JP7324565B2 - Cd127に対する抗体 - Google Patents
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Description
CD127は、IL-7受容体(IL-7R)とTSLP受容体(TSLPR)に共通している。IL-7Rは、CD127とインターロイキン受容体の共通ガンマ鎖(γc)のヘテロ二量体から構成される。共通ガンマ鎖γcは、本明細書において及び文献において、CD132と呼ばれることもある。IL-7Rは、インターロイキン7によって結合される。TSLP受容体は、CD127とサイトカイン受容体様因子2(CRLF2)のヘテロ二量体である。TSLP受容体はTSLPによって結合される。文献では、TSLPRを用いて、この受容体のCRLF2鎖とCD127/CRLF2複合体の両方を表すこともある。混乱を避けるために、以下において、TSLPRは、通常、この複合体を表す。
IL-7のIL-7Rへの結合は、Janusキナーゼ(JAK)-1及び-3、シグナル伝達兼転写活性化因子5(STAT5)、及びホスファチジルイノシトール 3-キナーゼ(PI3-k)を含む、いくつかのシグナル伝達経路の活性化を誘発する。STAT1及びSTAT3経路が活性化されることが報告されているが、それらは主要な経路ではないように思われる。STAT5経路の活性化は、抗アポトーシスタンパク質Bcl-2の誘導及びアポトーシス促進性タンパク質Baxのミトコンドリアへの侵入の防止に必要とされ、したがって、胸腺で発生するT細胞前駆細胞の生存に必要とされる。PI3-k経路の活性化は、アポトーシス促進性タンパク質Badのリン酸化及び細胞質保持をもたらす。
胸腺間質性リンホポイエチン(TSLP)は、リンパ球産生に活性があり、特に、免疫系の細胞の発生の調節に関与する上皮細胞サイトカインであり、該調節は、特に、該細胞の成熟に影響を及ぼす。ヒトTSLP(Genbankアクセッション番号AF338732)は、樹状細胞の分極化を働かせ、T細胞及びB細胞の増殖及び分化を促進する因子である。TSLPはまた、Treg細胞の発生を抑制する(Leiらの文献、2011)。
「CD127陽性細胞」は、その細胞表面でCD127を発現する細胞を表す。ほとんどの場合、CD127陽性細胞は、IL-7Rを形成する複合体中に(IL-7R陽性細胞)及び/又はTSLPRを形成する複合体中に(TSLPR陽性細胞)、CD127を発現する。CD127は、様々な細胞によって発現され、これには、メモリーT細胞とナイーブT細胞によるものが含まれる。CD127は、特に、休止T細胞及びメモリーT細胞を含むエフェクターT細胞(Teff)によって、並びに未成熟B細胞によって発現されるが、とりわけ、休止ナチュラル調節性T細胞(ナチュラルTreg)によっては発現されない。IL-7Rαは、胸腺細胞の分化及びリンパ球のクローン性増殖の促進に不可欠である。
樹状細胞は、成熟後に、T細胞媒介性免疫応答を促進する高レベルの共刺激分子、例えば、CD80を発現する。それらは、T細胞で走化性を誘導する、TARC(CCL17)というサイトカインを産生する。したがって、成熟樹状細胞は、例えば、喘息、関節リウマチ、結腸炎、多発性硬化症、及びブドウ膜炎で見られるような、T細胞応答が効果を現すいくつかの免疫媒介疾患の生理病理学に寄与する。成熟樹状細胞は、細胞、組織、又は臓器同種移植片の拒絶過程においても重要な役割を果たす。それゆえ、多くの治療戦略は、樹状細胞成熟を妨げることを目的としている。
・VHCDR1配列番号10;
・VHCDR2配列番号12;
・VHCDR3配列番号14もしくは配列番号48;
・VH配列番号22
のうちの少なくとも1つを含むVH鎖及び/又は以下のアミノ酸配列:
・VLCDR1配列番号16もしくは配列番号50;
・VLCDR2配列番号18もしくは配列番号52;
・VLCDR3配列番号20;
・VL配列番号24
のうちの少なくとも1つを含むVL鎖
を含む。
(a)該エピトープは、CD127の2b部位から、特に、配列番号114のアミノ酸109~127から、より具体的には、配列番号114のアミノ酸110~125、110~120、112~120から、より具体的には、配列番号114のアミノ酸114~119(配列番号116に対応する)から取られた配列、特に、少なくとも3つ、4つ、5つ、6つ、又は7つの連続するアミノ酸を含み;特に、該エピトープは、配列番号116を含み、特に、配列番号86を含み;特に、該エピトープは、CD127のP112又はL115を含む;
(b)上記の(a)の特徴に加えて、該エピトープは、CD127のD1ドメインから、特に、配列番号114のアミノ酸1~98から取られた配列、特に、少なくとも3つ、4つ、5つ、6つ、又は7つの連続するアミノ酸を含み;特に、該エピトープは、配列番号115のアミノ酸配列を含む(特に、ep1(配列番号110)のアミノ酸配列を含む)、
(c)上記の(a)の特徴及び任意に(b)の特徴に加えて、該エピトープは、配列番号114のアミノ酸180~220から、特に、アミノ酸190~200から取られた配列、特に、3つ、4つ、5つ、6つ、又は7つの連続するアミノ酸を含み;特に、該エピトープは、配列番号117のアミノ酸配列を含み;特に、ep2(配列番号111)のアミノ酸配列を含む;
(d)該エピトープは、配列番号115の配列及び配列番号116の配列を含むか、又は該エピトープは、配列番号117の配列及び配列番号116の配列を含み;特に、該エピトープは、配列番号115、配列番号116、及び配列番号117の配列を含む;
(e)該エピトープは、上記の(a)、(b)、(c)、及び/又は(d)で定義されたCD127の配列を含み、かつ明示的に言及されたもの以外のCD127の(3つ、4つ、又は5つを超える連続するアミノ酸の)アミノ酸配列を含まない、すなわち、特に、該エピトープは、CD127由来の以下の配列のみを含む:
-特に、配列番号114のアミノ酸109~127、又は配列番号114のアミノ酸110~125、110~120、もしくは112~120、又は配列番号114のアミノ酸114~119(配列番号116に対応する)、又は配列番号86に対応する配列からなる、並びに/或いは部位2bから取られた3つのアミノ酸もしくは3つ、4つ、5つ、6つ、7つを超えるアミノ酸の配列及び部位2bから取られた19のアミノ酸又は19、18、15、11未満のアミノ酸の配列からなる、部位2bから取られた1つの配列、特に、CD127のP112又はL115を含むそのような配列;
-任意に、部位2bの配列に加えて、CD127のドメインD1から、特に、配列番号114のアミノ酸98から取られた1つの配列、特に、配列番号110からなるもしくは配列番号115からなる、並びに/又は配列番号115を含むかもしくは配列番号115の配列に含まれる3つのアミノ酸もしくは3つ、4つ、5つ、6つ、7つを超えるアミノ酸の配列及び配列番号115を含むかもしくは配列番号115の配列に含まれる20のアミノ酸もしくは20、18、16、11未満のアミノ酸の配列からなる、1つの配列;
-任意に、部位2bの配列に加えて、及び存在する場合、ドメインD1由来の任意の配列に加えて、配列番号114のアミノ酸180~220から取られた1つの配列;特に、配列番号111からなるもしくは配列番号117からなる、並びに/又は配列番号117を含むかもしくは配列番号117の配列に含まれる3つのアミノ酸もしくは3つ、4つ、5つ、6つ、7つを超えるアミノ酸の配列及び配列番号117を含むかもしくは配列番号117の配列に含まれる20のアミノ酸もしくは20、18、16、11未満のアミノ酸の配列からなる、1つの配列;
該エピトープは、追加のアミノ酸を含む可能性があるが、これらの追加のアミノ酸は、CD127の配列から取られないことを条件とする(すなわち、該エピトープは、部位2b由来の配列、並びに場合により、ドメインD1由来の任意の配列及び上記の配列番号114のアミノ酸180~220由来の任意の配列は別として、CD127の配列由来の3つ、4つ、又は5つを超える連続するアミノ酸を含まないことを条件とする);
(f)該エピトープは、上記の(a)、(b)、(c)、又は(d)に記載の特徴に加えて、配列番号114の領域99~108から取られた3つ、4つ、もしくは5つを超える連続するアミノ酸を含まず、配列番号114の領域128~179から取られた3つ、4つ、もしくは5つを超える連続するアミノ酸を含まず、及び/又は配列番号114の領域220~239から取られた3つ、4つ、もしくは5つを超える連続するアミノ酸を含まず、特に、配列番号114の領域99~108、128~179、及び220~239のいずれかに由来する3つ、4つ、又は5つを超える連続するアミノ酸を含まない;
(g)該エピトープは、上記の(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、及び/又は(f)で定義されたCD127の配列の組合せを含み、ここで、いくつかのアミノ酸は、突然変異させられ、特に、欠失させられ及び/又は置換され、特に、類似の特性を有するアミノ酸によって置換され(保存的置換);特に、該エピトープは、適切な場合、(b)、(c)、又は(d)で定義されたように組み合わされた、上記の(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、及び/又は(f)で定義されたCD127の配列との少なくとも80%、85%、90%、又は95%の配列同一性を有する配列からなるか又は該配列を含む;
(h)該エピトープは、上記の(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)及び/又は(g)で定義された特徴を有する立体構造エピトープである、すなわち、天然のCD127内の該配列の立体構造を模倣する立体構造の(単量体としてか、又はγcとの及び/もしくはIL-7と関連した二量体としてかのいずれかの)上記の(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、及び/又は(g)で定義された配列を含むか又は該配列からなる;
(i)該エピトープは、上記の(a)、(b)、(c)、(d)、(g)、及び/又は(h)の特徴を有するCD127の断片(すなわち、連続するアミノ酸のストレッチ)を含む;
(j)該エピトープは、上記の(g)で定義された特徴を有しており、予測可能な構造を持つペプチド集合の合成を可能にするCLIPS技術などの技術によって得られる。
本発明によれば、IL-7Rαタンパク質への「結合」は、抗原-抗体型相互作用を指し、かつ抗体又はその抗原結合性断片の「特異的結合」特性を包含し、この特異的結合は、該抗体又は抗原結合性断片がIL-7Rαタンパク質に結合する一方で、それらが他のタンパク質(例えば、共通のサイトカイン受容体γ鎖)に結合しないか又はそれに顕著により弱い親和性で結合することを意味する。特異的結合は、とりわけ、試験溶液のpH及び塩含有量に関して生理的条件下で定義及び/又は決定されることが好ましい。結合及び結合特異性は、実施例に開示される試験に従ってアッセイすることができ、特に、Biacore、ELISA、又はウェスタンブロット解析によってアッセイすることができる。
