JP7395174B2 - 免疫抑制作用又は免疫寛容誘導作用を評価する方法、及び免疫寛容誘導剤 - Google Patents
免疫抑制作用又は免疫寛容誘導作用を評価する方法、及び免疫寛容誘導剤 Download PDFInfo
- Publication number
- JP7395174B2 JP7395174B2 JP2019156208A JP2019156208A JP7395174B2 JP 7395174 B2 JP7395174 B2 JP 7395174B2 JP 2019156208 A JP2019156208 A JP 2019156208A JP 2019156208 A JP2019156208 A JP 2019156208A JP 7395174 B2 JP7395174 B2 JP 7395174B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cells
- recipient
- mouse
- derived
- mice
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 30
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 title claims description 26
- 230000006058 immune tolerance Effects 0.000 title description 30
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 title description 13
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 claims description 119
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 88
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 claims description 84
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 79
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 74
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 67
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 52
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 51
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 51
- 238000011740 C57BL/6 mouse Methods 0.000 claims description 41
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 claims description 41
- 230000004044 response Effects 0.000 claims description 30
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 claims description 22
- 230000035584 blastogenesis Effects 0.000 claims description 22
- 230000006057 immunotolerant effect Effects 0.000 claims description 12
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 8
- 230000003614 tolerogenic effect Effects 0.000 claims description 8
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 26
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 25
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 24
- 238000011725 BALB/c mouse Methods 0.000 description 20
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 18
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 16
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 16
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 16
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 15
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 15
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 12
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 11
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 9
- QJJXYPPXXYFBGM-LFZNUXCKSA-N Tacrolimus Chemical compound C1C[C@@H](O)[C@H](OC)C[C@@H]1\C=C(/C)[C@@H]1[C@H](C)[C@@H](O)CC(=O)[C@H](CC=C)/C=C(C)/C[C@H](C)C[C@H](OC)[C@H]([C@H](C[C@H]2C)OC)O[C@@]2(O)C(=O)C(=O)N2CCCC[C@H]2C(=O)O1 QJJXYPPXXYFBGM-LFZNUXCKSA-N 0.000 description 7
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 7
- 229960001967 tacrolimus Drugs 0.000 description 7
- QJJXYPPXXYFBGM-SHYZHZOCSA-N tacrolimus Natural products CO[C@H]1C[C@H](CC[C@@H]1O)C=C(C)[C@H]2OC(=O)[C@H]3CCCCN3C(=O)C(=O)[C@@]4(O)O[C@@H]([C@H](C[C@H]4C)OC)[C@@H](C[C@H](C)CC(=C[C@@H](CC=C)C(=O)C[C@H](O)[C@H]2C)C)OC QJJXYPPXXYFBGM-SHYZHZOCSA-N 0.000 description 7
