CN117607334A - 糖尿病皮肤病变风险筛查试剂盒及筛查方法 - Google Patents
糖尿病皮肤病变风险筛查试剂盒及筛查方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN117607334A CN117607334A CN202311589904.8A CN202311589904A CN117607334A CN 117607334 A CN117607334 A CN 117607334A CN 202311589904 A CN202311589904 A CN 202311589904A CN 117607334 A CN117607334 A CN 117607334A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- diabetic
- area
- plate body
- screening kit
- microorganism
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 title claims abstract description 43
- 238000012216 screening Methods 0.000 title claims abstract description 33
- 206010040882 skin lesion Diseases 0.000 title claims abstract description 17
- 231100000444 skin lesion Toxicity 0.000 title claims abstract description 17
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 15
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims abstract description 32
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 27
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 20
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 17
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 claims abstract description 17
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 claims abstract description 17
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 claims abstract description 16
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 14
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims abstract description 12
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 9
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 claims abstract description 9
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 7
- BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N Silver Chemical compound [Ag] BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 239000004332 silver Substances 0.000 claims abstract description 6
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 claims abstract description 6
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 25
- 229960001153 serine Drugs 0.000 claims description 22
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 20
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 claims description 14
- 230000003902 lesion Effects 0.000 claims description 14
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N EtOH Substances CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 claims description 8
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 8
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 8
- 239000012085 test solution Substances 0.000 claims description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 238000007664 blowing Methods 0.000 claims description 6