本発明の抗体は、TSLP受容体中のCD127に結合することができる(すなわち、CD127がCRLF2との複合体中にあってTSLP受容体を形成しているとき、CD127に結合することができる)。それゆえ、本発明の抗体は、TSLP誘導性及び/又はTSLP受容体媒介性シグナル伝達を妨害することができる。
特定の実施態様において、本発明の抗体(又は巨大分子)は、インビトロでのα4、β7、及びα4/β7インテグリンのIL7誘導性発現を阻害する。α4、β7、及びα4/β7インテグリンのIL7誘導性発現は、本明細書で使用される場合、α4インテグリン及びβ7インテグリンのどちらか又は両方の発現のレベルの増大、並びにα4、β7、及び/又はα4/β7インテグリンを発現するTリンパ球の数又は比率の増大を表す。阻害は部分的であり得る、すなわち、IL7の存在下でのα4、β7、及びα4/β7インテグリンの発現のレベルは、抗体の存在下では、ベースラインレベル(すなわち、抗体もIL7もない場合のレベル)よりも増大するが、抗体の非存在下では、より少なくなり;又は阻害は完全であり得る、すなわち、IL7の存在下及び抗体の存在下でのα4、β7、及びα4/β7インテグリンの発現のレベルは、ベースラインレベルほどの大きさである。
内在化とは、CD127などの細胞表面受容体が細胞の細胞質空間の内側に(おそらくは、細胞内区画又は膜の表面に/表面で)輸送され、その結果、細胞外空間からはもはや接近不可能となる細胞プロセスである、すなわち、内在化された受容体に、細胞外空間のリガンドは直接接触することができない。リガンドは、受容体の天然のリガンドであれ、受容体に結合した任意の人工リガンド又は他の分子であれ、受容体とともに内在化され得る。ほとんどの受容体は定期的な内在化を受け、その細胞表面発現は、内在化され、分解された受容体を新たに合成された/成熟した受容体に交換するか、又は直接的なリサイクリング、すなわち、内在化された受容体を輸送して細胞表面に戻すかのいずれかによって、一定に維持される。
特定の実施態様によれば、本発明の巨大分子、特に、抗体又はその抗原結合性断片は、IL7-Rのγc鎖へのCD127の結合を妨害し得る。これは、CD127とγc鎖が、抗体の非存在下で及び特にIL-7の存在下で結合する条件(特に、化学的及び物理的条件)の下で、該抗体の存在が該結合を顕著に低下させるということを意味する。特定の実施態様において、抗体の存在下及びIL-7の存在下で、CD127は、γcに結合しない。特に、抗体の存在下及びIL-7の存在下で、CD127と関連している(又は結合している)ことが見出されるγc鎖の量は、抗体の非存在下(又は別の抗CD-127抗体、例えば、MD707-13の存在下)、それ以外は同一の条件で、特に、IL-7の存在下で結合する量の80%未満、好ましくは50%未満、一層より好ましくは25%又は10%未満である。抗体のそのような特徴は、特に、タンパク質の相互作用を試験するために当業者によく知られており、かつ本明細書において実施例21に例示されている共免疫沈降法によって評価することができる。特に、細胞を被験抗体の存在下又は非存在下でインキュベートし、その後、タンパク質複合体の維持を可能にする条件で可溶化することができ、得られた溶解物を抗CD127免疫沈降に供し、CD127含有免疫沈降複合体中のγcの存在を、抗γc抗体を用いるウェスタンブロッティングによって評価することができる(逆に、免疫沈降を、抗γc抗体を用いて実施し、CD127の存在を、抗CD127抗体を用いて評価することができる)。
特定の実施態様によれば、本発明の巨大分子、特に、抗体又はその抗原結合性断片はさらに、インターロイキン7(IL-7)に対するアンタゴニスト特性を有し、それにより、CD127陽性細胞上のCD127へのIL-7の接近、すなわち、結合に拮抗する。
本発明の抗体はIL-7R中のCD127に結合するので、それは、TSLPR中のCD127にも結合することができ、特に、立体障害によって及び/又は共通の結合部位での競合によって、それは、TSLPRへのTSLPの結合を阻害することができる。言い換えると、本発明の抗体は、TSLPの結合に対するアンタゴニスト活性を示し得る。
特定の実施態様において、本発明の抗体は、CD127陽性細胞のTSLP誘導性のTARC産生を阻害することができる。上述のように、TSLP刺激された樹状細胞は、TARCのレベルの上昇をもたらす。これは、TSLPRに対するその結合及びTSLP結合のアンタゴニストとしてのその潜在的な作用によって生じ得る。
本発明の特定の実施態様において、IL-7受容体中に存在するCD127分子に対する本発明の抗体又はその抗原結合性断片はさらに、ヒト細胞、とりわけ、該受容体を発現するヒトT細胞に対して細胞傷害性であるという性質を有する。本発明の抗体及びその断片の標的である、IL-7受容体の鎖としてのCD127を発現するヒト細胞は、主にTリンパ球であり、より正確には、ナイーブT細胞及びメモリーT細胞を含む、エフェクターTリンパ球の亜集団であるが、調節性T細胞(Treg)ではなく、とりわけ、休止ナチュラルTregではない。メモリーT細胞は、抗原プライミングの結果として発生し、二次エフェクター細胞及びメモリー細胞への再活性化及び分化の際にリコール増殖(recall proliferation)を経る能力を含む、その機能的特性によって主に定義される。同様に、(IL-7-Rアルファ鎖を含む複合体としての)標的TSLP受容体は、Tヘルパーリンパ球、B細胞、及び樹状細胞分化を調節する。
・VHCDR1配列番号10;
・VHCDR2配列番号12;
・VHCDR3配列番号14;
のうちの少なくとも1つ、もしくは下記のそれらの好ましいヒト化変異体のうちの1つを含み、
・VLCDR1配列番号16;
・VLCDR2配列番号18;
・VLCDR3配列番号20
のうちの少なくとも1つ、もしくは下記のそれらの好ましいヒト化変異体のうちの1つを含む、抗体又はその断片に関する。
本発明の抗体の「抗原結合性断片」は、抗体の一部、すなわち、おそらくはその天然の形態で、ヒトIL-7のIL-7受容体のアルファ鎖に対する抗原結合能を示す、本発明の抗体の構造の一部に対応する分子であり;そのような断片は、とりわけ、対応する4本鎖抗体の抗原結合特異性と比較して、該抗原に対する同じ又は実質的に同じ抗原結合特異性を示す。好都合なことに、該抗原結合性断片は、対応する4本鎖抗体と同様の結合親和性を有する。しかしながら、対応する4本鎖抗体に対して低下した抗原結合親和性を有する抗原結合性断片も本発明の範囲内に包含される。該抗原結合能は、抗体の親和性及び検討される断片の親和性を測定することによって決定することができる。これらの抗原結合性断片は、抗体の機能的断片と呼ぶこともできる。
本発明の別の実施態様によれば、該抗体は修飾されており、結果として、異なる抗体、特に、異なる動物種から得られ、機能的抗体として1つに組み合わされた抗体のアミノ酸残基のドメイン又は鎖(複数可)を含む、キメラ抗体である。特定の実施態様において、本発明の巨大分子は、少なくとも2つの異なる種由来の抗体断片の集合体に存在するキメラ抗体である。特定の実施態様において、キメラ抗体は、ヒト抗体の定常領域を含む。そのような定常領域は、実施例において、Fc断片G1(配列番号26)又はFc断片G4(配列番号28)又はCLカッパ断片(配列番号30)により示されている。或いは、図12に示されたヒトFc断片(Uniprot P01857、Uniprot P01859、Uniprot P01861)及び/又は配列番号31、配列番号32、配列番号33、もしく配列番号112の配列を有するヒトFc断片を使用することができる。特定の実施態様において、キメラ抗体は、齧歯類抗体の可変領域及びヒト抗体の定常領域を含む。特定の実施態様において、キメラ抗体は、配列番号2の配列(N13B2-G1m-VH-FcG1m(E333A))又は配列番号6の配列(N13B2-G4m-VH-FcG4m(S228P))を有するVH鎖及び配列番号4の配列(N13B2-G1m-VL-CLカッパ)を有するVL鎖を含む。
本発明の巨大分子は、本明細書において抗原結合性抗体模倣物とも呼ばれる、抗体の抗原結合能を模倣する抗原結合能を有する人工タンパク質も含む。そのようなタンパク質は、アフィチン及びアンチカリンを含む。アフィチンは、抗原に選択的に結合する能力を有する人工タンパク質である。これらは、古細菌ドメインに属する微生物であるスルホロブス・アシドカルダリウス(Sulfolobus acidocaldarius)で見出されたDNA結合タンパク質Sac7dに構造的に由来している。例えば、Sac7dの結合面の11個の残基の無作為置換に対応する変異体を作製することによって、Sac7dの結合表面のアミノ酸を無作為化することにより、アフィチンライブラリーを作製することができ、得られたタンパク質ライブラリーを次々とリボソームディスプレイに供して、親和性をペプチド、タンパク質、ウイルス、及び細菌などの様々な標的に対するものとすることができる。アフィチンは抗体模倣物であり、バイオテクノロジーにおけるツールとして開発されているところである。これらは、様々な酵素の特異的阻害剤としても使用されている(Krehenbrinkらの文献、2008)。当業者は、当技術分野で公知の、特に、特許出願WO2008068637号及び上に引用された刊行物に開示されている方法、特に、ファージディスプレイ及び/又はリボソームディスプレイライブラリーの作製、並びに本明細書に開示されている抗原を用いたそのスクリーニングを用いて、所要の結合特性を有するアフィチンを容易に開発することができる。アンチカリンは、タンパク質か又は小分子かのいずれかの抗原に結合することができる人工タンパク質である。これらは、天然結合タンパク質のファミリーであるヒトリポカリンに由来する抗体模倣物である。アンチカリンは、約8倍小さく、約180アミノ酸のサイズ及び約20kDaの質量を有する(Skerraの文献、2008)。特に、特異的結合特性を有するアンチカリンのスクリーニング及び選択を可能にするアンチカリンファージディスプレイライブラリーが作製されている。当業者は、当技術分野で公知の、特に、EP特許EP1270725 B1号、米国特許US8536307 B2号(Schlehuber及びSkerraの文献、2002)、及び上に引用された刊行物に開示されている方法、特に、ファージディスプレイ及び/又はリボソームディスプレイライブラリーの作製、並びに本明細書に開示されている抗原を用いたそのスクリーニングを用いて、所要の結合特性を有するアフィチンを容易に開発することができる。アンチカリンとアフィチンはどちらも、細菌発現系を含むいくつかの発現系で産生することができる。したがって、本発明は、アフィチン、アンチカリン、並びに特に、CD127への結合、CD127内在化の非誘導及び/又は阻害、DCの成熟に関して、本明細書に記載の抗体の特徴を有する他の同様の抗体模倣物を提供するものであり、これらは全て、本発明の巨大分子として企図されている。
