JP7417514B2 - 包装体およびその製造方法 - Google Patents

Description

本発明は、酵素を有効成分として含む医薬組成物が容器に収容された包装体およびその製造方法に関する。

糖分解酵素を有効成分として含む医薬組成物は、様々な疾患分野で利用されている。例えば、アウドラザイム（登録商標）、エラプレース（登録商標）、ナグラザイム（登録商標）、リプレガル（登録商標）、およびビミジム（登録商標）など、約３ｍｇ／バイアルから約１０ｍｇ／バイアルの糖分解酵素を有効成分として含むリソソーム病治療用医薬組成物が、注射用の液体製剤として市販されている。また、例えば、国際公開第２０１２／０８１２２７号には、糖分解酵素（特にコンドロイチナーゼＡＢＣ）を有効成分として含む椎間板ヘルニア治療剤が記載されている。

液体製剤と比較して、凍結乾燥製剤は、物流コストが抑えられるという点で優れている。一方、酵素の力価は凍結乾燥により低下する場合があるため、凍結乾燥製剤の製造に際しては、所望の酵素活性を有する製品が生産できるよう、工夫がされている。例えば、国際公開第２０１２／０８１２２７号の実施例では、少量の酵素を凍結乾燥することによる力価の低下を考慮して、投薬１回分のために必要な量である単位用量を大きく超える量で調製した酵素溶液を容器に収容した後、凍結乾燥製剤を得ている。そして当該文献では、得られた凍結乾燥製剤を溶解希釈した後、必要量を分取することで、１回投与に必要な活性成分が含まれる投与液を調製している。

ここで、単位用量を超える量で酵素溶液を予め調製してから、その一部を１回投与量として分取する手法では、投与に使用されなかった残部の酵素は廃棄されることとなる。このため、高価な酵素の残部が無駄になる場合があった。また、一旦調製した酵素溶液から少量を取り分ける作業が必要なため、当該作業中における活性の低下にも気を配る必要があった。

一方、本発明者は、凍結乾燥製剤を収容する包装体の製造において、収容する糖分解酵素を少量とすることで起こる力価の低下が予想外に大きくなることを見出した。本発明者はさらに、糖分解酵素の収容量が従来の医薬組成物よりも低い水準である場合、かような力価の低下が特に顕著であることをも見出した。

したがって、本発明は、収容する糖分解酵素を少量とすることで起こる力価の低下が抑制された、糖分解酵素を有効成分として含む医薬組成物が容器に収容されてなる包装体を提供することを目的とする。

本発明の一側面は、医薬組成物と容器とを含み、前記医薬組成物は糖分解酵素を有効成分として含む凍結乾燥製剤であり、前記容器は前記医薬組成物を収容し、当該容器の内表面にファインセラミック、シリコーン樹脂、およびフッ素樹脂からなる群から選択される材料の少なくとも１種を備える、包装体に関する。

本発明の別の側面は、医薬組成物とそれを収容する容器とを含む包装体の製造方法であり、ファインセラミック、シリコーン樹脂、およびフッ素樹脂からなる群から選択される材料の少なくとも１種を内表面に備える容器に、糖分解酵素を含む溶液を収容する工程と、前記溶液を凍結乾燥して医薬組成物を得る工程とを含む、製造方法に関する。

本発明の一側面によれば、糖分解酵素を含む医薬組成物が容器に収容された包装体であって、収容される糖分解酵素量が少ないことに起因する力価低下が抑制された包装体が提供できる。

以下、本発明を詳説するが、本発明はこれらの実施形態に限定されるものではない。本明細書において「工程」との語は、独立した工程だけではなく、他の工程と明確に区別できない場合であってもその工程の所期の目的が達成されれば、本用語に含まれる。また組成物中の各成分の含有量は、組成物中に各成分に該当する物質が複数存在する場合、特に断らない限り、組成物中に存在する当該複数の物質の合計量を意味する。

（１）医薬組成物および包装体
医薬組成物は、糖分解酵素を有効成分として含む凍結乾燥製剤である。医薬組成物は、単位用量製剤であってもよい。本明細書において「単位用量」は、１回の投薬のために用意される必要量であり、単位用量製剤は医薬組成物が単位用量で製剤化されてなる。単位用量は、有効量に加えて、１回の投与液調製のために必要な増仕込み量を含み得る。

包装体は、少なくとも、容器と、当該容器に収容された医薬組成物とを含む。

「糖分解酵素」とは、医薬に用いられ得るものであれば、特に限定されない。例えば、糖分解酵素としては、グリコサミノグリカン分解酵素；グリコシダーゼ；ペプチド：Ｎ－グリカナーゼ（ＰＮＧａｓｅＦ、エンドグリコシダーゼＨなど）、α－Ｌ－イズロニダーゼ、α－ガラクトシダーゼ、β－ガラクトシダーゼ、β－グルクロニダーゼ、β－グルコセレブロシダーゼ、イデュルスルファーゼ、イズロン酸－２－スルファターゼ、Ｎ－アセチルガラクトサミン－６－スルファターゼ、Ｎ－アセチルガラクトサミン－４－スルファターゼ等を挙げることができる。グリコサミノグリカン分解酵素としては、例えば、ケラタナーゼＩ、ケラタナーゼＩＩなどのケラタナーゼ；ヘパリナーゼＩ、ヘパリナーゼＩＩ、ヘパリナーゼＩＩＩなどのヘパリナーゼ；ヘパリチナーゼＩＶ、ヘパリチナーゼＶ、ヘパリチナーゼＴ－Ｉ、ヘパリチナーゼＴ－ＩＩ、ヘパリチナーゼＴ－ＩＩＩ、ヘパリチナーゼＴ－ＩＶなどのヘパリチナーゼ；コンドロイチナーゼＡＢＣ、コンドロイチナーゼＡＣＩ、コンドロイチナーゼＡＣＩＩ、コンドロイチナーゼＡＣＩＩＩ、コンドロイチナーゼＢ、コンドロイチナーゼＣなどのコンドロイチナーゼ；放線菌由来のヒアルロニダーゼ、連鎖球菌由来のヒアルロニダーゼなどのヒアルロニダーゼ等が挙げられる。またグリコシダーゼとしては、例えば、微生物由来のβ－ガラクトシダーゼ、α－ガラクトシダーゼなどが挙げられる。

一実施形態では、グリコサミノグリカン分解酵素が、糖分解酵素として用いられる。グリコサミノグリカン分解酵素としては、ヒアルロニダーゼ、コンドロイチナーゼ、ヘパリナーゼ、ケラタナーゼ、ヘパラナーゼ、ヘパリチナーゼ等が挙げられる。糖分解酵素としては、中でもコンドロイチナーゼが好ましく、コンドロイチナーゼＡＢＣ、コンドロイチナーゼＢ、コンドロイチナーゼＡＣＩ、コンドロイチナーゼＡＣＩＩがより好ましく、コンドロイチナーゼＡＢＣ（コンドリアーゼともいう）が特に好ましい。なお、コンドロイチナーゼＡＢＣは、ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸、コンドロイチン、デルマタン硫酸等を、不飽和糖を含む二糖またはオリゴ糖に分解する酵素である。

糖分解酵素の由来は特に限定されない。好ましい一実施形態では、微生物由来の糖分解酵素が採用される。微生物の非制限的な例としては、例えば、バチルス属、エスケリキア属、シュードモナス属、フラボバクテリウム属、プロテウス属、アースロバクター属、ストレプトコッカス属、バクテロイデス属、アスペルギルス属、エリザベトキンギア属、およびストレプトマイセス属等が挙げられる。例えば、糖分解酵素がコンドロイチナーゼＡＢＣである場合は、プロテウス・ブルガリス（Ｐｒｏｔｅｕｓ ｖｕｌｇａｒｉｓ）由来のもの（例えば、プロテウス・ブルガリス由来のコンドロイチナーゼＡＢＣ）が例示できる。

糖分解酵素の製造方法等は特に限定されない。糖分解酵素の例示的な製造方法は、糖分解酵素を産生する微生物または動物細胞の培養物を得る工程、および培養物から糖分解酵素を回収する工程を含む。

微生物によって産生される糖分解酵素は、当該微生物が本来的に有するものであってもよく、または後述する遺伝子工学的手法等により目的とする酵素を産生するように当該微生物を改変して得たものであってもよい。例えば、糖分解酵素がコンドロイチナーゼＡＢＣである場合は、プロテウス・ブルガリス等の微生物を培養して生産させてもよく、コンドロイチナーゼＡＢＣをコードするＤＮＡ等を用いて遺伝子工学的手法で生産させてもよい。また、糖分解酵素は、生物が本来的に有するものと同一アミノ酸配列であってもよいが、医薬品としての所望の目的を達成し得る限りにおいて、一部のアミノ酸が欠損、置換および／または付加等されたものであってもよい。

微生物としては、例えば、バチルス属、エスケリキア属、シュードモナス属、フラボバクテリウム属、プロテウス属、アースロバクター属、ストレプトコッカス属、バクテロイデス属、アスペルギルス属、エリザベトキンギア属、およびストレプトマイセス属の微生物が例示できる。微生物の生育条件（例えば、培地、培養条件等）は、用いる微生物に合わせて適宜選択され、当業者であれば任意に設定できる。微生物を用いて糖分解酵素を製造することにより、動物細胞を用いて糖分解酵素を製造する場合に比べ、安価に大量に製造することが可能である。

糖分解酵素の製造方法は、目的の糖分解酵素をコードする遺伝子を発現する組替えベクターを宿主に導入する工程を含んでもよい。ベクターとしては、例えば、導入した遺伝子を発現させることが可能な適当な（好ましくは、プロモーター等の調節配列を含む）発現ベクター（例えば、ファージベクター、プラスミドベクター等）を使用することができる。ベクターは、宿主細胞に応じて適宜選択する。より具体的には、このような宿主－ベクター系としては、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）と、ｐＥＴシリーズ、ｐＴｒｃＨｉｓ、ｐＧＥＸ、ｐＴｒｃ９９、ｐＫＫ２３３－２、ｐＥＺＺ１８、ｐＢＡＤ、ｐＲＳＥＴ、およびｐＳＥ４２０等の原核細胞用の発現ベクターとの組み合わせ；ＣＯＳ－７細胞、ＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞と、ｐＣＭＶシリーズ、ｐＭＥ１８Ｓシリーズ、ｐＳＶＬ等の哺乳類細胞用発現ベクターとの組み合わせの他、宿主細胞として昆虫細胞、酵母、枯草菌などが例示され、これらに対応する各種ベクターが例示される。

また、上記ベクターは、組み込んだ遺伝子がコードするタンパク質と、マーカーペプチド、シグナルペプチド等との融合タンパク質を発現するように構築されたものを用いることもできる。当該ペプチドとしては例えばプロテインＡ、インスリンシグナル配列、Ｈｉｓタグ、ＦＬＡＧ、ＣＢＰ（カルモジュリン結合タンパク質）、ＧＳＴ（グルタチオン－Ｓ－トランスフェラーゼ）などが挙げられる。いずれのベクターを用いる場合であっても、常法に従って、挿入核酸配列とベクターとを連結することが可能なように制限酵素などによって処理し、必要に応じて平滑化、粘着末端の連結等を行った後、挿入核酸配列とベクターとを連結をすることができる。

宿主のベクターによる形質転換は、常法によって行うことができる。例えば、市販のトランスフェクション用試薬を用いる方法、ＤＥＡＥ－デキストラン法、エレクトロポレーション法、遺伝子銃による方法等によってベクターを宿主に導入し、形質転換を行うことができる。

糖分解酵素を産生する微生物または動物細胞の生育条件（例えば、培地、培養条件等）は、用いる微生物、細胞等に合わせて適宜選択される。例えば、大腸菌を用いる場合は、ＬＢ培地等を主成分として適宜調製した培地を用いることができる。また例えば、宿主細胞としてＣＯＳ－７細胞を用いる場合には、２％（ｖ／ｖ）程度のウシ胎仔血清を含有するＤＭＥＭ培地を用い、３７℃条件下で培養することができる。

生育物からの糖分解酵素の回収は、産生される糖分解酵素の形態に応じて、公知のタンパク質の抽出・精製方法によって行うことができる。例えば糖分解酵素が、培地（培養液の上清）中に分泌される可溶性の形態で産生される場合には、培地を採取し、これをそのまま糖分解酵素として用いてもよい。また糖分解酵素が細胞質中に分泌される可溶性の形態、または不溶性（膜結合性）の形態で産生される場合には、窒素キャビテーション装置を用いる方法、ホモジナイズ、ガラスビーズミル法、音波処理、浸透ショック法、凍結融解法等の細胞破砕による抽出、界面活性剤抽出、またはこれらの組み合わせ等の処理操作によって抽出することができる。糖分解酵素は、塩析、硫安分画、遠心分離、透析、限外ろ過法、吸着クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、疎水性クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、ゲル浸透クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、電気泳動法等、およびこれらの組み合わせ等の従来公知の手法により精製してもよい。

糖分解酵素は１種を単独で、または２種以上を組み合わせて用いてもよい。また、糖分解酵素は、アセチル化、ポリアルキレングリコール化（例えば、ポリエチレングリコール化）、アルキル化、アシル化、ビオチン化、ラベル化（例えば、蛍光物質、発光物質などのラベル）、リン酸化、硫酸化などの、従来公知の化学修飾基が付加されたものであってもよい。

医薬組成物は、薬学上許容される担体を含み得る。本明細書において、「薬学上許容される担体」としては、慣用の賦形剤、結合剤、緩衝剤、注射用水、等張化剤、保存剤、無痛化剤等、通常医薬に用いられる成分が例示される。

緩衝剤としては、例えば、塩酸、水酸化ナトリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、リン酸、リン酸二水素カリウム、リン酸水素二カリウム、リン酸二水素ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム、アミノ酢酸、安息香酸ナトリウム、クエン酸、クエン酸ナトリウム、酢酸、酢酸ナトリウム、酒石酸、酒石酸ナトリウム、乳酸、乳酸ナトリウム、エタノールアミン、アルギニン、エチレンジアミン等からなる群から選択される１種以上を含有する緩衝剤が例示され、リン酸二水素ナトリウム、およびリン酸水素二ナトリウムの少なくとも１種が好ましい。