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 6
- 102100024222 B-lymphocyte antigen CD19 Human genes 0.000 description 5
- 101000980825 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD19 Proteins 0.000 description 5
- 238000011316 allogeneic transplantation Methods 0.000 description 5
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 5
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 5
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 5
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 5
- 108700014844 flt3 ligand Proteins 0.000 description 5
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 5
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 5
- ZAHRKKWIAAJSAO-UHFFFAOYSA-N rapamycin Natural products COCC(O)C(=C/C(C)C(=O)CC(OC(=O)C1CCCCN1C(=O)C(=O)C2(O)OC(CC(OC)C(=CC=CC=CC(C)CC(C)C(=O)C)C)CCC2C)C(C)CC3CCC(O)C(C3)OC)C ZAHRKKWIAAJSAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229960002930 sirolimus Drugs 0.000 description 5
- QFJCIRLUMZQUOT-HPLJOQBZSA-N sirolimus Chemical compound C1C[C@@H](O)[C@H](OC)C[C@@H]1C[C@@H](C)[C@H]1OC(=O)[C@@H]2CCCCN2C(=O)C(=O)[C@](O)(O2)[C@H](C)CC[C@H]2C[C@H](OC)/C(C)=C/C=C/C=C/[C@@H](C)C[C@@H](C)C(=O)[C@H](OC)[C@H](O)/C(C)=C/[C@@H](C)C(=O)C1 QFJCIRLUMZQUOT-HPLJOQBZSA-N 0.000 description 5
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 4
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 4
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 4
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 3
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 3
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 3
- 229960003444 immunosuppressant agent Drugs 0.000 description 3
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 description 3
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 3
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- 230000000384 rearing effect Effects 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 description 3
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 3
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 3
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 2
- PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N Cyclosporin A Chemical compound CC[C@@H]1NC(=O)[C@H]([C@H](O)[C@H](C)C\C=C\C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C1=O PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N 0.000 description 2
- 108010036949 Cyclosporine Proteins 0.000 description 2
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 description 2
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- 238000011298 ablation treatment Methods 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 2
- 230000001494 anti-thymocyte effect Effects 0.000 description 2
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 229960001265 ciclosporin Drugs 0.000 description 2
- 238000003501 co-culture Methods 0.000 description 2
- 229930182912 cyclosporin Natural products 0.000 description 2