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 6
- 238000005507 spraying Methods 0.000 claims description 6
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 claims description 5
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 238000011161 development Methods 0.000 claims description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 3
- 238000009826 distribution Methods 0.000 claims description 3
- HTRJDXQPCKIFIU-UHFFFAOYSA-N silver;ethanol;nitrate Chemical compound [Ag+].CCO.[O-][N+]([O-])=O HTRJDXQPCKIFIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 230000037380 skin damage Effects 0.000 claims description 3
- 238000003825 pressing Methods 0.000 claims description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims 2
- 238000003892 spreading Methods 0.000 abstract description 8
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 23
- 208000008960 Diabetic foot Diseases 0.000 description 18
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 14
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 9
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 6
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 5
- 101000669447 Homo sapiens Toll-like receptor 4 Proteins 0.000 description 4
- 102100039360 Toll-like receptor 4 Human genes 0.000 description 4
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 230000007480 spreading Effects 0.000 description 4
- 101000946889 Homo sapiens Monocyte differentiation antigen CD14 Proteins 0.000 description 3
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102100035877 Monocyte differentiation antigen CD14 Human genes 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 3
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 3
- 210000002510 keratinocyte Anatomy 0.000 description 3
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 3
- 150000003355 serines Chemical class 0.000 description 3
- 244000005714 skin microbiome Species 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000606125 Bacteroides Species 0.000 description 2
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010040943 Skin Ulcer Diseases 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- PQNFLJBBNBOBRQ-UHFFFAOYSA-N indane Chemical compound C1=CC=C2CCCC2=C1 PQNFLJBBNBOBRQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 231100000019 skin ulcer Toxicity 0.000 description 2
- DNXIKVLOVZVMQF-UHFFFAOYSA-N (3beta,16beta,17alpha,18beta,20alpha)-17-hydroxy-11-methoxy-18-[(3,4,5-trimethoxybenzoyl)oxy]-yohimban-16-carboxylic acid, methyl ester Natural products C1C2CN3CCC(C4=CC=C(OC)C=C4N4)=C4C3CC2C(C(=O)OC)C(O)C1OC(=O)C1=CC(OC)=C(OC)C(OC)=C1 DNXIKVLOVZVMQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000589291 Acinetobacter Species 0.000 description 1
