JP7393457B2 - フランアスピドスペルミン二量体又はその薬学的に許容される塩及びその製造方法と適用、ならびに医薬組成物 - Google Patents

フランアスピドスペルミン二量体又はその薬学的に許容される塩及びその製造方法と適用、ならびに医薬組成物 Download PDF

Info

Publication number
JP7393457B2
JP7393457B2 JP2022039550A JP2022039550A JP7393457B2 JP 7393457 B2 JP7393457 B2 JP 7393457B2 JP 2022039550 A JP2022039550 A JP 2022039550A JP 2022039550 A JP2022039550 A JP 2022039550A JP 7393457 B2 JP7393457 B2 JP 7393457B2
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
furan
aspidospermine
dimer
pharmaceutically acceptable
methanol
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
JP2022039550A
Other languages
English (en)
Other versions
JP2022140710A (ja
Inventor
祥海 蔡
桂生 鐘
思蒙 趙
梅芬 保
陽 郁
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Kunming Institute of Botany of CAS
Original Assignee
Kunming Institute of Botany of CAS
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Kunming Institute of Botany of CAS filed Critical Kunming Institute of Botany of CAS
Publication of JP2022140710A publication Critical patent/JP2022140710A/ja
Application granted granted Critical
Publication of JP7393457B2 publication Critical patent/JP7393457B2/ja
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/55—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound the modifying agent being also a pharmacologically or therapeutically active agent, i.e. the entire conjugate being a codrug, i.e. a dimer, oligomer or polymer of pharmacologically or therapeutically active compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/545—Heterocyclic compounds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D491/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00
    • C07D491/22—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00 in which the condensed system contains four or more hetero rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
    • A61K31/475—Quinolines; Isoquinolines having an indole ring, e.g. yohimbine, reserpine, strychnine, vinblastine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)

