JP7357645B2 - 敏感肌の処置のための抽出物および該抽出物を含む皮膚科用組成物 - Google Patents
敏感肌の処置のための抽出物および該抽出物を含む皮膚科用組成物 Download PDFInfo
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Description
本発明は、敏感肌および/または反応性の不耐性皮膚(reactive intolerant skin)の保護および/または処置、特に皮膚の神経原性炎症に対する標的化された作用を介した保護および/または処置に有用であり得る新規な細菌抽出物に関する。本発明はまた、そのような細菌抽出物を活性成分として含有する化粧品組成物または皮膚科用組成物にも関する。
表皮は多層化した上皮(pluristratified epithelium)であり、その環境および害からの防護バリアとして機能している。その複数の生理機能のうち、表皮は微生物による身体の侵襲に対する生物学的、物理的および化学的バリアを構成する機能を有する。この表皮の物理的バリア特性は、その構造と顕著に関連している。例えば、表皮は、通常、表皮の胚芽層を構成するケラチノサイトの基底層と、数層の多面細胞(polyhedral cell)からなるいわゆる有棘層と、そして最後に、一連の上層(角質細胞と呼ばれる分化の最終段階にあるケラチノサイトからなる角質層(horny layerまたはstratum corneum)と呼ばれる)とに分けられる。表皮の化学的バリア特性は、特に、表皮の表面における多くの抗菌ペプチドの放出に依存している。表皮細胞の構造組織における機能不全、または表皮の化学バリア機能の欠陥は、皮膚の炎症状態をもたらし得る。
-化学的刺激物、例えば、特定の石鹸、家庭用洗剤、汚染物質と接触したときに起こる炎症反応。したがって、これらの物質を誘発する閾値(the threshold triggering these substances)が、敏感肌または不耐性皮膚を誘発する;
-表皮バリア機能の変化。この現象は、次いで、皮膚の脱水およびとりわけ潜在的な刺激物の浸透を促進する;
-心理的要因、例えば、ストレス;
-ホルモン要因;
-物理的要因、例えば、日光、温度変化(暖かい/冷たい)、風、エアコン、暖房、硬水
によって説明可能である。
本発明者らは、驚くべきことに、皮膚の神経原性炎症の予防および/または処置における特定の新規な細菌抽出物の有効性を明らかにした。
第1の実施形態によれば、本発明の目的は、本発明の細菌抽出物、ならびに皮膚の神経原性炎症の予防および/または処置における該細菌抽出物の使用である。
a)本発明の細菌、特にLMB64を、好適な培地で培養して細菌培養物を得る工程;
b)前記培養物の液体/固体を分離し、液相を除去する工程;
c)前記分離された固相の細胞を溶解する工程;
d)前記固相の溶解物を、水性液相、好ましくは緩衝化された水性液相に再懸濁する工程;
e)前記再懸濁された液体/固体を分離し、液相を回収する工程;
f)必要に応じて、前記回収された液相をろ過する工程
を含んでなる。
例として、好ましい培養培地は、塩化アンモニウム、硫酸マグネシウムおよび酵母エキスを含む。また、出願WO2012/085182等に示されているように、その他の類似の培地が使用されてもよく、したがって、本明細書の不可欠な部分として考慮されるべきであることにも留意すべきである。当業者によるいかなる改変もまた、本発明の一部として考慮されなければならない。
-滅菌された50%グルコース溶液を含むバイアル。この溶液(グルコースバッチ前培養)は、初期グルコース濃度が20g/Lになるように直ちに培養培地に移される。
-上記植菌工程で説明した植菌液を入れた三角フラスコは、前発酵槽に植菌される。
-滅菌されたグルコース溶液を含むバイアル。この溶液は、初期グルコース濃度が20g/Lになるように直ちに培養培地に移される。
-消泡剤のボトル。この消泡剤は、培養中に自動的に添加され、発酵槽内の泡のレベルをコントロールする。
-フェッドバッチグルコースのボトル。この溶液は、細胞の成長をサポートするために培養中に添加される。
以下の例は、好ましい実施形態の例示として示されているが、限定的と考えるべきではない。
本試験の目的は、皮膚の炎症における本発明の細菌抽出物の調節特性を評価することである。そのために、サブスタンスPによって活性化されたヒト表皮ケラチノサイトによる腫瘍壊死因子-α(TNF-α)およびインターロイキン-1β(IL-1β)の産生および放出の測定に基づくin vitroの実験的アプローチが、皮膚の神経原性炎症のin vitroモデルとして提案されている。
