＩＬ－２Ｒγｃリガンド、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド、タンデムＩＬ－２Ｒβγｃリガンド、またはＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物を作製する方法であって、宿主細胞を培養することであって、宿主細胞が、ＩＬ－２Ｒβリガンド、ＩＬ－２Ｒγｃリガンド、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド、タンデムＩＬ－２Ｒβγｃリガンド、またはＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物が発現される条件下で、本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβリガンド、ＩＬ－２Ｒγｃリガンド、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド、タンデムＩＬ－２Ｒβγｃリガンド、またはＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物をコードする核酸を含む発現ベクターを含む、培養することと、発現されたＩＬ－２Ｒβリガンド、ＩＬ－２Ｒγｃリガンド、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド、タンデムＩＬ－２Ｒβγｃリガンド、またはＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物を回収することと、を含む、方法を含む。
発明の態様
本発明は、以下の態様によってさらに定義される。
態様１．ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドであって、
（ａ）ＩＬ－２Ｒβリガンドであって、式（１）（配列番号８０５）、式（１ａ）（配列番号８０６）、式（１ｂ）（配列番号８０７）、式（１ｃ）（配列番号８０８）、もしくは式（１ｄ）（配列番号８０９）のアミノ酸配列、または式（１）（配列番号８０５）、式（１ａ）（配列番号８０６）、式（１ｂ）（配列番号８０７）、式（１ｃ）（配列番号８０８）、もしくは式（１ｄ）（配列番号８０９）のアミノ酸配列と６０％超の配列類似性を有するアミノ酸配列を含み、

式中、
Ｘ２１１は、アミノ酸から選択され、
Ｘ２１２は、Ｆ、Ｈ、Ｗ、およびＹから選択され、
Ｘ２１３は、Ｆ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｖ、Ｗ、およびＹから選択され、
Ｘ２１４は、Ｐであり、
Ｘ２１５は、Ｆ、Ｈ、Ｗ、およびＹから選択され、
Ｘ２１６は、Ｆ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｖ、Ｗ、およびＹから選択され、
Ｘ２１７は、Ａであり、
Ｘ２１８は、Ｋ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、およびＹから選択され、
Ｘ２１９は、Ｆ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｖ、Ｗ、およびＹから選択され、
Ｘ２２０は、Ｇであり、
Ｘ２２１は、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、およびＹから選択され、
Ｘ２２２は、Ｌであり、
Ｘ２２３は、Ｄであり、
Ｘ２２４は、Ｆ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｖ、Ｗ、およびＹから選択され、
Ｘ２２５は、ＤおよびＥから選択される、ＩＬ－２Ｒβリガンドと、
（ｂ）ＩＬ－２Ｒγｃリガンドであって、式（５）（配列番号９４４）、式（５ａ）（配列番号９４５）、式（５ｂ）（配列番号９４６）、式（５ｃ）（配列番号９４７）、式（５ｄ）（配列番号９４８）、もしくは式（５ｅ）（配列番号９４９）のアミノ酸配列、または式（５）（配列番号９４４）、式（５ａ）（配列番号９４５）、式（５ｂ）（配列番号９４６）、式（５ｃ）（配列番号９４７）、式（５ｄ）（配列番号９４８）、もしくは式（５ｅ）（配列番号９４９）のアミノ酸配列と６０％超の配列類似性を有するアミノ酸配列を含み、

式中、
Ｘ１７１は、Ｈ、Ｋ、およびＲから選択され、
Ｘ１７２は、Ｓ、Ｔ、およびＹから選択され、
Ｘ１７３は、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｖ、Ｗ、およびＹから選択され、
Ｘ１７４は、Ｆ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｖ、Ｗ、およびＹから選択され、
Ｘ１７５は、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｖ、Ｗ、およびＹから選択され、
Ｘ１７６は、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、およびＹから選択され、
Ｘ１７７は、ＤおよびＥから選択され、
Ｘ１７８は、Ｆ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｖ、Ｗ、およびＹから選択され、
Ｘ１７９は、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、およびＹから選択され、
Ｘ１８０は、Ｇであり、
Ｘ１８１は、Ｖであり、
Ｘ１８２は、Ｅであり、
Ｘ１８３は、Ｌであり、
Ｘ１８４は、Ｗから選択され、
Ｘ１８５は、Ｆ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｖ、Ｗ、Ｙ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、およびＴから選択され、
Ｘ１８６は、Ｅであり、
Ｘ１８７は、アミノ酸から選択され、
Ｘ１８８は、ＤおよびＥから選択される、ＩＬ－２Ｒγｃリガンドと、
（ｃ）ＩＬ－２ＲβリガンドをＩＬ－２Ｒγｃリガンドに結合する、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドリンカーと、を含む、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド。
態様２．式（５）～（５ｅ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、
Ｘ２１１は、Ｈ、Ｋ、およびＲから選択され、
Ｘ２１２は、Ｗであり、
Ｘ２１３は、Ｙであり、
Ｘ２１４は、Ｐであり、
Ｘ２１５は、Ｗであり、
Ｘ２１６は、Ｍであり、
Ｘ２１７は、Ａであり、
Ｘ２１８は、ＮおよびＱから選択され、
Ｘ２１９は、ＬおよびＶから選択され、
Ｘ２２０は、Ｇであり、
Ｘ２２１は、Ｅ、Ｄ、およびＱから選択され、
Ｘ２２２は、Ｌであり、
Ｘ２２３は、Ｄであり、
Ｘ２２４は、ＬおよびＭから選択され、
Ｘ２２５は、ＤおよびＥから選択される、態様１に記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド。
態様３．式（５）～（５ｅ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、
Ｘ２１１は、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、およびＶから選択され、
Ｘ２１２は、Ｃ、Ｆ、Ｗ、およびＹから選択され、
Ｘ２１３は、Ｆ、Ｈ、Ｋ、Ｌ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｗ、およびＹから選択され、
Ｘ２１４は、Ｐであり、
Ｘ２１５は、ＷおよびＹから選択され、
Ｘ２１６は、Ｆ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、およびＶから選択され、
Ｘ２１７は、Ａであり、
Ｘ２１８は、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｋ、Ｌ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、およびＹから選択され、
Ｘ２１９は、Ｌ、Ｐ、およびＶから選択され、
Ｘ２２０は、Ｇ、Ｈ、およびＷから選択され、
Ｘ２２１は、Ｄ、Ｅ、およびＱから選択され、
Ｘ２２２は、ＬおよびＭから選択され、
Ｘ２２３は、Ｄであり、
Ｘ２２４は、Ｌ、Ｍ、Ｑ、およびＶから選択され、
Ｘ２２５は、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｌ、Ｎ、Ｑ、Ｔ、およびＶから選択される、態様１に記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド。
態様４．式（５）～（５ｅ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、
Ｘ２１１は、ＨおよびＲから選択され、
Ｘ２１２は、ＦおよびＷから選択され、
Ｘ２１３は、Ｆ、Ｌ、Ｗ、およびＹから選択され、
Ｘ２１４は、Ｐであり、
Ｘ２１５は、ＷおよびＹから選択され、
Ｘ２１６は、Ｆ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、およびＶから選択され、
Ｘ２１７は、Ａであり、
Ｘ２１８は、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｎ、Ｑ、およびＲから選択され、
Ｘ２１９は、ＬおよびＶから選択され、
Ｘ２２０は、Ｇであり、
Ｘ２２１は、Ｄ、Ｅ、およびＱから選択され、
Ｘ２２２は、ＬおよびＭから選択され、
Ｘ２２３は、Ｄであり、
Ｘ２２４は、Ｌ、Ｍ、およびＶから選択され、
Ｘ２２５は、ＤおよびＥから選択される、態様１に記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド。
態様５．式（５）～（５ｅ）のＩＬ－２Ｒβリガンドにおいて、
Ｘ２１１は、ＨおよびＲから選択され、
Ｘ２１２は、Ｗであり、
Ｘ２１３は、Ｙであり、
Ｘ２１４は、Ｐであり、
Ｘ２１５は、Ｗであり、
Ｘ２１６は、Ｍであり、
Ｘ２１７は、Ａであり、
Ｘ２１８は、ＫおよびＲから選択され、
Ｘ２１９は、Ｌであり、
Ｘ２２０は、Ｇであり、
Ｘ２２１は、ＥおよびＱから選択され、
Ｘ２２２は、Ｌであり、
Ｘ２２３は、Ｄであり、
Ｘ２２４は、Ｌであり、
Ｘ２２５は、ＤおよびＥから選択される、態様１に記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド。
態様６．式（５）～（５ｅ）のＩＬ－２Ｒγｃリガンドにおいて、
Ｘ１７１は、Ｈ、Ｋ、およびＲから選択され、
Ｘ１７２は、Ｓ、Ｔ、およびＹから選択され、
Ｘ１７３は、ＤおよびＥから選択され、
Ｘ１７４は、Ｖであり、
Ｘ１７５は、ＤおよびＥから選択され、
Ｘ１７６は、ＥおよびＱから選択され、
Ｘ１７７は、ＤおよびＥから選択され、
Ｘ１７８は、Ｆ、Ｈ、Ｗ、およびＹから選択され、
Ｘ１７９は、Ｄ、Ｅ、およびＱから選択され、
Ｘ１８０は、Ｇであり、
Ｘ１８１は、Ｖであり、
Ｘ１８２は、Ｅであり、
Ｘ１８３は、Ｌであり、
Ｘ１８４は、Ｗであり、
Ｘ１８５は、Ｆ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｖ、Ｗ、Ｙ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、およびＴから選択され、
Ｘ１８６は、Ｅであり、
Ｘ１８７は、アミノ酸から選択され、
Ｘ１８８は、ＤおよびＥから選択される、態様１～５のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド。
態様７．式（５）～（５ｅ）のＩＬ－２Ｒγｃリガンドにおいて、
Ｘ１７１は、Ｈ、Ｋ、およびＲから選択され、
Ｘ１７２は、Ｓ、Ｔ、およびＹから選択され、
Ｘ１７３は、Ｆ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｖ、Ｗ、およびＹから選択され、
Ｘ１７４は、Ｖであり、
Ｘ１７５は、Ｆ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｖ、Ｗ、およびＹから選択され、
Ｘ１７６は、ＥおよびＱから選択され、
Ｘ１７７は、ＤおよびＥから選択され、
Ｘ１７８は、Ｆ、Ｈ、Ｗ、およびＹから選択され、
Ｘ１７９は、Ｄ、Ｅ、およびＱから選択され、
Ｘ１８０は、Ｇであり、
Ｘ１８１は、Ｖであり、
Ｘ１８２は、Ｅであり、
Ｘ１８３は、Ｌであり、
Ｘ１８４は、Ｗであり、
Ｘ１８５は、Ｆ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｖ、Ｗ、Ｙ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、およびＴから選択され、
Ｘ１８６は、Ｅであり、
Ｘ１８７は、アミノ酸から選択され、
Ｘ１８８は、ＤおよびＥから選択される、態様１～５のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド。
態様８．式（５）～（５ｅ）のＩＬ－２Ｒγｃリガンドにおいて、
Ｘ１７１は、Ｈ、Ｋ、およびＲから選択され、
Ｘ１７２は、Ｓ、Ｔ、およびＹから選択され、
Ｘ１７３は、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｖ、Ｗ、およびＹから選択され、
Ｘ１７４は、Ｖであり、
Ｘ１７５は、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｖ、Ｗ、およびＹから選択され、
Ｘ１７６は、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、およびＹから選択され、
Ｘ１７６は、ＥおよびＱから選択され、
Ｘ１７７は、ＤおよびＥから選択され、
Ｘ１７８は、Ｗであり、
Ｘ１７９は、Ｄ、Ｅ、およびＱから選択され、
Ｘ１８０は、Ｇであり、
Ｘ１８１は、Ｖであり、
Ｘ１８２は、Ｅであり、
Ｘ１８３は、Ｌであり、
Ｘ１８４は、Ｗであり、
Ｘ１８５は、Ｆ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｖ、Ｗ、Ｙ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、およびＴから選択され、
Ｘ１８６は、Ｅであり、
Ｘ１８７は、アミノ酸から選択され、
Ｘ１８８は、ＤおよびＥから選択される、態様１～５のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド。
態様９．（ａ）ＩＬ－２Ｒβリガンドが、式（１）、式（１ａ）、式（１ｂ）、式（１ｃ）、または式（１ｄ）のアミノ酸配列を含み、（ｂ）ＩＬ－２Ｒγｃリガンドが、式（５）、式（５ａ）、式（５ｂ）、式（５ｃ）、式（５ｄ）、または式（５ｅ）のアミノ酸配列を含む、態様１に記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド。
態様１０．（ａ）ＩＬ－２Ｒβリガンドが、式（１）、式（１ａ）、式（１ｂ）、式（１ｃ）、または式（１ｄ）のアミノ酸配列と６０％超の配列類似性を有するアミノ酸配列を含み、（ｂ）ＩＬ－２Ｒγｃリガンドが、式（１２）、式（５ａ）、式（５ｂ）、式（５ｃ）、式（５ｄ）、または式（５ｅ）のアミノ酸配列と６０％超の配列類似性を有するアミノ酸配列を含む、態様１に記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド。
態様１１．ＩＬ－２Ｒβリガンドが、配列番号８０５～９０３のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－２Ｒγｃリガンドが、配列番号９４４～１０２８のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む、態様１に記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド。
態様１２．ＩＬ－２Ｒβリガンドが、配列番号６１２、６６４、８６５、８５６、８５８、８６４、８６９、８７０、８７４、８７５、および９０１のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含み、ＩＬ－２Ｒγｃリガンドが、配列番号９６５、９８０、９８１、９８５、１０２４、１０２６、および１０２８のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む、態様１に記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド。
態様１３．ＩＬ－２Ｒβリガンドが、配列番号８０５～９０３のうちのいずれか１つと６０％超のアミノ酸配列類似性を有する、態様１に記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド。
態様１４．ＩＬ－２Ｒγｃリガンドが、配列番号９４４～１０２８のうちのいずれか１つと６０％超のアミノ酸配列類似性を有する、態様１に記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド。
態様１５．ＩＬ－２Ｒβリガンドが、配列番号６１２、６６４、８６５、８５６、８５８、８６４、８６９、８７０、８７４、８７５、および９０１のうちのいずれか１つと６０％超のアミノ酸配列類似性を有し、ＩＬ－２Ｒγｃリガンドが、配列番号９６５、９８０、９８１、９８５、１０２４、１０２６、および１０２８のうちのいずれか１つと６０％超のアミノ酸配列類似性を有する、態様１に記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド。
態様１６．ＩＬ－２Ｒβリガンドが、ＩＬ－２Ｒβリガンドの２つのシステイン間のジスルフィド結合を含む、態様１～１５のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド。
態様１７．ＩＬ－２Ｒγｃリガンドが、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドの２つのシステイン間のジスルフィド結合を含む、態様１～１５のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド。
態様１８．ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドが、ＩＬ－２Ｒβリガンドのシステインと、ＩＬ－２Ｒγｃリガンドのシステインとの間のジスルフィド結合を含む、態様１～１５のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド。
態様１９．ＩＬ－２Ｒβリガンドのシステインのそれぞれが、ジスルフィド結合によってＩＬ－２Ｒγｃリガンドのシステインに結合する、態様１～１５のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド。
態様２０．ＩＬ－２Ｒβリガンドが、ｐＨバイアスＩＬ－２Ｒβリガンドであり、かつ／またはＩＬ－２Ｒγｃリガンドが、ｐＨバイアスＩＬ－２Ｒγｃリガンドである、態様１～１９のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド。
態様２１．ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドが、ｐＨバイアスＩＬ－２Ｒβγｃリガンドである、態様１～２０のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド。
態様２２．ＩＬ－２Ｒβリガンドが、ＩＬ－２Ｒβサブユニットの特異的結合部位に結合し、ＩＬ－２、配列番号１０４４のアミノ酸配列を含むＩＬ－２Ｒβリガンド、および配列番号２２４を含むＩＬ－２Ｒγｃリガンドが、ＩＬ－２Ｒβサブユニット上の特異的結合部位への結合についてＩＬ－２Ｒβリガンドと競合しない、態様１～２１のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド。
態様２３．ＩＬ－２Ｒβリガンドが、１００μＭ未満のＩＣ５０でＩＬ－２Ｒβサブユニットに結合し、ＩＬ－２Ｒβリガンドが、１００μＭ超のＩＣ５０でＩＬ－２Ｒγｃサブユニットに結合する、態様１～２２のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド。
態様２４．ＩＬ－２Ｒγｃリガンドが、ＩＬ－２Ｒγｃサブユニットの特異的結合部位に結合し、ＩＬ－２、配列番号１０３２のアミノ酸配列を含むＩＬ－２Ｒγｃリガンド、および配列番号５８を含むＩＬ－２Ｒβリガンドが、ＩＬ－２Ｒγｃサブユニット上の特異的結合部位への結合についてＩＬ－２Ｒγｃリガンドと競合しない、態様１～２３のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド。
態様２５．ＩＬ－２Ｒγｃリガンドが、１００μＭ未満のＩＣ５０でＩＬ－２Ｒγｃサブユニットに結合し、ＩＬ－２Ｒγｃリガンドが、１００μＭ超のＩＣ５０でＩＬ－２Ｒβサブユニットに結合する、態様１～２４のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド。
態様２６．ＩＬ－２ＲβリガンドのＣ末端および／またはＮ末端のそれぞれが、独立して、２～１０個の隣接アミノ酸を含む、態様１～２５のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド。
態様２７．ＩＬ－２ＲβリガンドのＣ末端および／またはＮ末端のそれぞれが、独立して、－Ｇ－（配列番号９３９０）、－ＧＧ－（配列番号９４００）、または－ＧＧＲＲ－（配列番号９４０２）から選択される隣接アミノ酸を含む、態様１～２６のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド。
態様２８．ＩＬ－２ＲγｃリガンドのＣ末端および／またはＮ末端のそれぞれが、独立して、２～１０個の隣接アミノ酸を含む、態様１～２７のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド。
態様２９．ＩＬ－２ＲγｃリガンドのＣ末端および／またはＮ末端のそれぞれが、独立して、－Ｇ－（配列番号９３９０）、－ＧＧ－（配列番号９４００）、または－ＧＧＲＲ－（配列番号９４０２）から選択される隣接アミノ酸を含む、態様１～２８のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド。