等張化剤としては、塩化ナトリウム、塩化カリウム、グリセリン、マンニトール、ソルビトール、ホウ酸、ホウ砂、ブドウ糖、プロピレングリコールなどが挙げられる。

その他の薬学上許容される担体として具体的には、例えば、デキストラン類、スクロース、ラクトース、マルトース、キシロース、トレハロース、マンニトール、キシリトール、ソルビトール、イノシトール、血清アルブミン、ゼラチン、クレアチニン、ポリアルキレングリコール、非イオン性界面活性剤（例えば、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ショ糖脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコール）などが挙げられ、中でもスクロースおよびポリアルキレングリコールの少なくとも１種が好ましく、スクロースおよびポリエチレングリコールの少なくとも１種がより好ましい。ポリエチレングリコールは平均分子量が２００以上２５０００以下であるものが好ましく、さらには常温で固体であるもの、例えば、平均分子量が２０００以上９０００以下であるものがより好ましく、３０００以上４０００以下であるものが更に好ましい。ポリエチレングリコールとしては、例えば平均分子量３２５０、３３５０および４０００のものを例示することができる。薬学上許容される担体としてポリエチレングリコールとスクロースとの混合物を用いる場合、ポリエチレングリコール／スクロースの重量比が一般に１／１０から１０／１までの範囲となるようにすることが好ましく、ポリエチレングリコール／スクロースの重量比が２／１程度となるようにすることがより好ましい。

本明細書において、「容器」とは、医薬組成物を収容できるものであれば特に限定されない。容器としては、シリンジ、バイアル、アンプル、注射器などが例示され、バイアルであることが好ましい。容器の母材はガラス、プラスチックなどが例示でき、ガラスであることが好ましい。ガラスには例えば、ホウケイ酸ガラス、ソーダ石灰ガラスなどが含まれる。容器は、栓部材またはキャップをさらに有することが好ましく、ゴム栓を有することがより好ましい。容器のサイズは特に限定されないが、０．５ｍＬ以上１００ｍＬ以下が例示され、１ｍＬ以上１０ｍＬ以下が好ましく、２ｍＬ以上４ｍＬ以下がより好ましく、３ｍＬが更に好ましい。医薬組成物が容器に収容された包装体は、窒素ガス、アルゴンガスなどの不活性ガスが封入されていてもよく、あるいは、脱気されていてもよい。

容器はその内表面に、ファインセラミック、シリコーン樹脂、およびフッ素樹脂からなる群から選択される材料の少なくとも１種を備え得る。ファインセラミックとしては、例えば、酸化ケイ素、窒化ケイ素、酸窒化ケイ素、酸化アルミニウム、窒化アルミニウム、酸窒化アルミニウムなどの金属酸化物、金属窒化物、金属酸窒化物などが挙げられる。フッ素樹脂としては、例えば、ポリテトラフルオロエチレン、ポリフッ化ビニリデン、ポリクロロトリフルオロエチレン、テトラフルオロエチレン・パーフルオロアルキルビニルエーテル共重合体、テトラフルオロエチレン・ヘキサフルオロプロピレン共重合体、テトラフルオロエチレン・エチレン共重合体、クロロトリフルオエチレン・エチレン共重合体などが挙げられる。シリコーン樹脂としては、オルガノポリシロキサン（例えば、ジメチルポリシロキサンなど）およびその変性物（例えば、ポリエーテル変性、フェノール変性、アミン変性、シラノール変性、トリメチルシリル変性、カルビノール変性、カルボキシル変性、エポキシ変性、アクリル変性、メタアクリル変性など）などが挙げられる。前記材料は、容器の内表面のうち、少なくとも医薬組成物が接触する部分に備えられていればよい。前記材料は容器の内表面の少なくとも一部に備えられる。一実施形態では、容器の内表面の全面に前記材料が備えられる。別の実施形態では、容器自体が前記材料で形成されてなる。好ましい一実施形態では、容器は、内表面に前記材料を含有する膜を備える。容器が内表面に前記材料を含有する膜を有する場合、その厚みは、例えば、０．１μｍ以上０．２μｍ以下である。より好ましい一実施形態では、容器の内表面において医薬組成物が接触し得るすべての部分に前記材料を含有する膜を備える。

凍結乾燥された酵素の貯蔵安定性、例えば力価残存率の観点から、好ましい一実施形態では、前記材料は、酸化ケイ素、窒化ケイ素、酸窒化ケイ素、酸化アルミニウム、窒化アルミニウム、および酸窒化アルミニウムからなる群から選択される。前記材料は、酸化ケイ素、窒化ケイ素、および酸窒化ケイ素からなる群から選択されることがより好ましく、酸化ケイ素であることが更に好ましく、二酸化ケイ素であることが特に好ましい。

前記材料を含有する膜は、従来公知の湿式または乾式の成膜方法で作製され得る。湿式の成膜方法には、例えば、塗布法が含まれる。前記材料を含有する膜は、例えば、化学気相蒸着法（ＣＶＤ法）、物理気相蒸着法、スプレー熱分解法、スパッタ法等の乾式成膜方法により形成されてなることが好ましく、ＣＶＤ法またはスプレー熱分解法により形成されてなることがより好ましい。凍結乾燥された酵素の貯蔵安定性、例えば力価残存率の観点から、ＣＶＤ法により形成されてなることが更に好ましく、中でもプラズマ化学気相蒸着法（プラズマＣＶＤ法）により形成されてなることが特に好ましい。

容器としては、例えば、内表面に酸化ケイ素、窒化ケイ素、および酸窒化ケイ素からなる群から選択される材料を含有し、ＣＶＤ法により形成されてなる膜を備えるもの：内表面に二酸化ケイ素を含有し、ＣＶＤ法により形成されてなる膜を備えるもの：内表面に酸化ケイ素、窒化ケイ素、および酸窒化ケイ素からなる群から選択される材料を含有し、プラズマＣＶＤ法により形成されてなる膜を備えるもの：内表面に二酸化ケイ素を含有し、プラズマＣＶＤ法により形成されてなる膜を備えるもの：などが例示できるが、これらに限定されるものではない。

前記材料を含有する膜を内表面に備える容器としては、市販のシリカコートバイアル、シリコーンコートバイアル、またはフッ素樹脂コートバイアル等を使用してもよい。

容器の内表面に上記したような材料が備えられることにより、例えば、金属イオン等の夾雑物が容器母材から医薬組成物へ混入することが抑制され得ると考えられる。夾雑物の混入抑制が、本発明における酵素活性の低下抑制効果と関連している可能性が考えられる。なお、以上の推定メカニズムは、本発明の技術的範囲をなんら制限するものではない。

凍結乾燥製剤の水分含量は、例えば５％（ｗ／ｗ）以下であり、３％（ｗ／ｗ）以下であることが好ましく、２％（ｗ／ｗ）以下であることがより好ましい。なお、本明細書において水分含量は、電量滴定法によって測定された値である。

ある実施形態では、容器あたりの糖分解酵素の収容量は、例えば、１０μｇ未満である。容器あたりの糖分解酵素の収容量は、０．１μｇ、０．５μｇ、１μｇ、２μｇ、２．５μｇ、４μｇ、５μｇ、６μｇ、７μｇ、８μｇ、９μｇ、９．５μｇ、９．８μｇおよび１０μｇ未満のうちの任意数値の組合せからなる数値範囲で設定され得る。すなわち、容器あたりの糖分解酵素の収容量は、０．１μｇ以上、０．５μｇ以上、１μｇ以上、２μｇ以上、２．５μｇ以上、または４μｇ以上であってもよく、５μｇ以下、６μｇ以下、７μｇ以下、９．５μｇ以下、または９．８μｇ以下であってもよい。好ましい一実施形態では、容器あたりの糖分解酵素の収容量は、０．１μｇ以上９．８μｇ以下である。より好ましい一実施形態では、容器あたりの糖分解酵素の収容量は、２μｇ以上７μｇ以下である。特に好ましい一実施形態では、容器あたりの糖分解酵素の収容量は、２．５μｇ以上５μｇ以下である。