- 241000186361 Actinobacteria <class> Species 0.000 description 1
- 241000607534 Aeromonas Species 0.000 description 1
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000589519 Comamonas Species 0.000 description 1
- 241000186031 Corynebacteriaceae Species 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- 201000004624 Dermatitis Diseases 0.000 description 1
- 208000002249 Diabetes Complications Diseases 0.000 description 1
- 206010012655 Diabetic complications Diseases 0.000 description 1
- 208000027244 Dysbiosis Diseases 0.000 description 1
- 206010058314 Dysplasia Diseases 0.000 description 1
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 description 1
- 241000605909 Fusobacterium Species 0.000 description 1
- 241000207202 Gardnerella Species 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 241000736262 Microbiota Species 0.000 description 1
- 241000605861 Prevotella Species 0.000 description 1
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M Propionate Chemical compound CCC([O-])=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000192142 Proteobacteria Species 0.000 description 1
- 241000588769 Proteus <enterobacteria> Species 0.000 description 1
- LCQMZZCPPSWADO-UHFFFAOYSA-N Reserpilin Natural products COC(=O)C1COCC2CN3CCc4c([nH]c5cc(OC)c(OC)cc45)C3CC12 LCQMZZCPPSWADO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QEVHRUUCFGRFIF-SFWBKIHZSA-N Reserpine Natural products O=C(OC)[C@@H]1[C@H](OC)[C@H](OC(=O)c2cc(OC)c(OC)c(OC)c2)C[C@H]2[C@@H]1C[C@H]1N(C2)CCc2c3c([nH]c12)cc(OC)cc3 QEVHRUUCFGRFIF-SFWBKIHZSA-N 0.000 description 1
- 241001136275 Sphingobacterium Species 0.000 description 1
- 241000295644 Staphylococcaceae Species 0.000 description 1
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 1
- KXKVLQRXCPHEJC-UHFFFAOYSA-N acetic acid trimethyl ester Natural products COC(C)=O KXKVLQRXCPHEJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 238000007605 air drying Methods 0.000 description 1
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 230000001174 ascending effect Effects 0.000 description 1
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008236 biological pathway Effects 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 210000004207 dermis Anatomy 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 1
- 230000007140 dysbiosis Effects 0.000 description 1
- 210000005175 epidermal keratinocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 1
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 1