Description

本発明は、医薬の技術分野、特にフランアスピドスペルミン二量体またはその薬学的に許容される塩及びその製造方法と適用、ならびに医薬組成物に関する。
免疫不全や免疫欠乏によって引き起こされる腫瘍、エイズ、又はその他の病原性微生物による感染症などの病気は世界的な問題になり、この原因で中国では毎年数百万人の病人が亡くなる。化学療法、抗ウイルス薬、抗生物質などの現在臨床的に使用されている薬には特定の治療効果があり、薬は病変に直接作用することができるが、その高い毒性と強い薬剤耐性のために、患者に大きな肉体的苦痛と精神的圧力をもたらす。これらの病気のほとんどは、免疫力の低下または免疫系の欠陥の原因で、体の保護バリアの崩壊につながる。体の免疫力を向上させ維持することで、これらの病気を大幅に治療および予防することができ、これは、体の自然な耐病性の本能でもある。免疫細胞は体の免疫系の主要な武器であり、Ｔリンパ球は免疫細胞の主成分であり、その主な機能は外来の侵入者を貪食することであるため、体内のＴリンパ球の割合を増やし、その機能を強化することが上記の免疫疾患の治療と予防のキーポイントである。
本発明は、免疫応答を活性化し、Ｔリンパ球の割合を増加させることによりその機能を強化できるフランアスピドスペルミン二量体またはその薬学的に許容される塩、及びその製造方法と適用、ならびに医薬組成物を提供することを目的とする。
上記発明の目的を達成するために、本発明は以下の技術解決手段を提供する。
本発明は、式Ｉに示される構造を有するフランアスピドスペルミン二量体またはその薬学的に許容される塩を提供する。
ここで、前記Ｒ1とＲ1’は独立して水素、ヒドロキシル、またはＣ1-6アルコキシであり、前記ｎは０～４の正の整数であり、
前記Ｒ2、Ｒ2’およびＲ2''は独立して水素またはＣ1-6アルキルであり、前記Ｒ3およびＲ3’は独立して水素、ヒドロキシルまたは＝Ｏであり、
Ｒ4は水素またはヒドロキシル、Ｒ5は置換基なしまたは＝Ｏであり、
前記Ａ－－Ｂは－ＣＨ2－ＣＨ2－、－ＣＨ＝ＣＨ－、－ＨＯＣＨ－ＣＨＯＨ－、－ＣＨ2－ＣＨＯＨ－又は
であり、
前記その薬学的に許容される塩は、Ｒ2’およびＲ2''の位置で置換された有機または無機の塩である。
好ましくは、前記Ａ－－Ｂが
である場合、前記フランアスピドスペルミン二量体またはその薬学的に許容される塩は、式Ｉ－１～式Ｉ－４に示される構造を有し、
前記式Ｉ－１では、Ｒ1はＨ、Ｒ3’はＨ、またはＲ1はメトキシ、Ｒ3’はＨ、またはＲ1は水素、Ｒ3’は＝Ｏであり、
前記式Ｉ－２では、Ｒ1はヒドロキシ、またはＲ1はメトキシであり、
前記式Ｉ－３では、Ｒ1は水素、Ｒ5は置換基なし、またはＲ1はメトキシ、Ｒ5は置換基なし、またはＲ1はメトキシ、Ｒ5は＝Ｏであり、
前記式Ｉ－４では、Ｒ1はＯＨ、Ｒ1’はＨ（化合物５と表記）、またはＲ1はＨ、Ｒ1’はヒドロキシル（化合物６と表記）、またはＲ1はＯＨ、Ｒ1’はメトキシ（化合物７と表記）である。
好ましくは、前記Ａ－－Ｂが－ＣＨ2－ＣＨＯＨ－である場合、前記－ＣＨ2－ＣＨＯＨ－のヒドロキシル基はＢ位にあり、かつ前記ヒドロキシル基はβ－ＯＨであり、前記フランアスピドスペルミン二量体またはその薬学的に許容される塩は、式Ｉ－５に示される構造を有し、
前記式Ｉ－５では、Ｒ3’は＝Ｏであり、
前記Ａ－－Ｂが－ＨＯＣＨ－ＣＨＯＨ－である場合、前記－ＨＯＣＨ－ＣＨＯＨ－のＡ位にあるヒドロキシル基はα－ＯＨ、Ｂ位にあるヒドロキシル基はβ－ＯＨであり、前記フランアスピドスペルミン二量体またはその薬学的に許容される塩は、式Ｉ－５に示される構造を有し、
前記式Ｉ－５では、Ｒ3’は水素である。
好ましくは、前記Ａ－－Ｂが－ＣＨ＝ＣＨ－である場合、前記フランアスピドスペルミン二量体またはその薬学的に許容される塩は、式Ｉ－６～式Ｉ－９に示される構造を有し、
前記式Ｉ－６では、Ｒ1はＯＨ、Ｒ2はＨ、またはＲ1はメトキシ、Ｒ2はＨ、またはＲ1はメトキシ、Ｒ2はメチルであり、
前記式Ｉ－７では、Ｒ1’はＨ、Ｒ3’はＨ、またはＲ1’はＯＨ、Ｒ3’はＨ、またはＲ1’はＨ、Ｒ3’は－ＯＡｃであり、
前記式Ｉ－８では、Ｒ3はＨ、Ｒ3’は＝Ｏ、Ｒ4はＨ、またはＲ3はＨ、Ｒ3’は＝Ｏ、Ｒ4はヒドロキシルまたはＲ3は＝Ｏ、Ｒ3’はＨ、Ｒ4は水素であり、
前記式Ｉ－９では、Ｒ1はＨ、Ｒ11はＨ、Ｒ3’は水素、またはＲ1はＨ、Ｒ11はヒドロキシル、Ｒ3’は水素、またはＲ1はＨ、Ｒ11はメトキシ、Ｒ3’は水素、または、Ｒ1はヒドロキシル、Ｒ11は水素、Ｒ3’は水素、またはＲ1はメトキシ、Ｒ11は水素、Ｒ3’は水素、またはＲ1はヒドロキシル、Ｒ11はメトキシ、Ｒ3’は＝Ｏである。
好ましくは、前記無機酸塩は、塩酸塩、臭化水素酸塩、硝酸塩、硫酸塩またはリン酸塩である。
好ましくは、前記有機酸塩は、酒石酸塩、クエン酸塩、ギ酸塩、酢酸塩またはシュウ酸塩である。
本発明はまた、上記の技術的解決手段に記載されたフランアスピドスペルミン二量体の製造方法を提供し、
エルウァタミア属植物またはＭｅｌｏｄｉｎｕｓ ｓｕａｖｅｏｌｅｎｓ属植物に対して、順次浸出、抽出、勾配溶離を行い、前記フランアスピドスペルミン二量体を得るステップを含む。
本発明はまた、免疫疾患を治療するための医薬品を製造する際の上記の技術的解決手段による前記フランアスピドスペルミン二量体またはその薬学的に許容される塩の適用を提供する。
本発明はまた、上記技術的解決手段に記載のフランアスピドスペルミン二量体またはその薬学的に許容される塩および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を提供する。
好ましくは、前記医薬組成物中の前記フランアスピドスペルミン二量体またはその薬学的に許容される塩の質量パーセントは、１０％以上である。
本発明は、式Ｉに示される構造を有するフランアスピドスペルミン二量体またはその薬学的に許容される塩を提供し、式Ｉに示す構造を有し、ここで、前記Ｒ1とＲ1’は独立して水素、ヒドロキシル、またはＣ1-6アルコキシであり、前記ｎは０～４の正の整数であり、前記Ｒ2、Ｒ2’およびＲ2''は独立して水素またはＣ1-6アルキルであり、前記Ｒ3およびＲ3’は独立して水素、ヒドロキシルまたは＝Ｏであり、Ｒ4は水素またはヒドロキシル、Ｒ5は置換基なしまたは＝Ｏであり、前記Ａ－－Ｂは－ＣＨ2－ＣＨ2－、－ＣＨ＝ＣＨ－、－ＨＯＣＨ－ＣＨＯＨ－、－ＣＨ2－ＣＨＯＨ－又は
であり、前記その薬学的に許容される塩は、Ｒ2’およびＲ2''の位置で置換された有機または無機の塩である。本発明に記載の式Ｉは、フラン環を介して、２つのアスピドスペルミンモノマーが接続されて形成される二量体であり、フラン環が開いているが不活性であるアスピドスペルミン二量体ｔａｂｅｒｎａｅｍｏｎｔｉｎｅｓＡ－Ｌと比較して、フラン環は活性重要な基であることを示している。また、フラン環アスピドスペルミン－コリナンテイン、フラン環アスピドスペルミン－イボガビスインドールは、どちらもマクロファージＭ２極性化の活性を阻害せず、これは、アスピドスペルミンモノマーも活性の必須単位であることを裏付け、つまり、アスピドスペルミンモノマーとフラン環の剛性接続方式は、活性の基本的な骨格である。
図１は、ＣＰＬＤ、ＣＰＬＬ、ＴＢＹＡ、ＭＤＫ、およびＨＭＤの活性化免疫テストデータ図である。 図２は、化合物１～３および５～７の活性化免疫テストデータ図である。 図３は、化合物１体内の活性化免疫活性データ図である。 図４は、化合物１がＣＤ８+Ｔ細胞機能を改善および強化することを示すデータ図である。 図５は、ＣＰＬＤがＣＤ８+Ｔ細胞機能を改善および強化することを示すデータ図である。
本発明は、式Ｉに示される構造を有するフランアスピドスペルミン二量体またはその薬学的に許容される塩を提供する。
ここで、前記Ｒ1とＲ1’は独立して水素、ヒドロキシル、またはＣ1-6アルコキシであり、前記ｎは０～４の正の整数であり、
前記Ｒ2、Ｒ2’およびＲ2''は独立して水素またはＣ1-6アルキルであり、前記Ｒ3およびＲ3’は独立して水素、ヒドロキシルまたは＝Ｏであり、
Ｒ4は水素またはヒドロキシル、Ｒ5は置換基なしまたは＝Ｏであり、
前記Ａ－－Ｂは－ＣＨ2－ＣＨ2－、－ＣＨ＝ＣＨ－、－ＨＯＣＨ－ＣＨＯＨ－、－ＣＨ2－ＣＨＯＨ－又は
であり、
前記その薬学的に許容される塩は、Ｒ2’およびＲ2''の位置で置換された有機または無機の塩である。
本発明において、前記Ａ－－Ｂが
である場合、前記フランアスピドスペルミン二量体またはその薬学的に許容される塩は、好ましくは、式Ｉ－１～式Ｉ－４に示される構造を有し、
前記式Ｉ－１では、Ｒ1はＨ、Ｒ3’はＨ（化合物１と表記）、またはＲ1はメトキシ、Ｒ3’はＨ（ｔａｂｅｒｙｕｎｉｎｅ Ａ又はＴＢＹ Ａと表記）、またはＲ1は水素、Ｒ3’は＝Ｏ（化合物２と表記）であり、
前記式Ｉ－２では、Ｒ1はヒドロキシ（ｔａｂｅｒｙｕｎｉｎｅ Ｃと表記）、またはＲ1はメトキシ（１０－ｄｅｈｙｄｒｏｘｙｌ－ｃｏｎｏｐｈｙｌｌｉｎｅと表記）であり、
前記式Ｉ－３では、Ｒ1は水素、Ｒ5は置換基なし（化合物３と表記）、またはＲ1はメトキシ、Ｒ5は置換基なし（ｃｏｎｏｐｈｙｌｌｉｎｅ（ＣＰＬＬ）と表記）、またはＲ1はメトキシ、Ｒ5は＝Ｏ（化合物４と表記）であり、
前記式Ｉ－４では、Ｒ1はＯＨ、Ｒ1'はＨ（化合物５と表記）、またはＲ1はＨ、Ｒ1'はＯＨ（化合物６と表記）、またはＲ1はＯＨ、Ｒ1'はメトキシ（化合物７と表記）である。
本発明において、前記Ａ－－Ｂが－ＣＨ2－ＣＨＯＨ－の場合、前記－ＣＨ2－ＣＨＯＨ－のヒドロキシル基はＢ位にあり、かつ前記ヒドロキシル基はβ－ＯＨであり、前記フランアスピドスペルミン二量体またはその薬学的に許容される塩は、式Ｉ－５に示される構造を有し、
前記式Ｉ－５では、Ｒ3’は＝Ｏ（化合物８と表記）であり、
前記Ａ－－Ｂが－ＨＯＣＨ－ＣＨＯＨ－の場合、前記－ＨＯＣＨ－ＣＨＯＨ－のＡ位にあるヒドロキシル基はα－ＯＨ、Ｂ位にあるヒドロキシル基はβ－ＯＨであり、前記フランアスピドスペルミン二量体またはその薬学的に許容される塩は、好ましくは、式Ｉ－５に示される構造を有し、
前記式Ｉ－５では、Ｒ3’は水素（ｃｏｎｏｐｈｙｌｌｉｎｉｎｅと表記）である。
本発明において、前記Ａ－－Ｂが－ＣＨ＝ＣＨ－の場合、前記フランアスピドスペルミン二量体またはその薬学的に許容される塩は、好ましくは、式Ｉ－６～式Ｉ－９に示される構造を有し、
前記式Ｉ－６では、Ｒ1はＯＨ、Ｒ2はＨ（ｃｏｎｏｐｈｙｌｌｉｄｉｎｅ（ＣＰＬＤ）と表記）、またはＲ1はメトキシ、Ｒ2はＨ（１０－Ｏ－ｍｅｔｈｙｌ－ｃｏｎｏｐｈｙｌｌｉｄｉｎｅと表記）、またはＲ1はメトキシ、Ｒ2はメチル（１０，１５－ｄｉｍｅｔｈｙｌ－ｃｏｎｏｐｈｙｌｌｉｄｉｎｅ）であり、
前記式Ｉ－７では、Ｒ1’はＨ、Ｒ3’はＨ（ｍｅｌｏｄｉｎｅｉｎｅ Ｋ（ＭＤ Ｋ）と表記）、またはＲ1’はＯＨ、Ｒ3’はＨ（１９’－ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｌｏｄｉｎｉｎｅＫ（ＨＭＤ Ｋ）と表記）、またはＲ1’はＨ、Ｒ3’は－ＯＡｃ（３’－ａｃｅｔｏｎｙｌ－ｍｅｌｏｄｉｎｉｎｅ Ｋと表記）であり、
前記式Ｉ－８では、Ｒ3はＨ、Ｒ3’は＝Ｏ、Ｒ4はＨ（化合物９と表記）、またはＲ3はＨ、Ｒ3’は＝Ｏ、Ｒ4はヒドロキシル（化合物１０と表記）、またはＲ3は＝Ｏ、Ｒ3’はＨ、Ｒ4は水素（化合物１１と表記）であり、
前記式Ｉ－９では、Ｒ1はＨ、Ｒ11はＨ、Ｒ3’は水素（ｔａｂｅｒｙｕｎｉｎｅ Ｂと表記）、またはＲ1はＨ、Ｒ11はヒドロキシル、Ｒ3’は水素（化合物１２と表記）、またはＲ1はＨ、Ｒ11はメトキシ、Ｒ3’は水素（化合物１３と表記）、または、Ｒ1はヒドロキシル、Ｒ11は水素、Ｒ3’は水素（化合物１４と表記）、またはＲ1はメトキシ、Ｒ11は水素、Ｒ3’は水素（化合物１５と表記）、またはＲ1はヒドロキシル、Ｒ11はメトキシ、Ｒ3’は＝Ｏ（化合物１６と表記）である。
本発明において、前記無機酸塩は、塩酸塩、臭化水素酸塩、硝酸塩、硫酸塩またはリン酸塩であり、前記有機酸塩は、酒石酸塩、クエン酸塩、ギ酸塩、酢酸塩またはシュウ酸塩である。
本発明はまた、上記の技術的解決手段に記載されたフランアスピドスペルミン二量体の製造方法を提供し、エルウァタミア属植物またはＭｅｌｏｄｉｎｕｓ ｓｕａｖｅｏｌｅｎｓ属植物に対して、順次浸出、抽出、勾配溶離を行い、前記フランアスピドスペルミン二量体を得るステップを含む。
本発明において、前記エルウァタミア属植物は、好ましくは、Ｔａｂｅｒｎａｅｍｏｎｔａｎａ ｂｏｖｉｎａ、Ｔａｂｅｒｎａｅｍｏｎｔａｎａ ｄｉｖａｒｉｃａｔａ、Ｔａｂｅｒｎａｅｍｏｎｔａｎａ ｃｏｒｙｍｂｏｓa、Ｔａｂｅｒｎａｅｍｏｎｔａｎａ ｂｕｆａｌｉｎａ Ｌｏｕｒ、およびＴａｂｅｒｎａｅｍｏｎｔａｎａ ｐａｎｄａｃａｑｕｉであり、前記Ｍｅｌｏｄｉｎｕｓ ｓｕａｖｅｏｌｅｎｓ属植物は、好ましくはＭｅｌｏｄｉｎｕｓ ｓｕａｖｅｏｌｅｎｓ又はＭｅｌｏｄｉｎｕｓ ｔｅｎｕｉｃａｕｄａｔｕｓである。
本発明において、前記浸出は、好ましくは有機溶剤中で実施され、前記有機溶剤は、好ましくはアルコール系溶剤、ケトン系溶剤、エステル系溶剤、エーテル系溶剤またはハロゲン化アルキル系溶剤、より好ましくはＣ1-6アルコール、Ｃ3-6ケトン、Ｃ3-6エステル、Ｃ2-6エーテルまたはＣ1-6ハロゲン化アルキルであり、前記Ｃ1-6アルコールは、好ましくは、メタノール、エタノール、ｎ－プロパノール、イソプロパノール、ｎ－ブタノール、イソブタノール、ｔｅｒｔ－ブタノール、ｎ－アミルアルコール、イソアミルアルコール、シクロペンタノール、ｎ－ヘキサノールまたはシクロヘキサノールであり、前記Ｃ3-6ケトンは、好ましくはアセトン、メチルエチルケトンまたはメチルイソブチルケトンであり、前記Ｃ3-6エステルは、好ましくはギ酸エチルまたは酢酸エチルプロピオン酸エチルであり、前記Ｃ2-6エーテルは、好ましくはメチルエーテルまたはエーテルであり、前記Ｃ1-6ハロゲン化アルキルには、好ましくはジクロロメタン、クロロホルム、またはジクロロエタンが含まれる。
前記浸出後、本発明はさらに、好ましくは得られた浸出液を減圧濃縮して総抽出物を得ることを含む。
本発明において、前記抽出が採用する抽出剤は、好ましくは酢酸エチルである。そのプロセスは、好ましくは得られた総抽出物のｐＨ値を１．０～４．５に調整した後、酢酸エチルで抽出した後、得られた酸性水層のｐＨ値を７．０～１１．０に調整し、酢酸エチルを用いて２回目の抽出を行うことである。
本発明において、前記勾配溶離は、好ましくはシリカゲルカラムクロマトグラフィーを用いて実施し、使用する溶離機は、好ましくはクロロホルム－メタノール系（１：０→０：１、ｖ／ｖ）である。
本発明において、式Ｉ－１～式Ｉ－９で表される構造の化合物の抽出プロセスは具体的には以下のとおりである。