「力価」とは、糖分解酵素１μｇに対する酵素の活性（ユニット）を意味し、ユニット／μｇの単位で示される。一実施形態では、凍結乾燥された糖分解酵素の力価は０．３（ユニット／μｇ）以上である。別の実施形態では、凍結乾燥された糖分解酵素の力価は０．３（ユニット／μｇ）以上１（ユニット／μｇ）以下である。別の実施形態では、凍結乾燥された糖分解酵素の力価は０．３２（ユニット／μｇ）以上１（ユニット／μｇ）以下である。別の実施形態では、凍結乾燥された糖分解酵素の力価は０．３３（ユニット／μｇ）以上１（ユニット／μｇ）以下である。別の実施形態では、凍結乾燥された糖分解酵素の力価は０．３６（ユニット／μｇ）以上１（ユニット／μｇ）以下である。

一実施形態では、凍結乾燥された糖分解酵素の力価は０．３（ユニット／μｇ）以上０．５（ユニット／μｇ）以下である。別の実施形態では、凍結乾燥された糖分解酵素の力価は０．３３（ユニット／μｇ）以上０．５（ユニット／μｇ）以下、または０．３６（ユニット／μｇ）以上０．５（ユニット／μｇ）以下である。

「ユニット（Ｕ、単位）」とは、糖分解酵素が有する活性を示しており、１ユニットは、至適温度、至適ｐＨ条件下で、単位時間あたりに基質から１マイクロモルに相当する分解物を遊離させる量を意味する。例えば、糖分解酵素がコンドロイチナーゼＡＢＣの場合、１ユニットとは、ｐＨ８．０、３７℃の条件下で、コンドロイチン硫酸ナトリウム（日本薬局方外医薬品規格２００２に適合するコンドロイチン硫酸エステルナトリウム）から１分間あたり１マイクロモルの不飽和二糖を遊離させる量を意味する。

一実施形態では、容器に収容する前の力価を１００％とした場合、1回投与に必要な量の医薬組成物を容器に収容した後の糖分解酵素の力価は、例えば７５％以上である。好ましい一実施形態では、糖分解酵素の力価は、容器に収容する前の力価を１００％とした場合、1回投与に必要な量の医薬組成物を容器に収容した後の糖分解酵素の力価は、８０％以上である。

一実施形態では、容器あたりの酵素活性（糖分解酵素の酵素活性）は、例えば、５ユニット未満である。別の一実施形態では、容器あたりの酵素活性は、例えば、４．５ユニット以下である。別の一実施形態では、容器あたりの酵素活性は、例えば、４．１ユニット以下である。別の一実施形態では、容器あたりの酵素活性は、例えば、４ユニット以下である。別の一実施形態では、容器あたりの酵素活性は、例えば、０．１ユニット以上４．５ユニット以下である。別の一実施形態では、容器あたりの酵素活性は、例えば、０．１ユニット以上４．１ユニット以下である。別の一実施形態では、容器あたりの酵素活性は、例えば、０．１ユニット以上４ユニット以下である。別の一実施形態では、容器あたりの酵素活性は、０．９ユニット以上２．５ユニット以下、０．９ユニット以上２ユニット以下、１．２５ユニット以上２ユニット以下、または１．５ユニットである。

本発明の一実施形態によれば、例えば、１２ヶ月以上の貯蔵安定性を有する包装体が提供され得る。好ましい一実施形態では、２４ヶ月以上の貯蔵安定性を有する包装体であり、より好ましい一実施形態では、３６ヶ月以上の貯蔵安定性を有する包装体である。貯蔵安定性の上限は特に制限されないが、例えば、４８ヶ月以下、または３６ヶ月以下であり得る。

ここで、「貯蔵安定性を有する」とは、所定条件（例えば、５℃±３℃で１２ヶ月以上、２５℃±２℃で６か月以上、または４０℃±２℃で３ヶ月以上もしくは６ヶ月以上）で密封・遮光状態で静置して貯蔵した後における力価（％）が、薬学上許容される程度に維持されていることをいう。本明細書において「貯蔵安定性」は、例えば力価残存率（％）で評価される。例えば、５℃±３℃で１２ヶ月以上の間試料を貯蔵した後の力価残存率は、例えば９０％以上であり、９５％以上であることが好ましい。５℃±３℃で２４ヶ月以上の間試料を貯蔵した後の力価残存率は、例えば、９０％以上であり、９５％以上であることが好ましい。５℃±３℃で３６ヶ月以上の間試料を貯蔵した後の力価残存率は、例えば、９０％以上であり、９５％以上であることが好ましい。２５℃±２℃で６ヶ月以上の間試料を貯蔵した後の力価残存率は、例えば、９０％以上であり、９５％以上であることが好ましい。４０℃±２℃で３ヶ月以上の間試料を貯蔵した後の力価残存率は、例えば、９０％以上であり、９５％以上であることが好ましい。４０℃±２℃で６ヶ月以上の間試料を貯蔵した後の力価残存率は、例えば、６５％以上であり、７０％以上であることが好ましく、７５％以上であることがより好ましい。なお、「力価残存率（％）」とは、本発明に係る包装体を所定温度（例えば、５℃±３℃、２５℃±３℃または４０℃±２℃）の条件下で貯蔵した後における力価（％）を、貯蔵開始時の力価を１００％として算出した値を意味する。これが１００％ならば、貯蔵開始前後で酵素活性の値が等しいことになる。

本発明の一実施形態によれば、１２ヶ月以上の有効期間を有する包装体が提供され得る。好ましい一実施形態では、２４ヶ月以上の有効期間を有する包装体であり、より好ましい一実施形態では、３６ヶ月以上の有効期間を有する包装体である。有効期間の上限は特に制限されないが、例えば、４８ヶ月以下、または３６ヶ月以下であり得る。

本明細書における「有効期間」とは、医薬品がその有用性を確認された時点から一定の貯蔵方法（例えば、５℃±３℃で密封・遮光下、２５℃±２℃で密封・遮光下または４０℃±２℃で密封・遮光下で静置）で貯蔵した時、その確認時点における医薬品と同等の有用性が期待できる期間を意味する。

本明細書において、前記医薬組成物の用途は、糖分解酵素の用途として公知の種々の用途が選択され得る。例えば、糖分解酵素を有効成分として含む医薬組成物の用途は、特に限定されないが、ヘルニア症、リソソーム病、ケロイド、肥厚性瘢痕、筋ジストロフィー、または脊髄損傷の治療が例示できる。好ましい一実施形態では、医薬組成物はヘルニア症の治療用に用いられる。より好ましい一実施形態では、椎間板ヘルニア（例えば、腰椎椎間板ヘルニア）の治療用に用いられる。

本明細書において「治療」は、完全な治癒のみならず、疾患の一部または全部の症状の改善、および疾患の進行の抑制（維持および進行速度の低下を含む）ならびに予防を含む。ここで予防とは、疾患に伴う諸症状が生じていない場合において、当該諸症状の発生を未然に防ぐことを含む。また、予防とは、例えば明確な器質的病変が認められていないものの、疾患に伴う諸症状が生じている場合において、当該器質的な病変の発生を未然に防ぐこと、および当該諸症状のうち顕在化していない症状の発展を抑制することを含む。