- 230000001969 hypertrophic effect Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 210000004969 inflammatory cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000003780 keratinization Effects 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 210000002752 melanocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 230000037311 normal skin Effects 0.000 description 1
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- BJOIZNZVOZKDIG-MDEJGZGSSA-N reserpine Chemical compound O([C@H]1[C@@H]([C@H]([C@H]2C[C@@H]3C4=C([C]5C=CC(OC)=CC5=N4)CCN3C[C@H]2C1)C(=O)OC)OC)C(=O)C1=CC(OC)=C(OC)C(OC)=C1 BJOIZNZVOZKDIG-MDEJGZGSSA-N 0.000 description 1
- 229960003147 reserpine Drugs 0.000 description 1
- MDMGHDFNKNZPAU-UHFFFAOYSA-N roserpine Natural products C1C2CN3CCC(C4=CC=C(OC)C=C4N4)=C4C3CC2C(OC(C)=O)C(OC)C1OC(=O)C1=CC(OC)=C(OC)C(OC)=C1 MDMGHDFNKNZPAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 210000000434 stratum corneum Anatomy 0.000 description 1
- 210000000437 stratum spinosum Anatomy 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/90—Plate chromatography, e.g. thin layer or paper chromatography
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/75—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated
- G01N21/77—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated by observing the effect on a chemical indicator
- G01N21/78—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated by observing the effect on a chemical indicator producing a change of colour
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/90—Plate chromatography, e.g. thin layer or paper chromatography
- G01N30/95—Detectors specially adapted therefor; Signal analysis
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Plasma & Fusion (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本发明公开了一种糖尿病皮肤病变风险筛查试剂盒，包括板体，所述板体的一面分为手持区域和微生物采集区域，板体的该面在微生物采集区域处上下堆叠有多层贴片膜，每层贴片膜上粘贴有阵列分布的多片用于采集微生物的贴片，手持区域有一凹槽，凹槽内置有标本管、试剂、滤纸、硅胶薄层层析板以及紫色比色卡，试剂包括0.1％茚三酮溶液、第一种展层剂、层析液、丝氨酸标准溶液、第二种展层剂和硝酸银‑茚三酮试液。本发明的糖尿病皮肤病变风险筛查试剂盒能短时高效的采集糖尿病患者皮肤表面微生物标本并对皮肤病变风险的判断形成有效的帮助。
Description
技术领域
本发明涉及糖尿病皮肤病变风险筛领域，尤其涉及一种糖尿病皮肤病变风险筛查试剂盒及筛查方法。
背景技术
糖尿病足病患者预后是否良好，与是否能早期及时地判断病情发展有关系，而患者的病情发展往往伴随着表面微生物菌群的改变。前期本课题组研究发现，纳入研究的五组不同患糖尿病足风险受试者皮肤表面菌群分布类型各不相同。非糖尿病受试者组以葡萄球菌和棒状杆菌为主。糖尿病足（DF）的极低风险组葡萄球菌较少，棒状杆菌较多。DF的低风险组以普雷沃氏菌属、内切杆菌属和加德纳菌属为主。DF的中等风险组以新鞘氨醇杆菌属、变形杆菌、河口微菌属和大芬戈尔德菌为主。DF的高风险组中不动杆菌属、拟杆菌属、梭杆菌属、气单胞菌属和丛毛单胞菌属的数量增加。因此可见，随着DF风险的增加，厚壁菌门和放线菌门，革兰氏阳性（G+）细菌趋于减少，但变形菌门和拟杆菌门，革兰氏阴性（G-）细菌显示出上升趋势。
LPS（脂多糖）是G−细菌细胞壁的重要组成部分，我们进一步研究G−细菌是否通过LPS的作用引发糖尿病皮肤病变，而TLR4和CD14是针对LPS的人免疫应答的主要受体。免疫组化显示，与非糖尿病组相比，高风险组TLR4和CD14的表达显著增加，TLR4在表皮中显著表达，CD14主要在真皮中表达，局部应用TLR4拮抗剂利血平特异性减弱微生物群诱导的皮肤炎症。以上结果表明皮肤微生物组的生态失调，主要是G−细菌的增加，可能通过LPS-TLR 4信号转导引发炎症细胞浸润，导致促进糖尿病皮肤病变发展的炎症状态。另一方面，通过非靶向质谱皮肤代谢组学，发现丝氨酸与皮肤的几种代谢物生物学途径高度相关。比较健康受试者、糖尿病患者（DD）和糖尿病足患者（DF）三组受试者之间的皮肤H&E染色和皮肤丝氨酸含量，我们发现.糖尿病皮肤H&E染色后表皮层整体增厚，角质形成细胞增大、发育不良，部分角质化过度，角质层结构疏松，颗粒层薄，棘层肥大，颗粒层黑素细胞较少，表皮向下延伸呈波浪状。皮肤丝氨酸水平与糖尿病足风险水平的增加成比例地显著增加。当丝氨酸浓度（0.1 mmol/L）时人角质形成细胞增殖与正常皮肤相似。而丝氨酸过载（10 mmol/L）7 d后，人角质形成细胞增殖能力明显优于对照组。因此丝氨酸过载与糖尿病患者表皮形成细胞过度增殖密切相关。随着糖尿病并发症的进展，糖尿病患者的皮肤微生物组在分类和功能水平上经历动态变化。皮肤表面革兰氏阴性菌增多，通过LPS-TLR4信号转导和丝氨酸过载，可诱导早期糖尿病皮损的炎症反应和表皮角质细胞的不良增殖，从而极大的增加了患糖尿病足的风险。因此通过采集并检测糖尿病患者尚未发生糖尿病足的皮肤表面微生物代谢物LPS及丝氨酸含量，可以有效判断糖尿病足发生风险，及时干预处置可极大减少糖尿病足发生率。