７５ｋｇのＴａｂｅｒｎａｅｍｏｎｔａｎａ ｂｏｖｉｎａ（Ｔａｂｅｒｎａｅｍｏｎｔａｎａ ｂｏｖｉｎａ）の乾燥した葉を粉砕した後にメタノールで３回（３×２０Ｌ）浸出し、得られた抽出液を減圧濃縮した後、ｐＨ値を２～３に調整し、酢酸エチルで２回抽出し、抽出して得られた酸性水層のｐＨ値を７～９に調整した後、等量の酢酸エチルで３回抽出し、酢酸エチル層を合わせて濃縮した後、総アルカロイド（８７５ｇ）を得た。総アルカロイドをシリカゲルカラムクロマトグラフィーにかけ、クロロホルム－メタノール（１：０～１：１、ｖ／ｖ）で溶離し、合わせて画分した後、成分Ｉ－Ｘを得た。２４６ｇの第ＩＩＩ成分を、まずＲＰ－１８中圧クロマトグラフィーカラムによる勾配溶離（３０～１００％メタノール）により、小さな１２段階（ＩＩＩ－１～ＩＩＩ－１２）に分割した。ＩＩＩ－１０（４５ｇ）をＲＰ－１中圧クロマトグラフィーカラムで５０～９０％メタノールを用いて溶離し、７つの小さな部分（ＩＩＩ－１０－１～ＩＩＩ－１０－７）を得て、その中で、ＩＩＩ－１０－７をゲル（メタノール）で２回精製した後、さらにＨＰＬＣ調製（６０～７５％アセトニトリル）で精製して化合物６を得た。ＩＩＩ－１１（３７ｇ）を続いてＲＰ－１８－中圧クロマトグラフィーカラムにより５０～１００％メタノール溶液で勾配溶離し、８つの小さい部分（ＩＩＩ－１１－１～ＩＩＩ－１０－８）を得て、その中で、ＩＩＩ－１１－５をゲル（メタノール）で精製した後、さらにＨＰＬＣ調製（７０～８５％アセトニトリル）で精製して化合物１５を得て、ＩＩＩ－１１－８をゲル（メタノール）で精製した後、さらにＨＰＬＣ調製（Ｃ１８分取カラム、６０～７５％アセトニトリル）で精製して、化合物５を得た。ＩＩＩ－１２（２０ｇ）を続いてＲＰ－１８－中圧クロマトグラフィーカラムから勾配溶離（６０～１００％メタノール）で５つの小さい部分（ＩＩＩ－１２－１～ＩＩＩ－１２－５）を得て、その中で、ＩＩＩ－１２－４をゲル（メタノール）で２回精製した後、ＨＰＬＣ調製（Ｃ１８分取カラム、６５～８０％アセトニトリル）でさらに精製して化合物１６を得た。ＩＩＩ－１２－５をゲル（メタノール）で細分した後、さらにＨＰＬＣ調製（Ｃ１８分取カラム、６５～８０％アセトニトリル）で精製して、１０－ｄｅｈｙｄｒｏｘｙｌ－ｃｏｎｏｐｈｙｌｌｉｎｅを得た。第ＩＶ成分（７９ｇ）を最初にＲＰ－１８中圧クロマトグラフィーカラムにより、メタノール－水溶液勾配溶離（１５～８５％）で７段階（ＩＶ－１～ＩＶ－７）に分割した。ＩＶ－５（１６ｇ）を続いてＲＰ－１８中圧クロマトグラフィーカラムによりメタノール－水溶液で勾配溶離（３０～８０％）し、小さな５つの部分（ＩＶ－５－１～ＩＶ－５－５）を得て、その中で、ＩＶ－５－３をゲル（メタノール）で精製した後、ＨＰＬＣ調製（Ｃ１８分取カラム、４５～６０％アセトニトリル）でさらに精製してｃｏｎｏｐｈｙｌｌｉｎｉｎｅを得て、ＩＶ－５－４をゲル（メタノール）で精製した後、ＨＰＬＣ調製（Ｃ１８分取カラム、４５～６０％アセトニトリル）でさらに精製して化合物８を得た。
Ｔａｂｅｒｎａｅｍｏｎｔａｎａ ｄｉｖａｒｉｃａｔａ（Ｔ．ｄｉｖａｒｉｃａｔａ）の乾燥した葉（７．５ｋｇ）を粉砕し、常温でメタノールで３回浸出させ、減圧下で濃縮することによって総抽出物を得た。総抽出物をｐＨ２～３に調整し、等量の酢酸エチルで３回抽出し、酸性水層をｐＨ７～９に調整し、等量の酢酸エチルで３回抽出し、総アルカロイド（６８ｇ）を得て、順相シリカゲルカラムクロマトグラフィーで、クロロホルム－メタノール系（１：０－０：１、ｖ／ｖ）で溶離し、合わせた後に化合物の５つの成分（Ｆｒ．Ｉ－Ｖ）を得た。Ｆｒ．ＩＩ（２５ｇ）を中圧カラムクロマトグラフィーで段階に分画し、メタノール－水系（１０～１００％）で勾配溶離し、５段階（Ｆｒ．ＩＩ－１～５）に分画した。Ｆｒ．ＩＩ－２（２ｇ）をさらに中圧で段階に分画し、メタノール－水系（３０～５５％）で勾配溶離し、５段階（Ｆｒ．ＩＩ－２－１～５）に分画し、Ｆｒ．ＩＩ－２－４（０．５ｇ）をＳｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ－２０ゲルカラムで処理し、ＨＰＬＣ（５０～６５％アセトニトリル）で精製して化合物３を得た。Ｆｒ．ＩＩ－３（８．５ｇ）は白色の柱状結晶を析出させ、母液（５ｇ）を中圧で分離し、１０～８０％のメタノールで４段階（Ｆｒ．ＩＩ－３－１～４）に勾配溶離した。Ｆｒ．ＩＩ－３－４をＨＰＬＣ（Ｃ１８分取カラム、４５～６０％アセトニトリル）で精製して、化合物４を得た。Ｆｒ．ＩＩ－４（３．５ｇ）を中圧で段階に分画し、メタノール－水系（４５～６５％）で勾配溶離し、７段階（Ｆｒ．ＩＩ－４－１～７）に分画した。Ｆｒ．ＩＩ－４－５（２．０ｇ）をＳｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ－２０ゲルカラムで処理して４段階を得て、そのうち、Ｆｒ．ＩＩ－４－５－３をＨＰＬＣ（６５～８０％アセトニトリル）で精製して化合物７を得て、Ｆｒ．ＩＩ－４－５－４をＨＰＬＣ（Ｃ１８分取カラム、６５～８０％アセトニトリル）で精製して、化合物１２を得て、Ｆｒ．ＩＩ－５（０．７ｇ）を中圧で段階に分画し、４５～６５％のメタノールで勾配溶離して８段階（Ｆｒ．ＩＩ－５－１～８）に分画し、Ｆｒ．ＩＩ－５－８（０．１ｇ）をＳｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ－２０ゲルカラムで処理し、ＨＰＬＣ（６５～７５％アセトニトリル）で精製して化合物１３を得た。
Ｔａｂｅｒｎａｅｍｏｎｔａｎａ ｃｏｒｙｍｂｏｓａの乾燥した茎と葉（１５ｋｇ）を粉砕した後にメタノールで液を抽出して、減圧下で総抽出物を得た。総抽出物を０．５％ＨＣｌ溶液で完全に溶解し、ｐＨを２～３に調整し、等量の酢酸エチルで３回抽出し酸性水部分を１０％アンモニア水でｐＨ９～１０に調整し、等量の酢酸エチルで３回抽出し、酢酸エチル層を合わせて濃縮し、総アルカロイド（６１．５ｇ）を得た。シリカゲルカラムクロマトグラフィーで、クロロホルム－アセトン勾配溶離（１：０～２：１）により、同じ画分を合わせて８つの部分を得た（Ｆｒ．Ｉ－ＶＩＩＩ）。ＩＶ（１１．３ｇ）をＣ１８中圧（ＭｅＯＨ－Ｈ２Ｏ：４０％、５０％、６０％、７０％、８０％）で調製して、ＩＶ－１～ＩＶ－５という５つの部分を得た。ＩＶ－４（１．２ｇ）をＣ１８中圧調製（ＭｅＯＨ－Ｈ２Ｏ、４０～６５％）、および高圧調製（Ｃ１８カラム）ＭｅＯＨ－Ｈ２Ｏ（６０～７０％）勾配溶離により、Ｔａｂｅｒｙｕｎｉｎｅ Ｃを得た。Ｆｒ．ＶＩＩＩ（２０．３ｇ）を中圧（メタノール水：１５～６５％）で段階に分画し、ＶＩＩＩ－ＩとＶＩＩＩ－ＩＩの２つの成分を得た。ＶＩＩＩ－Ｉ（８．２ｇ）をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム－アセトン５：１～０：１）にかけて、５つの成分を得た。ＶＩＩＩ－Ｉ－２（１．５ｇ）をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム－メタノール２０：１～９：１）にかけて、ＶＩＩＩ－Ｉ－２－１を得て、次にＨＰＬＣ（メタノール－水：４０～５５％）によりさらに精製した後、ｃｏｎｏｐｈｙｌｌｉｄｉｎｅ及びｃｏｎｏｐｈｙｌｌｉｎｅを得た。ＶＩＩＩ－Ｉ－５（０．４２ｇ）をＨＰＬＣ（メタノール－水：６０～７５％）で精製して、１０－ｄｅｈｙｄｒｏｘｙｌ－ｃｏｎｏｐｈｙｌｌｉｎｅを得た。ＶＩＩＩ－ＩＩ（４．７ｇ）をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム－メタノール５：１～０：１）により、３つの成分ＶＩＩＩ－ＩＩ－１～ＶＩＩＩ－ＩＩ－３を得た。ＶＩＩＩ－ＩＩ－１（０．９ｇ）をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム－メタノール：１０：１）により、ＶＩＩＩ－ＩＩ－１－１を得て、次にＨＰＬＣ（メタノール－水：７０～８５％）で精製して、ｔａｂｅｒｙｕｎｉｎｅ Ａ及びｔａｂｅｒｙｕｎｉｎｅ Ｂを得た。
Ｍｅｌｏｄｉｎｕｓ ｓｕａｖｅｏｌｅｎｓ（Ｍ． ｓｕａｖｅｏｌｅｎｓ）の乾燥した茎（２８ｋｇ）を粉砕し、メタノールで４回（４×７５Ｌ）抽出し、抽出液を減圧下で回収して総抽出物を得た。総抽出物をｐＨ２～３に調整した後、等量の酢酸エチルで３回抽出し、酸性水部をｐＨ７～９に調整し、等量の酢酸エチルで３回抽出し、得られた全アルカロイド（２５０ｇ）をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにかけ、クロロホルム－アセトン勾配溶離して３つの段階（Ｆｒ．Ｉ－ＩＩＩ）を得た。Ｆｒ．ＩＩ（３．０ｇ）を中圧（３０～８０％メタノール）で分離し、９つの成分ＩＩ－１～ＩＩ－９を得た。ＩＩ－２を中圧（６０～８０％メタノール）で分離し、化合物ｍｅｌｏｄｉｎｉｎｅ Ｋを得た。ＩＩ－９（１．１ｇ）を中圧で段階に分割して５つの部分ＩＩ－９－１～ＩＩ－９－５を得て、ＩＩ－９－１をＳｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ－２０デキストランゲル（１００％メタノール）により２つの部分ＩＩ－９－１－１～ＩＩ－９－１－２に分割した。ＩＩ－９－１－１をＨＰＬＣ（５０～６５％アセトニトリル）で精製して化合物１０を得て、ＩＩ－９－１－２をそれぞれＳｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ－２０デキストランゲル（メタノール）を介して、次にＨＰＬＣ（５０～６５％アセトニトリル）で精製して化合物２を得て、ＩＩ－９－２をＳｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ－２０デキストランゲル（メタノール）で溶離した後、ＨＰＬＣ（４５～６０％アセトニトリル）で精製して化合物９を得て、ＩＩ－９－３をＨＰＬＣ（５５～７０％アセトニトリル）で精製して化合物１１を得た。
Ｍｅｌｏｄｉｎｕｓ ｓｕａｖｅｏｌｅｎｓ（Ｍ． ｓｕａｖｅｏｌｅｎｓ）の乾燥した茎と葉（３．０ｋｇ）を粉砕した後に毎回２４時間に９５％エタノールに３回浸し、抽出液を合わせ、溶剤を減圧下で蒸留除去し、粗抽出物を水に懸濁させた。１％塩酸水溶液を加えてｐＨを２～３に調整し且つ撹拌し、ＥｔＯＡｃで抽出し、水層のｐＨを１０％アンモニア水溶液でｐＨ９～１０に調整し、次にＥｔＯＡｃで抽出して、９．８ｇの総アルカロイド抽出物を得た。サンプルを１０ｇシリカゲルと混合し、１００ｇシリカゲルカラムクロマトグラフィー、石油エーテル－アセトン（４０：１～２：１）で勾配溶離して、ＩＶ個成分を得た。第ＩＩＩ成分（３．２ｇ）をＲＰ－１８逆相カラムアセトニトリル－水５～４０％で溶離してＩＩＩ－１～ＩＩＩ－３を得て、そのうちＩＩＩ－３をＨＰＬＣで精製してｍｅｌｏｄｉｎｉｎｅ Ｋを得て、第ＩＶ成分（０．８ｇ）をＨＰＬＣ（７０～８０％メタノール）で精製して化合物３’－ａｃｅｔｏｎｙｌ－ｍｅｌｏｄｉｎｉｎｅ Ｋ及び１９’－ｈｙｄｒｏｘｙ－ｍｅｌｏｄｉｎｉｎｅ Ｋを得た。
Ｍｅｌｏｄｉｎｕｓ ｔｅｎｕｉｃａｕｄａｔｕｓの乾燥した茎と葉（１４ｋｇ）を上記と同じ方法で処理して、総アルカロイド抽出物１７ｇを得た。シリカゲルカラムクロマトグラフィーで、クロロホルム－メタノール勾配溶離して、類似成分を組み合わせて５つの部分を得た。４番目の画分（２ｇ）をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにかけ、クロロホルム－メタノール（１５：１～８：１）で溶離し、次にシリカゲル大気圧および中圧カラムクロマトグラフィーを実施し、石油エーテル／アセトン（４：１）、石油エーテル／酢酸エチル（３：１）、クロマトグラフィー／アセトン（９：１）、メタノール／水（６０～８０％）等の溶離システムで繰り返し精製して、化合物ｍｅｌｏｄｉｎｉｎｅ Ｋを得た。
得られたｍｅｌｏｄｉｎｉｎｅ Ｋ、クロロホルム、過塩素酸、メタクロロ過安息香酸を混合し、０度の条件下で酸化反応を起こして化合物１を得て、反応式は
に示し、
得られたｍｅｌｏｄｉｎｉｎｅ Ｋを、まずメタクロロ過安息香酸、クロロホルム、次に無水トリフルオロ酢酸、アセトンと混合し、０度では、酸化および求核反応が起こり、３’－ａｃｅｔｏｎｙｌ－ｍｅｌｏｄｉｎｉｎｅ Ｋが得られ、反応式は
に示し、
ｃｏｎｏｐｈｙｌｌｉｄｉｎｅ、ヨードメタン、およびアセトニトリルを混合して、室温で置換反応が起こり、１０－Ｏ－ｍｅｔｈｙｌ－ｃｏｎｏｐｈｙｌｌｉｄｉｎｅが得られ、反応式は
である。
ｃｏｎｏｐｈｙｌｌｉｄｉｎｅ、ヨードメタン、およびアセトニトリルを混合して、５０度で置換反応が起こり、１０，１５－Ｏ－ｄｉｍｅｔｈｙｌ－ｃｏｎｏｐｈｙｌｌｉｄｉｎｅが得られ、反応式は
である。
本発明はまた、免疫疾患を治療するための医薬品を製造する際の上記の技術的解決手段による前記フランアスピドスペルミン二量体またはその薬学的に許容される塩の適用を提供する。
本発明はまた、医薬組成物を提供し、上記技術的解決手段に記載のフランアスピドスペルミン二量体またはその薬学的に許容される塩および薬学的に許容される担体を含む。
本発明において、前記医薬組成物中の前記フランアスピドスペルミン二量体またはその薬学的に許容される塩の質量パーセントは、好ましくは１０％以上、より好ましくは２０％以上、最も好ましくは５０％以上である。本発明は、前記薬学的に許容される担体の種類に特別な制限はなく、当業者に周知の種類を使用すればよい。
本発明は、前記医薬組成物の投与剤形に特別な制限はなく、当業者に周知の投与剤形を使用すればよい。
本発明において、前記医薬組成物の投与経路は、好ましくは経口投与または非経口投与である。１日投与量は、好ましくは１～１０００ｍｇである。前記投与経路が経口投与である場合、前記医薬組成物はまた、好ましくは、医薬補剤を含み、前記医薬補剤は、好ましくは賦形剤、崩壊剤、結合剤、潤滑剤、抗酸化剤、コーティング剤、着色剤、芳香剤および界面活性剤のうちの１つまたは複数を含む。前記医薬組成物中の前記医薬補剤の質量パーセント含有量は、好ましくは１０％以上、より好ましくは２０％以上、最も好ましくは５０％以上である。前記医薬組成物の投与剤形は、好ましくは、顆粒剤、カプセルまたは錠剤である。前記投与経路が非経口投与である場合、前記医薬組成物の投与剤型は、好ましくは注射液、注射剤または坐剤である。
以下に、実施例に関連して、本発明によって提供されるフランアスピドスペルミン二量体またはその薬学的に許容される塩、及びその製造方法と適用、医薬組成物を詳細に説明するが、それらを本発明の保護範囲を制限するものとして解釈することはできない。
実施例１
７５ｋｇの薬用Ｔａｂｅｒｎａｅｍｏｎｔａｎａ ｂｏｖｉｎａ（Ｔａｂｅｒｎａｅｍｏｎｔａｎａ ｂｏｖｉｎａ）の乾燥した葉を粉砕した後にメタノールで３回（３×２０Ｌ）浸出し、得られた抽出液を減圧濃縮した後、ｐＨ値を２～３に調整し、酢酸エチルで２回抽出し、抽出して得られた酸性水層のｐＨ値を７～９に調整した後、等量の酢酸エチルで３回抽出し、酢酸エチル層を合わせて濃縮した後、総アルカロイド（８７５ｇ）を得た。総アルカロイドをシリカゲルカラムクロマトグラフィーにかけ、クロロホルム－メタノール（１：０～１：１、ｖ／ｖ）で溶離し、合わせて画分した後、成分Ｉ－Ｘを得た。２４６ｇの第ＩＩＩ成分を、まずＲＰ－１８中圧クロマトグラフィーカラムによる勾配溶離（３０～１００％メタノール）により、小さな１２段階（ＩＩＩ－１～ＩＩＩ－１２）に分割した。ＩＩＩ－１０（４５ｇ）をＲＰ－１中圧クロマトグラフィーカラムで５０～９０％メタノールを用いて溶離し、７つの小さな部分（ＩＩＩ－１０－１～ＩＩＩ－１０－７）を得て、その中で、ＩＩＩ－１０－６をゲル（メタノール溶離）で分離した後、ＨＰＬＣ調製（Ｃ１８分取カラム、７０～８５％アセトニトリル）でさらに精製して、化合物１４を得た。ＩＩＩ－１０－７をゲル（メタノール）で２回精製した後、さらにＨＰＬＣ調製（６０～７５％アセトニトリル）で精製して化合物６を得た。ＩＩＩ－１１（３７ｇ）を続いてＲＰ－１８－中圧クロマトグラフィーカラムにより５０～１００％メタノール溶液で勾配溶離し、８つの小さい部分（ＩＩＩ－１１－１～ＩＩＩ－１０－８）を得て、その中で、ＩＩＩ－１１－５をゲル（メタノール）で精製した後、さらにＨＰＬＣ調製（７０～８５％アセトニトリル）で精製して化合物１５を得て、ＩＩＩ－１１－８をゲル（メタノール）で精製した後、さらにＨＰＬＣ調製（Ｃ１８分取カラム、６０～７５％アセトニトリル）で精製して、化合物５を得た。ＩＩＩ－１２（２０ｇ）を続いてＲＰ－１８－中圧クロマトグラフィーカラムから勾配溶離（６０～１００％メタノール）で５つの小さい部分（ＩＩＩ－１２－１～ＩＩＩ－１２－５）を得て、その中で、ＩＩＩ－１２－４をゲル（メタノール）で２回精製した後、ＨＰＬＣ調製（Ｃ１８分取カラム、６５～８０％アセトニトリル）でさらに精製して化合物１６を得た。ＩＩＩ－１２－５をゲル（メタノール）で細分した後、さらにＨＰＬＣ調製（Ｃ１８分取カラム、６５～８０％アセトニトリル）で精製して、１０－ｄｅｈｙｄｒｏｘｙｌ－ｃｏｎｏｐｈｙｌｌｉｎｅを得た。第ＩＶ成分（７９ｇ）を最初にＲＰ－１８中圧クロマトグラフィーカラムにより、メタノール－水溶液勾配溶離（１５～８５％）で７段階（ＩＶ－１～ＩＶ－７）に分割した。ＩＶ－５（１６ｇ）を続いてＲＰ－１８中圧クロマトグラフィーカラムによりメタノール－水溶液で勾配溶離（３０～８０％）し、小さな５つの部分（ＩＶ－５－１～ＩＶ－５－５）を得て、その中で、ＩＶ－５－３をゲル（メタノール）で精製した後、ＨＰＬＣ調製（Ｃ１８分取カラム、４５～６０％アセトニトリル）でさらに精製してｃｏｎｏｐｈｙｌｌｉｎｉｎｅを得て、ＩＶ－５－４をゲル（メタノール）で精製した後、ＨＰＬＣ調製（Ｃ１８分取カラム、４５～６０％アセトニトリル）でさらに精製して化合物８を得た。