本明細書において「有効成分として」および「有効量」とは、合理的なリスク／ベネフィット比に見合う量であり、且つ過度の有害副作用（毒性、刺激性など）を有さずに、所望の応答を得るのに十分な成分の量を意味する。当該「有効成分として」および「有効量」は、投与対象となる患者の症状、体格、年齢、性別等の諸要素によって変化し得る。しかしながら、当業者であれば、諸要素の組み合わせのそれぞれについての個別の試験を要するまでもなく、一または複数の具体的な試験例の結果と技術常識とに基づいて、他の場合における有効量を決定することができる。

本明細書において「患者」とは、動物、好ましくは哺乳動物（例えば、ヒト、マウス、ラット、ハムスター、モルモット、ウサギ、イヌ、ネコ、ウマ等）、より好ましくはヒトを意味する。

好ましい一実施形態では、容器に収容された医薬組成物は、滅菌状態で提供される。医薬組成物の滅菌方法は特に制限されず、ろ過滅菌、乾熱滅菌等、従来公知の手法によって行われ得る。

医薬組成物の投与形態も特に制限されず、治療すべき疾患、症状、重症度、患者の属性（例えば、年齢など）等に応じて、適宜選択され得る。凍結乾燥製剤は、任意の溶媒（例えば、注射用水、生理食塩液など）に溶解させて使用され得る。投与形態は、例えば、椎間板内注射、静脈注射、筋肉注射、皮下注射、点滴などの任意の投与経路が挙げられる。医薬組成物の投与量もまた、治療すべき疾患、症状、重症度、患者の属性（例えば、年齢など）等に応じて、当業者であれば適宜設定できる。

本発明の好ましい具体的態様を以下に例示するが、本発明の技術的範囲を制限するものではない。以下、医薬組成物の適用が椎間板ヘルニアであるものを例に説明することもあるが、適用される疾患等を問わない「医薬組成物」であってもよいことは当然である。

（包装体１）
有効成分： コンドロイチナーゼＡＢＣ
容器の内表面が備える材料： 二酸化ケイ素
容器あたりの有効成分の収容量： ２．５μｇ以上１０μｇ未満
酵素力価： ０．３２（ユニット／μｇ）以上１（ユニット／μｇ）以下
容器あたりの酵素活性： ０．４ユニット以上４．５ユニット以下
適用： 椎間板ヘルニア

（包装体２）
有効成分： コンドロイチナーゼＡＢＣ
容器の内表面が備える材料： シリコーン樹脂
容器あたりの有効成分の収容量： ２．５μｇ以上１０μｇ未満
酵素力価： ０．３２（ユニット／μｇ）以上１（ユニット／μｇ）以下
容器あたりの酵素活性： ０．４ユニット以上４．５ユニット以下
適用： 椎間板ヘルニア

（包装体３）
有効成分： コンドロイチナーゼＡＢＣ
容器の内表面が備える材料： フッ素樹脂
容器あたりの有効成分の収容量： ２．５μｇ以上１０μｇ未満
酵素力価： ０．３２（ユニット／μｇ）以上１（ユニット／μｇ）以下
容器あたりの酵素活性： １ユニット以上４．５ユニット以下
適用： 椎間板ヘルニア

（包装体４）
有効成分： コンドロイチナーゼＡＢＣ
容器の内表面が備える材料： 二酸化ケイ素、シリコーン樹脂およびフッ素樹脂から選択される少なくとも１種
容器あたりの有効成分の収容量： ２μｇ以上５μｇ以下
酵素力価： ０．３２（ユニット／μｇ）以上０．５（ユニット／μｇ）以下
容器あたりの酵素活性： １．２５ユニット以上２．５ユニット以下
適用： 椎間板ヘルニア
（包装体５）
有効成分： コンドロイチナーゼＡＢＣ
容器の内表面が備える材料： 二酸化ケイ素、シリコーン樹脂およびフッ素樹脂から選択される少なくとも１種
容器あたりの有効成分の収容量： ２．５μｇ以上５μｇ以下
酵素力価： ０．３２（ユニット／μｇ）以上０．５（ユニット／μｇ）以下
容器あたりの酵素活性： １．５ユニット
適用： 椎間板ヘルニア

（２）キット
一実施形態では、前記包装体、およびヘルニア症、リソソーム病、ケロイド、肥厚性瘢痕、筋ジストロフィー、または脊髄損傷の治療のための前記医薬組成物の使用を説明する添付文書またはラベルを含むキットが提供される。

キットは、前記医薬組成物が容器に収容された包装体、ならびにヘルニア症、リソソーム病、ケロイド、肥厚性瘢痕、筋ジストロフィー、または脊髄損傷の治療のための前記医薬組成物の使用を説明する添付文書またはラベルを含んでいればよい。すなわち、更に他の構成成分を含むものであってもよい。

（３）製造方法
本発明の一側面は、医薬組成物とそれを収容する容器とを含む包装体の製造方法であり、ファインセラミック、シリコーン樹脂、およびフッ素樹脂からなる群から選択される材料の少なくとも１種を内表面に備える容器に、糖分解酵素を含む溶液を収容する第１工程と、前記溶液を凍結乾燥して医薬組成物を得る第２工程とを含む、製造方法に関する。

第１工程において、糖分解酵素を含む溶液の調製に用いる溶媒は、特に限定されないが、例えば水、生理食塩水、リン酸緩衝液等の緩衝液が採用され得る。また、溶液は、上記したような薬学上許容される担体を含んでいてもよい。容器に収容する糖分解酵素を含む溶液のｐＨは特に限定されないが、６．５以上７．５以下の範囲であることが好ましい。

一実施形態では、第１工程において、容器あたりの酵素活性が５ユニット未満となるように、糖分解酵素を含む溶液を容器に収容する。別の実施形態では、第１工程において、容器あたりの酵素活性が４．５ユニット以下となるように、糖分解酵素を含む溶液を容器に収容する。別の実施形態では、第１工程において、容器あたりの酵素活性が４．１ユニット以下となるように、糖分解酵素を含む溶液を容器に収容する。別の実施形態では、第１工程において、容器あたりの酵素活性が０．５ユニット以上４．５ユニット以下となるように、糖分解酵素を含む溶液を容器に収容する。別の実施形態では、第１工程において、容器あたりの酵素活性が０．５ユニット以上４．１ユニット以下となるように、糖分解酵素を含む溶液を容器に収容する。好ましい一実施形態では、第１工程において、容器あたりの酵素活性が４ユニット以下となるように、糖分解酵素を含む溶液を容器に収容する。より好ましい一実施形態では、容器あたりの酵素活性が０．５ユニット以上４ユニット以下となるように、溶液を容器に収容する。別の一実施形態では、容器あたりの酵素活性が０．５ユニット以上３．５ユニット以下、１．１ユニット以上３ユニット以下、１ユニット以上２ユニット以下、１．２５ユニット以上１．６ユニット以下、または１．５ユニットとなるように、溶液を容器に収容する。

第２工程は、糖分解酵素を含む溶液を凍結させ、その凍結状態のまま昇華させることにより水分を除去して乾燥させる凍結乾燥工程を含む。第２工程においては、凍結乾燥後の医薬組成物の水分含量が、例えば５％（ｗ／ｗ）以下となるまで乾燥が行われる。第２工程における乾燥は、凍結乾燥後の医薬組成物の水分含量が３％（ｗ／ｗ）以下となるまで行われることが好ましく、２％（ｗ／ｗ）以下となるまで行われることがより好ましい。