特定の実施態様において、本発明の巨大分子は、ヒト化抗体又はその抗原結合性断片である。したがって、動物の免疫及びハイブリドーマからのモノクローナル抗体の産生の後、動物で、とりわけ、齧歯類動物で、特に、ラットで最初に得られたら、本発明の抗体を、フレームワーク内及び任意にさらにCDR配列内でのアミノ酸残基の置換によって、そのVH配列及び/又はVL配列内で修飾する。該ヒト化は、既知の技法に従って、リサーフェシングによるか又はCDR移植によって行うことができる。リサーフェシングは、とりわけ、齧歯類残基をヒトアミノ酸残基に置換することによって達成される。置換は、それによって抗原結合親和性が保持されるように、もとの抗体のフレームワーク構造及びさらにはCDR提示を維持し、それにより、リサーフェシングされた抗体におけるフレームワークとCDRの相互作用が抗原と接触する表面の天然の立体構造を維持することを可能にするやり方で行う。
本発明のこれらの基本的な抗原結合性断片を1つに組み合わせて、ダイアボディ、トリアボディ、又はテトラボディなどの多価抗原結合性断片を得ることができる。これらの多価抗原結合性断片も本発明の一部である。
本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、特に、ヒトT細胞によって発現されるCD127である分子に対して好都合に作製され、場合により、天然ポリペプチド又は組換え分子という形態での免疫から作製される。
i.配列番号10のアミノ酸配列を有するVHCDR1;
ii.配列番号12のアミノ酸配列を有するVHCDR2;
iii.配列番号14のアミノ酸配列を有するVHCDR3;
iv.配列番号16のアミノ酸配列を有するVLCDR1;
v.配列番号18のアミノ酸配列を有するVLCDR2;
vi.配列番号20のアミノ酸配列を有するVLCDR3;
である。
i.配列番号1もしくは配列番号5もしくは配列番号54の配列を有するVH領域、又は配列番号21もしくは配列番号35もしくは配列番号37もしくは配列番号39の配列を有するVH領域の可変領域をコードするポリヌクレオチド;
ii.配列番号3もしくは配列番号7もしくは配列番号56の配列を有するVL領域、又は配列番号23もしくは配列番号41もしくは配列番号43もしくは配列番号45の配列を有するVL領域の可変領域をコードするポリヌクレオチド;
iii.配列番号9の配列を有するVHCDR1領域をコードするポリヌクレオチド、
iv.配列番号11の配列を有するVHCDR2領域をコードするポリヌクレオチド、
v.配列番号13の配列又は配列番号47の配列を有するVHCDR3領域をコードするポリヌクレオチド、
vi.配列番号15の配列又は配列番号49の配列を有するVLCDR1領域をコードするポリヌクレオチド、
vii.配列番号17の配列又は配列番号51の配列を有するVLCDR2領域をコードするポリヌクレオチド、
viii.配列番号19の配列を有するVLCDR3領域をコードするポリヌクレオチド
の群の中で選択される。
(a)それぞれ、配列番号2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、もしくは56のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードし、並びに/又は
(b)それぞれ、配列番号1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、もしくは55の配列を有するポリヌクレオチドのうちの1つとのその全長にわたる少なくとも85%、好ましくは、少なくとも90%、より好ましくは、少なくとも95%、及び最も好ましくは、少なくとも98%もしくは少なくとも99%の同一性を有し、並びに/又は
(c)配列番号1、3、5、7、21、23、35、37、39、41、43、45、53、もしくは55の配列を有し、かつ抗原結合性断片を含むかもしくは抗原結合性断片からなるポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの断片である、
ポリヌクレオチドに関する。
(a)動物、とりわけ、哺乳動物を、ヒトIL-7受容体のヒトアルファ鎖、好ましくは、配列番号115(及び/もしくは配列番号110)並びに/又は配列番号117(及び/もしくは配列番号111)並びに/又は配列番号116(及び/もしくは配列番号86)の配列を有するヒトCD127の配列を含むその抗原(該抗原は、上で開示されているように、ヒトCD127の他の配列を含むか、又はこれを含まない)で免疫し、必要な場合、該動物を同じ免疫原で追加免疫し、免疫に応答する動物由来の脾臓細胞又はリンパ節細胞を回収し、該細胞を骨髄腫細胞と融合させ、ハイブリドーマを得た後に、モノクローナル抗体を単離すること、並びに/或いは
(b)そのような抗体をコードするポリヌクレオチド、例えば、そのヌクレオチド配列が組換え形態である本明細書に開示されるポリヌクレオチドを、細胞内で、抗体の回収を可能にする条件で発現させること、並びに
(c)特に、CD127の2b部位由来の配列を含み、かつ特に、そのような配列及びさらにCD127のD1ドメイン由来の配列を含む、本明細書に定義されるエピトープを認識する抗体、特に、ヒトIL-7受容体のアルファ鎖に対する所望の結合親和性を有する抗体を回収すること
を含む、方法にも関する。
a.巨大分子を、CD127に対する、特に、本明細書に開示されるその抗原に対する該巨大分子の結合能に関して試験する工程(例えば、実施例1、実施例2、実施例6、及び/もしくは実施例7に記載されている);
b.巨大分子の存在によって誘導されるCD127発現細胞におけるCD127の内在化を試験する工程(例えば、図16及び/もしくは実施例5に記載されている);
c.巨大分子によるCD127発現細胞におけるIL7誘導性のCD127内在化の阻害を試験する工程(例えば、図16及び/もしくは実施例5に記載されている);
d.巨大分子の存在下でTSLPによって誘導されるDCの成熟の増大を試験する工程(例えば、図5、図6、及び/もしくは実施例9に見られる);
のうちの少なくとも1つを含むか又はこれらからなり、任意に、以下の工程:
e.巨大分子によるIL-7誘導性シグナル伝達、特に、STAT5リン酸化の阻害を試験する工程(例えば、図1、図2、及び/又は実施例3に見られる);
f.巨大分子によるTSLP誘導性のTARC産生の阻害を試験する工程(例えば、実施例9、図5、及び/又は図6に見られる);
g.巨大分子によるα4、β7及び/又はα4/β7インテグリン発現、特に、T-リンパ球での細胞表面発現の発現の阻害を試験する工程(例えば、実施例16、図19、及び/又は図20に見られる);
h.特に、IL-7の存在下での、抗体によるCD127のγc鎖への結合の妨害を試験する工程(例えば、実施例21、図28に見られる)
のうちの少なくとも1つを含む、方法に関する。
これらの試験工程の各々の後に、本明細書に開示される所望の機能的特徴を有する1以上の巨大分子を選択する。
上述のように、抗体が、CD127の配列中で連続していない配列を含むエピトープを認識することが望ましい場合、CD127の単一の連続配列からなる(又は本質的に該配列からなる)エピトープの断片の認識(又は該断片への結合)を順次試験することが可能である。例えば、配列番号115、配列番号116、及び配列番号117を含むエピトープを認識する抗体を得ることが望ましい場合、第1に、本質的に配列番号116からなるエピトープを認識する抗体を選択し、次いで、第2に、これらの第1の選択された抗体の中で、本質的に配列番号115からなるエピトープを認識する抗体を選択し、その後、これらの第2の選択された抗体の中で、配列番号117から本質的になるエピトープを認識する抗体を選択することが可能である。選択の順序を、単に一例として提供されたこの順序と比べて、改変することができることが明白である。
本発明のさらなる特徴及び特性は、以下の実施例及び図面から明白であろう。
(実施例1.新規の抗ヒトCD127 Mabの調製及び選択)
ラットを組換えhCD127-Ig(免疫グロブリンの定常断片と融合したhCD127-Sino Biologicals, Beijing, China;照会番号10975-H03H)で免疫し、モノクローナル抗体を従来法によって得た。使用した免疫プロトコルは、次の通りであった:組換えCD127 Fcキメラ(10975-H03H Sino Biological, Beijing, China)を用いて、LOU/C Igk1a系統のラットを免疫した。50マイクログラムのタンパク質を完全フロイントアジュバントに懸濁させ、皮下投与した。20日後、不完全フロイントアジュバントに懸濁させたタンパク質のリコール注射を行った。別の同様のリコール注射を60日目に行い、追加免疫注射を、100マイクログラムのタンパク質を用いて、90日目に行い、4日後に、脾臓細胞を回収した。
組換えhCD127(Sino Biologicals, Beijing, China;照会番号10975-H08H)をプラスチック上に固定化し、増加用量のMabを添加して、結合を測定した。インキュベーション及び洗浄の後、ペルオキシダーゼ標識マウス抗ラットカッパ鎖(AbdSerotec)を添加し、従来法により顕示させた。結合を各抗体について確認した。
健常ボランティアからフィコール勾配によって採取されたヒト末梢血単核球細胞(PBMC)を、様々な濃度の対象となる抗体を含む無血清培地中、室温で15分間インキュベートし、その後、0.1又は5ng/mlの組換えヒトIL-7(rhIL-7; AbD Serotec、照会番号PHP046)とともに37℃で15分間インキュベートした。rhIL-7で処理しなかったPBMCをバックグラウンドシグナルとして解析し、一方、抗体なしでIL-7処理した細胞を陰性対照として設定した。その後、PBMCを素早く冷却し、FACSバッファーで洗浄して、反応を停止させた。その後、細胞を冷えたCytofix/Cytoperm溶液(BD Bioscience、照会番号554722)とともに15分間インキュベートし、Perm/Washバッファー(Bd Bioscience)で2回洗浄し、抗ヒトCD3 FITC抗体(Bd Bioscience、照会番号557694)で氷上で30分間染色した。その後、PBMCをPerm/Washバッファーで2回洗浄し、BD Perm Buffer III(Bd Bioscience、照会番号558050)中で30分間透過処理した。その後、細胞をFACSバッファー(並びに/又は1%BSA及び0.1%アジドを含むPBS)中で2回洗浄し、抗ヒトpSTAT5 Alexa 647抗体(BD Bioscience、照会番号612599)とともに室温で30分間インキュベートした。試料をBD CANTO II FACS装置で解析した。図1及び図2に示すように、N13B2及びそれから誘導されたキメラ抗体(N13B2-G1及びN13B2-G4)は、STAT5リン酸化の強い阻害剤であり;わずか50ng/mlの濃度で50%を超える阻害、わずか100ng/mlの抗体濃度で80%を超える阻害(0.1ng/mlのIL-7の場合)又は90%を超える阻害(5ng/mlのIL-7の場合)である。
(実施例4.様々な抗ヒトIL-7Rαモノクローナル抗体の半阻害濃度(IC50)を表1に示す)
