JP7366428B2 - 乾癬を判定するための皮膚試料の分析方法及びシステム - Google Patents
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Description
記憶部11は、入力部12から入力された乾癬を判別するための、D-セリン量のカットオフ値と乾癬の病態情報を記憶し、
入力部12から、対象の皮膚試料中のD-セリンの量の測定値が入力され、記憶部に記憶し、
データ処理部14は、D-セリン量の測定値を、記憶部11に記憶されたカットオフ値と比較することにより、対象の乾癬の病態情報を決定し、
出力部15が対象の乾癬についての病態情報を出力することができる。
D-セリン量のカットオフ値と、乾癬の病態情報との関連を記憶部11に記憶させる指令;
入力部12から、対象の皮膚試料中のD-セリンの量の測定値を読みだして記憶部11に記憶させる指令;
データ処理部14を作動させて、記憶部に記憶されたD-セリン量の測定値を、カットオフ値と比較させて、対照の乾癬の病態情報を決定させて記憶部11に記憶させる指令;及び
出力部15を作動させて、記憶された乾癬についての病態情報を出力させる指令
を含む。このようなプログラムは、記憶媒体に格納されてもよいし、インターネット又はLAN等の電気通信回線を介して提供されてもよい。
21名の尋常性乾癬患者、31名のアトピー性皮膚炎患者、8名の乾皮症患者の皮疹部と、無疹部とから、テープストリップ法により角層試料を取得した。同様に、対照として42名の健常者の皮膚から角層試料を取得した。乾癬患者の重症度は、軽症8名、中等症7名、重症3名、不明3名であった。角層試料は、5.6cm2の採取面積の角層テープを用い、同じ個所で3回テープストリップを行い、3枚目の試料を用いた。角層テープに付着した角層試料を、95%メタノール1500μlで処理し、超音波処理を行い、15000rpmで10分遠心した。上清を250μl分取し、減圧下で乾固させた。乾固物に対し、200mMホウ酸ナトリウム水溶液(pH8.0:30μl)を添加し溶解させた。得られた溶液に対し、40mMのNBD-Fアセトニトリル溶液(5μl)を添加して、60℃で2分間反応させ、2%(v/v)トリフルオロ酢酸水溶液90μl)を添加して、2次元HPLC分析に供した。
アミノ酸のエナンチオマーを、J Chromatogr A 1217, 1056-1062 (2010)やJournal of chromatography. B, Analytical technologies in the biomedical and life sciences 877, 2506-2512 (2009)に記載される通りに、マイクロ2D-HPLCプラットフォームを用いて定量した。簡潔に記載すると、アミノ酸のNBD-誘導体を、逆相カラム(モノリシックODSカラム、0.53mmi.d.×100mm(ML-750)販売元:非売品・資生堂試作品)を用い、MeCN、THF及びTFAを含む水性移動相を用いて勾配溶出した。D体及びL体を分離して測定するために、標的アミノ酸の画分をマルチループバルブを用いて自動的に回収し、そして光学分割カラム(OA2500S-15250, 1.5mmi.e. ×250mm)販売元:ダイセル工業)に供した。移動相は、クエン酸又はギ酸を含むMeOH-MeCNの混合溶液であり、そしてNBD-アミノ酸の蛍光を、470nmで励起し、530nmで検出した。全ての定量データを蛍光検出により取得した。HPLC-MS/MSを用いて、実際の生物的マトリクス中のD-アミノ酸の存在を確認した。
健常者と、各疾患の皮疹部と無疹部とに分けて、各群における%D-Serについて、Student’s t-testによる群間比較(等分散仮定)を行い、有意差を検証した(表1)。これらの結果は%D(Ser)が健常者と乾癬の区別に利用できることを示すだけでなく、乾癬特徴的なパラメータ変動であるためにそのほかの皮膚疾患との鑑別にも有用であることを端的に示している。
Claims (11)
- 対象において、乾癬を判定するための皮膚試料の分析方法であって、D-セリンの量を指標とする、前記分析方法。
- 以下の:
皮膚試料においてD-セリンの量を測定する工程;
D-セリン量の低下と、乾癬とを関連付ける工程
を含む、請求項1に記載の分析方法。 - 皮膚試料の内部標準の量を定量し、内部標準の量を用いて、D-セリン量を正規化する工程をさらに含む、請求項1又は2に記載の分析方法。
- 前記内部標準が、タンパク質量、遺伝子量、総アミノ酸量、総D-アミノ酸量、総L-アミノ酸量、任意のL-アミノ酸の量、角層重量、からなる群から選ばれる少なくとも1である、請求項3に記載の分析方法。
- 前記内部標準が、L-セリン量、又はD,L-セリン量である、請求項4に記載の分析方法。
- D-セリン量の低下が、予め決定されたカットオフ値と比較することで、決定される、請求項2~5のいずれか一項に記載の分析方法。
- 記憶部、入力部、データ処理部、及び出力部を含む、対象において、乾癬を判定するための皮膚試料分析システムであって、
入力部から、乾癬を判定するための皮膚試料中のD-セリンの量のカットオフ値と乾癬の病態情報が入力され、記憶部に記憶し、
入力部から、対象の皮膚試料中のD-セリンの量の測定値が入力され、記憶部に記憶し、
データ処理部が、記憶されたD-セリンの量の測定値を、記憶されたカットオフ値と比較して、対象の乾癬の病態情報を決定し;
乾癬の病態情報を出力部に出力する
前記皮膚試料分析システム。 - 分析測定部をさらに含み、該分析測定部が、対象の皮膚試料からD-セリンを定量して測定値を決定し、入力部に代わり又は入力部を介して測定値を入力する、請求項7に記載の分析システム。
- 入力部から内部標準の量が入力され、データ処理部が、さらに内部標準の量に基づきD-セリン量を正規化する、請求項7又は8に記載の分析システム。
- 前記内部標準が、タンパク質量、遺伝子量、総アミノ酸量、総D-アミノ酸量、総L-アミノ酸量、任意のL-アミノ酸の量、角層重量、からなる群から選ばれる少なくとも1である、請求項9に記載の分析システム。
- 前記内部標準が、L-セリン量、又はD,L-セリン量である、請求項10に記載の分析システム。
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Advanced Targeting Systems,Anti-Conjugated D.Serine Mouse Monoclonal,カタログ,2016年,https://www.atsbio.com/catalog/data/abt175.pdf |
SCHELL, M. J. et al.,D-Serine, an endogenous synaptic modulator: Localization to astrocytes and glutamate-stimulated rele,Proc. Natl. Acad. Sci. USA,1995年,Vol.92,p.3948-3952,ISSN 1091-6490 |
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