正常なヒト表皮ケラチノサイトに対して、この試験を実施する。これらの細胞は新生児の***から得られたものである。従来の実験室での手順を使用して、これらの細胞を無血清培地で培養する。試験される化合物(本発明の細菌抽出物および参照化合物)の非存在下(対照条件)または存在下で、場合によりサブスタンスPに曝露された培地中で培養されたこれらのケラチノサイトについて、皮膚の神経原性炎症のマーカーの決定を実施する。炎症性サイトカイン(TNF-αおよびIL-1β)のレベルは、サブスタンスP(0.5μM)の添加による炎症性ストレスの誘導の24時間後に定量される。同時に、参照化合物として選択的NK-1R阻害剤である化合物CP96345を1μMで試験する。2つの異なるケラチノサイトドナーで、各実験条件を実施する。
皮膚のバリア機能には、微生物に対する防御も含まれている。上皮は、生得的な宿主防御において積極的な役割を果たしている。皮膚の抗菌システムは、数ある中でも、特定の表面脂質および特定の構成タンパク質の存在に基づいている。これらのタンパク質は抗菌活性を有する。さらに、表皮表面の酸性化は、皮膚の抗菌防御なしでも、重要な役割を果たしている。このように、皮膚は、物理的なバリアとしてだけでなく、化学的なバリアとしても機能している。抗菌ペプチドの誘導性分泌に基づく自然免疫の順応的要素もある。後者は、上皮細胞および炎症性細胞に作用し、細胞増殖およびサイトカイン産生に影響を与えることにより、炎症のメディエーターとして重要な役割を果たす。それらの作用様式は、感染性微生物の細胞膜を破裂させること、または細胞内代謝を妨害するために微生物の中に入ることで構成されている。皮膚で最も研究されている抗菌ペプチドは、β-デフェンシンおよびカテリシジンである。ヒトのβ-デフェンシンは、ヒト上皮に見られる抗菌ペプチドの主要な部類であり、そのうち4つが皮膚で同定されており、HBD1~4である。これらは同一のファミリーに属しているが、異なる経路で制御されている。4kDaのヘパリン結合ペプチドであるヒトβ-デフェンシン2(hBD2)は、主要な皮膚抗菌ペプチドの1つである。hBD2ペプチドの発現は、炎症状態を反映するサイトカイン(IL-1α、IL-1βおよびTNF-α)の分泌によって、あるいは、細菌または真菌との接触によって誘導される。
ポジティブコントロールとして使用した1.5mM 塩化カルシウムで正常ヒト表皮ケラチノサイトを処理すると、自然免疫の標的遺伝子の強発現が誘導される。この結果により、実験条件の有効性が確認される(表4)。
Claims (9)
- 皮膚の神経原性炎症を予防および/または処置するための医薬品の製造における、非病原性グラム陰性細菌の細菌抽出物の使用であって、
前記細菌は、2010年4月8日にCNCMに番号I-4290として寄託されたLMB64であり、
前記細菌抽出物は、以下の工程:
a.前記細菌を好適な培地で培養して細菌培養物を得る工程;
b.前記培養物の液体/固体を分離し、液相を除去する工程;
c.前記分離された固相の細胞を溶解する工程;
d.前記固相の溶解物を、水性液相に再懸濁する工程、ここで、前記水性液相は、トリス-アルギニン緩衝液である;
e.前記再懸濁された液体/固体を分離し、液相を回収する工程
を含んでなる方法によって得られる、前記使用。 - 前記方法が、以下の工程:
f.必要に応じて、前記回収された液相を濾過する工程
をさらに含んでなる、請求項1に記載の使用。 - 前記細菌が、配列番号2の配列を含んでなる1つ以上のプラスミドを含むことを特徴とする、請求項1または2に記載の使用。
- 前記皮膚の神経原性炎症が、敏感肌および/または不耐性皮膚の炎症を含むことを特徴とする、請求項1~3のいずれか一項に記載の使用。
- 細菌抽出物と、化粧品としてまたは皮膚科学的に許容可能な1種以上の賦形剤とを含んでなる化粧品組成物または皮膚科用組成物であって、
前記細菌抽出物は、非病原性グラム陰性細菌の細菌抽出物であり、
前記細菌は、2010年4月8日にCNCMに番号I-4290として寄託されたLMB64であり、
前記細菌抽出物は、以下の工程:
a.前記細菌を好適な培地で培養して細菌培養物を得る工程;
b.前記培養物の液体/固体を分離し、液相を除去する工程;
c.前記分離された固相の細胞を溶解する工程;
d.前記固相の溶解物を、水性液相に再懸濁する工程、ここで、前記水性液相は、トリス-アルギニン緩衝液である;
e.前記再懸濁された液体/固体を分離し、液相を回収する工程
を含んでなる方法によって得られる、前記化粧品組成物または皮膚科用組成物。 - 前記方法が、以下の工程:
f.必要に応じて、前記回収された液相を濾過する工程
をさらに含んでなる、請求項5に記載の化粧品組成物または皮膚科用組成物。 - 局所適用に適していることを特徴とする、請求項5または6に記載の化粧品組成物または皮膚科用組成物。
- 皮膚の神経原性炎症を予防および処置するための医薬品の製造における、請求項5~7のいずれか一項に記載の皮膚科用組成物の使用。
- 前記皮膚の神経原性炎症が敏感肌および/または不耐性皮膚の炎症を含むことを特徴とする、請求項8に記載の使用。
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