然而，目前尚未有短时高效的微生物采集方法，现有的微生物采集方式如创面表面分泌物进行微生物培养、棉拭子、刮匙、探针、无菌针深部取材、脓液抽吸法都是针对已发生糖尿病足的患者，不能对糖尿病足高危人群进行早期筛查及预警，对于病情进展的判断也不能形成有效的帮助。
发明内容
本发明的目的一是提供一种糖尿病皮肤病变风险筛查试剂盒，能短时高效的采集具有患糖尿病足风险患者，也即尚未发生皮肤溃疡患者，皮肤足背表面微生物丝氨酸代谢物浓度及脂多糖（LPS)浓度，分别通过滤纸上的氨基酸显色斑点的颜色变化和硅胶薄层层析板上斑点颜色对疾病预警、病情进展的判断形成有效的帮助。
本发明的目的二是提供一种糖尿病皮肤病变风险筛查试剂盒的筛查方法，通过层析方法和化学反应能快速对糖尿病足高危人群进行早期筛查及预警。
为实现上述目的一，本发明提供一种糖尿病皮肤病变风险筛查试剂盒，包括板体，所述板体的一面分为手持区域和微生物采集区域，板体的该面在微生物采集区域处上下堆叠有多层贴片膜，每层贴片膜上粘贴有阵列分布的多片用于采集微生物的贴片，手持区域有一凹槽，凹槽内置有标本管、试剂、滤纸、硅胶薄层层析板以及紫色比色卡，试剂包括0.1％茚三酮溶液、第一种展层剂、层析液、丝氨酸标准溶液、第二种展层剂和硝酸银-茚三酮试液。
优选的，每相邻的上下两层贴片膜在多个贴片的周围相互粘接固定并且彼此可分离，最下层贴片膜粘接固定在板体上并且可撕离。
优选的，所述板体的顶面在微生物采集区域和手持区域相接的位置竖直朝上延伸有片状部，片状部朝向微生物采集区域的侧面凸出形成上下间隔分布的多个连接片，各层贴片膜与一所述连接片相连，并且在相连的位置设置有使各层贴片膜容易撕下的断续连接线。
优选的，所述板体的另一相对面黏贴有使用说明指示标识，使用说明指示标识位于板体的另一相对面对应贴片膜的位置处。
优选的，所述微生物采集区域的面积大于或等于手持区域的面积。
优选的，所述微生物采集区域的面积是板体设置所述微生物采集区域的表面的面积的1/2。
优选的，所述板体是长为8cm、宽为4cm、高为1-2cm的长方形形状。
优选的，各所述膜片是直径为1cm、厚度为0.1mm的圆形形状。
优选的，所述贴片膜的数量为十五张，每层贴片膜上的贴片的数量为十片。
为了实现上述目的二，本发明提供一种糖尿病皮肤病变风险筛查试剂盒的筛查方法，其步骤包括：
（1）将一张贴片膜上的十片贴片依次撕下并均贴在糖尿病患者无皮肤破损的足背表面，按压均匀，5分钟后撕下贴片，收集贴片于标本管中后往标本管加入适量去离子水，在涡旋混匀仪中震荡混匀，获得混悬液；
（2）将层析液倒入一展开缸中静置20min，在一滤纸上距滤纸下端2cm处划一横线，将待测混悬液用毛细管点样于横线上形成待测样品点，点样半径不要超过2mm，将L-丝氨酸标准溶液用毛细管点样于距待测样品点1.5 cm处的横线上，点样半径不要超过2mm，待混悬液样液自然挥发干后倾斜放入展开缸中，下端1cm左右浸入层析液中，上端高出展开缸的部分延展开缸边缘折叠挂于展开缸上，确保滤纸不与展开缸内壁接触，待层析液上行至距折线1cm左右时取出滤纸，放入105℃的干燥箱中干燥5min，干燥后的滤纸上会呈现明显的氨基酸显色斑点，与紫色比色卡比对，紫色颜色越深说明丝氨酸浓度更高；
（3）取同一混悬液10μl，点于硅胶薄层层析板上，加适当第二种展开剂50min后取出，喷以0.1mol／L硝酸银乙醇试液，吹干后再喷1％茚三酮-乙醇试剂，热风吹干，在硅胶薄层层析板上可以清晰地看到被洗脱下来的细菌内毒素的斑点，即硅胶薄层层析板上斑点淡红色变色结果；
（4）根据获得氨基酸显色斑点与细菌内毒素的斑点联合分析结果，评估糖尿病皮肤病变风险。
与现有技术相比，本发明的一种糖尿病皮肤病变风险筛查试剂盒及筛查方法的有益效果如下：
（1）通过采用贴片膜，无需抽血，可快速高效无创采集糖尿病尚未发生皮肤溃疡患者足背皮肤表面微生物丝氨酸代谢物及脂多糖（LPS），并对疾病发生预警、病情进展的判断形成有效的帮助。
（2）整体设计简单，有标准卡可比对，判断方便，更加直观表现患者的皮肤表面丝氨酸浓度高低。
（3）通过使用说明指示标识，步骤清晰，操作人员易上手。
（4）通过层析方法和化学反应使特定氨基酸显色，无需通过高效液相色谱仪分析各种氨基酸成分，成本较低，易于实现。
通过以下的描述并结合附图，本发明将变得更加清晰，这些附图用于解释本发明的实施例。
附图说明
图1为糖尿病皮肤病变风险筛查试剂盒的立体图一。
图2为滤纸放入展开缸中实验时的立体图。
图3为紫色比色卡的示意图。
图4为硅胶薄层层析板的示意图。
图5为糖尿病皮肤病变风险筛查试剂盒另一实施方式的立体图。
图6为糖尿病皮肤病变风险筛查试剂盒再一实施方式的立体图。
附图标号说明：板体1，手持区域11，微生物采集区域12，贴片13，使用说明指示标识2。
实施方式
现在参考附图描述本发明的实施例，附图中类似的元件标号代表类似的元件。
请参考图1-4，所述的糖尿病皮肤病变风险筛查试剂盒包括板体1，板体1采用医用塑料材质制成。所述板体1的一面分为手持区域11和微生物采集区域12，微生物采集区域12的面积等于手持区域11的面积，微生物采集区域12的面积是板体1设置微生物采集区域12的表面的面积的1/2。
板体11的该面在微生物采集区域12处上下堆叠有多层贴片膜13，每层贴片膜13上粘贴有阵列分布的多片用于采集微生物的贴片131（每相邻的上下两层贴片膜13在多个贴片131的周围相互粘接固定并且彼此可分离，最下层贴片膜13粘接固定在板体1上并且可撕离。贴片膜13的数量为十五张，每层贴片膜13上的贴片131的数量为十片。