態様３０．ＩＬ－２ＲβリガンドのＣ末端およびＩＬ－２ＲγｃリガンドのＣ末端が、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドリンカーに結合する、態様１～２９のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド。
態様３１．ＩＬ－２ＲβリガンドのＣ末端およびＩＬ－２ＲγｃリガンドのＮ末端が、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドリンカーに結合する、態様１～２９のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド。
態様３２．ＩＬ－２ＲβリガンドのＮ末端およびＩＬ－２ＲγｃリガンドのＣ末端が、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドリンカーに結合する、態様１～２９のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド。
態様３３．ＩＬ－２ＲβリガンドのＮ末端およびＩＬ－２ＲγｃリガンドのＮ末端が、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドリンカーに結合する、態様１～２９のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド。
態様３４．ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドリンカーが、５Å～２００Åの長さを有する、態様１～３３のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド。
態様３５．ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドリンカーが、ＩＬ－２ＲβγｃリガンドのＩＬ－２Ｒへの結合を促進するように構成される、態様１～３４のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド。
態様３６．ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドリンカーが、ＩＬ－２Ｒを活性化するように構成される、態様１～３５のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド。
態様３７．ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドリンカーが、合成ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドリンカーを含む、態様１～３６のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド。
態様３８．合成ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドリンカーが、トリアゾールを含む、態様１～３６のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド。
態様３９．ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドリンカーが、ペプチジルＩＬ－２Ｒβγｃリガンドリンカーを含む、態様１～３６のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド。
態様４０．ペプチジルＩＬ－２Ｒβγｃリガンドリンカーが、２～２０アミノ酸を含む、態様３７に記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド。
態様４１．ペプチジルＩＬ－２Ｒβγｃリガンドリンカーが、（Ｇ）ｎ（配列番号９３８０）、（ＧＳ）ｎ（配列番号９３８１）、（ＧＧＳ）ｎ（配列番号９３８２）、（ＧＧＧＳ）ｎ（配列番号９３８３）、または（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号９３８４）を含み、ｎが、１～２０の整数である、態様３７に記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド。
態様４２．ＩＬ－２Ｒβγｃリンカーが、切断可能なＩＬ－２Ｒβγｃリガンドリンカーを含む、態様１～４１のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド。
態様４３．ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドが、配列番号８６５のアミノ酸配列を含むＩＬ－２Ｒβリガンドと、配列番号９６５のアミノ酸配列を含むＩＬ－２Ｒγｃリガンドと、を含む、態様１に記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド。
態様４４．ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドが、配列番号８６５と６０％超の配列類似性を有するアミノ酸配列を含むＩＬ－２Ｒβリガンドと、配列番号９６５と６０％超の配列類似性を有するアミノ酸配列を含むＩＬ－２Ｒγｃリガンドと、を含む、態様１に記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド。
態様４５．ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドリンカーが、（Ｇ）ｎ（配列番号９３８０）、（ＧＳ）ｎ（配列番号９３８１）、（ＧＧＳ）ｎ（配列番号９３８２）．（ＧＧＧＳ）ｎ（配列番号９３８３）、または（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号９３８４）を含み、ｎが、１～２０の整数である、態様４４に記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド。
態様４６．ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドリンカーが、－ＧＧＳ－（配列番号９３９２）を含む、態様４４に記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド。
態様４７．ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドが、配列番号１２６３のアミノ酸配列または配列番号１２６３と６０％超の配列類似性を有するアミノ酸配列を含む、態様１に記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド。
態様４８．ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドが、１つ以上の隣接グリシンを含む、態様４７に記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド。
態様４９．ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドが、配列番号１２６４のアミノ酸配列または配列番号１２６４と６０％超の配列類似性を有するアミノ酸配列を含む、態様１に記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド。
態様５０．ＩＬ－２Ｒβリガンドのシステインが、ジスルフィド結合によって互いに結合し、ＩＬ－２Ｒγｃリガンドのシステインが、ジスルフィド結合によって互いに結合する、態様４９に記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド。
態様５１．ＩＬ－２Ｒβリガンドのシステインが、ＩＬ－２Ｒγｃリガンドのシステインに結合する、態様４９に記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド。
態様５２．ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドが、完全ＩＬ－２Ｒアゴニストである、態様１～５１のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド。
態様５３．ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドが、部分的ＩＬ－２Ｒアゴニストである、態様１～５１のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド。
態様５４．ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドが、ｐＨバイアスＩＬ－２Ｒアゴニストである、態様１～５３のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド。
態様５５．ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドが、ＮＫ－９２細胞およびＴＦ－１β細胞におけるＳＴＡＴ５リン酸化、ＡＫＴリン酸化、およびＥＲＫ１／２リン酸化経路についてのＩＬ－２Ｒアゴニストである、態様１～５１のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド。
態様５６．タンデムＩＬ－２Ｒβγｃリガンドが、態様１～５５のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドのうちの２つ以上を含む、タンデムＩＬ－２Ｒβγｃリガンド。
態様５７．２つ以上のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドのそれぞれが、同一である、態様５６の記載のタンデムＩＬ－２Ｒβγｃリガンド。
態様５８．２つ以上のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドのうちの少なくとも１つが、別のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドとは異なる、態様５６または５７に記載のタンデムＩＬ－２Ｒβγｃリガンド。
態様５９．２つ以上のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドのそれぞれが、タンデムリンカーを介して別のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドに結合する、態様５６～５８のいずれか１つに記載のタンデムＩＬ－２Ｒβγｃリガンド。
態様６０．第１のＩＬ－２ＲβγｃリガンドのＣ末端が、タンデムリンカーに結合し、第２のＩＬ－２ＲβγｃリガンドのＮ末端が、タンデムリンカーに結合する、態様５６～５９のいずれか１つに記載のタンデムＩＬ－２Ｒβγｃリガンド。
態様６１．タンデムリンカーが、ペプチジルタンデムリンカーを含む、態様５６～６０のいずれか１つに記載のタンデムＩＬ－２Ｒβγｃリガンド。
態様６２．ペプチジルタンデムリンカーが、２～２０個のアミノ酸を含む、態様６１に記載のタンデムＩＬ－２Ｒβγｃリガンド。
態様６３．ペプチジルタンデムリンカーが、５Å～２００Åの長さを有する、態様６１または６２に記載のタンデムＩＬ－２Ｒβγｃリガンド。
態様６４．ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物であって、構築パートナーに結合した態様１～５５のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドのうちの１つ以上を含む、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物。
態様６５．ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物が、２つ以上のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドを含み、２つ以上のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドのそれぞれが、同一である、態様６４に記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物。
態様６６．ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物が、２つ以上のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドを含み、２つ以上のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドのうちの少なくとも１つが、他のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドのうちの少なくとも１つとは異なる、態様６４に記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物。
態様６７．構築リンカーをさらに含み、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドが、構築リンカーを介して構築パートナーに結合する、態様６４～６６のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物。
態様６８．ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドが、ＩＬ－２ＲβγｃリガンドのＣ末端を介して構築リンカーに結合する、態様６７に記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物。
態様６９．ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドが、ＩＬ－２ＲβγｃリガンドのＮ末端を介して構築リンカーに結合する、態様６７に記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物。
態様７０．構築リンカーは、ペプチジル構築リンカーを含む、態様６７～６９のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物。
態様７１．ペプチジル構築リンカーが、２～２００個のアミノ酸を含む、態様７０に記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物。
態様７２．ペプチジル構築リンカーが、５Å～２００Åの長さを有する、態様７０または７１に記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物。
態様７３．ペプチジル構築リンカーが、（Ｇ）ｎ（配列番号９３８０）、（ＧＳ）ｎ（配列番号９３８１）、（ＧＧＳ）ｎ（配列番号９３８２）、（ＧＧＧＳ）ｎ（配列番号９３８３）、（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号９３８４）、または（ＰＡ）ｎ（配列番号９４２１）を含み、ｎが、１～２０の整数である、態様７０に記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物。
態様７４．構築リンカーが、切断可能な構築リンカーを含む、態様６７に記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物。
態様７５．構築パートナーが、ポリペプチドを含み、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドが、ポリペプチドのＣ末端および／またはＮ末端に結合する、態様６４～７４のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物。
態様７６．構築パートナーが、ポリペプチドを含み、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドが、アミノ酸側鎖に結合する、態様６４～７４のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物。
態様７７．構築パートナーが、ポリペプチドを含み、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドが、ポリペプチドに組み込まれる、態様６４～７４のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物。
態様７８．構築パートナーが、患者の体循環においてＩＬ－２Ｒβγｃリガンドに所望の薬物動態特性を付与するように構成された化合物を含む、態様６４～７７のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物。
態様７９．構築パートナーが、患者の体においてＩＬ－２Ｒβγｃリガンドに所望の生体分布特性を付与するように構成された化合物を含む、態様６４～７８のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物。
態様８０．構築パートナーが、ポリマー、ポリペプチド、Ｆｃ断片、免疫グロブリン断片、および抗体から選択される、態様６４～７９のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物。
態様８１．構築パートナーが、ヒト血清アルブミン、ポリペプチド、およびポリエチレングリコールから選択される、態様６４～７９のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物。
態様８２．ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物が、組換え融合タンパク質を含む、態様６４～７９のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物。
態様８３．ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物が、配列番号１２１２～１２５２のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列または配列番号１２１２～１２５２のうちのいずれか１つと６０％超の配列類似性を有するアミノ酸配列を含む、態様６４～８２のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物。
態様８４．ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドが、配列番号１２６３のアミノ酸配列または配列番号１２６３と６０％超の配列類似性を有するアミノ酸配列を含む、態様６４～８２のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物。
態様８５．構築パートナーが、Ｆｃ断片を含む、態様６４～８４のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物。
態様８６．Ｆｃ断片が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、もしくはＩｇＧ４、または前述のうちのいずれかの変異体に由来する、態様８５に記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物。
態様８７．ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドが、Ｆｃ断片のＣ末端に結合する、態様８５または８６に記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物。
態様８８．ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドが、Ｆｃ断片のＮ末端に結合する、態様８７に記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物。
態様８９．ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドが、Ｆｃ断片リンカーを介してＦｃ断片に結合する、態様８７に記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物。
態様９０．Ｆｃ断片リンカーが、ペプチジルＦｃ断片リンカーを含む、態様８９に記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物。
態様９１．ペプチジルＦｃ断片リンカーが、２～２００個のアミノ酸を含む、態様８９に記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物。
態様９２．ペプチジルＦｃ断片リンカーが、５Å～２００Åの長さを有する、態様８９に記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物。
態様９３．ペプチジルＦｃ断片リンカーが、（Ｇ）ｎ（配列番号９３８０）、（ＧＳ）ｎ（配列番号９３８１）、（ＧＧＳ）ｎ（配列番号９３８２）、（ＧＧＧＳ）ｎ（配列番号９３８３）、（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号９３８４）、または（ＰＡ）ｎ（配列番号９４２１）を含み、ｎが、１～２０の整数である、態様８９に記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物。
態様９４．構築パートナーが、免疫グロブリン断片である、態様６４～８４のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物。
態様９５．免疫グロブリン断片が、ＩｇＧ１断片、ＩｇＧ２断片、およびＩｇＧ４断片から選択される、態様９４に記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物。
態様９６．ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドが、免疫グロブリン断片のＣ末端に結合する、態様９４に記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物。
態様９７．ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドが、免疫グロブリン断片のＮ末端に結合する、態様９４に記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物。
態様９８．ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドが、免疫グロブリンリンカーを介して免疫グロブリン断片に結合する、態様９４に記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物。