Ｔａｂｅｒｎａｅｍｏｎｔａｎａ ｄｉｖａｒｉｃａｔａ（Ｔ．ｄｉｖａｒｉｃａｔａ）の乾燥した葉（７．５ｋｇ）を粉砕し、常温でメタノールで３回浸出させ、減圧下で濃縮することによって総抽出物を得た。総抽出物をｐＨ２～３に調整し、等量の酢酸エチルで３回抽出し、酸性水層をｐＨ７～９に調整し、等量の酢酸エチルで３回抽出し、総アルカロイド（６８ｇ）を得て、順相シリカゲルカラムクロマトグラフィーで、クロロホルム－メタノール系（１：０－０：１、ｖ／ｖ）で溶離し、合わせた後に化合物の５つの成分（Ｆｒ．Ｉ－Ｖ）を得た。Ｆｒ．ＩＩ（２５ｇ）を中圧カラムクロマトグラフィーで段階に分画し、メタノール－水系（１０～１００％）で勾配溶離し、５段階（Ｆｒ．ＩＩ－１～５）に分画した。Ｆｒ．ＩＩ－２（２ｇ）をさらに中圧で段階に分画し、メタノール－水系（３０～５５％）で勾配溶離し、５段階（Ｆｒ．ＩＩ－２－１～５）に分画し、Ｆｒ．ＩＩ－２－４（０．５ｇ）をＳｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ－２０ゲルカラムで処理し、ＨＰＬＣ（５０～６５％アセトニトリル）で精製して化合物３を得た。Ｆｒ．ＩＩ－３（８．５ｇ）は白色の柱状結晶を析出させ、母液（５ｇ）を中圧で分離し、１０～８０％のメタノールで４段階（Ｆｒ．ＩＩ－３－１～４）に勾配溶離した。Ｆｒ．ＩＩ－３－４をＨＰＬＣ（Ｃ１８分取カラム、４５～６０％アセトニトリル）で精製して、化合物４を得た。Ｆｒ．ＩＩ－４（３．５ｇ）を中圧で段階に分画し、メタノール－水系（４５～６５％）で勾配溶離し、７段階（Ｆｒ．ＩＩ－４－１～７）に分画した。Ｆｒ．ＩＩ－４－５（２．０ｇ）をＳｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ－２０ゲルカラムで処理して４段階を得て、そのうち、Ｆｒ．ＩＩ－４－５－３をＨＰＬＣ（６５～８０％アセトニトリル）で精製して化合物７を得て、Ｆｒ．ＩＩ－４－５－４をＨＰＬＣ（Ｃ１８分取カラム、６５～８０％アセトニトリル）で精製して、化合物１２を得て、Ｆｒ．ＩＩ－５（０．７ｇ）を中圧で段階に分画し、４５～６５％のメタノールで勾配溶離して８段階（Ｆｒ．ＩＩ－５－１～８）に分画し、Ｆｒ．ＩＩ－５－８（０．１ｇ）をＳｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ－２０ゲルカラムで処理し、ＨＰＬＣ（６５～７５％アセトニトリル）で精製して化合物１３を得た。
Ｔａｂｅｒｎａｅｍｏｎｔａｎａ ｃｏｒｙｍｂｏｓａの乾燥した茎と葉（１５ｋｇ）を粉砕した後にメタノールで液を抽出して、減圧下で総抽出物を得た。総抽出物を０．５％ＨＣｌ溶液で完全に溶解し、ｐＨを２～３に調整し、等量の酢酸エチルで３回抽出し酸性水部分を１０％アンモニア水でｐＨ９～１０に調整し、等量の酢酸エチルで３回抽出し、酢酸エチル層を合わせて濃縮し、総アルカロイド（６１．５ｇ）を得た。シリカゲルカラムクロマトグラフィーで、クロロホルム－アセトン勾配溶離（１：０～２：１）により、同じ画分を合わせて８つの部分を得た（Ｆｒ．Ｉ－ＶＩＩＩ）。ＩＶ（１１．３ｇ）をＣ１８中圧（ＭｅＯＨ－Ｈ２Ｏ：４０％、５０％、６０％、７０％、８０％）で調製して、ＩＶ－１～ＩＶ－５という５つの部分を得た。ＩＶ－４（１．２ｇ）をＣ１８中圧調製（ＭｅＯＨ－Ｈ２Ｏ、４０～６５％）、および高圧調製（Ｃ１８カラム）ＭｅＯＨ－Ｈ２Ｏ（６０～７０％）勾配溶離により、Ｔａｂｅｒｙｕｎｉｎｅ Ｃを得た。Ｆｒ．ＶＩＩＩ（２０．３ｇ）を中圧（メタノール水：１５～６５％）で段階に分画し、ＶＩＩＩ－ＩとＶＩＩＩ－ＩＩの２つの成分を得た。ＶＩＩＩ－Ｉ（８．２ｇ）をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム－アセトン５：１～０：１）にかけて、５つの成分を得た。ＶＩＩＩ－Ｉ－２（１．５ｇ）をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム－メタノール２０：１～９：１）にかけて、ＶＩＩＩ－Ｉ－２－１を得て、次にＨＰＬＣ（メタノール－水：４０～５５％）によりさらに精製した後、ｃｏｎｏｐｈｙｌｌｉｄｉｎｅ及びｃｏｎｏｐｈｙｌｌｉｎｅを得た。ＶＩＩＩ－Ｉ－５（０．４２ｇ）をＨＰＬＣ（メタノール－水：６０～７５％）で精製して、１０－ｄｅｈｙｄｒｏｘｙｌ－ｃｏｎｏｐｈｙｌｌｉｎｅを得た。ＶＩＩＩ－ＩＩ（４．７ｇ）をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム－メタノール５：１～０：１）により、３つの成分ＶＩＩＩ－ＩＩ－１～ＶＩＩＩ－ＩＩ－３を得た。ＶＩＩＩ－ＩＩ－１（０．９ｇ）をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム－メタノール：１０：１）により、ＶＩＩＩ－ＩＩ－１－１を得て、次にＨＰＬＣ（メタノール－水：７０～８５％）で精製して、ｔａｂｅｒｙｕｎｉｎｅ Ａ及びｔａｂｅｒｙｕｎｉｎｅ Ｂを得た。
Ｍｅｌｏｄｉｎｕｓ ｓｕａｖｅｏｌｅｎｓ（Ｍ．ｓｕａｖｅｏｌｅｎｓ）の乾燥した茎（２８ｋｇ）を粉砕し、メタノールで４回（４×７５Ｌ）抽出し、抽出液を減圧下で回収して総抽出物を得た。総抽出物をｐＨ２～３に調整した後、等量の酢酸エチルで３回抽出し、酸性水部をｐＨ７～９に調整し、等量の酢酸エチルで３回抽出し、得られた全アルカロイド（２５０ｇ）をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにかけ、クロロホルム－アセトン勾配溶離して３つの段階（Ｆｒ．Ｉ－ＩＩＩ）を得た。Ｆｒ．ＩＩ（３．０ｇ）を中圧（３０～８０％メタノール）で分離し、９つの成分ＩＩ－１～ＩＩ－９を得た。ＩＩ－２を中圧（６０～８０％メタノール）で分離し、化合物ｍｅｌｏｄｉｎｉｎｅ Ｋを得た。ＩＩ－９（１．１ｇ）を中圧で段階に分割して５つの部分ＩＩ－９－１～ＩＩ－９－５を得て、ＩＩ－９－１をＳｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ－２０デキストランゲル（１００％メタノール）により２つの部分ＩＩ－９－１－１～ＩＩ－９－１－２に分割した。ＩＩ－９－１－１をＨＰＬＣ（５０～６５％アセトニトリル）で精製して化合物１０を得て、ＩＩ－９－１－２をそれぞれＳｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ－２０デキストランゲル（メタノール）を介して、次にＨＰＬＣ（５０～６５％アセトニトリル）で精製して化合物２を得て、ＩＩ－９－２をＳｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ－２０デキストランゲル（メタノール）で溶離した後、ＨＰＬＣ（４５～６０％アセトニトリル）で精製して化合物９を得て、ＩＩ－９－３をＨＰＬＣ（５５～７０％アセトニトリル）で精製して化合物１１を得た。
Ｍｅｌｏｄｉｎｕｓ ｓｕａｖｅｏｌｅｎｓ（Ｍ． ｓｕａｖｅｏｌｅｎｓ）の乾燥した茎と葉（３．０ｋｇ）を粉砕した後に毎回２４時間に９５％エタノールに３回浸し、抽出液を合わせ、溶剤を減圧下で蒸留除去し、粗抽出物を水に懸濁させた。１％塩酸水溶液を加えてｐＨを２～３に調整し且つ撹拌し、ＥｔＯＡｃで抽出し、水層のｐＨを１０％アンモニア水溶液でｐＨ９～１０に調整し、次にＥｔＯＡｃで抽出して、９．８ｇの総アルカロイド抽出物を得た。サンプルを１０ｇシリカゲルと混合し、１００ｇシリカゲルカラムクロマトグラフィー、石油エーテル－アセトン（４０：１～２：１）で勾配溶離して、ＩＶ個成分を得た。第ＩＩＩ成分（３．２ｇ）をＲＰ－１８逆相カラムアセトニトリル－水５～４０％で溶離してＩＩＩ－１～ＩＩＩ－３を得て、そのうちＩＩＩ－３をＨＰＬＣで精製してｍｅｌｏｄｉｎｉｎｅ Ｋを得て、第ＩＶ成分（０．８ｇ）をＨＰＬＣ（７０～８０％メタノール）で精製して化合物３’－ａｃｅｔｏｎｙｌ－ｍｅｌｏｄｉｎｉｎｅ Ｋ及び１９’－ｈｙｄｒｏｘｙ－ｍｅｌｏｄｉｎｉｎｅ Ｋを得た。
Ｍｅｌｏｄｉｎｕｓ ｔｅｎｕｉｃａｕｄａｔｕｓの乾燥した茎と葉（１４ｋｇ）を上記と同じ方法で処理して、総アルカロイド抽出物１７ｇを得た。シリカゲルカラムクロマトグラフィーで、クロロホルム－メタノール勾配溶離して、類似な成分を合わせて５つの部分を得た。４番目の画分（２ｇ）をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにかけ、クロロホルム－メタノール（１５：１～８：１）で溶離し、次にシリカゲル大気圧および中圧カラムクロマトグラフィーを実施し、石油エーテル／アセトン（４：１）、石油エーテル／酢酸エチル（３：１）、クロマトグラフィー／アセトン（９：１）、メタノール／水（６０～８０％）等の溶離システムで繰り返し精製して、化合物ｍｅｌｏｄｉｎｉｎｅ Ｋを得た。
得られたｍｅｌｏｄｉｎｉｎｅ Ｋ、クロロホルム、過塩素酸、メタクロロ過安息香酸を混合し、０度の条件下で酸化反応を起こして化合物１を得て、反応式は
に示し、
得られたｍｅｌｏｄｉｎｉｎｅ Ｋを、まずメタクロロ過安息香酸、クロロホルム、次に無水トリフルオロ酢酸及びアセトンと混合し、０度では、酸化および求核反応が起こり、３’－ａｃｅｔｏｎｙｌ－ｍｅｌｏｄｉｎｉｎｅ Ｋが得られ、反応式は
に示す。
ｃｏｎｏｐｈｙｌｌｉｄｉｎｅ、ヨードメタン、およびアセトニトリルを混合して、室温で置換反応が起こり、１０－Ｏ－ｍｅｔｈｙｌ－ｃｏｎｏｐｈｙｌｌｉｄｉｎｅが得られ、反応式は
に示す。
ｃｏｎｏｐｈｙｌｌｉｄｉｎｅ、ヨードメタン、およびアセトニトリルを混合して、５０度で置換反応が起こり、１０，１５－Ｏ－ｄｉｍｅｔｈｙｌ－ｃｏｎｏｐｈｙｌｌｉｄｉｎｅが得られ、反応式は
に示す。
実施例１の抽出によって得られた一連のフランアスピドスペルミン二量体のスペクトルデータは以下のとおりである。
化合物１：淡黄色の粉末、紫外線スペクトルＵＶ（ＭｅＯＨ）λ（ｍａｘ）：１９６、２４５、３３０ｎｍ。核磁気1Ｈ（８００ＭＨｚ）および13Ｃ（２００ＭＨｚ）ＮＭＲ（ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ6）データを表１および２に示し、質量分析ＥＳＩ－ＭＳ ｍ／ｚ：７１９（［Ｍ＋Ｈ］+）、分子式Ｃ42Ｈ46Ｎ4Ｏ7。
化合物２：淡黄色の粉末、紫外線スペクトルＵＶ（ＭｅＯＨ）λ（ｍａｘ）：１９１、２５４、３２９ｎｍ。核磁気1Ｈ（８００ＭＨｚ）および13Ｃ（２００ＭＨｚ）ＮＭＲ（ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ6）データを表１および２に示し、質量分析ＥＳＩ－ＭＳ ｍ／ｚ：７３３（［Ｍ＋Ｈ］+）、分子式Ｃ42Ｈ44Ｎ4Ｏ8。
化合物３：淡黄色の粉末：紫外線スペクトルＵＶ（ＭｅＯＨ）λｍａｘ：１９６、２５４、３２８ｎｍ。核磁気1Ｈ（６００ＭＨｚ）および13Ｃ（１５０ＭＨｚ）ＮＭＲ（ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ6）データを表１および２に示し、質量分析ＥＳＩＭＳ ｍ／ｚ：７８７［Ｍ＋Ｎａ］+、分子式はＣ43Ｈ48Ｎ4Ｏ9である。
化合物４：淡黄色の粉末、紫外線スペクトルＵＶ（ＭｅＯＨ）λ（ｍａｘ）：１９６、２５４、３３２ｎｍ。核磁気1Ｈ（６００ＭＨｚ）および13Ｃ（１５０ＭＨｚ）ＮＭＲ（ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ6）データを表１および２に示し、質量分析ＥＳＩＭＳ ｍ／ｚ：８０９．３４０５［Ｍ－Ｈ］、分子式Ｃ44Ｈ50Ｎ4Ｏ11。
化合物５：黄色粉末：紫外線スペクトルＵＶ（ＭｅＯＨ）λ（ｍａｘ）：１９６、２４８、３３０ｎｍ。核磁気1Ｈ（６００ＭＨｚ）および13Ｃ（１５０ＭＨｚ）ＮＭＲ（ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ6）データを表１および２に示し、質量分析ＥＳＩＭＳ ｍ／ｚ：７６５［Ｍ＋Ｈ］+、分子式Ｃ43Ｈ48Ｎ4Ｏ9。
化合物６：黄色粉末：紫外線スペクトルＵＶ（ＭｅＯＨ）λ（ｍａｘ）：１９６、２４８、３３０ｎｍ。核磁気1Ｈ（６００ＭＨｚ）および13Ｃ（１５０ＭＨｚ）ＮＭＲ（ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ6）データを表１および２に示し、質量分析ＥＳＩＭＳ ｍ／ｚ：７６５［Ｍ＋Ｈ］+、分子式Ｃ43Ｈ48Ｎ4Ｏ9。
化合物７：黄色粉末、紫外線スペクトルＵＶ（ＭｅＯＨ）λｍａｘ：１９６、２５４、３３２ｎｍ、核磁気1Ｈ（６００ＭＨｚ）および13Ｃ（１５０ＭＨｚ）ＮＭＲ（ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ6）データを表１および２に示し、質量分析ＥＳＩＭＳ ｍ／ｚ７９５．３６０１［Ｍ＋Ｈ］+、分子式Ｃ44Ｈ50Ｎ4Ｏ10。
化合物８：黄色粉末：紫外線スペクトルＵＶ（ＭｅＯＨ）λ（ｍａｘ）：１９６、２４０、３２０、３４０ｎｍ。核磁気1Ｈ（６００ＭＨｚ）および13Ｃ（１５０ＭＨｚ）ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ）データを表１および２に示し、質量分析ＥＳＩＭＳ ｍ／ｚ：８１０［Ｍ＋Ｈ］+、分子式Ｃ44Ｈ50Ｎ4Ｏ11。
化合物９：淡黄色の粉末、紫外線スペクトルＵＶ（ＭｅＯＨ）λ（ｍａｘ）：１９８、２５４、３２８ｎｍ。核磁気1Ｈ（８００ＭＨｚ）および13Ｃ（２００ＭＨｚ）ＮＭＲ（ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ6）データを表１および２に示し、質量分析ＥＳＩＭＳ ｍ／ｚ：７１７［Ｍ＋Ｈ］+、分子式Ｃ42Ｈ44Ｎ4Ｏ7。
化合物１０：淡黄色の粉末、紫外線スペクトルＵＶ（ＭｅＯＨ）λ（ｍａｘ）：１９６、２５４、３３２ｎｍ。核磁気1Ｈ（６００ＭＨｚ）および13Ｃ（１５０ＭＨｚ）（ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ6）データを表１および２に示し、質量分析ＥＳＩＭＳ ｍ／ｚ：７３３［Ｍ＋Ｈ］+、分子式Ｃ42Ｈ44Ｎ4Ｏ8。