板体1是长为8cm、宽为4cm、高为1cm的长方形形状，贴片131是直径为1cm、厚度为0.1mm的圆形形状。贴片膜13采用CUDERM D100皮肤角质层取样贴片，基材为聚酯材质，颜色为透明色。
手持区域11有一凹槽14，凹槽14内置有标本管、试剂、滤纸、硅胶薄层层析板及紫色比色卡。
试剂包括0.1％茚三酮溶液、第一种展层剂、层析液、丝氨酸标准溶液、第二种展层剂和硝酸银-茚三酮试液。
以下为试剂盒中所含试剂及耗材的具体配置方法（参考相关文献：关洪亮,熊倩,余训民,等. 茚三酮法定性定量检测丝氨酸[J]. 武汉工程大学学报,2012,34(11):40-43；陈孜,任国梅. 薄层层析法分离鉴定细菌内毒素的研究[J]. 广东药学院学报,1998, (1):52-53. ）
0.1％茚三酮溶液7ml的配制方法为：称取0.1g茚三酮溶于95％乙醇中，定容至100mL。
第一种展层剂20ml的配制方法为：正丁醇：95％乙醇：冰醋酸：水按体积比4：1：1：2配制。
层析液10ml (0.1％茚三酮-第一种展层剂)：（每10 mL展层剂中加入2.5 mL 0．1％茚三酮溶液），pH为4.50左右。
丝氨酸标准溶液10ml：（1g／L的L一丝氨酸标准溶液配制方法：称取0.1g丝氨酸溶于100mL去离子水中）。
硅胶薄层层析板（配制方法：称取硅胶G 3.5g，加入约10ml单蒸水，研磨成均匀糊状，涂成300μm厚的薄层板。室内自然风干后，置 110℃烘烤 2h，放干燥器内。
第二种展层剂：配置方法：乙酸甲酯：异丙醇：0.8％氯化钙：5mol／L氨水按体积比45：35：20：10 配置。
硝酸银-茚三酮试液（配置方法：0.1mol／L硝酸银-85％乙醇液和1％茚三酮-90％乙醇液组成）。
实验室自备：实验室旋涡混匀仪；滤纸；毛细管；展开缸(规格100mm×100mm)；干燥箱；去离子水。
使用时，医护人员手持所述手持区域11处，将一张贴片膜13上的十片贴片131依次撕下并均贴在糖尿病患者无皮肤破损的足背表面，5分钟后医护人员撕下十片贴片131离开糖尿病患者皮肤，通过十片贴片131的粘性，可以将糖尿病患者足背表面的微生物丝氨酸代谢物黏附在贴片131上，收集贴片131于标本管中后往标本管内加入适量去离子水，在涡旋混匀仪中震荡混匀，获得混悬液，将预先配制的层析液倒入展开缸中静置20min，使缸内环境达到平衡，在距滤纸下端2cm处划一横线，将待测样品用毛细管点样于横线上，点样半径不要超过2mm，将L一丝氨酸标准溶液用毛细管点样于距待测样品点1.5 cm处的横线上，点样半径不要超过2mm。待样液自然挥发干后倾斜放入展开缸中，下端1cm左右浸入层析液中，上端高出展开缸的部分延展开缸边缘折叠挂于展开缸上，确保滤纸不与展开缸内壁接触，待层析液上行至距折线1cm左右时取出滤纸，放入105℃的干燥箱中干燥5min，干燥后的滤纸上会呈现明显的氨基酸显色斑点，与紫色比色卡比对，紫色颜色越深说明丝氨酸浓度更高。
取同一混悬液10μl，点于硅胶薄层层析板上，加适当第二种展开剂 50min后取出，喷以0.1mol／L硝酸银乙醇试液，吹干后再喷1％茚三酮-乙醇试剂，热风吹干，在硅胶薄层层析板上可以清晰地看到被洗脱下来的细菌内毒素的斑点，即观察硅胶薄层层析板上斑点淡红色变色结果。
结果分析
在其他实施例中，板体1是长为8cm、宽为4cm、高为2cm的长方形形状。
在其他实施例中，板体1是长为8cm、宽为4cm、高为1.5cm的长方形形状。
在其他实施例中，微生物采集区域12的面积大于手持区域11的面积，这种情况下，微生物采集区域12的宽度为4cm、长度为5cm，手持区域11的宽度为4cm、长度为3cm；或者微生物采集区域12的宽度为4cm、长度为6cm，手持区域11的宽度为4cm、长度为2cm。
在其他实施例中，所述板体1的另一相对面黏贴有使用说明指示标识2，使用说明指示标识2位于板体1的另一相对面对应贴片膜13的位置处，使用说明指示标识2有提示怎样使用糖尿病皮肤菌群检测试剂盒的提示，可以让没有操作基础的人也能自行完成采集患者表面微生物的操作，如图2所示。
在其他实施例中，如图6所示，所述板体1的顶面在微生物采集区域12和手持区域11相接的位置竖直朝上延伸有片状部15，片状部15朝向微生物采集区域12的侧面凸出形成上下间隔分布的多个连接片151，各层贴片膜13与一所述连接片151相连，并且在相连的位置设置有使各层贴片膜13容易撕下的断续连接线152。沿着断续连接线152，可方便将各层贴片膜13撕下。
以上结合最佳实施例对本发明进行了描述，但本发明并不局限于以上揭示的实施例，而应当涵盖各种根据本发明的本质进行的修改、等效组合。
Claims (10)
1.一种糖尿病皮肤病变风险筛查试剂盒，其特征在于，包括：板体，所述板体的一面分为手持区域和微生物采集区域，板体的该面在微生物采集区域处上下堆叠有多层贴片膜，每层贴片膜上粘贴有阵列分布的多片用于采集微生物的贴片，手持区域有一凹槽，凹槽内置有标本管、试剂、滤纸、硅胶薄层层析板以及紫色比色卡，试剂包括0.1％茚三酮溶液、第一种展层剂、层析液、丝氨酸标准溶液、第二种展层剂和硝酸银-茚三酮试液。
2.如权利要求1所述的糖尿病皮肤病变风险筛查试剂盒，其特征在于：每相邻的上下两层贴片膜在多个贴片的周围相互粘接固定并且彼此可分离，最下层贴片膜粘接固定在板体上并且可撕离。
3.如权利要求1所述的糖尿病皮肤病变风险筛查试剂盒，其特征在于：所述板体的顶面在微生物采集区域和手持区域相接的位置竖直朝上延伸有片状部，片状部朝向微生物采集区域的侧面凸出形成上下间隔分布的多个连接片，各层贴片膜与一所述连接片相连，并且在相连的位置设置有使各层贴片膜容易撕下的断续连接线。
4.如权利要求2或3所述的糖尿病皮肤病变风险筛查试剂盒，其特征在于：所述板体的另一相对面黏贴有使用说明指示标识，使用说明指示标识位于板体的另一相对面对应贴片膜的位置处。
5.如权利要求2或3所述的糖尿病皮肤病变风险筛查试剂盒，其特征在于：所述微生物采集区域的面积大于或等于手持区域的面积。
6.如权利要求5所述的糖尿病皮肤病变风险筛查试剂盒，其特征在于：所述微生物采集区域的面积是板体设置所述微生物采集区域的表面的面积的1/2。
7.如权利要求6所述的糖尿病皮肤病变风险筛查试剂盒，其特征在于：所述板体是长为8cm、宽为4cm、高为1-2cm的长方形形状。
8.如权利要求6所述的糖尿病皮肤病变风险筛查试剂盒，其特征在于：各所述膜片是直径为1cm、厚度为0.1mm的圆形形状。