態様９９．免疫グロブリンリンカーが、ペプチジル免疫グロブリンリンカーを含む、態様９８に記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物。
態様１００．ペプチジル免疫グロブリンリンカーが、２～２００個のアミノ酸を含む、態様９９に記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物。
態様１０１．ペプチジル免疫グロブリンリンカーが、５Å～２００Åの長さを有する、態様９９に記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物。
態様１０２．ペプチジル免疫グロブリンリンカーが、（（Ｇ）ｎ（配列番号９３８０）、（ＧＳ）ｎ（配列番号９３８１）、（ＧＧＳ）ｎ（配列番号９３８２）、（ＧＧＧＳ）ｎ（配列番号９３８３）、（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号９３８４）、または（ＰＡ）ｎ（配列番号９４２１）を含み、ｎが、１～２０の整数である、態様９９に記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物。
態様１０３．少なくとも１つのＩＬ－２Ｒβγｃリガンドが、免疫グロブリン重鎖に結合する、態様８９に記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物。
態様１０４．少なくとも１つのＩＬ－２Ｒβγｃリガンドが、免疫グロブリン軽鎖に結合する、態様８９に記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物。
態様１０５．構築パートナーが、抗体を含む、態様６４～８４のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物。
態様１０６．抗体が、腫瘍抗原を対象とする、態様９９に記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物。
態様１０７．腫瘍抗原が、ＣＥＡおよびＦＡＰから選択される、態様１０６に記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物。
態様１０８．抗体が、チェックポイント阻害剤を対象とする、態様１０５に記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物。
態様１０９．チェックポイント阻害剤が、ＰＤ－１である、態様１０８に記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物。
態様１１０．ＰＤ－１抗体が、セミプリマブおよびペムブロリズマブから選択される、態様１０９に記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物。
態様１１１．抗体が、細胞特異的抗原を対象とする、態様１０５に記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物。
態様１１２．細胞特異的抗原が、ＣＤ２５、ＮＫ６２Ｄ、およびＣＤ８から選択される、態様１１１に記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物。
態様１１３．抗体が、サイトカインをさらに含む、態様１０５に記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物。
態様１１４．サイトカインが、インターロイキンを含む、態様１１３に記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物。
態様１１５．ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物が、細胞標的化部分を含む、態様６４～８４のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物。
態様１１６．細胞標的化部分が、腫瘍標的化部分を含む、態様１１５に記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物。
態様１１７．細胞標的化部分が、免疫細胞標的化部分を含む、態様１１５に記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物。
態様１１８．ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物が、ユビキチン様修飾因子をさらに含む、態様６４～８４のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物。
態様１１９．ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物が、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドに加えて、治療的に有効な部分をさらに含む、態様６４～１１８のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物。
態様１２０．ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物が、完全ＩＬ－２Ｒアゴニストである、態様６４～１１９のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物。
態様１２１．ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物が、部分的ＩＬ－２Ｒアゴニストである、態様６４～１１９のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物。
態様１２２．ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物が、ｐＨバイアスＩＬ－２Ｒアゴニストである、態様６４～１２１のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物。
態様１２３．ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物であって、構築パートナー、構築パートナーに結合した少なくとも１つのＩＬ－２Ｒβリガンド、および構築パートナーに結合した少なくとも１つのＩＬ－２Ｒγｃリガンドを含み、
（ａ）ＩＬ－２Ｒβリガンドが、式（１１）（配列番号８０５）、式（１１ａ）（配列番号８０６）、式（１１ｂ）（配列番号８０７）、式（１１ｃ）（配列番号８０８）、もしくは式（１１ｄ）（配列番号８０９）のアミノ酸配列、または式（１１）（配列番号８０５）、式（１１ａ）（配列番号８０６）、式（１１ｂ）（配列番号８０７）、式（１１ｃ）（配列番号８０８）、もしくは式（１１ｄ）（配列番号８０９）のアミノ酸配列と６０％超の配列類似性を有するアミノ酸配列を含み、

式中、
Ｘ２１１は、アミノ酸から選択され、
Ｘ２１２は、Ｆ、Ｈ、Ｗ、およびＹから選択され、
Ｘ２１３は、Ｆ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｖ、Ｗ、およびＹから選択され、
Ｘ２１４は、Ｐであり、
Ｘ２１５は、Ｆ、Ｈ、Ｗ、およびＹから選択され、
Ｘ２１６は、Ｆ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｖ、Ｗ、およびＹから選択され、
Ｘ２１７は、Ａであり、
Ｘ２１８は、Ｋ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、およびＹから選択され、
Ｘ２１９は、Ｆ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｖ、Ｗ、およびＹから選択され、
Ｘ２２０は、Ｇであり、
Ｘ２２１は、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、およびＹから選択され、
Ｘ２２２は、Ｌであり、
Ｘ２２３は、Ｄであり、
Ｘ２２４は、Ｆ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｖ、Ｗ、およびＹから選択され、
Ｘ２２５は、ＤおよびＥから選択され、
（ｂ）ＩＬ－２Ｒγｃリガンドが、式（５）（配列番号９４４）、式（５ａ）（配列番号９４５）、式（５ｂ）（配列番号９４６）、式（５ｃ）（配列番号９４７）、式（５ｄ）（配列番号９４８）、もしくは式（５ｅ）（配列番号１９４９）のアミノ酸配列、または式（５）（配列番号９４４）、式（５ａ）（配列番号９４５）、式（５ｂ）（配列番号９４６）、式（５ｃ）（配列番号９４７）、式（５ｄ）（配列番号９４８）、もしくは式（５ｅ）（配列番号９４９）のアミノ酸配列と６０％超の配列類似性を有するアミノ酸配列を含み、

式中、
Ｘ１７１は、Ｈ、Ｋ、およびＲから選択され、
Ｘ１７２は、Ｓ、Ｔ、およびＹから選択され、
Ｘ１７３は、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｖ、Ｗ、およびＹから選択され、
Ｘ１７４は、Ｆ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｖ、Ｗ、およびＹから選択され、
Ｘ１７５は、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｖ、Ｗ、およびＹから選択され、
Ｘ１７６は、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、およびＹから選択され、
Ｘ１７７は、ＤおよびＥから選択され、
Ｘ１７８は、Ｆ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｖ、Ｗ、およびＹから選択され、
Ｘ１７９は、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、およびＹ；から選択され、
Ｘ１８０は、Ｇであり、
Ｘ１８１は、Ｖであり、
Ｘ１８２は、Ｅであり、
Ｘ１８３は、Ｌであり、
Ｘ１８４は、Ｗから選択され、
Ｘ１８５は、Ｆ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｖ、Ｗ、Ｙ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、およびＴから選択され、
Ｘ１８６は、Ｅであり、
Ｘ１８７は、アミノ酸から選択され、
Ｘ１８８は、ＤおよびＥから選択される、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物。
態様１２４．ＩＬ－２Ｒβリガンドが、配列番号８６５のアミノ酸配列、または配列番号８６５と６０％超の配列類似性を有するアミノ酸配列を含み、ＩＬ－２Ｒγｃリガンドが、配列番号９６５のアミノ酸配列、または配列番号９６５と６０％超の配列類似性を有するアミノ酸配列を含む、態様１２３に記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド。
態様１２５．ＩＬ－２Ｒβリガンドのシステインが、ジスルフィド結合によって互いに結合し、ＩＬ－２Ｒγｃリガンドのシステインが、ジスルフィド結合によって互いに結合する、態様１２３または１２４に記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド。
態様１２６．少なくとも１つのＩＬ－２Ｒβリガンドのそれぞれおよび少なくとも１つのＩＬ－２Ｒγｃリガンドのそれぞれが、構築リンカーを介して構築パートナーに結合する、態様１２３～１２５のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物。
態様１２７．少なくとも１つのＩＬ－２Ｒβリガンドのそれぞれが同一であり、少なくとも１つのＩＬ－２Ｒγｃリガンドのそれぞれが同一である、態様１２３～１２６のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物。
態様１２８．ＩＬ－２Ｒβリガンドのうちの少なくとも１つが、他のＩＬ－２Ｒβリガンドのうちの少なくとも１つとは異なり、かつ／またはＩＬ－２Ｒγｃリガンドのうちの少なくとも１つが、他のＩＬ－２Ｒγｃリガンドのうちの少なくとも１つとは異なる、態様１２３～１２７のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物。
態様１２９．構築パートナーが、Ｆｃ断片、免疫グロブリン断片、または免疫グロブリンを含む、態様１２３～１２８のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物。
態様１３０．構築パートナーが、ポリペプチドまたはポリマーを含む、態様１２３～１２８のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物。
態様１３１．少なくとも１つのＩＬ－２Ｒβγｃリガンドをさらに含む、態様１２３～１３０のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物。
態様１３２．患者においてがんを治療する方法であって、治療有効量の、態様１～１５５のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド、態様５６～６３のいずれか１つに記載のタンデムＩＬ－２Ｒβγｃリガンド、態様６４～１２２のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物、態様１２３～１３１のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物、または前述のうちのいずれかの組み合わせを、そのような治療を必要とする患者に投与することを含む、方法。
態様１３３．患者において自己免疫疾患を治療する方法であって、治療有効量の、態様１～１５５のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド、態様５６～６３のいずれか１つに記載のタンデムＩＬ－２Ｒβγｃリガンド、態様６４～１２２のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物、態様１２３～１３１のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物、または前述のうちのいずれかの組み合わせを、そのような治療を必要とする患者に投与することを含む、方法。
態様１３４．患者において炎症性疾患を治療する方法であって、治療有効量の、態様１～１５５のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド、態様５６～６３のいずれか１つに記載のタンデムＩＬ－２Ｒβγｃリガンド、態様６４～１２２のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物、態様１２３～１３１のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物、または前述のうちのいずれかの組み合わせを、そのような治療を必要とする患者に、投与することを含む、方法。
態様１３５．免疫細胞を増殖させる方法であって、エクスビボまたはインビボで免疫細胞の集団を、有効量の、態様１～１５５のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド、態様５６～６３のいずれか１つに記載のタンデムＩＬ－２Ｒβγｃリガンド、態様６４～１２２のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物、態様１２３～１３１のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物、または前述のうちのいずれかの組み合わせと接触させることを含む、方法。
態様１３６．細胞療法の方法であって、細胞を操作して、態様１～１５５のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドまたは態様５６～６３のいずれか１つに記載のタンデムＩＬ－２Ｒβγｃリガンドを発現させることを含み、その結果、ＩＬ－２ＲβγｃリガンドまたはタンデムＩＬ－２Ｒβγｃリガンドが、細胞表面上に発現され、かつ／または細胞によって分泌される、方法。
態様１３７．ワクチンを増強する方法であって、ワクチンおよび治療有効量の、態様１～１５５のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド、態様５６～６３のいずれか１つに記載のタンデムＩＬ－２Ｒβγｃリガンド、態様６４～１２２のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物、態様１２３～１３１のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物、または前述のうちのいずれかの組み合わせを患者に投与することを含む、方法。
態様１３８．免疫応答を修正する方法であって、有効量の、態様１～１５５のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド、態様５６～６３のいずれか１つに記載のタンデムＩＬ－２Ｒβγｃリガンド、態様６４～１２２のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物、態様１２３～１３１のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物、または前述のうちのいずれかの組み合わせを患者に投与することを含む、方法。
態様１３９．態様１～１５５のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド、態様５６～６３のいずれか１つに記載のタンデムＩＬ－２Ｒβγｃリガンド、態様６４～１２２のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物、態様１２３～１３１のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物、または前述のうちのいずれかの組み合わせを含む、医薬組成物。
態様１４０．化学療法剤、免疫調節剤、チェックポイント阻害剤、ワクチン、または前述のうちのいずれかの組み合わせをさらに含む、態様１３９に記載の医薬組成物。
態様１４１．態様１～１５５のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド、態様５６～６３のいずれか１つに記載のタンデムＩＬ－２Ｒβγｃリガンド、態様６４～１２２のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物、および／または態様１２３～１３１のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物をコードする、核酸。
態様１４２．ＩＬ－２Ｒβリガンドをコードする核酸であって、ＩＬ－２Ｒβリガンドが、配列番号８０５～９０３のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列、または配列番号８０５～９０３のうちのいずれか１つと６０％超のアミノ酸配列類似性を有するアミノ酸配列を含む、核酸。
態様１４３．ＩＬ－２Ｒβリガンドをコードする核酸であって、ＩＬ－２Ｒβリガンドが、配列番号６１２、６６４、８６５、８５６、８５８、８６４、８６９、８７０、８７４、８７５、および９０１のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列、または配列番号６１２、６６４、８６５、８５６、８５８、８６４、８６９、８７０、８７４、８７５、および９０１のうちのいずれか１つと６０％超のアミノ酸配列類似性を有するアミノ酸配列を含む、核酸。
態様１４４．ＩＬ－２Ｒγｃリガンドをコードする核酸であって、ＩＬ－２Ｒγｃリガンドが、配列番号９４４～１０２８のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列、または配列番号９４４～１０２８のうちのいずれか１つと６０％超のアミノ酸配列類似性を有するアミノ酸配列を含む、核酸。
態様１４５．ＩＬ－２Ｒγｃリガンドをコードする核酸であって、ＩＬ－２Ｒγｃリガンドが、配列番号９６５、９８０、９８１、９８５、１０２４、および１０２６のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列、または配列番号９６５、９８０、９８１、９８５、１０２４、１０２６、および１０２８のうちのいずれか１つと６０％超のアミノ酸配列類似性を有するアミノ酸配列を含む、核酸。
態様１４６．態様１～１５５のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドをコードする核酸。
態様１４７．ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドが、配列番号８６５のアミノ酸配列、または配列番号８６５と６０％超のアミノ酸配列類似性を有するアミノ酸配列を含むＩＬ－２Ｒβリガンドと、配列番号９６５のアミノ酸配列、または配列番号８６５と６０％超のアミノ酸配列類似性を有するアミノ酸配列を含むＩＬ－２Ｒγｃリガンドと、を含む、態様１４６に記載の核酸。
態様１４８．ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドが、配列番号１２０５を含むアミノ酸配列、または配列番号１２０５と６０％超のアミノ酸配列類似性を有するアミノ酸配列を含む、態様１４６に記載の核酸。
態様１４９．ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドリンカーのそれぞれが、独立して、ペプチジルＩＬ－２Ｒβγｃリガンドリンカーを含み、タンデムリンカーのそれぞれが、独立して、ペプチジルタンデムリンカーを含む、態様５６～６３のいずれか１つに記載のタンデムＩＬ－２Ｒβγｃリガンドをコードする核酸。
態様１５０．構築リンカーが、ペプチジル構築リンカーを含む、態様６４～１２２のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物をコードする核酸。
態様１５１．ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物が、配列番号１２０２～１２５２のうちのいずれか１つと６０％超のアミノ酸配列類似性を有するアミノ酸配列を含む、態様１５０に記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物をコードする核酸。