内在化アッセイは、Henriquesらの文献(2010)及びLuoらの文献(2011)の材料及び方法に詳述されているように、共焦点顕微鏡を用いて実施することができた。IL-7の非存在でのCD127の内在化を観察するために、50ng/mlの最終濃度の抗体hN13B2、HALクローンH3L4(米国特許第8,637,27号)もしくは1A11(国際特許出願WO2011094259号)、又は10μg/mlの最終濃度の抗体MD707-5、MD707-12、MD707-13、もしくはN13B2-G4を、ヒトPBMC(100000細胞/ウェル)とともに、無血清培地(TexMACS, Miltenyi Biotec)中、4℃又は37℃で30分間インキュベートした。IL-7の非存在下でのCD127の内在化を観察するために、同じプレインキュベーション条件を抗体とともに37℃で用い、その後、細胞を0.1ng/mlの組換えIL7(AbD Serotec、照会番号PHP046)で、37℃で15分間刺激した。反応を4℃で停止させ、細胞をPBS-1%BSA-0.1%アジドで3回洗浄した後、PBS-1%BSA-0.1%アジドに1/10で希釈したPE標識抗CD127(クローンhIL7R-M21, BD Bioscience、照会番号557938)で染色し、4℃で15分間インキュベートした。洗浄後、細胞をCantoIIサイトメーター(BD Biosciences)によるサイトフルオロメトリーにより解析した。図16に示す結果は、3回の独立した実験を代表するものである。
抗hCD127抗体の親和性をBiacore 3000(GE Healthcare)での表面プラズモン共鳴により測定した。
サンドイッチELISAのために、ロバ抗ヒトIgG(Fc特異的)抗体を1.2μg/mlでP96-プレートにコーティングし、精製抗体を添加して、標準範囲の関数で濃度を測定した。インキュベーション及び洗浄の後、マウス抗ヒト軽鎖、カッパ特異的(Abcam、照会番号ab79115又はEffimune、クローンNaM76-5F3)+ペルオキシダーゼ標識ロバ抗マウス(Jackson Immunoresearch、照会番号715-036-151)抗体を添加し、従来法により顕示させた。
ヒト化及びキメラ精製N13B2-G1を37℃又は-80℃で7日間インキュベートした。2つのアッセイ:ELISAアッセイによる抗CD127の結合及びゲル濾過による凝集体の形成を用いて、抗体の安定性を測定した。活性ELISAアッセイのために、組換えhCD127(Sino Biologicals, Beijing, China;照会番号10975-H08H)をプラスチック上に1μg/mlで固定化し、上清の希釈物を添加して、結合を測定した。インキュベーション及び洗浄の後、マウス抗ヒト軽鎖(カッパ特異的)+ペルオキシダーゼ標識ロバ抗マウス抗体を添加し、従来法により顕示させた。凝集体形成の解析のために、試料をゲル濾過クロマトグラフィーカラム(Superdex 200, 10/300GL, GeHealthcare)上で解析して、試料由来の凝集体と単量体を分離し、評価した。
骨髄樹状細胞(DC)を、CD1c(BDCA-1)+樹状細胞単離キット(Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach ,Germany)を用いて、健常ボランティア(Etablissement Francais du Sang, Nantes, France)の血液から単離した。骨髄樹状細胞を、10%胎仔ウシ血清、1%ピルビン酸塩、1%Hepes、1%L-グルタミン、及び1%ペニシリン-ストレプトマイシンを含むRPMI中で培養した。細胞を、TSLP(15ng/ml)、LPS(1μg/ml)、又は培養培地のみの存在下、様々な濃度のラット抗ヒトCD127抗体を添加して、平らな96ウェルプレートに、5.104細胞/ウェルで播種した。培養から24時間後、細胞を、成熟のCD80細胞表面マーカー(抗CD80-V450(BD#560442))について、フローサイトメトリーにより解析し、上清を回収し、TARC産生についてELISAアッセイ(R&Dシステム, Minneapolis, USA)により解析した。
ADCCとは、標的細胞上に発現するエピトープに対する抗体の結合、並びにその後の、主にグランザイム/パーフォリン系機構による標的細胞の死滅をもたらす、Fc受容体を発現するエフェクター免疫細胞(本質的にNK細胞及び活性化リンパ球)のFc依存性動員を指す。
N13B2クローンのVH領域及びVL領域を、RACE PCR技術を用いてシークエンシングした。簡潔に述べると、全RNAを抽出し、逆転写し、得られたcDNAを、dATP及びターミナルトランスフェラーゼ酵素を用いて、分子の3′末端でポリアデニル化させた。1回目の35サイクルのPCR反応は、オリゴdTアンカープライマー及びHerculease酵素(Stratagene)を用いて行った。2回目の35サイクルのPCRは、ネステッドPCRアンカープライマーを用いて行った。その後、得られたPCR産物を大腸菌(E. Coli)内でTAクローニングし、アンピシリンで選択した後、得られたコロニーを制限酵素プロファイリングによってスクリーニングし、挿入されたcDNAをシークエンシングした。
ラットN13B2モノクローナル抗体のヒト化は、標準的なCDR移植技術を用いて達成した。この方法の原理は、ヒトでの抗体免疫原性を低下させるだけでなく、CDR移植された分子の生物物理学的特性を改善することも目的として、ヒト抗体がラットモノクローナル抗体由来の相補性決定領域(CDR)のみを含むように、ヒト抗体を作り直すことである。
ヒト化NSGマウスでの結腸炎の誘導におけるアンタゴニスト抗体の効果を調べることを目的として、本発明者らは、測定可能な効果を示してきたTNBSモデルで一連の実験を行った。TNBS(2,4,6,トリニトロベンゼンスルホン酸)などのハプテンの使用により、免疫モデルを模倣するものを誘導することが可能になる(Nanceyらの文献、2008)。結腸炎は、0日目に、エタノールに溶解したTNBS(Sigma Chemical, L′Isle d′Abeau Chesne, France)を4匹のヒト化マウスに直腸内投与することにより、マウスで誘導される。はじめに、ガス混合物の吸入により、マウスに麻酔をかける。7日目に、これらの動物をいくつかの試験用にCO2中毒による麻酔の下で屠殺した(データは示さない)。一部の動物は、その臨床スコアが悪かったため、7日目よりも前に屠殺した。
生存(図9A):本発明者らは、化学的処理及び抗IL7Rα抗体の使用による生存率を評価した。生存のパーセンテージは、Hu-TNBS+PBS群よりもHu-TNBS+IL7Rα群にとって重要である傾向にある(図9A)。実際、本発明者らは、Hu-TNBS群+IL7Rαのマウスのうちの100%が最大5日間生存することを観察したが、Hu-TNBS+PBS群では、3匹の動物をJ5よりも前に安楽死させなければならなかった。
(動物)
ヒヒ(フランス・ルセのCNRS霊長類学センターから得たアヌビスヒヒ)は、ツベルクリン皮膚試験を含む全ての検疫試験について陰性であった。フランス国立保健医学研究所(Institut National de la Sante Et de la Recherche Medicale, France)の施設倫理ガイドラインの勧告に従って、動物を本発明者らの実験室の巨大動物施設で飼育した。実験は全て、Zoletil(Virbac, Carron, France)による全身麻酔下で行われた。薬物動態試験及び薬力学試験を、DTH実験において、10mg/kgのN13B2-IgG1又はN13B2-IgG4又はMD707-13-IgG4のいずれかの静脈内ボーラスを受けている5匹のヒヒに対して行った。
Poirierら(Poirierらの文献、2011)に準拠して、DTH皮膚試験の4週間前と2週間前に、ヒヒの肢の上部領域に、カルメット・ゲラン桿菌(BCG)ワクチン(0・1ml; 2~8 ¥105 UFS; Sanofi Pasteur MSD, Lyon, France)で2回皮内(i.d.)免疫した。DTH皮膚試験前の抗原特異的なT細胞免疫を調べるために、免疫の達成を、製造元の指示に従って、新たに単離されたPBMCに対するインターフェロン(IFN)-g酵素結合免疫スポット(ELISPOT)アッセイ(非ヒト霊長類IFN-g ELISPOTキット; R&D Systems, Minneapolis, MN, USA)により確認した。皮内反応(IDR)を、動物の右背中の皮膚で、0.1mlの2つの用量(1000UI又は2000UI)のツベルクリン精製タンパク質誘導体(PPD; Symbiotics Corporation, San Diego, CA, USA)の反復皮内注射により実施した。生理食塩水(0.1ml)を陰性対照として使用した。注射部位での皮膚応答をノギスを用いて測定した。各々の硬結性紅斑の直径を、3日目から8日目まで、2人の観察者が測定し、直径が>4mmの場合に陽性と見なした。読取りの平均を記録した。DTH又は対照(生理食塩水)部位由来の皮膚生検を4日目に1回2連で行い、免疫組織化学的解析用にTissue Tek最適切削温度(OCT)化合物(Sakura Finetek, Villeneuve d′Ascq, France)中に入れた。2回目のIDRを3週間のウォッシュアウト期間の後に行い、動物は、この2回目のPPD投与の1日前に、10mg/kgのキメラCD127抗体(N13B2-IgG1又はN13B2-IgG4又はMD707-13-IgG4)のいずれかの1回のi.v.注射を受けた。3回目のIDRをさらに3~6週間のウォッシュアウト期間の後に行い、動物を未処理のまま放置した。場合によっては、4回目のIDRをもう3カ月のウォッシュアウト期間の後に行い、動物を同じく未処理のまま放置した。
T細胞表面でのIL7誘導性α4β7発現を測定するために、ヒトT-リンパ球を、37℃で9日間、5ng/mlのIL7(AbD Serotec、照会番号PHP046)で刺激した。反応を4℃で停止させ、洗浄した後、PerCP/Cy5標識抗α4(BD Bioscience 563644クローン9F10)及びPE標識抗β7(BD Bioscience、クローンFIB504)で染色した。α4インテグリンの陽性細胞、その後、β7陽性細胞をフローサイトメトリーにより測定した。N13B2ヒト化抗体を、0日目に、細胞培養物に、0.01~20ug/mlの様々な濃度で添加した。
peptide TechnologiesのPepStar(商標)ペプチドマイクロアレイは、ガラス表面に化学選択的かつ共有結合的に固定化されている、抗原又は他の源に由来する精製合成ペプチドを含む。立体障害によって生じる偽陰性を回避するために、最適化された親水性リンカー部分がガラス表面と抗原由来ペプチド配列の間に挿入されている。技術的な理由で、全てのペプチドがC-末端グリシンを含む。試料のプロファイリング実験を52個のペプチドからなるペプチドライブラリーに対して行った。ペプチドの完全なリストを下に示す:
質量分析を用いて、立体構造エピトープを同定した。エピトープのシークエンシングは、MALDI質量分析計を用いて行った。この装置は、800~4000Daのペプチド配列を容認する。対象となるタンパク質の消化により、タンパク質を小さい断片(潜在的エピトープ)に切断することが可能になる。理想的には、消化酵素は、エピトープの境界のなるべく近くで切断しなければならない。消化酵素の選択は、組換えタンパク質の配列中の酵素切断頻度に従って行われるべきである。2回目の消化は、1回目の消化の最後に得られたエピトープのサイズを低下させるために検討される。選択される酵素によって、プロファイルは大きく異なる。配列上に消化物が最もよく分布している酵素は、キモトリプシンである。適切な切断頻度を有し、かつ対象となる配列上で十分に分布している第2の酵素は、Glu Cである。