9.如权利要求8所述的糖尿病皮肤病变风险筛查试剂盒，其特征在于：所述贴片膜的数量为十五张，每层贴片膜上的贴片的数量为十片。
10.一种如权利要求9所述的糖尿病皮肤病变风险筛查试剂盒的筛查方法，其步骤包括：
（1）将一张贴片膜上的十片贴片依次撕下并均贴在糖尿病患者无皮肤破损的足背表面，按压均匀，5分钟后撕下贴片，收集贴片于标本管中后往标本管加入适量去离子水，在涡旋混匀仪中震荡混匀，获得混悬液；
（2）将层析液倒入一展开缸中静置20min，在一滤纸上距滤纸下端2cm处划一横线，将待测混悬液用毛细管点样于横线上形成待测样品点，点样半径不要超过2mm，将L-丝氨酸标准溶液用毛细管点样于距待测样品点1.5 cm处的横线上，点样半径不要超过2mm，待混悬液样液自然挥发干后倾斜放入展开缸中，下端1cm左右浸入层析液中，上端高出展开缸的部分延展开缸边缘折叠挂于展开缸上，确保滤纸不与展开缸内壁接触，待层析液上行至距折线1cm左右时取出滤纸，放入105℃的干燥箱中干燥5min，干燥后的滤纸上会呈现明显的氨基酸显色斑点，与紫色比色卡比对，紫色颜色越深说明丝氨酸浓度更高；
（3）取同一混悬液10μl，点于硅胶薄层层析板上，加适当第二种展开剂50min后取出，喷以0.1mol／L硝酸银乙醇试液，吹干后再喷1％茚三酮-乙醇试剂，热风吹干，在硅胶薄层层析板上可以清晰地看到被洗脱下来的细菌内毒素的斑点，即硅胶薄层层析板上斑点淡红色变色结果；
（4）根据获得氨基酸显色斑点与细菌内毒素的斑点联合分析结果，评估糖尿病皮肤病变风险。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202311589904.8A CN117607334A (zh) | 2023-11-27 | 2023-11-27 | 糖尿病皮肤病变风险筛查试剂盒及筛查方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202311589904.8A CN117607334A (zh) | 2023-11-27 | 2023-11-27 | 糖尿病皮肤病变风险筛查试剂盒及筛查方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN117607334A true CN117607334A (zh) | 2024-02-27 |
Family
ID=89955680
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202311589904.8A Pending CN117607334A (zh) | 2023-11-27 | 2023-11-27 | 糖尿病皮肤病变风险筛查试剂盒及筛查方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN117607334A (zh) |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE102006026173A1 (de) * | 2006-06-06 | 2007-12-20 | Fachhochschule Südwestfalen | Verfahren zur nichtinvasiven Diagnose von Diabetes |
| CN103823014A (zh) * | 2014-02-12 | 2014-05-28 | 长春大合生物技术开发有限公司 | 组合物、试剂盒及其用途和用其分析氨基酸方法 |
| CN107773275A (zh) * | 2017-11-20 | 2018-03-09 | 珠海伊斯佳科技股份有限公司 | 一种皮肤检测采样包及其应用 |
| WO2020045364A1 (ja) * | 2018-08-27 | 2020-03-05 | 株式会社 資生堂 | 乾癬を判定するための皮膚試料の分析方法及びシステム |
| CN210285292U (zh) * | 2019-07-31 | 2020-04-10 | 康迪菲（苏州）生物科技有限公司 | 一种皮肤贴片 |
| CN210541509U (zh) * | 2019-05-16 | 2020-05-19 | 上海市皮肤病医院 | 一种皮肤代谢速率监测试剂盒 |
-
2023
- 2023-11-27 CN CN202311589904.8A patent/CN117607334A/zh active Pending
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE102006026173A1 (de) * | 2006-06-06 | 2007-12-20 | Fachhochschule Südwestfalen | Verfahren zur nichtinvasiven Diagnose von Diabetes |
| CN103823014A (zh) * | 2014-02-12 | 2014-05-28 | 长春大合生物技术开发有限公司 | 组合物、试剂盒及其用途和用其分析氨基酸方法 |
| CN107773275A (zh) * | 2017-11-20 | 2018-03-09 | 珠海伊斯佳科技股份有限公司 | 一种皮肤检测采样包及其应用 |
| WO2020045364A1 (ja) * | 2018-08-27 | 2020-03-05 | 株式会社 資生堂 | 乾癬を判定するための皮膚試料の分析方法及びシステム |
| CN210541509U (zh) * | 2019-05-16 | 2020-05-19 | 上海市皮肤病医院 | 一种皮肤代谢速率监测试剂盒 |
| CN210285292U (zh) * | 2019-07-31 | 2020-04-10 | 康迪菲（苏州）生物科技有限公司 | 一种皮肤贴片 |
Non-Patent Citations (6)
| Title |
|---|
| ANGELA CAPPELLO等: "Extracellular serine empowers epidermal proliferation and psoriasis-like symptoms", SCI. ADV., vol. 8, 16 December 2022 (2022-12-16), pages 1 - 17 * |