化合物１１：淡黄色の粉末、紫外線スペクトルＵＶ（ＭｅＯＨ）λ（ｍａｘ）：１９５、２５４、３２９ｎｍ。核磁気1Ｈ（８００ＭＨｚ）および13Ｃ（２００ＭＨｚ）ＮＭＲ（ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ6）データを表３および４に示し、質量分析ＥＳＩＭＳ ｍ／ｚ：７１７［Ｍ＋Ｈ］+、分子式Ｃ42Ｈ44Ｎ4Ｏ7。
化合物１２：淡黄色の粉末、紫外線スペクトルＵＶ（ＭｅＯＨ）λｍａｘ：１９６、２４３、３３１ｎｍ。核磁気1Ｈ（５００ＭＨｚ）および13Ｃ（１２５ＭＨｚ）ＮＭＲ（ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ6）データを表３および４に示し、ＥＳＩＭＳ ｍ／ｚ：７４９［Ｍ＋Ｈ］+。分子式はＣ43Ｈ48Ｎ4Ｏ8である。
化合物１３：淡黄色の粉末、紫外線スペクトルＵＶ（ＭｅＯＨ）λｍａｘ：１９６、２４２、３２８ｎｍ。核磁気1Ｈ（６００ＭＨｚ）および13Ｃ（１５０ＭＨｚ）ＮＭＲ（ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ6）、データを表３および４に示し、質量分析ＥＳＩＭＳ ｍ／ｚ７８５．３５２６［Ｍ＋Ｎａ］+、分子式はＣ44Ｈ50Ｎ4Ｏ8である。
化合物１４：黄色粉末：紫外線スペクトルＵＶ（ＭｅＯＨ）（ｍａｘ）：１９８、２５０、３２６ｎｍ。核磁気1Ｈ（６００ＭＨｚ）および13Ｃ（１５０ＭＨｚ）ＮＭＲ（ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ6）データを表３および４に示し、質量分析ＥＳＩＭＳ ｍ／ｚ：７４９［Ｍ＋Ｈ］+、分子式Ｃ43Ｈ48Ｎ4Ｏ8。
化合物１５：黄色の粉末、紫外線スペクトルＵＶ（ＭｅＯＨ）λ（ｍａｘ）：１９８、２５０、３３０ｎｍ。核磁気1Ｈ（６００ＭＨｚ）および13Ｃ（１５０ｈｚ）ＮＭＲ（ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ6）データを表３および４に示し、質量分析ＥＳＩＭＳ ｍ／ｚ：７６３［Ｍ＋Ｈ］+、分子式Ｃ44Ｈ50Ｎ4Ｏ8。
化合物１６：黄色の粉末、紫外線スペクトルＵＶ（ＭｅＯＨ）λ（ｍａｘ）：１９８、２４５、３３５ｎｍ。核磁気１Ｈ（６００ＭＨｚ）および13Ｃ（１５０ＭＨｚ）ＮＭＲ（ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ6）データを表３および４に示し、質量スペクトルＥＳＩＭＳ ｍ／ｚ：７９３［Ｍ＋Ｈ］+、分子式Ｃ44Ｈ48Ｎ4Ｏ10。
Ｔａｂｅｒｙｕｎｉｎｅ Ａ：淡黄色の粉末、紫外線スペクトルＵＶ（ＭｅＯＨ）λ（ｍａｘ）：２４２、３３０ｎｍ、核磁気1Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ6）δ：７．４０（１Ｈ，ｓ，Ｈ－９’）、６．５８（１Ｈ，ｓ，Ｈ－１２）、６．５６（１Ｈ，ｓ，Ｈ－１２’）、５．９９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，Ｈ－９）、５．９２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，Ｈ－１０）、４．９７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．０，４．８Ｈｚ，Ｈ－１４）、４．８８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，Ｈ－３）、４．０８（１Ｈ，ｂｒｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，Ｈ－１５）、３．７１（３Ｈ，ｓ，ＣＯ２Ｍｅ’）、３．６９（３Ｈ，ｓ，ＣＯ２Ｍｅ）、３．６５（３Ｈ，ｓ，１１－ＯＭｅ）、０．９０（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，Ｈ－１８’）、０．６６（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，Ｈ－１８）。13Ｃ（１５０ＭＨｚ）ＮＭＲ（ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ6）データを表５に示し、分子式はＣ43Ｈ48Ｎ4Ｏ8である。
Ｔａｂｅｒｙｕｎｉｎｅ Ｃ：白色の粉末、紫外線スペクトルＵＶ（ＭｅＯＨ）λ（ｍａｘ）：２４１、３２８ｎｍ、核磁気1Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ6）δ：８．８８（１Ｈ，ｓ，ＮＨ）、９．３９（１Ｈ，ｓ，ＮＨ’）、７．４２（１Ｈ，ｓ，Ｈ－９’）、６．５７（１Ｈ，ｓ，Ｈ－１２’）、５．９９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ｈ－１０）、５．６４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ｈ－９）、４．９７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．８，４．８Ｈｚ，Ｈ－１４）、４．８９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，Ｈ－３）、４．０８（１Ｈ，ｂｒｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，Ｈ－１５）、３．７２（６Ｈ，ｓ，Ｃ’Ｏ２Ｍｅ及びＣＯ2Ｍｅ）、３．７３（３Ｈ，ｓ，１１－ＯＭｅ）、０．９２（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，Ｈ－１８’）、０．６８（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，Ｈ－１８）。13Ｃ（１５０ＭＨｚ）ＮＭＲ（ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ6）データを表５に示す。質量分析ＨＲＥＳＩＭＳ ｍ／ｚ ７６５．３４８０［Ｍ＋Ｈ］+、分子式Ｃ43Ｈ49Ｎ4Ｏ9。
１０－Ｄｅｈｙｄｒｏｘｙｌ－ｃｏｎｏｐｈｙｌｌｉｎｅ：白色の粉末、紫外線スペクトルＵＶ（ＭｅＯＨ）λ（ｍａｘ）：２４８、３２９ｎｍ、核磁気1Ｈ（６００ＭＨｚ）ＮＭＲ（ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ6）δ：８．８８（１Ｈ，ｓ，ＮＨ）、９．３９（１Ｈ，ｓ，ＮＨ’）、７．４２（１Ｈ，ｓ，Ｈ－９’）、６．５７（１Ｈ，ｓ，Ｈ－１２’）、５．９９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ｈ－１０）、５．６４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ｈ－９）、４．９７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．８，４．８Ｈｚ，Ｈ－１４）、４．８９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，Ｈ－３）、４．０８（１Ｈ，ｂｒｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，Ｈ－１５）、３．７２（６Ｈ，ｓ，ＣＯ2Ｍｅ’及びＣＯ2Ｍｅ）、３．６５（３Ｈ，ｓ，１１－ＯＭｅ）、０．９２（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，Ｈ－１８’）、０．６６（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，Ｈ－１８）。質量分析ＥＳＩ－ＭＳ ｍ／ｚ ７７９．３６２３［Ｍ＋Ｈ］+、分子式はＣ44Ｈ50Ｎ4Ｏ9である。
Ｃｏｎｏｐｈｙｌｌｉｎｅ：白色の粉末、紫外線スペクトルＵＶ（ＭｅＯＨ）λ（ｍａｘ）：２４３、３３０ｎｍ、核磁気1Ｈ ＮＭＲ（ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ6，４００ＭＨｚ）：δ ８．７８（１Ｈ，ｓ，ＮＨ）、４．８４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，Ｈ－３）、５．６５（１Ｈ，ｓ，Ｈ－９）、４．９３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．７，４．３Ｈｚ，Ｈ－１４）、４．０９（１Ｈ，ｍ，Ｈ－１５）、０．７０（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，Ｈ－１８）、２．５６（１Ｈ，ｓ，Ｈ－２１）、３．７０（３Ｈ，ｓ，１６－ＣＯＯＣＨ3）、９．３７（１Ｈ，ｓ，ＮＨ’）、７．１９（１Ｈ，ｓ，Ｈ－９’）、６．５８（１Ｈ，ｓ，Ｈ－１２’）、３．１６（１Ｈ，ｍ，Ｈ－１４’）、０．７６（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，Ｈ－１８’）、２．６６（１Ｈ，ｓ，Ｈ－２１’）、３．７１（３Ｈ，ｓ，１６’－ＣＯＯＣＨ3）、３．７２（３Ｈ，ｓ， １１’－ＯＣＨ3）、３．８６（３Ｈ，ｓ，１２’－ＯＣＨ3）。13Ｃ（１００ＭＨｚ） ＮＭＲ（ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ6）、データを表５に示す。
Ｃｏｎｏｐｈｙｌｌｉｎｉｎｅ 黄色の粉末、核磁気1Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ6，）：δ ８．７７（１Ｈ，ｓ，ＮＨ）、５．７５（１Ｈ，ｓ，Ｈ－９）、４．９１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．６，３．５Ｈｚ，Ｈ－１４）、４．８３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，Ｈ－３）、３．８３（３Ｈ，ｓ，１２－ＯＣＨ3）、３．７２（３Ｈ，ｓ，１１－ＯＣＨ３）、３．６８（３Ｈ，ｓ，１６－ＣＯＯＣＨ3）、０．６８（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，Ｈ－１８）、９．２６（１Ｈ，ｓ，ＮＨ’）、７．３８（１Ｈ，ｓ，Ｈ－９’）、６．５８（１Ｈ，ｓ，Ｈ－１２’）、３．７０（３Ｈ，ｓ，１６’－ＣＯＯＣＨ３）、０．８２（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，Ｈ－１８’）。13Ｃ（１２５ＭＨｚ）ＮＭＲ（ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ6）データを表５に示す。
Ｃｏｎｏｐｈｙｌｌｉｄｉｎｅ：淡黄色の粉末、紫外線スペクトルＵＶ（ＭｅＯＨ）λ（ｍａｘ）：２４２、３３０ｎｍ、核磁気1Ｈ ＮＭＲ（ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ6，４００ＭＨｚ）：δ：９．３７（１Ｈ，ｓ，ＮＨ’）、８．７７（１Ｈ，ｓ，ＮＨ）、７．４０（１Ｈ，ｓ，Ｈ－９’）、６．５９（１Ｈ，ｓ，Ｈ－１２’）、５．６２（１Ｈ，ｓ，Ｈ－９）、４．９３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．６，３．６Ｈｚ，Ｈ－１４）、４．８２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，Ｈ－３）、４．０５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，Ｈ－１５）、３．８６（３Ｈ，ｓ，１２’－ＯＣＨ3）、３．７２（３Ｈ，ｓ，１１’－ＯＣＨ3）、３．７１（３Ｈ，ｓ，１６’－ＣＯＯＣＨ３）、３．７０（３Ｈ，ｓ，１６－ＣＯＯＣＨ3）、０．７０（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，Ｈ－１８）、０．６９（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，Ｈ－１８’）。13Ｃ（ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ6）ＮＭＲ（１００ＭＨｚ）データを表５に示す。
１０－Ｏ－ｍｅｔｈｙｌ－ｃｏｎｏｐｈｙｌｌｉｄｉｎｅ：淡黄色の粉末、紫外線スペクトルＵＶ（ＭｅＯＨ）λ（ｍａｘ）：２４２、３３０ｎｍ。核磁気1Ｈ（４００ＭＨｚ）ＮＭＲ（ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ6）δ：９．２９（１Ｈ，ｓ，ＮＨ）、６．２０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．２，Ｈ－９）、６．４６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．２，Ｈ－９）、７．０１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．２，Ｈ－１１）、７．００（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．２，Ｈ－１２）、５．０１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．８，３．６Ｈｚ，Ｈ－１４）、４．０７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，Ｈ－１５）、４．８３（１Ｈ，ｓ，Ｈ－３）、７．４６（１Ｈ，ｓ，Ｈ－９’）、６．５６（１Ｈ，ｓ，Ｈ－１２’）、５．８７（２Ｈ，ｏｖｅｒｌａｐ，Ｈ－１４’／１５’）、３．７７（３Ｈ，ｓ，ＣＯＯＣＨ3）、３．６６（３Ｈ，ｓ，Ｃ’ＯＯＣ’Ｈ3）、２．０８（３Ｈ，ｓ，ＣＨ２ＣＯＣＨ3）、０．８４（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，Ｈ－１８’）、０．６７（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，Ｈ－１８）。質量分析ＨＲＥＳＩＭＳ ｍ／ｚ：８４９．４０７５［Ｍ＋Ｈ］+、分子式Ｃ48Ｈ56Ｎ4Ｏ10。
１０，１５－Ｏ－ｄｉｍｅｔｈｙｌ－ｃｏｎｏｐｈｙｌｌｉｄｉｎｅ：淡黄色の粉末、紫外線スペクトルＵＶ（ＭｅＯＨ）λ（ｍａｘ）：２４２、３３０ｎｍ。質量分析ＨＲＥＳＩＭＳ ｍ／ｚ：８６３．４２３１［Ｍ＋Ｈ］+、分子式Ｃ49Ｈ58Ｎ4Ｏ10。
Ｍｅｌｏｄｉｎｉｎｅ Ｋ：白色の粉末、紫外線スペクトルＵＶ（ＭｅＯＨ）λｍａｘ：２４２、３３０ｎｍ。核磁気1Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ6）δ：９．２７（１Ｈ，ｓ，ＮＨ）、９．３９（１Ｈ，ｓ，ＮＨ’）、７．４６（１Ｈ，ｓ，Ｈ－９’）、６．９９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，Ｈ－１１）、６．９４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，Ｈ－１２）、６．５８（１Ｈ，ｓ，Ｈ－１２’）、６．４０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，Ｈ－１０）、６．１１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，Ｈ－９）、５．８９（２Ｈ，ｏｖｅｒｌａｐ，Ｈ－１４’／１５’）、５．００（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．８，３．６Ｈｚ，Ｈ－１４）、４．８９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，Ｈ－３）、４．０７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，Ｈ－１５）、３．７２（３Ｈ，ｓ，Ｃ’Ｏ2Ｍｅ’）、３．７１（３Ｈ，ｓ，ＣＯ2Ｍｅ）、０．８２（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，Ｈ－１８’）、０．６７（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，Ｈ－１８）。13Ｃ（１５０ＭＨｚ）ＮＭＲ （ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ6）データを表６に示す。質量分析ＥＳＩ－ＭＳ ｍ／ｚ ７０３ ［Ｍ＋Ｈ］+、分子式Ｃ42Ｈ46Ｎ4Ｏ6。
１９’－Ｈｙｄｒｏｘｙ－ｍｅｌｏｄｉｎｉｎｅ Ｋ：白色の粉末。紫外線スペクトルＵＶ（ＭｅＯＨ）λｍａｘ：２４２、３３０ｎｍ。核磁気1Ｈ ＮＭＲ（ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ6，４００ＭＨｚ）δ：９．２４（１Ｈ，ｓ，ＮＨ）、９．３３（１Ｈ，ｓ，Ｎ’Ｈ）、７．４３（１Ｈ，ｓ，Ｈ－９’）、６．９６（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，Ｈ－１１）、６．９１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，Ｈ－１２）、６．５６（１Ｈ，ｓ，Ｈ－１２’）、６．５４（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，Ｈ－１０）、６．０５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，Ｈ－９）、５．８５（２Ｈ，ｏｖｅｒｌａｐ，Ｈ－１４’／１５’）、４．９３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．８，３．６Ｈｚ，Ｈ－１４）、４．８３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，Ｈ－３）、４．０５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，Ｈ－１５）、３．７７（３Ｈ，ｓ，ＣＯＯＣＨ3）、３．６９（３Ｈ，ｓ，Ｃ’ＯＯＣ’Ｈ3）、３．５５（１Ｈ，ｑ，Ｊ＝６．５Ｈｚ）、１．００（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，Ｈ－１８’）、０．６５（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，Ｈ－１８）。13Ｃ（１５０ＭＨｚ）ＮＭＲ（ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ6）データを表６に示す。質量分析ＨＲ－ＥＳＩ－ＭＳ ｍ／ｚ：７１９．３４４３［Ｍ＋Ｈ］+、分子式Ｃ42Ｈ46Ｎ4Ｏ7。
３’－ａｃｅｔｏｎｙｌ－ｍｅｌｏｄｉｎｉｎｅ Ｋ：白色の粉末。紫外線スペクトルＵＶ（ＭｅＯＨ）λｍａｘ ３３０、２４７ｎｍ。核磁気1Ｈ（６００ＭＨｚ）ＮＭＲ（ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ6）δ：９．４９（１Ｈ，ｓ，ＮＨ）、９．２９（１Ｈ，ｓ，ＮＨ）、７．４６（１Ｈ，ｓ，Ｈ－９’）、７．０１（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２，Ｈ－１１）、７．００（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．２，Ｈ－１２）、６．５６（１Ｈ，ｓ，Ｈ－１２’）、６．４６（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２，Ｈ－１０）、６．２０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．２，Ｈ－９）、５．８７（２Ｈ，ｏｖｅｒｌａｐ，Ｈ－１４’／１５’）、４．９８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．８，３．６Ｈｚ，Ｈ－１４）、４．８３（１Ｈ，ｓ，Ｈ－３）、４．０７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，Ｈ－１５）、３．７７（３Ｈ，ｓ，ＣＯＯＣＨ3）、３．６６（３Ｈ，ｓ，Ｃ’ＯＯＣ’Ｈ3）、２．０８（３Ｈ，ｓ，ＣＨ２ＣＯＣＨ3）、０．８４（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，Ｈ－１８’）、０．６７（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，Ｈ－１８）。13Ｃ（１５０ＭＨｚ）ＮＭＲ（ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ6）データを表６に示す。質量分析ＨＲＥＳＩＭＳ ｍ／ｚ ７５９．３７６１［Ｍ＋Ｈ］+、分子式Ｃ45Ｈ50Ｎ4Ｏ7。
Ｔａｂｅｒｙｕｎｉｎｅ Ｂ：淡黄色の粉末：紫外線スペクトルＵＶ （ＭｅＯＨ）λｍａｘ：２０４、 ２４２、 ３３０ｎｍ。核磁気1Ｈ （６００ ＭＨｚ） ＮＭＲ δ： ９．２３（１Ｈ，ｓ，ＮＨ）、９．３９（１Ｈ，ｓ，ＮＨ’）、７．４４（１Ｈ，ｓ，Ｈ－９’）、６．５７（２Ｈ，ｓ，Ｈ－１２／１２’）、５．９９ （１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，Ｈ－９）、５．９１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ， Ｈ－１０）、５．８０（２Ｈ，ｏｖｅｒｌａｐ，Ｈ－１４’／１５’）、４．９５ （１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．８，４．８ Ｈｚ，Ｈ－１４）、４．８９（１Ｈ，ｄ，Ｊ ＝７．８Ｈｚ，Ｈ－３）、４．０６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，Ｈ－１５）、３．７０（３Ｈ，ｓ，Ｃ’ＯＯＣ’Ｈ3）、３．６９（３Ｈ，ｓ，ＣＯＯＣＨ3）、３．６３（３Ｈ，ｓ，１１－ＯＭｅ）、０．８４（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，Ｈ－１８’）、０．６６（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，Ｈ－１８）。 13Ｃ （１５０ＭＨｚ） ＮＭＲ （ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ6）データを表６に示す。ＨＲＥＳＩＭＳ ｍ／ｚ ７３３．３６１２［Ｍ＋Ｈ］+、分子式Ｃ43Ｈ49Ｎ4Ｏ7。
表１～６は、実施例１の抽出により得られた一連のフランアスピドスペルミン二量体の核磁気データ帰属表である。
Figure 0007393457000036
Figure 0007393457000037
Figure 0007393457000038
Figure 0007393457000039
Figure 0007393457000040
Figure 0007393457000041
Figure 0007393457000042
テスト例
活性化免疫テスト：ＢＭＭｓは骨髄から分離され、誘導して培養された初代細胞であり、マクロファージの機能を十分に反映することができ、マクロファージの機能を研究するために一般的に使用される細胞である。マウス大腿骨の骨髄を分離した後、ｍＣＳＦ因子を含む培地で６～７日間培養することによって成熟したＢＭＭｓが得られ、ＩＬ－４で１２時間刺激すると、ＡＲＧ１の高発現を伴う免疫抑制型のＭ２型に極性化するように誘導でき、タンパク質を抽出した後、体外でアルギニン加水分解を行い、さらにα－ｉｓｏｎｉｔｒｏｓｏｐｒｏｐｉｏｐｈｅｎｏｎｅを使用して加水分解物尿素と反応させて発色させ、波長５４０ｎｍで吸光度を測定し、ＡＲＧ１活性のマーカーとした。具体的なプロセスは以下のとおりである。細胞を薬物（ＣＰＬＤ、ＣＰＬＬ、ＴＢＹＡ、ＭＤＫ、ＨＭＤ、化合物１～３および化合物５～７）で前処理（１μＭ）した後、ＩＬ－４を１２時間刺激し、ＰＢＳで洗浄し、プロテアーゼ阻害剤を含む細胞溶解液で細胞を溶解し、総細胞タンパク質を取り、０．２～０．４ｍＭのＭｎ2+を添加した後、５５℃で１０分間加熱して、アルギナーゼＡＲＧ１を完全に活性化した。０．５ｍＭアルギニンを添加し、３７℃で１～２時間インキュベートして、アルギニンを完全に加水分解した。硫酸とリン酸を含む酸性溶液を加えて反応を停止し、９％α－ｉｓｏｎｉｔｒｏｓｏｐｒｏｐｉｏｐｈｅｎｏｎｅエタノール溶液を加え、９５℃で１５～３０分間加熱して発色できる。実験結果を図１に示すように、図１から、化合物ＣＰＬＤ、ＣＰＬＬ、ＴＢＹＡ、ＭＤＫ、およびＨＭＤが、マクロファージでＩＬ－４によって誘導されるａｒｇｉｎａｓｅ発現を有意に阻害し、マクロファージのＭ２極性化を阻害できることがわかり、図１（ＡはマクロファージＭ２極性化の抑制、ＢはＣＰＬＤ、ＣＰＬＬ、ＴＢＹＡ、ＭＤＫ、ＨＭＤの構造式、Ｃは化合物の濃度依存関係）から、ＣＰＬＤ、ＣＰＬＬ、ＴＢＹＡ、ＭＤＫ、およびＨＭＤは、マクロファージでのＩＬ－４誘導ａｒｇｉｎａｓｅ発現を有意に阻害でき、濃度依存的にマクロファージでのＭ２極性化を阻害できることがわかる。図２から、化合物１～３および５～７もマクロファージＭ２の極性化を阻害できることがわかる。
免疫に依存した活性の検証：マウス黒色腫モデルでは、化合物１を２ｍｇ／ｋｇの用量で４回連続腹腔内投与し、テスト結果を図３に示し、化合物１には明らかな抗腫瘍効果があり、その抗腫瘍活性は免疫系に依存し、正常なマウス黒色腫モデル（Ａ）および乳がんモデル（Ｂ）では、化合物１は腫瘍の成長を有意に抑制し、乳がんの自然発生的な肺転移（ＣおよびＤ）を抑制した。Ｂａｌｂ／ｃヌードマウスを用いて構築した黒色腫モデル（Ｅ）と乳がん細胞モデル（Ｆ）では、化合物１の抗腫瘍活性が消失した。
ＣＤ８+Ｔ細胞機能を改善および強化するための検証：ＦＡＣＳ分析により、化合物１のテスト結果を図３に示すように、化合物１は、腫瘍における免疫細胞の浸潤を促進し、ＣＤ８+Ｔ細胞の割合をアップレギュレートし、骨髄細胞の割合をダウンレギュレートできるが、ＣＤ４+Ｔ細胞、Ｔｒｅｇ細胞、ＮＫ細胞、Ｂ細胞等には有意な影響を与えない。さらなる研究により、化合物１はＣＤ８+Ｔ細胞の機能を促進し、ＩＦＮγ、Ｇｒａｎｚｙｍｅ Ｂ、ＴＮＦαを増強し、ＰＤ１、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３をアップレギュレートできることがわかった。また、化合物１は、ＣＤ２０６+マクロファージの割合をダウンレギュレートできる（図－４）。そのうち、（Ａ）は、化合物１が腫瘍免疫応答を活性化できることを示している。（Ｂ）微小環境における免疫細胞分類群の割合を調整した。（Ｃ～Ｅ）Ｔ細胞、特にＣＤ８+Ｔ細胞の割合をアップレギュレーションした。（Ｆ～Ｈ）はＴｒｅｇ比に有意な影響を与えなかった。（Ｉ，Ｊ）ＣＤ８+Ｔ細胞の機能を促進し、ＩＦＮγ、Ｇｒａｎｚｙｍｅ Ｂ、ＴＮＦαの発現をアップレギュレーションした。（Ｋ，Ｌ）ＰＤ１、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３の発現を同時にアップレギュレーションした。（Ｍ，Ｎ）腫瘍微小環境における骨髄細胞（ＣＤ１１ｂ+）の割合をダウンレギュレートした。（Ｏ，Ｐ）特にＭ２型のＴＡＭｓ（ＣＤ２０６hi）の割合．*Ｐ＜０．０５、**Ｐ＜０．０１。
ＣＯＬＤのテスト結果を図５に示すように、ＣＰＬＤ処理は、腫瘍内のＣＤ８+Ｔ細胞の割合を大幅に増加させることができるが、ＣＤ４+Ｔ細胞には有意な影響を与えず（図－５ Ａ～Ｅ）、Ｔｒｅｇの割合（Ｆ～Ｇ）には影響を与えないことがわかった。細胞内染色は、ＣＰＬＤがＣＤ８+Ｔ細胞の機能を促進し、ＩＦＮγ、Ｇｒａｎｚｙｍｅ Ｂ、ＴＮＦαの発現を増強できることを示した（Ｈ～Ｋ）。さらなる免疫蛍光染色実験では、ＣＰＬＤがＣＤ８+Ｔ細胞の割合を増加させ、Ｇｒａｎｚｙｍｅ Ｂの発現を促進できることもわかった（Ｌ）。さらに、マウスにａｎｔｉ－ＣＤ８抗体を継続的に注入し、体内のＣＤ８+Ｔ細胞を削除して黒色腫モデルを構築し、化合物の抗腫瘍活性を調べた。結果は、ＣＰＬＤの抗腫瘍効果がＣＤ８+Ｔ細胞削除腫瘍モデルおよびヌードマウス腫瘍モデルで有意に減少したことを示し、ＣＰＬＤがＴＡＭｓの機能を調節することによってＣＤ８+Ｔ細胞の機能をさらに促進して抗腫瘍活性を発揮できることを確認した（Ｍ～Ｎ）。
実施例２
硫酸塩の調製：
実施例１で調製した２８個の物質において、それぞれ４％質量濃度の硫酸エタノール溶液をｐＨ＝４まで加え、濾過し、乾燥させて硫酸塩を得た。
実施例３
塩酸塩の調製：
実施例１で調製した２８個の物質において、それぞれ４％質量濃度の塩酸エタノール溶液をｐＨ＝４まで加え、濾過し、乾燥させて塩酸塩を得た。
実施例４
リン酸塩の調製：
実施例１で調製した２８個の物質において、それぞれ４％質量濃度のリン酸溶液をｐＨ＝４まで加え、濾過し、乾燥させてリン酸塩を得た。
実施例５
酒石酸塩の調製：
実施例１で調製した２８個の物質において、それぞれ４％質量濃度の酒石酸溶液をｐＨ＝４まで加え、濾過し、乾燥させて酒石酸塩を得た。
実施例６
クエン酸塩の調製：
実施例１で調製した２８個の物質において、それぞれ４％質量濃度のクエン酸溶液をｐＨ＝４まで加え、濾過し、乾燥させてクエン酸塩を得た。
実施例７
ギ酸塩の調製：
実施例１で調製した２８個の物質において、それぞれ４％質量濃度のギ酸溶液をｐＨ＝４まで加え、濾過し、乾燥させてギ酸塩を得た。
実施例８
シュウ酸塩の調製：
実施例１で調製した２８個の物質において、それぞれ４％質量濃度のシュウ酸溶液をｐＨ＝４まで加え、濾過し、乾燥させてシュウ酸塩を得た。
実施例９
注射液の調製：
実施例２から８で調製された塩に、注射用の水を添加し、精密ろ過して、注型封止して滅菌して注射液を得た。
実施例１０
粉末注射剤の調製：
実施例２～８で調製された塩を、滅菌注射用水に溶解し、溶解するまで撹拌し、滅菌吸引フィルター漏斗でろ過し、次に滅菌精密ろ過し、アンプルに密封包装し、低温凍結乾燥した後、滅菌溶解および密封して粉末注射剤を得た。
実施例１１
粉剤の調製：
質量比９：１で、実施例２～８で調製した塩を賦形剤と混合して粉剤を得た。
実施例１２
錠剤の調製：
質量比１：（５～１０）で、実施例２～８で調製した塩を賦形剤と混合し、錠剤に圧縮して錠剤を得た。
実施例１３
質量比５：１で、実施例２～８で調製した塩を賦形剤と混合してカプセル、顆粒剤または顆粒製剤に形成した。
実施例１４
質量比３：１で、実施例２～８で調製した塩を賦形剤と混合してカプセル、顆粒剤または顆粒製剤に形成した。
上記は、本発明の好ましい実施形態にすぎない。当業者にとって、本発明の原理から逸脱することなく、いくつかの改善および修正を行うことができる。これらの改善および修正はまた、本発明の保護範囲と見なされるべきであることに留意されたい。

Claims (8)

  1. フランアスピドスペルミン二量体又はその薬学的に許容される塩であって、式Ｉ－１’に示す構造を有し、
    ここで、Ｒ1は水素であり、
    Ｒ2’およびＲ2''はメチルであり、Ｒ3’は水素または＝Ｏであり、
    前記その薬学的に許容される塩は、Ｒ2’およびＲ2''の位置で置換された有機または無機の塩であることを特徴とするフランアスピドスペルミン二量体又はその薬学的に許容される塩。
  2. 前記無機酸塩は、塩酸塩、臭化水素酸塩、硝酸塩、硫酸塩またはリン酸塩であることを特徴とする請求項１に記載のフランアスピドスペルミン二量体又はその薬学的に許容される塩。
  3. 前記有機酸塩は、酒石酸塩、クエン酸塩、ギ酸塩、酢酸塩またはシュウ酸塩であることを特徴とする請求項１に記載のフランアスピドスペルミン二量体又はその薬学的に許容される塩。
  4. エルウァタミア属植物またはＭｅｌｏｄｉｎｕｓ ｓｕａｖｅｏｌｅｎｓ属植物に対して、順次浸出、抽出、勾配溶離を行い、前記フランアスピドスペルミン二量体を得るステップを含むことを特徴とする請求項１に記載のフランアスピドスペルミン二量体。
  5. 免疫疾患の治療のための医薬品の製造における、請求項１～３のいずれか一項に記載のフランアスピドスペルミン二量体またはその薬学的に許容される塩の使用。
  6. 請求項１～３のいずれか一項に記載のフランアスピドスペルミン二量体またはその薬学的に許容される塩を含む、免疫疾患の治療用医薬品。
  7. 医薬組成物であって、請求項１～３のいずれか一項に記載のフランアスピドスペルミン二量体またはその薬学的に許容される塩および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
  8. 前記医薬組成物中の前記フランアスピドスペルミン二量体またはその薬学的に許容される塩の質量パーセントは、１０％以上であることを特徴とする請求項７に記載の医薬組成物。
JP2022039550A 2021-03-13 2022-03-14 フランアスピドスペルミン二量体又はその薬学的に許容される塩及びその製造方法と適用、ならびに医薬組成物 Active JP7393457B2 (ja)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110270901.2 2021-03-13
CN202110270901.2A CN115073481B (zh) 2021-03-13 2021-03-13 一种呋喃白坚木碱二聚体或其药学上可接受的盐及其制备方法和应用、药物组合物

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JP2022140710A JP2022140710A (ja) 2022-09-27
JP7393457B2 true JP7393457B2 (ja) 2023-12-06

Family

ID=81254854

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2022039550A Active JP7393457B2 (ja) 2021-03-13 2022-03-14 フランアスピドスペルミン二量体又はその薬学的に許容される塩及びその製造方法と適用、ならびに医薬組成物

Country Status (4)

Country Link
US (1) US20220296724A1 (ja)
JP (1) JP7393457B2 (ja)
CN (1) CN115073481B (ja)
GB (1) GB2605878A (ja)

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107011352A (zh) 2017-04-28 2017-08-04 中国科学院昆明植物研究所 白坚木碱二聚体与其药物组合物及其制备方法和应用

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH07233071A (ja) * 1993-12-28 1995-09-05 Terumo Corp 癌遺伝子機能抑制剤
JPH11322602A (ja) * 1998-05-13 1999-11-24 Kazuo Umezawa 転写因子ＮＦκＢ活性化阻害剤
EP1623986A4 (en) * 2003-05-09 2008-04-02 Univ Keio USE OF A ALKALOID OF THE PERVENCHE AND ITS SALT
CN110372732B (zh) * 2019-08-14 2021-04-30 昆明理工大学 白坚木碱-喹啉型二聚吲哚生物碱化合物及其应用
CN110372731B (zh) * 2019-08-14 2021-04-30 昆明理工大学 喹啉-白坚木碱型双吲哚生物碱类化合物及其应用

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107011352A (zh) 2017-04-28 2017-08-04 中国科学院昆明植物研究所 白坚木碱二聚体与其药物组合物及其制备方法和应用

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
J．Nat.Prod.，2019年，Vol.82，pp.850-858
Med Chem Res，2017年，Vol.26，pp.1268-1278
Phytochemistry，1995年，Vol.40, No.3，pp.953-959
Phytochemistry，2018年，Vol.152，pp.125-133

Also Published As

Publication number Publication date
JP2022140710A (ja) 2022-09-27
CN115073481A (zh) 2022-09-20
CN115073481B (zh) 2024-04-12
US20220296724A1 (en) 2022-09-22
GB202203422D0 (en) 2022-04-27
GB2605878A (en) 2022-10-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN107986951B (zh) 新型拓扑异构酶i抑制剂及其药物组合物与其制备方法及应用
US20190322638A1 (en) Dipyridyl alkaloid, preparation method therefor and use thereof
EP3240772B1 (en) Compounds from antrodia camphorata, method for preparing the same and use thereof
CN110343116B (zh) 一种野菊花提取物及其制备方法和在制备治疗鼻咽癌药物中的应用
JPH01157995A (ja) 鎮痛−抗炎症活性を有するガングリオシドの内部エステル
CN110437247B (zh) 一种具有保肝护肝作用的混源萜类化合物及其用途
WO2017092230A1 (zh) 双黄酮化合物及其治疗癌症和制备药物的用途
JP7393457B2 (ja) フランアスピドスペルミン二量体又はその薬学的に許容される塩及びその製造方法と適用、ならびに医薬組成物
CN111647003A (zh) 三环氧六氢色酮a及其药物组合物和其应用
CN110452110B (zh) 一种间苯三酚类天然药物及其制备方法和用途
CN110922440A (zh) 吲哚氮苷类化合物及提取方法及在制备防治神经***疾病药物中的应用
CN112979640B (zh) 一类生物碱二聚体类化合物及其在制备pd-1/pd-l1通路抑制剂中的应用
CN101775019B (zh) 薄叶山橙素甲,其药物组合物及其制备方法和用途
CN115160251A (zh) 一种n-n-双-恶唑烷酮生物碱类化合物、制备方法及在医药领域的应用
CN112592328B (zh) 草豆蔻中二芳基庚烷-查尔酮聚合物及其药物组合物与应用
CN111529515B (zh) 12,15-二氧-α-蛇床烯在制药中的应用
CN106810551A (zh) 两种新碳架生物碱化合物及其提取分离方法
CN105753681A (zh) 一种胞磷胆碱钠的药物组合物及其医药用途
CN109438300B (zh) 一种酚类化合物及其制备方法
KR100979921B1 (ko) 갈색꽃구름 버섯추출물과 이로부터 분리된 락톤계 화합물 및 이를 포함하는 항 비만제 조성물
CN114478700B (zh) 鸡冠花子中荨麻科类型环肽的制备方法及其在抗肿瘤药物中的应用
JP3035846B2 (ja) プロポリス由来のベンゾピラン誘導体の生理活性
CN113425725B (zh) 盖裂果及其提取物在制备抗幽门螺杆菌药物中的应用
CN115073463B (zh) 一类苦参碱型二聚体生物碱类化合物、其药物组合物及其应用
CN113929706B (zh) 一种具有抗癌作用的化合物

Legal Events

Date Code Title Description
A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20220314

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20220331

RD01 Notification of change of attorney

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7426

Effective date: 20220520

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821

Effective date: 20220520

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20230221

A977 Report on retrieval

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007

Effective date: 20230216

A601 Written request for extension of time

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601

Effective date: 20230519

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20230525

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20230711

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20230913

TRDD Decision of grant or rejection written
A01 Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01

Effective date: 20231114

A61 First payment of annual fees (during grant procedure)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61

Effective date: 20231124

R150 Certificate of patent or registration of utility model

Ref document number: 7393457

Country of ref document: JP

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150