以前に記載されたように(Henriquesらの文献、2010)、IL-7単独で、IL-7媒介シグナル伝達に必要とされるTリンパ球の表面でのIL-7受容体アルファ鎖(CD127)の速やかな内在化(30~40%)が誘導される。ここで、本発明者らは、N13B2 mAbがIL-7誘導性のCD127内在化を妨げ、かつ単独ではこの内在化を誘導しないことを記載した(図16)。対照的に、本発明者らは、GSK製の抗ヒトCD127 1A11クローン(特許出願WO2011094259号)が、単独で又はIL-7と組み合わせて37℃で適用されたとき、Tリンパ球の表面でのCD127の発現を劇的に減少させることを記載した(図16)。この効果は、いくつかの市販の抗IL7R抗体(eBioRDR5及びMB15-18C9、データは示さない)による様々な染色を用いて観察された。キメラN13B2 mAb(ヒトIgG1又はIgG4 Fc-ドメインを有するようなフォーマットにしたもの)を10mg/Kgで非ヒト霊長類に静脈内投与した後、本発明者らは、2週間の追跡調査期間にわたって、T-リンパ球の表面でのCD127発現の低下を測定することがなかった(図17B)。対照的に、10mg/kgの抗ヒトCD127 MD707-13クローン(ヒトIgG4 Fc-ドメインを有するようなフォーマットにしたもの;WO2013/056984号)で並行して静脈内処理した他の非ヒト霊長類において、本発明者らは、T-リンパ球の表面でのCD127の有意な減少(60%)を観察した(図17B)。T-リンパ球上で抗ヒトCD127 mAbが結合した後のこのCD127の内在化は、Pfizerのグループによっても以前に発表されており、そこで、このグループは、その抗ヒトCD127 mAb(クローンHAL-H3L4、米国特許第8,637,273号)が、ヒト及び非ヒト霊長類の血液細胞に対してエクスビボで、並びに非ヒト霊長類に静脈内投与した後にインビボで、CD127内在化を顕著に誘導することを記載した(Kernらの文献、2013)。
CLIPSペプチドを用いて、これらのCLIPSペプチドを、所望の抗体を誘導する活性のある強力な免疫原に変換する目的で、抗原の天然の2次構造及び3次構造を適切に模倣することができる(Boshuizenらの文献、2014)。CLIPS技術は、2つ、3つ、又は4つのアンカーポイントを保有する小さな柔軟性のない実体(化学的スキャフォールド)との反応による線状ペプチドの(多重)環状化を伴う。このアンカーは、ペプチドの1種類の官能基(すなわち、チオール)のみと反応し、複数の共有結合を介してペプチドに結合する。ペプチドは、スキャフォールドの周囲にフォールディングし、柔軟性を解放しながら、輪郭のはっきりとした3次元構造をゆっくりと取り、中心のスキャフォールド実体が「クモの巣の中のクモ」のようになる。
CD127のγc鎖への結合に対するN13B2の効果及び従来技術の抗体の効果を調べるために、IL-7により刺激し、抗体の非存在下又はMD707-13もしくはN13B2抗体の存在下でインキュベートした細胞で共免疫沈降実験を行った。抗体の非存在下では、CD127及びγcは、共免疫沈降することが示された。細胞とMD707-13とのインキュベーションは、この共免疫沈降を妨げなかったが、N13B2とのインキュベーションは、そのような共免疫沈降の欠如をもたらした。それゆえ、本発明者らの抗体は、CD127のγc鎖への結合を妨害することができるが、従来技術の抗体は、そのような特徴を有しない。
以下の番号付き実施態様は、本発明の好ましい実施態様を構成する。
1.CD127に特異的に結合し、かつCD127の内在化を誘導しない、抗体又は抗体の抗原結合性断片又は抗原結合性抗体模倣物。
2.IL7誘導性のCD127内在化を阻害する、特に、実施態様1による、抗体又はその抗原結合性断片もしくは模倣物。
3.抗体又は断片の存在下でのIL-7処理細胞におけるCD127の細胞表面発現が、抗体の非存在でインキュベートした細胞におけるそのレベルの少なくとも80%、好ましくは、少なくとも90%である、実施態様1又は2による抗体又はその抗原結合性断片もしくは模倣物。
4.CD127に特異的に結合し、それにより、サイトカイン受容体のγc共通鎖へのCD127の結合を妨害する、抗体又はその抗原結合性断片。
5.CD127に結合したとき、サイトカイン受容体のγc共通鎖へのCD127の結合を妨害する、実施態様1~3のいずれかによる抗体又はその抗原結合性断片。
6.特に、測定が、該抗体の存在下又は非存在下でインキュベートされた、細胞表面でIL7受容体を発現するインタクトな細胞由来のCD127含有分子複合体を含む細胞溶解物に対して行われるとき、その存在下で、CD127に結合したγcの量が、抗体の非存在下で、それ以外は同一の条件で測定される該量の80%未満、好ましくは50%未満、一層より好ましくは25%又は10%未満である、実施態様4又は5のいずれかによる抗体又はその抗原結合性断片。
7.IL-7によって誘導されるIL-7Rシグナル伝達のアンタゴニストである、上記の実施態様のいずれかによる抗体又はその抗原結合性断片もしくは模倣物。
8.実施態様53~67のいずれかによる抗原又は該抗原のエピトープに対して特異的に結合し、及び/又は作製された、特に、上記の実施態様のいずれかによる抗体又はその抗原結合性断片もしくは模倣物。
9.TSLPによって誘導される樹状細胞の成熟を増大させない、特に、上記の実施態様のいずれかによる、CD127に特異的に結合する、抗体又はその抗原結合性断片もしくは模倣物。
10.α4、β7、及び/又はα4/β7インテグリンの発現を阻害する、上記の実施態様のいずれかによる抗体又はその抗原結合性断片もしくは模倣物。
11.インビボで、特に、免疫不全マウスに注射されたヒトT細胞で、α4、β7、及び/又はα4/β7インテグリンの発現を阻害する、実施態様10による抗体又はその抗原結合性断片もしくは模倣物。
12.以下のアミノ酸配列:
・VHCDR1配列番号10;
・VHCDR2配列番号12;
・VHCDR3配列番号14もしくは配列番号48;又は
・VH配列番号22
のうちの少なくとも1つを含むVH鎖、及び/或いは以下のアミノ酸配列:
・VLCDR1配列番号16もしくは配列番号50;
・VLCDR2配列番号18もしくは配列番号52;
・VLCDR3配列番号20;又は
・VL配列番号24
のうちの少なくとも1つを含むVL鎖を含む、特に、上記の実施態様のいずれかによる、CD127に特異的に結合する、抗体又はその抗原結合性断片もしくは模倣物。
13.VHCDR1配列番号10、VHCDR2配列番号12、VHCDR3配列番号14又は配列番号48、VLCDR1配列番号16又は配列番号50、VLCDR2配列番号18又は配列番号52、及びVLCDR3配列番号20からなる群から選択される少なくとも2つ、3つ、4つ、又は5つのCDR配列を含む、実施態様12による抗体又はその断片もしくは模倣物。
14.VHCDR1配列番号10、VHCDR2配列番号12、VHCDR3配列番号14又は配列番号48、VLCDR1配列番号16又は配列番号50、VLCDR2配列番号18又は配列番号52、及びVLCDR3配列番号20の6つ全てのCDR配列を含む、実施態様13による抗体又はその断片もしくは模倣物。
15.-VH鎖が、配列番号2の配列もしくは配列番号6の配列もしくは配列番号54の配列を有するVH鎖にあるか、又は配列番号22の配列もしくは配列番号36の配列もしくは配列番号38の配列もしくは配列番号40の配列を含み;かつ
-VL鎖が、配列番号4の配列もしくは配列番号56の配列を有するVL鎖にあるか、又は配列番号24の配列もしくは配列番号42の配列もしくは配列番号44の配列もしくは配列番号46の配列を含む、
実施態様14による抗体。
16.キメラ抗体又はヒト化抗体又は脱免疫化抗体である、上記の実施態様のいずれかによる抗体。
17.重鎖が配列番号52の配列を有し、かつ軽鎖が配列番号54の配列を有する、ヒト化されかつ脱免疫化された抗体である、実施態様13による抗体。
18.上記の実施態様のいずれかによる抗体又はその抗原結合性断片もしくは模倣物を含むキメラ分子である巨大分子であって、該抗体が機能的に異なる分子と関連しており、該キメラ分子が、融合キメラタンパク質か、又は化学基もしくは分子、例えば、PEGポリマーもしくは標識抗体の共有結合によって得られるコンジュゲートかのどちらかである、前記巨大分子。
19.アフィチン又はアンチカリンである、上記の実施態様のいずれかによる巨大分子。
20.5E-10Mよりも低い、とりわけ、1E-10Mよりも低い、とりわけ、5E-11Mよりも低いKdでCD127に結合する、上記の実施態様のいずれかによる巨大分子、特に、抗体又はその抗原結合性断片もしくは模倣物。
21.CD127陽性細胞に対する細胞傷害活性を示す、上記の実施態様のいずれかによる巨大分子、特に、抗体又はその抗原結合性断片もしくは模倣物。
22.TSLPによって誘導される樹状細胞の成熟を増大させず、ここで、TSLPによって誘導される樹状細胞成熟の増大が、TSLPのみで処理した細胞と比較した、TSLPで処理しかつ該巨大分子で処理したTSLP受容体陽性細胞における細胞表面マーカーCD40及び/又はCD80の発現の上昇を決定することによって評価される、上記の実施態様のいずれかによる巨大分子、特に、抗体又はその抗原結合性断片もしくは模倣物。
23.CD80の発現が、TSLPのみで処理した細胞と比較して、TSLPで処理しかつ該巨大分子で処理したTSLP受容体陽性細胞で、25%以下、好ましくは10%以下上昇する、実施態様22による巨大分子、特に、抗体又はその抗原結合性断片もしくは模倣物。
24.CD80の発現が、TSLPのみで処理した細胞と比較して、TSLPで処理しかつ該巨大分子で処理したTSLP受容体陽性細胞で上昇しないか又は減少する、実施態様23による巨大分子、特に、抗体又はその抗原結合性断片もしくは模倣物。
25.CD40の発現が、TSLPのみで処理した細胞と比較して、TSLPで処理しかつ該巨大分子で処理したTSLP受容体陽性細胞で50%以下、好ましくは25%以下上昇する、実施態様22による巨大分子、特に、抗体又はその抗原結合性断片もしくは模倣物。
26.CD40の発現が、TSLPのみで処理した細胞と比較して、TSLPで処理しかつ該巨大分子で処理したTSLP受容体陽性細胞で上昇しないか又は減少する、実施態様25による巨大分子、特に、抗体又はその抗原結合性断片もしくは模倣物。
27.上記の実施態様のいずれかの抗体もしくはその抗原結合性断片、又は巨大分子をコードする核酸分子。
28.配列番号2;配列番号4;配列番号6;配列番号8;配列番号10;配列番号12;配列番号14;配列番号16;配列番号18;配列番号20;配列番号22;配列番号24;配列番号36;配列番号38;配列番号40;配列番号42;配列番号44;配列番号46;配列番号48;配列番号50;配列番号52;配列番号54、及び配列番号56からなる群から選択されるアミノ酸をコードする、実施態様27による核酸分子。
29.配列番号1;配列番号3;配列番号5;配列番号7;配列番号9;配列番号11;配列番号13;配列番号15;配列番号17;配列番号19;配列番号21;配列番号23;配列番号35;配列番号37;配列番号39;配列番号41;配列番号43;配列番号45;配列番号47;配列番号49;配列番号51;配列番号53、及び配列番号55からなる群から選択される、実施態様28による核酸分子。
30.実施態様27~29のいずれかのポリヌクレオチドのクローニング用及び/又は発現用のベクター、とりわけ、哺乳動物細胞でのクローニング及び/又は発現に好適なプラスミド。
31.実施態様27~30のいずれかによるポリヌクレオチドで組み換えられた細胞又は細胞株、とりわけ、哺乳動物細胞又は細胞株。
32.実施態様1~26のいずれかによる巨大分子、特に、抗体又はその抗原結合性断片もしくは模倣物を医薬ビヒクルとともに含む医薬組成物であって、さらなる異なる活性成分を任意に含む、前記医薬組成物。
33.ヒト患者に投与したとき、樹状細胞分化/成熟を制御するのに好適な製剤中の、実施態様1~26のいずれかによる巨大分子、特に、抗体又はその抗原結合性断片もしくは模倣物を治療活性成分として含む医薬組成物、或いは実施態様32の医薬組成物。
34.特に、自己免疫疾患もしくはアレルギー疾患、白血病、例えば、急性リンパ芽球性白血病、リンパ腫、癌疾患、慢性ウイルス感染、炎症性疾患、移植、呼吸器疾患、又は自己免疫に関与する細胞に対する治療的免疫モジュレーター作用を有する追加の化合物をさらに含む、実施態様32又は33の医薬組成物。
35.それを必要としている患者における併用治療レジメン又は追加治療レジメンにおいて治療活性成分として使用するための、実施態様1~26のいずれかによる巨大分子、特に、抗体又はその抗原結合性断片もしくは模倣物或いは実施態様27~30のいずれかの核酸或いは実施態様31の細胞又は細胞株。
36.疾患を有する患者、特に、ヒト患者の治療において使用するための、実施態様1~26のいずれかによる巨大分子、特に、抗体又はその抗原結合性断片もしくは模倣物或いは実施態様27~30のいずれかの核酸或いは実施態様31の細胞又は細胞株或いは実施態様32~34のいずれかの医薬組成物。
37.疾患のリスクがある患者、特に、ヒト患者の治療において使用するための、実施態様1~26のいずれかによる巨大分子、特に、抗体又はその抗原結合性断片もしくは模倣物或いは実施態様27~30のいずれかの核酸或いは実施態様31の細胞又は細胞株或いは実施態様32~34のいずれかの医薬組成物。
38.疾患が、自己免疫疾患、特に、関節リウマチ、多発性硬化症、I型糖尿病、自己免疫甲状腺炎、及び狼瘡である、実施態様36及び/又は実施態様37による使用のための巨大分子、核酸、細胞、細胞株、又は医薬組成物。
39.疾患が、炎症性疾患、特に、IBD及び脳脊髄炎である、実施態様36及び/又は実施態様37による使用のための巨大分子、核酸、細胞、細胞株、又は医薬組成物。
40.疾患がアレルギー疾患である、実施態様36及び/又は実施態様37による使用のための巨大分子、核酸、細胞、細胞株、又は医薬組成物。
41.疾患が癌疾患である、実施態様36及び/又は実施態様37による使用のための巨大分子、核酸、細胞、細胞株、又は医薬組成物。
42.疾患が呼吸器疾患である、実施態様36及び/又は実施態様37による使用のための巨大分子、核酸、細胞、細胞株、又は医薬組成物。
43.疾患が移植に関するものであり、特に、移植の結果である、実施態様36及び/又は実施態様37による使用のための巨大分子、核酸、細胞、細胞株、又は医薬組成物。
44.疾患を有するか又は疾患のリスクがある患者における実施態様1~26のいずれかによる巨大分子、特に、抗体又はその抗原結合性断片もしくは模倣物或いは実施態様27~30のいずれかの核酸或いは実施態様31の細胞又は細胞株或いは実施態様32~34の医薬組成物の投与を含む治療方法。
45.疾患が、自己免疫疾患、特に、関節リウマチ、多発性硬化症、I型糖尿病、自己免疫甲状腺炎、及び狼瘡である、実施態様44による治療方法。
46.疾患が、炎症性疾患、特に、IBD及び脳脊髄炎である、実施態様44による治療方法。
47.疾患がアレルギー疾患である、実施態様44による治療方法。
48.疾患が癌疾患である、実施態様44による治療方法。
49.疾患が呼吸器疾患である、実施態様44による治療方法。
50.疾患が移植に関するものであり、特に、移植の結果である、実施態様44による治療方法。
51.移植を必要としている及び/もしくはもうすぐ移植を受ける患者、特に、ヒト患者、並びに/又は移植を受けた患者の治療において使用するための、実施態様1~26のいずれかによる巨大分子、特に、抗体又はその抗原結合性断片もしくは模倣物或いは実施態様27~30のいずれかの核酸或いは実施態様31の細胞又は細胞株或いは実施態様32~34のいずれかの医薬組成物。
52.移植を必要としている及び/もしくはもうすぐ移植を受ける患者並びに/又は移植を受けた患者における実施態様1~26のいずれかによる巨大分子、特に、抗体又はその抗原結合性断片もしくは模倣物或いは実施態様27~30のいずれかの核酸或いは実施態様31の細胞又は細胞株或いは実施態様32~34の医薬組成物の投与を含む治療方法。
53.エピトープが、CD127の部位2b由来の配列を含むか又は該配列からなり、特に、CD127の部位2b由来の少なくとも3つ、4つ、5つ、6つ、又は7つの連続するアミノ酸を含む、抗原。
54.エピトープが、配列番号114のアミノ酸109~127からなる部位由来の、特に、アミノ酸110~125、112~125、112~120からなる部位由来の配列を含むか又はこれらの配列からなり、特に、該部位由来の少なくとも3つ、4つ、5つ、6つ、又は7つの連続するアミノ酸を含む、実施態様53による抗原。
55.エピトープが、CD127の少なくとも3つ、4つ、5つ、6つ、又は7つの連続するアミノ酸を含み、該連続するアミノ酸がP112及び/又はL115を含む、実施態様53又は54のいずれかによる抗原。
56.エピトープが、配列番号116の配列からなるか又は該配列を含み、特に、配列番号86の配列を含む、実施態様53~55のいずれかによる抗原。
57.エピトープが、CD127のD1ドメイン由来の、特に、配列番号114のアミノ酸1~98由来の配列、特に、少なくとも3つ、4つ、5つ、6つ、又は7つの連続するアミノ酸も含む、実施態様53~56のいずれかによる抗原。
58.エピトープが、配列番号115の配列を含むか又は該配列からなる、特に、配列番号110を含むか又は該配列からなるヒトCD127の配列を含む、実施態様57による抗原。
59.エピトープが、配列番号114のアミノ酸180~220由来の配列、特に、少なくとも3つ、4つ、5つ、6つ、又は7つの連続するアミノ酸も含み、特に、該配列番号114のアミノ酸180~220由来の配列が、配列番号117の配列からなるか又は該配列を含み、特に、配列番号111の配列を含むか又は該配列からなる、実施態様53~58のいずれかによる抗原。
60.エピトープが:
配列番号110の配列もしくは配列番号115の配列;
配列番号111の配列もしくは配列番号117の配列;及び
配列番号86の配列もしくは配列番号116の配列
からなるヒトCD127配列の配列からなるか又はこれらの配列を含む、実施態様53~59のいずれかによる抗原。
61.エピトープが、配列番号114のアミノ酸99~108の配列由来の3つ、4つ、もしくは5つよりも多くの連続するアミノ酸を含まず、及び/又は配列番号114のアミノ酸128~179の配列由来の3つ、4つ、もしくは5つよりも多くの連続するアミノ酸を含まず、及び/又は配列番号114のアミノ酸220~239の配列由来の3つ、4つ、もしくは5つよりも多くの連続するアミノ酸を含まず、特に、配列番号114の該アミノ酸配列のいずれかに由来の3つ、4つ、又は5つよりも多くの連続するアミノ酸を含まない、実施態様53~60のいずれかによる抗原。
62.配列番号110を含むヒトCD127のエピトープ配列が、ヒトCD127の配列中の該配列に隣接するアミノ酸を、N-末端の1アミノ酸を超えて、又はC-末端の7アミノ酸を超えて含むようには拡張しない、実施態様53又は60のいずれかによる抗原。
63.配列番号110を含むヒトCD127のエピトープ配列が、ヒトCD127の配列中の該配列に隣接するN-末端及び/又はC-末端のアミノ酸を1つでも含むようには拡張しない、実施態様61による抗原。
64.配列番号111を含むヒトCD127のエピトープ配列が、ヒトCD127の配列中の該配列に隣接するアミノ酸を、N-末端の30アミノ酸を超えて、又はC-末端の30アミノ酸を超えて含むようには拡張しない、実施態様53~63のいずれかによる抗原。
65.配列番号111を含むヒトCD127のエピトープ配列が、ヒトCD127の配列中の該配列に隣接するN-末端及び/又はC-末端のアミノ酸を1つでも含むようには拡張しない、実施態様64による抗原。
66.エピトープが立体構造エピトープであり、特に、該エピトープに含まれるCD127由来のペプチドが、天然のCD127又はその細胞外ドメイン中の、特に、リガンドなしのその単量体形態の、γcに結合したその形態の、及び/又はIL7に結合したその形態のCD127中の対応するペプチドの立体構造を模倣する立体構造である、実施態様53~65のいずれかによる抗原。
67.エピトープが立体構造エピトープであり、その中で、CD127由来のペプチドが、それらを所望の立体構造に保持する堅い分子骨格に結合している、実施態様66による抗原、特に、CLIPS技術を用いて得られるような抗原。
68.実施態様53~67のいずれかに定義されているエピトープ。
69.実施態様53~67のいずれかによって定義される抗原をコードする核酸。
70.抗体を製造する方法であって、非ヒト動物を実施態様53~67のいずれかに定義されている抗原に対して免疫することを含む、前記方法。
71.抗体、抗体の断片、又は抗体模倣物、特に、実施態様70と同様に得られる抗体又はその断片もしくは模倣物を選択する方法であって、実施態様53~67のいずれかに定義されている少なくとも1つの抗原に対する該抗体の結合能をアッセイする工程を含み、特に、各工程がCD127の単一の連続配列からなる異なるペプチドに対する結合能をアッセイする、いくつかの連続的なそのような工程を含む、前記方法。
72.巨大分子、特に、抗体、特に、実施態様70と同様に得られる抗体、又はそのような抗体の抗原結合性断片もしくは模倣物を選択する方法であって、CD127に対する、特に、実施態様53~67のいずれかに定義されているその抗原に対する巨大分子の結合能を試験する工程及び任意に実施態様20による巨大分子を選択する工程を含むか又はこれらの工程からなる、前記方法。
73.実施態様71又は72のいずれかによる、巨大分子を選択する方法であって、抗原がCD127のいくつかの不連続ペプチドを含み、該方法がいくつかの工程を含み、該工程の各々がCD127の該ペプチドのうちの1つに対する巨大分子の結合能を試験することからなる、前記方法。
74.特に、実施態様71~73のいずれかによる、巨大分子、特に、抗体、特に、実施態様70と同様に得られる抗体又はそのような抗体の抗原結合性断片もしくは模倣物を選択する方法であって、巨大分子の存在によって誘導されるCD127発現細胞におけるCD127の内在化を試験する工程を含むか又はこの工程からなる、前記方法。
75.特に、実施態様71~74のいずれかによる、巨大分子、特に、抗体、特に、実施態様70と同様に得られる抗体又はそのような抗体の抗原結合性断片もしくは模倣物を選択する方法であって、CD127発現細胞におけるIL7誘導性のCD127内在化の巨大分子による阻害を試験する工程及び任意に実施態様3による巨大分子を選択する工程を含むか又はこれらの工程からなる、前記方法。
76.特に、実施態様71~75のいずれかによる、巨大分子、特に、抗体、特に、実施態様70と同様に得られる抗体又はそのような抗体の抗原結合性断片もしくは模倣物を選択する方法であって、該巨大分子が、CD127へのその結合によって、CD127のγc鎖への結合を妨げる能力をアッセイする工程を含むか又は該工程からなる、前記方法。
77.特に、実施態様71~76のいずれかによる、巨大分子、特に、抗体、特に、実施態様70と同様に得られる抗体又はそのような抗体の抗原結合性断片もしくは模倣物を選択する方法であって、巨大分子の存在下でTSLPによって誘導されるDCの成熟の増大を試験する工程及び任意に実施態様22~26のいずれかによる巨大分子を選択する工程を含むか又はこれらの工程からなる、前記方法。
78.以下の工程:
a.巨大分子によるIL-7誘導性シグナル伝達、特に、STAT5リン酸化の阻害を試験する工程;
b.巨大分子によるTSLP誘導性のTARC産生の阻害を試験する工程;
c.巨大分子によるα4、β7、及び/又はα4/β7インテグリン発現、特に、T-リンパ球での細胞表面発現の発現の阻害を試験する工程
のうちの1つ又は複数をさらに含む、実施態様71~77のいずれかによる方法。
(参考文献)
(構成1)
CD127に特異的に結合し、かつCD127の2b部位から取られた配列を含むエピトープを認識する、抗体又は抗体の抗原結合性断片又は抗原結合性抗体模倣物。
(構成2)
CD127に特異的に結合し、かつCD127の内在化を誘導せず、及び/又はIL7誘導性のCD127内在化を阻害する、抗体又は抗体の抗原結合性断片又は抗原結合性抗体模倣物。
(構成3)
CD127に特異的に結合し、それにより、サイトカイン受容体のγc共通鎖へのCD127の結合を妨害する、抗体又はその抗原結合性断片。
(構成4)
(i)CD127の内在化を誘導せず、及び/もしくはIL7誘導性のCD127内在化を阻害し、並びに/又は(ii)CD127に結合したとき、サイトカイン受容体のγc共通鎖へのCD127の結合を妨害する、構成1記載の抗体又は抗体の抗原結合性断片又は抗原結合性抗体模倣物。
(構成5)
CD127に結合したとき、サイトカイン受容体のγc共通鎖へのCD127の結合を妨害する、構成2記載の抗体又は抗体の抗原結合性断片又は抗原結合性抗体模倣物。
(構成6)
IL-7によって誘導されるIL-7Rシグナル伝達のアンタゴニストである、構成1~5のいずれか一項記載の抗体又はその抗原結合性断片もしくは模倣物。
(構成7)
特に、5E-10Mよりも低い、とりわけ、1E-10Mよりも低い、とりわけ、5E-11Mよりも低いKdで、配列番号116(又は配列番号86)の配列並びに配列番号110(もしくは配列番号115)の配列及び/又は配列番号111(もしくは配列番号117)の配列を含むか又はこれらの配列からなる、特に、配列番号110の配列及び配列番号111の配列を含むか又はこれらの配列からなるヒトCD127のエピトープ配列に特異的に結合し、かつ該エピトープ配列を認識する抗体又はその抗原結合性断片もしくは模倣物であって
i.配列番号110を含むヒトCD127のエピトープ配列が、ヒトCD127の配列中の該配列に隣接するアミノ酸を、N-末端の1アミノ酸を超えて、又はC-末端の7アミノ酸を超えて含むようには拡張せず;及び/又は
ii.配列番号111を含むヒトCD127のエピトープ配列が、ヒトCD127の配列中の該配列に隣接するアミノ酸を、N-末端の30アミノ酸を超えて、又はC-末端の30アミノ酸を超えて含むようには拡張しない、
前記抗体又はその抗原結合性断片もしくは模倣物。
(構成8)
CD127に特異的に結合し、かつTSLPによって誘導される樹状細胞の成熟を増大させない、構成1~6のいずれか一項記載の抗体又はその抗原結合性断片もしくは模倣物。
(構成9)
CD127に特異的に結合し、以下のアミノ酸配列:
・VHCDR1配列番号10;
・VHCDR2配列番号12;
・VHCDR3配列番号14もしくは配列番号48;又は
・VH配列番号22
のうちの少なくとも1つを含むVH鎖及び/或いは以下のアミノ酸配列:
・VLCDR1配列番号16もしくは配列番号50;
・VLCDR2配列番号18もしくは配列番号52;
・VLCDR3配列番号20;又は
・VL配列番号24;
のうちの少なくとも1つを含むVL鎖を含み、特に、VHCDR1配列番号10、VHCDR2配列番号12、VHCDR3配列番号14又は配列番号48、VLCDR1配列番号16又は配列番号50、VLCDR2配列番号18又は配列番号52、及びVLCDR3配列番号20からなる群から選択される少なくとも2つ、3つ、4つ、又は5つのCDR配列を含む、構成1~8のいずれか一項記載の抗体又はその抗原結合性断片もしくは模倣物。
(構成10)
-前記VH鎖が、配列番号2の配列もしくは配列番号6の配列もしくは配列番号54の配列を有するVH鎖にあるか、又は配列番号22の配列もしくは配列番号36の配列もしくは配列番号38の配列もしくは配列番号40の配列を含み;かつ
-前記VL鎖が、配列番号4の配列もしくは配列番号56の配列を有するVL鎖にあるか、又は配列番号24の配列もしくは配列番号42の配列もしくは配列番号44の配列もしくは配列番号46の配列を含む、
構成9記載の抗体。
(構成11)
キメラ抗体又はヒト化抗体又は脱免疫化抗体、特に、ヒト化されかつ脱免疫化された抗体であり、ここで、前記重鎖が配列番号52の配列を有し、かつ前記軽鎖が配列番号54の配列を有する、構成1~10のいずれか一項記載の抗体。
(構成12)
構成1~11のいずれか一項記載の抗体又はその抗原結合性断片もしくは模倣物を含むキメラ分子である巨大分子であって、該抗体が機能的に異なる分子と関連しており、該キメラ分子が、融合キメラタンパク質か、又は化学基もしくは分子、例えば、PEGポリマーもしくは標識抗体の共有結合によって得られるコンジュゲートかのどちらかである、前記巨大分子。
(構成13)
構成1~12のいずれか一項記載の抗原、抗体、その抗原結合性断片もしくは模倣物、又は巨大分子、特に、配列番号2;配列番号4;配列番号6;配列番号8;配列番号10;配列番号12;配列番号14;配列番号16;配列番号18;配列番号20;配列番号22;配列番号24;配列番号36;配列番号38;配列番号40;配列番号42;配列番号44;配列番号46;配列番号48;配列番号50;配列番号52;配列番号54、及び配列番号56からなる群から選択されるアミノ酸をコードする核酸分子、特に、配列番号1;配列番号3;配列番号5;配列番号7;配列番号9;配列番号11;配列番号13;配列番号15;配列番号17;配列番号19;配列番号21;配列番号23;配列番号35;配列番号37;配列番号39;配列番号41;配列番号43;配列番号45;配列番号47;配列番号49;配列番号51;配列番号53、及び配列番号55からなる群から選択される核酸分子。
(構成14)
構成1~12のいずれか一項記載の巨大分子、特に、抗体又はその抗原結合性断片もしくは模倣物、或いは構成13記載の核酸を医薬ビヒクルとともに含む医薬組成物であって、さらなる異なる活性成分、特に、自己免疫疾患もしくはアレルギー疾患、白血病、例えば、急性リンパ芽球性白血病、リンパ腫、癌疾患、慢性ウイルス感染、炎症性疾患、移植、呼吸器疾患、又は自己免疫に関与する細胞に対して、特に、治療的免疫モジュレーター作用を有する追加の化合物を任意に含む、前記医薬組成物。
(構成15)
それを必要としている患者における併用治療レジメン又は追加治療レジメンにおける治療活性成分として使用するための、構成1~12のいずれか一項記載の巨大分子、特に、抗体又はその抗原結合性断片もしくは模倣物、或いは構成13記載の核酸、或いは構成14記載の医薬組成物。
(構成16)
移植を必要としている及び/又はもうすぐ移植を受ける患者、特に、ヒト患者、並びに/或いは移植を受けた患者並びに/或いは疾患、特に、自己免疫疾患、例えば、関節リウマチ、多発性硬化症、I型糖尿病、自己免疫甲状腺炎、もしくは狼瘡、又は炎症性疾患、例えば、炎症性腸疾患(IBD)及び脳脊髄炎、又はアレルギー疾患、又は癌疾患、又は呼吸器疾患、又は移植に関連する疾患を有するか、或いは該疾患のリスクがある患者の治療において使用するための、構成1~12のいずれか一項記載の巨大分子、特に、抗体又はその抗原結合性断片もしくは模倣物、或いは構成13記載の核酸、或いは構成14記載の医薬組成物。
(構成17)
配列番号116(もしくは配列番号86)の配列並びに配列番号110(もしくは配列番号115)の配列及び/又は配列番号111(もしくは配列番号117)の配列を含むか又はこれらの配列からなる、特に、配列番号115の配列及び配列番号110(もしくは配列番号115)の配列及び配列番号111(もしくは配列番号117)の配列を含むか又はこれらの配列からなるヒトCD127のエピトープ配列からなる抗原であって、
(i)配列番号110を含むヒトCD127のエピトープ配列が、ヒトCD127の配列中の該配列に隣接するアミノ酸を、N-末端の1アミノ酸を超えて、又はC-末端の7アミノ酸を超えて含むようには拡張せず;及び/又は
(ii)配列番号111を含むヒトCD127のエピトープ配列が、ヒトCD127の配列中の該配列に隣接するアミノ酸を、N-末端の30アミノ酸を超えて、又はC-末端の30アミノ酸を超えて含むようには拡張しない、
前記抗原。
(構成18)
非ヒト動物を構成17記載の抗原に対して免疫することを含む、抗体の製造方法。
(構成19)
抗体、特に、構成18記載のように得られる抗体、そのような抗体の抗原結合性断片もしくは模倣物、又は別の巨大分子を選択する方法であって、以下の工程:
a.CD127に対する、特に、構成17記載のその抗原に対する該巨大分子の結合能を試験する工程;
b.該巨大分子の存在によって誘導されるCD127発現細胞におけるCD127の内在化を試験する工程;
c.該巨大分子によるCD127発現細胞におけるIL7誘導性のCD127内在化の阻害を試験する工程;
d.該巨大分子の存在下でTSLPによって誘導されるDCの成熟の増大を試験する工程;
のうちの少なくとも1つを含むか又はこれらの工程からなり、かつ任意に、以下の工程:
e.該巨大分子によるIL-7誘導性シグナル伝達、特に、STAT5リン酸化の阻害を試験する工程;
f.該巨大分子によるTSLP誘導性のTARC産生の阻害を試験する工程;
g.該巨大分子によるα4、β7、及び/又はα4/β7インテグリン発現、特に、T-リンパ球での細胞表面発現の発現の阻害を試験する工程
のうちの1つ又は複数をさらに含む、
前記方法。
Claims (24)
- ヒトCD127に特異的に結合する抗体又はその抗原結合性断片であって、該抗体又はその抗原結合性断片が、
以下のアミノ酸配列:
・VHCDR1配列番号10;
・VHCDR2配列番号12;及び
・VHCDR3配列番号14もしくは配列番号48
を含むVH鎖、及び
以下のアミノ酸配列:
・VLCDR1配列番号16もしくは配列番号50;
・VLCDR2配列番号18もしくは配列番号52;及び
・VLCDR3配列番号20
を含むVL鎖を含む、前記抗体又はその抗原結合性断片。 - -配列番号2及び配列番号4、又は
-配列番号6及び配列番号8、又は
-配列番号54及び配列番号56、又は
-配列番号22及び配列番号24、又は
-配列番号36及び配列番号42、又は
-配列番号38及び配列番号44、又は
-配列番号40及び配列番号46
からなる群からの重鎖及び軽鎖を含む、請求項1記載の抗体又はその抗原結合性断片。 - TSLPによって誘導される樹状細胞の成熟を増大させない、請求項1又は2記載の抗体又はその抗原結合性断片。
- キメラ抗体又はヒト化抗体又は脱免疫化抗体である、請求項1~3のいずれか一項記載の抗体又はその抗原結合性断片。
- 請求項1~4のいずれか一項記載の抗体又はその抗原結合性断片を含むキメラ分子である巨大分子であって、
該抗体、断片が機能的に異なる分子と関連しており、該キメラ分子が融合キメラタンパク質か、又は化学基もしくは生物学的分子の共有結合によって得られるコンジュゲートかのどちらかである、前記巨大分子。 - 前記コンジュゲートの分子が、PEGポリマーもしくは標識である、請求項5記載の巨大分子。
- 請求項1~4のいずれか一項記載の抗体もしくはその抗原結合性断片又は請求項5もしくは6記載の巨大分子の、重鎖及び軽鎖をコードする、核酸分子又は核酸分子の組合せであって、
該核酸分子が、
-配列番号2及び配列番号4、又は
-配列番号6及び配列番号8、又は
-配列番号22及び配列番号24、又は
-配列番号36及び配列番号42、又は
-配列番号38及び配列番号44、又は
-配列番号40及び配列番号46、又は
-配列番号54及び配列番号56
からなる群から選択されるアミノ酸をコードする、前記核酸分子又は核酸分子の組合せ。 - 前記核酸分子が、
-配列番号1及び配列番号3、又は
-配列番号5及び配列番号7、又は
-配列番号21及び配列番号23、又は
-配列番号35及び配列番号41、又は
-配列番号37及び配列番号43、又は
-配列番号39及び配列番号45、又は
-配列番号53及び配列番号55
からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含むか又はこれらからなる、請求項7記載の核酸分子又は核酸分子の組合せ。 - 請求項1~4のいずれか一項記載の抗体もしくはその抗原結合性断片又は請求項5もしくは6記載の巨大分子をコードする、核酸分子又は核酸分子の組合せであって、
該抗体もしくはその抗原結合性断片又は巨大分子が、
(i) 配列番号10、及び配列番号12、及び配列番号14、及び配列番号16、及び配列番号18、及び配列番号20;又は
(ii) 配列番号10、及び配列番号12、及び配列番号14、及び配列番号50、及び配列番号18、及び配列番号20;又は
(iii) 配列番号10、及び配列番号12、及び配列番号14、及び配列番号16、及び配列番号52、及び配列番号20;又は
(iv) 配列番号10、及び配列番号12、及び配列番号14、及び配列番号50、及び配列番号52、及び配列番号20;又は
(v) 配列番号10、及び配列番号12、及び配列番号48、及び配列番号16、及び配列番号18、及び配列番号20;又は
(vi) 配列番号10、及び配列番号12、及び配列番号48、及び配列番号50、及び配列番号18、及び配列番号20;又は
(vii) 配列番号10、及び配列番号12、及び配列番号48、及び配列番号16、及び配列番号52、及び配列番号20、又は
(viii) 配列番号10、及び配列番号12、及び配列番号48、及び配列番号50、及び配列番号52、及び配列番号20
のアミノ酸を含むVH鎖及びVL鎖を含む、前記核酸分子又は核酸分子の組合せ。 - 前記核酸分子が、
(i) 配列番号9、及び配列番号11、及び配列番号13、及び配列番号15、及び配列番号17、及び配列番号19;又は
(ii) 配列番号9、及び配列番号11、及び配列番号13、及び配列番号49、及び配列番号17、及び配列番号19;又は
(iii) 配列番号9、及び配列番号11、及び配列番号13、及び配列番号15、及び配列番号51、及び配列番号19;又は
(iv) 配列番号9、及び配列番号11、及び配列番号13、及び配列番号49、及び配列番号51、及び配列番号19;又は
(v) 配列番号9、及び配列番号11、及び配列番号47、及び配列番号15、及び配列番号17、及び配列番号19;又は
(vi) 配列番号9、及び配列番号11、及び配列番号47、及び配列番号49、及び配列番号17、及び配列番号19;又は
(vii) 配列番号9、及び配列番号11、及び配列番号47、及び配列番号15、及び配列番号51、及び配列番号19;又は
(viii) 配列番号9、及び配列番号11、及び配列番号47、及び配列番号49、及び配列番号51、及び配列番号19
のヌクレオチド配列を含む、請求項9記載の核酸分子又は核酸分子の組合せ。 - 請求項1~4のいずれか一項記載の抗体又はその抗原結合性断片、又は請求項5もしくは6記載の巨大分子、又は請求項7~10のいずれか一項記載の核酸分子又は核酸分子の組合せを医薬ビヒクルとともに含む、医薬組成物。
- 異なる活性成分、治療的免疫モジュレーター作用を有する追加の化合物、又は自己免疫疾患、アレルギー疾患、白血病、急性リンパ芽球性白血病、リンパ腫、癌疾患、慢性ウイルス感染、炎症性疾患、移植、呼吸器疾患、もしくは自己免疫に関与する細胞に対して治療的免疫モジュレーター作用を有する追加の化合物をさらに含む、請求項11記載の医薬組成物。
- 患者における併用治療レジメンの治療又は追加治療レジメンの治療のための医薬組成物であって、
治療活性成分として、請求項1~4のいずれか一項記載の抗体又はその抗原結合性断片、又は請求項5もしくは6記載の巨大分子、又は請求項7~10のいずれか一項記載の核酸分子又は核酸分子の組合せを含む、前記医薬組成物。 - 異なる活性成分、治療的免疫モジュレーター作用を有する追加の化合物、又は自己免疫疾患、アレルギー疾患、白血病、急性リンパ芽球性白血病、リンパ腫、癌疾患、慢性ウイルス感染、炎症性疾患、移植、呼吸器疾患、もしくは自己免疫に関与する細胞に対して治療的免疫モジュレーター作用を有する追加の化合物をさらに含む、請求項13記載の医薬組成物。
- 患者における併用治療レジメン又は追加治療レジメンに使用する医薬品の製造のための治療活性成分としての、請求項1~4のいずれか一項記載の抗体又はその抗原結合性断片、又は請求項5もしくは6記載の巨大分子、又は請求項7~10のいずれか一項記載の核酸分子又は核酸分子の組合せ、又は請求項11~14のいずれか一項記載の医薬組成物の使用。
- 移植を必要としている及び/又はもうすぐ移植を受ける患者、及び/又は移植を受けた患者、及び/又は疾患を有するか、或いは該疾患のリスクがある患者の治療のための医薬組成物であって、
請求項1~4のいずれか一項記載の抗体又はその抗原結合性断片、又は請求項5もしくは6記載の巨大分子、又は請求項7~10のいずれか一項記載の核酸分子又は核酸分子の組合せを含む、前記医薬組成物。 - 自己免疫疾患、関節リウマチ、多発性硬化症、I型糖尿病、自己免疫甲状腺炎、もしくは狼瘡、又は炎症性疾患、炎症性腸疾患(IBD)、もしくは脳脊髄炎、又はアレルギー疾患、又は癌疾患、又は呼吸器疾患、又は移植に関連する疾患からなる群から選択される疾患の治療のための医薬組成物であって、
請求項1~4のいずれか一項記載の抗体又はその抗原結合性断片、又は請求項5もしくは6記載の巨大分子、又は請求項7~10のいずれか一項記載の核酸分子又は核酸分子の組合せを含む、前記医薬組成物。 - 異なる活性成分、治療的免疫モジュレーター作用を有する追加の化合物、又は自己免疫疾患、アレルギー疾患、白血病、急性リンパ芽球性白血病、リンパ腫、癌疾患、慢性ウイルス感染、炎症性疾患、移植、呼吸器疾患、もしくは自己免疫に関与する細胞に対して治療的免疫モジュレーター作用を有する追加の化合物をさらに含む、請求項16又は17記載の医薬組成物。
- 移植を必要としている及び/又はもうすぐ移植を受ける患者、及び/又は移植を受けた患者を治療するための、及び/又は疾患を有するか、或いは該疾患のリスクがある患者を治療するための医薬品の製造のための、請求項1~4のいずれか一項記載の抗体又はその抗原結合性断片、又は請求項5もしくは6記載の巨大分子、又は請求項7~10のいずれか一項記載の核酸分子又は核酸分子の組合せ、又は請求項11~14のいずれか一項記載の医薬組成物の使用。
- 前記疾患が、自己免疫疾患、関節リウマチ、多発性硬化症、I型糖尿病、自己免疫甲状腺炎、もしくは狼瘡、又は炎症性疾患、炎症性腸疾患(IBD)、もしくは脳脊髄炎、又はアレルギー疾患、又は癌疾患、又は呼吸器疾患、又は移植に関連する疾患からなる群から選択される、請求項19記載の使用。
- 抗体を製造する方法であって、
-配列番号1及び配列番号3、又は
-配列番号5及び配列番号7、又は
-配列番号21及び配列番号23、又は
-配列番号35及び配列番号41、又は
-配列番号37及び配列番号43、又は
-配列番号39及び配列番号45、又は
-配列番号53及び配列番号55
からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含むか又はこれらからなるポリヌクレオチドを、低いフコシル化特性を示す細胞で、抗体の回収を可能にする条件で発現させること、及び
IL-7によって誘導されるIL-7Rシグナル伝達のアンタゴニストである抗体を回収すること
を含む、前記方法。 - 抗体を製造する方法であって、
(i) 配列番号9、及び配列番号11、及び配列番号13、及び配列番号15、及び配列番号17、及び配列番号19;又は
(ii) 配列番号9、及び配列番号11、及び配列番号13、及び配列番号49、及び配列番号17、及び配列番号19;又は
(iii) 配列番号9、及び配列番号11、及び配列番号13、及び配列番号15、及び配列番号51、及び配列番号19;又は
(iv) 配列番号9、及び配列番号11、及び配列番号13、及び配列番号49、及び配列番号51、及び配列番号19;又は
(v) 配列番号9、及び配列番号11、及び配列番号47、及び配列番号15、及び配列番号17、及び配列番号19;又は
(vi) 配列番号9、及び配列番号11、及び配列番号47、及び配列番号49、及び配列番号17、及び配列番号19;又は
(vii) 配列番号9、及び配列番号11、及び配列番号47、及び配列番号15、及び配列番号51、及び配列番号19;又は
(viii) 配列番号9、及び配列番号11、及び配列番号47、及び配列番号49、及び配列番号51、及び配列番号19
のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを、低いフコシル化特性を示す細胞で、抗体の回収を可能にする条件で発現させること、及び
IL-7によって誘導されるIL-7Rシグナル伝達のアンタゴニストである抗体を回収すること
を含む、前記方法。 - 前記抗体が請求項1~4のいずれか一項記載の抗体である、請求項21又は22記載の抗体を製造する方法。
- 前記低いフコシル化特性を示す細胞が、鳥類EB66細胞である、請求項21~23のいずれか一項記載の抗体を製造する方法。
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