態様１５２．ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物が、配列番号１２０２～１２５２のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物をコードする核酸。
態様１５３．態様１２３～１３１のいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物をコードする核酸。
態様１Ａ．ＩＬ－２Ｒβリガンドであって、式（１）～（１ｄ）、式（２）～（２ｄ）、式（３）～（３ｅ）、および式（４）～（４ｆ）のうちのいずれか１つのアミノ酸配列、前述のうちのいずれかの切断アミノ酸配列、前述のうちのいずれかの置換アミノ酸配列、隣接アミノ酸を有する前述のアミノ酸配列のうちのいずれか、および前述のうちのいずれかと６０％超の配列類似性を有するアミノ酸配列を含む、ＩＬ－２Ｒβリガンド。
態様２Ａ．ＩＬ－２Ｒβリガンドであって、配列番号８０５～９０３、９１１～９３０、２５７５～２６５５、２６６１～２８９１、２９００～２９２６、および２９２９～２９３９のうちのいずれか１つのアミノ酸配列、前述のうちのいずれかの切断アミノ酸配列、前述のうちのいずれかの置換アミノ酸配列、隣接アミノ酸を有する前述のアミノ酸配列のうちのいずれか、および前述のうちのいずれかと６０％超の配列類似性を有するアミノ酸配列を含む、ＩＬ－２Ｒβリガンド。
態様３Ａ．ＩＬ－２Ｒβリガンドであって、式（１）～（１ｄ）、式（２）～（２ｄ）、式（３）～（３ｅ）、または式（４）～（４ｆ）のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む、ＩＬ－２Ｒβリガンド。
態様４Ａ．ＩＬ－２Ｒβリガンドであって、配列番号８０５～９０３、９１１～９３０、２５７５～２６５５、２６６１～２８９１、２９００～２９２６、および２９２９～２９３９のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む、ＩＬ－２Ｒβリガンド。
態様５Ａ．ＩＬ－２Ｒβリガンドであって、配列番号８６５のアミノ酸配列、その切断アミノ酸配列、前述のうちのいずれかの置換アミノ酸配列、隣接アミノ酸を有する前述のアミノ酸配列のうちのいずれか、および前述のうちのいずれかと６０％超の配列類似性を有するアミノ酸配列を含む、ＩＬ－２Ｒβリガンド。
態様６Ａ．ＩＬ－２Ｒβリガンドが、ＩＬ－２Ｒβリガンドの２つのシステイン間のジスルフィド結合を含む、態様１Ａ～５Ａのいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβリガンド。
態様７Ａ．ＩＬ－２Ｒβリガンドが、ファージＥＬＩＳＡ競合アッセイを使用して決定して、１００μＭ未満のＩＣ５０でＩＬ－２Ｒβサブユニットの特異的結合部位に結合する、態様１Ａ～６Ａのいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβリガンド。
態様８Ａ．ＩＬ－２Ｒβリガンドが、ＴＦ－１β細胞および／またはＮＫ－９２細胞におけるＳＴＡＴ５リン酸化について、１００μＭ未満のＥＣ５０を示す、態様１Ａ～７Ａのいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβリガンド。
態様９Ａ．ＩＬ－２Ｒβリガンドが、ファージＥＬＩＳＡ競合アッセイを使用して決定して、１００μＭ未満のＩＣ５０でｈＩＬ－２Ｒβサブユニットに結合する、態様１Ａ～８Ａのいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβリガンド。
態様１０Ａ．ＩＬ－２Ｒβリガンドが、ファージＥＬＩＳＡ競合アッセイを使用して決定して、１００μＭ未満のＩＣ５０でｃｙｎｏ－ＩＬ－２Ｒβサブユニットに結合する、態様１Ａ～９Ａのいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβリガンド。
態様１１Ａ．ＩＬ－２Ｒγｃリガンドであって、式（５）～（５ｅ）のうちのいずれか１つのアミノ酸配列、前述のうちのいずれかの切断アミノ酸配列、前述のうちのいずれかの置換アミノ酸配列、隣接アミノ酸を有する前述のアミノ酸配列のうちのいずれか、および前述のうちのいずれかと６０％超の配列類似性を有するアミノ酸配列を含む、ＩＬ－２Ｒγｃリガンド。
態様１２Ａ．ＩＬ－２Ｒγｃリガンドであって、配列番号９４４～１０２８、１０３２～１０６０、および１６０１～１６１３のうちのいずれか１つのアミノ酸配列、前述のうちのいずれかの切断アミノ酸配列、前述のうちのいずれかの置換アミノ酸配列、隣接アミノ酸を有する前述のアミノ酸配列のうちのいずれか、および前述のうちのいずれかと６０％超の配列類似性を有するアミノ酸配列を含む、ＩＬ－２Ｒγｃリガンド。
態様１３Ａ ＩＬ－２Ｒγｃリガンドであって、式（５）～（５ｅ）のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む、ＩＬ－２Ｒγｃリガンド。
態様１４Ａ．ＩＬ－２Ｒγｃリガンドであって、配列番号９４４～１０２８、１０３２～１０６０、および１６０１～１６１３のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む、ＩＬ－２Ｒγｃリガンド。
態様１５Ａ．ＩＬ－２Ｒγｃリガンドであって、配列番号９６５のアミノ酸配列、その切断アミノ酸配列、前述のうちのいずれかの置換アミノ酸配列、隣接アミノ酸を有する前述のアミノ酸配列のうちのいずれか、および前述のうちのいずれかと６０％超の配列類似性を有するアミノ酸配列を含む、ＩＬ－２Ｒγｃリガンド。
態様１６Ａ．ＩＬ－２Ｒγｃリガンドが、ＩＬ－２Ｒγｃリガンドの２つのシステイン間のジスルフィド結合を含む、態様１１Ａ～１５Ａのいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒγｃリガンド。
態様１７Ａ．ＩＬ－２Ｒγｃリガンドが、ファージＥＬＩＳＡ競合アッセイを使用して決定して、１００μＭ未満のＩＣ５０でＩＬ－２Ｒγｃサブユニットの特異的結合部位に結合する、態様１１Ａ～１６Ａのいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒγｃリガンド。
態様１８Ａ．ＩＬ－２Ｒγｃリガンドが、ＴＦ－１β細胞および／またはＮＫ－９２細胞におけるＳＴＡＴ５リン酸化について、１００μＭ未満のＥＣ５０を示す、態様１１Ａ～１７Ａのいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒγｃリガンド。
態様１９Ａ．ＩＬ－２Ｒγｃリガンドが、ファージＥＬＩＳＡ競合アッセイを使用して決定して、１００μＭ未満のＩＣ５０でｈＩＬ－２Ｒγｃサブユニットに結合する、態様１１Ａ～１８Ａのいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒγｃリガンド。
態様２０Ａ．ＩＬ－２Ｒγｃリガンドが、ファージＥＬＩＳＡ競合アッセイを使用して決定して、１００μＭ未満のＩＣ５０でｃｙｎｏ－ＩＬ－２Ｒγｃサブユニットに結合する、態様１１Ａ～１９Ａのいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒγｃリガンド。
態様２１Ａ．ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物であって、態様１Ａ～１０Ａのいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβリガンド、および態様１１Ａ～２０Ａのいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒγｃリガンドを含む、ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物。
態様２２Ａ．ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物が、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドを含み、２Ｒβγｃリガンドが、リガンドリンカーと、リガンドリンカーに結合したＩＬ－２Ｒβリガンドと、リガンドリンカーに結合したＩＬ－２Ｒγｃリガンドと、を含む、態様２１Ａに記載のＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物。
態様２３Ａ．ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドが、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドの２つのシステイン間のジスルフィド結合を含む、態様２２Ａに記載のＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物。
態様２４Ａ．ＩＬ－２ＲβリガンドおよびＩＬ－２Ｒγｃリガンドが、Ｃ／Ｃ配向、Ｃ／Ｎ配向、Ｎ／Ｃ配向、またはＮ／Ｎ配向でリガンドリンカーに結合する、態様２１Ａまたは２２Ａに記載のＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物。
態様２５Ａ．リガンドリンカーが、ペプチジルリガンドリンカーを含む、態様２１Ａ～２４Ａのいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物。
態様２６Ａ．リガンドリンカーが、化学リガンドリンカーを含む、態様２１Ａ～２４Ａのいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物。
態様２７Ａ．リガンドリンカーが、（Ｇ）ｎ（配列番号９３８０）、（ＧＳ）ｎ（配列番号９３８１）、（ＧＧＳ）ｎ（配列番号９３８２）．（ＧＧＧＳ）ｎ（配列番号９３８３）、または（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号９３８４）を含み、ｎが、１～２０の整数である、態様２１Ａ～２４Ａのいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物。
態様２８．Ａ ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドが、配列番号１２６３～１２７０、４０７０～４０８５、および４０９０～４０９９のうちのいずれか１つのアミノ酸配列、前述のうちのいずれかの切断アミノ酸配列、前述のうちのいずれかの置換アミノ酸配列、隣接アミノ酸を有する前述のアミノ酸配列のうちのいずれか、および前述のうちのいずれかと６０％超の配列類似性を有するアミノ酸配列を含む、態様２１Ａ～２４Ａのいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物。
態様２９Ａ．ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドが、配列番号１２６３～１２７０、４０７０～４０８５、および４０９０～４０９９のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む、態様２１Ａ～２４Ａのいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物。
態様３０Ａ．ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドが、完全ＩＬ－２Ｒアゴニストまたは部分的ＩＬ－２Ｒアゴニストである、態様２１Ａ～２９Ａのいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物。
態様３１Ａ．ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドが、ＴＦ－１β細胞および／またはＮＫ－９２細胞におけるＳＴＡＴ５リン酸化について、１００μＭ未満のＥＣ５０を示す、態様２１Ａ～３０Ａのいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物。
態様３２Ａ．ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドが、ファージＥＬＩＳＡ競合アッセイを使用して決定して、１００μＭ未満のＩＣ５０でｈＩＬ－２Ｒに結合する、態様２１Ａ～３１Ａのいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物。
態様３３Ａ．ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドが、ファージＥＬＩＳＡ競合アッセイを使用して決定して、１００μＭ未満のＩＣ５０でｃｙｎｏ－ＩＬ－２Ｒに結合する、態様２１Ａ～３２Ａのいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物。
態様３４Ａ．ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物が、構築パートナーを含み、ＩＬ－２ＲβリガンドおよびＩＬ－２Ｒγｃリガンドが、構築パートナーに結合する、態様２１Ａに記載のＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物。
態様３５Ａ．ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物が、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドを含み、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドが、構築パートナーに結合する、態様２２Ａ～３３Ａのいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物。
態様３６Ａ．ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドが、ＩＬ－２ＲβγｃリガンドのＣ末端を介して、またはＮ末端を介して、構築パートナーに結合する、態様３５Ａに記載のＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物。
態様３７Ａ．ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドが、構築リンカーを介して構築パートナーに結合する、態様３５Ａまたは３６Ａに記載のＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物。
態様３８Ａ．構築リンカーが、ペプチジルリガンドリンカーを含む、態様３７Ａに記載のＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物。
態様３９Ａ．構築リンカーが、化学リガンドリンカーを含む、態様３７Ａに記載のＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物。
態様４０Ａ．構築リンカーが、（Ｇ）ｎ（配列番号９３８０）、（ＧＳ）ｎ（配列番号９３８１）、（ＧＧＳ）ｎ（配列番号９３８２）．（ＧＧＧＳ）ｎ（配列番号９３８３）、または（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号９３８４）を含み、ｎが、１～２０の整数である、態様３７Ａに記載のＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物。
態様４１Ａ．構築パートナーが、ポリマー、ポリペプチド、Ｆｃ断片、免疫グロブリン断片、および抗体から選択される、態様３４Ａ～４０Ａのいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物。
態様４２Ａ．構築パートナーが、ヒト血清アルブミン、ポリペプチド、およびポリエチレングリコールから選択される、態様３４Ａ～４０Ａのいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物。
態様４３Ａ．構築パートナーが、ウイルス表面抗原またはウイルス様粒子を含む、態様３４Ａ～４０Ａのいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物。
態様４４Ａ．構築パートナーが、サイトカインを含む、態様３４Ａ～４０Ａのいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物。
態様４５Ａ．化合物が、組換え融合タンパク質を含む、態様３４Ａ～４０Ａのいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物。
態様４６Ａ．組換え融合タンパク質が、ｈＩｇＧ－Ｆｃ組換え融合タンパク質およびｈＩｇＧ１－Ｆｃ組換え融合タンパク質から選択される、態様４５Ａに記載のＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物。
態様４７Ａ．構築パートナーが、抗体を含み、抗体が、腫瘍抗原を対象とする、態様３４Ａ～４０Ａのいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物。
態様４８Ａ．構築パートナーが、細胞標的化部分を含む、態様３４Ａ～４０Ａのいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物。
態様４９Ａ．細胞標的化部分が、腫瘍標的化部分、免疫細胞標的化部分、またはそれらの組み合わせを含む、態様４８Ａに記載のＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物。
態様５０Ａ．ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物が、配列番号１２１２～１２５２および８０６１～８０８２のうちのいずれか１つのアミノ酸配列、前述のうちのいずれかの切断アミノ酸配列、前述のうちのいずれかの置換アミノ酸配列、隣接アミノ酸を有する前述のアミノ酸配列のうちのいずれか、および前述のうちのいずれかと６０％超の配列類似性を有するアミノ酸配列を含む、態様３５Ａに記載のＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物。
態様５１Ａ．ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物が、完全ＩＬ－２Ｒアゴニストまたは部分的ＩＬ－２Ｒアゴニストである、態様３４Ａ～５０Ａのいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物。
態様５２Ａ．ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物が、ＴＦ－１β細胞および／またはＮＫ－９２細胞におけるＳＴＡＴ５リン酸化について、１００μＭ未満のＥＣ５０を示す、態様３４Ａ～５１Ａのいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物。
態様５３Ａ．ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物が、ファージＥＬＩＳＡ競合アッセイを使用して決定して、１００μＭ未満のＩＣ５０でｈＩＬ－２Ｒに結合する、態様３４Ａ～５２Ａのいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物。
態様５４Ａ．ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物が、ファージＥＬＩＳＡ競合アッセイを使用して決定して、１００μＭ未満のＩＣ５０でｃｙｎｏ－ＩＬ－２Ｒに結合する、態様３４Ａ～５３Ａのいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物。
態様５５Ａ．態様２１Ａ～５４Ａのいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物を含む、医薬組成物。
態様５６Ａ．化学療法剤、免疫調節剤、チェックポイント阻害剤、ワクチン、または前述のうちのいずれかの組み合わせをさらに含む、態様５５Ａに記載の医薬組成物。
態様５７Ａ．患者における疾患を治療する方法であって、治療有効量の、態様２１Ａ～５４Ａのいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物、または態様５５Ａもしくは５６Ａに記載の医薬組成物を、そのような治療を必要とする患者に投与することを含む、方法。
態様５８Ａ．疾患が、がん、自己免疫疾患、炎症性疾患、感染性疾患、およびウイルス性疾患から選択される、態様５７Ａに記載の方法。
態様５９Ａ．免疫細胞を増殖させる方法であって、エクスビボまたはインビボで免疫細胞の集団を、有効量の、態様１Ａ～１０Ａのいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβリガンド、態様１１Ａ～２０Ａのいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒγｃリガンド、または態様２１Ａ～５４Ａのいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物と接触させることを含む、方法。
態様６０Ａ．細胞療法の方法であって、細胞を操作して、態様２１Ａ～５４Ａのいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物を発現させることを含む、方法。
態様６１Ａ．ワクチンを増強する方法であって、ワクチンおよび治療有効量の、態様２１Ａ～５４Ａのいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物、または態様５５Ａもしくは５６Ａに記載の医薬組成物を患者に投与することを含む、方法。
態様６２Ａ．免疫応答を修正する方法であって、有効量の、態様２１Ａ～５４Ａのいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物、または態様５５Ａもしくは５６Ａに記載の医薬組成物を患者に投与することを含む、方法。
態様６３Ａ．態様１Ａ～１０Ａのいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβリガンド、態様１１Ａ～２１Ａのいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒγｃリガンド、または態様２２Ａ～５４Ａのいずれか１つに記載のＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物をコードする、核酸。
以下の実施例は、本開示によって提供される、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドを合成する方法、ＩＬ－２Ｒβγｃ構築物を合成する方法、ならびにＩＬ－２ＲβγｃリガンドおよびＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物の活性を決定する方法を詳細に記載する。以下の実施例はまた、本開示によって提供される、ＩＬ－２ＲβγｃリガンドおよびＩＬ－２Ｒβγｃ構築物の特性を決定するための方法を詳細に記載する。材料および方法の両方に対する多くの修正が、本発明の範囲から逸脱することなく実施され得ることは、当業者には明白であろう。
実施例では、ＩＬ－２Ｒβサブユニットは、ヒトＩＬ－２Ｒβ（ＣＤ１２２タンパク質、Ｆｃタグ）（２７－２３９）、アクセッション番号ＮＰ＿０００８６９．１を指し、ＡＣＲＯｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．から製品番号ＩＬＢ－Ｈ５２５３で入手した。
ＩＬ－２Ｒγｃサブユニットは、ヒトＩＬ－２Ｒγｃ（ＣＤ１３２タンパク質、Ｆｃタグ）（２３～２５４）、アクセッション番号ＡＡＨ１４９７２を指し、ＡＣＲＯｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．から、製品番号ＩＬＧ－Ｈ５２５６で入手した。
ｃｙａｎｏ－ＩＬ－２Ｒβサブユニットは、カニクイザルＩＬ－２Ｒβサブユニット、アクセッション番号ＮＰ＿０００８６９．１を指し、Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｃ．から、製品番号９０３２８－Ｃ０２Ｈから入手した。
実施例において、ＩＬ－２Ｒγｃサブユニットは、カニクイザルＲγｃサブユニット、アクセッション番号ＸＰ＿００５５０３９４９．１を指す。
実施例１
ＩＬ－２Ｒβリガンド、ＩＬ－２Ｒγｃリガンド、およびペプチジルＩＬ－２Ｒβγｃリガンドの合成
ＩＬ－２Ｒβリガンド、ＩＬ－２Ｒγｃリガンド、およびペプチジルＩＬ－２Ｒβγｃリガンドを、一本鎖固相合成によって合成した。
２－クロロトリチル樹脂（１ｇ、１．５モル／ｇ、Ａｎａｓｐｅｃ製）をＤＭＦ（２×）で洗浄し、次いで、５０ｍＬのＤＭＦ中で１０分間静置させた。腫脹した樹脂を、０．５ＭでＤＭＦ中に溶解した５当量のアミノ酸および５当量のＨＡＴＵから調製したＦｍｏｃ－グリシンの活性化溶液で処理した後、１０当量のＤＩＥＡを添加し、混合物を２５℃で３０分間穏やかに撹拌した。樹脂を洗浄し（ＤＭＦ、ＴＨＦ、ＤＣＭ、およびＭｅＯＨ）、乾燥させて、Ｆｍｏｃ保護樹脂を得た。次いで、Ｆｍｏｃ基を、ＤＭＦ中の３０％ピペリジンで２０分間樹脂を穏やかに振とうし、続いて洗浄（ＤＭＦ、ＴＨＦ、ＤＣＭ、およびＭｅＯＨ）し、乾燥させることによって除去した。次いで、樹脂を、ＨＡＴＵ活性化によるＦｍｏｃ－アミノ酸カップリング、およびピペリジンによるＦｍｏｃ除去の反復サイクルに供し、所望のアミノ酸配列を構築した。配列の４つのシステイン残基を除いて、標準的な９５％ＴＦＡ不安定アミノ酸側鎖保護基を使用した。樹脂の近位にある２つのシステイン残基については、Ｔｒｔ保護を使用し、樹脂の遠位にある２つのシステイン残基については、Ａｃｍ保護を使用した。二量体配列の最終アミノ酸からＦｍｏｃを除去した後、末端アミン基を、ＤＭＦ中の無水酢酸（１０当量）およびＤＩＥＡ（２０当量）で２０分間アシル化し、続いて上記のように洗浄した。
完成したペプチドを、ＴＦＡ（９５体積％）、水（２．５体積％）、およびトリイソプロピルシラン（２．５体積％）の溶液中の懸濁液によって、２５℃で３時間、樹脂から切断した。ＴＦＡ溶液を５℃まで冷却し、Ｅｔ２Ｏ中に注ぎ、ペプチドを沈殿させた。濾過および減圧下での乾燥により、所望のペプチドを得た。Ｃ１８カラムを用いた分取ＨＰＬＣによる精製により、還元状態の２つのＣ末端チオール基を有する純粋なペプチドを得た。このペプチドを２０％ＤＭＳＯ／水（１ｍｇ乾燥重量ペプチド／ｍＬ）中に溶解し、２５℃で３６時間静置させ、次いで、逆相ＨＰＬＣにより精製して、ジスルフィド架橋によって連結された２つのＣ末端チオールを有するペプチドを得た。次いで、２つのＮ末端Ａｃｍ保護システイン残基を、ペプチド０．１モルを５０％酢酸／Ｈ２Ｏ２５ｍＬおよび１ＭのＨＣｌ２．５ｍＬ中に溶解させ、窒素雰囲気下で撹拌しながら０．１Ｍヨウ素（氷酢酸中；５当量）５ｍＬを滴加することにより脱保護した。脱保護／酸化反応を、完全な反応を確実にするために、頻繁にモニタリング（分析ＨＰＬＣ）しながら２５℃で２時間進行させた。反応を、氷冷ジエチルエーテル（９体積当量）を添加することによって停止した。得られた溶液をドライアイス上で冷却し（３分）、エーテル溶液を慎重にデカントし、得られた淡黄色固体を分取逆相ＨＰＬＣ（９５％）によって精製して、最終的な一本鎖ペプチド二量体を得た。
実施例２
クリックケミストリーを使用したＩＬ－２Ｒβγｃリガンドの合成
ＩＬ－２ＲβリガンドおよびＩＬ－２Ｒγリガンドのペプチド配列を、実施例１に記載の標準的な固相合成条件およびＦｍｏｃ保護アミノ酸を使用して別々に合成した。
Ｒｉｎｋアミド－ＭＢＨＡ樹脂（１ｇ、１．５ミリモル／ｇ、Ａｎａｓｐｅｃ）をＤＭＦ（２×）で洗浄し、次いで、５０ｍＬのＤＭＦ中で１０分間静置させた。腫脹した樹脂の別々の部分を、０．５ＭでＤＭＦ中に溶解した５当量のアミノ酸および５当量のＨＡＴＵから調製したＦｍｏｃ－プロパルギルグリシン（ＩＬ－２Ｒβリガンド）または２－（Ｆｍｏｃ－ＮＨ）－５－アジド－ペンタン酸（ＩＬ－２Ｒγｃリガンド）の活性化溶液のいずれかで処理し、続いて１０当量のＤＩＥＡを添加し、混合物を２５℃で３０分間穏やかに撹拌した。樹脂を洗浄し（ＤＭＦ、ＴＨＦ、ＤＣＭ、およびＭｅＯＨ）、乾燥させて、Ｆｍｏｃ保護樹脂を得た。次いで、Ｆｍｏｃ基を、ＤＭＦ中の３０％ピペリジンで２０分間樹脂を穏やかに振とうし、続いて洗浄（ＤＭＦ、ＴＨＦ、ＤＣＭ、およびＭｅＯＨ）し、乾燥させることによって除去した。次いで、樹脂を、ＨＡＴＵ活性化によるＦｍｏｃ－アミノ酸カップリング、およびピペリジンによるＦｍｏｃ除去の反復サイクルに供して、所望のＩＬ－２Ｒβリガンドアミノ酸配列および所望のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドアミノ酸配列を得た。標準的な９５％ＴＦＡ不安定アミノ酸側鎖保護基をすべての残基に使用した。各リガンド配列の最終アミノ酸からＦｍｏｃを除去した後、末端アミン基を、ＤＭＦ中の無水酢酸（１０当量）およびＤＩＥＡ（２０当量）で２０分間アシル化した。
各完成したリガンドを、ＴＦＡ（９５％）、水（２．５％）、およびトリイソプロピルシラン（２．５％）の溶液中の懸濁液によって、２５℃で３時間、樹脂から切断した。ＴＦＡ溶液を５℃まで冷却し、Ｅｔ２Ｏ中に注ぎ、ペプチドを沈殿させた。減圧下での濾過および乾燥により、所望のリガンドを得た。Ｃ１８カラムを用いた分取ＨＰＬＣによる精製により、還元状態の２つのチオール基を有する純粋なペプチドを得た。リガンドを２０％ＤＭＳＯ／水（１ｍｇ乾燥重量ペプチド／ｍＬ）中に別々に溶解し、２５℃で３６時間静置させ、次いで、逆相ＨＰＬＣにより精製して、分子内ジスルフィド架橋を介して連結された２つのチオールを有するＩＬ－２ＲβおよびＩＬ－２Ｒγｃリガンドを得た。
精製アルキン含有ＩＬ－２Ｒβリガンドの２．０ｍＭ溶液の１０分の２（０．２）ｍＬを、リガンドを１：１のＨ２Ｏ／ｔＢｕＯＨ中に溶解することによって調製した。同様に、２．４ｍＭの精製アジド含有リガンド溶液０．２ｍＬを、同じ溶媒を使用して調製した。Ｈ２Ｏ中の１００ｍＭのＣｕＳＯ４０．１ｍＬ、３：１のＤＭＳＯ／ｔＢｕＯＨ中の、ＤＩＥＰＡ、ピリジン、またはＴＨＰＴＡ（トリス（３－ヒドロキシプロピルトリアゾリルメチル）アミン）などの２５０ｍＭのＣｕ（Ｉ）キレート剤０．１ｍＬ、Ｈ２Ｏ中の０．５Ｍアスコルビン酸０．１ｍＬ、および３：２のｔＢｕＯＨ／Ｈ２Ｏ０．３ｍＬとともに２つのリガンド溶液を合わせ、嫌気条件下４５℃で反応を進行させた。反応の進行をＬＣ／ＭＳによって頻繁にモニタリングし、さらなるアジド含有リガンドおよびＣｕＳＯ４を添加して、反応を完了させた。最大量のアルキンが消費された（約３時間）後、１：１のＨ２Ｏ／ＡＣＮ約８ｍＬの添加によって反応をクエンチし、ペプチド二量体を、分取スケールのＣ１８ＨＰＬＣカラムを使用して精製した（９５％）。
実験例で使用したＩＬ－２ＲβリガンドおよびＩＬ－２Ｒγｃリガンドの構造を、表８および９、ならびに図１９Ａ～１９Ｃに提供する。

実施例３
異なるリガンド／配向／リンカーを有するＩＬ－２ＲβγｃリガンドによるＴＦ－１β細胞におけるＳＴＡＴ５リン酸化
ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドを、ＴＦ－１β細胞におけるＳＴＡＴ５リン酸化の誘導について評価した。ＴＦ－１β細胞は、ＩＬ－２Ｒγｃを天然に発現するが、ＩＬ－２Ｒβを発現しない、成長因子依存性ヒト赤白血病細胞株ＴＦ－１（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ－２００３）に由来した。細胞を、ヒト全長ＩＬ－２Ｒβによるトランスフェクションによって、ＩＬ－２応答性であるように操作した。より高いレベルのＩＬ－２Ｒβを発現する細胞株をＩＬ－２の増殖によって選択し、ＩＬ－２ＲβおよびＩＬ－２Ｒγｃの両方のサブユニットの発現レベルをｑＰＣＲおよびＦＡＣＳ解析によって検証した。
ＳＴＡＴ５リン酸化の誘導のための化合物を試験するために、ＴＦ－１β細胞を、Ｔ７５フラスコ内の飢餓培地（ＧＭ－ＣＳＦまたはｒｈＩＬ－２補足物を含まない、ＲＰＭＩ １６４０＋２．５ｇ／Ｌのグルコース＋５％ＦＢＳ＋２ｍＭのＬ－グルタミン＋１ｍＭのＮａＰｙｒ＋１０ｍＭのＨＥＰＥＳ）中で５×１０５細胞／ｍＬにて一晩飢餓させた。翌日、細胞を、９６ウェルＶ底プレートに２×１０５細胞／ウェルでプレーティングした。飢餓培地中のＩＬ－２ＲβγｃリガンドまたはＩＬ－２の３倍連続希釈液を細胞に添加し、３７℃で３０分間インキュベートした。１０×Ｃｅｌｌ Ｌｙｓｉｓ Ｂｕｆｆｅｒ（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ＃９８０３）ならびに１×ＨＡＬＴホスファターゼおよびプロテアーゼ阻害剤カクテル（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ ＃７８４４２）の混合物をウェルに直接添加することによって、細胞抽出物を調製した。プレートを２５℃で５分間撹拌して、即時使用のための細胞抽出物を調製したか、または－８０℃で保存した。ｐＳＴＡＴ５の検出を、ＰａｔｈＳｃａｎ（登録商標）Ｐｈｏｓｐｈｏ－Ｓｔａｔ５（Ｔｙｒ６９４）Ｓａｎｄｗｉｃｈ ＥＬＩＳＡ Ｋｉｔ（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ＃７１１３）を使用して実施した。細胞抽出物を、マウス抗ホスホ－ＳＴＡＴ５抗体でプレコーティングし、４℃で一晩インキュベートしたマイクロウェルに添加した。次いで、ウェルをＰＢＳで洗浄し、結合したホスホ－ＳＴＡＴ５（Ｔｙｒ６９４）を、ウサギ抗ＳＴＡＴ５検出抗体を添加し、３７℃で１時間インキュベートすることによって検出した。ウェルをＰＢＳで洗浄し、抗ウサギＩｇＧ ＨＲＰ連結抗体を各ウェルに添加した。最終洗浄後、ＴＭＢ基質溶液を添加して、各ウェル内のＨＲＰの量を測定した。吸光度を４５０ｎｍにてマイクロプレートリーダーにおいて読み取った。生成されたシグナルは、各細胞抽出物中のリン酸化ＳＴＡＴ５の量に比例する。
結果を図２に提示する。
図２で評価したＩＬ－２Ｒβγｃリガンドの構造を、図１９Ａ～１９Ｃに提供する。
実施例４
Ｃ／Ｃ配向を有し、同じリガンドリンカーを有する異なるＩＬ－２ＲβおよびＩＬ－２Ｒγｃリガンドを有するＩＬ－２ＲβγｃリガンドによるＮＫ－９２細胞におけるＳＴＡＴ５リン酸化
ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドを、３つすべてのＩＬ－２受容体サブユニットを発現するヒト細胞株であり、ＩＬ－２Ｒβγｃ偏在バリアントおよび野生型ＩＬ－２に応答する、ＮＫ－９２細胞におけるＳＴＡＴ５リン酸化の誘導について評価した。ＳＴＡＴ５リン酸化の誘導のための化合物を試験するために、ＮＫ－９２細胞を、３７℃でＴ７５フラスコ内の飢餓培地（ｒｈＩＬ－２補足物を含まない、ＲＰＭＩ １６４０＋２０％ＦＢＳ＋２ｍＭのＬ－グルタミン＋１ｍＭのＮａＰｙｒ＋１０ｍＭのＨＥＰＥＳ＋０．１ｍＭのＢＭＥ）中で一晩飢餓させた。翌日、ＮＫ－９２細胞を、９６ウェルＶ底プレートに２×１０５細胞／ウェルでプレーティングした。飢餓培地中の試験化合物またはＩＬ－２の３倍連続希釈液を細胞に添加し、３７℃で３０分間インキュベートした。
細胞抽出物を調製し、実施例３に記載されるように、ＰａｔｈＳｃａｎ（登録商標）Ｐｈｏｓｐｈｏ－Ｓｔａｔ５（Ｔｙｒ６９４）Ｓａｎｄｗｉｃｈ ＥＬＩＳＡ Ｋｉｔを使用してリン酸化ＳＴＡＴ５の量を測定した。
結果を図３に提示する。
図３で評価したＩＬ－２Ｒβγｃリガンドの構造を、図１９Ａ～１９Ｃに提供する。
実施例５
異なる配向を有するＩＬ－２ＲβγｃリガンドによるＮＫ－９２細胞におけるＳＴＡＴ５リン酸化
異なるＮ／Ｃ配向を有するが、同じリガンドリンカーに結合した、同じＩＬ－２ＲβおよびＩＬ－２Ｒγｃリガンドを含むＩＬ－２Ｒβγｃリガンドのアゴニスト活性を、ＮＫ－９２細胞においてＳＴＡＴ５リン酸化アッセイを使用して評価した。
ＩＬ－２ＲβγｃリガンドをＮＫ－９２細胞とインキュベートし、実施例４に記載の方法を使用してＳＴＡＴ５リン酸化を濃度の関数として測定した。
結果を図４に提示する。
図４で評価したＩＬ－２Ｒβγｃリガンドの構造を、図１９Ａ～１９Ｃに提供する。
実施例６
異なるリガンドを有するＩＬ－２ＲβγｃリガンドによるＴＦ－１β細胞におけるＳＴＡＴ５リン酸化
同じ合成リガンドリンカーに結合し、同じＮ／Ｃ配向を有する、異なるＩＬ－２ＲβおよびＩＬ－２Ｒγｃリガンドを含むＩＬ－２Ｒβγｃリガンドのアゴニスト活性を、ＴＦ－１β細胞においてＳＴＡＴ５リン酸化アッセイを使用して評価した。
化合物をＴＦ－１β細胞とインキュベートし、実施例３に記載の方法を使用してＳＴＡＴ５リン酸化を濃度の関数として測定した。
結果を図５Ａおよび５Ｂに提示する。
図５Ａおよび５Ｂで評価したＩＬ－２Ｒβγｃリガンドの構造を、図１９Ａ～１９Ｃに提供する。
実施例７
異なるリンカーを有するＩＬ－２ＲβγｃリガンドによるＮＫ－９２細胞におけるＳＴＡＴ５リン酸化
合成ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドリンカー（ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド（ＢＧＬ２０））またはペプチジルＩＬ－２Ｒβγｃリガンドリンカー（ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド（ＢＧＬ２１））に結合し、同じＮ／Ｃ配向を有する、同じＩＬ－２ＲβおよびＩＬ－２Ｒγｃリガンドを含むＩＬ－２Ｒβγｃリガンドのアゴニスト活性を、ＮＫ－９２細胞においてＳＴＡＴ５リン酸化アッセイを使用して評価した。
ＩＬ－２ＲβγｃリガンドをＮＫ－９２細胞とインキュベートし、実施例４に記載の方法を使用してＳＴＡＴ５リン酸化を濃度の関数として測定した。
結果を図６に提示する。
図６で評価したＩＬ－２Ｒβγｃリガンドの構造を、図１９Ａ～１９Ｃに提供する。
実施例８
ＩＬ－２およびＩＬ－２ＲβγｃリガンドによるＮＫ－９２細胞におけるＳＴＡＴ５、ＡＫＴおよびＥＲＫ１／２リン酸化
ＮＫ－９２細胞におけるＳＴＡＴ５リン酸化、ＡＫＴリン酸化、およびＥＲＫ１／２リン酸化アッセイを使用して、ＩＬ－２およびＩＬ－２Ｒβγｃリガンド（ＢＧＬ２１）のアゴニスト活性を評価した。
化合物をＮＫ－９２細胞とインキュベートし、実施例４に記載の方法を使用してＳＴＡＴ５リン酸化を濃度の関数として測定した。ＰａｔｈＳｃａｎ（登録商標）Ｐｈｏｓｐｈｏ－ＡＫＴ（Ｔｈｒ３０８）Ｓａｎｄｗｉｃｈ ＥＬＩＳＡ Ｋｉｔ（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ＃７２５２）を使用して、リン酸化ＡＫＴの検出を実施した。リン酸化ＥＲＫ１／２の検出を、ＰａｔｈＳｃａｎ（登録商標）Ｐｈｏｓｐｈｏ－ｐ４４／４２ＭＡＰＫ（Ｔｈｒ２０２／Ｔｙｒ２０４）Ｓａｎｄｗｉｃｈ ＥＬＩＳＡ Ｋｉｔ（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ＃７１７７）を使用して実施した。
結果を、ＳＴＡＴ５リン酸化について図７Ａに提示し、ＡＫＴリン酸化について図７Ｂに提示し、ＥＲＫ１／２リン酸化について図７Ｃに提示する。
図７Ａ～７Ｃで評価したＩＬ－２Ｒβγｃリガンドの構造を、図１９Ａ～１９Ｃに提供する。
実施例９
ＩＬ－２およびＩＬ－２ＲβγｃリガンドによるＮＫ－９２の増殖
ＮＫ－９２細胞を飢餓培地（増殖因子を差し引いたもの）にプレーティングし、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド（ＢＧＬ２１）またはＩＬ－２の連続希釈液と、３７℃で４８時間インキュベートした。各ウェルに存在する生存細胞の数は、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）アッセイキット（Ｐｒｏｍｅｇａ＃Ｇ７５７１）を使用して、代謝的に活性な細胞の指標である、ＡＴＰレベルを測定することによって定量化した。等体積のＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）試薬を各ウェルに添加し、２５℃で１０分間インキュベートした。発光シグナルを、Ｗａｌｌａｃ Ｖｉｃｔｏｒ １４２０プレートリーダーを使用して測定した。値（相対光単位（ＲＬＵ））を、試験化合物の濃度の関数としてプロットした。
結果を図８Ａに提供する。
ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド（ＢＧＬ２１）またはＩＬ－２に応答するＮＫ－９２細胞増殖もまた、Ｋｉ６７染色を使用して測定した。核タンパク質Ｋｉ６７は、細胞周期のすべての活動期の間に存在するが、静止細胞には存在しない。ＮＫ－９２細胞を飢餓培地中に再懸濁し、９６ウェルプレートに２×１０５細胞／ウェルでプレーティングした。次いで、試験化合物の３倍連続希釈液を細胞に４８時間加えた。インキュベーション期間の後、細胞を、Ｌｉｖｅ／Ｄｅａｄ（登録商標）Ｆｉｘａｂｌｅ Ａｑｕａ Ｄｙｅ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ＃Ｌ３４９６６）で３０分間処理して、生存細胞を染色した。次いで、細胞をＰＢＳで洗浄し、次いで、Ｆｏｘｐ３ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ｆａｃｔｏｒ Ｆｉｘ／Ｐｅｒｍ（登録商標）緩衝液（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ＃００－５５２３）を用いて２５℃で１時間固定し、透過させた。細胞を洗浄し、次いで、抗Ｋｉ６７ＰＥ抗体で染色した。最終洗浄後、細胞を、ＬＳＲ ＩＩ機器（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）上でフローサイトメトリーによって分析した。データ解析は、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを使用して行った。Ｋｉ６７＋細胞の蛍光強度中央値を、試験化合物濃度の関数としてプロットする。
結果を図８Ｂに提供する。
ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド（ＢＧＬ２１）の構造を、図１９Ａ～１９Ｃに提供する。
実施例１０
静止ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＴｒｅｇ細胞におけるＳＴＡＴ－５リン酸化
静止ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、およびＴｒｅｇ細胞におけるＩＬ－２およびＩＬ－２Ｒβγｃリガンド（ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド（ＢＧＬ２１））のアゴニスト活性を、ＳＴＡＴ５リン酸化アッセイを使用して評価した。
ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、Ｌｙｍｐｈｏｐｒｅｐ（登録商標）（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ＃０７８１１）密度勾配遠心分離を使用してバフィーコートから単離した。回収したＰＢＭＣを、Ｔ細胞培地（血清またはＩＬ－２を含まない、ＣＴＳ ＯｐＴｍｉｚｅｒ（登録商標）培地＋２ｍＭのＬ－グルタミン＋Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ）中に、２×１０６細胞／ｍＬで再懸濁し、３７℃で３時間インキュベートした。次いで、ＰＢＭＣを、１０６細胞／ウェルで９６ウェルディープウェルプレートに添加した。ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド（ＢＧＬ２１）またはＩＬ－２の３倍連続希釈液を細胞に添加し、３７℃で３０分間インキュベートした。次いで、細胞を、Ｆｉｘ／Ｐｅｒｍ（登録商標）緩衝液（Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ｆａｃｔｏｒ Ｐｈｏｓｐｈｏ Ｂｕｆｆｅｒ Ｓｅｔ、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ ＃５６３２３９）中で、５０分間氷上で固定し、続いてＰｅｒｍ Ｂｕｆｆｅｒ ＩＩＩ中で、２０分間氷上で透過させた。細胞を、Ｐｅｒｍ／Ｗａｓｈ（登録商標）緩衝液を使用して数回洗浄した。細胞表面および細胞内染色に使用した抗体コンジュゲートを表１０に示す。
抗体混合物を細胞に加え、氷上で３０分間インキュベートし、光から保護した。細胞を、Ｐｅｒｍ／Ｗａｓｈ（登録商標）緩衝液で洗浄し、ＰＢＳ＋２％ＦＢＳ中に再懸濁した。各試験試料を、ＬＳＲ ＩＩ機器（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）上でフローサイトメトリーによって分析した。データ解析は、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを使用して行った。各血液細胞集団中のｐＳＴＡＴ５＋細胞のパーセントを、試験化合物の濃度の関数としてプロットした。
結果を図９Ａ～９Ｃに提示する。
実施例１１
ヒトＰＢＭＣ由来のＮＫ細胞における増殖
ヒトＰＢＭＣを密度勾配遠心分離（Ｌｙｍｐｈｏｐｒｅｐ（登録商標）、Ｓｔｅｍｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ＃０７８１１）によってバフィーコートから単離し、Ｔ７５フラスコ中で３×１０６細胞／ｍＬでＴ細胞培地（ＣＴＳ ＯｐＴｍｉｚｅｒ（登録商標）、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ＃Ａ１０４８５０１）中で一晩培養した。翌日、細胞を新鮮な培地中に再懸濁し、９６ウェル細胞培養プレートに５×１０５細胞／ウェルでプレーティングした。ＩＬ－２またはＩＬ－２Ｒβγｃリガンド（ＢＧＬ２１）のいずれかの３倍連続希釈液を細胞に添加し、３７℃で３日間インキュベートした。処理後、細胞を、生存性染料（Ｌｉｖｅ／Ｄｅａｄ（登録商標）Ｆｉｘａｂｌｅ Ａｑｕａ Ｃｅｌｌ Ｓｔａｉｎ Ｋｉｔ、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ ＃Ｌ３４９６５）中で３０分間３７℃でインキュベートし、その後、表面抗体染色を、次いで、ＰＢＳ＋２％ＦＢＳ中で、３０分間氷上で行った。細胞を固定し、３０分間氷上で、固定／透過性緩衝液（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ Ｆｏｘｐ３／Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ｓｔａｉｎｉｎｇ Ｂｕｆｆｅｒ Ｓｅｔ、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ＃００－５５２３－００）で透過処理した。細胞内（Ｋｉ－６７）染色を、３０分間氷上で、透過性緩衝液中で行い、処理した細胞を、ＦＡＣＳ分析の前にＰＢＳ＋２％ＦＢＳ中に再懸濁した。ＮＫ細胞を、ＣＤ３－およびＣＤ２０－（非Ｔ、非Ｂ細胞）集団由来のＣＤ５６＋および／またはＣＤ１５９ａ＋細胞として同定した。細胞表面および細胞内染色に使用した抗体コンジュゲートを表１１に示す。
結果を、図１０Ａおよび図１０Ｂに示す。
実施例１２
Ａ５４９腫瘍細胞におけるＰＤ－ＬＩの上方調節および腫瘍細胞溶解ＰＤ－Ｌ１上方調節
ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、密度勾配遠心分離によってバフィーコートから単離した。ヒト肺がんＡ５４９細胞（ＡＴＣＣ ＣＣＬ－１８５）を、６ウェルプレートに１０６細胞／ウェルで一晩播種した。翌日、新たに単離したＰＢＭＣを、最終的なエフェクター対標的比（Ｅ：Ｔ）を１０：１とするために１０７細胞／ウェルでＡ５４９細胞に添加した。ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド（ＢＧＬ２１）またはＩＬ－２の連続希釈液をウェルに添加し、細胞を３７℃で４８時間インキュベートした。次いで、ＰＢＭＣをウェルから吸引し、０．２５％（ｗ／ｖ）トリプシン－０．５３ｍＭのＥＤＴＡ溶液を使用して接着Ａ５４９細胞を収集した。細胞をＰＢＳで洗浄し、表１２に示す抗体混合物で染色して、Ａ５４９細胞上のＰＤ－Ｌ１発現レベルを定量し、ＰＢＭＣを分析から除外した。
試料を、ＬＳＲ ＩＩ機器（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）上でフローサイトメトリーによって分析した。ＰＤ－Ｌ１についての染色陽性のＡ５４９細胞のパーセントを、試験化合物の濃度の関数としてプロットした。
結果を図１１Ａに示す。
実施例１３
ＰＢＭＣ腫瘍細胞溶解
新たに単離したＰＢＭＣ（エフェクター細胞）を、Ｔ細胞培地（血清またはｈＩＬ－２を含まない、ＣＴＳ ＯｐＴｍｉｚｅｒ培地＋２ｍＭのＬ－グルタミン＋Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ）中に再懸濁し、９６ウェル細胞培養プレートに６×１０５細胞／ウェルでプレーティングした。ヒト結腸がん細胞株ＬＳ１８０（ＡＴＣＣ ＣＬ－１８７）およびＣＯＬＯ ２０５（ＡＴＣＣ ＣＣＬ－２２２）（標的細胞）を、最終Ｅ：Ｔ比を２０：１とするためにＰＢＭＣに３×１０４細胞／ウェルで添加した。次いで、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド（ＢＧＬ２１）またはＩＬ－２の希釈液をウェルに添加し、細胞を３７℃で４８時間インキュベートした。細胞上清を遠心分離により回収し、各ウェルから５０μＬを９６ウェルプレートに移した。腫瘍細胞溶解は、Ｐｒｏｍｅｇａ ＣｙｔｏＴｏｘ ９６（登録商標）Ｎｏｎ－Ｒａｄｉｏａｃｔｉｖｅ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ（＃Ｇ１７８０）でＬＤＨ放出を測定することによって定量した。等体積のＣｙｔｏＴｏｘ ９６（登録商標）試薬を各ウェルに添加し、２５℃で３０分間インキュベートした。次いで、停止溶液（５０μＬ）を各ウェルに添加して反応を終了させ、吸光度シグナルを、Ｗａｌｌａｃ Ｖｉｃｔｏｒ １４２０プレートリーダーにおいて４９０ｎｍで測定した。細胞傷害性パーセントは、各試料について得られた値を、溶解緩衝液で処理したウェルから得られた上清から得られた最大値で割ることによって算出した。
結果を、図１１Ｂおよび図１１Ｃに示す。
実施例１４
ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドを組み込んだ組換え融合タンパク質
免疫グロブリン融合体：複数の哺乳動物発現ベクターを構築して、完全長ヒトＩｇＧ、またはヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、もしくはＩｇＧ４の重鎖およびヒンジ領域のＣＨ２およびＣＨ３ドメインからなるＦｃ断片に連結したＩＬ－２Ｒβγｃリガンドを発現させた。各ベクターは、強力な構成的プロモーター（ＣＭＶまたはｈＥＦ１－ＨＴＬＶ）および融合タンパク質を培養培地中に分泌するためのＩＬ－２シグナルペプチド配列を含有した。ベクターは、ペプチドリガンドが、免疫グロブリンタンパク質のＮ末端またはＣ末端のいずれかに融合することを可能にし、ＩＬ－２ＲβγｃリガンドとＩｇＧとの間に様々な長さの構築リンカーを組み込むように設計した。
融合タンパク質を、ポリエチレンイミン試薬ＰＥＩ ＭＡＸ（Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．）を使用して細胞内にプラスミドＤＮＡをトランスフェクトすることによって、２９３ヒト胎児腎臓細胞（ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（登録商標）２９３－Ｆ）において一過性に発現させた。トランスフェクトされた細胞を、１２５ｒｐｍで回転するオービタルシェーカー上の３７℃加湿ＣＯ２インキュベーターにおけるシェーカーフラスコ内のＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（登録商標）２９３発現培地（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）中で増殖させた。培養物を、遠心分離によってトランスフェクションの９６時間後に回収し、分泌された融合タンパク質を、プロテインＡ親和性クロマトグラフィーを使用して上清から精製した。
プロテインＡアガロース樹脂を、培養上清と混合し、室温で数時間インキュベートした。次いで、樹脂をＰＢＳで３回洗浄し、結合したＩｇＧ ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド融合物を、０．１Ｍのグリシン緩衝液（ｐＨ２．８）で溶出した。溶出物を１Ｍのトリス緩衝液で中和し、ＮａｎｏＤｒｏｐ（登録商標）分光光度計を使用して２８０ｎｍでの吸光度を測定することによって定量した。タンパク質の一次配列から導出した計算された吸光係数を使用して、タンパク質濃度を決定した。バイオアッセイにおける融合タンパク質の活性を測定する前に、サイズ排除クロマトグラフィーを使用して、高分子量の不純物を除去した。
ヒト血清アルブミン融合：ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）のＣ末端に連結したＩＬ－２Ｒβγｃリガンドを発現させるように、哺乳動物発現ベクターを構築した。６×－Ｈｉｓタグを、精製目的のためにＨＳＡのＮ末端に連結した。ベクターは、強力な構成的プロモーター（ｈＥＦ１－ＨＴＬＶ）および融合タンパク質を培養培地中に分泌するためのＩＬ－２シグナルペプチド配列を含有する。
ＨＳＡ－ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド融合タンパク質を、ポリエチレンイミン試薬ＰＥＩ ＭＡＸ（Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．）を使用して細胞内に最初にプラスミドＤＮＡをトランスフェクトすることによって、２９３ヒト胎児腎臓細胞（ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（登録商標）２９３－Ｆ）において一過性に発現させた。トランスフェクトされた細胞を、１２５ｒｐｍで回転するオービタルシェーカー上の３７℃加湿ＣＯ２インキュベーターにおけるシェーカーフラスコ内のＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（登録商標）２９３発現培地（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）中で増殖させた。培養物を遠心分離によってトランスフェクションの９６時間後に回収し、分泌されたＨＳＡ－ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド融合タンパク質を、Ｎｉ－ＮＴＡ親和性クロマトグラフィーにより上清から精製した。
Ｎｉ－ＮＴＡアガロース樹脂を培養上清に加え、室温で数時間インキュベートした。次いで、樹脂をＴＢＳ洗浄緩衝液（２５ｍＭのトリスｐＨ８．０、１５０ｍＭのＮａＣｌ、２０ｍＭのイミダゾール）で３回洗浄した。結合したＨＳＡ－ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド融合タンパク質を、溶出緩衝液（２５ｍＭのトリスｐＨ８．０、１５０ｍＭのＮａＣｌ、２５０ｍＭのイミダゾール）で樹脂から溶出し、続いて緩衝液交換を行い、Ｚｅｂａ（登録商標）スピンカラム（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）を使用してイミダゾールを除去した。タンパク質を、ＮａｎｏＤｒｏｐ（登録商標）分光光度計を使用して２８０ｎｍで吸光度を測定することによって定量し、タンパク質の一次配列から導出した計算された吸光係数を使用して濃度を決定した。
実験例で使用したＩＬ－２Ｒβγｃリガンド融合タンパク質のアミノ酸配列を、図２０Ａ～２０Ｊおよび図２１Ａ～２１Ｃに提供する。
ｈＩｇＧ２ Ｆｃ断片は、ＩｇＧ２重鎖のＣＨ２およびＣＨ３ドメインと、ヒンジ領域とからなるＦｃ領域を指す。ヒンジ領域の第１および第２のシステインをセリンで置き換えて、有害なジスルフィド架橋を防止した。Ｆｃ領域の最後のアミノ酸（リジン）を、融合安定性のためにアラニンに置き換えた。ＩｇＧ２ Ｆｃ構築物のＮ末端は、Ａｌａ－Ｐｒｏ－Ｌｅｕ（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎベクター由来）から開始する。
ｈＩｇＧ１ｖ Ｆｃ断片は、ＩｇＧ１重鎖のＣＨ２およびＣＨ３ドメインと、ヒンジ領域とからなるＦｃ領域を指す。ヒンジ領域の第１のシステインをセリンに置き換えて、有害なジスルフィド架橋を防止した。Ｆｃ領域の最後のアミノ酸（リジン）を、融合安定性のためにアラニンに置き換えた。エフェクターサイレンシング変異Ｐ３２９Ｇ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ（ＬＡＬＡ）を、ＩｇＧ１ｖ Ｆｃ－（ＢＧＬ２１）構築物（ＦＰ２）（配列番号１２１３）に含めた。ＩｇＧ１ｖ Ｆｃ構築物のＮ末端は、Ａｌａ（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎベクター由来）から開始する。
ｈＩｇＧ４ Ｆｃ断片は、ＩｇＧ４重鎖のＣＨ２およびＣＨ３ドメインと、ヒンジ領域とからなるＦｃ領域を指す。エフェクターサイレンシング変異Ｐ３２９Ｇ、Ｓ２２８Ｐ／Ｌ２３５Ｅ（ＳＰＬＥ）を、ｈＩｇＧ４ Ｆｃバリアント（ＦＰ３）（配列番号１２１４）に含めた。
Ｆｃ－ノブは、ヒトヒンジノブＦｃ ＩｇＧ１ ＬＡＬＡ－ｄＫ（減少したエフェクター機能および低いＣ末端不均一性）（Ｌ２５２Ａ、Ｌ２５３Ａ、Ｔ３８４Ｗ）を指す。
Ｆｃ－ホールは、ヒトヒンジホールＦｃ ＩｇＧ１ ＬＡＬＡ－ｄＫ（減少したエフェクター機能および低いＣ末端不均一性）（Ｌ２５２Ａ、Ｌ２５３Ａ、Ｔ３８４Ｓ、Ｌ３８６Ａ、Ｙ４２５Ｖ）を指す。
ｈＩｇＧ１ Ｆｃ断片は、ＩｇＧ１重鎖のＣＨ２およびＣＨ３ドメインと、ヒンジ領域とからなるＦｃ領域を指す。Ｆｃ領域の最後のアミノ酸（リジン）を、融合安定性のためにアラニンに置き換えた。構築物は、エフェクターサイレンシング変異Ｎ２９７Ａを含む。
ｈＩｇＧ２ Ｆｃ断片は、ＩｇＧ２重鎖のＣＨ２およびＣＨ３ドメインと、ヒンジ領域とからなるＦｃ領域を指す。ヒンジの第１および第２のシステインをセリンで置き換えて、有害なジスルフィド架橋を防止した。Ｆｃ領域の最後のアミノ酸（リジン）を、融合安定性のためにアラニンに置き換えた。
実験例で使用したＩＬ－２Ｒβγｃリガンド融合タンパク質のアミノ酸配列を、図２０Ａ～２０Ｊに提供する。
実施例１５
ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド融合タンパク質によるＴＦ－１β細胞におけるＳＴＡＴ５リン酸化
実施例１４に記載されるように、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド（ＢＧＬ２１）を、ヒトＩｇＧ２の重鎖およびヒンジ領域のＣＨ２およびＣＨ３ドメインからなるＩｇＧ Ｆｃ断片（Ｃ末端融合配列番号１２１２、Ｎ末端融合配列番号１２１５）に融合させた。また、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド（ＢＧＬ２１）を、ヒトＩｇＧ１の重鎖およびヒンジ領域のＣＨ２およびＣＨ３ドメインからなるヘテロ二量体Ｆｃ断片（ノブ・イントゥ・ホール）バリアントに融合させた。ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド（ＢＧＬ２１）を、「ノブ」変異（Ｔ３６６Ｗ）およびエフェクターサイレンシング変異（Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ）を含有するノブ－Ｆｃ断片（配列番号１２１６）のＣ末端に融合させた。「ホール」変異（Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ）およびエフェクターサイレンシング変異（Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ）を含有する、ホール－Ｆｃ断片（配列番号１２１７）とともに、構築物を共発現させて、融合タンパク質のＣ末端にＩＬ－２Ｒβγｃリガンド（ＢＧＬ２１）の単一コピーを有するヘテロ二量体Ｆｃ断片を作製した。Ｆｃ断片への融合に加えて、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド（ＢＧＬ２１）もまた、実施例１４に記載されるように、ヒト血清アルブミン（配列番号１２５２）のＣ末端に融合させた。
融合タンパク質をＴＦ－１β細胞とインキュベートし、実施例３に記載の方法を使用してＳＴＡＴ５リン酸化を濃度の関数として測定した。
ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド融合タンパク質の構造を、図２０Ａ～２０Ｊおよび２１Ａ～２１Ｃに提供する。
結果を図１２に提示する。
実施例１６
異なるＩＬ－２ＲβγｃリガンドＩｇＧ２ Ｆｃ断片融合タンパク質によるＴＦ－１β細胞におけるＳＴＡＴ５リン酸化
実施例１４に記載されるように、一連のＩＬ－２Ｒβγｃリガンドを、ヒトＩｇＧ２の重鎖およびヒンジ領域のＣＨ２およびＣＨ３ドメインからなるＩｇＧ２ Ｆｃ断片のＣ末端に融合させた。ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、２つのペプチド配列の間で可撓性リンカー（ＧＧＧＧＳ）２（配列番号９３９６）とともに連結されたＩＬ－２Ｒに対して様々な結合親和性を示すＩＬ－２ＲβおよびＩＬ－２Ｒγｃリガンドを含む。
融合タンパク質をＴＦ－１β細胞とインキュベートし、実施例３に記載の方法を使用してＳＴＡＴ５リン酸化を濃度の関数として測定した。
評価したＦｃ－ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド融合タンパク質の構造を、配列番号１２１２、１２３９、１２４３、１２４４、１２５０、および１２５１として、図２０および２３に提供する。
結果を図１３に提示する。
実施例１７
異なるＩｇＧアイソタイプのＦｃ断片に結合したＩＬ－２Ｒβγｃリガンドを含む、融合タンパク質によるＮＫ－９２細胞におけるＳＴＡＴ５リン酸化
ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド（ＢＧＬ２１）を、ヒトＩｇＧの３つの異なるアイソタイプの重鎖およびヒンジ領域のＣＨ２およびＣＨ３ドメインからなるＦｃ断片に融合させた。第１の構築物（ＦＰ２、配列番号１２１３）において、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド（ＢＧＬ２１）を、ヒンジ領域内の第１のシステインが有害なジスルフィド架橋を防止するためにセリンに置き換えられ、最後のアミノ酸（リジン）が融合安定性のためにアラニンに置き換えられた、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ断片バリアントのＣ末端に融合させた。エフェクターサイレンシング変異もまた、このバリアント（Ｐ３２９Ｇ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ）に含めた。第２の構築物（ＦＰ１、配列番号１２１２）ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド（ＢＧＬ２１）を、ヒンジ領域内の第１および第２のシステインが有害なジスルフィド架橋を防止するためにセリンに置き換えられ、最後のアミノ酸（リジン）が融合安定性のためにアラニンに置き換えられた、ヒトＩｇＧ２ Ｆｃ断片バリアントのＣ末端に融合させた。第３の構築物（ＦＰ３、配列番号１２１４）において、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド（ＢＧＬ２１）を、エフェクターサイレンシング変異（Ｐ３２９Ｇ、Ｓ２２８Ｐ／Ｌ２３５）を含有するヒトＩｇＧ４ Ｆｃ断片バリアントのＣ末端に融合させた。各融合タンパク質を発現させ、実施例１４に記載されるように精製した。
融合タンパク質をＴＦ－１β細胞とインキュベートし、実施例３に記載の方法を使用してＳＴＡＴ５リン酸化を濃度の関数として測定した。
ＩｇＧ Ｆｃ－ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド融合タンパク質（ＦＰ１）～（ＦＰ３）の構造を、図２０Ａおよび２１Ａ～２１Ｃに提供し、それらは、配列番号１２１２、１２１３、および１２１４に対応する。
結果を図１４に提示する。
実施例１８
異なるＦｃリンカーを有するＩＬ－２ＲβγｃリガンドＩｇＧ２ Ｆｃ断片融合タンパク質によるＴＦ－１β細胞におけるＳＴＡＴ５リン酸化
Ｆｃ断片とＣ末端ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド（ＢＧＬ２１）との間に、グリシンもしくはグリシン／セリン反復を有する一連の可撓性構築リンカー、またはプロリン／アラニン反復を有する剛性構築リンカーを含有するＩＬ－２Ｒβγｃリガンド（ＢＧＬ２１）ＩｇＧ２ Ｆｃ断片バリアントを、実施例１４に記載されるように調製した。
融合タンパク質をＴＦ－１β細胞とインキュベートし、実施例３に記載の方法を使用してＳＴＡＴ５リン酸化を濃度の関数として測定した。
Ｆｃ－ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド融合タンパク質の構造を、図２０Ａ～２０Ｊおよび２１Ａ～２１Ｃに提供し、それらは、配列番号１２２７～１２３５に対応するＩＬ－２Ｒβγｃリガンド融合タンパク質（ＦＰ１６）～（ＦＰ２４）に対応する。
結果を図１５に提示する。
実施例１９
異なるＦｃリンカーを有するＩＬ－２ＲβγｃリガンドＩｇＧ２ Ｆｃ断片融合タンパク質によるＴＦ－１β細胞およびＮＫ－９２におけるＳＴＡＴ５リン酸化
ＩｇＧ２ Ｆｃ断片とＩＬ－２Ｒβγｃリガンド（ＢＧＬ２１）のＣ末端との間に、（ＧＳ）１０（配列番号９４０７）（ＦＰ１４、配列番号１２２５を参照されたい）可撓性リンカーからなる可撓性リンカー、または（ＰＡ）１０（配列番号９４２８）（ＦＰ１５、配列番号１２２６をされたい）からなる剛性リンカーを含有するＩＬ－２Ｒβγｃリガンド（ＢＧＬ２１）ＩｇＧ２ Ｆｃ断片バリアントを、実施例１４に記載されるように調製した。
融合タンパク質をＴＦ－１□細胞とインキュベートし、実施例３に記載の方法を使用してＳＴＡＴ５リン酸化を濃度の関数として測定した。各融合タンパク質もまた、ＮＫ－９２細胞増殖アッセイにおいてＫｉ６７染色を使用して試験して、実施例９に記載の化合物に応答して増殖した細胞を定量した。
Ｆｃ－ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド融合タンパク質の構造を、図２０Ａ～２０Ｊおよび２１Ａ～２１Ｃに提供する。図２１Ａ～２１Ｃにおいて、親ＩＬ－２Ｒβリガンドおよび親ＩＬ－２Ｒγｃリガンドのアミノ酸配列が参照される。Ｆｃ－ＩＬ－２Ｒγｃ融合タンパク質に使用されるＩＬ－２ＲβリガンドのそれぞれおよびＩＬ－２Ｒγｃリガンドのそれぞれは、親リガンドのＮ末端およびＣ末端のそれぞれに２つの隣接グリシンを含む。例えば、配列番号１２１２を有するＩＬ－２Ｒβγｃリガンド融合タンパク質（ＦＰ１）は、配列番号９１４を有するＩＬ－２Ｒβリガンドを含み、これは、Ｎ末端およびＣ末端のそれぞれ上にグリシンを有する配列番号８６５（ＢＬ４）を有する親ＩＬ－２Ｒβリガンドに対応し、配列番号１０５２を有するＩＬ－２Ｒγｃリガンドに結合し、これは、Ｎ末端およびＣ末端のそれぞれ上に２つのグリシンを有する配列番号９６５（ＧＬ２）を有する親ＩＬ－２Ｒγｃリガンドに対応する。
結果を図１６Ａおよび１６Ｂに提示する。
実施例２０
抗ＰＤ－１抗体－ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド（ＢＧＬ２１）融合タンパク質のＰＤ－１結合およびＩＬ－２アゴニスト活性
実施例１４のＩｇＧ Ｆｃ断片へのヘテロ二量体ペプチド融合について記載されるように、ＰＤ－１を標的とする２つの治療用チェックポイント阻害剤抗体（ペムブロリズマブ（ＦＰ８）（配列番号１２１９、セミプリマブ（ＦＰ１０）（配列番号１２２１）の重鎖のＣ末端にＩＬ－２Ｒβγｃリガンド（ＢＧＬ２１）を融合させた。構築物を、ＨＥＫ－２９３Ｆ細胞において、それらの対応する軽鎖構築物（ペムブロリズマブ（ＦＰ７、配列番号１２１８）、セミプリマブ（ＦＰ９、配列番号１２２０）と一過性に共発現させて、完全なＩｇＧ ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド（ＢＧＬ２１）融合物を作製した。
精製したタンパク質を、ＥＬＩＳＡによってＰＤ－１標的タンパク質への結合について評価した。組換えヒトＰＤ－１ ｈｉｓタグ付きタンパク質（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ ８９８６－ＰＤ－１００）を、１μｇ／ｍＬでＰＢＳ中に溶解し、吸収によってマイクロタイターウェルに直接固定した後、ＰＢＳ／１％ＢＳＡでブロックした。ペムブロリズマブおよびセミプリマブ抗体、または対応するＩＬ－２Ｒβγｃリガンド（ＢＧＬ２１）融合タンパク質の連続希釈液をウェルに添加し、４℃で１時間インキュベートした。次いで、ウェルをＰＢＳで洗浄し、抗ヒトＩｇＧ ＨＲＰ連結抗体を各ウェルに添加し、４℃で１時間インキュベートした。最終洗浄後、ＴＭＢ基質溶液を添加して、各ウェル内のＨＲＰの量を測定した。吸光度を４５０ｎｍにてマイクロプレートリーダーにおいて読み取った。生成されるシグナルは、各ウェルにおけるＰＤ－１に結合した抗体の量に比例する。ＰＤ－１への結合の結果を、図１７Ａおよび１７Ｃに示す。
ペムブロリズマブおよびセミプリマブＩＬ－２Ｒβγｃリガンド（ＢＧＬ２１）融合タンパク質を、ＴＦ－１β細胞とインキュベートし、実施例３に記載の方法を使用して濃度の関数としてＳＴＡＴ５リン酸化を測定した。ＳＴＡＴ５リン酸化アッセイの結果を、それぞれ図１７Ｂおよび１７Ｄに示す。
Ｆｃ－ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド融合タンパク質の構造を、図２０Ａ～２０Ｊおよび２１Ａ～２１Ｃに提供する。
実施例２１
ＰＥＧ化ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド（ＢＧＬ２１）構築物の合成
Ｎ末端一級アミンを無水酢酸でアセチル化する代わりに、Ｆｍｏｃ－ＰＥＧ１０－ＣＨ２ＣＨ２－ＣＯ２Ｈ（Ａｎａｓｐｅｃ、Ｈａｙｗａｒｄ，ＣＡ）を、最終的なＨＡＴＵ媒介カップリング工程を使用してＮ末端に加え、Ｆｍｏｃ保護基を前述のように除去したことを除いて、実施例１に記載されるようにＩＬ－２Ｒβγｃリガンド（ＢＧＬ２１）の類似体を調製した。樹脂からの切断およびジスルフィド形成を、実施例１に記載されるように行って、酸化されたペプチドに遊離Ｎ末端一級アミンを提供した。ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド（ＢＧＬ２１）（１．５モル当量）を、乾燥ＤＭＦ中の４０ｋＤの分岐ＰＥＧ試薬（１．０モル当量）（ＮＯＦ Ｃｏｒｐ．、Ｔｏｋｙｏ，Ｊａｐａｎ）のＮＨＳ－エステルと混合した。２５℃で１５分間穏やかに撹拌した後、ＤＩＥＡ（１０モル当量）を添加し、反応を進行させて完了させた（約４時間；分析的Ｃ１８逆相ＨＰＬＣによる分析）。最終生成物（ＰＥＧ－８）を、Ｃ１８逆相ＨＰＬＣによって精製し、ＰＥＧ化ペプチドの構造を、ＭＡＬＤＩ ＴｏＦ（飛行時間）質量分析および逆相ＨＰＬＣによって確認した。
実施例２２
ＰＥＧ－ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドのアゴニスト活性
実施例２１で合成したＰＥＧ－ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物（ＰＥＧ－８）を、ＮＫ－９２細胞とインキュベートし、実施例３および４に記載の方法を使用してＳＴＡＴ５リン酸化を濃度の関数として測定した。
結果を図１８に提示する。
実施例２３
生成方法
ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド（ＢＧＬ２１）を、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ断片バリアント（ＦＰ１３、配列番号１２２４）のＣ末端に融合させた、哺乳動物細胞発現構築物を調製した。ヒンジ領域内の最初のシステインを、有害なジスルフィド架橋を防止するためにセリンに置き換え、最後のアミノ酸（リジン）を、融合安定性のためにアラニンに置き換えた。エフェクターサイレンシング変異もまた、このバリアント（Ｎ２９７Ａ）に含めた。可撓性リンカー（ＧＳ）１０（配列番号９４０７）は、Ｆｃ断片とＩＬ－２Ｒβγｃリガンド（ＢＧＬ２１）との間に位置する。
ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド（ＢＧＬ２１）を、ヒンジ領域内の第１および第２のシステインが有害なジスルフィド架橋を防止するためにセリンに置き換えられ、最後のアミノ酸（リジン）が融合安定性のためにグリシンに置き換えられた、ヒトＩｇＧ２ Ｆｃ断片バリアントのＣ末端に融合させた、さらなる哺乳動物細胞発現構築物を調製した。可撓性リンカー（ＧＳ）１０（配列番号０４０７）（ＦＰ１４、配列番号１２２５を参照されたい）または硬性リンカー（ＰＡ）１０（配列番号９４２８）（ＦＰ１５、配列番号１２２６を参照されたい）は、Ｆｃ断片とＩＬ－２Ｒβγｃリガンド（ＢＧＬ２１）との間に位置する。
発現プラスミドをＣＨＯ－Ｋ１細胞にトランスフェクトし、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド（ＢＧＬ２１）ＩｇＧ Ｆｃ断片融合物を発現する安定なプールを、抗生物質含有培地中で選択した。個々のクローンを、希釈を制限することによってこれらのプールから単離し、ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド（ＢＧＬ２１）ＩｇＧ Ｆｃ断片融合タンパク質の高発現について試験した。高発現クローンの大規模培養物を遠心分離によって採取し、分泌された融合タンパク質を、プロテインＡ親和性クロマトグラフィーを使用して上清から精製した。サイズ排除クロマトグラフィーを使用して、高分子量の不純物を除去した。
実施例２４
ｐＨ選択的スクリーニング
ＩＬ－２ＲβおよびＩＬ－２Ｒγｃリガンドを２つのペプチドライブラリでスクリーニングして、それぞれの受容体サブユニットに対するｐＨ依存的親和性を示すペプチドを同定した。スクリーニングアプローチは、様々な酸性および中性のｐＨ条件下での結合および溶出のサイクルを利用した。
２つの標的ｐＨ値におけるファージＥＬＩＳＡを使用して、ファージのＩＬ－２Ｒβ－ＧＰＩまたはＩＬ－２Ｒγｃ－ＧＰＩに対する結合を決定し、ｐＨ６．０における結合に対するｐＨ７．４における結合の変化パーセントを計算した。
ｐＨ依存的ファージ力価測定のために、以前の段落に記載されたＥＬＩＳＡスクリーニングプロトコールを、以下の差異を伴って使用した：（１）すべての９６ウェルＥＬＩＳＡプレートは、ＩＬ－２Ｒβ－ＧＰＩ標的、またはＩＬ－２Ｒγｃ－ＧＰＩ標的を含有し、（２）ファージ上清の力価測定を、２つの異なるＰＢＴ ｐＨ緩衝液（ｐＨ６．０およびｐＨ７．４）中で調製した。
以下の手順を使用して、９６ウェルポリプロピレンプレート中でファージ力価測定を行った。ＰＢＴ ｐＨ６緩衝液およびｐＨ７．４緩衝液中のファージの３倍希釈を調製した。１００μＬの希釈したファージを標的コーティングしたアッセイプレートに移し、４℃で１時間インキュベートした。
ｐＨ６．０ウェルを冷ＰＴｐＨ６．０で３回洗浄し、ｐＨ７．４ウェルを冷ＰＴｐＨ７．４で２回洗浄した。
結合したファージを、抗Ｍ１３－ＨＲＰで検出した。
実施例２５
ビオチン化ペプチドｐＨ依存的結合（ＩＬ－２Ｒβ／Ｆｃ－受容体結合／多価）のためのＥＬＩＳＡプロトコール：
アッセイされる各ペプチドについて、１６個のＥＬＩＳＡプレートウェルを、５０μＬ／ウェルでニュートラビジン（ＰＢＳ ｐＨ７．２中１０μｇ／ｍＬ）でコーティングした。コーティングされたウェルを２５℃で少なくとも１時間インキュベートした。
ニュートラビジンを各ウェルから除去した。３００μＬのブロッキング緩衝液（１×ＰＢＳ ｐＨ７．２、１％ＢＳＡ）をニュートラビジンコーティングプレートの各ウェルに添加した。すべてのプレートを覆い、２５℃で１時間、または４℃で一晩維持した。
インキュベートしたプレートをＰＴ（１×ＰＢＳ（ｐＨ７．２、０．０５％ Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０）緩衝液で４回洗浄した。
ビオチン化ペプチドをＰＢＴ ｐＨ７．２緩衝液中で１μＭに希釈し、５０μＬを適切な１６ウェル（各結合ｐＨについて８）に加えた。プレートを２５℃で少なくとも１時間インキュベートした。
ＰＢＴ ｐＨ６．０およびｐＨ７．４を使用し、２μｇ／ｍＬから開始して３倍希釈して、ポリプロピレンプレート中で、ＩＬ－２Ｒβ－Ｆｃタンパク質の２回の力価測定を調製した。
プレートをＰＴ（１×ＰＢＳ（ｐＨ７．２、０．０５％ Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０）緩衝液で４回洗浄した。
５０μＬのＩＬ－２Ｒβ－Ｆｃタンパク質希釈物を、ｐＨ６．０またはｐＨ７．４で緩衝したアッセイプレートに添加し、４℃で１時間インキュベートした。
インキュベートしたプレートを、対応するｐＨ緩衝液ＰＴ（５０ｍＭのＰＢＳ（ｐＨ６．０、０．０５％のＴｗｅｅｎ（登録商標）２０または５０ｍＭのＰＢＳ（ｐＨ７．４、０．０５％のＴｗｅｅｎ（登録商標）２０）で３回洗浄した。
５０μＬの冷ＰＢＴ（ｐＨ６．０）中で１：２５００に希釈したヤギ抗ｈｕＩｇＧ－ＨＲＰを各ウェルに添加した。次いで、プレートを４℃で１時間インキュベートした。次いで、プレートを冷却緩衝液ＰＴ ｐＨ６．０で４回洗浄した。次いで、５０μＬのＴＭＢを各ウェルに添加し、ウェルを２５℃で１～１０分間インキュベートした。５０μＬの「停止」溶液を各ウェルに添加し、プレートを４５０ｎｍで読み取った。
実施例２６
ｐＨバイアスＩＬ－２Ｒβリガンドを有するＩＬ－２ＲβγｃリガンドによるＮＫ－９２細胞におけるＳＴＡＴ５リン酸化
ＮＫ－９２細胞におけるＳＴＡＴ５リン酸化アッセイを使用して、ＩＬ－２Ｒβに対するｐＨバイアス親和性を有するＩＬ－２Ｒβリガンドを含むｐＨバイアスＩＬ－２ＲβγｃリガンドのＩＬ－２Ｒアゴニスト活性を評価した。
ＩＬ－２ＲβγｃリガンドをＮＫ－９２細胞とインキュベートし、飢餓培地をｐＨ６．０またはｐＨ７．４のいずれかに調整した実施例４に記載の方法を使用して、濃度の関数としてＳＴＡＴ５リン酸化を測定した。
結果を図２４に提示する。
実施例２７
ＩＬ－２ＲβリガンドｐＨバイアス結合のための競合ＥＬＩＳＡプロトコール
アッセイされる各ペプチドについて、１６個のＥＬＩＳＡプレートウェルを、ＩＬ－２Ｒβ－Ｆｃ（５０ｎｇ／ウェル）で少なくとも１時間、２５℃で、または４℃で一晩コーティングした。
ＩＬ－２Ｒβ－Ｆｃを各ウェルから除去した。３００μＬのブロッキング緩衝液（１×ＰＢＳ ｐＨ７．２、１％ＢＳＡ）を、ＩＬ－２Ｒβ－Ｆｃコーティングプレートの各ウェルに添加した。すべてのプレートを２５℃で少なくとも１時間覆い、維持した。
インキュベートしたプレートをＰＴ（１×ＰＢＳ ｐＨ７．２、０．０５％ Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０）緩衝液で３回洗浄した。
ｐＨバイアスＩＬ－２Ｒβリガンドを有するｐＨバイアスＩＬ－２Ｒβγｃリガンドを、ＰＢＴ ｐＨ６．０およびｐＨ７．２の緩衝液中で２倍の最終濃度（２０μＭ）に希釈し、５０μＬを適切な１６ウェル（各結合ｐＨについて８）に添加した。次いで、プレートを４℃で１時間インキュベートした。
ｐＨ６．０および７．４で結合親和性が同じである試験ペプチドと競合するペプチドリガンドのビオチン化型を、ニュートラビジン－ＨＲＰコンジュゲートと少なくとも４５分間組み合わせて、ペプチド－ＨＲＰ複合体を調製し、次いで、ｐＨ６．０またはｐＨ７．４のＰＢＴ中で希釈した。
洗浄せずに、５０μＬのペプチド－ＨＲＰ複合体希釈物を、ｐＨ６．０またはｐＨ７．４で緩衝したアッセイプレートに添加し、４℃で１時間インキュベートした。
インキュベートしたプレートを、対応するｐＨ緩衝液ＰＴ（５０ｍＭのＰＢＳ（ｐＨ６．０、０．０５％のＴｗｅｅｎ（登録商標）２０または５０ｍＭのＰＢＳ（ｐＨ７．４、０．０５％のＴｗｅｅｎ（登録商標）２０）で３回洗浄した。
次いで、５０μＬのＴＭＢ（３，３’５，５’－テトラメチルベンジジン）を各ウェルに添加し、ウェルを２５℃で１～１５分間インキュベートした。５０μＬの停止溶液を各ウェルに添加し、プレートを４５０ｎｍで読み取った。結果を図２５に提示する。
実施例２８
競合的結合
競合的結合アッセイを行って、ＩＬ－２Ｒβリガンドについて、ＩＬ－２Ｒγｃリガンド、およびＩＬ－２ＲβγｃリガンドへのＩＬ－２Ｒ結合部位を特徴付けた。
ＩＬ－２Ｒβリガンドについて、ＩＬ－２Ｒβリガンドファミリー由来のペプチドを提示する代表的なファージクローンを、マイクロタイターウェルに固定化されたＩＬ－２Ｒβサブユニットの細胞外ドメイン（ＥＣＤ）に結合させた。ファージ結合は、合成試験ペプチドの存在下および非存在下で行われ、ファージペプチドおよび試験ペプチドがＩＬ－２Ｒβ上の同じ部位への結合について競合したかどうかを判定した。合成試験ペプチドを選択して、ＩＬ－２Ｒβリガンドファミリーからのペプチド、ならびに陽性および陰性対照ペプチドを表した。評価されるＩＬ－２Ｒβリガンドファミリー配列および特異的なＩＬ－２Ｒβリガンドが、表１３に提供される。
ＩＬ－２Ｒβリガンドは、１０μＭ未満のＩＣ５０でＩＬ－２Ｒβサブユニットに結合し、１００μＭを超えるＩＣ５０でＩＬ－２Ｒγｃサブユニットに結合した。
固定化ＩＬ－２Ｒβ ＥＣＤに対するファージ結合を、ファージコートタンパク質に対する抗体（抗ファージＡｂ）で染色し、抗ファージＡｂに対する標識二次抗体で染色し、マイクロタイタープレート光学リーダー中のＯＤを読み取ることによってスコア化することによって検出した。
試験ペプチドの存在下および非存在下における各ファージ結合のＥＬＩＳＡシグナルを比較して、ＩＬ－２Ｒβサブユニットへの結合についてどの合成ペプチドと競合したか判定した。競合的結合（すなわち、交差阻害）を示したペプチド対は、ＩＬ－２受容体上の同じ機能部位で結合すると考えられた。結果を表１４に提示する。
ＩＬ－２Ｒβリガンドは、ＩＬ－２とＩＬ－２Ｒβサブユニットの結合部位に競合的に結合しなかった。
ＩＬ－２Ｒγｃリガンドの結合を評価するために同様の研究を行った。評価されるＩＬ－２Ｒγｃリガンドファミリー配列および特異的なＩＬ－２Ｒγｃリガンドが、表１５に提供される。
ＩＬ－２Ｒγｃリガンドは、１０μＭ未満のＩＣ５０でＩＬ－２Ｒγｃサブユニットに結合し、１００μＭを超えるＩＣ５０でＩＬ－２Ｒβサブユニットに結合した。
競合結合アッセイの結果を表１６に提示する。
実施例２９
ＰＥＧ－ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物のアゴニスト活性
ＰＥＧ－ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物を実施例２１に記載されるように合成した。ＰＥＧ－ＩＬ－２Ｒβγｃリガンド構築物の構造を図２７～３３に示す。構築物のそれぞれに使用したＩＬ－２Ｒβγｃリガンドは、配列番号１２６３を有した。ＰＥＧ構築物をＮＫ－９２細胞とインキュベートし、実施例３および４にそれぞれ記載の方法を使用してＳＴＡＴ５リン酸化を濃度の関数として測定した。
結果を表１７に提示する。
実施例３０
ＣＤ－１マウスにおけるＩＬ－２Ｒβγｃ ＰＥＧ－ペプチドアゴニストＰＫ分析
ＩＬ－２Ｒβγｃ ＰＥＧ－ペプチドアゴニストの薬物動態研究を、ＣＤ－１オスマウスにおいて行った。ＩＬ－２Ｒβγｃ ＰＥＧ－ペプチドアゴニスト（ＰＥＧ－６）を、各マウス（ｎ＝５）に１ｍｇ／ｋｇの単回用量で静脈内投与した。血液試料を、０時間（投与前）、投与の１時間、２時間、６時間、２４時間、４８時間、７２時間および９６時間後に血清分離バイアルに収集した。試料を１０，０００×ｇで５分間４℃で遠心分離し、血清を新しいチューブに移した。試料を凍結し、試験前に－８０℃で保管した。
実施例３に記載されるＴＦ－１β ＳＴＡＴ５リン酸化バイオアッセイを使用して、血清試料のそれぞれに存在するＰＥＧ－６の量を定量した。飢餓培地中の各血清試料または化合物参照標準物質の３倍連続希釈物を細胞に加え、細胞と３０分間インキュベートした。細胞抽出物を調製し、実施例３に記載されるようにリン酸化ＳＴＡＴ５の量を決定した。各血清試料中のＰＥＧ－６濃度は、参照標準物質から生成した標準曲線を使用して計算した。
結果を図２６に提示する。
実施例３１
磁気ビーズ（酸溶出）上のＦｃ－受容体融合に対するファージディスプレイｐＩＩＩライブラリパンニング手順
以下のプロトコールまたは同様のプロトコールを使用して、ペプチドがｈＩＬ－２ＲβおよびｈＩＬ－２Ｒγｃサブユニットに結合すること、ならびにいくつかのペプチドがｃｙｎｏ－ＩＬ－２Ｒβおよびｃｙｎｏ－ＩＬ－２Ｒγｃサブユニットに結合することをスクリーニングした。
各ライブラリ試料について、５０μＬのプロテインＧ Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（登録商標）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用した。ストックボトルを再懸濁した後、所望の体積のビーズを滅菌微量遠心チューブに移し、磁石に適用した。
ビーズを磁石上で除去し、ビーズを１ｍＬのＰＴ緩衝液（１×ＰＢＳ、０．０５％ Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０）で洗浄した。
上清を除去し、１ｍＬのＰＢＳ＋１％のＢＳＡ＋０．０５％のＴｗｅｅｎ（登録商標）２０を添加し、２５℃で少なくとも１時間混合してビーズをブロッキングした。
マグネットにチューブを適用し、ブロッキング溶液を除去した。試験される各ライブラリについて、各ラウンドについて５μｇの目的のＦｃ融合受容体を各ライブラリ試料に添加して、総体積を少なくとも４００μＬにした。試料を２５℃で少なくとも１時間混合した。試料を磁石に適用し、上清を除去した。
５０μＬのビーズごとに２００μＬのＰＴ緩衝液を添加した。試料を完全に混合し、２００μＬのアリコートを、スクリーニングする各ライブラリについて事前に標識したチューブに移した。さらに５００μＬのＰＴを各チューブに添加し、試料を混合し、次に磁石に適用した。合計７００μＬ／チューブを洗浄に使用した。
－２０℃の冷凍庫から取り出したライブラリの１ｍＬアリコート。１００（１００μＬの１０×ＢＴ緩衝液（５％ＢＳＡ、１×ＰＢＳ中０．５％ Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０）を各チューブに添加し、ボルテックスした。ライブラリ試料を、ビーズを含有する予め標識されたチューブに移した。次いで、試料を、少なくとも２時間、回転子上で４ ℃でインキュベートした。追加のスクリーニングラウンドについて、各ライブラリからの前のラウンドからの１ｍＬのアリコートの増幅を使用した。ビーズを磁石で回収し、ファージ溶液を除去した。ビーズを１ｍＬのＰＴ緩衝液で２回洗浄した。５００μＬのＰＴ緩衝液を添加し、懸濁液をクリーンチューブに移した。ビーズを磁石上で回収し、最終洗浄を除去した。
４７５μＬのファージ溶出緩衝液を各ウェル（０．２Ｍグリシン－ＨＣＬ、ｐＨ２．２、１．０ｍｇ／ｍＬ ＢＳＡ）に添加した。試料を回転子上で２５℃で１０分間インキュベートした。ビーズを磁石上で回収し、溶出したファージをクリーンチューブに移した。
２５μＬの中和緩衝液（２ＭＴｒｉｓ塩基）を４７５μＬの溶出物に加えた。ＴＧ１細胞の増幅の準備ができるまで、中和した試料を４℃で維持した。試料をスクリーニング後、－２０℃で保管した。５０μＬ（全体積の約１０％）を１．５ｍＬの微量遠心チューブに移し、ディープシークエンシングに使用するために－２０℃で保管した。
実施例３２
ＴＧ１培養およびライブラリ増幅
ライブラリをビーズに添加した後、新鮮なＴＧ１（またはＯｍｎｉＭａｘ）培養物を約１～１．５時間増殖させた。２Ｘ－ＹＴ培地（１０ｍＬ）を５０ｍＬのＦａｌｃｏｎ（登録商標）チューブに入れた。２００μＬのＴＧ１を、ｆａｌｃｏｎチューブに一晩加えた。２Ｘ－ＹＴ培地（６００μＬ）をＯＤ６００ブランク用キュベットに入れた。培養物を２５０ｒｐｍおよび３７℃で増殖させ、６０分後に最初のＯＤ測定を行った。ＴＧ１細胞は、使用時にＯＤ６００が０．５～０．７の対数期でなければならない。
溶出ファージ（４００μＬ～４５０μＬ）を、５０ｍＬのＦａｌｃｏｎ（登録商標）チューブ中の０．５～０．７のＯＤ６００で１．０ｍＬのＴＧ１細胞に添加した。ファージおよびＴＧ１細胞を振盪せずに３７℃で３０分間インキュベートした。滴定および特徴付けのために約５０μＬ～１００μＬを留置した。
２ＹＴ培地（１０．５ｍＬ）を１２μＬのカルベニシリン（ｃａｒｂ）（１００ｍｇ／ｍＬを作製するために１００μｇ／ｍＬ）および２４μＬの５０％ブドウ糖（０．１％ブドウ糖を作製するために）に添加し、細胞を３７℃で２５０ｒｐｍで１時間振盪させながらインキュベートした。
次いで、Ｍ１３Ｋ０７ヘルパーファージ（５×１０１０ｐｆｕ、２４μＬのストック、２×１０１２ｐｆｕ／ｍＬ）を添加し、旋回して混合した。ファージおよび細胞を振盪せずに３７℃で３０分間インキュベートした。
カナマイシンを３ｍｇ／ｍＬに希釈し、２ＹＴ培地／カルベニシリン－１００／０．１％グルコース中のアラビノースを２．４％に希釈し、１００μＬを各増幅に添加した。混合物を３７℃および２５０ｒｐｍで一晩インキュベートした。
培養物を５０ｍＬの高速ＶＷＲ遠心チューブに移し、ＪＳＰ－Ｆ５０Ｃ遠心分離器中で８，０００ｇで４℃で１５分間遠心分離して細胞をペレット化した。
上清を５０ｍＬの高速ＶＷＲ遠心チューブに移し、０．２体積のＰＥＧ／ＮａＣｌ（体積に０．２５ｍＬを乗じて、１２ｍＬ増幅に対して３ｍＬのＰＥＧ／ＮａＣｌとした）を添加し、混合し、氷上で３０分間インキュベートした。
次いで、細胞を、ＪＳＰ－Ｆ５０Ｃ遠心分離器中で１０，５００ｇで４℃で１５分間遠心分離した。上清を除去し、ファージペレットをピペッティングによって合計１ｍＬのＰＢＴ（１×ＰＢＳ、０．０５％ Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０、０．５％ＢＳＡ）中に再懸濁した。
試料をＥｐｐｅｎｄｏｒｆチューブに移し、ボルテックスし、１２，０００ｒｐｍで３０秒間遠心分離した。上清を清潔なエッペンドルフ管に移し、４℃で保管した。この増幅ファージ試料（２５０～５００μＬ）を、次のラウンドのスクリーニングに使用した。
実施例３３
個々のコロニーからの培養物の調製
９６ウェルのディープウェルプレートに１ｍＬの２ＹＴブロス／アンピシリン－５０／０．１％グルコースを充填した。９６個のコロニーを、Ｐ２０チップを使用してウェルに配置した。ポジションをマークするためにチップをウェルに残した。プレート全体が完了した後、マルチチャネルピペットを使用してチップを除去した。プレートは通気性のあるフィルムで覆われていた。
接種したプレートを、培養物が濁るまで、典型的には２５０ｒｐｍで４時間以内に、３７℃でシェーカー内でインキュベートした。
プレートをインキュベーターから取り出し、各ウェルから５０μＬの培養物を、１ｍＬの２ＹＴブロス／アンピシリン－５０／０．１％グルコースを含有する「アーカイブブロック」として指定された別のディープウェルブロックに取り出した。プレートを通気性フィルムで覆い、３７℃および２５０ｒｐｍで一晩インキュベートした。
一晩インキュベートした後、Ｍ１３Ｋ０７ヘルパーファージを、２ＹＴブロス／アンピシリン－５０／０．１％グルコース中２×１０１０ｐｆｕ／ｍＬに添加した（ブロック当たり６．０ｍＬを作製する）。希釈したＭ１３Ｋ０７の５０μＬをディープウェルブロック内の各培養ウェルに添加した。ディープウェルブロックを通気性フィルムで覆い、３７℃および２５０ｒｐｍで３０分間インキュベートした。
２ＹＴブロス／アンピシリン－５０／０．１％グルコース中で、カナマイシンを０．５ｍｇ／ｍＬに希釈し、アラビノースを０．４％に希釈し（ブロック当たり６．０ｍＬを作製する）、５０μＬを各ウェルに添加した。プレートを通気性フィルムで覆い、３７℃および２５０ｒｐｍで一晩インキュベートした。
「アーカイブブロック」培養物をインキュベーターから取り出し、５０μＬを５０μＬの５０％グリセロールを含有する９６ウェルプレートに移した。プレートをホイルで密封し、－８０℃で保管した。ブロック内の残りの培養物をホイルシールで覆い、４℃で保管した。
ブロックを遠心分離し、Ｍ１３Ｋ０７を４０００ｒｐｍで１５分間接種した。細菌ペレットを避けながら、ファージ上清８５０μＬを新鮮なディープウェルプレートに移し、ホイルシールで覆い、４℃で保管した。
実施例３４
Ｆｃ－融合物のためのＥＬＩＳＡプロトコール
アッセイされる各ブロックについて、１×９６ウェルＥＬＩＳＡプレートを５０μＬ／ウェルでＦｃ－融合物（ＰＢＳ中１μｇ／ｍＬ）でコーティングした。ウェルを２５℃で少なくとも１時間インキュベートした。
Ｆｃ－融合物を各ウェルから除去した。３００μＬのブロッキング緩衝液（１×ＰＢＳ、１％ＢＳＡ）を受容体コーティングプレートの各ウェルに添加した。また、ブロッキング緩衝液３００μＬを別個の非コーティング９６ウェルＥＬＩＳＡプレートに添加して、陰性対照として使用した。両方のプレートをフィルムで覆い、３７℃で１時間、または４℃で一晩放置した。
プレートをＰＴ（１×ＰＢＳ、０．０５％ Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０）緩衝液で４回洗浄した。５０μＬのＰＢＴを各ウェルに添加した。ブロックからの５０μＬのファージ上清を各ウェルに添加し、４℃で１時間インキュベートした。プレートを冷ＰＴで４回洗浄した。各ウェルに、冷ＰＢＴ中に１：５０００で希釈した抗Ｍ１３－ＨＲＰ抗体１００μＬを添加した。ウェルを４℃で１時間インキュベートした。
次いで、プレートを冷ＰＴで４回洗浄した。その後、５０μＬのＴＭＢを各ウェルに添加し、ウェルを２５℃で１～１０分間インキュベートした。５０μＬの「停止」溶液を添加し、プレートを４５０ｎｍで読み取った。
実施例３５
ＩＬ－２Ｒβγｃを二量体化し、ＩＬ－２応答性細胞を活性化するペプチドヘテロ二量体能力の評価
ＩＬ－２ＲβおよびＩＬ－２Ｒγｃ結合活性を示すペプチジルリガンドの同定後、ＩＬ－２Ｒアゴニスト活性を示す化合物を同定した。これは、ペプチドがＩＬ－２Ｒβγｃサブユニットを二量体化し、細胞ベースのアッセイにおいてシグナル伝達する能力を評価することを含む。二量体化は、受容体シグナル伝達の活性化において必要であるが十分ではない工程である。細胞ベースのアッセイにおいてアゴニスト活性を評価するために、ＩＬ－２応答性細胞株を、ＩＬ－２シグナル伝達の指標であるＳＴＡＴ５のリン酸化について試験する。次いで、これらの細胞株においてＩＬ－２Ｒβγｃアゴニスト活性を示す化合物を、ＩＬ－２Ｒアゴニズム、およびＩＬ－２Ｒβγｃサブユニットを発現するが、ＩＬ－２Ｒα（ＣＤ２５）サブユニット発現が少ないかまたは全くない細胞型の活性化を好む所望の選択性について、初代ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）中で試験する。
二量体化の可能性を、β－Ｇａｌ相補系を使用して評価する。β－Ｇａｌ相補系では、各々それぞれのＩＬ－２受容体サブユニットの細胞内ドメインの一部がβ－Ｇａｌの機能的に相補的な断片に置き換えられ、十分に近接すると触媒活性を取り戻す。これらの構築物を発現する細胞は、ＩＬ－２で処理すると、約２６ｎＭのＥＤ５０でβ－Ｇａｌ活性を生成する（ＤｉｓｃｏｖｅｒＸ製品仕様を参照されたい）。すべての合成、潜在的にアゴニストのペプチドを、このアッセイを使用して試験する。
２つの細胞株におけるＳＴＡＴ５リン酸化の誘導について候補化合物をスコア化する。（１）ＣＴＬＬ－２細胞、３つすべてのＩＬ－２受容体サブユニットを発現し、ＩＬ－２Ｒβγｃバイアスバリアントならびに野生型ＩＬ－２に応答性であるマウス細胞傷害性Ｔリンパ球株；および（２）ヒト赤白血病株ＴＦ－１に由来し、ＩＬ－２Ｒγｃのみを天然で発現し、ＩＬ－２ＲβのトランスフェクションによってＩＬ－２応答性であるように操作されるＴＦ－１β細胞。ＴＦ－１βを構築し、両方の細胞株におけるＩＬ－２Ｒサブユニット発現レベルをＱＰＣＲおよびＦＡＣＳ分析によって検証する。
化合物を両方の細胞株において試験する。用量応答アッセイを実施して、試験化合物のＥＣ５０を決定し、試験化合物をＩＬ－２Ｒβγｃ受容体バイアスの指標としてＩＬ－２と比較する。サブユニットバイアスをさらに特徴付けるために、ヒトＩＬ－２Ｒβサブユニットに対する中和抗体の存在下で並行アッセイを実行する。
陽性化合物がＩＬ－２受容体の刺激を通じて作用していることを確認するための対照として、中和抗ｈｕＩＬ－２Ｒβ抗体で処理した細胞でもアッセイを行う。化合物活性がサイトカインによる汚染に起因しないことを判定するために、試験化合物を、天然のＩＬ－２Ｒβγｃアゴニスト、ＩＬ－２およびＩＬ－１５に対する中和抗体（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）で処理する。
細胞株にＩＬ－２Ｒアゴニスト活性を示す化合物を、ヒト初代免疫細胞、個々のドナーから収集した（Ｌｏｎｚａから市販されている）ＰＢＭＣ上で試験し、場合によっては精製ＣＤ４＋細胞（Ｌｏｎｚａ）上で試験する。正常なドナーからのＰＢＭＣの実質的な部分は、ＩＬ－２に応答する。試験化合物のＩＬ－２アゴニスト活性を評価するために、細胞を化合物またはＩＬ－２に曝露し、ウェスタンブロット解析によってＳＴＡＴ５リン酸化についてスコア化する。陽性化合物がＩＬ－２受容体の刺激を通じて作用していることを確認するための対照として、中和抗ｈｕＲβ抗体で処理した細胞でもアッセイを行う。
ＰＢＭＣのＳＴＡＴ５活性化を示すそれらの化合物を、ＩＬ－２と比較して化合物のサブユニットバイアスを評価するように設計されたフォローオンアッセイに供する。このアッセイは、ＩＬ－２Ｒ活性化の指標としての細胞内ｐＳＴＡＴ５と、ＩＬ－２Ｒβサブユニットである細胞表面ＣＤ２５との両方の検出を可能にするＦＡＣＳベースのプロトコールによってスコア化された、３０分間にわたる試験化合物およびＩＬ－２（１～１０００ＩＵ）の用量応答を決定することを含む。３つのＩＬ－２ＲサブユニットであるＩＬ－２Ｒβγｃを発現する細胞は、非常に高い親和性（約１０ｐＭ）でＩＬ－２に結合するため、低濃度のＩＬ－２に感受性であるが、ＩＬ－２Ｒβγｃのみを発現する細胞（約１ｎＭの親和性）は、活性化のために非常に高いＩＬ－２レベルへの曝露を必要とする。本開示によって提供される化合物は、ＩＬ－２ＲβおよびＩＬ－２Ｒγｃサブユニットに結合するために選択されたが、ＩＬ－２Ｒαには結合しないため、化合物の効力は、細胞上のＩＬ－２Ｒαの発現のレベルと相関しないことが予想され、本開示によって提供される化合物で処理されるか、またはＩＬ－２で処理される細胞の応答プロファイルの比較は、いずれかのバイアスを明らかにするはずである。
実施例３６
同定されたペプチド
各ライブラリがおよそ１０１０個の独立した組換えを含有し、各クローンが独自のペプチド配列を潜在的に示す確率的ライブラリが、ヒトＩＬ－２ＲβまたはヒトＩｌ－２Ｒγｃサブユニットに対する結合についてスクリーニングされている。
実施例３６
ｈＩＬ－２ＲのＳＴＡＴ５活性化試験のためのＮＫ－９２細胞の調製
ＮＫ－９２細胞を２４ウェルプレートに４×１０５細胞で１ｍＬの飢餓培地（ＳＭ）に播種し、３７℃、５％ＣＯ２で一晩インキュベートした。飢餓培地は、ＲＰＭＩ１６４０＋２０％のＦＢＳ＋２ｍＭのＬ－グルタミン＋１ｍＭのＮａＰｙｒ＋１０ｍＭのＨＥＰＥＳ＋０．１ｍＭのＢＭＥ（ｒｈＩＬ－２サプリメントなし）を含有した。
処理混合物は、１μｇ／ｍＬの抗ｈＩＬ－２中和抗体（０．２ｍｇ／ｍＬ原液）またはヤギＩｇＧ対照（１ｍｇ／ｍＬ原液）を調製した。
処理混合物および抗体混合物を、３７℃、５％ＣＯ２で３０分間細胞に加えた。次いで、各試料を１．５ｍＬの微量遠心チューブに移し、１，５００ＲＰＭで５分間スピンダウンした。細胞を１ｍＬ ＰＢＳ中で洗浄し、再度遠心分離した。
ホスファターゼおよびプロテアーゼ阻害剤カクテル（Ｔｈｅｒｍｏ＃７８４４２）を１：１００希釈でｍＰＥＲ緩衝液に添加した。細胞をペレット化した後、５０μＬのｍＰＥＲ緩衝液を各試料に添加し、繰り返しピペッティングして均質化した。
溶解物を室温で５分間１４，０００ＲＰＭで遠心分離した。上清をクリーンチューブに移し、－８０℃で冷凍保存した。
ヒトＩＬ－２抗体（ヤギＩｇＧ）をＲ＆Ｄ ＳｙｓｔｅｍｓからＮｏ．ＡＦ－２０２－ＮＡで入手し、正常なヤギＩｇＧ対照をＲ＆Ｄ ＳｙｓｔｅｍｓからＮｏ．ＡＢ－１０８－Ｃで入手し、抗ＳＴＡＴ５抗体（ウサギ）はＣｅｌｌ ＳｉｇｎａｌｉｎｇからＮｏ．９４２０５Ｓで、抗ｐＳＴＡＴ５抗体（ウサギ）はＣｅｌｌ ＳｉｇｎａｌｉｎｇからＮｏ．４３２２Ｓで、およびヤギ抗ウサギＩｇＧ－ＨＲＰをＪａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈからＮｏ．１１１－０３５－１４４で入手した。
試料の各々についての抗体、処理、およびワーキングストック調製物を表１８に提供する。化合物ＡおよびＢは、本開示によって提供されるＩＬ－２Ｒβγｃアゴニストである。

試料をウェスタンブロットに適用した。処理試薬には、抗ＳＴＡＴ５抗体（ウサギ）、Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、Ｎｏ．９４２０５Ｓ、抗ｐＳＴＡＴ５抗体（ウサギ）、Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、Ｎｏ．４３２２Ｓ、およびヤギ抗ウサギＩｇＧ－ＨＲＰ、Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ、Ｎｏ．１１１－０３５－１４４が含まれた。
アッセイを行うために、ＮＫ－９２細胞を９６ウェルプレート中で２０，０００細胞／ウェルで飢餓培地に播種した。１０μＭの最大濃度を有するペプチドおよび６．６７ｎＭの最大濃度を有するｒｈＬ－２を用いて３倍連続希釈で各ウェルに処理を加えた。次いで、細胞を３７℃で４８時間インキュベートした。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）試薬を添加し、細胞を２５℃で１０分間インキュベートしてから発光読み取りを行った。
実施例３７
ｈＩＬ－２ＲのＳＴＡＴ５活性化試験のためのＴＦ－１βおよびＴＦ－１細胞の調製
ＴＦ－１βおよびＴＦ－１親細胞をカウントした。細胞を収集し、２．５×１０６個の細胞を２００×ｇで５分間ペレット化した。ペレット状細胞を添加物を含まない２５ｍＬ ＲＰＭＩで洗浄した。
ＴＦ－１βおよびＴＦ－１親細胞をＴ２５フラスコ中、５ｍＬ飢餓培地（ＳＭ）中、５×１０５細胞で播種し、５％ＣＯ２下、３７℃でフラスコを直立させて一晩インキュベートした。
ＴＦ－１βおよびＴＦ－１親細胞をカウントし、生存率を決定した。必要に応じて、細胞をＳＭ中５×１０５細胞／ｍＬに希釈し、次いで懸濁液１ｍＬを２４ウェルディッシュの６ウェル／細胞株で添加し、５％ＣＯ２下３７℃でインキュベートした。
処理を、５％ＣＯ２下、３７℃で３０分間細胞に加えた。処理した細胞を１．５ｍＬの微量遠心チューブに移し、１，５００ＲＰＭで５分間スピンダウンした。細胞を１ｍＬのＰＢＳ中で洗浄し、再び遠心分離し、上清を吸引した。処理試薬には、抗ＳＴＡＴ５抗体（ウサギ）、Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、Ｎｏ．９４２０５Ｓ、抗ｐＳＴＡＴ５抗体（ウサギ）、Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、Ｎｏ．４３２２Ｓ、およびヤギ抗ウサギＩｇＧ－ＨＲＰ、Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ、Ｎｏ．１１１－０３５－１４４が含まれた。
ホスファターゼおよびプロテアーゼ阻害剤カクテル（Ｔｈｅｒｍｏ Ｎｏ．７８４４２）を１：１００希釈でｍＰＥＲ緩衝液に添加した。細胞をペレット化した後、５０μＬのｍＰＥＲ緩衝液を各試料に添加し、混合物を繰り返しピペッティングして均質化させた。
溶解物を１４，０００ＲＰＭで２５℃で５分間遠心分離した。上清をクリーンチューブに移し、－８０℃で凍結保存した。
試料の各々についての抗体、処理、およびワーキングストック調製物を表２０に提供する。
最後に、本明細書に開示される実施形態を実装する代替の方法が存在することに留意すべきである。したがって、本実施形態は例示的なものであり、限定的なものではなく、特許請求の範囲は、本明細書に与えられる詳細に限定されるものではなく、その範囲および均等物内で修正され得る。
配列番号表
ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物
代理人整理番号６２ＡＪ－０００４１０ＰＣ－３２０３９１

Claims (28)

  1. ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドを含む、ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物であって、
    前記ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドが、
    リガンドリンカーと、
    前記リガンドリンカーに結合した前記ＩＬ－２Ｒβリガンドであって、配列番号６１２、８０５～９０３、９１１～９３０、２５７５～２６５５、２６６１～２８９１、２９００～２９２６、２９２９～２９３９および９３０１～９３１４のうちのいずれか１つを含む、ＩＬ－２Ｒβリガンドと、
    前記リガンドリンカーに結合したＩＬ－２Ｒγｃリガンドであって、配列番号９４４～１０２８、１０３２～１０６０、１６０１～１６１３および９３４０～９３５３のうちのいずれか１つを含む、ＩＬ－２Ｒγｃリガンドと
    を含む、ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物。
  2. 前記ＩＬ－２Ｒβリガンドが、配列番号６１２、８６５、２８５８、および９３０１～９３１４のうちのいずれか１つを含む、請求項１に記載のＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物。
  3. 前記ＩＬ－２Ｒγｃリガンドが、配列番号９６５、および９３４０～９３５３のうちのいずれか１つを含む、請求項１または２に記載のＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物。
  4. 前記ＩＬ－２Ｒγｃリガンドが、配列番号９６５を含む、請求項３に記載のＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物。
  5. 前記ＩＬ－２Ｒβリガンドが、配列番号８６５を含む、請求項２から４のいずれか一項に記載のＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物。
  6. 前記ＩＬ－２Ｒβリガンドが、配列番号８６５を含み、
    前記ＩＬ－２Ｒγｃリガンドが、配列番号９６５を含む、
    請求項５に記載のＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物。
  7. 前記ＩＬ－２Ｒβリガンドが、配列番号２８５８を含む、請求項１から４のいずれか一項に記載のＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物。
  8. 前記ＩＬ－２Ｒβリガンドが、配列番号２８５８を含み、
    前記ＩＬ－２Ｒγｃリガンドが、配列番号９６５を含む、
    請求項７に記載のＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物。
  9. 前記ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドの２つのシステイン間のジスルフィド結合を含む、請求項１～８のいずれか一項に記載のＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物。
  10. 前記リガンドリンカーが、ペプチジルリガンドリンカーを含む、請求項１～９のいずれか一項に記載のＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物。
  11. 前記リガンドリンカーが、合成化学的リガンドリンカーを含む、請求項１～１０のいずれか一項に記載のＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物。
  12. 前記ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドが、配列番号１２６３～１２７０、４０７０～４０８５、および４０９０～４０９９のうちのいずれかを含む、請求項１に記載のＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物。
  13. 前記ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドが、配列番号１２６４を含む、請求項１に記載のＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物。
  14. 前記ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドが、配列番号１２６３を含む、請求項１に記載のＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物。
  15. 前記ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドが、配列番号４０９５を含む、請求項１に記載のＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物。
  16. 前記ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物が、構築パートナーを含み、前記ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドが、前記構築パートナーに結合し、
    前記構築パートナーが、ヒト血清アルブミン、ポリマー、ポリペプチド、Ｆｃ断片、免疫グロブリン断片、抗体、ポリエチレングリコール、およびポリエチレングリコール、ウイルス表面抗原、ウイルス様粒子、サイトカイン、組換え融合タンパク質、または細胞標的化部分を含む、請求項１～１５のいずれか一項に記載のＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物。
  17. 前記ＩＬ－２Ｒβγｃリガンドが、構築リンカーを介して前記構築パートナーに結合する、請求項１６に記載のＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物。
  18. 前記構築リンカーが、ペプチジルリガンドリンカーを含む、請求項１７に記載のＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物。
  19. 前記構築パートナーが、抗体を含み、前記抗体は、腫瘍抗原に向けられる、請求項１６～１８のいずれか一項に記載のＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物。
  20. 前記構築パートナーが、細胞標的化部分を含み、前記細胞標的化部分は、腫瘍標的化部分、免疫細胞標的化部分、またはそれらの組み合わせを含む、請求項１６～１８のいずれか一項に記載のＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物。
  21. 前記構築パートナーが、組換え融合タンパク質を含み、前記組換え融合タンパク質は、ｈＩｇＧ－Ｆｃ組換え融合タンパク質、またはｈＩｇＧ１－Ｆｃ組換え融合タンパク質を含む、請求項１６～１８のいずれか一項に記載のＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物。
  22. 請求項１～２１のいずれか一項に記載のＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物を含む、医薬組成物。
  23. がん、自己免疫疾患、炎症性疾患、感染性疾患、およびウイルス性疾患から選択される疾患を治療するための、請求項２２に記載の医薬組成物。
  24. がん、自己免疫疾患、炎症性疾患、感染性疾患、およびウイルス性疾患から選択される疾患を治療するための医薬組成物を製造するための、請求項１～２１のいずれか一項に記載のＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物の使用。
  25. 細胞を操作して、前記ＩＬ－２Ｒβγｃ結合化合物を発現させることを含む細胞療法で使用するための、請求項２２に記載の医薬組成物。
  26. エクスビボまたはインビボで免疫細胞の集団を増殖するための、請求項２２に記載の医薬組成物。
  27. ワクチンを増強するための、請求項２２に記載の医薬組成物。
  28. 免疫応答を修正するための、請求項２２に記載の医薬組成物。
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