本発明に係る製造方法は、「前記（１）組成物および包装体」および「前記（２）キット」の記述、例示、好ましい範囲などがそのまま適用できる。

本発明は、別の態様として、ヘルニア症、リソソーム病、ケロイド、肥厚性瘢痕、筋ジストロフィー、または脊髄損傷の処置における包装体の使用であって、前記包装体は、糖分解酵素およびマトリックスメタロプロテアーゼの少なくとも１種の酵素を有効成分として含む凍結乾燥製剤である医薬組成物が、内表面にファインセラミック、シリコーン樹脂、およびフッ素樹脂からなる群から選択される材料の少なくとも１種を備える容器に収容されてなる包装体の使用をも包含する。さらに、別の態様として、ヘルニア症、リソソーム病、ケロイド、肥厚性瘢痕、筋ジストロフィー、または脊髄損傷の処置に使用される包装体であって、糖分解酵素およびマトリックスメタロプロテアーゼの少なくとも１種の酵素を有効成分として含む凍結乾燥製剤である医薬組成物が、内表面にファインセラミック、シリコーン樹脂、およびフッ素樹脂からなる群から選択される材料の少なくとも１種を備える容器に収容されてなる包装体をも包含する。

以下に本発明の実施形態を例示するが、本発明はこれらに限定されない。
＜１＞医薬組成物と容器とを含み、前記医薬組成物は糖分解酵素およびマトリックスメタロプロテアーゼの少なくとも１種の酵素を有効成分として含む凍結乾燥製剤であり、前記容器は前記医薬組成物を収容し、当該容器の内表面にファインセラミック、シリコーン樹脂、およびフッ素樹脂からなる群から選択される材料の少なくとも１種を備える、包装体。

＜２＞前記材料が、酸化ケイ素、窒化ケイ素、酸窒化ケイ素、酸化アルミニウム、窒化アルミニウム、および酸窒化アルミニウムからなる群から選択される、＜１＞に記載の包装体。

＜３＞前記酸化ケイ素が、二酸化ケイ素である、＜２＞に記載の包装体。

＜４＞前記容器は内表面に、前記材料を含有する膜を備える、＜１＞から＜３＞のいずれかに記載の包装体。

＜５＞前記材料を含有する膜が、化学気相蒸着法、物理気相蒸着法、スプレー熱分解法またはスパッタ法により形成されてなる、＜４＞に記載の包装体。

＜６＞前記化学気相蒸着法が、プラズマ化学気相蒸着法である、＜５＞に記載の包装体。

＜７＞前記容器あたりの酵素の収容量が１０μｇ未満である、＜１＞から＜６＞のいずれかに記載の包装体。

＜８＞前記酵素の力価が０．３（ユニット／μｇ）以上である、＜１＞から＜７＞のいずれかに記載の包装体。

＜９＞前記容器あたりの酵素活性が５ユニット未満である＜１＞から＜８＞のいずれかに記載の包装体。

＜１０＞前記酵素の酵素活性が、凍結乾燥前の値を１００％とした場合に、７５％以上である、＜１＞から＜９＞のいずれかに記載の包装体。

＜１１＞５℃±３℃で１２ヶ月以上の貯蔵安定性を有する、＜１＞から＜１０＞のいずれかに記載の包装体。

＜１２＞前記酵素がグリコサミノグリカン分解酵素である、＜１＞から＜１１＞のいずれかに記載の包装体。

＜１３＞前記グリコサミノグリカン分解酵素がコンドロイチナーゼである、＜１２＞に記載の包装体。

＜１４＞前記コンドロイチナーゼがコンドロイチナーゼＡＢＣである、＜１３＞に記載の包装体。

＜１５＞前記マトリックスメタロプロテアーゼがマトリックスメタロプロテアーゼ７である、＜１＞から＜１４＞のいずれかに記載の包装体。

＜１６＞前記医薬組成物が薬学上許容される担体を含む、＜１＞から＜１５＞のいずれかに記載の包装体。

＜１７＞前記担体が、ポリアルキレングリコールおよびスクロースの少なくとも１種を含む、＜１６＞に記載の包装体。

＜１８＞前記医薬組成物が、ヘルニア症、リソソーム病、ケロイド、肥厚性瘢痕、筋ジストロフィー、または脊髄損傷の治療用である、＜１＞から＜１７＞のいずれかに記載の包装体。

＜１９＞前記容器が、バイアル、シリンジ、またはアンプルである、＜１＞から＜１８＞のいずれかに記載の包装体。

＜２０＞ファインセラミック、シリコーン樹脂、およびフッ素樹脂からなる群から選択される材料の少なくとも１種を内表面に備える容器内で、糖分解酵素およびマトリックスメタロプロテアーゼの少なくとも１種の酵素を含む溶液を凍結乾燥することにより得られてなる、医薬組成物。

＜２１＞前記酵素の力価が０．３ユニット／μｇ以上である、＜２０＞に記載の医薬組成物。

＜２２＞前記酵素量が１０μｇ未満の単位用量製剤である、＜２０＞から＜２１＞のいずれかに記載の医薬組成物。

＜２３＞酵素活性が５ユニット未満である、＜２０＞から＜２２＞のいずれかに記載の医薬組成物。

＜２４＞５℃±３℃で１２ヶ月以上の貯蔵安定性を有する、＜２０＞から＜２３＞のいずれかに記載の医薬組成物。

＜２５＞前記酵素がグリコサミノグリカン分解酵素である、＜２０＞から＜２４＞のいずれかに記載の医薬組成物。

＜２６＞前記グリコサミノグリカン分解酵素がコンドロイチナーゼである、＜２５＞に記載の医薬組成物。

＜２７＞前記コンドロイチナーゼがコンドロイチナーゼＡＢＣである、＜２６＞に記載の医薬組成物。

＜２８＞前記マトリックスメタロプロテアーゼがマトリックスメタロプロテアーゼ７である、＜２０＞から＜２７＞のいずれかに記載の医薬組成物。

＜２９＞薬学上許容される担体を含む、＜２０＞から＜２８＞のいずれかに記載の医薬組成物。

＜３０＞前記担体が、ポリアルキレングリコールおよびスクロースの少なくとも１種を含む、＜２９＞に記載の医薬組成物。

＜３１＞前記医薬組成物が、ヘルニア症、リソソーム病、ケロイド、肥厚性瘢痕、筋ジストロフィー、または脊髄損傷の治療用である、＜２０＞から＜３０＞のいずれかに記載の医薬組成物。

＜３２＞＜１＞から＜１９＞のいずれかに記載の包装体、およびヘルニア症、リソソーム病、ケロイド、肥厚性瘢痕、筋ジストロフィー、または脊髄損傷の治療のための前記医薬組成物の使用を説明する添付文書またはラベルを含む、キット。

＜３３＞医薬組成物とそれを収容する容器とを含む包装体の製造方法であり、ファインセラミック、シリコーン樹脂、およびフッ素樹脂からなる群から選択される材料の少なくとも１種を内表面に備える容器に、糖分解酵素およびマトリックスメタロプロテアーゼの少なくとも１種の酵素を含む溶液を収容する工程と、前記溶液を凍結乾燥して医薬組成物を得る工程とを含む、製造方法。

＜３４＞前記材料が、酸化ケイ素、窒化ケイ素、酸窒化ケイ素、酸化アルミニウム、窒化アルミニウム、および酸窒化アルミニウムからなる群から選択される、＜３３＞に記載の製造方法。