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 2
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 2
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 2
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 2
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 230000000366 juvenile effect Effects 0.000 description 2
- 239000011325 microbead Substances 0.000 description 2
- 238000007799 mixed lymphocyte reaction assay Methods 0.000 description 2
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 2
- 206010033675 panniculitis Diseases 0.000 description 2
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 210000004304 subcutaneous tissue Anatomy 0.000 description 2
- BPVHBBXCESDRKW-UHFFFAOYSA-N 5(6)-carboxyfluorescein Chemical compound C12=CC=C(O)C=C2OC2=CC(O)=CC=C2C21OC(=O)C1=CC(C(=O)O)=CC=C21.C12=CC=C(O)C=C2OC2=CC(O)=CC=C2C11OC(=O)C2=CC=C(C(=O)O)C=C21 BPVHBBXCESDRKW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 238000011752 CBA/J (JAX™ mouse strain) Methods 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 101000932479 Mus musculus Fms-related tyrosine kinase 3 ligand Proteins 0.000 description 1
- 101000746372 Mus musculus Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Proteins 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241000282579 Pan Species 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 1
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 1
- 230000003409 anti-rejection Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 210000000624 ear auricle Anatomy 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 239000005337 ground glass Substances 0.000 description 1
- 238000007490 hematoxylin and eosin (H&E) staining Methods 0.000 description 1
- 210000002758 humerus Anatomy 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 230000004957 immunoregulator effect Effects 0.000 description 1
- 230000000957 immunotolerogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 231100000636 lethal dose Toxicity 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000000116 mitigating effect Effects 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 210000002303 tibia Anatomy 0.000 description 1
- 230000024664 tolerance induction Effects 0.000 description 1
- 210000000689 upper leg Anatomy 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
(ii)前記ドナーマウス由来の細胞又は組織の移植の前、移植と同時、又は移植の後に、レシピエントマウスに被験処置を行う工程;
(iii)前記移植及び被験処置の後に、レシピエントマウスの拒絶反応を評価する工程;並びに
(iv)前記レシピエントマウスの拒絶反応を、ドナーマウス由来の細胞又は組織を移植したが被験処置を行っていない対照レシピエントマウスの拒絶反応と比較し、被験処置を行ったレシピエントマウスの拒絶反応が対照レシピエントマウスの拒絶反応よりも弱かった場合に、被験処置は免疫抑制作用又は免疫寛容作用を有すると判定する工程
を含む、被験処置の免疫抑制作用又は免疫寛容作用を評価する方法。
(2)(i)H-2抗原の型がb/kであるレシピエントマウス由来のT細胞を含む試料と、H-2抗原の型がb/b、k/k又はb/kであってマイナー組織適合性抗原の型が前記レシピエントマウスと一致しないドナーマウス由来の抗原提示細胞を含む試料とを混合し、レシピエント由来T細胞とドナー由来抗原提示細胞とをインビトロで共存させる工程;
(ii)レシピエント由来T細胞とドナー由来抗原提示細胞とを共存させる前、共存させるのと同時、又は共存させた後に、レシピエント由来T細胞に被験処置を行う工程;
(iii)ドナー由来抗原提示細胞との共存及び被験処置の後に、レシピエント由来T細胞の幼若化反応を評価する工程;並びに
(iv)レシピエント由来T細胞の幼若化反応を、ドナー由来抗原提示細胞と共存させたが被験処置を行っていない対照のレシピエント由来T細胞の幼若化反応と比較し、被験処置を行ったレシピエント由来T細胞の幼若化反応が対照レシピエント由来T細胞の幼若化反応よりも弱かった場合に、被験処置は免疫抑制作用又は免疫寛容作用を有すると判定する工程
を含む、被験処置の免疫抑制作用又は免疫寛容作用をインビトロで評価する方法。
