JP7304846B2 - 抗ｃｄ８抗体およびその使用 - Google Patents

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Description

分野
本開示は、糖タンパク質ＣＤ８に特異的に結合する抗体および抗体の抗原結合フラグメント、これらの抗体、放射性標識された抗ＣＤ８抗体、蛍光標識された抗ＣＤ８抗体を使用する治療および診断方法、ならびにそれらの撮像における使用に関する。
配列表
配列表の正式なコピーは、ファイル名１０３５７ＷＯ０１＿ＳＥＱ＿ＬＩＳＴ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ、作成日２０１８年７月２３日、および約１２キロバイトのサイズのＡＳＣＩＩ形式配列表として、ＥＦＳ－Ｗｅｂを介して本明細書と同時に電子提出される。このＡＳＣＩＩ形式文書に含まれる配列表は、本明細書の一部であり、またこの文書の全体が参照により本明細書に援用される。
背景
Ｔ細胞の共刺激分子および共抑制分子（併せて、共シグナル伝達分子と名付けられている）は、Ｔ細胞の活性化、サブセット分化、エフェクター機能および生存の制御に重要な役割を果たしている（Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ ２０１３，Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：２２７－２４２）。抗原提示細胞上の同系ペプチド－ＭＨＣ複合体がＴ細胞受容体（ＴＣＲ）に認識された後、共シグナル伝達受容体は、免疫シナプスでＴ細胞受容体と共局在化し、そこで、それらはＴＣＲシグナル伝達と相乗作用して、Ｔ細胞の活性化および機能を促進または阻害する（Ｆｌｉｅｓ ｅｔ ａｌ ２０１１，Ｙａｌｅ Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．８４：４０９－４２１）。基本的な免疫応答は、共刺激性シグナルと共阻害性シグナルとの間のバランスにより制御されている（「免疫チェックポイント」）（Ｐａｒｄｏｌｌ ２０１２，Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｃａｎｃｅｒ １２：２５２－２６４）。ＣＤ８、細胞表面糖タンパク質は、Ｔ細胞受容体－ＭＨＣ－Ｉ相互作用を安定化し、活性化のために、ＣＤ３関連免疫受容体チロシン活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）のリンパ球特異的タンパク質チロシンキナーゼ（Ｌｃｋ）のリン酸化によって細胞内シグナル伝達を開始する。
ヒトでは、ＣＤ８は主に細胞傷害性Ｔリンパ球上で発現されるが、樹状細胞、ナチュラルキラー細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、およびγδＴ細胞のサブセットでも発現される。この糖タンパク質は、異なる遺伝子によってコードされ、ααホモ二量体またはαβヘテロ二量体として発現される、２つのアイソフォーム、αおよびβから構成される。αβヘテロ二量体は、より優勢である。
免疫陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）は、陽電子放出体で標識されたモノクローナル抗体を利用する画像診断ツールであり、抗体の標的特性を陽電子放出断層撮影カメラの感度と組み合わせたものである。例えば、Ｔｈｅ Ｏｎｃｏｌｏｇｉｓｔ、１２：１３７９（２００７）；Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｕｃｌｅａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、５２（８）：１１７１（２０１１）を参照されたい。免疫ＰＥＴにより、インビボでの抗原および抗体の蓄積の可視化および定量が可能になり、そのため、診断および補完療法のための重要なツールとして機能し得る。例えば、免疫ＰＥＴは、特定の療法に対する有力な対象候補の選択、ならびに処置のモニタリングで助けとなり得る。
特定の抗腫瘍療法の対象の適合性または対応性を予測および監視するための診断ツールに対するニーズがある。
Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ ２０１３，Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：２２７－２４２ Ｆｌｉｅｓ ｅｔ ａｌ ２０１１，Ｙａｌｅ Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．８４：４０９－４２１ Ｐａｒｄｏｌｌ ２０１２，Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｃａｎｃｅｒ １２：２５２－２６４ Ｔｈｅ Ｏｎｃｏｌｏｇｉｓｔ、１２：１３７９（２００７） Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｕｃｌｅａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、５２（８）：１１７１（２０１１）
簡単な要旨
ＣＤ８に結合するモノクローナル抗体およびその抗原結合フラグメントが、本明細書に提供される。抗体は、とりわけ、ＣＤ８を発現する免疫細胞を標的化するために、およびＣＤ８陽性Ｔ細胞活性を調節するために有用であり得る。ある特定の実施形態では、抗体は、ＣＤ８陽性Ｔ細胞活性を阻害または中和するために有用であり、例えば、ＣＤ８陽性Ｔ細胞におけるＩＦＮγ産生の阻害および／または活性化Ｔ細胞における転写因子アクチベータータンパク質（ＡＰ－１）の阻害に有用である。いくつかの実施形態では、抗体および抗原結合フラグメントは、インビボでのＣＤ８結合に有用である。抗体は、ＣＤ８陽性Ｔ細胞活性化に関連する疾患または状態の処置に有用である。
本明細書で提供する抗体は、完全長（例えば、ＩｇＧ１抗体もしくはＩｇＧ４抗体）であってもよいか、または抗原結合部分（例えば、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、もしくはｓｃＦｖフラグメント）のみを含んでいてもよく、かつ、例えば、残存するエフェクター機能を排除するように機能性に影響するように修飾されていてもよい（Ｒｅｄｄｙ ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：１９２５－１９３３）。
第１の態様において、本明細書では、ＣＤ８に特異的に結合する、単離された組換えモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。ある特定の実施形態では、抗体は完全にヒトであってもよい。
例示的な抗ＣＤ８抗体は、表１に列挙されており、これは重鎖および軽鎖相補性決定領域配列ならびに重鎖および軽鎖可変領域配列のアミノ酸配列識別子と核酸配列識別子とを提供する。
配列番号２のアミノ酸配列、または配列番号２に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、配列番号２と実質的に類似した配列を含むＨＣＶＲを含む、抗体またはその抗原結合フラグメントも提供する。
配列番号１０のアミノ酸配列、または配列番号１０に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、配列番号１０と実質的に類似した配列を含むＬＣＶＲを含む、抗体またはその抗原結合フラグメントも提供する。
配列番号４のアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、配列番号４と実質的に類似した配列を含む重鎖ＣＤＲ１（ＨＣＤＲ１）を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントも提供する。
配列番号６のアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、配列番号６と実質的に類似した配列のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２（ＨＣＤＲ２）を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントも提供する。
配列番号８のアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、配列番号８と実質的に類似した配列のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３（ＨＣＤＲ３）を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントも提供する。
配列番号１２のアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、配列番号１２と実質的に類似した配列を含む軽鎖ＣＤＲ１（ＬＣＤＲ１）を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントも提供する。
配列番号１４のアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、配列番号１４と実質的に類似した配列のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２（ＬＣＤＲ２）を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントも提供する。
配列番号１６のアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、配列番号１６と実質的に類似した配列のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３（ＬＣＤＲ３）を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントも提供する。
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号８／１６を含むＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ３アミノ酸配列ペアを含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２／１０のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲのアミノ酸配列ペアを含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２／１０のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲのアミノ酸配列ペア内にＣＤＲのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号４／６／８／１２／１４／１６の６個のＣＤＲアミノ酸配列組み合わせ（ＨＣＤＲ１／ＨＣＤＲ２／ＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ１／ＬＣＤＲ２／ＬＣＤＲ３）を含む。
ＨＣＶＲアミノ酸配列およびＬＣＶＲアミノ酸配列の内部にあるＣＤＲを識別するための方法および技術は、当該技術分野において周知であり、本明細書に開示される特定のＨＣＶＲアミノ酸配列および／またはＬＣＶＲアミノ酸配列の内部にあるＣＤＲを識別するために使用することができる。ＣＤＲの境界を識別するのに使用することができる例示的規定としては、例えば、Ｋａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、およびＡｂＭ定義が挙げられる。概括的にいうと、Ｋａｂａｔ定義は、配列変化に基づき、Ｃｈｏｔｈｉａ定義は、構造的ループ領域の位置に基づき、ＡｂＭ定義は、ＫａｂａｔのアプローチとＣｈｏｔｈｉａのアプローチとの間の折衷物である。例えば、Ｋａｂａｔ，“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，”Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）；Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７３：９２７－９４８（１９９７）；およびＭａｒｔｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：９２６８－９２７２（１９８９）を参照されたい。抗体内のＣＤＲ配列を識別するために、公開データベースも利用可能である。
修飾されたグリコシル化パターンを有する抗ＣＤ８抗体が、本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、例えば、抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）機能を増大させるために、望ましくないグリコシル化部位を除去する修飾、または抗体がオリゴ糖鎖上に存在するフコース部分を欠損していることが有用であり得る（Ｓｈｉｅｌｄ ｅｔ ａｌ．（２００２）ＪＢＣ ２７７：２６７３３を参照されたい）。他の応用において、ガラクトシル化の修飾は、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を修飾するために行うことができる。
ヒトまたは他の種からのＣＤ８に特異的に結合する抗体およびその抗原結合フラグメントが、本明細書に提供される。ある特定の実施形態では、抗体はヒトＣＤ８および／またはサルＣＤ８に結合してもよい。ある特定の実施形態では、抗体はヒトＣＤ８αに結合する。
第２の態様では、抗ＣＤ８抗体またはその一部をコードする核酸分子が、本明細書に提供される。例えば、配列番号２のＨＣＶＲのアミノ酸配列をコードする核酸分子を本明細書に提供し、ある特定の実施形態では、この核酸分子は、配列番号１のポリヌクレオチド配列、または配列番号１に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有する、配列番号１に実質的に類似した配列を含む。配列番号１０のＬＣＶＲのアミノ酸配列をコードする核酸分子を本明細書に提供し、ある特定の実施形態では、この核酸分子は、配列番号９のポリヌクレオチド配列、または配列番号９に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有する、配列番号９に実質的に類似した配列を含む。表１に列挙されたＣＤＲのアミノ酸配列のいずれかをコードする核酸分子を本明細書に提供し、ある特定の実施形態では、この核酸分子は、表１に列挙されたＣＤＲ核酸配列のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列、またはそれに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、それと実質的に類似した配列を含む。
関連する態様では、本発明は、抗ＣＤ８抗体の重鎖可変領域または軽鎖可変領域を含むポリペプチドを発現することのできる組換え発現ベクターを本明細書に提供する。例えば、上述の核酸分子、すなわち表１に記載されるＨＣＶＲ配列、ＬＣＶＲ配列、および／またはＣＤＲ配列のいずれかをコードする核酸分子のいずれかを含む組換え発現ベクターを本明細書に提供する。また、抗ＣＤ８抗体の重鎖もしくは軽鎖可変領域を含むポリペプチドを発現することのできる組換え発現ベクターも提供される。例えば、上述の核酸分子、すなわち、表１に記載される重鎖または軽鎖配列のいずれかをコードする核酸分子のいずれかを含む組換え発現ベクターが、本明細書に企図される。このようなベクターが導入された宿主細胞、ならびに抗体または抗体フラグメントの産生を可能にする条件下で宿主細胞を培養することにより抗体またはその部分を産生する方法、およびそのように産生された抗体および抗体フラグメントを回収する方法も、本開示の範囲内に含まれる。
第３の態様では、ＣＤ８に特異的に結合する組換えヒト抗体またはそのフラグメントと、薬学的に許容される担体と、を含む薬学的組成物が、本明細書に提供される。別の関連する態様では、本組成物は、抗ＣＤ８抗体と第２の治療剤との組み合わせである。一実施形態では、第２の治療剤は、抗ＣＤ８抗体と有利に組み合わされた任意の薬剤である。抗ＣＤ８抗体と有利に組み合わせることができる例示的な薬剤としては、活性Ｔ細胞信号伝達に結合し、かつ／もしくは活性Ｔ細胞信号伝達を調節する他の薬剤（他の抗体もしくはそれらの抗原結合フラグメントなど）、および／または、ＣＤ８には直接結合しないにもかかわらず、免疫細胞の活性を調節する薬剤が挙げられるが、これらに限定しない。本明細書に提供される抗ＣＤ８抗体が関与する追加的な併用療法および合剤は、本明細書の他の場所で開示されている。
第４の態様では、対象における免疫応答を調節するための方法が提供され、本方法は、治療有効量の抗ＣＤ８抗体またはその抗原結合フラグメントの投与を、それを必要とする対象に施すことを含む。ある特定の実施形態では、本方法は、対象における免疫応答を減少させる、例えば、活性化されたＣＤ８陽性Ｔ細胞におけるＩＦＮγの産生を減少させる、および／または活性化されたＴ細胞における転写因子アクチベータータンパク質（ＡＰ－１）を阻害する。本方法は、有効量のＣＤ８に結合する抗体またはそのフラグメントを対象に投与することを含む。一実施形態では、治療有効量の抗ＣＤ８抗体またはその抗原結合フラグメントの投与を、それを必要とする対象に施すことを含む、対象におけるＴ細胞活性化を軽減する方法が、本明細書に提供される。ある特定の実施形態では、それを必要とする対象は、感染または自己免疫疾患などの疾患もしくは障害を患う場合がある。
第５の態様では、本明細書に提供される抗ＣＤ８抗体または抗体の抗原結合部分を使用して、対象の感染または自己免疫疾患などの疾患もしくは障害を処置する治療方法が、本明細書に提供され、この治療方法は、治療有効量の、本明細書に提供される抗体または抗体のフラグメントを含む薬学的組成物の投与を、それを必要とする対象に施すことを含む。処置される障害は、ＣＤ８陽性Ｔ細胞の活性または信号伝達の阻害によって、改善、寛解、抑制、または予防される任意の疾患または容態である。ある特定の実施形態では、本抗体またはその抗原結合フラグメントは、それを必要とする対象へ、第２の治療剤との組み合わせで投与される。第２の治療剤は、別のＴ細胞共阻害剤、腫瘍細胞抗原への抗体、Ｔ細胞受容体への抗体、ウイルス感染細胞上のエピトープに対する抗体、細胞傷害性剤、抗癌薬、抗ウイルス薬、抗炎症薬（例えば、コルチコステロイド）、化学療法剤、放射線療法、免疫抑制剤、および当該技術分野において既知の任意の他の薬物または療法から選択され得る。ある特定の実施形態では、第２の治療剤は、本明細書に提供する抗体またはその抗原結合フラグメントに関連する任意の起こり得る副作用（単数または複数）が生じるであろう場合、この副作用に対処するか、またはこれを軽減するのを助ける薬剤であり得る。
本抗体またはそのフラグメントは、皮下に、静脈内に、皮内に、腹腔内に、経口で、筋肉内に、または頭蓋内に投与することができる。抗体またはそのフラグメントは、対象の体重１ｋｇあたり約０．１ｍｇ～約１００ｍｇの用量で投与され得る。
また、本明細書において、ＣＤ８結合および／またはシグナル伝達の遮断から利益を得るか、またはＣＤ８陽性Ｔ細胞活性化の軽減から利益を得る疾患もしくは障害の処置のための薬剤の製造における抗ＣＤ８抗体またはその抗原結合フラグメントの使用が提供される。
別の態様では、本明細書において、免疫ＰＥＴ撮像で使用するための放射性標識された抗ＣＤ８抗体コンジュゲートが提供される。コンジュゲートは、抗ＣＤ８抗体またはその抗原結合フラグメントと、キレート部分と、陽電子放出体と、を含む。
本明細書において、該コンジュゲートおよびそのために有用な合成中間体を合成するためのプロセスが提供される。
本明細書において、ＣＤ８を発現する組織を撮像する方法が提供され、本方法は、本明細書に記載の放射性標識された抗ＣＤ８抗体コンジュゲートを組織に投与することと、陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）撮像によって、ＣＤ８発現を可視化することと、を含む。
本明細書において、ＣＤ８発現細胞、例えば、ＣＤ８発現腫瘍内リンパ球、またはＣＤ８陽性Ｔ細胞を含む組織を撮像する方法が提供され、本方法は、本明細書に記載の放射性標識された抗ＣＤ８抗体コンジュゲートを組織に投与することと、ＰＥＴ撮像によって、ＣＤ８発現を可視化することと、を含む。
本明細書において、組織内のＣＤ８を検出する方法が提供され、本方法は、本明細書に記載の放射性標識された抗ＣＤ８抗体コンジュゲートを組織に投与することと、ＰＥＴ撮像によって、ＣＤ８発現を可視化することと、を含む。一実施形態では、組織は、ヒト対象に存在する。ある特定の実施形態では、対象は、非ヒト哺乳動物である。ある特定の実施形態では、対象は、癌、炎症性疾患、または感染などの疾患もしくは障害を有する。
本明細書において、組織内のＣＤ８を検出する方法が提供され、本方法は、組織を本明細書に記載の蛍光分子にコンジュゲートされた抗ＣＤ８抗体コンジュゲートと接触させることと、蛍光撮像によって、ＣＤ８発現を可視化することと、を含む。
本明細書において、対象が抗腫瘍療法に適していることを確認するための方法が提供され、本方法は、固形腫瘍を有する対象を選択することと、本明細書に記載の放射性標識された抗ＣＤ８抗体を投与することと、ＰＥＴ撮像によって、腫瘍内に投与された放射性標識された抗体コンジュゲートを可視化することと、を含み、腫瘍における放射性標識された抗体コンジュゲートの存在が、対象が抗腫瘍療法に適したものとして確認する。
本明細書において、腫瘍を処置する方法が提供され、本方法は、固形腫瘍を有する対象を選択することと、固形腫瘍がＣＤ８陽性であると決定することと、抗腫瘍療法を、それを必要とする対象に施すことと、を含む。特定の実施形態では、抗腫瘍療法はＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１シグナル伝達軸の阻害剤（例えば、抗ＰＤ－１抗体または抗ＰＤ－Ｌ１抗体）を含み、一例として、チェックポイント阻害剤療法である。ある特定の実施形態では、対象には本明細書に記載される放射性標識された抗ＣＤ８抗体コンジュゲートが投与され、放射性標識された抗体コンジュゲートの局在化を、陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）撮像によって撮像し、腫瘍がＣＤ８陽性であるかどうかを決定する。ある特定の実施形態では、対象には本明細書に記載される放射性標識された抗ＰＤ－１抗体コンジュゲートがさらに投与され、放射性標識された抗体コンジュゲートの局在化を、陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）撮像によって撮像し、腫瘍がＰＤ－１陽性であるかどうかを決定する。
本明細書において、対象の抗腫瘍療法の有効性を監視するための方法が提供され、本方法は、固形腫瘍を有する対象を選択することであって、対象が抗腫瘍療法で処置されている、選択することと、本明細書に記載される放射性標識された抗ＣＤ８コンジュゲートを対象に投与することと、ＰＥＴ撮像によって、腫瘍における投与された放射性標識されたコンジュゲートの局在化を撮像することと、腫瘍成長を決定することと、を含み、コンジュゲートまたは放射性標識されたシグナルの取り込みのベースラインからの減少が、抗腫瘍療法有効性を示す。ある特定の実施形態では、抗腫瘍療法は、ＰＤ－１阻害剤（例えば、ＲＥＧＮ２８１０、ＢＧＢ－Ａ３１７、ニボルマブ、ピジリズマブ、およびペンブロリズマブ）、ＰＤ－Ｌ１阻害剤（例えば、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、ＭＤＸ－１１０５、およびＲＥＧＮ３５０４、ならびに特許出願公開第ＵＳ２０１５－０２０３５８０号に開示されるもの）、ＣＴＬＡ－４阻害剤（例えば、イピリムマブ）、ＴＩＭ３阻害剤、ＢＴＬＡ阻害剤、ＴＩＧＩＴ阻害剤、ＣＤ４７阻害剤、ＧＩＴＲ阻害剤、別のＴ細胞共阻害剤もしくはリガンドの拮抗薬（例えば、ＬＡＧ３、ＣＤ－２８、２Ｂ４、ＬＹ１０８、ＬＡＩＲ１、ＩＣＯＳ、ＣＤ１６０またはＶＩＳＴＡへの抗体）、インドールアミン－２，３－ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）拮抗薬［例えば、アフリベルセプトもしくは米国特許第７，０８７，４１１号に記載されるＶＥＧＦ阻害融合タンパク質などの「ＶＥＧＦ－トラップ」、または抗ＶＥＧＦ抗体もしくはその抗原結合フラグメント（例えば、ベバシズマブ、またはラニビズマブ）またはＶＥＧＦ受容体の小分子キナーゼ阻害剤（例えば、スニチニブ、ソラフェニブ、またはパゾパニブ）］、Ａｎｇ２阻害剤（例えば、ネスアクマブ）、トランスフォーミング増殖因子ベータ（ＴＧＦβ）阻害剤、表皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）阻害剤（例えば、エルロチニブ、セツキシマブ）、ＣＤ２０阻害剤（例えば、リツキシマブなどの抗ＣＤ２０抗体）、腫瘍特異抗原に対する抗体［例えば、ＣＡ９、ＣＡ１２５、黒色腫関連抗原３（ＭＡＧＥ３）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ビメンチン、腫瘍－Ｍ２－ＰＫ、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、ムチン－１、ＭＡＲＴ－１、およびＣＡ１９－９］、ワクチン（例えば、カルメット・ゲラン桿菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ Ｃａｌｍｅｔｔｅ－Ｇｕｅｒｉｎ）、癌ワクチン）、抗原提示を増加させるアジュバント（例えば、顆粒球－マクロファージコロニー刺激因子）、二特異性抗体（例えば、ＣＤ３×ＣＤ２０二重特異性抗体、またはＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体）、細胞毒素、化学療法剤（例えば、ダカルバジン、テモゾロミド、シクロホスファミド、ドセタキセル、ドキソルビシン、ダウノルビシン、シスプラチン、カルボプラチン、ゲムシタビン、メトトレキサート、ミトキサントロン、オキサリプラチン、パクリタキセル、およびビンクリスチン）、シクロホスファミド、放射線療法、ＩＬ－６Ｒ阻害剤（例えば、サリルマブ）、ＩＬ－４Ｒ阻害剤（例えば、デュピルマブ）、ＩＬ－１０阻害剤、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－２１、およびＩＬ－１５などのサイトカイン、および抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）（例えば、抗ＣＤ１９－ＤＭ４ ＡＤＣ、および抗ＤＳ６－ＤＭ４ ＡＤＣ）を含む。
本明細書において、抗腫瘍療法に対する対象の応答を予測するための方法が提供され、本方法は、固形腫瘍を有する対象を選択することと、腫瘍がＣＤ８陽性であるかどうかを決定することを含み、腫瘍がＣＤ８陽性である場合、対象の抗腫瘍療法の陽性応答を予測する。ある特定の実施形態では、本開示の放射性標識された抗ＣＤ８抗体コンジュゲートを投与し、ＰＥＴ撮像によって、放射性標識された抗体コンジュゲートを腫瘍内に局在化させる（腫瘍における放射性標識された抗体コンジュゲートの存在は、腫瘍がＣＤ８陽性であることを示す）ことによって、腫瘍は陽性であると決定される。いくつかの実施形態では、抗腫瘍療法は、ＰＤ－１阻害剤（例えば、ＲＥＧＮ２８１０、ＢＧＢ－Ａ３１７、ニボルマブ、ピジリズマブ、およびペンブロリズマブ）、ＰＤ－Ｌ１阻害剤（例えば、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、ＭＤＸ－１１０５、およびＲＥＧＮ３５０４）、ＣＴＬＡ－４阻害剤（例えば、イピリムマブ）、ＴＩＭ３阻害剤、ＢＴＬＡ阻害剤、ＴＩＧＩＴ阻害剤、ＣＤ４７阻害剤、ＧＩＴＲ阻害剤、ＬＡＧ３阻害剤、別のＴ細胞共阻害剤もしくはリガンドの拮抗薬（例えば、ＣＤ－２８、２Ｂ４、ＬＹ１０８、ＬＡＩＲ１、ＩＣＯＳ、ＣＤ１６０またはＶＩＳＴＡへの抗体）、インドールアミン－２，３－ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）拮抗薬［例えば、アフリベルセプトもしくは米国特許第７，０８７，４１１号に記載されるＶＥＧＦ阻害融合タンパク質などの「ＶＥＧＦ－トラップ」、または抗ＶＥＧＦ抗体もしくはその抗原結合フラグメント（例えば、ベバシズマブ、またはラニビズマブ）またはＶＥＧＦ受容体の小分子キナーゼ阻害剤（例えば、スニチニブ、ソラフェニブ、またはパゾパニブ）］、Ａｎｇ２阻害剤（例えば、ネスアクマブ）、トランスフォーミング増殖因子ベータ（ＴＧＦβ）阻害剤、表皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）阻害剤（例えば、エルロチニブ、セツキシマブ）、ＣＤ２０阻害剤（例えば、リツキシマブなどの抗ＣＤ２０抗体）、腫瘍特異抗原に対する抗体［例えば、ＣＡ９、ＣＡ１２５、メラノーマ関連抗原３（ＭＡＧＥ３）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ビメンチン、腫瘍－Ｍ２－ＰＫ、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、ムチン－１、ＭＡＲＴ－１、およびＣＡ１９－９］、ワクチン（例えば、カルメット・ゲラン桿菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ Ｃａｌｍｅｔｔｅ－Ｇｕｅｒｉｎ）、癌ワクチン）、抗原提示を増加させるアジュバント（例えば、顆粒球－マクロファージコロニー刺激因子）、二特異性抗体（例えば、ＣＤ３×ＣＤ２０二重特異性抗体、またはＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体）、細胞毒素、化学療法剤（例えば、ダカルバジン、テモゾロミド、シクロホスファミド、ドセタキセル、ドキソルビシン、ダウノルビシン、シスプラチン、カルボプラチン、ゲムシタビン、メトトレキサート、ミトキサントロン、オキサリプラチン、パクリタキセル、およびビンクリスチン）、シクロホスファミド、放射線療法、ＩＬ－６Ｒ阻害剤（例えば、サリルマブ）、ＩＬ－４Ｒ阻害剤（例えば、デュピルマブ）、ＩＬ－１０阻害剤、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－２１、およびＩＬ－１５などのサイトカイン、および抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）（例えば、抗ＣＤ１９－ＤＭ４ ＡＤＣ、および抗ＤＳ６－ＤＭ４ ＡＤＣ）から選択される。
本明細書において、固形腫瘍を有する対象における抗腫瘍療法に対する陽性応答を予測する方法が提供される。本方法は、放射性標識された抗ＣＤ８抗体を対象に投与して、固形腫瘍におけるＣＤ８陽性細胞の存在を決定することを含み、ＣＤ８陽性細胞の存在は、抗腫瘍療法に対する陽性応答を予測する。
本明細書において、固形腫瘍を有する対象における抗腫瘍療法に対する陽性応答を監視する方法が提供される。本方法は、（ａ）対象に抗腫瘍療法の１回以上の用量を投与することと、（ｂ）抗腫瘍療法を施した１～２０週後に、対象に放射性標識された抗ＣＤ８抗体コンジュゲートを投与して、固形腫瘍におけるＣＤ８陽性細胞の存在を決定することと、を含む。ＣＤ８陽性細胞の存在は、抗腫瘍療法に対する陽性応答を示す。
本明細書において、固形腫瘍を有する対象における抗腫瘍療法の成功もしくは有効性を予測または監視するための方法が提供されており、本方法は、（ａ）腫瘍におけるＣＤ８陽性細胞のレベルを決定することと、（ｂ）ＣＤ８陽性細胞のレベルを成功した抗腫瘍療法に相関させることと、を含む。ある特定の閾値を超えるＣＤ８の高レベルが、成功した抗腫瘍療法の予測または指標である。
本明細書において、腫瘍におけるＴ細胞の存在またはＴ細胞の浸潤を監視するための方法が提供され、本方法は、（ａ）腫瘍を有する対象に、第１の時点で放射性標識された抗ＣＤ８抗体コンジュゲートを投与し、腫瘍におけるＣＤ８陽性Ｔ細胞の存在を決定することと、（ｂ）抗腫瘍療法の１回以上の用量を対象に投与することと、（ｃ）腫瘍療法を施した１～２０週後に、第２の時点で放射性標識された抗ＣＤ８抗体を対象に投与し、腫瘍におけるＣＤ８陽性Ｔ細胞の存在を決定することと、を含む。腫瘍におけるＴ細胞の存在は、抗腫瘍療法に対する陽性応答を示す。
特定の実施形態では、例えば、以下が提供される：
（項目１）
ＣＤ８に結合する単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体またはそのフラグメントが、以下の特性：
（ａ）完全ヒトモノクローナル抗体であること、
（ｂ）表面プラズモン共鳴によって測定されるとき、３．５×１０ －８ Ｍ以下のＫ Ｄ でＣＤ８に結合すること、
（ｃ）ヒトＣＤ８αに結合すること、
（ｄ）活性化ＣＤ８Ｔ細胞においてＩＦＮγ産生を阻害すること、
（ｅ）活性化Ｔ細胞において転写因子アクチベータータンパク質（ＡＰ－１）を阻害すること、ならびに
（ｆ）ヒトおよびサルＣＤ８と交差反応することのうちの１つ以上を示す、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント。
（項目２）
ＣＤ８に結合する単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体またはそのフラグメントが、配列番号２の重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）のアミノ酸配列内に含有されている３つの重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）と、配列番号１０の軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）のアミノ酸配列内に含有されている３つの軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）とを含む、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント。
（項目３）
配列番号２のＨＣＶＲのアミノ酸配列を含む、項目１または２に記載の単離された抗体。
（項目４）
配列番号１０のＬＣＶＲのアミノ酸配列を含む、項目１または２に記載の単離された抗体。
（項目５）
配列番号２／１０のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲのアミノ酸配列ペアを含む、項目１または２に記載の単離された抗体。
（項目６）
項目１～５のいずれか一項に記載の、治療有効量の１つ以上の単離されたヒトモノクローナル抗体、またはその抗原結合フラグメントと共に、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤を含む薬学的組成物。
（項目７）
項目１～５のいずれか一項に記載の、ＣＤ８に結合するヒトモノクローナル抗体またはそのフラグメントをコードする、核酸分子。
（項目８）
項目７に記載の、ＣＤ８に結合するヒトモノクローナル抗体またはそのフラグメントをコードする核酸分子を含む、発現ベクター。
（項目９）
項目８に記載の発現ベクターを含有する、宿主細胞。
（項目１０）
ＣＤ８に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントと、陽電子放出体と、を含む、放射性標識された抗体コンジュゲート。
（項目１１）
ＣＤ８に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントと、キレート部分と、陽電子放出体と、を含む、放射性標識された抗体コンジュゲート。
（項目１２）
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、式（Ａ）：
Figure 0007304846000001
のキレート部分Ｌに共有結合しており、
式中、Ｍが、陽電子放出体であり、ｚが、各出現において独立して、０または１であり、ｚのうちの少なくとも１つが１である、項目１１に記載のコンジュゲート。
（項目１３）
前記キレート部分が、デスフェリオキサミンを含む、項目１１または１２に記載のコンジュゲート。
（項目１４）
前記陽電子放出体が、 ８９ Ｚｒである、項目１０～１２のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
（項目１５）
－Ｌ－Ｍが、
Figure 0007304846000002
である、項目１２～１４のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
（項目１６）
抗体またはその抗原結合フラグメントが、式（Ａ）の１つ、２つ、または３つの部分に共有結合している、項目１０～１５のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
（項目１７）
前記抗体が、配列番号２のＨＣＶＲのアミノ酸配列内に含有されている３つの重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）と、配列番号１０のＬＣＶＲのアミノ酸配列内に含有されている３つの軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）とを含む、項目１０～１６のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
（項目１８）
前記抗体が、
（ａ）表面プラズモン共鳴によって測定されるとき、約３．５×１０ －８ Ｍ未満の結合解離平衡定数（Ｋ Ｄ ）でヒトＣＤ８に結合すること、
（ｂ）ヒトＣＤ８αに結合すること、
（ｃ）活性化ＣＤ８Ｔ細胞でのＩＦＮγ産生を阻害すること、
（ｄ）活性化Ｔ細胞における転写因子アクチベータータンパク質（ＡＰ－１）を阻害すること、ならびに
（ｅ）ヒトおよびサルＣＤ８と交差反応することからなる群から選択される１つ以上の特性を有する、項目１０～１７のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
（項目１９）
前記抗体が、配列番号２／１０のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む、項目１０～１８のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
（項目２０）
ＣＤ８を発現する組織の撮像方法であって、項目１０～１９のいずれか一項に記載の放射性標識された抗体コンジュゲートを前記組織に投与することと、陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）撮像によりＣＤ８発現を可視化することと、を含む、組織の撮像方法。
（項目２１）
固形腫瘍を有する対象をチェックポイント阻害剤療法で処置するための方法であって、
（ａ）前記固形腫瘍がＣＤ８陽性Ｔ細胞を含むかどうかを決定することと、
（ｂ）前記腫瘍がＣＤ８陽性Ｔ細胞を含む場合、前記チェックポイント阻害剤療法の１回以上の用量を前記対象に投与することと、を含み、
前記腫瘍中のＣＤ８陽性Ｔ細胞の存在が、前記チェックポイント阻害剤療法での処置に対する前記腫瘍の応答を示す、方法。
（項目２２）
工程（ａ）が、
（ｉ）項目１０～１９のいずれか一項に記載の放射性標識された抗体コンジュゲートを前記対象に投与することと、
（ｉｉ）陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）撮像によって、前記腫瘍における前記放射性標識された抗体コンジュゲートの局在化の撮像を行うことと、を含み、前記腫瘍における前記放射性標識された抗体コンジュゲートの存在が、前記腫瘍がＣＤ８陽性細胞を含むことを示す、項目２１に記載の方法。
（項目２３）
前記対象が、０．１～１０ｍｇ／ｋｇの前記放射性標識された抗体コンジュゲートを投与される、項目２２に記載の方法。
（項目２４）
Ｔ細胞機能が、前記放射性標識された抗体コンジュゲートの投与によって損なわれない、項目２２に記載の方法。
（項目２５）
前記放射性標識された抗体コンジュゲートが、前記対象に対して皮下または静脈内に投与される、項目２２または２４に記載の方法。
（項目２６）
ＰＥＴ撮像が、前記放射性標識された抗体コンジュゲートの投与の２～７日後に実施される、項目２２～２５のいずれか一項に記載の方法。
（項目２７）
工程（ａ）が工程（ｂ）の前に実行される、項目２１～２５のいずれか一項に記載の方法。
（項目２８）
（ｃ）前記対象を抗腫瘍療法の少なくとも１回の用量で処置した後に、工程（ａ）を繰り返すことをさらに含み、前記腫瘍における前記放射性標識された抗体コンジュゲートの局在化の面積のベースラインからの増加が、前記抗腫瘍療法の有効性を示す、項目２１～２７のいずれか一項に記載の方法。
（項目２９）
前記対象に、前記抗腫瘍療法を施した１～２０週後に前記放射性標識された抗体コンジュゲートを投与される、項目２２に記載の方法。
（項目３０）
前記固形腫瘍がＰＤ－１陽性であることを、放射性標識された抗ＰＤ－１コンジュゲートの投与を、それを必要とする前記対象に施すことにより決定する工程と、ＰＥＴ撮像によって、前記腫瘍における前記放射性標識された抗ＰＤ－１コンジュゲートの局在化を撮像する工程とを、さらに含み、前記腫瘍における前記放射性標識された抗ＰＤ－１コンジュゲートの存在が、前記腫瘍がＰＤ－１陽性であることを示す、項目２１に記載の方法。
（項目３１）
前記抗腫瘍療法が、前記ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１シグナル伝達軸の阻害剤、ＣＴＬＡ－４阻害剤、ＴＩＭ３阻害剤、ＢＴＬＡ阻害剤、ＴＩＧＩＴ阻害剤、ＣＤ４７阻害剤、ＧＩＴＲ阻害剤、別のＴ細胞共阻害剤もしくはリガンドの拮抗薬、インドールアミン－２，３－ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）拮抗薬、Ａｎｇ２阻害剤、トランスフォーミング増殖因子ベータ（ＴＧＦβ）阻害剤、表皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）阻害剤、ＣＤ２０阻害剤、腫瘍特異抗原に対する抗体、癌ワクチン、二重特異性抗体、細胞毒素、化学療法薬、シクロホスファミド、放射線療法、ＩＬ－６Ｒ阻害剤、ＩＬ－４Ｒ阻害剤、ＩＬ－１０阻害剤、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－２１、ＩＬ－１５、および抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）からなる群から選択される、項目２１～３０のいずれか一項に記載の方法。
（項目３２）
前記抗腫瘍療法が、ＲＥＧＮ２８１０、ＢＧＢ－Ａ３１７、ニボルマブ、ピジリズマブ、ペンブロリズマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、ＭＤＸ－１１０５、ＲＥＧＮ３５０４、イピリムマブ、抗ＣＤ－２８抗体、抗２Ｂ４抗体、抗ＬＹ１０８抗体、抗ＬＡＩＲ１抗体、抗ＩＣＯＳ抗体、抗ＣＤ１６０抗体、抗ＶＩＳＴＡ抗体、アフリベルセプト、ベバシズマブ、ラニビズマブ、スニチニブ、ソラフェニブ、パゾパニブ、ネスバクマブ、エルロチニブ、セツキシマブ、リツキシマブ、抗ＣＡ９抗体、抗ＣＡ１２５抗体、抗黒色腫関連抗原３（ＭＡＧＥ３）抗体、抗癌胎児性抗原（ＣＥＡ）抗体、抗ビメンチン抗体、抗腫瘍Ｍ２－ＰＫ抗体、抗前立腺特異抗原（ＰＳＡ）抗体、抗ムチン－１抗体、抗ＭＡＲＴ－１抗体、抗ＣＡ１９－９抗体、カルメット・ゲラン桿菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ Ｃａｌｍｅｔｔｅ－Ｇｕｅｒｉｎ）、ＣＤ３×ＣＤ２０二重特異性抗体、ＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体、ダカルバジン、テモゾロミド、シクロホスファミド、ドセタキセル、ドキソルビシン、ダウノルビシン、シスプラチン、カルボプラチン、ゲムシタビン、メトトレキサート、ミトキサントロン、オキサリプラチン、パクリタキセル、ビンクリスチン、シクロホスファミド、放射線療法、サリルマブ、デュピルマブ、抗ＣＤ１９－ＤＭ４ ＡＤＣ、および抗ＤＳ６－ＤＭ４ ＡＤＣからなる群から選択される、項目２１～３０のいずれか一項に記載の方法。
（項目３３）
前記抗腫瘍療法が、抗ＰＤ－１抗体および抗ＰＤ－Ｌ１抗体からなる群から選択される、項目２１～３２のいずれか一項に記載の方法。
（項目３４）
前記ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１シグナル伝達軸の前記阻害剤が、抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合フラグメントである、項目３１に記載の方法。
（項目３５）
前記抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合フラグメントが、ＲＥＧＮ２８１０、ノボルマブ、またはペンブロリズマブである、項目３４に記載の方法。
（項目３６）
前記抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合フラグメントが、ＲＥＧＮ２８１０である、項目３４に記載の方法。
（項目３７）
前記ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１シグナル伝達軸の前記阻害剤が、抗ＰＤ－Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントである、項目３１に記載の方法。
（項目３８）
前記抗ＰＤ－Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントが、アテゾリズマブ、アベルマブ、またはデュルバルマブである、項目３７に記載の方法。
（項目３９）
前記腫瘍が、血液癌、脳癌、腎細胞癌、卵巣癌、膀胱癌、前立腺癌、乳癌、肝細胞癌、骨癌、結腸癌、非小細胞肺癌、頭頸部の扁平上皮細胞癌、大腸直腸癌、中皮腫、Ｂ細胞リンパ腫、および黒色腫からなる群から選択される、項目２１～３８のいずれか一項に記載の方法。
（項目４０）
固形腫瘍を有する対象における抗腫瘍療法に対する陽性応答を予測する方法であって、前記方法が、
前記対象に放射性標識された抗ＣＤ８抗体コンジュゲートを投与して、前記固形腫瘍におけるＣＤ８陽性細胞の存在を決定することを含み
前記ＣＤ８陽性細胞の存在が、抗腫瘍療法に対する陽性応答を予測する、方法。
（項目４１）
抗腫瘍療法に対する対象における腫瘍の応答を監視する方法であって、
（ａ）前記対象に対して抗腫瘍療法の１回以上の用量を投与することと、
（ｂ）前記抗腫瘍療法を施した１～２０週後に、前記対象に対して放射性標識された抗ＣＤ８抗体コンジュゲートの少なくとも１回の用量を投与して、前記固体腫瘍におけるＣＤ８陽性細胞の存在を決定することと、を含み、
前記ＣＤ８陽性細胞の存在が、前記抗腫瘍療法に対する陽性応答を示す、方法。
（項目４２）
腫瘍を有する対象における抗腫瘍療法の有効性を予測または監視する方法であって、前記方法が、
（ａ）前記腫瘍におけるＣＤ８陽性Ｔ細胞のレベルを決定することと、
（ｂ）前記ＣＤ８陽性Ｔ細胞のレベルを、成功した抗腫瘍療法と相関させることと、を含み
ある特定の閾値を超える高レベルが、成功した抗腫瘍療法の予測または指標である、方法。
（項目４３）
経時的な腫瘍におけるＴ細胞の存在を監視する方法であって、前記方法が、
（ａ）放射性標識された抗ＣＤ８抗体コンジュゲートを、前記腫瘍を有する対象に第１の時点で投与して、前記腫瘍におけるＣＤ８陽性Ｔ細胞の存在を決定することと、
（ｂ）前記対象に対して抗腫瘍療法の１回以上の用量を投与することと、
（ｃ）前記抗腫瘍療法を施した１～２０週後に、前記対象に第２の時点で放射性標識された抗ＣＤ８抗体コンジュゲートを投与して、前記腫瘍におけるＣＤ８陽性Ｔ細胞の存在を決定することと、を含み、
前記腫瘍におけるＴ細胞の存在が、前記抗腫瘍療法に対する陽性応答を示す、方法。
（項目４４）
工程（ｃ）が、前記抗腫瘍療法による処置過程にわたって繰り返される、項目４３に記載の方法。
（項目４５）
前記第１の時点が、（ｂ）の前に起こる、項目４３に記載の方法。
（項目４６）
（ａ）による前記ＣＤ８陽性Ｔ細胞が、（ｃ）による前記ＣＤ８陽性Ｔ細胞に対して比較され、ＣＤ８陽性Ｔ細胞の経時的な増加が、前記抗腫瘍療法に対する陽性応答を示す、項目４３に記載の方法。
（項目４７）
式（ＩＩＩ）の化合物であって、
Figure 0007304846000003
式中、Ａが、ＣＤ８に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、ｋが、１～３０の整数である、化合物。
（項目４８）
ｋが、１または２である、項目４７に記載の化合物。
（項目４９）
（ｉ）ＣＤ８に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントと、（ｉｉ）１つ以上のキレート部分と、を含む、抗体コンジュゲート。
（項目５０）
前記キレート部分が、
Figure 0007304846000004
であり、
式中
Figure 0007304846000005
が、前記抗体またはその抗原結合フラグメントへの共有結合である、項目４９に記載の抗体コンジュゲート。
（項目５１）
前記コンジュゲートが、１．０～２．０の薬物対抗体比（ＤＡＲ）を有する、項目４９に記載の抗体コンジュゲート。
（項目５２）
前記キレート部分対抗体比が、約１．７である、項目４９に記載の抗体コンジュゲート。
（項目５３）
（ｉ）ＣＤ８に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントと、（ｉｉ）蛍光染料と、を含む、抗体コンジュゲート。
（項目５４）
前記蛍光染料が、近赤外染料である、項目５３に記載の抗体コンジュゲート。
（項目５５）
前記染料が、ＩＲＤｙｅ８００ＣＷまたはＶｉｖｏＴａｇ６８０ＸＬである、項目５４に記載の抗体コンジュゲート。
（項目５６）
前記抗体コンジュゲートが、以下の構造：
Ａｂ－［Ｄ］ ｎ を有し、
式中、Ａｂが、抗ＣＤ８抗体またはその抗原結合フラグメントであり、Ｄが、蛍光染料であり、ｎが、１～４の整数である、項目５３に記載の抗体コンジュゲート。
（項目５７）
Ｄが、
Figure 0007304846000006
であるか、またはその薬学的に許容される塩である、項目５６に記載の抗体コンジュゲート。
（項目５８）
ＣＤ８を発現する組織の撮像方法であって、前記方法が、（ａ）（ｉ）ＣＤ８に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントと、（ｉｉ）蛍光染料とを含む抗体コンジュゲートを前記組織に接触させることと、（ｂ）蛍光撮像を使用して前記組織を撮像することによってＣＤ８発現を可視化することと、を含む、方法。
ヒトＣＤ８＋およびカニクイアルＴ細胞に結合するｍＡｂ１を示す。 ｍＡｂ１によるＩＦＮγ産生の阻害を通したヒトＣＤ８ Ｔ細胞活性の調節を示す。 ＣＤ８転写活性のｍＡｂ１阻害を立証するＣＤ８ Ｔ細胞／ＡＰＣルシフェラーゼアッセイからのデータを示す。 ＤＦＯ－ｍＡｂ１コンジュゲートのＵＶ／ＶＩＳスペクトルを示す。 ＵＶ２８０ｎｍの吸光度検出を用いた、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ２００ Ｉｎｃｒｅａｓｅカラム上の２５ｕｇのＨＰＬＣ－ＳＥＣを示す。単量体（９７．５％）および高分子量（ＨＭＷ）種（２．５％）が示されている。 ＤＦＯ－ｍＡｂ１コンジュゲートの電気泳動図を示す。図６Ａ）非還元型コンジュゲートを表し、図６Ｂ）還元型コンジュゲートを表す。 ガンマ放射検出を用いた、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ２００ Ｉｎｃｒｅａｓｅカラム上のｍＡｂ１－Ｌ２－１１１０１６放射性免疫コンジュゲートのＳＥＣ－ＨＰＬＣクロマトグラムを示す。非標識８９Ｚｒは、全組み入れ活性の０．１％未満を占める。 ガンマ放射検出を用いた、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ２００ Ｉｎｃｒｅａｓｅカラム上のｍＡｂ１－Ｌ２－１１１５１６放射性免疫コンジュゲートのＳＥＣ－ＨＰＬＣクロマトグラムを示す。非標識８９Ｚｒは、全組み入れ活性の０．１％未満を占める。 ＵＶ２８０ｎｍの吸光度検出を用いた、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ２００ Ｉｎｃｒｅａｓｅカラム上のｍＡｂ１－Ｌ２－１１１０１６放射性免疫コンジュゲートのＳＥＣ－ＨＰＬＣクロマトグラムを示す。単量体（９８．５％）および高分子量（ＨＭＷ）種（１．５％）が示されている。 ＵＶ２８０ｎｍの吸光度検出を用いた、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ２００ Ｉｎｃｒｅａｓｅカラム上のｍＡｂ１－Ｌ２－１１１５１６放射性免疫コンジュゲートのＳＥＣ－ＨＰＬＣクロマトグラムを示す。単量体（９８．６％）および高分子量（ＨＭＷ）種（１４％）が示されている。 ｈＣＤ８を発現するマウスにおいて０．５または１．５ｍｇ／ｋｇのタンパク質用量で注入された８９Ｚｒ－ＤＦＯ－ｍＡｂ１の代表的なＰＥＴ画像を提供する。８９Ｚｒ－ＤＦＯ－ｍＡｂ１の特異的な取り込みは、両方の用量でｈＣＤ８を発現するマウスの脾臓およびリンパ節で検出される。取り込みの減少は、脾臓およびリンパ節で１．５ｍｇ／ｋｇのより高いタンパク質用量で検出され、リンパ器官に対する標的化特異性を示す。略語：Ｃｅｒｖ ＬＮ－頚部リンパ節；Ａｘｉｌ ＬＮ－腋窩リンパ節；Ｂｒａｃｈ ＬＮ－上腕リンパ節；Ｍｅｓ ＬＮ－腸間膜リンパ節、Ｉｎｇ ＬＮ－鼠経リンパ節。 ＲａｊｉおよびＲａｊｉ／ｈＰＢＭＣ腫瘍担持マウスにおいて０．１ｍｇ／ｋｇのタンパク質用量で注入された８９Ｚｒ－ＤＦＯ－ｍＡｂ１の代表的なＰＥＴ画像を示す。８９Ｚｒ－ＤＦＯ－ｍＡｂ１の特異的取り込みは、Ｒａｊｉ／ｈＰＢＭＣ腫瘍担持マウスの脾臓および腫瘍内で検出される。 ＬＣＭＶに感染したマウスの抗体処置を比較し、ｍＡｂ１で処置したマウスが、強力なＣＤ８遮断抗体で処置されたマウスに対してＬＣＭＶをクリアする能力を保持していることを立証している。
Ｉ．定義
本明細書に別途定義されていない限り、本明細書で使用される全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般に理解される意味と同じ意味を有する。
「ＣＤ８」（表面抗原分類８（Ｃｌｕｓｔｅｒ ｏｆ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ８））は、主に細胞傷害性Ｔリンパ球上で発現されるが、樹状細胞、ナチュラルキラー細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、およびγδＴ細胞のサブセットでも発現される、細胞表面糖タンパク質を指す。この糖タンパク質は、異なる遺伝子によってコードされ、ααホモ二量体またはαβヘテロ二量体として発現される、２つのアイソフォーム、αおよびβから構成され、αβヘテロ二量体は優勢である。ＣＤ８共受容体は、Ｔ細胞受容体ＭＨＣ－１の相互作用を安定化し、活性化のために、ＣＤ３関連免疫受容体チロシン活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）のリンパ球特異的タンパク質チロシンキナーゼ（Ｌｃｋ）のリン酸化によって細胞内シグナル伝達を開始する。
完全長ＣＤ８αのアミノ酸配列は、受託番号Ｐ０１７３２としてＵｎｉＰｒｏｔに提供され、本明細書では配列番号１８とも称される。完全長ＣＤ８βのアミノ酸配列は、受託番号１０９６６としてＵｎｉＰｒｏｔに提供され、本明細書では配列番号２０とも称される。「ＣＤ８」という用語は、完全長ＣＤ８αまたはＣＤ８β、組換えＣＤ８、そのフラグメント、およびその融合体を含む。この用語はまた、例えば、ヒスチジンタグ、マウスもしくはヒトＦｃ、またはＲＯＲ１のシグナル配列などのシグナル配列に結合されたＣＤ８αまたはＣＤ８β、もしくはそのフラグメントを包含する。例えば、この用語は、ＣＤ８αまたはＣＤ８βのフラグメントに結合されたＣ末端にマウスＦｃ（ｍｌｇＧ２ａ）を含む、配列番号１８または２０によって例示される配列を含む。他のタンパク質バリアントは、ＣＤ８またはそのフラグメントに結合されたＣ末端にヒスチジンタグを含む。非ヒト種からのものとして指定されない限り、「ＣＤ８」という用語はヒトＣＤ８を意味する。
ＣＤ８は、シンクスタークによって膜に接続された免疫グロブリン可変（ＩｇＶ）様細胞外ドメインと、細胞内テールとを有する免疫グロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリーのメンバーである。
本明細書で使用される場合、「Ｔ細胞共阻害剤」という用語は、Ｔ細胞活性化または抑制を介して免疫応答を調節するリガンドおよび／または受容体を指す。「Ｔ細胞共阻害剤」という用語は、Ｔ細胞共シグナル伝達分子としても知られており、これらには、リンパ球活性化遺伝子３タンパク質（ＬＡＧ－３、ＣＤ２２３としても知られる）、プログラム細胞死－１（ＰＤ－１）、細胞傷害性Ｔ－リンパ球抗原－４（ＣＴＬＡ－４）、ＢおよびＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）、ＣＤ－２８、２Ｂ４、ＬＹ１０８、Ｔ細胞免疫グロブリンおよびムチン－３（ＴＩＭ３）、Ｔ細胞免疫グロブリンおよびＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ、ＶＳＩＧ９としても知られる）、白血球関連免疫グロブリン様受容体１（ＬＡＩＲ１、ＣＤ３０５としても知られる）、誘導性Ｔ細胞共刺激分子（ＩＣＯＳ、ＣＤ２７８としても知られる）、Ｂ７－１（ＣＤ８０）、およびＣＤ１６０が挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書で使用する「抗体」という用語は、ジスルフィド結合によって相互接続された４つのポリペプチド鎖、２つの重（Ｈ）鎖、および２つの軽（Ｌ）鎖からなる免疫グロブリン分子（すなわち、「完全抗体分子」）、ならびにこれらの多量体（例えば、ＩｇＭ）またはこれらの抗原結合フラグメントを指すことが意図される。各重鎖は、重鎖可変領域（「ＨＣＶＲ」または「ＶＨ」）および重鎖定常領域（ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメインからなる）からなる。各軽鎖は、軽鎖可変領域（「ＬＣＶＲまたは「ＶＬ」）および軽鎖定常領域（ＣＬ）からなる。ＶＨ領域およびＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる、より保存された領域が点在する相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変領域へとさらに細分することができる。各ＶＨおよびＶＬは、以下の順序、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４でアミノ末端からカルボキシ末端に配置された３つのＣＤＲおよび４つのＦＲからなる。ある特定の実施形態では、抗体（またはその抗原結合フラグメント）のＦＲは、ヒト生殖系列配列と同一であってもよいか、または天然にもしくは人工的に修飾されていてもよい。アミノ酸コンセンサス配列は、２つ以上のＣＤＲの並列分析に基づいて定義され得る。
１つ以上のＣＤＲ残基の置換または１つ以上のＣＤＲの省略も可能である。抗体は、１つまたは２つのＣＤＲが結合のために省かれることができると科学文献に説明されている。Ｐａｄｌａｎ ｅｔ ａｌ．（１９９５ ＦＡＳＥＢ Ｊ．９：１３３－１３９）は、公開されている結晶構造に基づいて、抗体とこれらの抗原との間の接触領域を分析し、ＣＤＲ残基の約１／５～１／３のみが実際に抗原と接触すると結論付けた。Ｐａｄｌａｎは、１つまたは２つのＣＤＲが抗原と接触しているアミノ酸を有しない多くの抗体も発見した（Ｖａｊｄｏｓ ｅｔ ａｌ．２００２ Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ３２０：４１５－４２８も参照されたい）。
抗原と接触していないＣＤＲ残基は、先行研究に基づいて、ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲの外側にあるＫａｂａｔのＣＤＲの領域から、分子モデリングによって、かつ／または演繹的に識別することができる（例えば、ＣＤＲＨ２中の残基Ｈ６０～Ｈ６５はしばしば必要ではない）。ＣＤＲまたはその残基（単数または複数）が省略される場合、このＣＤＲまたはその残基（単数または複数）は、通常、別のヒト抗体配列またはこのような配列のコンセンサスにおける対応する位置を占有するアミノ酸と置換される。ＣＤＲ内の置換のための位置および置換すべきアミノ酸も演繹的に選択することができる。演繹的な置換は、保存的置換または非保存的置換であり得る。
本明細書に開示する完全ヒト抗ＣＤ８モノクローナル抗体は、対応する生殖系列配列と比較して、重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインのフレームワークおよび／またはＣＤＲ領域に１つ以上のアミノ酸置換、挿入、および／または欠失を含み得る。そのような変異は、本明細書に開示されるアミノ酸配列を、例えば公開抗体配列データベースから入手可能な生殖系列配列と比較することによって容易に確認され得る。本開示は、本明細書に開示されるアミノ酸配列のいずれかに由来する抗体、およびこれらの抗原結合フラグメントを含み、１つ以上のフレームワークおよび／またはＣＤＲ領域内の１つ以上のアミノ酸は、抗体が由来する生殖系列配列の対応する残基（単数または複数）、または別のヒト生殖系列配列の対応する残基（単数または複数）、または対応する生殖系列残基（単数または複数）の保存的アミノ酸置換に変異する（そのような配列変化は、本明細書において集合的に「生殖細胞系変異」と称される）。当業者であれば、本明細書に開示される重鎖可変領域配列および軽鎖可変領域配列から開始して、１つ以上の個々の生殖系列変異またはそれらの組み合わせを含む、多くの抗体および抗原結合フラグメントを容易に産生することができる。ある特定の実施形態では、ＶＨおよび／またはＶＬドメイン内のフレームワークおよび／またはＣＤＲ残基の全てが、抗体が由来する元の生殖系列配列に見られる残基に再び変異する。他の実施形態では、特定の残基のみ、例えば、ＦＲ１の最初の８個のアミノ酸内、もしくはＦＲ４の最後の８個のアミノ酸内に見られる変異残基のみ、またはＣＤＲ１、ＣＤＲ２、もしくはＣＤＲ３内に見られる変異残基のみが、元の生殖系列配列に変異する。他の実施形態では、フレームワークおよび／またはＣＤＲ残基（単数または複数）のうちの１つ以上は、異なる生殖系列配列（すなわち、抗体が元々由来する生殖系列配列とは異なる生殖系列配列）の対応する残基（単数または複数）に変異する。さらに、本開示の抗体は、フレームワークおよび／またはＣＤＲ領域内に２つ以上の生殖系列変異の任意の組み合わせを含有してもよく、例えば、ある特定の個々の残基が、特定の生殖系列配列の対応する残基に変異する一方で、元の生殖系列配列とは異なる、ある特定の他の残基が維持されるか、または異なる生殖系列配列の対応する残基に変異する。いったん得られれば、１つ以上の生殖系列変異を含有する抗体および抗原結合フラグメントは、結合特異性の改善、結合親和性の増大、アンタゴニストまたはアゴニストの生物学的特性の改善または亢進（場合により得る）、免疫原性の低下などの１つ以上の所望の特性について容易に試験することができる。この一般的な様式で得られた抗体および抗原結合フラグメントは、本開示に包含される。
本開示は、１つ以上の保存的置換を有する本明細書に開示するＨＣＶＲアミノ酸配列、ＬＣＶＲアミノ酸配列、および／またはＣＤＲアミノ酸配列のいずれかのバリアントを含む完全ヒト抗ＣＤ８モノクローナル抗体も含む。例えば、本開示は、本明細書に開示されるＨＣＶＲアミノ酸配列、ＬＣＶＲアミノ酸配列、および／またはＣＤＲアミノ酸配列のいずれかに対して、例えば１０個以下、８個以下、６個以下、または４個以下などの保存的アミノ酸置換を有するＨＣＶＲアミノ酸配列、ＬＣＶＲアミノ酸配列、および／またはＣＤＲアミノ酸配列を有する抗ＣＤ８抗体を含む。
「ヒト抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、非天然のヒト抗体を含むことが意図されている。この用語は、非ヒト哺乳類において、または非ヒト哺乳類の細胞において組換え産生された抗体を含む。この用語は、ヒト対象から単離された、またはヒト対象において生成された抗体を含むよう意図されるものではない。
「～を特異的に結合する」という用語もしくは「～へ特異的に結合する」という用語、またはこれらに類するものは、抗体またはその抗原結合フラグメントが、生理学的条件下で比較的安定である抗原と複合体を形成することを意味する。特異的結合は、少なくとも約５×１０－８Ｍ以下の平衡解離定数を特徴とすることができる（例えば、より小さなＫＤはより緊密な結合を示す）。２つの分子が特異的に結合するかどうかを決定するための方法は、当該技術分野で周知であり、例えば、平衡透析、表面プラズモン共鳴などを含む。本明細書で記載される場合、抗体は、ＣＤ８へ特異的に結合する表面プラズモン共鳴、例えばＢＩＡＣＯＲＥ（商標）によって識別されている。
本明細書で使用される場合、抗体の「抗原結合部分」、抗体の「抗原結合フラグメント」などという用語は、抗原に特異的に結合して複合体を形成する、任意の天然に存在する、酵素的に得られる、合成の、または遺伝子的に操作されたポリペプチドまたは糖タンパク質を含む。本明細書で使用する場合、抗体の「抗原結合フラグメント」、または「抗体フラグメント」という用語は、ＣＤ８に結合する能力を保持する抗体の１つ以上のフラグメントを指す。
本明細書で使用する場合、「単離された抗体」は、異なる抗原特異性を有する他の抗体（Ａｂ）を実質的に含まない抗体を指すことが意図される（例えば、ＣＤ８に特異的に結合する単離された抗体またはそのフラグメントは、ＣＤ８以外の抗原を特異的に結合するＡｂを実質的に含まない。
「表面プラズモン共鳴」という用語は、本明細書で使用する場合、例えばＢＩＡＣＯＲＥ（商標）システム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ ＡＢ，スウェーデン国ウプサラ市およびニュージャージー州ピスカタウェイ郡区）を用いて、バイオセンサーマトリックス内のタンパク質濃度の変化の検出によってリアルタイムでの生体分子相互作用の分析を可能にする光学現象を指す。
「ＫＤ」という用語は、本明細書で使用する場合、特定の抗体－抗原相互作用の平衡解離定数を指すよう意図される。
「エピトープ」という用語は、パラトープとして既知の抗体分子の可変領域における特異的抗原結合部位と相互作用する抗原決定基を指す。単一の抗原は１つ以上のエピトープを有してもよい。したがって、異なる抗体は、抗原上の異なる領域へ結合し得、異なる生物学的効果を有し得る。「エピトープ」という用語は、Ｂ細胞および／またはＴ細胞が応答する抗原上の部位も指す。この用語は、抗体が結合する抗原の領域も指す。エピトープは、構造的または機能的と定義され得る。機能的エピトープは概して、構造エピトープのサブセットであり、相互作用の親和性に直接寄与する残基を有する。エピトープは、立体配座的でもあり得、すなわち、非線形アミノ酸から構成され得る。ある特定の実施形態では、エピトープは、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリル基、またはスルホニル基などの分子の化学的に活性のある表面群である決定基を含み得、ある特定の実施形態では、特異的三次元構造特徴および／または比電荷特徴を有し得る。
「実質的な同一性」または「実質的に同一である」という用語は、核酸またはそのフラグメントを指す場合、別の核酸（またはその相補鎖）との適切なヌクレオチド挿入または欠失と最適に整列した場合、ＦＡＳＴＡ、ＢＬＡＳＴ、またはＧＡＰなど、配列同一性の任意の周知のアルゴリズムによって測定したときに、ヌクレオチド塩基の少なくとも約９０％、より好ましくは少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％または９９％においてヌクレオチド配列同一性があることを示す。
ポリペプチドへ適用される場合、「実質的な類似性」または「実質的に類似の」という用語は、２つのペプチド配列が、既定のギャップ重みを用いてプログラムＧＡＰまたはＢＥＳＴＦＩＴなどによって最適に整列した場合、少なくとも９０％の配列同一性、さらにより好ましくは少なくとも９５％、９８％または９９％の配列同一性を共有する。好ましくは、同一ではない残基位置は、保存的アミノ酸置換だけ異なる。「保存的アミノ酸置換」とは、アミノ酸残基が、類似の化学的特性（例えば、電荷または疎水性）を備えた側鎖（Ｒ基）を有する別のアミノ酸残基によって置換されたものである。一般に、保存的アミノ酸置換は、タンパク質の機能性特性を実質的に変化させない。２つ以上のアミノ酸配列が保存的置換だけ互いに異なる場合、相同性の百分率または程度は、置換の保存的性質を補正するために上向きに調整してもよい。この調整を行うための手段は、当業者に周知である。例えば、参照により本明細書に組み込まれる、Ｐｅａｒｓｏｎ（１９９４）Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２４：３０７－３３１を参照されたい。類似の化学的特性を備えた側鎖を有するアミノ酸の基の例としては、１）脂肪族側鎖：グリシン、アラニン、バリン、ロイシンおよびイソロイシン、２）脂肪族－ヒドロキシル側鎖：セリンおよびトレオニン、３）アミド含有側鎖：アスパラギンおよびグルタミン、４）芳香族側鎖：フェニルアラニン、チロシン、およびトリプトファン、５）塩基性側鎖：リジン、アルギニン、およびヒスチジン、６）酸性側鎖：アスパラギン酸およびグルタミン酸、ならびに７）含硫側鎖：システインおよびメチオニンが挙げられる。好ましい保存的アミノ酸置換基は、バリン－ロイシン－イソロイシン、フェニルアラニン－チロシン、リジン－アルギニン、アラニン－バリン、グルタミン酸－アスパラギン酸およびアスパラギン－グルタミンである。あるいは、保存的置換とは、参照により本明細書に組み込まれるＧｏｎｎｅｔ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５６：１４４３ ４５に開示されるＰＡＭ２５０対数尤度行列において正の値を有する任意の変化である。「適度に保存的な」置換とは、ＰＡＭ２５０対数尤度行列において負以外の値を有する何らかの変化である。ポリペプチドについての配列類似性は、典型的には、配列解析ソフトウェアを用いて測定される。タンパク質解析ソフトウェアは、保存的アミノ酸置換を含む種々の置換、欠失および他の修飾へ割り当てられた類似性の測定値を用いて類似の配列と一致させる。例えば、ＧＣＧソフトウェアは、異なる種の生物由来の相同ポリペプチドのような密接に関連するポリペプチド間の、または野生型タンパク質とその変異タンパク質の間の配列相同性または配列同一性を決定するための既定パラメータとともに使用することができるＧＡＰおよびＢＥＳＴＦＩＴなどのプログラムを含有する。例えば、ＧＣＧ第６．１版を参照されたい。ポリペプチド配列は、ＧＣＧ第６．１版におけるプログラムである、既定パラメータまたは推奨パラメータを備えたＦＡＳＴＡを使用して比較することもできる。ＦＡＳＴＡ（例えば、ＦＡＳＴＡ２およびＦＡＳＴＡ３）は、問い合わせ配列と検索配列との間の最良重複の領域の整列および配列同一性パーセントを提供する（Ｐｅａｒｓｏｎ（２０００）上述）。本開示の配列を、異なる生物由来の多数の配列を含有するデータベースと比較する場合の別の好ましいアルゴリズムは、既定パラメータを用いるコンピュータプログラムＢＬＡＳＴ、特にＢＬＡＳＴＰまたはＴＢＬＡＳＴＮである。例えば、それぞれが、参照により本明細書に組み込まれる、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－４１０および（１９９７）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９－３４０２を参照されたい。
「治療有効量」という句によって意味されるのは、所望の効果のために投与されて所望の効果を生じる量である。正確な量は、処置の目的によることになっており、既知の技術を用いて当業者によって確認できることになっている（例えば、Ｌｌｏｙｄ（１９９９）Ｔｈｅ Ａｒｔ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｉｎｇを参照されたい）。
本明細書で使用する場合、「対象」という用語は、慢性感染症、癌、または自己免疫疾患などの疾患または障害の寛解、予防、および／または処置を必要とする動物、好ましくは哺乳類を指す。
ＩＩ．概要
ＣＤ８は、胸腺内で生成され、Ｔ細胞受容体を発現する細胞傷害性Ｔ細胞で発現される。ＣＤ８は、二量体共受容体として発現され、典型的には、１つのＣＤ８αタンパク質と、１つのＣＤ８βタンパク質とを含む。ＣＤ８＋Ｔ細胞は、ＭＨＣ Ｉにより提示されるペプチドを認識し、ＣＤ８ヘテロ二量体は、抗原提示中にＭＨＣ Ｉα３に結合する。活性化ＣＤ８＋Ｔ細胞は、感染細胞または悪性細胞の除去に関与しており、自己免疫疾患にも関与する。
本明細書に記載される完全ヒト抗ＣＤ８抗体は、ＣＤ８αおよび／またはＣＤ８βへの特異的結合を示す。こうした抗体は、慢性感染、癌、または自己免疫疾患を処置するために使用され得る。
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ヒトＣＤ８αタンパク質および／またはヒトＣＤ８βタンパク質などの一次免疫原で免疫化されたマウスから得られ、これは市販されていてもよく、または組換えによって産生されてもよい。ヒトＣＤ８αおよびヒトＣＤ８βの完全長アミノ酸配列は、それぞれ配列番号１８および２０として示されている。ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ヒトＣＤ８α ＤＮＡおよび／またはヒトＣＤ８β ＤＮＡなどの一次免疫原で免疫化されたマウスから得られる。ヒトＣＤ８αの完全長核酸配列は、配列番号１７で見出すことができる。完全長ヒトＣＤ８β核酸配列は、配列番号１９で見出すことができる。
免疫原は、組換え的に産生されたＣＤ８、融合タンパク質、その活性フラグメントをコードするＤＮＡ、またはＣＤ８αタンパク質もしくはＣＤ８βタンパク質全体をコードするＤＮＡの生物学的活性フラグメントおよび／または免疫原性フラグメントであってもよい。フラグメントは、ヒトＣＤ８αおよびヒトＣＤ８βのＮ末端またはＣ末端のいずれかから誘導されてもよく、またはヒトＣＤ８αおよびヒトＣＤ８βのアミノ酸配列の任意の部位から誘導されてもよい。
ヒト抗体の調製
トランスジェニックマウスにおいてヒト抗体を生成するための方法は、当該技術分野で知られている。ＣＤ８に特異的に結合するヒト抗体を作製するために、任意のこのような既知の方法が、本開示の文脈において使用され得る。
モノクローナル抗体を生成するためにＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（商標）技術（例えば、ＵＳ６，５９６，５４１、Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）を参照されたい）または任意の他の既知の方法を使用して、ヒト可変領域およびマウス定常領域を有するＣｄ８に対する高親和性キメラ抗体を最初に単離する。ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）技術は、マウスが抗原刺激に応答してヒト可変領域およびマウス定常領域を含む抗体を産生するように、内在性マウス定常領域座に操作可能に連結されたヒト重鎖可変領域とヒト軽鎖可変領域とを含むゲノムを有するトランスジェニックマウスを生成することを伴う。抗体の重鎖および軽鎖の可変領域をコードするＤＮＡを単離し、ヒト重鎖定常領域およびヒト軽鎖定常領域をコードするＤＮＡに動作可能に連結する。次に、完全ヒト抗体を発現することができる細胞においてＤＮＡを発現させる。
概して、ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）マウスに関心対象の抗原を負荷し、抗体を発現するマウスからリンパ細胞（Ｂ細胞など）を回収する。リンパ細胞を骨髄腫細胞株と融合させて不死化ハイブリドーマ細胞株を調製し得、関心対象の抗原に特異的な抗体を産生するハイブリドーマ細胞株を同定するためにこのようなハイブリドーマ細胞株をスクリーニングおよび選択する。重鎖および軽鎖の可変領域をコードするＤＮＡを単離し得、重鎖および軽鎖の望ましいアイソタイプ定常領域へ連結することができる。このような抗体タンパク質は、ＣＨＯ細胞などの細胞において産生され得る。代替的に、抗原特異的キメラ抗体または軽鎖および重鎖の可変ドメインをコードするＤＮＡを抗原特異的リンパ球から直接単離することができる。
まず、ヒト可変領域とマウス定常領域とを有する高親和性キメラ抗体を単離する。以下の実験セクションと同様に、抗体を、親和性、選択性、エピトープなどを含む望ましい特徴について特徴付け、選択する。マウス定常領域を、所望のヒト定常領域で置換して、本明細書に提供する完全ヒト抗体、例えば、野生型のまたは修飾されたＩｇＧ１またはＩｇＧ４を生成する。選択される定常領域は特定の用途に応じて異なり得るが、高親和性抗原結合特徴および標的特異性特徴は可変領域に存在する。
概して、本明細書に提供する抗体は、固相または液相のいずれかに固定化された抗原への結合によって測定した場合、非常に高い親和性を有し、典型的には、約１０－１２～約１０－８ＭのＫＤを有する。マウス定常領域を所望のヒト定常領域と置換して、完全ヒト抗体を生成する。選択される定常領域は特定の用途に応じて異なり得るが、高親和性抗原結合特徴および標的特異性特徴は可変領域に存在する。
生物学的等価物
本明細書に提供する抗ＣＤ８抗体および抗体フラグメントは、記載される抗体のアミノ酸配列とは異なるが、ＣＤ８に結合する能力を保有するアミノ酸配列を有するタンパク質を包含する。このようなバリアント抗体および抗体フラグメントは、親配列と比較してアミノ酸の１つ以上の付加、欠失、または置換を含むが、説明された抗体の生物学的活性とは本質的に等価である生物学的活性を呈する。同様に、本明細書に提供する抗体をコードするＤＮＡ配列は、開示される配列と比較してヌクレオチドの１つ以上の付加、欠失、または置換を含むが、本明細書に開示する抗体または抗体フラグメントと本質的に生物学的に等価である抗体または抗体フラグメントをコードする配列を包含する。
２つの抗原結合タンパク質、または抗体は、例えば類似の実験条件下、同じモル用量で、単一用量または複数用量のいずれかで投与されたとき、吸収の速度および程度が著しい差異を示さない薬学的等価物または薬学的代替物である場合、生物学的等価物であるとみなされる。いくつかの抗体は、これらの吸収の程度は同等であるがこれらの吸収速度は同等ではない場合、等価物または薬学的代替物とみなされ、さらに、吸収速度のこのような差異が、意図的であり、ラベルに反映されており、例えば、慢性使用において有効身体薬物濃度の獲得に不可欠ではなく、研究した特定の薬剤製品にとって医学的に有意ではないとみなされるため、生物学的等価物であるとみなされる。
一実施形態では、２つの抗原結合タンパク質は、これらの安全性、純度、または有効性において臨床的に有意性のある差がない場合、生物学的に等価である。
一実施形態では、２つの抗原結合タンパク質は、参照製品と生物学的製品の間での１回以上の切り替えを行わない持続的療法と比較して、免疫原性の臨床的に有意な変化を含む有害作用のリスクの予想される上昇または有効性の減退が生じずに、対象がその様な切り替えを行うことができる場合、生物学的に等価である。
一実施形態では、２つの抗原結合タンパク質は、これらが両方とも、１つまたは複数の使用条件について、１つのまたは複数の共通の作用機序によって、このような機序が既知である程度まで作用する場合、生物学的に等価である。
生物学的等価性は、インビボおよび／またはインビトロの方法によって実証され得る。生物学的等価性測定法には、例えば、（ａ）抗体またはその代謝産物の濃度が血液、血漿、血清または他の生物学的流体中で時間の関数として測定される、ヒトまたは他の哺乳類におけるインビボでの試験、（ｂ）ヒトのインビボでの生物学的利用能データと相関し、このデータを合理的に予測しているインビトロ試験、（ｃ）抗体（またはその標的）の適切な急性薬理学的効果が時間の関数として測定される、ヒトまたは他の哺乳類におけるインビボ試験、および（ｄ）抗体の安全性、効能、または生物学的利用能もしくは生物学的等価性を確立する、十分に管理された臨床試験が含まれる。
本明細書に提供される抗体の生物学的に等価なバリアントは、例えば、残基もしくは配列の種々の置換を生じること、または生物活性に必要とされない末端もしくは内部の残基もしくは配列を欠失することによって構築され得る。例えば、生物学的活性にとって必須ではないシステイン残基は、再生の際の不必要または不正確な分子内ジスルフィド架橋の形成を防止するために、欠失または他のアミノ酸で置換することができる。他の文脈では、生物学的に等価の抗体には、抗体のグリコシル化特徴を修飾するアミノ酸変化、例えばグリコシル化を排除または除去する変異を含む、抗体バリアントが含まれ得る。
治療用の投与および製剤
本開示の抗ＣＤ８抗体またはその抗原結合フラグメントを含む治療用組成物を、本明細書に提供する。本開示による治療用組成物の投与は、改善された移動、送達、寛容などを提供するために、製剤へと組み込まれた好適な担体、賦形剤、および他の薬剤とともに、静脈内、皮下、筋肉内、鼻孔内が挙げられるが、これらに限定されない好適な経路を介して投与される。多数の適切な製剤は、全ての薬学的化学において既知の処方集、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ′ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡにおいて見出され得る。これらの製剤としては、例えば、粉末、ペースト、軟膏、ゼリー、ワックス、油、脂質、小胞を含有する脂質（カチオン性またはアニオン性）（ＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（商標）など）、ＤＮＡ共役体、無水吸収ペースト、水中油および油中水乳剤、乳剤カルボワックス（様々な分子量のポリエチレングリコール）、半固体ゲル、ならびにカルボワックスを含有する半固体混合物が挙げられる。Ｐｏｗｅｌｌ ｅｔ ａｌ．“Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ ｏｆ ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ ｆｏｒ ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ”ＰＤＡ（１９９８）Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ Ｔｅｃｈｎｏｌ ５２：２３８－３１１も参照されたい。
抗体の用量は、投与されることになっている対象の年齢およびサイズ、標的疾患、容態、投与経路などによって変わり得る。
様々な送達系、例えば、リポソーム、微粒子、マイクロカプセル、変異体ウイルスを発現することができる組換え細胞内へのカプセル化、受容体媒介性エンドサイトーシスが既知であり、本明細書に提供する薬学的組成物を投与するために使用され得る（例えば、Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，１９８７，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：４４２９－４４３２を参照されたい）。導入方法には、皮内経路、経皮経路、筋肉内経路、腹腔内経路、静脈内経路、皮下経路、鼻腔内経路、硬膜外経路および経口経路が含まれるが、これらに限定されない。組成物は、任意の好都合な経路によって、例えば、注入もしくはボーラス注射によって、上皮もしくは粘膜皮膚内層（ｌｉｎｉｎｇｓ）（例えば、口腔粘膜、直腸粘膜および腸粘膜など）を介した吸収によって投与することができ、かつ他の生物学的に活性な薬剤と一緒に投与することができる。投与は、全身または局所であり得る。
薬学的組成物は、ベシクル、特にリポソーム中で送達され得る（例えば、Ｌａｎｇｅｒ，１９９０，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７－１５３３を参照されたい）。
ある特定の状況では、薬学的組成物は、制御放出系で送達され得る。一実施形態では、ポンプを使用することができる。別の実施形態では、ポリマー材料を使用することができる。さらに別の実施形態では、徐放系を組成物の標的の近傍に配置することができ、したがって全身用量のほんの一部しか必要としない。
注入可能な調製物は、静脈内、皮下、皮内、および筋肉内注射、点滴などの投与形態を含み得る。これらの注射可能な調製物は、公知の方法によって調製されてもよい。例えば、注入可能な調製物は、例えば、注入に従来使用される無菌水性媒体または油性媒体に、上述される抗体またはその塩を溶解、懸濁、または乳化させることによって調製され得る。注射用水性媒体としては、例えば、生理食塩水、グルコースを含有する等張液、および他の助剤などがあり、これらは、アルコール（例えば、エタノール）、ポリアルコール（例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール）、非イオン性界面活性剤［例えば、ポリソルベート８０、ＨＣＯ－５０（水素化ヒマシ油のポリオキシエチレン（５０モル）付加物）］などの適切な可溶化剤と併用され得る。油性媒体としては、例えば、ゴマ油、ダイズ油などが採用され、これらは安息香酸ベンジル、ベンジルアルコールなどの可溶化剤と併用され得る。このようにして調製した注射液は、好ましくは、適切なアンプル中に充填される。
本開示の薬学的組成物は、標準的な針およびシリンジで皮下または静脈内に送達され得る。加えて、皮下送達に関して、ペン型送達デバイスは、本開示の薬学的組成物の送達において、容易に用途を見出す。そのようなペン型送達デバイスは、再利用可能であるか、または使い捨てであり得る。再利用可能なペン型送達デバイスは、概して、薬学的組成物を含有する交換可能なカートリッジを利用する。カートリッジ内部の薬学的組成物の全てが投与され、カートリッジが空になると、空のカートリッジは、容易に廃棄され得、薬学的組成物を含有する新しいカートリッジと交換され得る。次に、ペン型送達デバイスは再利用することができる。使い捨てペン型送達デバイスでは、交換可能なカートリッジはない。むしろ、使い捨てペン型送達デバイスは、薬学的組成物がデバイス内部のリザーバ内に保持された事前に充填された状態で販売される。いったんリザーバの薬学的組成物が空になると、デバイス全体が廃棄される。
多数の再利用可能なペン型および自動注入装置送達デバイスは、本開示の薬学的組成物の皮下送達において用途を見出す。例としては、ほんの数例を挙げると、ＡＵＴＯＰＥＮ（商標）（Ｏｗｅｎ Ｍｕｍｆｏｒｄ，Ｉｎｃ．，Ｗｏｏｄｓｔｏｃｋ，ＵＫ）、ＤＩＳＥＴＲＯＮＩＣ（商標）ペン （Ｄｉｓｅｔｒｏｎｉｃ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｂｕｒｇｈｄｏｒｆ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）、ＨＵＭＡＬＯＧ ＭＩＸ ７５／２５（商標）ペン、ＨＵＭＡＬＯＧ（商標）ペン、ＨＵＭＡＬＩＮ ７０／３０（商標）ペン（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ ａｎｄ Ｃｏ．，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）、ＮＯＶＯＰＥＮ（商標）Ｉ、ＩＩ、およびＩＩＩ（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ，Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ，Ｄｅｎｍａｒｋ）、ＮＯＶＯＰＥＮ ＪＵＮＩＯＲ（商標）（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ，Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ，Ｄｅｎｍａｒｋ）、ＢＤ（商標）ペン（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ，ＮＪ）、ＯＰＴＩＰＥＮ（商標）、ＯＰＴＩＰＥＮ ＰＲＯ（商標）、ＯＰＴＩＰＥＮ ＳＴＡＲＬＥＴ（商標）、およびＯＰＴＩＣＬＩＫ（商標）（ｓａｎｏｆｉ－ａｖｅｎｔｉｓ，Ｆｒａｎｋｆｕｒｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）が挙げられるが、決してこれらに限定されない。本開示の薬学的組成物の皮下送達において用途を見出す使い捨てペン型送達デバイスの例としては、ほんの数例を挙げると、ＳＯＬＯＳＴＡＲ（商標）ペン（Ｓａｎｏｆｉ－Ａｖｅｎｔｉｓ）、ＦＬＥＸＰＥＮ（商標）（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ）、およびＫＷＩＫＰＥＮ（商標）（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ）、ＳＵＲＥＣＬＩＣＫ（商標）Ａｕｔｏｉｎｊｅｃｔｏｒ（Ａｍｇｅｎ，Ｔｈｏｕｓａｎｄ Ｏａｋｓ，ＣＡ）、ＰＥＮＬＥＴ（商標）（Ｈａｓｅｌｍｅｉｅｒ，Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、ＥＰＩＰＥＮ（Ｄｅｙ，Ｌ．Ｐ．）およびＨＵＭＩＲＡ（商標）Ｐｅｎ（Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｓ，Ａｂｂｏｔｔ Ｐａｒｋ，ＩＬ）が挙げられるが、決してこれらに限定されない。
有利に、上述の経口または非経口使用のための薬学的組成物は、活性成分の用量を適合させるのに適した単位用量で剤形に調製される。単位用量におけるこのような剤形には、例えば、錠剤、丸剤、カプセル剤、注射剤（アンプル剤）、坐剤などが含まれる。
ＩＩＩ．免疫療法ＰＥＴ撮像用のＣＤ８抗体の放射性標識された免疫コンジュゲート
本明細書において、ＣＤ８に結合する放射性標識された抗原結合タンパク質が提供される。いくつかの実施形態では、放射性標識された抗原結合タンパク質は、陽電子放出体に共有結合した抗原結合タンパク質を含む。いくつかの実施形態では、放射性標識された抗原結合タンパク質は、１つ以上のキレート部分に共有結合した抗原結合タンパク質を含み、キレート部分は、陽電子放出体をキレート化することができる化学部分である。
好適な放射性標識された抗原結合タンパク質、例えば、放射性標識された抗体には、放射性標識された抗原結合タンパク質への曝露時に、Ｔ細胞機能を損なわないか、または実質的に損なわないものが含まれる。いくつかの実施形態では、ＣＤ８に結合する放射性標識された抗原結合タンパク質は、ＣＤ８のＴ細胞機能の弱いブロッカーであり、すなわち、放射標識された抗体への曝露時に、Ｔ細胞機能が損なわれないか、または実質的に損なわれない。本明細書に提供される方法によるＣＤ８媒介性Ｔ細胞機能に対する最小限の影響を有する放射性標識された抗ＣＤ８結合タンパク質の使用は、この分子で処置された対象が、そのＴ細胞が感染を一掃できないことによって不利益にならないことを確実にする。
いくつかの実施形態では、ＣＤ８に結合する抗原結合タンパク質、例えば、抗体が提供され、ＣＤ８に結合する該抗原結合タンパク質は、以下の構造を有する１つ以上の部分に共有結合されており、
－Ｌ－ＭＺ
式中、Ｌは、キレート部分であり、Ｍは、陽電子放出体であり、ｚは、各出現において独立して、０または１であり、ｚのうちの少なくとも１つは１である。
特定の実施形態では、放射性標識された抗原結合タンパク質は、式（Ｉ）の化合物であり、
Ｍ－Ｌ－Ａ－［Ｌ－ＭＺ］ｋ
（Ｉ）
Ａは、ＣＤ８に結合するタンパク質であり、Ｌは、キレート部分であり、Ｍは、陽陽電子放出体であり、ｚは、０または１であり、ｋは、０～３０の整数である。いくつかの実施形態では、ｋは、１である。いくつかの実施形態では、ｋは、２である。
特定の実施形態では、放射性標識された抗原結合タンパク質は、式（ＩＩ）の化合物であり、
Ａ－［Ｌ－Ｍ］ｋ
（ＩＩ）
式中、Ａは、ＣＤ８に結合するタンパク質であり、Ｌは、キレート部分であり、Ｍは、陽陽電子放出体であり、ｋは、１～３０の整数である。
いくつかの実施形態では、以下の構造を有するコンジュゲートを含む組成物が本明細書に提供されており、
Ａ－Ｌｋ
式中、Ａは、ＣＤ８に結合するタンパク質であり、Ｌは、キレート部分であり、ｋは、１～３０の整数であり、このコンジュゲートは、臨床的なＰＥＴ撮像に好適な比放射能を提供するのに十分な量の陽電子放出体でキレート化されている。
適切な結合タンパク質、キレート部分、および陽電子放出体は、以下に提供されている。
Ａ．ＣＤ８結合タンパク質
適切なＣＤ８結合タンパク質は、ＣＤ８に特異的に結合し、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、ＷＯ２０１４／１６４５５３に記載されるものを含む。本明細書に提供される例示的抗ＣＤ８結合タンパク質は、表１に記載される核酸およびアミノ酸配列特性を含む以下のｍＡｂ１と称されるモノクローナル抗体である。
Figure 0007304846000007
 表１には、例示的な抗ＣＤ８抗体の重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）、重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３）、および軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３）の核酸配列識別子およびアミノ酸配列識別子が記載されている。
いくつかの実施形態では、結合タンパク質は、配列番号２のアミノ酸配列、または配列番号２に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有する、配列番号２と実質的に類似した配列を含むＨＣＶＲを含む、抗体または抗原結合フラグメントである。
いくつかの実施形態では、結合タンパク質は、配列番号１０のアミノ酸配列、または配列番号１０に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有する、配列番号１０と実質的に類似した配列を含むＬＣＶＲを含む、抗体または抗原結合フラグメントである。
いくつかの実施形態では、結合タンパク質は、配列番号２／１０のＨＣＶＲとＬＣＶＲとのアミノ酸配列ペア（ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ）を含む抗体または抗原結合フラグメント、例えば、ｍＡｂ１である。
いくつかの実施形態では、結合タンパク質は、配列番号４のアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有する、配列番号４と実質的に類似した配列の重鎖ＣＤＲ１（ＨＣＤＲ１）を含む、抗体または抗原結合フラグメントである。
いくつかの実施形態では、結合タンパク質は、配列番号６のアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有する、配列番号６と実質的に類似した配列の重鎖ＣＤＲ２（ＨＣＤＲ２）を含む、抗体または抗原結合フラグメントである。
いくつかの実施形態では、結合タンパク質は、配列番号８のアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有する、配列番号８と実質的に類似した配列の重鎖ＣＤＲ３（ＨＣＤＲ３）を含む、抗体または抗原結合フラグメントである。
いくつかの実施形態では、結合タンパク質は、配列番号１２のアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有する、配列番号１２と実質的に類似した配列の軽鎖ＣＤＲ１（ＬＣＤＲ１）を含む、抗体または抗原結合フラグメントである。
いくつかの実施形態では、結合タンパク質は、配列番号１４のアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有する、配列番号１４と実質的に類似した配列の軽鎖ＣＤＲ２（ＬＣＤＲ２）を含む、抗体または抗原結合フラグメントである。
いくつかの実施形態では、結合タンパク質は、配列番号１６のアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有する、配列番号１６と実質的に類似した配列の軽鎖ＣＤＲ３（ＬＣＤＲ３）を含む、抗体または抗原結合フラグメントである。
いくつかの実施形態では、結合タンパク質は、配列番号８／１６のＨＣＤＲ３とＬＣＤＲ３とのアミノ酸配列ペア（ＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ３）を含む抗体または抗原結合フラグメントである。
いくつかの実施形態では、結合タンパク質は、表１に提供される例示的な抗ＣＤ８抗体内に含まれる６個のＣＤＲのセット（すなわち、ＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３－ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３）を含む抗体または抗原結合フラグメントである。ある特定の実施形態では、ＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３－ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３のアミノ酸配列の組み合わせは、配列番号４－６－８－１２－１４－１６を含む。
いくつかの実施形態では、結合タンパク質は、配列番号２／１０のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペア内に含まれる６個のＣＤＲのセット（すなわち、ＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３－ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３）を含む抗体または抗原結合フラグメントである。ＨＣＶＲアミノ酸配列およびＬＣＶＲアミノ酸配列の内部にあるＣＤＲを識別するための方法および技術は、当該技術分野において周知であり、本明細書に開示される特定のＨＣＶＲアミノ酸配列および／またはＬＣＶＲアミノ酸配列の内部にあるＣＤＲを識別するために使用することができる。ＣＤＲの境界を識別するために使用することができる例示的な規定としては、例えば、Ｋａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、およびＡｂＭ定義が挙げられる。一般的にいえば、Ｋａｂａｔ定義は、配列の可変性に基づいており、Ｃｈｏｔｈｉａ定義は、構造ループ領域の位置に基づいており、ＡｂＭ定義は、ＫａｂａｔのアプローチとＣｈｏｔｈｉａのアプローチとの間の折衷案である。例えば、Ｋａｂａｔ，“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，”Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）；Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７３：９２７－９４８（１９９７）；およびＭａｒｔｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：９２６８－９２７２（１９８９）を参照されたい。抗体内のＣＤＲ配列を識別するために、公開データベースも利用可能である。
いくつかの実施形態では、結合タンパク質は、ＨＣＶＲのＣＤＲおよびＬＣＶＲのＣＤＲを含む抗体またはその抗原結合フラグメントとＣＤ８への特異的な結合に対して競合する抗体およびその抗原結合フラグメントであり、ＨＣＶＲとＬＣＶＲとのアミノ酸配列ペアは、配列番号２／１０を含む。
また、ＣＤ８に結合し、かつ活性化ＣＤ８陽性Ｔ細胞においてＩＦＮγ産生を阻害する単離された抗体およびその抗原結合フラグメントが、本明細書に提供されている。ある特定の実施形態では、活性化ＣＤ８陽性Ｔ細胞において、ＣＤ８に結合し、かつ活性化ＣＤ８陽性Ｔ細胞においてＩＦＮγ産生を阻害する本開示の抗体は、配列番号２のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲのＣＤＲ、および配列番号１０のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲのＣＤＲを含む。
また、ＣＤ８に結合し、かつ活性化Ｔ細胞において転写因子アクチベータータンパク質（ＡＰ－１）を阻害する単離された抗体およびその抗原結合フラグメントが、本明細書に提供される。ある特定の実施形態では、ＣＤ８に結合し、かつ活性化Ｔ細胞においてＡＰ－１を阻害する本開示の抗体は、配列番号２のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲのＣＤＲ、および配列番号１０のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲのＣＤＲを含む。
いくつかの実施形態では、結合タンパク質は、ヒトまたは他の種からのＣＤ８に特異的に結合する抗体およびその抗原結合フラグメントである。ある特定の実施形態では、抗体はヒトＣＤ８および／またはカニクイザルＣＤ８に結合してもよい。
いくつかの実施形態では、結合タンパク質は、ＨＣＶＲのＣＤＲおよびＬＣＶＲのＣＤＲを含む参照抗体またはその抗原結合フラグメントとＣＤ８への結合に対して交差競合する抗体およびその抗原結合フラグメントであり、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲは、それぞれ、配列番号２／１０のアミノ酸配列ペアを有する。
一実施形態では、結合タンパク質は、以下の特徴のうちの１つ以上を有する単離された抗体または抗原結合フラグメントである：（ａ）完全ヒトモノクローナル抗体であること、（ｂ）表面プラズモン共鳴によって測定されるとき、３．５×１０－８Ｍ以下のＫＤでＣＤ８に結合すること、（ｃ）ヒトＣＤ８αに結合すること、（ｄ）活性化ＣＤ８Ｔ細胞においてＩＦＮγ産生を阻害すること、（ｅ）活性化Ｔ細胞において転写因子アクチベータータンパク質（ＡＰ－１）を阻害すること、（ｆ）ヒトおよびサルＣＤ８と交差反応すること、（ｇ）配列番号２の重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）のアミノ酸配列内に含まれる３つの重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）を含むこと、ならびに（ｈ）配列番号１０の軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）のアミノ酸配列内に含まれる３つの軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）を含むこと。
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、アゴニスト様式でＣＤ８に特異的に結合してもよく、すなわち、ＣＤ８の結合および／または活性を増強または刺激してもよく、他の実施形態では、抗体は、アンタゴニスト様式でＣＤ８に特異的に結合してもよく、すなわち、ＣＤ８が天然のＣＤ８結合パートナーに結合するのを遮断してもよい。
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、中立の様式でＣＤ８に特異的に結合してもよく、すなわち、ＣＤ８に結合するが、ＣＤ８の結合および／または活性を遮断または増強もしくは刺激しない。
いくつかの実施形態では、抗体およびその抗原結合フラグメントは、例えば、実施例２で定義されるようなアッセイ形式、または実質的に類似のアッセイを使用して、２５℃または３７℃での表面プラズモン共鳴により測定したときに、約２．０分を超える解離半減期（ｔ１／２）で、ＣＤ８、例えば、ＣＤ８αまたはＣＤ８βに結合する。ある特定の実施形態にでは、本抗体または抗原結合フラグメントは、２５℃でまたは３７℃で、例えば実施例２で定義されるアッセイ形式（例えば、ｍＡｂ捕捉または抗原捕捉形式）を用いる表面プラズモン共鳴または実質的に類似のアッセイによって測定されるとき、約５分超、約１０分超、約３０分超、約５０分超、約６０分超、約７０分超、約８０分超、約９０分超、約１００分超、約２００分超、約３００分超、約４００分超、約５００分超、約６００分超、約７００分超、約８００分超、約９００分超、約１０００分超、または約１１００分超のｔ１／２でＣＤ８に結合する。
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、実施例６で定義されるフローサイトメトリーアッセイ、または実質的に類似のアッセイによって測定されるとき、約１ｎＭ未満のＥＣ５０で、ヒトＣＤ８発現細胞に結合する。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、例えば、実施例６のアッセイ形式を使用するフローサイトメトリーアッセイ、または実質的に類似のアッセイによって測定されるとき、約０．９ｎＭ未満、約０．８ｎＭ未満、約０．７ｎＭ未満、約０．６ｎＭ未満、約０．５ｎＭ未満、約０．４ｎｍ未満のＥＣ５０で、ｈＣＤ８発現細胞に結合する。
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、実施例６で定義されるフローサイトメトリーアッセイ、または実質的に類似のアッセイによって測定されるとき、約１ｎＭ未満のＥＣ５０で、カニクイザルのＣＤ８発現細胞に結合する。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、例えば、実施例６のアッセイ形式を使用するフローサイトメトリーアッセイ、または実質的に類似のアッセイによって測定されるとき、約０．９ｎＭ未満、約０．８ｎＭ未満、約０．７ｎＭ未満、約０．６ｎＭ未満、約０．５ｎＭ未満、または約０．４ｎｍ未満のＥＣ５０で、サルＣＤ８発現細胞に結合する。
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、実施例８で定義されるＴ細胞／ＡＰＣルシフェラーゼレポーターアッセイ、または実質的に類似のアッセイによって測定されるとき、１．２Ｅ－０９Ｍ未満のＥＣ５０で、ＣＤ８陽性Ｔ細胞活性化を軽減または遮断する。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、例えば、実施例８で定義されるアッセイ形式を使用するＴ細胞／ＡＰＣルシフェラーゼレポーターアッセイ、または実質的に類似のアッセイによって測定されるとき、少なくとも約８５％または約８９％までのＥＣ５０で、ＣＤ８陽性Ｔ細胞活性化を遮断する。
一実施形態では、抗体またはそのフラグメントは、ＣＤ８に結合する完全ヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントであり、この抗体またはそのフラグメントは、以下の特性のうちの１つ以上を示す：（ｉ）配列番号２のＨＣＶＲのアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の配列同一性を有する、配列番号２と実質的に類似の配列を含むこと、（ｉｉ）配列番号１０の選択されたＬＣＶＲのアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の配列同一性を有する、配列番号１０と実質的に類似の配列を含むこと、（ｉｉｉ）配列番号８／１６のＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ３のアミノ酸配列ペア、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の配列同一性を有する、配列番号８／１６と実質的に類似の配列を含むこと、（ｉｖ）配列番号４／１２のＨＣＤＲ１／ＬＣＤＲ１のアミノ酸配列ペア、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の配列同一性を有する、配列番号４／１２と実質的に類似の配列；配列番号６／１４のＨＣＤＲ２／ＬＣＤＲ２アミノ酸配列ペア、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の配列同一性を有する、配列番号６／１４と実質的に類似の配列；配列番号８／１６のＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ３アミノ酸配列ペア、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の配列同一性を有する、配列番号８／１６と実質的に類似の配列を含むこと、（ｖ）表面プラズモン共鳴アッセイで測定されるとき、約３．５×１０－８Ｍの結合解離平衡定数（ＫＤ）でヒトＣＤ８に結合すること、（ｖｉ）活性化ＣＤ８陽性Ｔ細胞においてＩＦＮγ産生を阻害すること、および（ｖｉｉ）活性化Ｔ細胞において転写因子アクチベータータンパク質（ＡＰ－１）を阻害すること。
ある特定の実施形態では、抗体は、完全長タンパク質の任意の領域またはフラグメント（その配列が、配列番号１８に示されている）に結合することにより、ＣＤ８αに関連するＭＨＣクラスＩの結合活性を遮断または阻害することによって機能し得る。ある特定の実施形態では、抗体は、完全長タンパク質の任意の領域またはフラグメント（その配列が、配列番号２０に示されている）に結合することにより、ＣＤ８βに関連するＭＨＣクラスＩの結合活性を遮断または阻害することによって機能し得る。
ある特定の実施形態では、抗ＣＤ８抗体またはその抗原結合フラグメントは、エピトープを、配列番号１８に例示される天然形態の、または組換え産生させたＣＤ８αに例示される領域のうちの１つ以上内に、またはそのフラグメントへ結合させる。いくつかの実施形態では、抗体は、ＣＤ８αのアミノ酸残基２２～１８２からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸を含む細胞外領域に結合する。ある特定の実施形態では、抗ＣＤ８抗体またはその抗原結合フラグメントは、エピトープを、配列番号２０に例示される天然形態の、または組換え産生されたＣＤ８βに例示される領域のうちの１つ以上内に、またはそのフラグメントへ結合させる。いくつかの実施形態では、抗体は、ＣＤ８βのアミノ酸残基２２～１７０からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸を含む細胞外領域に結合する。
特定の実施形態では、抗ＣＤ８抗体およびその抗原結合フラグメントは、ＣＤ８α（配列番号１８）またはＣＤ８β（配列番号２０）の細胞外領域内に見られる１つ以上のエピトープと相互作用する。エピトープ（単数または複数）は、ＣＤ８αまたはＣＤ８βの細胞外領域内に位置する３つ以上（例えば、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、またはそれ以上）のアミノ酸の１つ以上の連続した配列からなっていてもよい。あるいは、エピトープは、ＣＤ８αまたはＣＤ８βの細胞外領域内に位置する複数の非連続的アミノ酸（または、アミノ酸配列）からなっていてもよい。
本開示は、表１に記載される特定の例示的抗体、または表１に記載される例示的抗体のＣＤＲ配列を有する抗体と同じエピトープ、またはエピトープの一部に結合する抗ＣＤ８抗体を含む。同様に、ＣＤ８またはＣＤ８フラグメントへの結合に対して、表１に記載される特定の例示的な抗体、または表１に記載される例示的な抗体のＣＤＲ配列を有する抗体と競合する抗ＣＤ８抗体も含まれる。例えば、本開示は、本明細書に提供される１つ以上の抗体（例えば、ｍＡｂ１）と、ＣＤ８への結合に対して交差競合する抗ＣＤ８抗体を含む。
本明細書に記載される抗体および抗原結合フラグメントは、ＣＤ８に特異的に結合し、かつＣＤ８とＭＨＣクラスＩとの相互作用を調節する。抗ＣＤ８抗体は、高い親和性または低い親和性でＣＤ８に結合し得る。ある特定の実施形態では、抗体は、抗体がＣＤ８に結合し、かつＣＤ８とＭＨＣクラスＩとの相互作用を遮断する、遮断抗体である。いくつかの実施形態では、本開示の遮断抗体は、ＣＤ８のＭＨＣクラスＩへの結合を遮断し、および／またはＴ細胞活性化を軽減する。いくつかの実施形態では、遮断抗体は、免疫応答を阻害するため、および／または感染または自己免疫疾患もしくは障害を処置するために有用である。
いくつかの実施形態では、抗体はＣＤ８に結合し、かつ活性化ＣＤ８陽性Ｔ細胞におけるＩＦＮγ産生を阻害する。ある特定の実施形態では、抗体はＣＤ８に結合し、かつ制御性Ｔ細胞活性を阻害し、例えば、ＣＤ８陽性Ｔ細胞において転写因子ＡＰ－１を阻害する。
ある特定の抗ＣＤ８抗体は、インビトロアッセイまたはインビボアッセイによって測定して、ＣＤ８に結合してその活性を中和することができる。ＣＤ８に結合してその活性を中和する抗体の能力は、本明細書に記載される、結合アッセイまたは活性アッセイを含む、当業者に知られている任意の標準的な方法を使用して測定され得る。
結合活性を測定するための非限定的な、例示のインビトロアッセイは、本明細書に提供される実施例に例示されており：実施例２では、ヒトＣＤ８に対する例示的なヒト抗ＣＤ８抗体の結合親和性および反応速度定数が、表面プラズモン共鳴によって決定され、測定はＢｉａｃｏｒｅ ４０００またはＴ２００機器で実施され；実施例６では、蛍光アッセイを使用して、抗ＣＤ８抗体のＣＤ８陽性Ｔ細胞およびカニクイザルＴ細胞に結合する能力を決定し；実施例７では、結合アッセイを使用して、抗ＣＤ８抗体の、ＣＤ８陽性Ｔ細胞におけるＩＦＮγ産生を減少させる能力を決定し；および実施例８では、結合アッセイを使用して、抗ＣＤ８抗体の、Ｔ細胞転写活性を変化させる能力を決定した。
別段の具体的な記載がない限り、本明細書で使用する場合、「抗体」という用語は、２つの免疫グロブリン重鎖および２つの免疫グロブリン軽鎖を含む抗体分子（すなわち、「完全抗体分子」）ならびにその抗原結合フラグメントを包含すると理解される。本明細書で使用される場合、抗体の「抗原結合部分」、抗体の「抗原結合フラグメント」などという用語は、抗原に特異的に結合して複合体を形成する、任意の天然に存在する、酵素的に得ることができる、合成の、または遺伝子的に操作されたポリペプチドまたは糖タンパク質を含む。本明細書で使用する場合、抗体の「抗原結合フラグメント」または「抗体フラグメント」という用語は、本明細書で使用する場合、ＣＤ８に特異的に結合する能力を保有する抗体の１つ以上のフラグメントを指す。抗体フラグメントは、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆｖフラグメント、ｄＡｂフラグメント、ＣＤＲを含有するフラグメント、または単離されたＣＤＲを含み得る。ある特定の実施形態では、「抗原結合フラグメント」という用語は、多重特異性抗原結合分子のポリペプチドまたはそのフラグメントを指す。このような実施形態では、「抗原結合フラグメント」という用語は、例えば、ＣＤ８に特異的に結合するＭＨＣクラスＩＩ分子を含む。抗体の抗原結合フラグメントは、例えば、抗体可変ドメインおよび（任意に）定常ドメインをコードするＤＮＡの操作および発現を伴うタンパク質消化技術または組換え遺伝子操作技術などの任意の適切な標準的技術を用いて、完全抗体分子から得られ得る。このようなＤＮＡは既知であり、かつ／または例えば、市販の供給源、ＤＮＡライブラリ（例えば、ファージ抗体ライブラリを含む）から容易に入手可能であるか、もしくは合成され得る。ＤＮＡを配列決定し、化学的にまたは分子生物学技法を使用することによって操作して、例えば、１つ以上の可変ドメインおよび／もしくは定常ドメインを好適な構成に配置するか、またはコドンを導入する、システイン残基を作成する、アミノ酸を修飾、付加、もしくは欠失させるなどが可能である。
抗体結合フラグメントの非限定例としては、（ｉ）Ｆａｂフラグメント、（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、（ｉｉｉ）Ｆｄフラグメント、（ｉｖ）Ｆｖフラグメント、（ｖ）一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子、（ｖｉ）ｄＡｂフラグメント、および（ｖｉｉ）抗体の超可変領域（例えば、ＣＤＲ３ペプチドなどの単離された相補性決定領域（ＣＤＲ））を模倣するアミノ酸残基、または拘束ＦＲ３‐ＣＤＲ３‐ＦＲ４ペプチドからなる最小認識単位が挙げられる。ドメイン特異的抗体、単一ドメイン抗体、ドメイン欠失した抗体、キメラ抗体、ＣＤＲ移植抗体、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、ナノボディ（例えば、一価ナノボディ、二価ナノボディなど）、小モジュラー免疫薬（ＳＭＩＰ）、およびサメ可変ＩｇＮＡＲドメインなどの他の操作された分子もまた、本明細書で使用される場合、「抗原結合フラグメント」という表現に包含される。
抗体の抗原結合フラグメントは、典型的に、少なくとも１つの可変ドメインを含む。可変ドメインは、任意のサイズまたはアミノ酸組成物であり得、概して、１つ以上のフレームワーク配列に隣接しているか、または１つ以上のフレームワーク配列とともにインフレームである、少なくとも１つのＣＤＲを含むであろう。ＶＬドメインと結合したＶＨドメインを有する抗原結合フラグメントにおいて、ＶＨドメインおよびＶＬドメインは、任意の好適な配置で互いに対して配置され得る。例えば、可変領域は二量体であり、ＶＨ－ＶＨ、ＶＨ－ＶＬまたはＶＬ－ＶＬ二量体を含有し得る。代替的に、抗体の抗原結合フラグメントは、モノマーＶＨまたはＶＬドメインを含有し得る。
ある特定の実施形態では、抗体の抗原結合フラグメントは、少なくとも１つの定常ドメインに共有結合された少なくとも１つの可変ドメインを含有し得る。本開示の抗体の抗原結合フラグメント内に見られ得る可変ドメインおよび定常ドメインの非限定的な例示的な構成には、（ｉ）ＶＨ－ＣＨ１、（ｉｉ）ＶＨ－ＣＨ２、（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＨ３、（ｉｖ）ＶＨ－ＣＨ１－ＣＨ２、（ｖ）ＶＨ－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３、（ｖｉ）ＶＨ－ＣＨ２－ＣＨ３、（ｖｉｉ）ＶＨ－ＣＬ、（ｖｉｉｉ）ＶＬ－ＣＨ１、（ｉｘ）ＶＬ－ＣＨ２、（ｘ）ＶＬ－ＣＨ３、（ｘｉ）ＶＬ－ＣＨ１－ＣＨ２、（ｘｉｉ）ＶＬ－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３、（ｘｉｉｉ）ＶＬ－ＣＨ２－ＣＨ３、および（ｘｉｖ）ＶＬ－ＣＬが含まれる。上に列挙される例示的な構成のうちのいずれかを含む可変ドメインおよび定常ドメインのいずれの構成において、可変ドメインおよび定常ドメインは、互いに直接連結され得るか、または完全もしくは部分的ヒンジもしくはリンカー領域によって連結され得る。ヒンジ領域は、単一のポリペプチド分子において隣接する可変ドメインおよび／または定常ドメイン間に可撓性または半可撓性の結合をもたらす少なくとも２つの（例えば、５、１０、１５、２０、４０、６０、またはそれ以上の）アミノ酸からなり得る。さらに、本開示の抗体の抗原結合フラグメントは、互いにおよび／または１つ以上のモノマーＶＨもしくはＶＬドメインとの（例えば、ジスルフィド結合（単数または複数）による）非共有会合で上に列挙される可変ドメイン構成および定常ドメイン構成のいずれかのホモ二量体またはヘテロ二量体（または他の多量体）を含み得る。
本開示の抗ＣＤ８抗体および抗体フラグメントは、説明された抗体のアミノ酸配列とは異なるがＣＤ８に結合する能力を保有するアミノ酸配列を有するタンパク質を包含する。このようなバリアント抗体および抗体フラグメントは、親配列と比較してアミノ酸の１つ以上の付加、欠失、または置換を含むが、説明された抗体の生物学的活性とは本質的に等価である生物学的活性を呈する。同様に、本開示の抗体コードＤＮＡ配列は、開示される配列と比較してヌクレオチドの１つ以上の付加、欠失、または置換を含むが、本開示の抗体または抗体フラグメントと本質的に生物学的に等価である抗体または抗体フラグメントをコードする配列を包含する。
２つの抗原結合タンパク質、または抗体は、例えば類似の実験条件下、同じモル用量で、単一用量または複数用量のいずれかで投与されたとき、吸収の速度および程度が著しい差異を示さない薬学的等価物または薬学的代替物である場合、生物学的等価物であるとみなされる。いくつかの抗体は、これらの吸収の程度は同等であるがこれらの吸収速度は同等ではない場合、等価物または薬学的代替物とみなされ、さらに、吸収速度のこのような差異が、意図的であり、ラベルに反映されており、例えば、慢性使用において有効身体薬物濃度の獲得に不可欠ではなく、研究した特定の薬剤製品にとって医学的に有意ではないとみなされるため、生物学的等価物であるとみなされる。
一実施形態では、２つの抗原結合タンパク質は、これらの安全性、純度、または効力において臨床的に意味のある差がない場合、生物学的に等価である。
一実施形態では、２つの抗原結合タンパク質は、参照製品と生物学的製品の間での１回以上の切り替えを行わない持続的療法と比較して、免疫原性の臨床的に有意な変化を含む有害作用のリスクの予想される上昇または有効性の減退が生じずに、対象がその様な切り替えを行うことができる場合、生物学的に等価である。
一実施形態では、２つの抗原結合タンパク質は、これらが両方とも、１つまたは複数の使用条件について、１つのまたは複数の共通の作用機序によって、このような機序が既知である程度まで作用する場合、生物学的に等価である。
生物学的等価性は、インビボおよび／またはインビトロの方法によって実証され得る。生物学的等価性測定法には、例えば、（ａ）抗体またはその代謝産物の濃度が血液、血漿、血清または他の生物学的流体中で時間の関数として測定される、ヒトまたは他の哺乳類におけるインビボでの試験、（ｂ）ヒトのインビボでの生物学的利用能データと相関し、このデータを合理的に予測しているインビトロ試験、（ｃ）抗体（またはその標的）の適切な急性薬理学的効果が時間の関数として測定される、ヒトまたは他の哺乳類におけるインビボ試験、および（ｄ）抗体の安全性、効能、または生物学的利用能もしくは生物学的等価性を確立する、十分に管理された臨床試験が含まれる。
本開示の抗体の生物学的に等価なバリアントは、例えば、残基もしくは配列の種々の置換を生じること、または生物活性に必要とされない末端もしくは内部の残基もしくは配列を欠失することによって構築され得る。例えば、生物学的活性にとって必須ではないシステイン残基は、再生の際の不必要または不正確な分子内ジスルフィド架橋の形成を防止するために、欠失または他のアミノ酸で置換することができる。他の文脈では、生物学的に等価の抗体には、抗体のグリコシル化特徴を修飾するアミノ酸変化、例えばグリコシル化を排除または除去する変異を含む、抗体バリアントが含まれ得る。
Ｆｃバリアントを含む抗ＣＤ８抗体
本開示のある特定の実施形態によると、抗ＣＤ８抗体は、例えば、中性ｐＨと比較して酸性ｐＨで、ＦｃＲｎ受容体への抗体結合を増強または減少させる１つ以上の変異を含むＦｃドメインを含む。例えば、本開示は、ＦｃドメインのＣＨ２またはＣＨ３領域に変異を含む抗ＣＤ８抗体を含み、変異（単数または複数）は、酸性環境において（例えば、ｐＨが約５．５～約６．０の範囲のエンドソームにおいて）ＦｃＲｎに対するＦｃドメインの親和性を増加させる。そのような突然変異は、動物に投与されたときに抗体の血清半減期の増加をもたらし得る。このようなＦｃ修飾の非限定的な例には、例えば、２５０位（例えば、ＥまたはＱ）、２５０位および４２８位（例えば、ＬまたはＦ）、２５２位（例えば、Ｌ／Ｙ／Ｆ／ＷまたはＴ）、２５４位（例えば、ＳまたはＴ）、および２５６位（例えば、Ｓ／Ｒ／Ｑ／Ｅ／ＤまたはＴ）における修飾、または４２８位および／もしくは４３３位（例えば、Ｈ／Ｌ／Ｒ／Ｓ／Ｐ／ＱまたはＫ）および／もしくは４３４位（例えば、Ａ、Ｗ、Ｈ、Ｆ、またはＹ［Ｎ４３４Ａ、Ｎ４３４Ｗ、Ｎ４３４Ｈ、Ｎ４３４Ｆ、またはＮ４３４Ｙ］）における修飾、あるいは２５０位および／もしくは４２８位における修飾、あるいは３０７位もしくは３０８位（例えば、３０８Ｆ、Ｖ３０８Ｆ）、および４３４位における修飾が含まれる。一実施形態では、修飾は、４２８Ｌ（例えば、Ｍ４２８Ｌ）および４３４Ｓ（例えば、Ｎ４３４Ｓ）修飾、４２８Ｌ、２５９Ｉ（例えば、Ｖ２５９Ｉ）、および３０８Ｆ（例えば、Ｖ３０８Ｆ）修飾、４３３Ｋ（例えば、Ｈ４３３Ｋ）および４３４（例えば、４３４Ｙ）修飾、２５２、２５４、および２５６（例えば、２５２Ｙ、２５４Ｔ、および２５６Ｅ）修飾、２５０Ｑおよび４２８Ｌ修飾（例えば、Ｔ２５０ＱおよびＭ４２８Ｌ）、ならびに３０７および／または３０８修飾（例えば、３０８Ｆおよび／または３０８Ｐ）を含む。さらに別の実施形態では、修飾は、２６５Ａ（例えば、Ｄ２６５Ａ）および／または２９７Ａ（例えば、Ｎ２９７Ａ）修飾を含む。
例えば、本開示は、以下からなる群から選択される変異の１つ以上の対または群を含むＦｃドメインを含む抗ＣＤ８抗体を含む：２５０Ｑおよび２４８Ｌ（例えば、Ｔ２５０ＱおよびＭ２４８Ｌ）；２５２Ｙ、２５４Ｔおよび２５６Ｅ（例えば、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４ＴおよびＴ２５６Ｅ）；４２８Ｌおよび４３４Ｓ（例えば、Ｍ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓ）；２５７Ｉおよび３１１Ｉ（例えば、Ｐ２５７ＩおよびＱ３１１Ｉ）；２５７Ｉおよび４３４Ｈ（例えば、Ｐ２５７ＩおよびＮ４３４Ｈ）；３７６Ｖおよび４３４Ｈ（例えば、Ｄ３７６ＶおよびＮ４３４Ｈ）；３０７Ａ、３８０Ａおよび４３４Ａ（例えば、Ｔ３０７Ａ、Ｅ３８０ＡおよびＮ４３４Ａ）；ならびに４３３Ｋおよび４３４Ｆ（例えば、Ｈ４３３ＫおよびＮ４３４Ｆ）。一実施形態では、本開示は、二量体安定化を促進するためにＩｇＧ４のヒンジ領域におけるＳ１０８Ｐ変異を含むＦｃドメインを含む抗ＣＤ８抗体を含む。前述のＦｃドメイン変異、および本明細書に開示される抗体可変ドメイン内の他の変異の全ての可能な組み合わせが、本開示の範囲内であることが企図される。
本開示は、キメラ重鎖定常（ＣＨ）領域を含む抗ＣＤ８抗体を含み、キメラＣＨ領域は、２つ以上の免疫グロブリンアイソタイプのＣＨ領域に由来するセグメントを含む。例えば、本開示の抗体は、ヒトＩｇＧ１分子、ヒトＩｇＧ２分子またはヒトＩｇＧ４分子に由来するＣＨ３ドメインの一部または全部と組み合わせて、ヒトＩｇＧ１分子、ヒトＩｇＧ２分子またはヒトＩｇＧ４分子に由来するＣＨ２ドメインの一部または全部を含むキメラＣＨ領域を含み得る。ある特定の実施形態によると、本開示の抗体は、キメラヒンジ領域を有するキメラＣＨ領域を含む。例えば、キメラヒンジは、ヒトＩｇＧ１ヒンジ領域、ヒトＩｇＧ２ヒンジ領域またはヒトＩｇＧ４ヒンジ領域に由来する「下部ヒンジ」配列（ＥＵ番号付けによる位置２２８～２３６のアミノ酸残基）と組み合わされた、ヒトＩｇＧ１ヒンジ領域、ヒトＩｇＧ２ヒンジ領域またはヒトＩｇＧ４ヒンジ領域に由来する「上部ヒンジ」アミノ酸配列（ＥＵ番号付けによる位置２１６～２２７のアミノ酸残基）を含むことができる。ある特定の実施形態によると、キメラヒンジ領域は、ヒトＩｇＧ１上部ヒンジまたはヒトＩｇＧ４上部ヒンジに由来するアミノ酸残基と、ヒトＩｇＧ２下部ヒンジに由来するアミノ酸残基とを含む。本明細書に説明されるキメラＣＨ領域を含む抗体は、ある特定の実施形態では、抗体の治療特性または薬物動態学的特性に負に影響を与えることなく修飾Ｆｃエフェクター機能を呈し得る。（例えば、その開示が全体として参照により本明細書により組み込まれる米国特許出願公開第２０１４０２４３５０４号を参照されたい）。
Ｂ．陽電子放出体およびキレート部分
好適な陽電子放出体としては、キレート部分と安定した複合体を形成し、免疫ＰＥＴ撮像の目的に適切な物理的半減期を有するものが挙げられるが、これらに限定されない。例示的な陽電子放出体には、８９Ｚｒ、６８Ｇａ、６４Ｃｕ、４４Ｓｃ、および８６Ｙが挙げられるが、これらに限定されない。適切な陽電子放出体にはまた、７６Ｂｒならびに１２４Ｉ、および補欠分子族、例えば、１８Ｆによって導入されるものが挙げられるが、これらに限定されないＣＤ８結合タンパク質と直接結合するものも含まれる。
本明細書に記載のキレート部分は、ＣＤ８結合タンパク質例えば、抗ＣＤ８抗体に共有結合された化学的部分であり、陽電子放出体とキレート化することができる、すなわち陽電子放出体と反応して、配位キレート錯体を形成することができる部分を含む。適切な部分には、特定の金属の効率的な負荷を可能にし、インビボ診断的用途に、例えば、免疫ＰＥＴ撮像に、十分に安定した金属キレート剤錯体を形成するものが含まれる。例示的キレート部分には、陽電子放出体の解離および骨ミネラル、血漿タンパク質、ならびに／または骨髄沈着における蓄積を、診断用途に適した程度に最小化するものが含まれる。
キレート部分の例としては、陽電子放射体８９Ｚｒ、６８Ｇａ、６４Ｃｕ、４４Ｓｃ、および８６Ｙと安定な錯体を形成するものが挙げられるが、これらに限定されない。例示的キレート部分には、それらの全体が参照により組み込まれている、Ｎａｔｕｒｅ Ｐｒｏｔｏｃｏｌ、５（４）：７３９，２０１０；Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．，２６（１２）：２５７９（２０１５）；Ｃｈｅｍ Ｃｏｍｍｕｎ（Ｃａｍｂ）、５１（１２）：２３０１（２０１５）；Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，１２：２１４２（２０１５）；Ｍｏｌ．Ｉｍａｇｉｎｇ Ｂｉｏｌ．，１８：３４４（２０１５）；Ｅｕｒ．Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｍｏｌ．Ｉｍａｇｉｎｇ，３７：２５０（２０１０）；Ｅｕｒ．Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｍｏｌ．Ｉｍａｇｉｎｇ（２０１６）．ｄｏｉ：１０．１００７／ｓ００２５９－０１６－３４９９－ｘ；Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．，２６（１２）：２５７９（２０１５）；ＷＯ２０１５／１４０２１２Ａ１；および米国特許第５，６３９，８７９号に記載されるものが挙げられるが、これに限定されない。
例示的キレート部分には、デスフェリオキサミン（ＤＦＯ）、１，４，７，１０－四酢酸（ＤＯＴＡ）、ジエチレンエトリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、（１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－テトラ（メチレンホスホン）酸（ＤＯＴＰ）、１Ｒ，４Ｒ，７Ｒ，１０Ｒ）－α’α”α’”－テトラメチル－１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－四酢酸（ＤＯＴＭＡ）、１，４，８，１１－テトラアザシクロテトラデカン－１，４，８，１１－四酢酸（ＴＥＴＡ）、Ｈ４オクテーパ、Ｈ６ホスパ、Ｈ２デドパ、Ｈ５デカパ、Ｈ２アザパ、ＨＯＰＯ、ＤＯ２Ａ、１，４，７，１０－テトラキス（カルバモイルメチル）－１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン（ＤＯＴＡＭ）、１，４，７－トリアザシクロノナン－Ｎ，Ｎ’，Ｎ”－三酢酸（ＮＯＴＡ）、１，４，７，１０－テトラキス（カルバモイルメチル）－１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン（ＤＯＴＡＭ）、１，４，８，１１－テトラアザシクロ［６．６．２］ヘキサデカン－４，１１－二酢酸（ＣＢ－ＴＥ２Ａ）、１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン（Ｃｙｃｌｅｎ）、１，４，８，１１－テトラアザシクロドデカン（Ｃｙｃｌａｍ）、オクタデンテートキレート剤、ヘキサデンテートキレート剤、ホスホネートベースのキレート剤、大環状キレート剤、大環状テレフタルアミド配位子を含むキレート剤、二官能性キレート剤、フサリニンＣならびにフサリニンＣ誘導体キレート剤、トリアセチルフサリニンＣ（ＴＡＦＣ）、フェリオキサミンＥ（ＦＯＸＥ）、フェリオキサミンＢ（ＦＯＸＢ）、フェリクロームＡ（ＦＣＨＡ）なども挙げられるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、キレート部分は、ＣＤ８結合タンパク質、例えば、抗体またはその抗原結合フラグメントに、キレート部分のキレート部を結合タンパク質に共有結合しているリンカー部分を介して、共有結合する。いくつかの実施形態では、これらのリンカー部分は、ＣＤ８結合タンパク質の反応部分、例えば、抗体のシステインまたはリジンと、例えば、ｐ－イソチオシアナトベニル基および下記の結合方法に提供される反応部分を含む、キレート剤に結合した反応部分との間の反応から形成される。加えて、こうしたリンカー部分は、キレート部分とＣＤ８結合タンパク質との間の極性、溶解度特性、立体相互作用、剛性、および／または長さを調節する目的で使用される化学基を任意に含む。
Ｃ．放射性標識された抗ＣＤ８コンジュゲートの調製
放射性標識された抗ＣＤ８タンパク質コンジュゲートは、（１）ＣＤ８結合タンパク質、例えば、抗体を、陽電子放出体キレート剤と、ＣＤ８結合タンパク質の所望のコンジュゲーション部位に対して反応性の部分とを含む分子と反応させることと、（２）所望の陽電子放出体を装填させることと、によって調製することができる。
適切なコンジュゲーション部位には、限定されないが、リシンおよびシステインが挙げられ、その両方が例えば、天然または操作されたものであり得、例えば、抗体の重鎖または軽鎖上に存在することができる。システインコンジュゲーション部位には、抗体ジスルフィド結合の変異、挿入、または還元から得られるものが含まれるが、これらに限定されない。システイン操作された抗体を作製する方法には、ＷＯ２０１１／０５６９８３に開示されているものが含まれるが、これらに限定されない。部位特異的結合方法はまた、抗体の特異的部位への結合反応を指示するために、所望の化学量論を達成するために、および／または所望のキレート剤対抗体比を達成するために使用することもできる。このようなコンジュゲーション方法は当業者に既知であり、グルタミンコンジュゲーション、Ｑ２９５コンジュゲーション、およびトランスグルタミナーゼ媒介コンジュゲーション、ならびにその全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，３６：１００（２０１６）に記載されているものが挙げられるが、これらに限定されない。所望のコンジュゲーション部位に反応性の適切な部分は一般的に、ＣＤ８結合タンパク質、例えば、抗体と、陽電子放出体キレート剤との効率的かつ容易な結合を可能にする。リジンおよびシステイン部位に対して反応性の部分は、当業者に既知である求電子基を含む。ある特定の態様では、所望のコンジュゲーション部位がリジンである場合、反応性部分はイソチオシアネート、例えば、ｐ－イソチオシアナトベニル基または反応性エステルである。ある特定の態様では、所望のコンジュゲーション部位がシステインである場合、反応性部分はマレイミドである。
キレート剤がデスフェリオキサミン（ＤＦＯ）である場合、好適な反応性部分としては、イソチオシアナトベンジル基、ｎ－ヒドロキシスクリニイミドエステル、２，３，５，６テトラフルオロフェノールエステル、ｎ－スクリンイミダイル－Ｓ－アセチルチオアセテート、およびその全体が参照により本明細書に組み込まれる、ＢｉｏＭｅｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｖｏｌ ２０１４，Ａｒｔｉｃｌｅ ＩＤ ２０３６０１に記載されるものが挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、ＣＤ８結合タンパク質は抗体であり、陽電子放出体キレート剤とコンジュゲーション部位に対して反応性の部分とを含む分子は、ｐ－イソチオシアナトベンジル－デスフェリオキサミン（ｐ－ＳＣＮ－Ｂｎ－ＤＦＯ）：
Figure 0007304846000008
 である。
陽電子放出体の装填は、ＣＤ８結合タンパク質キレート剤コンジュゲートを、陽電子放出体と、該陽電子放出体のキレート剤への配位を可能にするのに十分な時間、インキュベートすることによって、例えば、本明細書に提供される実施例に記載された方法、または実質的に類似した方法を実施することによって、達成される。
Ｄ．コンジュゲートの例示的実施形態
ヒトＣＤ８に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントと、陽電子放出体と、を含む、放射性標識された抗体コンジュゲートが、本開示に含まれる。また、ヒトＣＤ８に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントと、キレート部分と、陽電子放出体と、を含む、放射性標識された抗体コンジュゲートも本開示に含まれる。
いくつかの実施形態では、キレート部分は、８９Ｚｒと錯体を形成することができるキレート剤を含む。ある特定の実施形態では、キレート部分は、デスフェリオキサミンを含む。ある特定の実施形態では、キレート部分は、ｐ－イソチオシアナトベンジル－デスフェリオキサミンである。
いくつかの実施形態では、陽電子放出体は、８９Ｚｒである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ８抗体の１．０％未満は、陽電子放出体とコンジュゲートされており、抗ＣＤ８抗体の０．９％未満は、陽電子放出体とコンジュゲートされており、抗ＣＤ８抗体の０．８％未満は、陽電子放出体とコンジュゲートされており、抗ＣＤ８抗体の０．７％未満は、陽電子放出体とコンジュゲートされており、抗ＣＤ８抗体の０．６％未満は、陽電子放出体とコンジュゲートされており、抗ＣＤ８抗体の０．５％未満は、陽電子放出体とコンジュゲートされており、抗ＣＤ８抗体の０．４％未満は、陽電子放出体とコンジュゲートされており、抗ＣＤ８抗体の０．３％未満は、陽電子放出体とコンジュゲートされており、抗ＣＤ８抗体の０．２％未満は、陽電子放出体とコンジュゲートされており、または抗ＣＤ８抗体の０．１％未満は、陽電子放出体とコンジュゲートされている。
いくつかの実施形態では、コンジュゲートのキレート部分対抗体比は、１．０～２．０である。本明細書で使用される場合、「キレート部分対抗体比」は、平均キレート部分対抗体比であり、抗体あたりのキレート負荷の尺度である。この比は、「ＤＡＲ」、すなわち、抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）についての抗体当たりの薬物負荷を測定するために、当業者によって使用されている薬物－抗体比と類似しており、ｉＰＥＴ撮像に関する本明細書に記載のコンジュゲートの場合、キレート部分対抗体比は、本明細書に記載される方法およびＤＡＲの決定のための当該技術分野において既知の他の方法、例えば、Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｙ－Ｄｒｕｇ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ，Ｔｈｅ ２１ｓｔ Ｃｅｎｔｕｒｙ Ｍａｇｉｃ Ｂｕｌｌｅｔｓ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ（２０１５）に記載されているものを使用して確認することができる。いくつかの実施形態では、キレート部分対抗体比は、約１．７である。いくつかの実施形態では、キレート部分対抗体比は、１．０～２．０である。いくつかの実施形態では、キレート部分対抗体比は、約１．７である。
特定の実施形態では、キレート部分は、ｐ－イソチオシアナトベンジル－デスフェラリオキサミンであり、陽電子放出体は、８９Ｚｒである。別の特定の実施形態では、キレート部分は、ｐ－イソチオシアナトベンジル－デスフェラリオキサミンであり、陽電子放出体は、８９Ｚｒであり、コンジュゲートのキレート部分対抗体比は、１～２である。
いくつかの実施形態では、ＣＤ８に結合する抗原結合タンパク質が本明細書に提供され、ＣＤ８に結合する該抗原結合タンパク質は、以下の構造を有する１つ以上の部分に共有結合されており、
－Ｌ－ＭＺ
式中、Ｌは、キレート部分であり、Ｍは、陽電子放出体であり、ｚは、各出現において独立して、０または１であり、ｚのうちの少なくとも１つは１である。特定の実施形態では、放射性標識された抗原結合タンパク質は、式（Ｉ）の化合物であり、
Ｍ－Ｌ－Ａ－［Ｌ－ＭＺ］ｋ
（Ｉ）
Ａは、ＣＤ８に結合するタンパク質であり、Ｌは、キレート部分であり、Ｍは、陽陽電子放出体であり、ｚは、０または１であり、ｋは、０～３０の整数である。いくつかの実施形態では、ｋは、１である。いくつかの実施形態では、ｋは、２である。
いくつかの実施形態では、Ｌは、
Figure 0007304846000009
 である。
いくつかの実施形態では、Ｍは、８９Ｚｒである。
いくつかの実施形態では、ｋは、１～２の整数である。いくつかの実施形態では、ｋは、１である。いくつかの実施形態では、ｋは、２である。
いくつかの実施形態では、－Ｌ－Ｍは、
Figure 0007304846000010
 である。
また、本開示では、式（ＩＩＩ）の化合物を、
Figure 0007304846000011
 （ＩＩＩ）
８９Ｚｒと接触させることを含む、放射性標識された抗体コンジュゲートを合成する方法も含まれ、式中、Ａは、ＣＤ８に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントである。ある特定の実施形態では、式（ＩＩＩ）の化合物は、ＣＤ８に結合する抗体、またはその抗原結合フラグメントを、ｐ－ＳＣＮ－Ｂｎ－ＤＦＯと接触させることによって合成される。
式（ＩＩＩ）の化合物と８９Ｚｒとの間の反応の生成物も本明細書に提供されている。
式（ＩＩＩ）の化合物が本明細書に提供されており、
Figure 0007304846000012
 式中、Ａは、ＣＤ８に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、ｋは、１～３０の整数である。いくつかの実施形態では、ｋは、１または２である。
（ｉ）ＣＤ８に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントと、（ｉｉ）１つ以上のキレート部分と、を含む、抗体コンジュゲートが本明細書に提供されている。
いくつかの実施形態では、キレート部分は、
Figure 0007304846000013
 を含む。
Figure 0007304846000014
 は、抗体またはその抗原結合フラグメントへの共有結合である。
いくつかの態様では、抗体コンジュゲートは、約１．０～約２．０のキレート部分対抗体比を有する。いくつかの耐容では、抗体コンジュゲートは、約１．７のキレート部分対抗体比を有する。
いくつかの実施形態では、以下の構造：
Ａ－Ｌｋ
を有するコンジュゲートを含む組成物が本明細書に提供されており、
式中、Ａは、ＣＤ８に結合するタンパク質であり、Ｌは、キレート部分であり、ｋは、１～３０の整数であり、このコンジュゲートは、臨床的なＰＥＴ撮像に好適な比放射能を提供するのに十分な量の陽電子放出体でキレート化されている。いくつかの実施形態では、キレート化陽電子放出体の量は、ＣＤ８に結合するタンパク質の１～５０ｍｇあたり約１～約５０ｍＣｉの比放射能を提供するのに十分な量である。
いくつかの実施形態では、キレート化陽電子放出体の量は、ＣＤ８に結合するタンパク質の１～５０ｍｇあたり、最大５０ｍＣｉ、最大４５ｍＣｉ、最大４０ｍＣｉ、最大３５ｍＣｉ、最大３０ｍＣｉ、最大２５ｍＣｉ、または最大１０ｍＣｉの、例えば約５～約５０ｍＣｉ、約１０～約４０ｍＣｉ、約１５～約３０ｍＣｉ、約７～約２５ｍＣｉ、約２０～約５０ｍＣｉ、または約５～約１０ｍＣｉの範囲の比放射能を提供するのに十分な量である。
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、表面プラズモン共鳴アッセイで測定したとき、約３．５×１０－８Ｍ未満の結合解離平衡定数（ＫＤ）でヒトＣＤ８に結合する。
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、表面プラズモン共鳴アッセイにおいて、約３．５×１０－８未満のＫＤでヒトＣＤ８αに結合する。
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、表面プラズモン共鳴アッセイで測定されるとき、約３．３×１０－８Ｍ未満のＫＤでヒトＣＤ８に結合する。
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＨＣＶＲの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む参照抗体とヒトＣＤ８への結合を競合し、ＨＣＶＲは配列番号２のアミノ酸配列と、ＬＣＶＲのＣＤＲとを有し、ＬＣＶＲは、配列番号１０のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、参照抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２／１０のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む。
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合性フラグメントは、ＣＤ８のＭＨＣクラスＩへの結合を．阻害する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、活性化ＣＤ８Ｔ細胞におけるＩＦＮγ産生を阻害する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合性フラグメントは、活性化Ｔ細胞における転写因子アクチベータータンパク質（ＡＰ－１）を阻害する。
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＨＣＶＲの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、ＨＣＶＲは配列番号２のアミノ酸配列と、ＬＣＶＲのＣＤＲとを有し、ＬＣＶＲは、配列番号１０のアミノ酸配列を有する。ある特定の実施形態では、単離された抗体は、配列番号２／１０のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む。
いくつかの実施形態では、抗体は、ヒトＣＤ８に特異的に結合するヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントであり、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含む。
いくつかの実施形態では、抗体は、ヒトＣＤ８に特異的に結合するヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントであり、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１０のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む。
いくつかの実施形態では、抗体は、ヒトＣＤ８に特異的に結合するヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントであり、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲと、（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲと、を含む。
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２の重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）内に含まれる３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）と、配列番号１０の軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）内に含まれる３つの軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）と、を含む。
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号４／６／８／１２／１４／１６の６つのＣＤＲアミノ酸配列の組み合わせを含む。
いくつかの実施形態では、抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号２／１０のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む。
ＩＶ．放射性標識された免疫コンジュゲートを使用する方法
ある特定の態様では、本開示は、本開示の放射性標識された抗体コンジュゲートを使用する診断および治療方法を提供する。
一態様によれば、本開示は、組織内のＣＤ８を検出する方法を提供し、本方法は、本明細書に提供される放射性標識された抗ＣＤ８抗体コンジュゲートを組織に投与することと、陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）撮像によって、ＣＤ８発現を可視化することと、を含む。ある特定の実施形態では、組織は、細胞または細胞株を含む。ある特定の実施形態では、組織は対象の身体内に存在し、この対象は哺乳類である。ある特定の実施形態では、対象はヒトの対象である。ある特定の実施形態では、対象は、癌、感染症、自己免疫疾患、および炎症性疾患からなる群から選択される疾患または障害を有する。一実施形態では、対象は癌を有する。ある特定の実施形態では、感染症は、例えば、リケッチア細菌、桿菌、クレブシエラ、髄膜炎菌ならびにゴノコッカス、プロテウス、肺炎球菌、シュードモナス、ストレプトコッカス、スタフィロコッカス、セラチア、ボレリア、炭疽菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒｉｃｉｓ）、クラミジア、クロストリジウム、ジフテリア菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ）、レジネラ、ライ菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｅｐｒａｅ）、マイコバクテリウム・レプロマトシス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｅｐｒｏｍａｔｏｓｉｓ）、サルモネラ、コレラ菌（Ｖｉｂｒｉｏ ｃｈｏｌｅｒａｅ）、およびビブリオコーリエ、およびペスト菌（Ｙｅｒｓｉｎｉａ ｐｅｓｔｉｓ）によって引き起こされる細菌感染である。ある特定の実施形態では、感染症は、例えば、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、ヘルペスウイルス（例えば、ＶＺＶ、ＨＳＶ－Ｉ、ＨＡＶ－６、ＨＳＶ－ＩＩ、ＣＭＶ、およびエプスタイン・バールウイルス）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）、およびサル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）によって引き起こされるウイルス感染である。ある特定の実施形態では、感染症は、例えば、エントアメーバの種（Ｅｎｔａｍｏｅｂａ ｓｐｐ．）、蟯虫（Ｅｎｔｅｒｏｂｉｕｓ ｖｅｒｍｉｃｕｌａｒｉｓ）、リーシュマニアの種（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ ｓｐｐ．）、トキソカラの種（Ｔｏｘｏｃａｒａ ｓｐｐ．）、マラリア原虫の種（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｓｐｐ．）、住血吸虫の種（Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ ｓｐｐ．）、有鉤条虫（Ｔａｅｎｉａ ｓｏｌｉｕｍ）、トキソプラズマ原虫（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉｉ）、およびトリパノソーマクルージ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ ｃｒｕｚｉ）によって引き起こされる寄生虫感染である。ある特定の実施形態では、感染症は、例えば、アスペルギルス属（フミガーツス、ニガーなど）、ブラストマイセス・デルマチチジス（Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ）、カンジダ属（アルビカンス、クルーセイ、グラブラータ、トロピカリスなど）、コクシジオイデス・イミチス（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｉｍｍｉｔｉｓ）、クリプトコッカス・ネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）、ケカビ属（ムコール、アブシジア、リゾプスなど）、ヒストプラズマ・カプスアツム（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）、パラコクシジオイデス・ブラジリエンシス（Ｐａｒａｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ）、およびスポロトリックス・シェンキィ（Ｓｐｏｒｏｔｈｒｉｘ ｓｃｈｅｎｋｉｉ）によって引き起こされる真菌感染である。
一態様によれば、本開示は、ＣＤ８を発現する組織を撮像する方法を提供し、本方法は、本開示の放射性標識された抗ＣＤ８抗体コンジュゲートを組織に投与することと、陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）撮像によって、ＣＤ８発現を可視化することと、を含む。一実施形態では、組織は、腫瘍内に含まれる。一実施形態では、組織は、腫瘍細胞培養または腫瘍細胞株内に含まれる。一実施形態では、組織は、対象の腫瘍病変内に含まれる。一実施形態では、組織は、組織内の腫瘍内リンパ球である。一実施形態では、組織は、ＣＤ８発現細胞を含む。
一態様によれば、本開示は、療法に対する応答を測定する方法を提供し、療法に対する応答は、ベースラインレベルに対するＣＤ８陽性Ｔ細胞の増加に相関する。この態様による方法は、本明細書に提供される放射性標識された抗体コンジュゲートを、それを必要とする対象に投与することと、陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）撮像によって、ＣＤ８発現を可視化することと、を含む。ある特定の実施形態では、ＣＤ８陽性Ｔ細胞は、対象の腫瘍内に存在する。ある特定の実施形態では、ＣＤ８発現の増加は、腫瘍における炎症の増加に相関する。ある特定の実施形態では、炎症は、対象の感染組織内に存在する。ある特定の実施形態では、ＣＤ８発現の減少は、感染組織の炎症の減少に相関する。
一態様によれば、本開示は、療法に対する応答を測定する方法を提供し、療法に対する応答は、ベースラインレベルに対するＣＤ８陽性Ｔ細胞の増加に相関する。この態様による方法は、（ｉ）本明細書に提供される放射性標識された抗体コンジュゲートを、それを必要とする対象に投与して、陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）撮像によって、ＣＤ８発現を可視化することと、（ｉｉ）療法の開始後、工程（ｉ）を１回以上繰り返すことと、を含む。ある特定の実施形態では、ＣＤ８陽性Ｔ細胞は、対象の組織内に存在する。ある特定の実施形態では、ＣＤ８発現の増加は、組織の炎症の増加に相関する。ある特定の実施形態では、ＣＤ８発現の減少は、組織の炎症の減少に相関する。ある特定の実施形態では、工程（ｉ）で可視化されたＣＤ８発現は、工程（ｉｉ）で可視化されたＣＤ８発現と比較される。
一態様によれば、本開示は、抗腫瘍療法に対する応答を予測する方法を提供する。本方法は、放射性標識された抗ＣＤ８抗体コンジュゲートを、それを必要とする対象に投与することと、対象の固形腫瘍がＣＤ８陽性Ｔ細胞を含むと決定することと、を含む。対象の腫瘍がＣＤ８陽性Ｔ細胞で浸潤されているか、または免疫学的に「熱い」場合、対象は抗腫瘍療法に対して応答する可能性が高い。ＣＤ８陽性Ｔ細胞の存在は、生存のための応答マーカーまたは予後マーカーの予測マーカーとすることができる。例えば、ＣＤ８陽性細胞によるベースライン腫瘍浸潤は、***、頭／頸部、および卵巣癌の生存の予後である。さらに、抗ＰＤ－１療法または抗ＰＤＬ－１療法中に検出されたＣＤ８陽性細胞の腫瘍浸潤は、処置に対する応答の予測マーカーである。
一態様によれば、本開示は、腫瘍を有する対象が抗腫瘍療法に適しているかどうかを決定するための方法を提供し、本方法は、本開示の放射性標識された抗体コンジュゲートを投与することと、ＰＥＴ撮像によって、投与された放射性標識された抗体コンジュゲートを腫瘍内に局在化させることと、を含み、腫瘍内における放射性標識された抗体コンジュゲートの存在は、対象が抗腫瘍療法に適しているものと確認する。
一態様によれば、本開示は、腫瘍を有する対象が、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１シグナル伝達軸の阻害剤を含む抗腫瘍療法に適しているかどうかを確認するための方法を提供し、本方法は、本開示の放射性標識された抗体コンジュゲートを対象に投与することと、ＰＥＴ撮像によって、投与された放射性標識された抗体コンジュゲートを腫瘍内に局在化させることと、を含み、腫瘍内における放射性標識された抗体コンジュゲートの存在は、対象が抗腫瘍療法に適しているものと確認する。いくつかの実施形態では、対象には、放射性標識された抗ＰＤ－１コンジュゲートがさらに投与され、ＰＥＴ撮像によって、投与された放射性標識された抗ＰＤ－１コンジュゲートは腫瘍内に局在化され、腫瘍における放射性標識された抗体コンジュゲートの存在は、対象がＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１シグナル伝達軸の阻害剤を含む抗腫瘍療法に適していると確認する。
本開示の別の態様は、経時的な腫瘍におけるＴ細胞の存在および／または浸潤を監視するための方法を提供する。いくつかの実施形態では、方法は、（ａ）腫瘍を有する対象に、第１の時点で放射性標識された抗ＣＤ８抗体コンジュゲートを投与し、腫瘍におけるＣＤ８陽性Ｔ細胞の存在を決定することと、（ｂ）抗腫瘍療法の１回以上の用量を対象に投与することと、（ｃ）腫瘍療法を施した１～２０週後に、第２の時点で放射性標識された抗ＣＤ８抗体を対象に投与し、腫瘍におけるＣＤ８陽性Ｔ細胞の存在を決定することと、を含む。腫瘍におけるＴ細胞の存在は、抗腫瘍療法に対する陽性応答を示す。工程（ｃ）は、抗腫瘍療法による処置過程にわたって繰り返すことができる。第１の時点は、（ｂ）の前に起凝り得るか、または（ｂ）後に起こり得る。
腫瘍におけるＴ細胞の存在を決定することは、当業者に既知の方法によってＴ細胞のレベルを定量化することを伴う。いくつかの態様では、ＣＤ８陽性Ｔ細胞のベースラインレベルは、抗腫瘍療法の過程後または過程中に測定されたＣＤ８陽性Ｔ細胞のレベルと比較される。ベースラインに対するＣＤ８陽性Ｔ細胞レベルの維持、または経時的なＣＤ８陽性Ｔ細胞の増加は、抗腫瘍療法に対する陽性応答を示す。
腫瘍におけるＴ細胞の存在を決定することは、腫瘍がＴ細胞陽性であるか、または腫瘍がＴ細胞陰性であるという単純な決定を伴い得る。
抗腫瘍療法に対する対象の応答を予測するための方法も本明細書に提供されており、本方法は、腫瘍がＣＤ８陽性であるかどうかを決定することを含み、腫瘍がＣＤ８陽性である場合、すなわち、腫瘍がＴ細胞を含有する場合、対象の抗腫瘍療法の陽性応答を予測する。ある特定の実施形態では、本開示の放射性標識された抗ＣＤ８抗体コンジュゲートを投与し、ＰＥＴ撮像によって、放射性標識された抗体コンジュゲートを腫瘍内に局在化させる（腫瘍における放射性標識された抗体コンジュゲートの存在は、腫瘍がＣＤ８陽性であることを示す）ことによって、腫瘍は陽性であると決定される。いくつかの実施形態では、抗腫瘍療法は、チェックポイント阻害剤療法である。いくつかの実施形態では、抗腫瘍療法は、ＰＤ－１阻害剤（例えば、ＲＥＧＮ２８１０、ＢＧＢ－Ａ３１７、ニボルマブ、ピジリズマブ、およびペンブロリズマブ）、ＰＤ－Ｌ１阻害剤（例えば、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、ＭＤＸ－１１０５、およびＲＥＧＮ３５０４、ならびに特許出願公開第ＵＳ２０１５－０２０３５８０号に開示されるもの）、ＣＴＬＡ－４阻害剤（例えば、イピリムマブ）、ＴＩＭ３阻害剤、ＢＴＬＡ阻害剤、ＴＩＧＩＴ阻害剤、ＣＤ４７阻害剤、ＧＩＴＲ阻害剤、ＬＡＧ３阻害剤、別のＴ細胞共阻害剤もしくはリガンドの拮抗薬（例えば、ＣＤ－２８、２Ｂ４、ＬＹ１０８、ＬＡＩＲ１、ＩＣＯＳ、ＣＤ１６０またはＶＩＳＴＡへの抗体）、インドールアミン－２，３－ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）拮抗薬［例えば、アフリベルセプトもしくは米国特許第７，０８７，４１１号に記載されるＶＥＧＦ阻害融合タンパク質などの「ＶＥＧＦ－トラップ」、または抗ＶＥＧＦ抗体もしくはその抗原結合フラグメント（例えば、ベバシズマブ、またはラニビズマブ）またはＶＥＧＦ受容体の小分子キナーゼ阻害剤（例えば、スニチニブ、ソラフェニブ、またはパゾパニブ）］、Ａｎｇ２阻害剤（例えば、ネスアクマブ）、トランスフォーミング増殖因子ベータ（ＴＧＦβ）阻害剤、表皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）阻害剤（例えば、エルロチニブ、セツキシマブ）、ＣＤ２０阻害剤（例えば、リツキシマブなどの抗ＣＤ２０抗体）、腫瘍特異抗原に対する抗体［例えば、ＣＡ９、ＣＡ１２５、黒色腫関連抗原３（ＭＡＧＥ３）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ビメンチン、腫瘍－Ｍ２－ＰＫ、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、ムチン－１、ＭＡＲＴ－１、およびＣＡ１９－９］、ワクチン（例えば、カルメット・ゲラン桿菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ Ｃａｌｍｅｔｔｅ－Ｇｕｅｒｉｎ）、癌ワクチン）、抗原提示を増加させるアジュバント（例えば、顆粒球－マクロファージコロニー刺激因子）、二特異性抗体（例えば、ＣＤ３×ＣＤ２０二重特異性抗体、またはＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体）、細胞毒素、化学療法剤（例えば、ダカルバジン、テモゾロミド、シクロホスファミド、ドセタキセル、ドキソルビシン、ダウノルビシン、シスプラチン、カルボプラチン、ゲムシタビン、メトトレキサート、ミトキサントロン、オキサリプラチン、パクリタキセル、およびビンクリスチン）、シクロホスファミド、放射線療法、ＩＬ－６Ｒ阻害剤（例えば、サリルマブ）、ＩＬ－４Ｒ阻害剤（例えば、デュピルマブ）、ＩＬ－１０阻害剤、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－２１、およびＩＬ－１５などのサイトカイン、および抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）（例えば、抗ＣＤ１９－ＤＭ４ ＡＤＣ、および抗ＤＳ６－ＤＭ４ ＡＤＣ）から選択される。
一態様によれば、本開示は、固形腫瘍を有する対象の抗腫瘍療法に対する応答を予測するための方法を提供し、本方法は、腫瘍がＣＤ８陽性であるかどうかを決定することを含み、腫瘍がＣＤ８陽性である場合に、対象の陽性応答が予測される。ある特定の実施形態では、本開示の放射性標識された抗体コンジュゲートを投与し、ＰＥＴ撮像によって、放射性標識された抗体コンジュゲートを腫瘍内に局在化させる（腫瘍における放射性標識された抗体コンジュゲートの存在は、腫瘍がＣＤ８陽性であることを示す）ことによって、腫瘍は陽性であると決定される。
一態様によれば、本開示は、対象のＣＤ８陽性腫瘍を検出するための方法を提供する。本態様による方法は、本開示の放射性標識された抗体コンジュゲートを対象に投与することと、ＰＥＴ撮像により放射性標識された抗体コンジュゲートの局在化を決定することと、を含み、腫瘍における放射性標識された抗体コンジュゲートの存在は、腫瘍がＣＤ８陽性であることを示す。
放射性標識された抗ＣＤ８抗体コンジュゲートを対象に投与して、固形腫瘍におけるＣＤ８陽性Ｔ細胞の存在を決定することを含む、抗腫瘍療法に対する陽性応答を予測する方法が、本明細書に提供される。ＣＤ８陽性Ｔ細胞の存在は、抗腫瘍療法に対する陽性応答を予測する。
（ａ）対象に抗腫瘍療法の１回以上の用量を投与することと、（ｂ）抗腫瘍療法を施した１～２０週後に、対象に放射性標識された抗ＣＤ８抗体コンジュゲートを投与して、固形腫瘍におけるＣＤ８陽性細胞の存在を決定することと、を含む、対象の抗腫瘍療法に対する陽性応答を監視するための方法が、本明細書に提供される。ＣＤ８陽性Ｔ細胞の存在は、抗腫瘍療法に対する陽性応答を示す。
固形腫瘍を有する対象における抗腫瘍療法の成功もしくは有効性を予測または監視するための方法が、本明細書に提供されており、本方法は、（ａ）腫瘍におけるＣＤ８陽性細胞のレベルを決定することと、（ｂ）ＣＤ８陽性細胞のレベルを成功した抗腫瘍療法に相関させることと、を含む。ある特定の閾値を超える高レベルが、成功した抗腫瘍療法の予測または指標である。
本明細書で使用される場合、「それを必要とする対象」という表現は、癌の１つ以上の症状または徴候を示すヒトまたは非ヒト哺乳動物、および／または固形腫瘍を含む癌と診断され、かつ癌の処置を必要とするヒトまたは非ヒト哺乳動物を意味する。多くの実施形態では、「対象」という用語は、用語「患者」と互換的に使用されてもよい。例えば、ヒト対象は、原発性腫瘍または転移性腫瘍を有し、および／もしくは、原因不明の体重減少、全身の衰弱、持続的疲労、食欲不振、発熱、ねあせ、骨痛、息切れ、腹部膨満、胸痛／胸部圧迫感、脾臓肥大、および癌関連バイオマーカー（例えば、ＣＡ１２５）のレベルの上昇が挙げられるが、これらに限定されない１つ以上の症状または徴候を有すると診断され得る。この表現には、原発性腫瘍または定着腫瘍を有する対象が含まれる。特定の実施形態では、この表現には、固形腫瘍、例えば、結腸癌、乳癌、肺癌、前立腺癌、皮膚癌、肝臓癌、骨癌、卵巣癌、子宮頸部癌、膵臓癌、頭頸部癌、および脳癌を有する、および／またはその処置を必要とするヒト対象が含まれる。この用語には、原発性または転移性腫瘍（進行性悪性腫瘍）を有する対象が含まれる。ある特定の実施形態では、「それを必要とする対象」という表現には、以前の療法（例えば、抗癌剤での処置）に抵抗性もしくは難治性であるか、または以前の療法によっては適切に制御されない固形腫瘍を有する対象が含まれる。例えば、この表現には、化学療法での処置（例えば、カルボプラチンまたはドセタキセル）などの、１つ以上の以前の選択療法で処置された対象が含まれる。ある特定の実施形態では、「それを必要する対象」という表現には、１つ以上の以前の選択療法で処置されたが、その後再発または転移した固形腫瘍を有する対象が含まれる。ある特定の実施形態では、この用語には、癌、関節リウマチ、アテローム性動脈硬化症、歯周炎、枯草熱、心臓疾患、冠動脈疾患、感染症、気管支炎、皮膚炎、髄膜炎、喘息、結核、潰瘍性大腸炎、クローン病、炎症性腸疾患、肝炎、副鼻腔炎、乾癬、アレルギー、線維症、ルーパス、脈管炎、強直性脊椎炎、グレーブス病、セリアック病、線維筋痛症、および移植拒絶が挙げられるが、これらに限定されない炎症性疾患または障害を有する対象が含まれる。
ある特定の実施形態では、本開示の方法は、固形腫瘍を有する対象で使用される。「腫瘍」、「癌」および「悪性腫瘍」という用語は、本明細書では互換的に使用される。本明細書で使用される場合、「固形腫瘍」という用語は、通常は嚢胞または液体領域を含有しない異常な組織の塊を指す。固形腫瘍は良性（癌ではない）または悪性（癌）であり得る。本開示の目的のために、「固形腫瘍」という用語は、悪性固形腫瘍を意味する。この用語には、それらを形成する細胞型、すなわち、肉腫、癌腫およびリンパ腫と名付けられた異なる種類の固形腫瘍が含まれる。ある特定の実施形態では、「固形腫瘍」という用語には、大腸直腸癌、卵巣癌、前立腺癌、乳癌、脳癌、子宮頸癌、膀胱癌、肛門癌、子宮癌、結腸癌、肝臓癌、膵臓癌、肺癌、子宮内膜癌、骨癌、精巣癌、皮膚癌、腎臓癌、胃癌、食道癌、頭頸部癌、唾液腺癌、および骨髄腫が挙げられるが、これらに限定されない癌が含まれる。
一態様によれば、本開示は、対象の固形腫瘍を処置する方法を提供する。この態様による方法は、腫瘍がＣＤ８陽性であると決定すること、すなわち、腫瘍がＣＤ８陽性Ｔ細胞を含むと決定することと、抗腫瘍療法の１回以上の用量を投与することと、を含む。抗腫瘍療法は、チェックポイント阻害剤療法とすることができる。ある特定の実施形態では、腫瘍は、本開示の放射性標識された抗体コンジュゲートを対象に投与し、また腫瘍においてＰＥＴ撮像により放射性標識された抗体コンジュゲートを可視化することによって、ＣＤ８陽性であることが決定される腫瘍における放射性標識されたる抗体コンジュゲートの存在は、腫瘍がＣＤ８陽性であることを示す。
本明細書に開示される放射性標識された抗ＣＤ８抗体は、対象がチェックポイント阻害剤療法に適しているかどうかを評価するために使用され得る。いくつかの態様では、放射性標識された抗ＣＤ８抗体を使用して、例えば、腫瘍の生検を行う必要なしに監視することを含む、腫瘍におけるＴ細胞浸潤を監視することができる。ある特定の実施形態では、十分なＴ細胞浸潤は、腫瘍がチェックポイント阻害療法に応答するであろうことを示す。本明細書に開示される放射性標識された抗ＣＤ８抗体は、例えば、処置過程の前の時点および／または処置過程中に、Ｔ細胞浸潤の程度の変化を測定することによって、チェックポイント阻害剤処置の過程中に、または処置後にＴ細胞浸潤を監視するためにも使用され得る。
腫瘍におけるＣＤ８陽性Ｔ細胞の存在は、腫瘍が処置に、例えば、チェックポイント阻害剤療法による処置に、より良好に応答するであろうことを示している。加えて、抗腫瘍療法で処置後の腫瘍におけるＣＤ８陽性Ｔ細胞の存在は、療法が効いており、Ｔ細胞がより増加するにつれて、処置がより有効になることを示している。
さらなる態様では、処置方法は、ＣＴＬＡ－４阻害剤（例えば、イピリムマブ）、ＴＩＭ３阻害剤、ＢＴＬＡ阻害剤、ＴＩＧＩＴ阻害剤、ＣＤ４７阻害剤、ＧＩＴＲ阻害剤、別のＴ細胞共阻害剤もしくはリガンドの拮抗薬（例えば、ＣＤ－２８、２Ｂ４、ＬＹ１０８、ＬＡＩＲ１、ＩＣＯＳ、ＣＤ１６０またはＶＩＳＴＡへの抗体）、インドールアミン－２，３－ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）拮抗薬［例えば、アフリベルセプトもしくは米国特許第７，０８７，４１１号に記載されるＶＥＧＦ阻害融合タンパク質などの「ＶＥＧＦ－トラップ」、または抗ＶＥＧＦ抗体もしくはその抗原結合フラグメント（例えば、ベバシズマブ、またはラニビズマブ）またはＶＥＧＦ受容体の小分子キナーゼ阻害剤（例えば、スニチニブ、ソラフェニブ、またはパゾパニブ）］、Ａｎｇ２阻害剤（例えば、ネスアクマブ）、トランスフォーミング増殖因子ベータ（ＴＧＦβ）阻害剤、表皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）阻害剤（例えば、エルロチニブ、セツキシマブ）、ＣＤ２０阻害剤（例えば、リツキシマブなどの抗ＣＤ２０抗体）、腫瘍特異抗原に対する抗体［例えば、ＣＡ９、ＣＡ１２５、黒色腫関連抗原３（ＭＡＧＥ３）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ビメンチン、腫瘍－Ｍ２－ＰＫ、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、ムチン－１、ＭＡＲＴ－１、およびＣＡ１９－９］、ワクチン（例えば、カルメット・ゲラン桿菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ Ｃａｌｍｅｔｔｅ－Ｇｕｅｒｉｎ）、癌ワクチン）、抗原提示を増加させるアジュバント（例えば、顆粒球－マクロファージコロニー刺激因子）、二特異性抗体（例えば、ＣＤ３×ＣＤ２０二重特異性抗体、またはＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体）、細胞毒素、化学療法剤（例えば、ダカルバジン、テモゾロミド、シクロホスファミド、ドセタキセル、ドキソルビシン、ダウノルビシン、シスプラチン、カルボプラチン、ゲムシタビン、メトトレキサート、ミトキサントロン、オキサリプラチン、パクリタキセル、およびビンクリスチン）、シクロホスファミド、放射線療法、ＩＬ－６Ｒ阻害剤（例えば、サリルマブ）、ＩＬ－４Ｒ阻害剤（例えば、デュピルマブ）、ＩＬ－１０阻害剤、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－２１、およびＩＬ－１５などのサイトカイン、抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）（例えば、抗ＣＤ１９－ＤＭ４ ＡＤＣ、および抗ＤＳ６－ＤＭ４ ＡＤＣ）、抗炎症薬（例えば、コルチコステロイド、および非ステロイド性抗炎症薬）、抗酸化剤などの栄養補助食品または癌を処置するための任意の他の療法ケアのうちの１回以上の用量を投与することをさらに含むことができる。ある特定の実施形態では、抗腫瘍療法は、抗腫瘍応答を増強するために、樹状細胞ワクチン、腫瘍溶解性ウイルス、腫瘍細胞ワクチンなどを含む癌ワクチンと組み合わせて使用されてもよい。抗腫瘍療法と組み合わせて使用できる癌ワクチンの例には、黒色腫および膀胱癌用のＭＡＧＥ３ワクチン、乳癌用ＭＵＣ１ワクチン、脳癌（多形神経膠芽腫を含む）用のＥＧＦＲｖ３（例えば、リンドペピムト）、またはＡＬＶＡＣ－ＣＥＡ（ＣＥＡ＋癌のための）が挙げられる。
ある特定の実施形態では、抗腫瘍療法は、長期持続性抗腫瘍応答を生じさせる、および／または癌を有する対象の生存を高めるための方法において、放射線療法と組み合わせて使用されてもよい。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤＬ－１の阻害剤、例えば、抗ＰＤ－１抗体は、癌の対象に放射線療法を施す前に、同時に、または施した後に投与されてもよい。例えば、放射線療法は、腫瘍病変に対して１回以上の線量で投与され、その後に抗ＰＤ－１抗体の１回以上の用量量の投与が行われてもよい。いくつかの実施形態では、放射線療法を腫瘍性病変に局所投与して、対象の腫瘍の局所免疫原性を増させ（アジュバント作用性放射線照射（ａｄｊｕｖｉｎａｔｉｎｇ ｒａｄｉａｔｉｏｎ））、および／または腫瘍細胞を死滅させ（切除性放射線照射（ａｂｌａｔｉｖｅ ｒａｄｉａｔｉｏｎ））、その後、抗ＰＤ－１抗体を全身投与することができる。例えば、頭蓋内放射線照射を、脳癌（例えば、多形神経膠芽腫）を有する対象に、抗ＰＤ－１抗体の全身投与との組み合わせて投与することができる。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、放射線療法および化学療法剤と（例えば、テモゾロミド）またはＶＥＧＦアンタゴニスト（例えば、アフリベルセプト）と組み合わせて投与されてもよい。
ある特定の実施形態では、例えば、ＬＣＭＶ、ＨＩＶ、ＨＰＶ、ＨＢＶ、またはＨＣＶによって引き起こされるウイルス感染を処置するために、それを必要とする対象に、抗ウイルス薬を投与することができる。抗ウイルス薬の例には、ジドブジン、ラミブジン、アバカビル、リバビリン、ロピナビル、エファビレンツ、コビシスタット、テノホビル、リルピビリン、およびコルチコステロイドが挙げられるが、これらに限定されない。
ある特定の実施形態では、例えば、リケッチア細菌、桿菌、クレブシエラ、髄膜炎菌ならびにゴノコッカス、プロテウス、肺炎球菌、シュードモナス、ストレプトコッカス、スタフィロコッカス、セラチア、ボレリア、炭疽菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒｉｃｉｓ）、クラミジア、クロストリジウム、ジフテリア菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ）、レジネラ、ライ菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｅｐｒａｅ）、マイコバクテリウム・レプロマトシス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｅｐｒｏｍａｔｏｓｉｓ）、サルモネラ、コレラ菌（Ｖｉｂｒｉｏ ｃｈｏｌｅｒａｅ）、およびビブリオコーリエ、およびペスト菌（Ｙｅｒｓｉｎｉａ ｐｅｓｔｉｓ）によって引き起こされる細菌感染を処置するために、それを必要とする対象に、１つ以上の抗菌薬が投与され得る。抗菌薬の例としては、ペニシリン、テトラセイクリン、セファロスポリン、キノロン、リンコマイシン、マクロライド、ケトライド、スルホンアミド、グリコペプチド、アミノグリコシド、およびカルバペネムが挙げられるが、これらに限定されない。
ある特定の実施形態では、例えば、アスペルギルス属（フミガーツス、ニガーなど）、ブラストマイセス・デルマチチジス（Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ）、カンジダ属（アルビカンス、クルーセイ、グラブラータ、トロピカリスなど）、コクシジオイデス・イミチス（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｉｍｍｉｔｉｓ）、クリプトコッカス・ネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）、ケカビ属（ムコール、アブシジア、リゾプスなど）、ヒストプラズマ・カプスアツム（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）、パラコクシジオイデス・ブラジリエンシス（Ｐａｒａｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ）、およびスポロトリックス・シェンキィ（Ｓｐｏｒｏｔｈｒｉｘ ｓｃｈｅｎｋｉｉ）によって引き起こされる真菌感染を処置するために、それを必要とする対象に、１つ以上の抗真菌薬が投与され得る。抗真菌薬の例としては、アンホテリシンＢ、フルコナゾール、ボリキソナゾナゾール、ポサコナゾール、イトラコナゾール、ボリコナゾール、アニデュラファンギン、キャスポファンギン、ミカファンギン、およびフルシトシンが挙げられるが、これらに限定されない。
ある特定の実施形態では、例えば、エントアメーバの種（Ｅｎｔａｍｏｅｂａ ｓｐｐ．、蟯虫（エンテロビウスバーミキュラリ（Ｅｎｔｅｒｏｂｉｕｓ ｖｅｒｍｉｃｕｌａｒｉｓ））、リーシュマニアの種（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ ｓｐｐ．）、トキソカラの種（Ｔｏｘｏｃａｒａ ｓｐｐ．）、マラリア原虫の種（マラリア原虫の種（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｓｐｐ．）、住血吸虫の種（Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ ｓｐｐ．）、有鉤条虫（Ｔａｅｎｉａ ｓｏｌｉｕｍ）、トキソプラズマ原虫（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉｉ）、およびトリパノソーマクルージ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ ｃｒｕｚｉ）によって引き起こされる寄生虫感染を処置するために、それを必要とする対象に、１つ以上の抗寄生虫薬が投与され得る。抗寄生虫薬の例には、プラジカンテル、オキサムニキン、メトロニダゾール、チニダゾール、ニタゾキサニド、デヒドロエメチンまたはクロロキシン、ジオキサニドフロエート、ヨードキノン、クロロキン、パロモマイシン、パモ酸ピランテル、アルベンダゾール、ニフルチモックス、およびベンズニダゾールが挙げられるが、これらに限定されない。
追加的治療活性薬剤（単数または複数）／成分を、ＣＤ８の阻害剤の投与前、同時に、または投与後に投与してもよい。本開示の目的のために、このような投与レジメンは、第２の治療上活性な成分とのＣＤ８阻害剤「組み合わせ」の投与とみなされる。
いくつかの態様では、処置方法は、細菌感染、ウイルス感染、真菌感染、または寄生虫感染を有する対象を選択することと、対象の影響を受ける組織がＣＤ８陽性であるとはんていすることと、感染に適切な治療剤の１回以上の用量を投与することと、を含む。ある特定の実施形態では、本開示の放射性標識された抗ＣＤ８抗体コンジュゲートを対象に投与し、ＰＥＴ撮像によって、対象の放射性標識された抗体コンジュゲートを可視化する（組織内の放射性標識された抗体コンジュゲートの存在は、その組織がＣＤ８陽性であることを示す）ことによって、影響を受けた組織はＣＤ８陽性であると決定される。ある特定の実施形態では、投与および可視化の工程は、感染症の処置における治療剤の有効性を監視するために１回以上実施される。
いくつあの態様では、処置方法は、固形腫瘍を有する対象を選択することと、腫瘍がＣＤ８陽性かつＰＤ－１陽性であると決定することと、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１シグナル伝達軸の阻害剤（例えば、抗ＰＤ－１抗体または抗ＰＤ－Ｌ１抗体）の１回以上の用量を投与することと、を含む。ある特定の実施形態では、本開示の放射性標識された抗ＣＤ８抗体コンジュゲートを対象に投与し、ＰＥＴ撮像によって、腫瘍における放射性標識された抗体コンジュゲートを可視化する（腫瘍における放射性標識された抗体コンジュゲートの存在は、腫瘍がＣＤ８陽性であることを示す）ことによって、腫瘍はＣＤ８陽性であると決定される。ある特定の実施形態では、本開示の放射性標識された抗ＰＤ－１コンジュゲートを対象に投与し、ＰＥＴ撮像によって、腫瘍における放射性標識された抗ＰＤ－１コンジュゲートを可視化する（腫瘍における放射性標識された抗ＰＤ－１コンジュゲートの存在は、腫瘍がＰＤ－１陽性であることを示す）ことによって、腫瘍はＰＤ－１陽性であると決定される。
例示的な抗ＰＤ－１抗体には、ＲＥＧＮ２８１０、ＢＧＢ－Ａ３１７、ニボルマブ、ピジリズマブ、およびペンブロリズマブが挙げられる。
例示的抗ＰＤ－Ｌ１抗体には、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、ＭＤＸ－１１０５、およびＲＥＧＮ３５０４、ならびに特許出願公開第２０１５－０２０３５８０号に開示されるものならびにそれらに開示されるものならびにそれらに開示されるものが挙げられる。
本明細書で使用される場合、「処置する」、「処置すること」などという用語は、症状を緩和すること、症状の原因を一時的もしくは永続的のいずれかで排除すること、腫瘍の成長を遅らせるかもしくは阻害すること、腫瘍細胞量もしくは腫瘍負荷を低減させること、腫瘍退縮、壊死および／または消失を引き起こすこと、転移を抑制もしくは阻害すること、転移性腫瘍の成長を阻害すること、および／または対象の生存期間を延ばすことを意味する。
一態様によれば、本開示は、対象の抗腫瘍療法の有効性を監視する方法を提供し、本方法は、固形腫瘍を有する対象を選択することであって、対象が抗腫瘍療法で処置されている、選択することと、本開示の放射性標識された抗ＣＤ８コンジュゲートを対象に投与することと、ＰＥＴ撮像によって、腫瘍における投与された放射性標識されたコンジュゲートの局在化を撮像することと、腫瘍成長を決定することと、を含み、放射性標識されたシグナルのベースラインからの減少が、抗腫瘍療法の有効性を示す。ある特定の実施形態では、抗腫瘍療法は、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１シグナル伝達軸の阻害剤（例えば、抗ＰＤ－１抗体または抗ＰＤ－Ｌ１抗体）を含む。
ある特定の実施形態では、本開示は、腫瘍の炎症状態の変化を評価するための方法を提供し、本方法は、固形腫瘍を有する対象を選択することであって、対象が抗腫瘍療法で処置されている、選択することと、本明細書に提供される放射性標識された抗ＣＤ８コンジュゲートを対象に投与することと、ＰＥＴ撮像によって、腫瘍における投与された放射性標識されたコンジュゲートの局在化を撮像することと、を含み、放射性標識されたシグナルのベースラインからの増加が、炎症の増加および抗腫瘍療法の有効性を示す。ある特定の実施形態では、抗腫瘍療法は、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１シグナル伝達軸の阻害剤（例えば、抗ＰＤ－１抗体または抗ＰＤ－Ｌ１抗体）を含む。ある特定の実施形態では、抗腫瘍療法は、ＰＤ－１阻害剤（例えば、ＲＥＧＮ２８１０、ＢＧＢ－Ａ３１７、ニボルマブ、ピジリズマブ、およびペンブロリズマブ）、ＰＤ－Ｌ１阻害剤（例えば、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、ＭＤＸ－１１０５、およびＲＥＧＮ３５０４）、ＣＴＬＡ－４阻害剤（例えば、イピリムマブ）、ＴＩＭ３阻害剤、ＢＴＬＡ阻害剤、ＴＩＧＩＴ阻害剤、ＣＤ４７阻害剤、ＧＩＴＲ阻害剤、別のＴ細胞共阻害剤もしくはリガンドの拮抗薬（例えば、ＣＤ－２８、２Ｂ４、ＬＹ１０８、ＬＡＩＲ１、ＩＣＯＳ、ＣＤ１６０またはＶＩＳＴＡへの抗体）、インドールアミン－２，３－ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）拮抗薬［例えば、アフリベルセプトもしくは米国特許第７，０８７，４１１号に記載されるＶＥＧＦ阻害融合タンパク質などの「ＶＥＧＦ－トラップ」、または抗ＶＥＧＦ抗体もしくはその抗原結合フラグメント（例えば、ベバシズマブ、またはラニビズマブ）またはＶＥＧＦ受容体の小分子キナーゼ阻害剤（例えば、スニチニブ、ソラフェニブ、またはパゾパニブ）］、Ａｎｇ２阻害剤（例えば、ネスアクマブ）、トランスフォーミング増殖因子ベータ（ＴＧＦβ）阻害剤、表皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）阻害剤（例えば、エルロチニブ、セツキシマブ）、ＣＤ２０阻害剤（例えば、リツキシマブなどの抗ＣＤ２０抗体）、腫瘍特異抗原に対する抗体［例えば、ＣＡ９、ＣＡ１２５、黒色腫関連抗原３（ＭＡＧＥ３）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ビメンチン、腫瘍－Ｍ２－ＰＫ、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、ムチン－１、ＭＡＲＴ－１、およびＣＡ１９－９］、ワクチン（例えば、カルメット・ゲラン桿菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ Ｃａｌｍｅｔｔｅ－Ｇｕｅｒｉｎ）、癌ワクチン）、抗原提示を増加させるアジュバント（例えば、顆粒球－マクロファージコロニー刺激因子）、二特異性抗体（例えば、ＣＤ３×ＣＤ２０二重特異性抗体、またはＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体）、細胞毒素、化学療法剤（例えば、ダカルバジン、テモゾロミド、シクロホスファミド、ドセタキセル、ドキソルビシン、ダウノルビシン、シスプラチン、カルボプラチン、ゲムシタビン、メトトレキサート、ミトキサントロン、オキサリプラチン、パクリタキセル、およびビンクリスチン）、シクロホスファミド、放射線療法、ＩＬ－６Ｒ阻害剤（例えば、サリルマブ）、ＩＬ－４Ｒ阻害剤（例えば、デュピルマブ）、ＩＬ－１０阻害剤、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－２１、およびＩＬ－１５などのサイトカイン、および抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）（例えば、抗ＣＤ１９－ＤＭ４ ＡＤＣ、および抗ＤＳ６－ＤＭ４ ＡＤＣ）を含む。
本明細書で使用される場合、腫瘍におけるＣＤ８発現に関する「ベースライン」という用語は、抗腫瘍療法の用量の投与前または投与時に、対象についての放射性標識されたコンジュゲートの取り込みの数値を意味する。放射性標識されたコンジュゲートの取り込みは、当技術分野において既知の方法を使用して決定される（例えば、Ｏｏｓｔｉｎｇ ｅｔ ａｌ ２０１５，Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．５６：６３－６９を参照されたい）。ある特定の実施形態では、抗腫瘍療法は、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１シグナル伝達軸の阻害剤を含む。
抗腫瘍療法に有効性があるかどうかを決定するために、放射性標識されたコンジュゲートの取り込みを、ベースライン時およびＣＤ８阻害剤の投与後の１つ以上の時点で定量化する。例えば、放射性標識された抗体コンジュゲート（例えば、放射性標識された抗ＣＤ８抗体コンジュゲート）の取り込みは、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１シグナル伝達軸（例えば、抗ＰＤ－１抗体）による初回処置後、２日目、３日目、４日目、５日目、６日目、７日目、８日目、９日目、１０日目、１１日目、１２日目、１４日目、１５日目、２２日目、２５日目、２９日目、３６日目、４３日目、５０日目、５７日目、６４日目、７１日目、８５日目に測定されてもよく、または１週目、２週目、３週目、４週目、５週目、６週目、７週目、８週目、９週目、１０週目、１１週目、１２週目、１３週目、１４週目、１５週目、１６週目、１７週目、１８週目、１９週目、２０週目、２１週目、２２週目、２３週目、２４週目、またはそれ以上の週の終わりに測定されてもよい。処置開始後の特定の時点での取り込みの値とベースライン時の取り込みの値との間の差異は、抗腫瘍療法が有効であるかどうか（腫瘍退縮または進行）を確立するために使用される。
ある特定の実施形態では、放射性標識された抗体コンジュゲートは、対象に静脈内または皮下で投与される。ある特定の実施形態では、放射性標識された抗体コンジュゲートは、腫瘍内に投与される。投与時に、放射性標識された抗体コンジュゲートは、腫瘍内で局在化される。局在化放射性標識された抗体コンジュゲートは、ＰＥＴ撮像により撮像され、腫瘍による放射性標識された抗体コンジュゲートの取り込みが、当技術分野において既知の方法によって測定される。ある特定の実施形態では、撮像は、放射性標識されたコンジュゲートの投与の１、２、３、４、５、６、または７日後に実施される。ある特定の実施形態では、撮像は、放射性標識された抗体コンジュゲートの投与と同日に実施される。
ある特定の実施形態では、放射性標識された抗ＣＤ８コンジュゲートは、対象の体重の約０．１ｍｇ／ｋｇ～体重の約１００ｍｇ／ｋｇ、例えば、体重の約０．１ｍｇ／ｋｇ～約５０ｍｇ／ｋｇ、または約０．５ｍｇ／ｋｇ～約２５ｍｇ／ｋｇ、または約０．１ｍｇ／ｋｇ～約１．０ｍｇ／ｋｇの用量で投与することができる。
ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＣＤ８に特異的に結合する。ある特定の実施形態では、抗ＣＤ８抗体は、ＨＣＶＲのＣＤＲ（ＨＣＶＲは、配列番号２のアミノ酸配列を有する）と、ＬＣＶＲのＣＤＲ（ＬＣＶＲは、配列番号１０のアミノ酸を有する）とを含む。
Ｖ．抗体の診断上の使用
本開示の抗ＣＤ８抗体は、例えば、診断目的のために、試料中のＣＤ８またはＣＤ８発現細胞を検出および／または測定するためにも使用され得る。例えば、抗ＣＤ８抗体、またはそのフラグメントは、ＣＤ８の異常発現（例えば、過剰発現、過小発現、発現の欠如、など）によって特徴付けられる状態または疾患を診断するために使用され得る。ＣＤ８に対する例示の診断アッセイは、例えば、対象から得られた試料を、抗ＣＤ８抗体と接触させることを含むことができ、この抗体は、検出可能な標識またはレポーター分子で標識されている。あるいは、標識されていない抗ＣＤ８抗体は、それ自体が検出可能に標識された２次抗体との組み合わせで、診断用途に使用することができる。検出可能な標識またはレポーター分子は、３Ｈ、１４Ｃ、３２Ｐ、３５Ｓ、または１２５Ｉなどの放射性同位体、フルオレセインもしくはローダミンなどの蛍光部分もしくは化学発光部分、またはアルカリホスファターゼ、β－ガラクトシダーゼ、セイヨウワサビペルオキシダーゼ、もしくはルシフェラーゼなどの酵素であり得る。試料中のＣＤ８を検出または測定するために使用することのできる具体的な例示的アッセイには、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、イムノＰＥＴ（例えば、８９Ｚｒ、６４Ｃｕ等）、および蛍光標識細胞分取（ＦＡＣＳ）が含まれる。
本開示によるＣＤ８診断アッセイで使用できる試料には、対象から得られる任意の組織または流体試料が含まれる。概して、健常な対象（例えば、異常なＣＤ８レベルまたは活性に関連する疾患または状態を患っていない対象）から得られた特定の試料中のＣＤ８のレベルは、ＣＤ８のベースライン、または標準レベルを先ず確立するために測定されることになっている。次に、ＣＤ８のこのベースラインレベルは、ＣＤ８関連疾患または状態を有すると疑われる個体から得られた試料において測定されるＣＤ８のレベルに対して比較することができる。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ８抗体は、放射性同位元素、蛍光部分、化学発光部分、または酵素で標識される。放射性同位元素は、３Ｈ、１４Ｃ、３２Ｐ、３５Ｓ、または１２５Ｉからなる群から選択され得る。蛍光部分または化学発光部分は、フルオレセインまたはローダミンからなる群から選択され得る。酵素は、アルカリホスファターゼ、β－ガラクトシダーゼ、西洋ペルオキシダーゼ、またはルシフェラーゼからなる群から選択され得る。
いくつかの実施形態では、アッセイは、蛍光部分または化学発光部分で検出可能に標識された本明細書に記載の抗ＣＤ８抗体を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ８抗体は、蛍光染料でコンジュゲートされる。いくつかの実施形態ではにおいて、抗ＣＤ８抗体は、近赤外（ＮＩＲ）蛍光染料にコンジュゲートされる。適切な染料には、蛍光分子断層撮影適用下で低発現標的に対して高い感度を提供するものが含まれる。いくつかの実施形態では、染料は、ＢＯＤＩＰＹ－Ｘ６３０／６５０（登録商標）、ＶｉｖｏＴａｇ（登録商標）６４５、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ（登録商標）６４７、ＶｉｖｏＴａｇ６８０（登録商標）、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ６８０（登録商標）、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ７５０（登録商標）、ＩＲＤｙｅ８００ＣＷ（登録商標）、ＤｙＬｉｇｈｔ８００ ＣＦ（登録商標）６６０Ｃ、ＣＦ（登録商標）６６０Ｒ、ＣＦ（登録商標）７９０、およびＣＦ（登録商標）８００である。いくつかの実施形態では、染料はＩＲＤｙｅ８００ＣＷである。いくつかの実施形態では、染料はＶｉｖｏｔａｇ６８０ＸＬである。いくつかの実施形態では、染料はＩＲＤｙｅ８００ＣＷであり、ＤＡＲは０．１０～１．００である。いくつかの実施形態では、染料はＶｉｖｏｔａｇ６８０ＸＬであり、ＤＡＲは１～２である。いくつかの実施形態では、染料は、ＩＲＤｙｅ８００ＣＷまたはＶｉｖｏｔａｇ６８０ＸＬであり、実施例１３に記載の方法に基づいてＳＥ－ＨＰＬＣにより測定される単量体純度は、＞９０、９５、９６、または９７％である。
以下の式を有する化合物も本明細書に提供されており、
Ａｂ－［Ｄ］ｎ、式中、Ａｂは本明細書に記載される抗ＣＤ８抗体、またはその抗原結合フラグメントであり、Ｄは蛍光染料であり、ｎは１～４の整数である。いくつかの実施形態では、ｎは、１～２である。いくつかの実施形態では、ｎは１である。いくつかの実施形態では、Ｄは、
Figure 0007304846000015
 またはその薬学的に許容される塩である。
ＶＩ．実施例
本開示のある特定の実施形態は、以下の非限定的な実施例によって例証される。
実施例１：ＣＤ８に対するヒト抗体の生成
ＣＤ８α ＤＮＡおよび／またはＣＤ８β ＤＮＡを含む免疫原を使用して、ＣＤ８に対する抗体を生成することができる。同様に、ＣＤ８αタンパク質および／またはＣＤ８βタンパク質を含む免疫原を使用して、ＣＤ８に対する抗体を生成することができる。ある特定の実施形態では、抗体は、完全長ＣＤ８α ＤＮＡ（例えば、配列番号１７）および／またはＣＤ８β ＤＮＡ（例えば、配列番号１９）、完全長ＣＤ８αタンパク質（例えば、配列番号１８）および／またはＣＤ８αタンパク質（例えば、配列番号２０）、またはＣＤ８αタンパク質および／またはＣＤ８βタンパク質のフラグメントで免疫化されたマウスから得られる。いくつかの実施形態では、抗体は、完全長ＣＤ８αおよびＣＤ８βを含有する融合ペプチド、またはＣＤ８αおよびＣＤ８βの両方のフラグメントを含有する融合ペプチドで免疫化されたマウスから得られる。
例示的抗ＣＤ８抗体は、ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）マウス（すなわち、ヒト免疫グロブリン重鎖およびカッパ軽鎖可変領域をコードするＤＮＡを含む遺伝子操作を受けたマウス）を、完全長ＣＤ８α ＤＮＡ（配列番号１７）および完全長ＣＤ８β ＤＮＡ（配列番号１９）で注射することによって得られた。ＤＮＡ配列は、マウスにおいてＣＤ８タンパク質の発現を引き起こし、抗体が生成されるインビボでより構造的に正確なタンパク質標的を生成し得る。抗体の免疫応答を、ＣＤ８特異的イムノアッセイによって監視した。所望の免疫応答が達成されたとき、脾細胞を収集し、マウス骨髄腫細胞と融合させて、それらの生存率を維持し、ハイブリドーマ細胞株を形成した。ハイブリドーマ細胞株をスクリーニングおよび選択して、ＣＤ８特異的抗体を産生する細胞株を識別した。この技術を用いて、抗ＣＤ８キメラ抗体（すなわち、ヒト可変ドメインとマウス定常ドメインとを有する抗体）を得た。抗体の完全ヒトバージョンは、マウス定常領域をヒト定常領域と置き換えることによって作製され得る。例示的抗体の可変領域核酸配列およびアミノ酸配列は、上記表１に提供されている。上述の方法に従って生成された例示的抗ＣＤ８抗体は、「ｍＡｂ１」と表示された抗体である。
この実施例の方法に従って生成された例示的な抗体の生物学的特性を、以下に記載した実施例において詳細に説明する。
実施例２：表面プラズモン共鳴によって測定されるＣＤ８への抗体結合
精製された抗ＣＤ８ ｍＡｂに結合するｈＣＤ８α．ｍｍｈの平衡解離定数（ＫＤ値）を、リアルタイム表面プラズモン共鳴バイオセンサを用いて決定し、Ｓｉｅｒｒａ Ｓｅｎｓｏｒ ＭＡＳＳ－１を使用して、高容量アミンセンサ表面を、ポリクローナルヤギ抗マウスＦｃ抗体（ＧＥ、＃ＢＲ－１００８－３８）とのアミンカップリングにより誘導体化して、精製された抗ＣＤ８ ｍＡｂを捕捉した。ＳＰＲ結合試験を、０．０１ＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）、０．１５ＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＥＤＴＡ、０．０５％ｖ／ｖの界面活性剤Ｐ２０（ＨＢＳ－ＥＴ泳動緩衝液）から構成される緩衝液中で実施した。ＨＢＳ－ＥＴ泳動緩衝液中で調製されたＣ末端ｍｙｃ－ｍｙｃ－ポリヒスチジンタグ（ｈＣＤ８α．ｍｍｈ、ＲＥＧＮ３９４０）を有するｈＣＤ８αの異なる濃度（３００ｎＭ～３．７ｎＭ、３倍希釈物）を、５０μＬ／分の流量で、抗ＣＤ８ ｍＡｂを捕捉した表面上に注入した。ｈＣＤ８α．ｍｍｈの捕捉されたモノクローナル抗体への結合を４分間監視し、ＨＢＳ－ＥＴ泳動緩衝液中のｈＣＤ８α．ｍｍｈの解離を１０分間監視した。結合動力学的実験を、２５℃で実施した。Ｓｃｒｕｂｂｅｒ ２．０ｃ曲線適合ソフトウェアを用いてリアルタイムセンサーグラムを１：１結合モデルへフィッティングすることによって、動力学的会合（ｋａ）および解離（ｋｄ）速度定数を決定した。結合解離平衡定数（ＫＤ）および解離半減期（ｔ１／２）を、動力学的速度定数から以下のように計算した：
Figure 0007304846000016
２５℃で精製された抗ＣＤ８モノクローナル抗体へのｈＣＤ８α．ｍｍｈの結合の結合動態パラメータを表２に示す。
Figure 0007304846000017
実施例３：ＦＡＣＳ分析による細胞結合
ＣＤ８抗体またはアイソタイプ対照抗体の一次ヒトＣＤ８陽性Ｔ細胞およびカニクイザルＴ細胞への結合を評価するために、フローサイトメトリーを実施した。
ヒトＴ細胞およびサルＴ細胞に結合するＣＤ８抗体の特性評価
ＰＢＭＣを、ヒト白血球パックまたはカニクイザルの全血から単離した。続いて、ＣＤ８陽性Ｔ細胞を、ヒトＰＢＭＣから、およびカニクイザルＰＢＭＣから単離し、ＣＤ４陽性およびＣＤ８陽性のいずれかであるＴ細胞を単離した。
ａ）ヒト白血球パックからのヒトＣＤ８陽性Ｔ細胞の単離：
ｍＡｂ１の結合を試験するために、ヒトＣＤ８陽性Ｔ細胞を、１人の健常ドナーからの末梢血の白血球パックから単離した。ヒト白血球パックは、ＮＹ血液センターから得られた。ＰＢＭＣの単離を、５０ｍｌのＳｅｐＭａｔｅ（商標）管を使用して、製造業者の推奨されるプロトコルに従って、密度勾配遠心分離によって達成した。簡潔に述べると、１５ｍｌのＦｉｃｏｌｌ－Ｐａｑｕｅ ＰＬＵＳを５０ｍｌのＳｅｐＭａｔｅ（商標）管に層状に置き、その後、ＰＢＳで１：２で希釈した３０ｍｌの白血球を添加した。次のステップを、ＳｅｐＭａｔｅ商標の製造業者のプロトコルに従って行った。ＰＢＭＣ単離後、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ ＢｉｏｔｅｃからのヒトＣＤ８マイクロビーズキットを、製造業者のプロトコルに従ってを使用して、ＣＤ８陽性Ｔ細胞を濃縮した。細胞を、ヒト一次培養培地（１０％のウシ胎児血清および０．０１ｍＭのベータ－メルカプトエタノールを補充したＸ－Ｖｉｖｏ１５培地）中で、ヒトＴ－アクチベータＣＤ３／ＣＤ２８ Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（登録商標）と共にインキュベートすることによって、ＣＤ８陽性Ｔ細胞を増殖させた。組換えヒトＩＬ－２（５０ＩＵ／ｍｌ）を、ＣＤ３／ＣＤ２８ Ｄｙｎａｂｅａｄとのインキュベーションから７２時間後に、培養基に補充した。フローサイトメトリー分析に必要な細胞数まで細胞を増殖させたとき、Ｄｙｎａｂｅａｄを磁気分離によって除去し、細胞を、ＣＤ８抗体またはアイソタイプ対照の結合を決定するために、直ちに使用した。
ｂ）カニクイザルＴ細胞の単離
抗体結合分析用に、サルＴ細胞を単離するために、ＢｉｏｒｅｃｌａｍａｔｉｏｎＩＶＴからのカニクイザル全血を使用した。ＳｅｐＭａｔｅ（商標）１５管および密度勾配遠心分離を、製造業者のプロトコルに従って使用して、ＰＢＭＣを単離した。その後、非ヒト霊長類用のＰａｎ Ｔ－ｉｓｏｌａｔｉｏｎキット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ）を、製造業者の推奨プロトコルに従って使用して、Ｔ細胞を濃縮した。次いで、サル一次培養培地（１０％のウシ胎児血清および０．０１ｍＭのベータ－メルカプトエタノールを補充したＸ－Ｖｉｖｏ１５培地）中で、非ヒト霊長類用のＴ細胞活性化／増殖キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ）を、使用して、Ｔ細胞を活性化させ増殖させた。７２時間語、組換えヒトＩＬ－２（１００ＩＵ／ｍｌ）を、一次培養培地に補充し、Ｔ細胞を１週間増殖させた。Ｔ細胞の活性化および増殖に使用された磁気ビーズを、細胞をＣＤ８またはアイソタイプ対照抗体で染色する直前に、磁気的に除去した。
ｃ）ヒトＣＤ８陽性Ｔ細胞およびカニクイザルＴ細胞に結合するｍＡｂ１抗体のフローサイトメトリー分析。
ｍＡｂ１およびアイソタイプ対照抗体を、２００ｎＭの濃度から始まる、ヒトＣＤ８陽性Ｔ細胞には８点滴定で、またはカニクイザルＴ細胞には１１点滴定でのいずれかにおいて、染色緩衝液（２％のＦＢＳを含有するＰＢＳ）中で４倍連続希釈した。一次抗体を含まない、染色緩衝液のみの試料も対照として含まれた。抗体滴定物を、Ｖ底マイクロプレートに５０ｕｌウェルで播種した。一次ヒトおよびカ二ガニカルサルＴ細胞を、ＰＢＳ中で１：１０００に希釈されたＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ（商標）Ｆｉｘａｂｌｅ Ｖｉｏｌｅｔ Ｄｅａｄ Ｃｅｌｌ染色（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて１５分間染色した。細胞を２回洗浄し、２％のＦＢＳを含有するＰＢＳ中で再懸濁した。ＣＤ４＋サルＴ細胞を取り除くために、カニクイザルＣＤ４＋Ｔ細胞と反応するＢＤ ＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓからのＣＤ４細胞を、サルＴ細胞と氷上で３０分間インキュベートし、続いて染色緩衝液で１回洗浄した。染色緩衝液中のヒトＣＤ８陽性およびサルＴ細胞は、約１５０，０００個のＴ細胞を含有する細胞懸濁液５０ｕｌが、滴定抗体を含有する９６ウェルＶ底マイクロプレートのウェルに添加されるように播種した。従って、抗体を２倍希釈し、それにより、最終濃度は、ヒトＣＤ８陽性Ｔ細胞とインキュベートした抗体では１００ｎＭ～２４ｐＭの範囲であって、またはサルＴ細胞とインキュベートした抗体では１００ｎＭ～０．１０ｐＭの範囲であった。細胞を、氷上で３０分間一次抗体とインキュベートし、染色緩衝液（２％のＦＢＳで補充されたＰＢＳ）で二回洗浄し、二次アロフィコシアニン（ＡＰＣ）ヤギ抗マウスＩｇＧ抗体を、２μｇ／ｍＬの濃度ですべてのウェルに添加し、氷上で３０分間インキュベートした。次いで、試料を染色緩衝液で１回洗浄した、その後、染色緩衝液で１：１で希釈されたＢＤ Ｃｙｔｏｆｉｘに固定させた。固定緩衝液を除去した後、細胞を染色緩衝液中に再懸濁し、濾過し、その後、ベックマン・コールターＣｙｔｏｆｌｅｘフローサイトメトリー測定器上で分析した。試料をＦｌｏｗＪｏ１０ソフトウェアで分析し、その結果、抗体結合に対して生存可能なＣＤ８陽性の単一細胞のみを評価した。ＡＰＣの幾何学的ＭＦＩを決定し、抗体濃度に対してプロットし、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ（商標）において４パラメータロジスティック方程式を用いて、１００ｎＭの濃度から始まる、ヒトＣＤ８陽性Ｔ細胞には８データ点に基づいて、またはカニクイザルＴ細胞には１２データ点に基づいて、ＥＣ５０値を決定した。
結果
ヒトＣＤ８陽性Ｔ細胞およびカニクイザルＴ細胞に結合するｍＡｂ１抗体のフローサイトメトリー分析。
ｍＡｂ１のヒトおよびサルＣＤ８に結合する能力を、フローサイトメトリーにより評価した（図１）。これらの実験では、無関係なアイソタイプと一致した抗体を、陰性対照として使用した。ｍＡｂ１の用量依存的結合を、ヒトおよびサルＣＤ８陽性Ｔ細胞の両方で観察した。ｍＡｂ１は、２５ｎＭにおいて、アイソタイプ対照抗体と比較して、ＭＦＩのおおよそ２，７７８倍の増加を伴いヒトＣＤ８陽性Ｔ細胞に対して０．３７ｎＭのＥＣ５０値を示した。ｍＡｂ１は、０．３３ｎＭのＥＣ５０値でカニクイザルＴ細胞と結合し、２５ｎＭにおいて、アイソタイプ対照と比較してＭＦＩのおよそ１，４７５倍の増加を示した。表３を参照されたい。アイソタイプ対照は、ヒトまたはサルＴ細胞のいずれかに対しても用量依存的結合を示さなかった。これらの結果は、ｍＡｂ１が、ヒトおよびサルのＣＤ８と交差反応し、両方の種のＣＤ８に類似のＥＣ５０で結合することを示している。
Figure 0007304846000018
Figure 0007304846000019
実施例４：ｍＡｂ１の存在下での活性化Ｔ細胞によって変更されたＩＦＮγ産生
Ｔ細胞は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）が標的細胞上のＭＨＣ分子によって提示される外来抗原を特異的に認識するときに活性化される。この相互作用は、相互作用する標的細胞上の、ＭＨＣＩＩまたはＭＨＣＩの非可変領域にそれぞれ結合するＴ細胞上の共受容体（ＣＤ４およびＣＤ８など）の存在によって強化され得る。さらに、これらの共受容体は、チロシンタンパク質キナーゼＬｃｋとのそれらの細胞質ドメインとの会合を通してＴ細胞活性を調節するのに直接的な役割を有する。共受容体とＭＨＣ分子との間の相互作用を妨害することは、Ｔ細胞活性に影響を与える可能性がある。ＣＤ８特異的抗体がＴ細胞活性を変化させるかどうかを識別するために、混合リンパ球反応（ＭＬＲ）アッセイを採用した。ＭＬＲアッセイは、インビトロのＴ細胞を活性化する生理学的に妥当な手段である。一方向性ＭＬＲでは、１つの個体からの白血球を、別の遺伝子学的に異なる個体の増殖阻止白血球と共培養する。同種の決定因子の不適合性は、Ｔ細胞活性化につながり、これはサイトカインの産生および／または増殖によって評価され得る。サイトカインＩＦＮγおよびＩＬ－２、ならびに増殖は、一般に、ＣＤ４＋Ｔ細胞活性のための読み出しとして使用される。しかしながら、ＣＤ８陽性エフェクターＴ細胞活性は、ＩＦＮγのそれらの産生によって最良に反映されるが、ＩＬ－２および増殖はバイスタンダー効果の結果であり得、活性化ＣＤ８陽性Ｔ細胞の割合に直接関連していないことが観察されている（Ａｎｔｈｏｎｙ ｅｔ ａｌ．２０１２－Ｄｉｓｓｅｃｔｉｎｇ ｔｈｅ Ｔ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ：Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ Ａｓｓａｙｓ ｖｓ．Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｓｉｇｎａｔｕｒｅｓ ｂｙ ＥＬＩＳＰＯＴ－Ｃｅｌｌｓ，１，１２７－１４０）。
ヒトＣＤ８陽性Ｔ細胞のＭＬＲアッセイ：
ＰＢＭＣをヒト白血球パックから単離し、その後、陰性単離によって処理し、によって加工して、非付着のＣＤ８陽性Ｔ細胞を得た。ＣＤ８陽性Ｔ細胞を使用して一方向性ＭＬＲアッセイを実施し、ｍＡｂ１が、ＩＦＮγ産生によって示されるＴ細胞活性に影響を及ぼすかどうかを評価した。
ヒト白血球パックからのＰＢＭＣおよびヒトＣＤ８陽性Ｔ細胞の単離：
ヒトＰＢＭＣを、ＮＹ血液センターから得られた健康なドナーからの末梢血の４つの白血球パックから単離した。ＰＢＭＣの単離を、５０ｍｌのＳｅｐＭａｔｅ（商標）管を使用して、製造業者の推奨されるプロトコルに従って、密度勾配遠心分離によって達成した。簡潔に述べると、１５ｍｌのＦｉｃｏｌｌ－Ｐａｑｕｅ ＰＬＵＳを５０ｍｌのＳｅｐＭａｔｅ（商標）管に層状に置き、その後、ＰＢＳで１：２で希釈した３０ｍｌの白血球を添加した。次のステップを、ＳｅｐＭａｔｅ（商標）の製造業者のプロトコルに従って行った。単離されたＰＢＭＣの一部（＞３００×１０＾６）を、１０％のＤＭＳＯを含有するＦＢＳ中で、バイアル当たり５０００万個の細胞の濃度で凍結させた。ＰＢＭＣ単離後、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ ＢｉｏｔｅｃからのヒトＣＤ８ Ｔ細胞単離キットを、製造業者のプロトコルに従ってを使用して、ＣＤ８陽性Ｔ細胞を濃縮した。続いて、単離されたＣＤ８陽性Ｔ細胞を、１０％のＤＭＳＯを含有するＦＢＳ中で、バイアル当たり５０００万個の細胞の濃度で凍結させた。ＰＢＭＣおよびＣＤ８陽性Ｔ細胞を、ベンゾナーゼヌクレアーゼを含有する、１次培養培地（１０％のウシ胎児血清および０．０１ｍＭのベータ－メルカプトエタノールを補充したＸ－Ｖｉｖｏ１５培地）において、５００Ｕのベンゾナーゼヌクレアーゼを含有する一次培養培地１０ｍｌ当たり５０００万個の濃度で、ＭＬＲアッセイセットアップの当日に解凍した。
ＭＬＲアッセイセットアップ
一次細胞培養培地（１２５ｕｌ／ウェル）を、丸底マイクロタイタープレートの各ウェルに播種した。ｍＡｂ１およびアイソタイプ対照の、４００ｎＭの濃度で始まる、３点の１０倍連続希釈を、一次培養培地中で行った。これから、２５ｕｌ抗体を、丸底マイクロプレートのウェルに三通りで播種した。抗体は、各ウェルの全容量の８分の１であり、最終抗体濃度５０ｎＭ、５ｎＭ、および０．５ｎＭにした。抗体を含まず、一次培養培地のみのウェルも、対照として含めた。同じ３人のドナーからの陰性単離されたＣＤ８陽性Ｔ細胞およびこれらの同じ３人のドナーからのＰＢＭＣ、並びについあのドナーをＭＬＲアッセイで使用した。ＰＢＭＣを、１２×１０＾６細胞／ｍｌの濃度で一次刺激培地中で５０ｕｇ／ｍＬまで希釈したマイトマイシンＣで処理した。３７℃／５％のＣＯ２で１時間のインキュベーション後に、ＰＢＭＣを５０ｍｌの円錐形管に集めて、一次細胞培養培地で合計３回洗浄した。これらの細胞を一次培養培地中の１２×１０＾６細胞／ｍｌの最終濃度に再懸濁し、２５ｕｌを丸底マイクロタイタープレートのウェルに添加し、ウェル当たり３００，０００個のＰＢＭＣの最終濃度を得た。さらに、ＰＢＭＣを含まない、培地およびＴ細胞のみのウェルもまた、対照して含まれ、Ｔ細胞単独でＩＦＮγを産生することができるかどうかを決定した。Ｔ細胞を、一次培養培地中で７×１０＾６細胞／ｍｌの濃度に調製し、丸底マイクロタイタープレートのウェルに播種して、これにより、各ウェルにおけるＴ細胞の最終濃度は、１７５，０００であった。ＰＢＭＣの単独では、ＩＦＮγ産生に寄与しないことを確認するために、Ｔ細胞を含まない、培地のみのウェルもまた、対照としての役割を果たすために含まれた。１人のドナーのみのＴ細胞および１人のドナーのマイトマイシンＣ処置されたＰＢＭＣが、各ウェルに含まれた。３人のドナーのＴ細胞の各々は、それ自体のまたは異なるドナーのＰＢＭＣとペアリングした。３７℃／５％のＣＯ２での７２時間のインキュベーション後に、マイクロタイタープレートを遠心分離して細胞をペレット化して、２０ｕｌの培地上清を収集した。収集した上清からの５ｕｌを、製造業者のプロトコルに従ってヒトＩＦＮγＡｌｐｈａＬＩＳＡアッセイで試験した。測定値を、マルチラベルプレートリーダーＥｎｖｉｓｉｏｎ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）上で取得した。生のＲＬＵ値をＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ（商標）の棒グラフにプロットし、抗体を含有するウェルにおけるＩＦＮγ産生量を、ＰＢＭＣおよびＴ細胞のみを含有するウェルと比較し、ＩＦＮγ産生の阻害率として計算した。
結果
ｍＡＢ１がＣＤ８ Ｔ細胞活性に影響を与える能力を、一方向性ＭＬＲにおけるＩＦＮγ産生により測定した（図２）。これらの実験では、無関係なアイソタイプと一致した抗体を、対照として使用した。２つの異なるＴ細胞／ＰＢＭＣペアについての結果および代表的画像は、ｍＡｂ１が、用量依存的にＩＦＮγ産生を減少させることができることを示している。この阻害の程度は、１人のドナー／ＰＢＭＣペア（ＭＬＲ反応１）が、ＩＦＮγの、１０％の阻害を、５ｎＭのｍＡｂ１処置において示し、一方別のドナー／ＰＢＭＣペア（ＭＬＲ反応２）が、ＩＦＮγの＞５０％の阻害を示すために、ドナー依存性であるように見える。両方の反応では、アイソタイプ対照は、５ｎＭで、ＩＦＮγ産生に及ぼす最小の影響を有した。表４を参照されたい。
ＩＦＮγ阻害率の計算：
Figure 0007304846000020
Figure 0007304846000021
実施例５：ｍＡｂ１の存在下での変更されたＴ細胞活性
Ｔ細胞は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）が、抗原提示細胞（ＡＰＣ）上で、主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）分子（ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）としても知られる）によって提示された外来性抗原を特異的に認識するときに活性化される。この相互作用は、相互作用するＡＰＣ上の、ＭＨＣＩＩまたはＭＨＣＩの非可変領域にそれぞれ結合するＴ細胞上の共受容体（ＣＤ４およびＣＤ８など）の存在によって強化され得る。さらに、これらの共受容体は、チロシンタンパク質キナーゼＬｃｋとのそれらの細胞質ドメインとの会合を通してＴ細胞活性を調節するのに直接的な役割を有する（Ｇｏｌｄｒａｔｈ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｌｅｃｔｉｎｇ ａｎｄ ｍａｉｎｔａｉｎｉｎｇ ａ ｄｉｖｅｒｓｅ Ｔ ｃｅｌｌ ｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅ，Ｎａｔｕｒｅ ４０２：２５５－２６２，１９９９；Ｄｅｎｋｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｏｌｅ ｆｏｒ ＣＤ８ ｉｎ Ｂｉｎｄｉｎｇ ｏｆ ＭＨＣ Ｔｅｔｒａｍｅｒｓ ｔｏ ＴＣＲ：ＣＤ８ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｂｌｏｃｋ Ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｂｉｎｄｉｎｇ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｔｕｍｏｒ－Ｓｐｅｃｉｆｉｃ ＭＨＣ－Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｔｅｔｒａｍｅｒｓ ｔｏ ＴＣＲ，Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２００１，１６７：２７０－２７６；Ｃａｎｔｒｅｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｔ ｃｅｌｌ Ａｎｔｉｇｅｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｓｉｇｎａｌ Ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２００２，１０５．４：３６９-３７４；およびＷａｎｇ ｅｔ ａｌ．２００９）。
ＣＤ８分子は、免疫系の細胞のサブセット表面上のホモ二量体（ＣＤ８αα）またはヘテロ二量体（ＣＤ８αβ）として存在する。ＴＣＲαβ Ｔ細胞では、ＣＤ８αβヘテロ二量体形態が発現される。共受容体とＭＨＣ分子との間の相互作用を妨害することは、Ｔ細胞活性に影響を与える可能性がある。
ＣＤ８特異的抗体がＴ細胞活性を変化させるかどうかを識別するために、Ｔ細胞／ＡＰＣベースのバイオアッセイを採用した。
レポーターＴ細胞の改変：
ＴＣＲシグナル伝達事象は、アクチベータ－タンパク質１（ＡＰ－１）、活性化Ｔ細胞の核因子（ＮＦＡＴ）または活性化Ｂ細胞の核因子カッパ軽鎖－エンハンサー（ＮＦκＢ）などの様々な転写因子によって駆動されるレポーター遺伝子によって監視され得る（Ｓｈａｐｉｒｏ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｔｔｉｎｇ Ｅｄｇｅ：Ｎｕｃｌｅａｒ Ｆａｃｔｏｒ ｏｆ Ａｃｔｉｖａｔｅｄ Ｔ Ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ＡＰ－１ Ａｒｅ Ｉｎｓｕｆｆｉｃｉｅｎｔ ｆｏｒ ＩＬ－２ Ｐｒｏｍｏｔｅｒ Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ：Ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔ ｆｏｒ ＣＤ２８ Ｕｐ－Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ＲＥ／ＡＰ，Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１９９８，１６１（１２）：６４５５－６４５８）。
ヒトＴ細胞クローン、ＪＲＴ３．Ｔ３．５を、転写因子ＡＰ－１の制御下で、レポーター遺伝子、ホタルルシフェラーゼを発現するように改変した。抗生物質耐性細胞を、ヒトＣＤ２８、（ＮＰ＿００６１３０．１）、１Ｇ４ ＴＣＲアルファベータサブユニット（Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．２０００）、ならびにヒトＣＤ８アルファおよびベータサブユニット（アルファ受託番号ＮＰ＿００１７５９．３およびベータ受託番号ＮＰ＿００４９２２．１）を用いた形質転換によって、さらに操作した。．単一のクローンを生成し（ＪＲＴ３．Ｔ３／ＡＰ１－Ｌｕｃ／ＣＤ２８／ＣＤ８ＡＢ／１Ｇ４ＡＢクローン１８）、Ｔ細胞／ＡＰＣレポーターバイオアッセイ実験で使用した。確立されたＴ細胞のレポーター株を、１００ｕｇ／ｍＬのハイグロマイシン＋５００ｕｇ／ｍＬのＧ４１８＋１ｕｇ／ｍＬのピューロマイシンを補充したＲＰＭＩ＋１０％のＦＢＳ＋ペニシリン／ストレプトマイシン／グルタミン（Ｐ／Ｓ／Ｇ）中に維持した。
ＡＰＣの改変：
マウス線維芽細胞３Ｔ３細胞株をＨＬＡ－Ａ＊０２対立遺伝子（受託番号Ｐ０１８９２－１）およびヒトβ２－ミクログロブリン（ｈβ２Ｍ；受託番号ＮＰ＿００４０３９．１）と共に、ＮＹ－ＥＳＯ－１ １５７－１６５、癌－精巣抗原ＮＹ－ＥＳＯ－１に由来するＨＬＡ－Ａ２＊０２拘束性ペプチド（受託番号ＮＰ＿００１３１８．１）を安定して過剰発現するように改変した。
確立されたＡＰＣ株を、１００ｕｇ／ｍＬのハイグロマイシン＋５００ｕｇ／ｍＬのＧ４１８＋１ｕｇ／ｍＬのピューロマイシンを補充したＤＭＥ＋１０％のＢＣＳ＋Ｐ／Ｓ／Ｇ中に維持した。
Ｔ細胞／ＡＰＣの刺激：
開発されたバイオアッセイにおいて、改変されたＡＰＣ上のＨＬＡ－Ａ２／ＮＹＥＳＯ１（１５７－１６５）ＭＨＣＩ／ペプチド複合体は、１Ｇ４ ＴＣＲに結合し、かつこれを刺激し（Ｒｏｂｂｉｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｓｉｎｇｌｅ ａｎｄ Ｄｕａｌ Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄ Ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎｓ ｉｎ ＴＣＲ ＣＤＲｓ Ｃａｎ Ｅｎｈａｎｃｅ Ａｎｔｉｇｅｎ－Ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｔ Ｃｅｌｌ Ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００８；１８０（９）：６１１６-６１３１）、改変されたレポーターＴ細胞株においてＡＰ－１の転写活性の増加をもたらす。ＡＰ－１は、次に、アッセイの読み出しとして使用される、ルシフェラーゼレポーター遺伝子の転写を活性化する。このバイオアッセイでは、ＣＤ８モノクローナル抗体を試験して、それらの遮断活性を評価した。
ルシフェラーゼアッセイのセットアップ：
１０％のＦＢＳおよびＰ／Ｓ／Ｇで補充されたＲＰＭＩ１６４０をアッセイ培地として用いて、細胞懸濁液および抗体希釈物を調製して、実験当日に抗ＣＤ８抗体のスクリーニングを実施した。
実験前日、改変されたレポーターＴ細胞を、５×１０＾５細胞／ｍＬで選択培地中で培養した。抗ＣＤ８モノクローナル抗体およびアイソタイプと一致した陰性対照の１０点の１：３連続希釈物を調製した。モノクローナル抗体の希釈は、１５ｐＭ～１００ｎＭの範囲であった。最後の希釈点は、抗体を含まなかった。一晩培養されたレポーターＴ細胞およびＡＰＣ細胞を、それぞれ２×１０＾６／ｍＬ、および４×１０＾５／ｍＬでアッセイ培地中で再懸濁した。試薬を９６ウェル白色平坦な底部プレートに、次の順序で添加した：モノクローナル抗体の連続希釈物を対応するウェルにピペッティングし、続いて１×１０＾４細胞／ウェルのＡＰＣ細胞を添加した。プレートを、室温で１５～３０分間インキュベートした。次いで、５×１０＾４個のレポーターＴ細胞をＡＰＣの上部に添加し、試料を３７℃／５％のＣＯ２で、さらに４～６時間インキュベートし、その後１００ｕＬのＯＮＥ－Ｇｌｏ（商標）（Ｐｒｏｍｅｇａ）試薬を添加し、ＡＰ１－Ｌｕｃ活性を検出した。放射された光を、マルチラベルプレートリーダーＥｎｖｉｓｉｏｎ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）上で発光量（ｒｅｌａｔｉｖｅ ｌｉｇｈｔ ｕｎｉｔ（ＲＬＵ））を捕捉した。すべての段階希釈物を、二通りで試験した。
ＣＤ８モノクローナル抗体のＥＣ５０値を、ＧｒａｐｈＰａｄソフトウェアを使用して、１０点用量反応曲線にわたる４パラメータロジスティック方程式から決定した。バイオアッセイにおけるＴ細胞応答の減少率を以下に示すように計算した：
減少率＝１００％－［１００ｎＭでの平均ＲＬＵ ｍＡｂ×１００／０ｎＭでの平均ＲＬＵ］
結果
表５および図３は、ｍＡｂ１および市販のクローンＲＰＡ－Ｔ８が、それぞれ、１．２ｎＭおよび１６１ｐＭのＩＣ５０で、改変されたＴ細胞におけるルシフェラーゼ活性を低下させることを示している。アイソタイプ１およびアイソタイプ２は、予想される用量依存的阻害を示していない。１００ｎＭでは、ｍＡｂ１は、Ｔ細胞活性を約８９．７％低下させ、一方でクローンＲＰＡ－Ｔ８は、ブ９７．９％遮断する。クローンＲＰＡ－Ｔ８と比べると、ｍＡｂ１は、ＣＤ８／ＭＨＣＩの相互作用をより弱く遮断する。両方の抗体は、ＢｉａｃｏｒｅおよびＥＬＩＳＡ実験において、ヒトＣＤ８αサブユニットに結合することが示された。
Figure 0007304846000022
実施例６：Ｒａｊｉ／ＰＢＭＣ異種移植片および臨床試料におけるＣＤ８のＬＣ－ＭＳ定量化
凍結組織試料（Ｒａｊｉ／ＰＢＭＣ腫瘍、マウス脾臓、および黒色腫組織）を、プロテアーゼ阻害剤を含む１×ＲＩＰＡ溶解緩衝液（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）中で溶解した。組織を小片に切断し、密着したダウンス型ホモジナイザー中で１ｍＬの溶解緩衝液で均質化した。溶解物を、超音波処理を１０分ごとに３０秒間行いながら、氷上で３０分間インキュベートし、完全なタンパク質抽出物を得た。溶解物を、１４，０００ｇで１０分間遠心分離した。タンパク質濃度をＢＣＡアッセイにより測定した。各試料を１ｍｇ／ｍＬに希釈し、１４，０００ｇで１０分間遠心分離し、アリコートで－８０℃にて保存した。
１００μＬのビオチニル化抗ＣＤ８α結合タンパク質（２μｇ／ｍＬ）をストレプトアビジンコート９６ウェルプレート（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）の各ウェルに添加した。次いで、プレートを室温で２時間インキュベートし、その後、ＰＢＳＴ（ｐＨ７．４、０．０５％のＴｗｅｅｎ－２０）で３回洗浄した。マウスの脾臓溶解物を代替マトリクスとして使用して、ＣＤ８の定量化のための標準曲線を生成した。組換えＣＤ８α．ｍｍｈを、０．３９～１００ｎｇ／ｍｇのタンパク質（１：２連続希釈物）の範囲の最終濃度で、１００μｇのマウス脾臓溶解物の各々にスパイクした。１００μＬの試験試料を各ウェルに適用し、Ｒ．Ｔ．で２時間インキュベートした。次いで、各ウェルを、２００μＬのＰＢＳＴで３回、２００μＬのｄｄＨ２Ｏで１回洗浄した。捕捉されたＣＤ８を、１００μＬの溶出緩衝液（５０％のＡＣＮ中３％のギ酸）で溶出し、新しい９６ウェルプレートに移した後に、完全に乾燥させた。
各試料を、１０μＬの８Ｍ尿素／ＴＣＥＰ緩衝液中で、３７℃で１時間変性させた。ＣＤ８αからのシグネチャーペプチド（ＡＡＥＧＬＤＴＱＲ）を選択的に監視し、対応する重同位体標識ペプチド（Ａｒｇ－１３Ｃ６ １５Ｎ４／Ｌｙｓ－１３Ｃ６ １５Ｎ２を有する同じＡＡ配列）を内部標準として各試料にスパイクした。標準および試験試料を、５μＭのＩＡＡで、Ｒ．Ｔ．にて３０分間アルキル化し、Ｌｙｓ－Ｃ（１：１００ｗ／ｗ）で４時間消化し、次いでトリプシン（１：２０ｗ／ｗ）で３７℃にて一晩消化した。各試料に１０％のギ酸を添加することによって、消化を停止させた。
各処理された試料（１５μＬ）を予め平衡化されたナノＣ１８トラップカラムに注入し、イージーナノＣ１８分離カラムによって分離し、その後、Ｑ Ｅｘａｃｔｉｖｅ ｐｌｕｓ質量分析計を使用して、並列反応モニタリング（ＰＲＭ）分析を行った。各タンパク質の較正曲線を、Ｌ／Ｈピーク面積比をスパイクインペプチドの濃度に対してプロットすることによって確立した。各組織試料中の多数の内因性ＣＤ８αを、較正曲線に基づいて計算した。ＣＤ８α．ｍｍｈ参照基準の最も低い濃度（０．９６ｎｇ／ｍｇの内因性ＣＤ８αと等価）は、アッセイのダイナミックレンジ内であって、アッセイのＬＬＯＱ（定量下限）として定義された。
結果
ＣＤ８α発現は、ＲＢＭＣ／Ｒａｊｉ注入したマウスからの５個の腫瘍および脾臓、Ｒａｊｉのみを注入したマウスの２個の腫瘍および脾臓、１０個の黒色腫臨床試料、ならびに５個の黒色腫の正常な隣接組織（ＮＡＴ）で分析した。組織重量、タンパク質量、抽出収率、およびＣＤ８発現を、表６に列挙した。Ｂｍａｘを、１ｇ／ｍＬでの腫瘍密度の見積りで、以下の方程式に基づいて計算した。
Figure 0007304846000023
Figure 0007304846000024
実施例７：抗ＣＤ８抗体ｍＡｂ１のｐ－ＳＣＮ－Ｂｎ－ＤＦＯとのコンジュゲーション
親抗ＣＤ８抗体、ｍＡｂ１（配列番号２／１０のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ配列ペアを有する）、およびアイソタイプ対照抗体を放射性標識を用いた免疫ＰＥＴ試験に好適であるように修飾するために、キレート化剤、ｐ－ＳＣＮ－ｂｎ－デフェロキサミン（ＤＦＯ；Ｍａｃｒｏｃｙｌｉｃｓ、カタログ番号：Ｂ－７０５））を、これらの抗体に結合させた。
修飾のために、１０Ｋ ＭＷＣＯスピンコンセントレーター（Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ－１５遠心濾過ユニット、ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、カタログ番号：ＵＦＣ９０１０２４）を用いて、ｍＡｂ１を、ＰＢＳ＋５％のグリセロール中で約２９ｍｇ／ｍＬに濃縮した。２１２，４００Ｍ－１ｃｍ－１のＭａｃＶｅｃｔｏｒ配列ベースの吸光係数、および１４５，６５４ｇ／ｍｏｌの分子量を使用して、濃度を、Ｎａｎｏｄｒｏｐ ２０００ ＵＶ／ＶＩＳ分光計（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）により決定した。濃縮抗体の５ミリグラムを、１０ｍｇ／ｍＬに、１００ｍＭのＮａＣＯ３、ｐＨ９．０（最終ｐＨが、９．０であることを確認した）を用いて希釈した。
別個のバイアルにおいて、ＤＦＯを、５０ｍＭのＤＦＯ濃度で、未希釈ジジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中で調製した。このＤＦＯ溶液を、最終溶液構成が、コンジュゲーション緩衝液、３倍のモル対モル過剰のＤＦＯを含む２％のＤＭＳＯ中で、１０ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ１であるように、抗体溶液に１／４増分で添加した。この溶液を、さらに攪拌することなく、３７℃の水浴中でインキュベートさせた。３７℃で３０分後、溶液を速やかにＮＡＰ－５脱塩カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、カタログ番号１７－０８５３－０２）を通過させ、ｐＨ５．５の１０ｍＭのヒスチジンを含有する緩衝液（配合緩衝液）で予め平衡化した。最終溶液を、シリンジフィルター（Ａｃｒｏｄｉｓｃ １３ｍｍシリンジフィルター、Ｐａｌｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、カタログ番号：４６０２）によって滅菌濾過した。
その後、抗体濃度およびＤＦＯ対抗体比（キレート部分対抗体比）を、ＵＶ／ＩＶ分光法によって測定した。図４を参照されたい。吸光度測定については、ＤＦＯコンジュゲート抗体を、２５２ｎｍ（Ａ２５２）、２８０ｎｍ（Ａ２８０）、および６００ｎｍ（Ａ６００）で配合緩衝液に対して測定した。計算については、次の方程式を使用して、バックグラウンドを、各吸光度で補正した：
Figure 0007304846000025
抗体濃度、コンジュゲート濃度、およびキレート部分対抗体比を、以下の方程式を用いて計算した：
抗体濃度の計算
Figure 0007304846000026
 コンジュゲート濃度の計算
Figure 0007304846000027
 キレート部分対抗体比の計算
Figure 0007304846000028
抗体コンジュゲートを、サイズ排除高速液体クロマトグラフィー（ＳＥ－ＨＰＬＣ）を使用して、凝集について試験し、２５ｕｇの試料を、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ２００ Ｉｎｃｒｅａｓｅ １０／３００ ＧＬカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、カタログ番号２８９９０９４４）上に注入し、ＰＢＳ移動相（０．７５ｍＬ／分）を用いて、２８０ｎｍで監視した。図５を参照されたい。抗体の完全性を、ＧＸＩＩマイクロ流体電気泳動図（Ｃａｌｉｐｅｒ、チップＩＤ：Ｐ９９Ｐ－０５６３Ｎ－０３）によって評価し、製造業者の指示に従ってセットアップした。図６を参照されたい。
結果
ＵＶ／ＶＩＳ分光法によって示されるように、ｍＡｂ１はリジンを介してＤＦＯと首尾よくコンジュゲートされた。計算されたキレート部分対抗体比は、１．０～２．０の予想される範囲内であった。ＳＥＣトレースは、検出可能な低分子量種を有さない９７．５％の単量体生成物を示している。この結果は、還元状態および非還元状態の両方の電気泳動図によって裏付けられる。
Figure 0007304846000029
Figure 0007304846000030
実施例８：ＤＦＯとコンジュゲートされたモノクローナル抗体の８９Ｚｒキレート化
免疫ＰＥＴインビボ試験での使用に関しては、ＤＦＯとコンジュゲートされた抗ＣＤ８抗体、ｍＡｂ１－Ｌ２を、８９Ｚｒで放射性標識した。
ＤＦＯ－Ａｂ免疫コンジュゲート溶液を、試験番号１および２の両方に対して同一の方法でキレート化する前に配合した。配合物組成を表９に列挙する。手短に言えば、ＤＦＯ－Ａｂ免疫コンジュゲート（２１２ｕｇ）を、先ず、１ＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．２中で１．０６ｍｇ／Ｍｌにさせた。別個に、８９Ｚｒ溶液を、表１０に示した対応する各試験の組成を用いて調製した。在庫の８９Ｚｒ－シュウ酸溶液を、３Ｄ Ｉｍａｇｉｎｇから得た。溶液の最終放射活性を、Ｃａｐｉｎｔｅｃ ＣＲＣ－２５Ｒ線量較正器（Ｃａｐｉｎｔｅｃ番号５０２）を使用して最初に確認し、次いでＤＦＯ－Ａｂ免疫コンジュゲート溶液と直ちに合わせて、穏やかに混合し（上下にピペッティングして）、その後、室温で４５分間インキュベートした。総反応量は、１２００ｕＬであった。
インキュベーション後、重力供給脱塩のために、ｐＨ５．４での２５０ｍＭの酢酸ナトリウムで予め平衡化された脱塩カラム、ＰＤ－１０（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、カタログ番号１７－０８５１－０１）へ混合物を移した。反応の内容物がカラム床に入った後、貫流を廃棄した。生成物を、ｐＨ５．４での２５０ｍＭの酢酸ナトリウム（配合緩衝液）で溶出し、製造業者の指示に従って溶出物を収集した。ここでＤＦＯ－Ａｂ放射免疫コンジュゲートと称される生成物の濃度をＵＶ／ＶＩＳ分光法によって測定し、方程式を使用して、適切な吸光係数および２８０ｎｍでの吸収を用いて計算した：
ｍｇ／ｍＬでの濃度＝２８０ｎｍでの吸収÷２８０ｎｍでの吸光係数
表１１を参照されたい。
グラムで測定した最終的な質量を、表１２に記録した。次いで、放射活性を、線量較正器（Ｃａｐｉｎｔｅｃ ＣＲＣ－２５Ｒ）を用いて測定し、表１２に報告した。最終材料（５ｕｇ）を、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ２００ Ｉｎｃｒｅａｓｅ １０／３００ ＧＬカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、カタログ番号２８９９０９４４）を、ＰＢＳ移動相を０．７５ｍＬ／分の流量で使用する、直列に接続されているＵＶ２８０および放射性同位元素検出器（ガンマ放射）を備えたＳＥＣ－ＨＰＬＣ（Ｌａｂｌｏｇｉｃ Ｒａｄｉｏ－ＴＬＣ／ＨＰＬＣ検出器、ＳＣＡＮ－ＲＡＭを備えたＡｇｉｌｅｎｔ １２６０）を用いて分析した。総タンパク質ピーク（約１０～約１８分）と非標識８９Ｚｒピーク（約２５分）の組み込みを比較することによって、放射性トレースを、放射化学的純度（１００％－非標識８９Ｚｒのパーセント）を決定するために使用した。単量体純度の割合を、高分子量（ＨＭＷ）種のピーク（約１０分～約１５分）の単量体（約１５～約１８分）の組み込みを比較することによって、ＵＶ２８０トレースによって決定した。
各ＤＦＯ－Ａｂ放射免疫コンジュゲートの比放射能およびタンパク質回収（％）を、以下の方程式を使用して決定した：：
ａ．ｍｇでのコンジュゲートの質量＝ｍｇ／ｍＬでの濃度×グラムでの溶液の質量
ｂ．ｍＣｉ／ｍｇでの比放射能＝ｍＣｉでのバイアルの活性÷ｍｇでのコンジュゲートの質量
ｃ．タンパク質回収＝開始時のコンジュゲート質量（ｍｇ）÷ｍｇでのコンジュゲートの質量
最後に、概観を書き留め、表１２に記録した。結果を以下の表１２に統合する。図７および図８に示すラジオ－ＳＥＣ－ＨＰＬＣクロマトグラムは、少なくとも９９．９％の放射化学的純度を確認している。図９および図１０に示すＵＶ２８０－ＨＰＬＣ ＳＥＣクロマトグラムは、高い単量体生成物（＞９０％）を確認している。
データは、ＤＦＯ－放射免疫コンジュゲートが、両方の試験において、８９Ｚｒで、成功裏にかつ一貫して放射性標識されたことを立証している。
Figure 0007304846000031
Figure 0007304846000032
Figure 0007304846000033
Figure 0007304846000034
実施例９：免疫反応性
実施例７および８に従って調製された放射性標識された抗ＣＤ８抗体の免疫反応性（ＩＲ）を、以下のように決定した。すべての緩衝溶液／すすぎ溶液を、ＰＢＳおよび１０％のウシ胎児血清（Ｓｅｒａｄｉｇｍ、カタログ番号１５００－５００）で作製した。表１３は、各ＩＲアッセイに使用される細胞数を提供する。各アッセイについて、約１０７個のＪＲＴ３．Ｔ３／ＡＰ１－ｌｕｃ／ｈＣＤ２８／ｈＣＤ８ΑＢ １Ｇ４細胞を、０．５Ｍｌの最終容量にさせた。２０ｎｇのそれぞれのＤＦＯ－Ａｂ放射免疫コンジュゲートを、この溶液に添加し、チューブ回転装置上で連続的に混合しながら、インキュベータ（ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｆｏｒｍａ Ｓｔｅｒｉ－Ｃｙｃｌｅ ＣＯ２）内で、３７℃、５％のＣＯ２で４５分間インキュベートした。その後、細胞を１５００ｒｐｍで５分間遠心分離し、「細胞ペレットＡ」を作製した。上清（約０．５ｍＬ）を除去し、「細胞ペレットＢ」と呼ばれる、未処置細胞の別のペレットに導入し、３７℃、５％のＣＯ２で、４５分間、再度インキュベートさせた。細胞ペレットＢをインキュベートしている間に、細胞ペレットＡを、１ｍＬの新鮮な培地で３回すすぎ、１５００ｒｐｍで５分間遠心分離した。それぞれのすすぎ物を回収し、後の分析のために保存した。４５分間の細胞ペレットＢのインキュベーション時間後に、これを１ｍＬの新鮮な培地で３回すすぎ、１５００ｒｐｍで５分間遠心分離した。再び、分析のためにすすぎ物を回収した。
各免疫－放射免疫コンジュゲートについての細胞ペレット、すべてのすすぎ物、および上清の放射活性を、自動ガンマカウンター（２４７０ Ｗｉｚａｒｄ２、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）で計数した。ＩＲパーセントを方程式１によって決定し、表１４に記録した：
Figure 0007304846000035
表１４に示されるように、抗体放射免疫コンジュゲートは、コンジュゲーションおよび放射性標識後に、少なくとも５５％の免疫反応性を保持していた。
Figure 0007304846000036
Figure 0007304846000037
実施例１０：ｈＣＤ８を発現するマウスにおけるインビボでの放射性標識された抗ＣＤ８抗体の選択的局在化
８９Ｚｒ－ＤＦＯ－ｍＡｂ１の投与およびＰＥＴ／ＣＴ撮像
ｈＣＤ８を発現する１６週齢のマウスに、８９Ｚｒ－ＤＦＯ－ｍＡｂ１を、０．５または１．５ｍｇ／ｋｇのタンパク質用量で注射した。０．５ｍｇ／ｋｇの用量で注射したマウスは、７μｇの放射性標識されたｍＡｂ１－Ｌ２－２０１６１１１５（約４８μＣｉ）および追加の８μｇのＤＦＯとコンジュゲートされていないｍＡｂ１（Ｌ１）を、最終の注入されたタンパク質用量を得るために補充として受容した。１．５ｍｇ／ｋｇの用量で注射したマウスは、７μｇの放射性標識されたｍＡｂ１－Ｌ２－２０１６１１１５（約４８μＣｉ）および追加の３８μｇのＤＦＯとコンジュゲートされていないｍＡｂ１（Ｌ１）を、最終の注入されたタンパク質用量を得るために補充として受容した。
抗体局所化のＰＥＴ撮像を、８９Ｚｒ－ＤＦＯ－ｍＡｂ１の投与の６日後に評価した。Ｓｏｆｉｅ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｇ８ ＰＥＴ／ＣＴを用いて、ＰＥＴ／ＣＴ画像を収集した（Ｓｏｆｉｅ ＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓおよびＰｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）。計器は、画像収集前に、８９Ｚｒの検出のために、事前較正した。エネルギー窓は、視野の中央で１．４ｍｍの再構成された解像度で、１５０～６５０ｋｅＶの範囲であった。イソフルランを使用して誘導麻酔を受けたマウスは、撮像中にイソフルランの連続的な流れ下に保持された。Ｇ８収集ソフトウェアを使用して、静的な１０分の画像を収集し、その後に、事前構成された設定を使用して再構成した。画像データを、減衰およびその他のパラメータに対して補正した。ＣＴ画像をＰＥＴ収集後に収集し、その後ＰＥＴ画像と共に位置合わせした。画像を、ＶｉｖｏＱｕａｎｔ後処理ソフトウェア（ｉｎｖｉＣＲＯ Ｉｍａｇｉｎｇ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ）を使用して作成した。
８９Ｚｒ－ＤＦＯ－ｍＡｂ１の生体分布：
生体分布試験のために、マウスを最終時点で（８９Ｚｒ－ＤＦＯ－ｍＡｂ１投与から６日後）安楽死させて、心臓穿刺を介して血液を採取した。組織を切除し、計数管中に置き、秤量した。８９Ｚｒについての計数毎分（ＣＰＭ）での計数データを、自動ガンマカウンター（Ｗｉｚａｒｄ ２４７０、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を使用して取得した。注入用量毎グラムのパーセント（％ＩＤ／ｇ）を、注射材料から調製された標準を使用して、各試料について計算した。
結果
この実験は、８９Ｚｒ－ＤＦＯ－ｍＡｂ１の、ｈＣＤ８を発現するマウスの脾臓およびリンパ節において内因性Ｔ細胞上で発現されるヒトＣＤ８を標的とする能力を立証した。０．５ｍｇ／ｋｇの投与された低タンパク質用量は、１．５ｍｇ／ｋｇ（１０．３２±１．５４％ＩＤ／ｇ）のより高い投与タンパク質用量と比べて、放射性トレーサー注射から６日後の血液からのより速い抗原媒介クリアランス（３．５７±１．５０％ＩＤ／ｇ）を立証した。低投与タンパク質用量で注射したマウスの血液からのこのより速いクリアランスは、高い投与タンパク質用量で注射されたマウスよりも二次リンパ様器官における高い取り込みに寄与し、脾臓およびリンパ節で発現されたＣＤ８に対する抗原特異的な標的化を立証している。ｈＣＤ８を発現するマウスにおける、８９Ｚｒ－ＤＦＯ－ｍＡｂ１の注射後６日目での生体分布からの％ＩＤ／ｇ値を、表１５に示している。ｈＣＤ８を発現するマウスにおける、注射から６日後に０．５および１．５ｍｇ／ｋｇの８９Ｚｒ－ＤＦＯ－ｍＡｂ１の代表的ｉＰＥＴ画像を図１１に示す。
Figure 0007304846000038
実施例１１：マウスにおけるＲａｊｉ／ＰＢＭＣ腫瘍に対する放射性標識された抗ＣＤ８抗体の選択的局在化
本実施例は、Ｒａｊｉ細胞およびヒトＰＢＭＣで同時移植された雌ＮＳＧマウスにおけるジルコニウム－８９標識されたＤＦＯ－抗ＣＤ８抗体コンジュゲートのインビボ撮像およびエクスビボ生体分布を記載している。
腫瘍の移植および投与群の割り当て：
ＣＤ８標的化のための放射性標識された抗体の特異性を立証するために、２×１０６個のＲａｊｉ細胞を単独で、または５×１０５個のヒトＰＢＭＣ（ロット０１６０６１４、ＲｅａｃｈＢｉｏ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｓ）と共に同時に、雌ＮＳＧマウス（８～１０週齢、ＮＯＤ．Ｃｇ－Ｐｒｋｄｃｓｃｉｄ ＩＩ２ｒｇｔｍ１Ｗｊｌ／ＳｚＪ；Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｓ）の右脇腹に移植した。腫瘍増殖を監視し、腫瘍移植から１３～１４日後に、マウスを、８９Ｚｒ－ＤＦＯ－ｍＡｂ１投与に関して４つの群にランダム化した。ＲａｊｉおよびＲａｊｉ／ｈＰＢＭＣ腫瘍は、８９Ｚｒ－ＤＦＯ－ｍＡｂ１で投与されたとき、それぞれ、約３３５±６８ｍｍ３および約３７１±４０ｍｍ３であった。
８９Ｚｒ－ＤＦＯ－ｍＡｂ１の投与およびＰＥＴ／ＣＴ撮像：
皮下のＲａｊｉおよびＲａｊｉ／ｈＰＢＭＣ腫瘍を担持するマウスに、０．１ｍｇ／ｋｇ用量の８９Ｚｒ－ＤＦＯ－ｍＡｂ１（約６６μＣｉおよび２．８μｇのタンパク質）を注射した。
抗体局所化のＰＥＴ撮像を、８９Ｚｒ－ＤＦＯ－ｍＡｂ１の投与から６日後に評価した。Ｓｏｆｉｅ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｇ８ ＰＥＴ／ＣＴを用いて、ＰＥＴ／ＣＴ画像を収集した（Ｓｏｆｉｅ ＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓおよびＰｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）。計器は、画像収集前に、８９Ｚｒの検出のために、事前較正した。エネルギー窓は、視野の中央で１．４ｍｍの再構成された解像度で、１５０～６５０ｋｅＶの範囲であった。イソフルランを使用して誘導麻酔を受けたマウスは、撮像中にイソフルランの連続的な流れ下に保持された。Ｇ８収集ソフトウェアを使用して、静的な１０分の画像を収集し、その後に、事前構成された設定を使用して再構成した。画像データを、減衰およびその他のパラメータに対して補正した。ＣＴ画像をＰＥＴ収集後に収集し、その後ＰＥＴ画像と共に位置合わせした。画像を、ＶｉｖｏＱｕａｎｔ後処理ソフトウェア（ｉｎｖｉＣＲＯ Ｉｍａｇｉｎｇ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ）を使用して作成した。
８９Ｚｒ－ＤＦＯ－ｍＡｂ１の生体分布
生体分布試験については、８９Ｚｒ－ＤＦＯ－ｍＡｂ１投与から６日後の最終ＰＥＴスキャン後に、血液を心臓穿刺を介して採取した）。マウスを安楽死させ、次いでＲａｊｉおよびＲａｊｉ／ｈＰＢＭＣ腫瘍を他の正常組織と共に切除し、計数管に入れて計量した。８９Ｚｒについての計数毎分（ＣＰＭ）での計数データを、自動ガンマカウンター（Ｗｉｚａｒｄ ２４７０、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を使用して取得した。注入用量毎グラムのパーセント（％ＩＤ／ｇ）を、注射材料から調製された標準を使用して、各試料について計算した。
結果
本試験は、８９Ｚｒ－ＤＦＯ－ｍＡｂ１のｓ．ｃ．において腫瘍内ヒトリンパ球上で発現されたＣＤ８に対する抗原特異的標的化を立証している。ＮＳＧマウスにおいて、Ｒａｊｉ／ｈＰＢＭＣ腫瘍（３１．１１±８．８２の％ＩＤ／ｇ）をＲａｉのみの腫瘍（６．３９±０．９３％ＩＤ／ｇ）と比較した。Ｒａｊｉ／ｈＰＢＭＣおよびＲａｊｉのみの腫瘍対血液比は、それぞれ３．３２±０．１１および０．４３±０．０７であった。さらに、Ｒａｊｉ／ｈＰＢＭＣ腫瘍と同時移植したマウスの脾臓における取り込みが増加している。８９Ｚｒ－ＤＦＯ－ｍＡｂ１注射から６日後のＲａｊｉおよびＲａｊｉ／ｈＰＢＭＣ腫瘍担持マウスの代表的なｉＰＥＴ画像（図１２）は、８９Ｚｒ－ＤＦＯ－ｍＡｂ１のＲａｊｉ腫瘍担持マウスと比べて、Ｒａｊｉ／ｈＰＢＭＣ腫瘍担持マウスの腫瘍および脾臓に対するより高い標的化を立証している。８９Ｚｒ－ＤＦＯ－ｍＡｂ１の注射後６日目での生体分布からの％ＩＤ／ｇ値（表１６）は、ｉＰＥＴ撮像データを確証している。
Figure 0007304846000039
 実施例１２：弱いＣＤ８機能遮断ブロッカーＭａｂ１でのマウスの処置は、ヒト化マウスにおける急性ＬＣＭＶ感染のクリアランスに悪影響を及ぼさない。
この実施例からの実験データは、以前に公開されたモデルに基づいており：リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルスのアームストロング株（ＬＣＭＶまたはＬＣＭＶアームのアームストロング株）によるＣ５７ＢＩ／６マウスの感染が、急性感染を引き起こし、その治癒は、機能的ＣＤ８＋ＣＴＬ応答の生成に依存する（ＰＮＡＳ．Ｖｏｌ．９１，ｐｐ．１０８５４－１０８５８；Ｊ Ｖｉｒｏｌ．１９８７ Ｊｕｎ；６１（６）：１８６７－７４）。本実施例では、マウスを、ヒトＴＣＲ、ＨＬＡ、ＣＤ４およびＣＤ８共受容体を発現するように遺伝子操作され、これはヒト化マウスと称される。ヒト化マウスを、ＬＣＭＶアームでチャレンジし（２×１０５ｆｆｕ（フォーカス形成単位）、腹腔内注射（ｉ．ｐ．））、反応速度がわずかに遅延したとはいえ（対照の感染後８～１０日目に対して１２～２１日目）、対照のＣ５７ＢＩ／６マウスと類似した急性感染の治癒を立証した。
この実施では、ヒト化マウスのＬＣＭＶ急性感染モデルを使用して、ウイルスクリアランスに対する他とは異なる遮断活性を有する抗ヒトＣＤ８抗体の効果を評価した。群は、Ａ）陽性対称とみなされる、ＣＤ８ Ｔ細胞枯渇性抗体（ＯＫＴ８）で、Ｂ）ＣＤ８活性の強力な遮断抗体で、Ｃ）ＣＤ８活性の弱い遮断抗体（Ｍａｂ１）で、およびＤ）非ＣＤ８結合タンパク質の対照で処置されたマウスから構成された。ＢおよびＣの遮断活性を、実施例５に記載された改変されたバイオアッセイを使用して評価した。
枯渇性ＯＫＴ８抗体を、１００ｕｇ／用量ｉ．ｐ．で、感染の２日前、１日前感染から１日後に投与され、一方で他の処置条件を、０．５ｍｇ／ｋｇ ｉ．ｐ．の単回用量として、注射の１日前に送達させた。マウスをＬＣＭＶアーム（２×１０５ ｆｆｕ ｉ．ｐ．）で感染させて、脾臓を感染から５日目、１４日目、および２１日目にマウスの群から採取した。標準的なプラークアッセイ法を使用して、均質化した脾臓組織からウイルス力価を評価した。
感染後５日目に、図１３に示すように、すべての処置群はＬＣＭＶのより高い力価（＞１×１０５ ｆｆｕ／ｍｌ）を有しており、遺伝子改変マウスにおけるウイルス感染の適切な確立を立証している。Ｃ５７Ｂｌ／６マウスのように、ヒト化マウスにおけるＬＣＭＶのクリアランスは、ＣＤ８依存性であり、なぜなら、ＯＫＴ８抗ヒトＣＤ８抗体を使用したＣＤ８ Ｔ細胞の枯渇が、感染後の最初の月にわたるＬＣＭＶ感染のクリアランスの遅延をもたらすためである。ＯＫＴ８のＣＤ８枯渇抗体で処置されたマウスは、ウイルスを除去することができず、感染後１４日目および２１日目の両日で高いウイルス力価（＞１×１０５ｆｆｕ／ｍｌ）を維持したが、一方、対照群はウイルスを検出限界（ＬＯＤ １００ｆｆｕ／ｍｌ）まで徐々に除去した。ＣＤ８ Ｔ細胞異能の弱いＣＤ８遮断薬であるＭａｂ１の単回用量で処置されたマウスは、統計的差異なしに（ｎ．ｓ）、非結合対照と類似したウイルスのクリアランスを立証した。ＣＤ８機能を強力に遮断する抗体の単回用量によるマウスの処置は、２１日目に弱い遮断薬と非結合タンパク質対照群の両方と統計的に異なった中間ウイルスクリアランス表現型を示した（ｐ＜０．０５）。２１日目のすべての処置群は、ＯＫＴ８枯渇群とは統計的に異なっていた（ｐ＜０．０１）。図１３を参照されたい。
全体的に、このデータは、治療上関連する用量でのＣＤ８（ｍＡｂ１）に対して弱い遮断抗体が、ヒト化マウスの能力に影響を与えずにＬＣＭＶ感染を除去し、したがって、Ｔ細胞機能は、陽性対照（ＣＤ８枯渇抗体）と陰性対照（非結合タンパク質対照）との両方と比較すると、損なわれていない。
実施例１３：ｍＡｂ１のＮＩＲ蛍光化合物とのコンジュゲーション
抗体、ｍＡｂ１のおよそ１０ｍｇを、製造業者の説明書に従って、事前調整されたＮａｐ－５カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、カタログ番号１７０８５３０２）を介して、配合緩衝液（ヒスチジンベース）から５０ｍＭの炭酸塩、ｐＨ８．４に緩衝液交換した。このプロセスを四通りで実施し、各溶出物（４００μＬ）を収集し、合計１６００μＬに合わせた。合わせた溶出濃度を、ＵＶ／ＶＩＳ分光法（Ｎａｎｏｄｒｏｐ ２０００ ＵＶ／ＶＩＳ分光計、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号ＮＤ－２０００ｃ－ＵＳ－ＣＡＮ）により１８．１ｍｇ／ｍＬであると決定した。
ＩＲＤｙｅ８００ＣＷ（Ｌｉ－Ｃｏｒ、カタログ番号９２９－７００２０）のコンジュゲーションについては、ＤＭＳＯ中の、１０ｍＭのＩＲＤｙｅ８００ＣＷ ＮＨＳエステルの２、４、または６倍のモル対モル過剰量のいずれかを、緩衝液交換されたｍＡｂ１の７．２ｍｇ（４００μＬ）に導入した。ピペットによって穏やかに混合した後、暗所に放置して、反応を室温で２時間進行させた。
シアニンベースのＶｉｖｏｔａｇ６８０ＸＬ（Ｐｅｒｋｉｎ－Ｅｌｍｅｒ、カタログ番号ＮＥＶ１１１２０）のコンジュゲーションについては、ＤＭＳＯ中の、１０ｍＭのＶｉｖｏｔａｇ６８０ＸＬの２倍のモル対モル過剰量を、緩衝液交換されたｍＡｂ１の７．２ｍｇ（４００μＬ）に導入した。ピペットによって穏やかに混合した後、暗所に放置して、反応を室温で２時間進行させた。
各コンジュゲーション反応を、ＰＢＳプラス５％のグリセロール、ｐＨ７．４で前調節されたＮａｐ－５カラムによって緩衝液交換し、反応染料を除去した。手短に言えば、各コンジュゲーション反応について、１０００μＬの全溶出を分画化し、それぞれの分画をＵＶ／ＶＩＳ分光計によってタンパク質の存在についてアッセイした。高タンパク質含有量を有する分画を組み合わせた。各反応に対する最終タンパク質濃度および染料対抗体比（ＤＡＲ）を、製造業者の説明書に従ってＵＶ／ＶＩＳ分光計によって決定した。結果を表１７にまとめる。
すべてのコンジュゲーション条件下で、２８０ｎｍでの吸光度を監視する、サイズ排除高速液体クロマトグラフィー、ＳＥ－ＨＰＬＣ（カラム：Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ２００ １０／３００ＧＬ ＳＥＣカラム、ＧＥ Ｌｉｆｅｓｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ番号２８９９０９４４）でアッセイするとき、単量体純度が、９５．０％以上であることを決定した。結果を表１７にまとめる。抗体の完全性を、還元および非還元条件下の両方で、ドデシル硫酸ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、Ｎｏｖｅｘ ４－２０％のトリス－グリシンゲル、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号ＥＣ６０２６ＢＯＸ）によってアッセイした。コンジュゲートされていない抗体と比較して、コンジュゲートの分断は観察されなかった。
Figure 0007304846000040
上述の実施形態および実施例は、単に例示的および非限定的であることが意図されている。当業者は、通常の実験、特定の化合物、材料および手順の多数の同等物だけを用いることで、認識し、または確認できることになる。こうしたすべての同等物は、範囲内であるとみなされ、添付の請求項によって包含される。

Claims (58)

  1. ＣＤ８に結合する単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体またはそのフラグメントが、配列番号２の重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）のアミノ酸配列内に含有されている３つの重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）と、配列番号１０の軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）のアミノ酸配列内に含有されている３つの軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）とを含む、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント。
  2. 請求項１に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体またはそのフラグメントが、以下の特性：
    （ａ）完全ヒトモノクローナル抗体であること、
    （ｂ）表面プラズモン共鳴によって測定されるとき、３．５×１０－８Ｍ以下のＫＤでＣＤ８に結合すること、
    （ｃ）ヒトＣＤ８αに結合すること、
    （ｄ）活性化ＣＤ８Ｔ細胞においてＩＦＮγ産生を阻害すること、
    （ｅ）活性化Ｔ細胞において転写因子アクチベータータンパク質（ＡＰ－１）を阻害すること、ならびに
    （ｆ）ヒトおよびサルＣＤ８と交差反応すること
    のうちの１つ以上を示す、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント。
  3. 配列番号２のＨＣＶＲのアミノ酸配列を含む、請求項１または２に記載の単離された抗体。
  4. 配列番号１０のＬＣＶＲのアミノ酸配列を含む、請求項１または２に記載の単離された抗体。
  5. 配列番号２／１０のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲのアミノ酸配列ペアを含む、請求項１または２に記載の単離された抗体。
  6. 請求項１～５のいずれか一項に記載の、治療有効量の１つ以上の単離されたヒトモノクローナル抗体、またはその抗原結合フラグメントと共に、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤を含む薬学的組成物。
  7. 請求項１～５のいずれか一項に記載の、ＣＤ８に結合するヒトモノクローナル抗体またはそのフラグメントをコードする、核酸分子。
  8. 請求項７に記載の、ＣＤ８に結合するヒトモノクローナル抗体またはそのフラグメントをコードする核酸分子を含む、発現ベクター。
  9. 請求項８に記載の発現ベクターを含有する、宿主細胞。
  10. 請求項１に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントと、陽電子放出体と、を含む、放射性標識された抗体コンジュゲート。
  11. 請求項１に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントと、１または複数のキレート部分と、を含み、前記１または複数のキレート部分のうちの少なくとも１つは陽電子放出体を含む、放射性標識された抗体コンジュゲート。
  12. 前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、１または複数の式（Ａ）：
    Figure 0007304846000041
    のキレート部分Ｌの各々に共有結合しており、
    式中、Ｍが、陽電子放出体であり、ｚが独立して、０または１であり、前記少なくとも１つのキレート部分においてｚが１である、請求項１１に記載のコンジュゲート。
  13. 前記キレート部分が、デスフェリオキサミンを含む、請求項１１または１２に記載のコンジュゲート。
  14. 前記陽電子放出体が、８９Ｚｒである、請求項１０～１２のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
  15. －Ｌ－Ｍが、
    Figure 0007304846000042
    であり、Ｚｒが８９Ｚｒである、請求項１２～１４のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
  16. 抗体またはその抗原結合フラグメントが、式（Ａ）の１つ、２つ、または３つの部分に共有結合している、請求項１０～１５のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
  17. 前記抗体が、それぞれ配列番号４、６および８の３つの重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）のアミノ酸配列と、配列番号１２、１４および１６の３つの軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）のアミノ酸配列とを含む、請求項１０～１６のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
  18. 前記抗体が、
    （ａ）表面プラズモン共鳴によって測定されるとき、約３．５×１０－８Ｍ未満の結合解離平衡定数（ＫＤ）でヒトＣＤ８に結合すること、
    （ｂ）ヒトＣＤ８αに結合すること、
    （ｃ）活性化ＣＤ８Ｔ細胞でのＩＦＮγ産生を阻害すること、
    （ｄ）活性化Ｔ細胞における転写因子アクチベータータンパク質（ＡＰ－１）を阻害すること、ならびに
    （ｅ）ヒトおよびサルＣＤ８と交差反応することからなる群から選択される１つ以上の特性を有する、請求項１０～１７のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
  19. 前記抗体が、配列番号２／１０のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む、請求項１０～１８のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
  20. ＣＤ８を発現する組織の撮像方法における使用のための組成物であって、前記組成物は、請求項１０～１９のいずれか一項に記載の放射性標識された抗体コンジュゲートを含み、前記方法は、前記組成物を前記組織に投与することと、陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）撮像によりＣＤ８発現を可視化することと、を含む、組成物。
  21. 固形腫瘍をチェックポイント阻害剤療法で処置するための方法における使用のための薬学的組成物であって、前記薬学的組成物は、請求項１０～１９のいずれか一項に記載の放射性標識された抗体コンジュゲートを含み、前記方法は、
    （ａ）前記組成物を対象に投与し、固形腫瘍がＣＤ８陽性Ｔ細胞を含むことを決定することと、
    （ｂ）前記腫瘍がＣＤ８陽性Ｔ細胞を含む場合、前記チェックポイント阻害剤療法の１回以上の用量を前記対象に投与することと、を含む、薬学的組成物。
  22. 前記処置の工程（ａ）が、陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）撮像によって、前記腫瘍における前記放射性標識された抗体コンジュゲートの局在化の撮像を行うことと、をさらに含み、前記腫瘍における前記放射性標識された抗体コンジュゲートの存在が、前記腫瘍がＣＤ８陽性細胞を含むことを示す、請求項２１に記載の薬学的組成物。
  23. 前記処置が、０．１～１０ｍｇ／ｋｇの前記放射性標識された抗体コンジュゲートを投与することを含む、請求項２２に記載の薬学的組成物。
  24. Ｔ細胞機能が、前記放射性標識された抗体コンジュゲートの投与によって損なわれない、請求項２２に記載の薬学的組成物。
  25. 前記放射性標識された抗体コンジュゲートが、前記対象に対して皮下または静脈内に投与されることを特徴とする、請求項２２または２４に記載の薬学的組成物。
  26. ＰＥＴ撮像が、前記放射性標識された抗体コンジュゲートの投与の２～７日後に実施される、請求項２２～２５のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
  27. 前記処置の工程（ａ）が工程（ｂ）の前に実行される、請求項２１～２５のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
  28. 前記処置が（ｃ）前記対象を抗腫瘍療法の少なくとも１回の用量で処置した後に、工程（ａ）を繰り返すことをさらに含み、前記腫瘍における前記放射性標識された抗体コンジュゲートの局在化の面積のベースラインからの増加が、前記抗腫瘍療法の有効性を示す、請求項２１～２７のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
  29. 前記組成物が、前記抗腫瘍療法を施した１～２０週後に投与されることを特徴とする、請求項２２に記載の薬学的組成物。
  30. 前記処置は、前記固形腫瘍がＰＤ－１陽性であることを、放射性標識された抗ＰＤ－１コンジュゲートの投与を、それを必要とする前記対象に施すことにより決定する工程と、ＰＥＴ撮像によって、前記腫瘍における前記放射性標識された抗ＰＤ－１コンジュゲートの局在化を撮像する工程とを、さらに含み、前記腫瘍における前記放射性標識された抗ＰＤ－１コンジュゲートの存在が、前記腫瘍がＰＤ－１陽性であることを示す、請求項２１に記載の薬学的組成物。
  31. 前記抗腫瘍療法が、前記ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１シグナル伝達軸の阻害剤、ＣＴＬＡ－４阻害剤、ＴＩＭ３阻害剤、ＢＴＬＡ阻害剤、ＴＩＧＩＴ阻害剤、ＣＤ４７阻害剤、ＧＩＴＲ阻害剤、別のＴ細胞共阻害剤もしくはリガンドの拮抗薬、インドールアミン－２，３－ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）拮抗薬、Ａｎｇ２阻害剤、トランスフォーミング増殖因子ベータ（ＴＧＦβ）阻害剤、表皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）阻害剤、ＣＤ２０阻害剤、腫瘍特異抗原に対する抗体、癌ワクチン、二重特異性抗体、細胞毒素、化学療法薬、シクロホスファミド、放射線療法、ＩＬ－６Ｒ阻害剤、ＩＬ－４Ｒ阻害剤、ＩＬ－１０阻害剤、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－２１、ＩＬ－１５、および抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）からなる群から選択される、請求項２１～３０のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
  32. 前記抗腫瘍療法が、ＲＥＧＮ２８１０、ＢＧＢ－Ａ３１７、ニボルマブ、ピジリズマブ、ペンブロリズマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、ＭＤＸ－１１０５、ＲＥＧＮ３５０４、イピリムマブ、抗ＣＤ－２８抗体、抗２Ｂ４抗体、抗ＬＹ１０８抗体、抗ＬＡＩＲ１抗体、抗ＩＣＯＳ抗体、抗ＣＤ１６０抗体、抗ＶＩＳＴＡ抗体、アフリベルセプト、ベバシズマブ、ラニビズマブ、スニチニブ、ソラフェニブ、パゾパニブ、ネスバクマブ、エルロチニブ、セツキシマブ、リツキシマブ、抗ＣＡ９抗体、抗ＣＡ１２５抗体、抗黒色腫関連抗原３（ＭＡＧＥ３）抗体、抗癌胎児性抗原（ＣＥＡ）抗体、抗ビメンチン抗体、抗腫瘍Ｍ２－ＰＫ抗体、抗前立腺特異抗原（ＰＳＡ）抗体、抗ムチン－１抗体、抗ＭＡＲＴ－１抗体、抗ＣＡ１９－９抗体、カルメット・ゲラン桿菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ Ｃａｌｍｅｔｔｅ－Ｇｕｅｒｉｎ）、ＣＤ３×ＣＤ２０二重特異性抗体、ＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体、ダカルバジン、テモゾロミド、シクロホスファミド、ドセタキセル、ドキソルビシン、ダウノルビシン、シスプラチン、カルボプラチン、ゲムシタビン、メトトレキサート、ミトキサントロン、オキサリプラチン、パクリタキセル、ビンクリスチン、シクロホスファミド、放射線療法、サリルマブ、デュピルマブ、抗ＣＤ１９－ＤＭ４ ＡＤＣ、および抗ＤＳ６－ＤＭ４ ＡＤＣからなる群から選択される、請求項２１～３０のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
  33. 前記抗腫瘍療法が、抗ＰＤ－１抗体および抗ＰＤ－Ｌ１抗体からなる群から選択される、請求項２１～３２のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
  34. 前記ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１シグナル伝達軸の前記阻害剤が、抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合フラグメントである、請求項３１に記載の薬学的組成物。
  35. 前記抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合フラグメントが、ＲＥＧＮ２８１０、ノボルマブ、またはペンブロリズマブである、請求項３４に記載の薬学的組成物。
  36. 前記抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合フラグメントが、ＲＥＧＮ２８１０である、請求項３４に記載の薬学的組成物。
  37. 前記ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１シグナル伝達軸の前記阻害剤が、抗ＰＤ－Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントである、請求項３１に記載の薬学的組成物。
  38. 前記抗ＰＤ－Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントが、アテゾリズマブ、アベルマブ、またはデュルバルマブである、請求項３７に記載の薬学的組成物。
  39. 前記腫瘍が、血液癌、脳癌、腎細胞癌、卵巣癌、膀胱癌、前立腺癌、乳癌、肝細胞癌、骨癌、結腸癌、非小細胞肺癌、頭頸部の扁平上皮細胞癌、大腸直腸癌、中皮腫、Ｂ細胞リンパ腫、および黒色腫からなる群から選択される、請求項２１～３８のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
  40. 固形腫瘍を有する対象における抗腫瘍療法に対する陽性応答を予測することにおける使用のための薬学的組成物であって、前記薬学的組成物が、請求項１０～１９のいずれか一項に記載の放射性標識された抗体コンジュゲートを含み、前記方法が、
    前記対象に前記組成物を投与して、前記固形腫瘍におけるＣＤ８陽性細胞の存在を決定することを含み
    前記ＣＤ８陽性細胞の存在が、抗腫瘍療法に対する陽性応答を予測する、薬学的組成物。
  41. 抗腫瘍療法に対する対象における腫瘍の応答を監視することにおける使用のための薬学的組成物であって、前記薬学的組成物が、請求項１０～１９のいずれか一項に記載の放射性標識された抗体コンジュゲートを含み、前記監視することが、
    （ａ）前記対象に対して抗腫瘍療法の１回以上の用量を投与することと、
    （ｂ）前記抗腫瘍療法を施した１～２０週後に、前記対象に対して放射性標識された抗ＣＤ８抗体コンジュゲートの少なくとも１回の用量を投与して、前記固体腫瘍におけるＣＤ８陽性細胞の存在を決定することと、を含み、
    前記ＣＤ８陽性細胞の存在が、前記抗腫瘍療法に対する陽性応答を示す、薬学的組成物。
  42. ＣＤ８陽性Ｔ細胞を、腫瘍を有する対象における抗腫瘍療法の有効性の指標として定量化する方法における使用のための、請求項１０～１９のいずれか一項に記載の放射性標識された抗体コンジュゲートを含む薬学的組成物であって、前記方法が、
    前記組成物を、前記腫瘍を有する対象に第１の時点で投与し、前記腫瘍におけるＣＤ８陽性Ｔ細胞の存在を決定することと、
    前記ＣＤ８陽性Ｔ細胞のレベルを、成功した抗腫瘍療法と相関させることとを含み、
    ある特定の閾値を超える高レベルが、成功した抗腫瘍療法の予測または指標である、薬学的組成物。
  43. 経時的な腫瘍におけるＴ細胞の存在を監視する方法における使用のための薬学的組成物であって、前記薬学的組成物が、請求項１０～１９のいずれか一項に記載の放射性標識された抗体コンジュゲートを含み、前記方法が、
    （ａ）前記組成物を、前記腫瘍を有する対象に第１の時点で投与して、前記腫瘍におけるＣＤ８陽性Ｔ細胞の存在を決定することと、
    （ｂ）前記対象に対して抗腫瘍療法の１回以上の用量を投与することと、
    （ｃ）前記抗腫瘍療法を施した１～２０週後に、前記対象に第２の時点で前記組成物を投与して、前記腫瘍におけるＣＤ８陽性Ｔ細胞の存在を決定することと、を含み、
    前記腫瘍におけるＴ細胞の存在が、前記抗腫瘍療法に対する陽性応答を示す、薬学的組成物。
  44. 前記処置の工程（ｃ）が、前記抗腫瘍療法による処置過程にわたって繰り返される、請求項４３に記載の薬学的組成物。
  45. 前記第１の時点が、前記処置の工程（ｂ）の前に起こる、請求項４３に記載の薬学的組成物。
  46. 工程（ａ）による前記ＣＤ８陽性Ｔ細胞が、工程（ｃ）による前記ＣＤ８陽性Ｔ細胞に対して比較され、ＣＤ８陽性Ｔ細胞の経時的な増加が、前記抗腫瘍療法に対する陽性応答を示す、請求項４３に記載の薬学的組成物。
  47. 式（ＩＩＩ）の化合物であって、
    Figure 0007304846000043
    式中、Ａが、ＣＤ８に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、ｋが、１～３０の整数であり、前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号２の重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）のアミノ酸配列内に含まれる３つの重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３）、ならびに配列番号１０の軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）のアミノ酸配列内に含まれる３つの軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３）を含む、化合物。
  48. ｋが、１または２である、請求項４７に記載の化合物。
  49. （ｉ）ＣＤ８に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントと、（ｉｉ）１つ以上のキレート部分と、を含む、抗体コンジュゲートであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号２の重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）のアミノ酸配列内に含まれる３つの重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３）、ならびに配列番号１０の軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）のアミノ酸配列内に含まれる３つの軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３）を含む、抗体コンジュゲート。
  50. 前記キレート部分が、
    Figure 0007304846000044
     であり、
    式中
    Figure 0007304846000045
    が、前記抗体またはその抗原結合フラグメントへの共有結合である、請求項４９に記載の抗体コンジュゲート。
  51. 前記コンジュゲートが、１．０～２．０のキレート部分対抗体比を有する、請求項４９に記載の抗体コンジュゲート。
  52. 前記キレート部分対抗体比が、約１．７である、請求項４９に記載の抗体コンジュゲート。
  53. （ｉ）ＣＤ８に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントと、（ｉｉ）蛍光染料と、を含む、抗体コンジュゲートであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号２の重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）のアミノ酸配列内に含まれる３つの重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３）、ならびに配列番号１０の軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）のアミノ酸配列内に含まれる３つの軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３）を含む、抗体コンジュゲート。
  54. 前記蛍光染料が、近赤外染料である、請求項５３に記載の抗体コンジュゲート。
  55. 前記染料が、シアニンベースの染料である、請求項５４に記載の抗体コンジュゲート。
  56. 前記抗体コンジュゲートが、以下の構造：
    Ａｂ－［Ｄ］ｎを有し、
    式中、Ａｂが、前記抗ＣＤ８抗体またはその抗原結合フラグメントであり、Ｄが、蛍光染料であり、ｎが、１～４の整数である、請求項５３に記載の抗体コンジュゲート。
  57. Ｄが、
    Figure 0007304846000046
    であるか、またはその薬学的に許容される塩である、請求項５６に記載の抗体コンジュゲート。
  58. ＣＤ８を発現する組織の撮像方法における使用のための組成物であって、前記組成物が、抗体コンジュゲートを含み、前記方法が、（ａ）前記組成物を前記組織に接触させることと、（ｂ）蛍光撮像を使用して前記組織を撮像することによってＣＤ８発現を可視化することと、を含み、
    前記抗体コンジュゲートが、（ｉ）配列番号２の重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）のアミノ酸配列内に含まれる３つの重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３）、ならびに配列番号１０の軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）のアミノ酸配列内に含まれる３つの軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３）を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントと、（ｉｉ）蛍光染料とを含む、組成物。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2017027325A1 (en) 2015-08-07 2017-02-16 Imaginab, Inc. Antigen binding constructs to target molecules
WO2018147960A1 (en) 2017-02-08 2018-08-16 Imaginab, Inc. Extension sequences for diabodies
CA3167285A1 (en) * 2020-01-10 2021-07-15 Fusion Pharmaceuticals Inc. Sustained immunotherapy
CN113563473A (zh) * 2020-04-29 2021-10-29 三生国健药业（上海）股份有限公司 四价双特异性抗体、其制备方法和用途
CN111413298A (zh) * 2020-05-27 2020-07-14 深圳市天安至远传感科技有限公司 一种光纤表面等离子体共振传感器、制备方法及检测***
JP2023535708A (ja) * 2020-07-21 2023-08-21 スーチョウ スマートヌクライド バイオファーマシューティカル カンパニー リミテッド Ｃｄ８結合ポリペプチドおよびその使用
JP2023537412A (ja) 2020-08-13 2023-08-31 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー 目的の細胞を標的とするためのｉｌ－２の向け直し方法
CN114112868A (zh) * 2020-08-26 2022-03-01 上海睿昂基因科技股份有限公司 一种用于监测肿瘤相关免疫微环境的流式细胞术试剂盒及监测方法
WO2022087458A1 (en) * 2020-10-23 2022-04-28 Asher Biotherapeutics, Inc. Fusions with cd8 antigen binding molecules for modulating immune cell function
EP4274901A1 (en) 2021-01-11 2023-11-15 Sana Biotechnology, Inc. Use of cd8-targeted viral vectors
IL307544A (en) * 2021-04-08 2023-12-01 Sana Biotechnology Inc Constructs of CD8-specific antibodies and preparations thereof
EP4346882A1 (en) * 2021-05-26 2024-04-10 Oxford BioTherapeutics Ltd Pharmaceutical combination comprising an anti-cd205 antibody and an immune checkpoint inhibitor
CN114230665B (zh) * 2021-06-23 2024-03-22 苏州智核生物医药科技有限公司 CD8α结合多肽及其用途
CA3228178A1 (en) 2021-08-05 2023-02-09 Go Therapeutics, Inc. Anti-glyco-muc4 antibodies and their uses
TW202328188A (zh) 2021-09-03 2023-07-16 美商Ｇｏ治療公司 抗醣化-cmet抗體及其用途
AU2022339819A1 (en) 2021-09-03 2024-04-11 Go Therapeutics, Inc. Anti-glyco-lamp1 antibodies and their uses
WO2023114949A1 (en) 2021-12-16 2023-06-22 Sana Biotechnology, Inc. Methods and systems of particle production
WO2023133595A2 (en) 2022-01-10 2023-07-13 Sana Biotechnology, Inc. Methods of ex vivo dosing and administration of lipid particles or viral vectors and related systems and uses
WO2023150647A1 (en) 2022-02-02 2023-08-10 Sana Biotechnology, Inc. Methods of repeat dosing and administration of lipid particles or viral vectors and related systems and uses
WO2023193015A1 (en) 2022-04-01 2023-10-05 Sana Biotechnology, Inc. Cytokine receptor agonist and viral vector combination therapies
WO2024026377A1 (en) 2022-07-27 2024-02-01 Sana Biotechnology, Inc. Methods of transduction using a viral vector and inhibitors of antiviral restriction factors
CN115337413B (zh) * 2022-08-08 2023-08-22 中国科学院近代物理研究所 一种针对非小细胞肺癌诊断的放射性分子探针的制备及应用
WO2024040195A1 (en) 2022-08-17 2024-02-22 Capstan Therapeutics, Inc. Conditioning for in vivo immune cell engineering
WO2024044655A1 (en) 2022-08-24 2024-02-29 Sana Biotechnology, Inc. Delivery of heterologous proteins
WO2024064838A1 (en) 2022-09-21 2024-03-28 Sana Biotechnology, Inc. Lipid particles comprising variant paramyxovirus attachment glycoproteins and uses thereof

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20150191543A1 (en) 2012-08-06 2015-07-09 The Regents Of The University Of California Engineered antibody fragments for targeting and imaging cd8 expression in vivo

Family Cites Families (64)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4680338A (en) 1985-10-17 1987-07-14 Immunomedics, Inc. Bifunctional linker
US5332567A (en) 1989-08-24 1994-07-26 Immunomedics Detection and treatment of infections with immunoconjugates
US5428156A (en) 1993-04-02 1995-06-27 Associated Universities, Inc. Synthesis of macrocyclic polyaminocarboxylates and their use for preparing stable radiometal antibody immunoconjugates for therapy, spect and pet imaging
US7087411B2 (en) 1999-06-08 2006-08-08 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Fusion protein capable of binding VEGF
US6596541B2 (en) 2000-10-31 2003-07-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
US20040018557A1 (en) 2002-03-01 2004-01-29 Immunomedics, Inc. Bispecific antibody point mutations for enhancing rate of clearance
US20100111856A1 (en) 2004-09-23 2010-05-06 Herman Gill Zirconium-radiolabeled, cysteine engineered antibody conjugates
WO2006050058A2 (en) 2004-10-28 2006-05-11 The General Hospital Corporation Methods of detection and therapy of inflamed tissues using immune modulation
US20080193376A1 (en) 2004-10-28 2008-08-14 The General Hospital Corporation Methods of Enhanced Detection and Therapy of Inflamed Tissues Using Immune Modulation
US8889100B2 (en) 2007-01-11 2014-11-18 Immunomedics, Inc. Methods and compositions for improved F-18 labeling of proteins, peptides and other molecules
WO2008124467A1 (en) 2007-04-06 2008-10-16 Macrocyclics Bifunctional hydroxamic acid ligands and method of synthesis
AR069804A1 (es) 2007-12-21 2010-02-17 Schering Corp Agonistas del receptor glucocorticoide c20- c21 sustituido
US20090297439A1 (en) 2008-06-02 2009-12-03 Metheresis Translational Research Sa, Anti-met monoclonal antibody, fragments and derivatives thereof for use in tumor diagnosis, corresponding compositions and kits
MX2010013265A (es) 2008-06-06 2011-02-24 Baylor Res Inst Anticuerpos anti-cd8 bloquean cebado de efectores citotoxicos y conducen a generacion de celulas t cd8+ reguladoras.
NZ701208A (en) 2010-06-03 2016-05-27 Genentech Inc Immuno-pet imaging of antibodies and immunoconjugates and uses thereof
KR20140014116A (ko) 2010-12-20 2014-02-05 제넨테크, 인크. 항-메소텔린 항체 및 면역접합체
US10668162B2 (en) 2012-01-06 2020-06-02 Linxis B.V. Method for preparing cell targeting conjugates, and the complexes obtained
WO2013138696A1 (en) 2012-03-16 2013-09-19 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Zirconium-89 complexes, methods of labeling cells, labeled cells, kits, and methods of use thereof
AR090549A1 (es) 2012-03-30 2014-11-19 Genentech Inc Anticuerpos anti-lgr5 e inmunoconjugados
US9056910B2 (en) 2012-05-01 2015-06-16 Genentech, Inc. Anti-PMEL17 antibodies and immunoconjugates
SG11201407561UA (en) 2012-05-21 2014-12-30 Genentech Inc ANTI-Ly6E ANTIBODIES AND IMMUNOCONJUGATES AND METHODS OF USE
CN104704359A (zh) 2012-10-25 2015-06-10 生命科技公司 糖蛋白酶介导位点特异性放射性标记的方法和组合物
EP2740726A1 (en) 2012-12-07 2014-06-11 3B Pharmaceuticals GmbH Neurotensin receptor ligands
TWI682941B (zh) 2013-02-01 2020-01-21 美商再生元醫藥公司 含嵌合恆定區之抗體
EP3339327A3 (en) 2013-02-28 2018-09-19 National Cancer Center Antibody against insoluble fibrin
US10414820B2 (en) 2013-03-13 2019-09-17 Imaginab, Inc. Antigen binding constructs to CD8
US20160000946A1 (en) 2013-03-14 2016-01-07 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Radiolabeled anti-glypican-3 immunoconjugates for immuno-pet imaging of hepatocellular carcinoma
PE20151672A1 (es) 2013-03-14 2015-11-27 Genentech Inc Anticuerpos e inmunoconjugados anti-b7-h4
JP2016527202A (ja) 2013-06-10 2016-09-08 ミレニアム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッドＭｉｌｌｅｎｎｉｕｍ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ． 癌の治療方法
AR096687A1 (es) 2013-06-24 2016-01-27 Genentech Inc Anticuerpos anti-fcrh5
FR3008408B1 (fr) 2013-07-11 2018-03-09 Mc Saf Nouveaux conjugues anticorps-medicament et leur utilisation en therapie
RS62189B1 (sr) 2013-08-26 2021-08-31 Biontech Research And Development Inc Nukleinske kiseline koje kodiraju humana antitela na sijalil-luis a
EP3060253B1 (en) 2013-10-21 2018-12-19 Genentech, Inc. Anti-ly6e antibodies and methods of use
RU2687163C1 (ru) 2013-11-19 2019-05-07 Фредакс Аб Полипептиды антител и их применения
MX2016007576A (es) 2013-12-13 2016-10-03 Genentech Inc Anticuerpos e inmunoconjugados anti-cd33.
TWI680138B (zh) * 2014-01-23 2019-12-21 美商再生元醫藥公司 抗ｐｄ-ｌ１之人類抗體
TWI681969B (zh) * 2014-01-23 2020-01-11 美商再生元醫藥公司 針對ｐｄ-１的人類抗體
GB201403875D0 (en) 2014-03-05 2014-04-16 Cantargia Ab Novel antibodies and uses thereof
DK3131585T3 (da) 2014-03-19 2020-10-19 Univ Zuerich Multidentate, bifunktionelle chelateringsmidler til radionuklidkompleksdannelse i diagnostik og terapi
MX2016015162A (es) 2014-05-22 2017-03-03 Genentech Inc Anticuerpos anti - gpc3 e inmunoconjugados.
EP3154638A1 (en) 2014-06-10 2017-04-19 3B Pharmaceuticals GmbH Conjugate comprising a neurotensin receptor ligand and use thereof
KR20170010785A (ko) 2014-06-11 2017-02-01 제넨테크, 인크. 항-lgr5 항체 및 이의 용도
GB201413913D0 (en) 2014-08-06 2014-09-17 Cantargia Ab Novel antibodies and uses thereof
DK3177640T3 (da) 2014-08-08 2020-08-10 Univ Leland Stanford Junior Pd-1-midler med høj affinitet og anvendelsesfremgangsmåder
US9751946B2 (en) 2014-09-12 2017-09-05 Genentech, Inc. Anti-CLL-1 antibodies and immunoconjugates
CA2957238C (en) 2014-09-12 2024-02-20 Genentech, Inc. Anti-her2 antibodies and immunoconjugates
AR101848A1 (es) 2014-09-12 2017-01-18 Genentech Inc Anticuerpos de anti-b7-h4 e inmunoconjugados
CN104360049B (zh) 2014-09-22 2016-08-17 重庆医科大学附属儿童医院 一种t淋巴细胞免疫分型的方法和试剂盒
WO2016058056A1 (en) 2014-10-16 2016-04-21 The University Of Melbourne Novel imaging composition and uses thereof
AU2015353573B2 (en) 2014-11-25 2020-09-03 Bristol-Myers Squibb Company Novel PD-L1 binding polypeptides for imaging
EP3973998B1 (en) 2015-03-06 2023-07-26 Mayo Foundation for Medical Education and Research Methods for cell labeling and medical imaging
NL2014423B1 (en) 2015-03-09 2016-10-13 Linxis B V Method for removing weakly bound functional moieties from cell targeting conjugates.
ES2941968T3 (es) 2015-10-01 2023-05-29 The Whitehead Institute For Biomedical Res Marcaje de anticuerpos
EP3377117A1 (en) 2015-11-18 2018-09-26 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Systems, methods, and compositions for imaging androgen receptor axis activity in carcinoma, and related therapeutic compositions and methods
PT3458111T (pt) 2016-05-19 2021-04-09 Bristol Myers Squibb Co Imunomoduladores para imagiologia tep
WO2017213494A1 (en) 2016-06-06 2017-12-14 Linxis B.V. Cell targeting conjugates
EP3474879A4 (en) 2016-06-24 2020-05-06 University of Iowa Research Foundation COMPOSITIONS AND METHODS FOR TREATING MELANOMAS
EP3266465A1 (en) 2016-07-06 2018-01-10 Julius-Maximilians-Universität Würzburg Immune complexes
AU2017300361A1 (en) 2016-07-18 2019-02-07 Wisconsin Alumni Research Foundation Radiohalogenated agents for In Situ Immune Modulated Cancer Vaccination
US11633506B2 (en) 2016-07-18 2023-04-25 Wisconsin Alumni Research Foundation Using targeted radiotherapy (TRT) to drive anti-tumor immune response to immunotherapies
EP3510046A4 (en) 2016-09-07 2020-05-06 The Regents of the University of California ANTIBODIES AGAINST OXIDATION-SPECIFIC EPITOPES
WO2018058125A1 (en) 2016-09-26 2018-03-29 Ensemble Group Holdings Methods of assessing and treating cancer in subjects having dysregulated lymphatic systems
US11103603B2 (en) 2016-10-20 2021-08-31 The University Of North Carolina At Chapel Hill 18F-labeled compounds for PET imaging and uses thereof
US11266639B2 (en) 2016-11-07 2022-03-08 Vidac Pharma Ltd. Use of hexokinase 2/mitochondria-detaching compounds for treating hexokinase-2 (HK2)-expressing cancers

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20150191543A1 (en) 2012-08-06 2015-07-09 The Regents Of The University Of California Engineered antibody fragments for targeting and imaging cd8 expression in vivo

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Cancer Metastasis. Rev.，2014年，Vol. 33，p. 809-822
J. Immunother. Cancer，2015年，Vol. 3, Suppl. 2，P391
J. Neurosci.，2014年，Vol. 34, No. 50，p. 16835-16850

Also Published As

Publication number Publication date
US20230159639A1 (en) 2023-05-25
IL271901A (en) 2020-02-27
MY197688A (en) 2023-07-05
CA3070796A1 (en) 2019-01-31
WO2019023148A1 (en) 2019-01-31
MA49683A (fr) 2020-06-03
MX2020000916A (es) 2020-09-10
JP2023121798A (ja) 2023-08-31
US11525001B2 (en) 2022-12-13
SG11202000073XA (en) 2020-02-27
US20210147542A1 (en) 2021-05-20
JP2020534250A (ja) 2020-11-26
CL2020000192A1 (es) 2020-08-14
CN110997013A (zh) 2020-04-10
PH12020550008A1 (en) 2020-10-12
BR112020001360A2 (pt) 2020-08-11
KR20200031645A (ko) 2020-03-24
US20190023790A1 (en) 2019-01-24
EP3658193A1 (en) 2020-06-03
US10730944B2 (en) 2020-08-04
CO2020000680A2 (es) 2020-01-31
AU2018307744A1 (en) 2020-02-13
CN110997013B (zh) 2022-09-20

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