＜３５＞前記酸化ケイ素が、二酸化ケイ素である、＜３４＞に記載の製造方法。

＜３６＞前記容器の内表面が、前記材料を含有する膜を備える、＜３３＞から＜３５＞のいずれかに記載の製造方法。

＜３７＞前記材料を含有する膜が、化学気相蒸着法、物理気相蒸着法、スプレー熱分解法またはスパッタ法により形成されてなる、＜３６＞に記載の製造方法。

＜３８＞前記化学気相蒸着法が、プラズマ化学気相蒸着法である、＜３７＞に記載の製造方法。

＜３９＞前記酵素の収容量が１０μｇ未満である、＜３３＞から＜３８＞のいずれかに記載の製造方法。

＜４０＞前記医薬組成物における酵素の力価が、０．３（ユニット／μｇ）以上である、＜３３＞から＜３９＞のいずれかに記載の製造方法。

＜４１＞前記容器に収容される溶液の酵素活性が５ユニット未満である、＜３３＞から＜４０＞のいずれかに記載の製造方法。

＜４２＞凍結乾燥後の前記酵素の酵素活性が、凍結乾燥前の酵素活性を１００％とした場合に、７５％以上である、＜３３＞から＜４１＞のいずれかに記載の製造方法。

＜４３＞前記酵素はグリコサミノグリカン分解酵素である、＜３３＞から＜４２＞のいずれかに記載の製造方法。

＜４４＞前記グリコアミノグリカン分解酵素がコンドロイチナーゼである、＜４３＞に記載の製造方法。

＜４５＞前記コンドロイチナーゼがコンドロイチナーゼＡＢＣである、＜４４＞に記載の製造方法。

＜４６＞前記マトリックスメタロプロテアーゼがマトリックスメタロプロテアーゼ７である、＜３３＞から＜４５＞のいずれかに記載の製造方法。

＜４７＞前記医薬組成物が薬学上許容される担体を含む、＜３３＞から＜４６＞のいずれかに記載の製造方法。

＜４８＞前記担体が、ポリアルキレングリコールおよびスクロースの少なくとも１種を含む、＜４７＞に記載の製造方法。

＜４９＞前記医薬組成物が、ヘルニア症、リソソーム病、ケロイド、肥厚性瘢痕、筋ジストロフィー、または脊髄損傷の治療用である、＜３３＞から＜４８＞のいずれかに記載の製造方法。

＜５０＞前記容器は、バイアル、シリンジ、またはアンプルである、＜３３＞から＜４９＞のいずれかに記載の製造方法。

以下、本発明をより具体的に詳説する。しかしながら、これにより本発明の技術的範囲が限定されるべきものではない。

＜調製例１＞
１）コンドロイチナーゼＡＢＣの調製
コンドロイチナーゼＡＢＣは、特開平６－１５３９４７号公報に記載の方法に準じて調製した。すなわち、プロテウス・ブルガリスの培養上清から精製することによって製造した。得られたコンドロイチナーゼＡＢＣの力価は、０．４０Ｕ／μｇであった。

２）コンドロイチナーゼＡＢＣの酵素活性測定と濃度測定
コンドロイチナーゼＡＢＣの酵素活性は以下の方法で測定した。
酵素試料（コンドロイチナーゼＡＢＣ）を０．０１％（ｗ／ｖ）カゼイン試薬（２０ｍＭリン酸緩衝液）で４０００倍希釈した。この希釈された酵素試料１００μＬに基質溶液４００μＬ（３ｍｇ／ｍｌコンドロイチン硫酸エステルナトリウム（日本薬局方外医薬品規格）、５０ｍＭ ２－アミノ－２－ヒドロキシメチル－１，３－プロパンジオール、５０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ８）を加えて混和した。溶液を３７℃で２０分間反応させた後、１００℃の水浴中で１分間加熱した。室温まで冷却後、０．０５Ｍ 塩酸の５．０ｍＬを加え、試料溶液を調製した。コンドロイチナーゼＡＢＣ標準物質を０．０１％（ｗ／ｖ）カゼイン試薬で４００倍希釈した。この希釈されたコンドロイチナーゼＡＢＣ標準物質の溶液１００μＬに対し、試料溶液の調製と同様の操作を行い、標準溶液を調製した。また、０．０１％（ｗ／ｖ）カゼイン試薬１００μＬに対し、試料溶液の調製と同様の操作を行い、対照溶液を調製した。試料溶液、標準溶液並びに対照溶液につき、紫外可視吸光度測定法により、波長２３２ｎｍにおける吸光度Ａ_Ｔ、Ａ_Ｓ、およびＡ_Ｂを測定し、下記式により酵素溶液活性（Ｕ／ｍＬ）を求めた。ここで酵素溶液活性は、単位液量当たりの酵素活性である。

酵素溶液活性（Ｕ／ｍＬ）＝（Ａ_Ｔ－Ａ_Ｂ）／（Ａ_Ｓ－Ａ_Ｂ）×４０００／４００×Ｕｓ
Ａ_Ｔ：試料溶液の吸光度
Ａ_Ｂ：対照溶液の吸光度
Ａ_Ｓ：標準溶液の吸光度
Ｕｓ：コンドロチナーゼＡＢＣ標準物質の酵素溶液活性（Ｕ／ｍＬ）

なお、１Ｕ（ユニット、単位）は、上記反応条件下において１分間に不飽和二糖を１マイクロモル遊離する反応を触媒する酵素活性の値と定義した。本明細書において用いた酵素活性の値は、酵素溶液活性に基づいて求めた。

コンドロイチナーゼＡＢＣの酵素量（タンパク量、μｇ）は以下のＬｏｗｒｙ法（ローリー法）で測定した。すなわち、純水で５０倍希釈した酵素試料（コンドロイチナーゼＡＢＣ）０．５ｍＬにアルカリ性銅試薬２．５ｍＬ加えて混和し、室温（２０℃以上２５℃以下）に１０分間放置した。この液に１ｍｏｌ／Ｌフェノール試薬０．２５ｍＬを加え混和し、室温に３０分間放置し、試料溶液とした。ウシ血清アルブミンを水に溶かし、それぞれ３０μｇ／ｍＬ、４０μｇ／ｍＬ、５０μｇ／ｍＬ、６０μｇ／ｍＬ、または７０μｇ／ｍＬとなるように溶液を調製し、これら溶液０．５ｍＬそれぞれに対し、前記５０倍希釈した酵素試料と同様の操作を行い、標準溶液とした。また、水０．５ｍＬに対し、前記５０倍希釈した酵素試料と同様の操作を行い、ブランク液とした。これらの液について、波長７５０ｎｍにおける吸光度を測定した。直線回帰法により標準溶液の吸光度とタンパク質濃度をプロットし、各点に最も近似した標準曲線を求めた。得られた標準曲線と試料溶液の吸光度から試料溶液中のタンパク量を求めた。

３）酵素用緩衝液の調製
以下の組成となるよう、酵素用緩衝液を用意した。
（組成；注射用蒸留水１Ｌ中）
リン酸水素ナトリウム水和物 １．１２５ｍｇ
（リン酸水素ナトリウム十二水和物）
リン酸二水素ナトリウム ０．３ｍｇ
スクロース ５ｍｇ
ポリエチレングリコール３３５０ １０ｍｇ
ｐＨ：６．５以上７．５以下。

＜参考例＞
上記の酵素試料（コンドロチナーゼＡＢＣ）を、酵素用緩衝液に溶解させた。得られた酵素溶液を、酵素量がそれぞれ以下になるよう、ガラスバイアル（バイアル瓶３０１０；不二硝子株式会社製）に収容した：
試料１： １５．０μｇ／バイアル（６．０Ｕ／バイアル）
試料２： ３０．０μｇ／バイアル（１２．０Ｕ／バイアル）
試料３： ６０．０μｇ／バイアル（２４．０Ｕ／バイアル）。

これらバイアルに収容した酵素溶液を凍結乾燥した（凍結乾燥後の水分含量２％（ｗ／ｗ）以下）。凍結乾燥後、窒素ガスでバイアル内を復圧し、ゴム栓を打栓し、包装体を得た。

各試料について、凍結乾燥後の酵素活性（Ｕ／バイアル）を測定した（ｎ＝３）。また、得られた酵素活性の値を基に、酵素の凍結乾燥後力価（Ｕ／μｇ）を算出した。その結果を表１に示す。なお、力価は酵素量当たりの酵素活性である。

表１に示す通り、バイアルに収容する酵素量が少ないほど力価が低下した。

＜実施例１＞
酵素用緩衝液を用いて調製したコンドロチナーゼＡＢＣ溶液を、９．１μｇ酵素／バイアル（３．６３Ｕ／バイアル；試料４から試料６）または１．３μｇ酵素／バイアル（０．５０Ｕ／バイアル；試料７）となるように３ｍＬサイズのガラスバイアルに収容した。ガラスバイアルとして、バイアル瓶３０１０（不二硝子株式会社製；試料４）、バイアル瓶３０１０シリコート（スプレー熱分解法（ＳＰＤ法）で形成された二酸化ケイ素膜をバイアル内表面に有する；不二硝子株式会社製；試料５）およびショット（登録商標）タイプワンプラス（プラズマ化学気相蒸着法（プラズマＣＶＤ法）で形成された二酸化ケイ素膜をバイアル内表面に有する；ＳＣＨＯＴＴ社製；試料６、試料７）を用いた。

これらバイアルに収容した酵素溶液を凍結乾燥した（凍結乾燥後の水分含量２％（ｗ／ｗ）以下）。乾燥後、窒素ガスでバイアル内を復圧し、ゴム栓を打栓し、単位用量が収容された包装体を得た。

各試料について、凍結乾燥後の酵素活性（Ｕ／バイアル）を測定した（ｎ＝１０）。また、得られた酵素活性の値を基に、酵素の凍結乾燥後力価（Ｕ／μｇ）を算出した。結果を表２に示す。

＜実施例２＞
試料４および試料６の包装体にアルミキャップで巻き締めした後、２５０℃で５時間乾熱滅菌した。乾熱滅菌後の酵素活性は、試料４では２．５３Ｕ／バイアルであり、試料６では３．１２Ｕ／バイアルであった。

＜実施例３＞
バイアル瓶３０１０（不二硝子株式会社製；試料８）およびショット（登録商標）タイプワンプラス（ＳＣＨＯＴＴ社製；試料９）に酵素溶液を収容し、凍結乾燥した（水分含量２％（ｗ／ｗ）以下）。凍結乾燥後、窒素ガスでバイアル内を復圧し、ゴム栓を打栓し、包装体を得た。得られた包装体を、４０±２℃、遮光の条件下で１ヶ月、３ヶ月または６カ月静置して貯蔵し、各貯蔵期間後における力価を求めた（ｎ＝３）。貯蔵開始時の力価を１００％とした場合の、各貯蔵期間後における力価残存率（％）を算出した結果を表３に示す。

また、試料９を５℃±３℃、遮光の条件で１２ヶ月静置して貯蔵したところ、力価残存率は９８％であった。

＜調製例２＞
１）コンドロイチナーゼＡＢＣの調製
調製例１と同様に、コンドロイチナーゼＡＢＣを、特開平６－１５３９４７号公報に記載の方法に準じて調製した。得られたコンドロイチナーゼＡＢＣの力価は、０．４２Ｕ／μｇであった。

＜実施例４＞
調製例２で得られたコンドロイチナーゼＡＢＣに酵素用緩衝液を加え、酵素溶液を調製した。この酵素溶液を、９．８μｇ酵素／バイアル（４．１Ｕ／バイアル；試料１０から試料１２）となるようにガラスバイアルに収容した。ガラスバイアルとして、ショット（登録商標）タイプワンプラス（プラズマ化学気相蒸着法（プラズマＣＶＤ法）で形成された二酸化ケイ素膜をバイアル内表面に有する；ＳＣＨＯＴＴ社製；試料１０）、シリコーンコートバイアル（シリコーン樹脂膜をバイアル内表面に有する：岩田硝子工業株式会社製；試料１１）、フッ素コートバイアル（ポリテトラフルオロエチレン膜をバイアル内表面に有する；株式会社ユニバーサル製；試料１２）を用いた。

これらバイアルに収容した酵素溶液を凍結乾燥した（凍結乾燥後の水分含量２％（ｗ／ｗ）以下）。乾燥後、窒素ガスでバイアル内を復圧し、ゴム栓を打栓し、単位用量が収容された包装体を得た。

各試料について、凍結乾燥後の酵素活性（Ｕ／バイアル）を測定した（ｎ＝３）。また、得られた酵素活性の値を基に、酵素の凍結乾燥後力価（Ｕ／μｇ）を算出した。結果を表４に示す。

本発明は具体的実施例と様々な実施形態とに関連して記載されているが、本明細書に記載される実施形態の多くの改変や応用が、本発明の精神および範囲を逸脱することなく可能であることは、当業者によって容易に理解される。
本出願は、２０１８年２月２８日付で日本国特許庁に出願された特願２０１８－３５８８４号、および２０１８年７月２７日付で日本国特許庁に出願された特願２０１８－１４１５４２号に基づく優先権を主張し、その内容は参照によって全体として本出願に組み込まれる。本明細書に記載された全ての文献、特許出願、及び技術規格は、個々の文献、特許出願、及び技術規格が参照により取り込まれることが具体的かつ個々に記された場合と同程度に、本明細書に参照により取り込まれる。

Claims (8)

1. 医薬組成物とそれを収容する容器とを含む包装体の製造方法であり、
   二酸化ケイ素を内表面に備える容器に、コンドロイチナーゼＡＢＣを含む溶液を収容する工程と、
   前記溶液を凍結乾燥して医薬組成物を得る工程とを含み、
   前記コンドロイチナーゼＡＢＣの収容量が１０μｇ未満である、製造方法。
2. 前記容器の内表面が、二酸化ケイ素を含有する膜を備える、請求項１に記載の製造方法。
3. 前記二酸化ケイ素を含有する膜が、化学気相蒸着法、物理気相蒸着法、スプレー熱分解法またはスパッタ法により形成されてなる、請求項２に記載の製造方法。
4. 前記化学気相蒸着法が、プラズマ化学気相蒸着法である、請求項３に記載の製造方法。
5. 前記医薬組成物が薬学上許容される担体を含む、請求項１から４のいずれか１項に記載の製造方法。
6. 前記薬学上許容される担体が、緩衝剤、デキストラン類、スクロース、ラクトース、マルトース、キシロース、トレハロース、マンニトール、キシリトール、ソルビトール、イノシトール、血清アルブミン、ゼラチン、クレアチニン、ポリアルキレングリコール、および非イオン性界面活性剤からなる群から選択される少なくとも１種を含む、請求項５に記載の製造方法。
7. 前記薬学上許容される担体が、リン酸緩衝剤、スクロース、およびポリエチレングリコールからなる群から選択される少なくとも１種を含む、請求項６に記載の製造方法。
8. 前記容器に収容するコンドロイチナーゼＡＢＣを含む溶液のｐＨが、６．５以上７．５以下の範囲である、請求項１から７のいずれか１項に記載の製造方法。