| JONAS A. ANDERSEN ET AL: "Metabolomic Risk Predictors of Diabetic Foot Complications: a longitudinal 1 observational study in Type 1 Diabetes", MEDRXIV, 30 August 2023 (2023-08-30), pages 1 - 21 * |
| QIYING XIONG ET AL: "LC– MS metabolomics reveal skin metabolic signature of psoriasis vulgaris", EXPERIMENTAL DERMATOLOGY, vol. 32, 30 June 2023 (2023-06-30), pages 889 - 899 * |
| SHAGHAYEGH HOSSEINKHANI ET AL: "Targeted metabolomics analysis of amino acids and acylcarnitines as risk markers for diabetes by LC–MS/MS technique", SCIENTIFIC REPORT, vol. 12, 19 May 2022 (2022-05-19), pages 1 - 11 * |
| SHILI ZHANG 等: "Gram-Negative Bacteria and Lipopolysaccharides as Risk Factors for the Occurrence of Diabetic Foot", THE JOURNAL OF CLINICAL ENDOCRINOLOGY & METABOLISM, vol. 108, 28 March 2023 (2023-03-28), pages 2604 - 2614 * |
| V. FRIDMAN ET AL: "Altered plasma serine and 1-deoxydihydroceramide profiles are associated with diabetic neuropathy in type 2 diabetes and obesity", JOURNAL OF DIABETES AND ITS COMPLICATIONS, vol. 35, 9 January 2021 (2021-01-09), pages 1 - 9 * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CA2185555C (en) | Integrated system for biological fluid constituent analysis | |
| JP4191051B2 (ja) | 血漿又は血清分離具 | |
| US6071247A (en) | Skin blister biopsy apparatus and method | |
| EP1038176B1 (en) | Embossed test strip system | |
| AU754536B2 (en) | Device for the determination of blood clotting by capacitance or resistance | |
| US7021122B1 (en) | Device for the determination of blood clotting by capacitance or resistance | |
| JP2002510392A (ja) | 体液内分析物測定装置 | |
| JP2001518622A (ja) | 毛細管試薬キャリアーを用いた分析装置 | |
| GB2441784A (en) | Device for obtaining and analysing a biological fluid | |
| US20100256464A1 (en) | Device for determining risk of developing breast cancer and method thereof | |
| CN102776267A (zh) | 直接分析通过胶带剥离获得的皮肤样品中的皮肤胆固醇 | |
| NO331851B1 (no) | Innretning for provetaking av flytende medier | |
| CN117607334A (zh) | 糖尿病皮肤病变风险筛查试剂盒及筛查方法 | |
| Géhin et al. | No skin off your back: the sampling and extraction of sebum for metabolomics | |
| CN113804876A (zh) | 一种用于唾液样品中分析物检测的侧向层析检测卡 | |
| CN101865852A (zh) | 一种总胆固醇比色卡 | |
| CN101865851A (zh) | 一种快速乳酸检测卡 | |
| WO2003025574A1 (en) | Embossed test strip system | |
| JP3233795U (ja) | サンプル収集および検出装置 | |
| WO2012008747A2 (ko) | 피부 진단 방법 및 키트 | |
| JP3359391B2 (ja) | 腫瘍検査用貼付剤及びそれを用いる検査方法 | |
| CN117741129A (zh) | 一种无创的检测口腔黏膜组织渗出液蛋白水平装置 | |
| JP2575652B2 (ja) | インスタント・パツチテスト・アレルゲン | |
| CN106018053B (zh) | 糖化血红蛋白检测用微量红细胞采集装置及采集检测方法 | |
| JP2002372527A (ja) | 経血又は膣分泌物採取器具、キット及び方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |