JP7282327B2 - 細胞固定デバイス、細胞固定方法、及び細胞操作方法 - Google Patents
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Description
本開示の別の局面は、細胞固定デバイスを用いて細胞を固定する細胞固定方法である。前記細胞固定デバイスは、表面に溝が形成された第1部材と、前記第1部材と当接し、前記溝を覆う第2部材と、前記溝と前記第2部材とにより形成される流路と、前記第1部材又は前記第2部材を貫通し、前記流路に連通する複数の孔とを備える。
本開示の別の局面である細胞固定方法を用いれば、1個の微小な細胞を、他の細胞から分離して固定できる。
<第1実施形態>
1.細胞固定デバイス1の構成
細胞固定デバイス1の構成を、図1~図4に基づき説明する。細胞固定デバイス1は、細胞を固定する用途に用いられるデバイスである。図1に示すように、細胞固定デバイス1は、第1部材3と、第2部材5と、を備える。
第2部材5は、平面視において長方形である板状の部材である。第2部材5のX方向及びY方向におけるサイズは、第1部材3と同じである。第2部材5の材質は、第1部材3の材質と同じである。そのため、第2部材5の弾性率は、固定しようとする細胞の弾性率より小さい。
(2-1)細胞懸濁液の調製
ココミクサKJ株を通気培養した。培養条件は以下のとおりとした。
明暗期:12/12時間
CO2濃度:2%
ココミクサKJ株は、2013年6月4日付で独立行政法人製品評価技術基盤機構 特許生物寄託センター(NITE-IPOD)(千葉県木更津市かずさ鎌足2-5-8 120号室)に受託番号FERM P-22254として寄託されている。ココミクサKJ株の短径は1~2μmであり、長径は2~5μmである。
第2部材5の表面39を、第1部材の表面7に当接させた。次に、第1孔33に細胞懸濁液を供給した。次に、シリンジポンプを用い、第2孔35、及び第3孔37から吸引を行った。吸引の圧力は118Paとした。なお、吸引の圧力は、1Pa以上が好ましく、10Pa以上がさらに好ましく、100Pa以上が特に好ましい。
また、一部の細胞懸濁液は、第1流路41から枝流路43Aに流入し、合流流路43B、吸引部31、及び第3孔37を順次経て、細胞固定デバイス1の外部に排出された。細胞懸濁液が枝流路43Aを流れるとき、細胞の一部は枝流路43Aに固定された。
第2部材5を第1部材3から分離した。分岐部21に固定されている細胞に対し、顕微鏡下で、マイクロマニュピレーターを用いてインジェクションを行った。インジェクションにより、以下のサンプルを細胞内に導入した。インジェクションは細胞操作に対応する。
(2-4)細胞の回収及び培養
第1部材3のうち、固定されている細胞を含む部分を、メスを用いて切り出した。切り出した部分には、分岐部21の一部と、その周辺部とが含まれる。次に、切り出した部分を培地に投入した。そして、内部の温度が25℃であるCO2インキュベーター内で細胞を培養した。細胞を培養しながら、細胞のトラッキングを行った。
(1A)細胞固定デバイス1を用いれば、1個の微小な細胞を、他の細胞から分離して固定できる。
(1D)第1部材3の弾性率は、細胞の弾性率より小さい。そのため、図5Bに示すように、枝流路43Aの流路壁46が、固定した細胞45により押し広げられ易い。そのため、細胞45をしっかりと固定することができる。
<第2実施形態>
1.第1実施形態との相違点
第2実施形態は、基本的な構成は第1実施形態と同様であるため、相違点について以下に説明する。なお、第1実施形態と同じ符号は、同一の構成を示すものであって、先行する説明を参照する。
2.細胞固定デバイス1が奏する効果
以上詳述した第2実施形態によれば、前述した第1実施形態の効果を奏し、さらに、以下の効果を奏する。
<他の実施形態>
以上、本開示の実施形態について説明したが、本開示は上述の実施形態に限定されることなく、種々変形して実施することができる。
(5)第1部材3及び第2部材5の材質は、ポリジメチルシロキサン以外の材質であってもよい。
Claims (7)
- 細胞を固定する細胞固定デバイスであって、
表面に溝が形成された第1部材と、
前記第1部材と当接し、前記溝を覆う第2部材と、
前記溝と前記第2部材とにより形成される流路と、
前記第1部材又は前記第2部材を貫通し、前記流路に連通する複数の孔と、
を備え、
前記流路は、
前記複数の孔の一部である第1孔に連通する部分から、前記複数の孔の一部である第2孔に連通する部分まで延びる第1流路と、
前記第1流路から分岐し、前記複数の孔のうちのいずれかの孔に連通する部分まで延びる第2流路と、
を備え、
前記第2流路は、前記第1流路よりも幅が狭く、前記細胞を固定可能な隘路部を備え、
前記隘路部の幅が前記細胞の幅の80~99%であり、かつ、前記第1部材の弾性率が前記細胞の弾性率より小さい細胞固定デバイス。 - 請求項1に記載の細胞固定デバイスであって、
前記第2流路は、前記第1流路における複数の位置でそれぞれ分岐する複数の枝流路と、前記複数の枝流路が合流した合流流路とを備え、
前記隘路部は、前記枝流路に備えられている細胞固定デバイス。 - 請求項2に記載の細胞固定デバイスであって、
前記隘路部は、
上流部と、
前記上流部よりも前記合流流路の側に位置し、前記上流部よりも幅が狭い下流部と、
を備える細胞固定デバイス。 - 請求項2又は3に記載の細胞固定デバイスであって、
前記枝流路同士の間隔は500μm以上であり、
前記第1部材及び前記第2部材の材質は、ポリジメチルシロキサンである細胞固定デバイス。 - 請求項1~4のいずれか1項に記載の細胞固定デバイスであって、
前記第1部材の材質は、ポリジメチルシロキサンであり、
前記第1部材において、前記表面から、その裏面までの厚みは1.0mm以下である細胞固定デバイス。 - 細胞固定デバイスを用いて細胞を固定する細胞固定方法であって、
前記細胞固定デバイスは、
表面に溝が形成された第1部材と、
前記第1部材と当接し、前記溝を覆う第2部材と、
前記溝と前記第2部材とにより形成される流路と、
前記第1部材又は前記第2部材を貫通し、前記流路に連通する複数の孔と、
を備え、
前記流路は、
前記複数の孔の一部である第1孔に連通する部分から、前記複数の孔の一部である第2孔に連通する部分まで延びる第1流路と、
前記第1流路から分岐し、前記複数の孔のうちのいずれかの孔である第3孔に連通する部分まで延びる第2流路と、
を備え、
前記第2流路は、前記第1流路よりも幅が狭く、前記細胞を固定可能な隘路部を備え、
前記隘路部の幅が前記細胞の幅の80~99%であり、かつ、前記第1部材の弾性率が前記細胞の弾性率より小さく、
前記細胞を含む液を前記第1孔に供給し、
前記第2孔及び前記第3孔から吸引を行うことで、前記細胞を含む液を、前記第1流路から前記第2流路に流入させ、
前記吸引を止める細胞固定方法。 - 請求項6に記載の細胞固定方法を行い、
前記第2部材を前記第1部材から分離し、
固定されている前記細胞に対しインジェクションを行う、
細胞操作方法。
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JP2008539711A (ja) | 2005-05-03 | 2008-11-20 | オックスフォード・ジーン・テクノロジー・アイピー・リミテッド | 個々に細胞を解析するための装置及び方法 |
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