(3)レシピエントマウスが129系統とC3H系統の交雑マウスであり、ドナーマウスがC57BL/6系統、CBA/N系統又はC57BL/6系統とCBA/N系統との交雑マウスである、(1)又は(2)に記載の方法。
(4)レシピエントマウスがC3129F1マウスである、(1)~(3)のいずれか一項に記載の方法。
(5)ドナーマウスがC57BL/6系統又はCBA/N系統のマウスである、(1)、(3)又は(4)のいずれか一項に記載の方法。
(6)ドナーマウスがC57BL/6系統のマウスである、(2)~(4)のいずれか一項に記載の方法。
(7)ドナー対象由来の免疫細胞を含む、レシピエント対象において免疫寛容を誘導するための細胞製剤であって、レシピエント対象に対する放射線照射及びT細胞除去処置と組み合わせて用いるための前記細胞製剤。
(8)ドナー対象の主要組織適合型抗原の型がレシピエント対象のそれと完全一致又は部分一致であり、ドナー対象のマイナー組織適合性抗原の型がレシピエント対象のそれと完全一致ではない、(7)に記載の細胞製剤。
(9)T細胞除去処置が、抗CD4抗体、抗CD8抗体、抗CD3抗体、抗TCR抗体及び抗胸腺細胞グロブリンよりなる群から選択される1又は複数の抗T細胞抗体の投与である、(7)又は(8)に記載の細胞製剤。
(10)免疫細胞が脾臓細胞、B細胞又は樹状細胞である、(7)~(9)のいずれか一項に記載の細胞製剤。
(11)免疫細胞がB細胞、又はFms-like tyrosine kinase 3 ligand(Flt3L)で誘導した樹状細胞である、(7)~(10)のいずれか一項に記載の細胞製剤。
本発明の第1の態様は、
(i)H-2抗原の型がb/kであるレシピエントマウスに、H-2抗原の型がb/b、k/k又はb/kであってマイナー組織適合性抗原の型が前記レシピエントマウスと一致しないドナーマウス由来の細胞又は組織を移植する工程;
(ii)前記ドナーマウス由来の細胞又は組織の移植の前、移植と同時、又は移植の後に、レシピエントマウスに被験処置を行う工程;
(iii)前記移植及び被験処置の後に、レシピエントマウスの拒絶反応を評価する工程;並びに
(iv)前記レシピエントマウスの拒絶反応を、ドナーマウス由来の細胞又は組織を移植したが被験処置を行っていない対照レシピエントマウスの拒絶反応と比較し、被験処置を行ったレシピエントマウスの拒絶反応が対照レシピエントマウスの拒絶反応よりも弱かった場合に、被験処置は免疫抑制作用又は免疫寛容作用を有すると判定する工程
を含む、被験処置の免疫抑制作用又は免疫寛容作用を評価する方法に関する。
本発明の別の態様は、(i)H-2抗原の型がb/kであるレシピエントマウス由来のT細胞を含む試料と、H-2抗原の型がb/b、k/k又はb/kであってマイナー組織適合性抗原の型が前記レシピエントマウスと一致しないドナーマウス由来の抗原提示細胞を含む試料とを混合し、レシピエント由来T細胞とドナー由来抗原提示細胞とをインビトロで共存させる工程;
(ii)レシピエント由来T細胞とドナー由来抗原提示細胞とを共存させる前、共存させるのと同時、又は共存させた後に、レシピエント由来T細胞に被験処置を行う工程;
(iii)ドナー由来抗原提示細胞との共存及び被験処置の後に、レシピエント由来T細胞の幼若化反応を評価する工程;並びに
(iv)レシピエント由来T細胞の幼若化反応を、ドナー由来抗原提示細胞と共存させたが被験処置を行っていない対照のレシピエント由来T細胞の幼若化反応と比較し、被験処置を行ったレシピエント由来T細胞の幼若化反応が対照レシピエント由来T細胞の幼若化反応よりも弱かった場合に、被験処置は免疫抑制作用又は免疫寛容作用を有すると判定する工程
を含む、被験処置の免疫抑制作用又は免疫寛容作用をインビトロで評価する方法に関する。
本発明はさらに異なる別の態様として、ドナー対象由来の免疫細胞を含む、レシピエント対象において免疫寛容を誘導するための細胞製剤であって、レシピエント対象に対する放射線照射及びT細胞除去処置と組み合わせて用いるための前記細胞製剤を提供する。
1)レシピエントマウスの作製
129X1/SvJマウス(雄、三協ラボサービス株式会社より購入)とC3H/Heマウス(雌、三協ラボサービス株式会社より購入)から、F1マウスを作製した。作製されたマウスのH-2抗原を、FITC-anti-H-2Kk(36-7-5、Biolegend)及びPE-anti-H-2Kb(AF6-88.5、Biolegend)を用いた末梢血のフローサイトメトリー(FC500、ベックマンコールター)によって解析し、H-2b/kであることを確認した。以後、このF1マウスをC3129F1と表す。
7~10週齢のC3129F1(雄、6~7匹/群)をレシピエントマウスとし、その背部に麻酔下で8 mmの皮膚欠損部を作製した。同週齢の雄のBALB/cマウス(H-2d/d)、C57BL/6マウス(H-2b/b)、CBA/Nマウス(H-2k/k)及び皮膚欠損部を作製した個体と同個体のC3129F1マウスから麻酔下でそれぞれ耳介を摘出したのち、鑷子で皮膚組織と軟骨組織を剥離した後、8 mmの皮膚片をレシピエントマウスの皮膚欠損部に移植した。移植後のマウスを通常の飼育条件下で最大100日間ないし150日間飼育し、移植片のサイズを経時的に測定して移植片サイズが0 mmとなった場合に拒絶と判定し、移植片の生着率(移植片が拒絶された個体数/全個体数)を算出した(図1)。
移植後10日目に移植片をレシピエントマウスの皮下組織ごと切除して回収し、HE染色を行った。BALB/cマウス(H-2d/d)及びC57BL/6マウス(H-2b/b)からの皮膚片を移植したマウスにおいて、移植部位でリンパ球の浸潤が観察された(図2)。
1)タクロリムス
実施例1の2)と同様にしてC3129F1マウスにBALB/cマウス(H-2d/d)、C57BL/6マウス(H-2b/b)又はCBA/Nマウス(H-2k/k)から採取した皮膚片の移植を行った。移植した日から毎日、各マウスに0.5mg/kg又は2.0mg/kgとなるようにタクロリムスを腹腔内投与しながら通常の飼育条件下で40日間飼育し、移植片のサイズを経時的に測定して、移植片の生着率を算出した。タクロリムスに代えて生理食塩水を投与した移植マウスを未処置群とした。
上記1)と同様にしてレシピエントマウスに皮膚移植を行った。移植した日から毎日、各マウスに1.0mg/kgのラパマイシンを腹腔内投与しながら通常の飼育条件下で100日間飼育し、移植片のサイズを経時的に測定して、移植片の生着率を算出した。
7~10週齢のC57BL/6J(雌)を安楽死させた後、脾臓を摘出した。脾臓をすりガラスを用いて優しくすりつぶし、単一細胞化した。低浸透圧処理により赤血球を破壊し、遠心操作により除去し、残存した細胞を脾臓細胞とした。脾臓細胞から抗マウスCD19抗体で標識した磁気ビーズ(CD19 MicroBeads, mouse、ミルテニーバイオテク)を用いた分離法によりCD19陽性細胞を分離し、B細胞とした。
C3129F1マウスの脾臓細胞から抗マウスCD90.2抗体標識磁気ビーズ(CD90.2 MicroBeads, mouse、ミルテニーバイオテク)を用いて磁気ビーズ分離法によりCD90.2陽性細胞を得てT細胞とした。T細胞は細胞***を観察するために5-(and -6)-Carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester (CFSE)で染色した。BALB/cマウス、C57BL/6マウス、CBA/Nマウス又はC3129F1マウスの骨髄細胞を組換えマウスGM-CSF存在下で1週間培養して生成した細胞を樹状細胞とした。2.0×105個のT細胞と1.0×104個の樹状細胞を共培養し、4日後にフローサイトメトリー(BD FACSCantoII、ベクトンディッキンソン)で解析した。共培養した細胞はPE-抗マウスCD4抗体RM4-5(Biolegend)、APC-抗マウスCD8α抗体53-6.72(Biolegend)で染色し、CD4陽性細胞、CD8陽性細胞におけるCFSEの減衰を測定し、CFSEが減衰した細胞を幼若化した細胞とし、その割合を算出した。
1)7~10週齢のC57BL/6J(雄、ドナー、H-2b/b)を安楽死させた後、上腕骨、大腿骨および脛骨を摘出した。摘出した骨の両端を切断し、シリンジを用いてPBSで骨内部を洗浄して骨髄を回収した。回収した骨髄を70Nフィルターを用いてろ過し、単一細胞化した。低浸透圧処理により赤血球を破壊し、遠心操作により除去し、残存した細胞を骨髄細胞とした。10% FBS入りRPMI-1640 10 mlに組換えマウスFlt3L(Biolegend) 2000 ngを加え、骨髄細胞1.0×107を懸濁した。7-9日間、37℃、5% CO2条件下で培養後、浮遊性または弱接着性細胞を回収して、C57BL/6マウス由来のFL-DCを調製した。
Claims (6)
- (i)H-2抗原の型がb/kであるレシピエントマウスに、H-2抗原の型がb/b、k/k又はb/kであってマイナー組織適合性抗原の型が前記レシピエントマウスと一致しないドナーマウス由来の細胞又は組織を移植する工程;
(ii)前記ドナーマウス由来の細胞又は組織の移植の前、移植と同時、又は移植の後に、レシピエントマウスに被験処置を行う工程;
(iii)前記移植及び被験処置の後に、レシピエントマウスの拒絶反応を評価する工程;並びに
(iv)前記レシピエントマウスの拒絶反応を、ドナーマウス由来の細胞又は組織を移植したが被験処置を行っていない対照レシピエントマウスの拒絶反応と比較し、被験処置を行ったレシピエントマウスの拒絶反応が対照レシピエントマウスの拒絶反応よりも弱かった場合に、被験処置は免疫抑制作用又は免疫寛容作用を有すると判定する工程
を含む、被験処置の免疫抑制作用又は免疫寛容作用を評価する方法。 - (i)H-2抗原の型がb/kであるレシピエントマウス由来のT細胞を含む試料と、H-2抗原の型がb/b、k/k又はb/kであってマイナー組織適合性抗原の型が前記レシピエントマウスと一致しないドナーマウス由来の抗原提示細胞を含む試料とを混合し、レシピエント由来T細胞とドナー由来抗原提示細胞とをインビトロで共存させる工程;
(ii)レシピエント由来T細胞とドナー由来抗原提示細胞とを共存させる前、共存させるのと同時、又は共存させた後に、レシピエント由来T細胞に被験処置を行う工程;
(iii)ドナー由来抗原提示細胞との共存及び被験処置の後に、レシピエント由来T細胞の幼若化反応を評価する工程;並びに
(iv)レシピエント由来T細胞の幼若化反応を、ドナー由来抗原提示細胞と共存させたが被験処置を行っていない対照のレシピエント由来T細胞の幼若化反応と比較し、被験処置を行ったレシピエント由来T細胞の幼若化反応が対照レシピエント由来T細胞の幼若化反応よりも弱かった場合に、被験処置は免疫抑制作用又は免疫寛容作用を有すると判定する工程
を含む、被験処置の免疫抑制作用又は免疫寛容作用をインビトロで評価する方法。 - レシピエントマウスが129系統とC3H系統の交雑マウスであり、ドナーマウスがC57BL/6系統、CBA/N系統又はC57BL/6系統とCBA/N系統との交雑マウスである、請求項1又は2に記載の方法。
- レシピエントマウスがC3129F1マウスである、請求項1~3のいずれか一項に記載の方法。
- ドナーマウスがC57BL/6系統又はCBA/N系統のマウスである、請求項1、3又は4のいずれか一項に記載の方法。
- ドナーマウスがC57BL/6系統のマウスである、請求項2~4のいずれか一項に記載の方法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
PCT/JP2019/047991 WO2020121988A1 (ja) | 2018-12-09 | 2019-12-09 | 免疫抑制作用又は免疫寛容誘導作用を評価する方法、及び免疫寛容誘導剤 |
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2018230477 | 2018-12-09 | ||
JP2018230477 | 2018-12-09 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2020092693A JP2020092693A (ja) | 2020-06-18 |
JP7395174B2 true JP7395174B2 (ja) | 2023-12-11 |
Family
ID=71084053
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2019156208A Active JP7395174B2 (ja) | 2018-12-09 | 2019-08-28 | 免疫抑制作用又は免疫寛容誘導作用を評価する方法、及び免疫寛容誘導剤 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP7395174B2 (ja) |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP3998237A4 (en) | 2019-07-08 | 2023-08-09 | Sumitomo Metal Mining Co., Ltd. | METHOD FOR PRODUCING A POSITIVE ELECTRODE ACTIVE MATERIAL FOR A SECONDARY LITHIUM-ION BATTERY |
WO2023190942A1 (ja) * | 2022-03-31 | 2023-10-05 | 学校法人順天堂 | 誘導型抑制性t細胞製剤の品質を評価する方法 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2016517394A (ja) | 2013-02-26 | 2016-06-16 | ザ ボード オブ トラスティーズ オブ ザ レランド スタンフォード ジュニア ユニバーシティー | 移植片の移植寛容のための組み合わされた臓器及び造血細胞 |
-
2019
- 2019-08-28 JP JP2019156208A patent/JP7395174B2/ja active Active
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2016517394A (ja) | 2013-02-26 | 2016-06-16 | ザ ボード オブ トラスティーズ オブ ザ レランド スタンフォード ジュニア ユニバーシティー | 移植片の移植寛容のための組み合わされた臓器及び造血細胞 |
Non-Patent Citations (5)
Title |
---|
MURATA T. et al.,Am J Transplant,2019年04月01日,Vol.19, No.suppl 3,p.1043 D41 |
PRZEWLOCKI G. et al.,Res. Immunol.,1990年,Vol.141,pp.839-853 |
YAMANO Tomoyoshi et al.,BLOOD,2011年,Vol.117, No.9,pp.2640-2648 |
医学のあゆみ,2017年12月23日,Vol.263/No.11-12,P.927-931 |
工藤浩也ほか,細胞治療による免疫寛容の誘導,今日の移植,2012年,Vol.25, No.4,pp.293-300 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP2020092693A (ja) | 2020-06-18 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP7001575B2 (ja) | B細胞の増加及び評価方法並びに疾患治療のための増加b細胞の使用方法 | |
ES2640813T3 (es) | Linfocitos T de memoria central antiterceros, métodos para producirlos y uso de los mismos en un trasplante y el tratamiento de enfermedades | |
Pilat et al. | T-regulatory cell treatment prevents chronic rejection of heart allografts in a murine mixed chimerism model | |
US10792309B2 (en) | Cell therapy composition for preventing or treating immune disease comprising mesenchymal stem cells and immunoregulatory t-cells as active ingredient | |
CN104093314A (zh) | 使用针对t/b细胞耗尽的特异性方案的用于稳定和长期植入的联合疗法 | |
Cousens et al. | Tregitope: immunomodulation powerhouse | |
CN108135935A (zh) | 表达pd-l1的造血干细胞及其用途 | |
JP7449997B2 (ja) | 修飾移植片を先に用いることによる移植片拒絶の抑制 | |
JP7395174B2 (ja) | 免疫抑制作用又は免疫寛容誘導作用を評価する方法、及び免疫寛容誘導剤 | |
CN110312527A (zh) | 用于干细胞移植的非基因毒性预处理方案 | |
JP2019509269A5 (ja) | ||
WO2015125941A1 (ja) | 眼疾患治療剤、そのスクリーニング方法または網膜色素上皮細胞移植に伴う拒絶反応の予測方法 | |
Buhler et al. | Persistence of indirect but not direct T cell xenoresponses in baboon recipients of pig cell and organ transplants | |
WO2020121988A1 (ja) | 免疫抑制作用又は免疫寛容誘導作用を評価する方法、及び免疫寛容誘導剤 | |
JP2009521459A (ja) | 肝機能障害治療において肝前駆細胞を用いる方法 | |
JPH08500009A (ja) | 造血促進細胞及びその使用 | |
Trivedi et al. | The effect of stem cell transplantation on immunosuppression in living donor renal transplantation: a clinical trial | |
CN113330110A (zh) | 杂交胸腺、制备方法及诱导异种移植物耐受性、恢复免疫能力和胸腺功能的使用方法 | |
Touraine | Transplantation of fetal haemopoietic and lymphopoietic cells in humans, with special reference to in utero transplantation | |
Tian et al. | Induction of transplantation tolerance by combining non-myeloablative conditioning with delivery of alloantigen by T cells | |
WO2023176986A1 (ja) | 免疫寛容誘導用組成物及びその製造方法 | |
US20220087233A1 (en) | Non-human animal models of sézary syndrome | |
Adigbli et al. | Transplantation Publish Ahead of Print | |
JP2023019830A (ja) | iPS細胞に対する免疫反応を評価する方法 | |
Thompson | Immunogenicity of Embryonic Stem Cell Derived Hematopoietic Progenitors |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20220722 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20230808 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20230926 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20231031 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20231121 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7395174 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |