JP7270596B2 - 抗ｄｏｔａ／抗腫瘍抗原二重特異性抗体による事前標的化放射免疫治療のためのｄｏｔａ－ハプテン組成物 - Google Patents

抗ｄｏｔａ／抗腫瘍抗原二重特異性抗体による事前標的化放射免疫治療のためのｄｏｔａ－ハプテン組成物 Download PDF

Info

Publication number
JP7270596B2
JP7270596B2 JP2020500214A JP2020500214A JP7270596B2 JP 7270596 B2 JP7270596 B2 JP 7270596B2 JP 2020500214 A JP2020500214 A JP 2020500214A JP 2020500214 A JP2020500214 A JP 2020500214A JP 7270596 B2 JP7270596 B2 JP 7270596B2
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
cancer
dota
tumor
antigen
subject
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
JP2020500214A
Other languages
English (en)
Other versions
JP2020526522A5 (ja
JP2020526522A (ja
Inventor
サラ エム チール
マイケル マクデヴィット
オウアセク オウエルフェリ
スティーヴン エム ラーソン
グアンビン ヤン
Original Assignee
メモリアル スローン ケタリング キャンサー センター
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by メモリアル スローン ケタリング キャンサー センター filed Critical メモリアル スローン ケタリング キャンサー センター
Publication of JP2020526522A publication Critical patent/JP2020526522A/ja
Publication of JP2020526522A5 publication Critical patent/JP2020526522A5/ja
Application granted granted Critical
Publication of JP7270596B2 publication Critical patent/JP7270596B2/ja
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D257/00—Heterocyclic compounds containing rings having four nitrogen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D257/02—Heterocyclic compounds containing rings having four nitrogen atoms as the only ring hetero atoms not condensed with other rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6875—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody being a hybrid immunoglobulin
    • A61K47/6879—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody being a hybrid immunoglobulin the immunoglobulin having two or more different antigen-binding sites, e.g. bispecific or multispecific immunoglobulin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6891—Pre-targeting systems involving an antibody for targeting specific cells
    • A61K47/6897—Pre-targeting systems with two or three steps using antibody conjugates; Ligand-antiligand therapies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
    • A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
    • A61K51/04—Organic compounds
    • A61K51/0474—Organic compounds complexes or complex-forming compounds, i.e. wherein a radioactive metal (e.g. 111In3+) is complexed or chelated by, e.g. a N2S2, N3S, NS3, N4 chelating group
    • A61K51/0482—Organic compounds complexes or complex-forming compounds, i.e. wherein a radioactive metal (e.g. 111In3+) is complexed or chelated by, e.g. a N2S2, N3S, NS3, N4 chelating group chelates from cyclic ligands, e.g. DOTA
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
    • A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
    • A61K51/04—Organic compounds
    • A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
    • A61K51/10—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody
    • A61K51/1045—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody against animal or human tumor cells or tumor cell determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F5/00—Compounds containing elements of Groups 3 or 13 of the Periodic System
    • C07F5/003—Compounds containing elements of Groups 3 or 13 of the Periodic System without C-Metal linkages
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/32—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against translation products of oncogenes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/44—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material not provided for elsewhere, e.g. haptens, metals, DNA, RNA, amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１７年７月６日に出願された米国仮特許出願第６２／５２９，３６３号の利益および優先権を主張し、その全内容が、参照により本明細書に組み込まれる。
技術分野
本技術は、一般に、新規なＤＯＴＡ－ハプテンを含む組成物、ならびに画像診断および事前標的化放射免疫治療においてそれを使用する方法に関する。
政府支援の記載
本発明は、アメリカ国立衛生研究所によって与えられたＣＡ００８７４８、およびＣＡ０８６４３８に基づく政府支援を受けてなされた。政府は、本発明において一定の権利を有する。
本技術の背景についての以下の説明は、単に本技術の理解の補助として提供されるものであり、本技術の先行技術を説明または構成すると認められるものではない。
放射標識された薬剤は、電離放射線の特定の疾患部位への送達ビヒクルとして、５０年超にわたって使用されている（Larson SM. Cancer 67:1253-1260 (1991)；Britton KE. Nucl Med Commun. 18:992-1007 (1997)）。放射性同位体の標的化送達のために、放射標識された抗体、抗体断片、改変足場（ａｌｔｅｒａｔｉｖｅ ｓｃａｆｆｏｌｄ）、および低分子を含む、多数の分子が検討されている（Tolmachev V, et al. Cancer Res. 67:2773-2782 (2007)；Birchler MT, et al., Otolaryngol Head Neck Surg. 136:543-548 (2007)；Reubi JC, Maecke HR. J Nucl Med. 49:1735-1738 (2008)）。毒物を腫瘍に標的化するための抗体の使用、例えば、直接コンジュゲート抗体を用いた放射免疫治療（ＲＩＴ）は、一つには最適でない腫瘍線量および治療指数（ＴＩ）に起因して困難であった。さらに、正常組織バイスタンダー毒性により、用量漸増は実行可能でなく、したがって、そのような治療は、限定された抗腫瘍効果を生じさせる。その上、抗体は、長い血中半減期を呈し、低い腫瘍対バックグラウンド比を生じさせる。抗体断片および他のより小さい結合足場は、より急速な血液クリアランスを呈するが、高い腎臓および／または肝臓内取り込みを生じさせる。放射標識された低分子リガンドは、一般に、抗体および抗体断片と比較してより迅速な血液クリアランスおよびより低いバックグラウンドを呈するが、通常は、所望の標的に対する相対的に低い親和性に起因して、不十分な特異性を生じさせる。
事前標的化放射免疫治療（ＰＲＩＴ）においては、腫瘍抗原および低分子ハプテンの両方に対する特異性を有する非放射性二機能性抗体（ｂｉｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ）を投与し、腫瘍に局在させる。抗体の十分な血液クリアランスの後に、放射標識された低分子を投与し、事前標的化された抗体によって捕捉する。しかしながら、ＰＲＩＴシステムにおいて使用される多くの低分子ペプチドおよび金属キレートハプテンは、著しい全身保持を呈し、これは、画像化の信号対バックグラウンド比を限定する望まれないバックグラウンド放射能を生じさせ、治療用途のための最大耐容用量を限定する非特異的放射の一因となる（Orcutt et al., Mol Imaging Biol 13:215-221 (2011)）。
したがって、（ａ）ｉｎ ｖｉｖｏでの固形腫瘍の効率的な事前標的化放射免疫治療および（ｂ）放射標識された低分子の非腫瘍組織からの迅速なクリアランスを可能にする新規分子が必要である。
本技術の概要
一態様では、本開示は、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩
Figure 0007270596000001
 (I)
（式中、Ｍ1は、175Ｌｕ3+、45Ｓｃ3+、69Ｇａ3+、71Ｇａ3+、89Ｙ3+、113Ｉｎ3+、115Ｉｎ3+、139Ｌａ3+、136Ｃｅ3+、138Ｃｅ3+、140Ｃｅ3+、142Ｃｅ3+、151Ｅｕ3+、153Ｅｕ3+、159Ｔｂ3+、154Ｇｄ3+、155Ｇｄ3+、156Ｇｄ3+、157Ｇｄ3+、158Ｇｄ3+、または160Ｇｄ3+であり、Ｘ1、Ｘ2、Ｘ3、およびＸ4は、各々独立して、孤立電子対（すなわち、酸素アニオンを与える）またはＨであり、Ｘ5、Ｘ6、およびＸ7は、各々独立して、孤立電子対（すなわち、酸素アニオンを与える）またはＨであり、Ｙ1は、ＯまたはＳであり、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、または２２である）
を提供する。ある特定の実施形態では、ｎは、３である。ある特定の実施形態では、ｎは、３である。ある特定の実施形態では、ｎは、３であり、Ｙ1は、Ｓである。
化合物のいくつかの実施形態では、Ｘ1、Ｘ2、Ｘ3、およびＸ4のうち少なくとも２つは、各々独立して、孤立電子対である。化合物のある特定の実施形態では、Ｘ1、Ｘ2、Ｘ3、およびＸ4のうち３つは、各々独立して、孤立電子対であり、残りのＸ1、Ｘ2、Ｘ3、またはＸ4は、Ｈである。
別の態様では、本開示は、式Ｉの上記化合物のいずれかおよび放射性核種カチオンを含むビスキレートを提供する。いくつかの実施形態では、ビスキレートは、式ＩＩのビスキレートまたはその薬学的に許容される塩
Figure 0007270596000002
 (II)
（式中、Ｍ1は、175Ｌｕ3+、45Ｓｃ3+、69Ｇａ3+、71Ｇａ3+、89Ｙ3+、113Ｉｎ3+、115Ｉｎ3+、139Ｌａ3+、136Ｃｅ3+、138Ｃｅ3+、140Ｃｅ3+、142Ｃｅ3+、151Ｅｕ3+、153Ｅｕ3+、159Ｔｂ3+、154Ｇｄ3+、155Ｇｄ3+、156Ｇｄ3+、157Ｇｄ3+、158Ｇｄ3+、または160Ｇｄ3+であり、Ｍ2は、放射性核種カチオンであり、Ｘ1、Ｘ2、Ｘ3、およびＸ4は、各々独立して、孤立電子対（すなわち、酸素アニオンを与える）またはＨであり、Ｘ5、Ｘ6、およびＸ7は、各々独立して、孤立電子対（すなわち、酸素アニオンを与える）またはＨであり、Ｙ1は、ＯまたはＳであり、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、または２２である）
である。ある特定の実施形態では、ｎは、３である。ある特定の実施形態では、ｎは、３であり、Ｙ1は、Ｓである。
ビスキレートのいくつかの実施形態では、Ｘ5、Ｘ6、およびＸ7のうち少なくとも２つは、各々独立して、孤立電子対である。追加的にまたは代替的に、ビスキレートのいくつかの実施形態では、放射性核種カチオンは、二価カチオンまたは三価カチオンである。放射性核種カチオンは、アルファ粒子放出同位体、ベータ粒子放出同位体、オージェ放出体、またはそれらのいずれか２種以上の組合せであり得る。アルファ粒子放出同位体の例は、213Ｂｉ、211Ａｔ、225Ａｃ、152Ｄｙ、212Ｂｉ、223Ｒａ、219Ｒｎ、215Ｐｏ、211Ｂｉ、221Ｆｒ、217Ａｔ、および255Ｆｍを含むがこれらに限定されない。ベータ粒子放出同位体の例は、86Ｙ、90Ｙ、89Ｓｒ、165Ｄｙ、186Ｒｅ、188Ｒｅ、177Ｌｕ、および67Ｃｕを含むがこれらに限定されない。オージェ放出体の例は、111Ｉｎ、67Ｇａ、51Ｃｒ、58Ｃｏ、99mＴｃ、103mＲｈ、195mＰｔ、119Ｓｂ、161Ｈｏ、189mＯｓ、192Ｉｒ、201Ｔｌ、および203Ｐｂを含む。ビスキレートのいくつかの実施形態では、放射性核種カチオンは、68Ｇａ、227Ｔｈ、または64Ｃｕである。
別の態様では、本開示は、式Ｉの化合物、ならびに該化合物および腫瘍抗原標的を認識し、結合する二重特異性抗体を含む複合体を提供する。本開示はまた、式ＩＩのビスキレート、ならびに該ビスキレートおよび腫瘍抗原標的に結合する二重特異性抗体を含む複合体を提供する。本明細書に開示される複合体の上記実施形態のいずれかでは、二重特異性抗体は、無限バインダー（ｉｎｆｉｎｉｔｅ ｂｉｎｄｅｒ）であり得る。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、Ｃ８２５（Cheal et al., Mol Cancer Ther. 13(7):1803-12 (2014)を参照されたい）または２Ｄ１２．５（Corneillie et al., J. Inorganic Biochemistry 100:882-890 (2006)）の抗原結合断片を含む。追加的にまたは代替的に、本明細書に開示される複合体の上記実施形態のいずれかでは、二重特異性抗体は、Ｇ５４Ｃ置換を有するＣ８２５の抗原結合断片を含む。追加的にまたは代替的に、本明細書に開示される複合体の上記実施形態のいずれかでは、二重特異性抗体は、Ｇ５４Ｃ置換を有する２Ｄ１２．５の抗原結合断片を含む。
本明細書に開示される複合体の上記実施形態のいずれかでは、腫瘍抗原標的は、ＧＰＡ３３、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＧＤ２、ＭＡＧＥ－１、ＭＡＧＥ－３、ＢＡＧＥ、ＧＡＧＥ－１、ＧＡＧＥ－２、ＭＵＭ－１、ＣＤＫ４、Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ、ｐ１５、ｇｐ７５、ベータ－カテニン、ＥｒｂＢ２、がん抗原１２５（ＣＡ－１２５）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＲＡＧＥ、ＭＡＲＴ（黒色腫抗原）、ＭＵＣ－１、ＭＵＣ－２、ＭＵＣ－３、ＭＵＣ－４、ＭＵＣ－５ａｃ、ＭＵＣ－１６、ＭＵＣ－１７、チロシナーゼ、Ｐｍｅｌ１７（ｇｐ１００）、ＧｎＴ－ＶイントロンＶ配列（Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ（ａｃｅｔｙｌｇｌｕｃｏａｍｉｎｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ）ＶイントロンＶ配列）、前立腺がんｐｓｍ、ＰＲＡＭＥ（黒色腫抗原）、β－カテニン、ＥＢＮＡ（エプスタイン・バーウイルス核抗原）１～６、ｐ５３、肺耐性タンパク質（ＬＲＰ）Ｂｃｌ－２、前立腺特異性抗原（ＰＳＡ）、Ｋｉ－６７、ＣＥＡＣＡＭ６、結腸特異性抗原ｐ（ＣＳＡｐ）、ＨＬＡ－ＤＲ、ＣＤ４０、ＣＤ７４、ＣＤ１３８、ＥＧＦＲ、ＥＧＰ－１、ＥＧＰ－２、ＶＥＧＦ、ＰｌＧＦ、インスリン様成長因子（ＩＬＧＦ）、テネイシン、血小板由来成長因子、ＩＬ－６、ＣＤ２０、ＣＤ１９、ＰＳＭＡ、ＣＤ３３、ＣＤ１２３、ＭＥＴ、ＤＬＬ４、Ａｎｇ－２、ＨＥＲ３、ＩＧＦ－１Ｒ、ＣＤ３０、ＴＡＧ－７２、ＳＰＥＡＰ、ＣＤ４５、Ｌ１－ＣＡＭ、ルイスＹ（Ｌｅy）抗原、Ｅ－カドヘリン、Ｖ－カドヘリン、およびＥｐＣＡＭからなる群から選択される。追加的にまたは代替的に、複合体のいくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、化合物またはビスキレートに、１００ｎＭ～９５ｎＭ、９５～９０ｎＭ、９０～８５ｎＭ、８５～８０ｎＭ、８０～７５ｎＭ、７５～７０ｎＭ、７０～６５ｎＭ、６５～６０ｎＭ、６０～５５ｎＭ、５５～５０ｎＭ、５０～４５ｎＭ、４５～４０ｎＭ、４０～３５ｎＭ、３５～３０ｎＭ、３０～２５ｎＭ、２５～２０ｎＭ、２０～１５ｎＭ、１５～１０ｎＭ、１０～５ｎＭ、５～１ｎＭ、１ｎＭ～９５０ｐＭ、９５０ｐＭ～９００ｐＭ、９００ｐＭ～８５０ｐＭ、８５０ｐＭ～８００ｐＭ、８００ｐＭ～７５０ｐＭ、７５０ｐＭ～７００ｐＭ、７００ｐＭ～６５０ｐＭ、６５０ｐＭ～６００ｐＭ、６００ｐＭ～５５０ｐＭ、５５０ｐＭ～５００ｐＭ、５００ｐＭ～４５０ｐＭ、４５０ｐＭ～４００ｐＭ、４００ｐＭ～３５０ｐＭ、３５０ｐＭ～３００ｐＭ、３００ｐＭ～２５０ｐＭ、２５０ｐＭ～２００ｐＭ、２００ｐＭ～１５０ｐＭ、１５０ｐＭ～１００ｐＭ、１００ｐＭ～５０ｐＭ、５０ｐＭ～４０ｐＭ、４０ｐＭ～３０ｐＭ、３０ｐＭ～２０ｐＭ、２０ｐＭ～１０ｐＭ、９ｐＭ、８ｐＭ、７ｐＭ、６ｐＭ、５ｐＭ、４ｐＭ、３ｐＭ、２．５ｐＭ、２ｐＭ、１．５ｐＭ、または１ｐＭ以下のＫdで結合する。
一態様では、本開示は、それを必要とする対象において固形腫瘍を検出するための方法であって、（ａ）式ＩＩのビスキレート、ならびに該ビスキレートおよび腫瘍抗原標的に結合する二重特異性抗体を含む複合体の有効量を対象に投与する工程であって、複合体が、複合体の二重特異性抗体によって認識される腫瘍抗原標的を発現している固形腫瘍に局在するように構成されている、工程と、（ｂ）基準値よりも高い、複合体によって放出される放射能レベルを検出することによって、対象における固形腫瘍の存在を検出する工程とを含む方法を提供する。いくつかの実施形態では、対象は、ヒトである。
別の態様では、本開示は、対象を事前標的化放射免疫治療のために選択するための方法であって、（ａ）式ＩＩのビスキレート、ならびに該ビスキレートおよび腫瘍抗原標的に結合する二重特異性抗体を含む複合体の有効量を対象に投与する工程であって、複合体が、複合体の二重特異性抗体によって認識される腫瘍抗原標的を発現している固形腫瘍に局在するように構成されている、工程と、（ｂ）複合体によって放出される放射能レベルを検出する工程と、（ｃ）複合体によって放出される放射能レベルが基準値よりも高い場合に、対象を事前標的化放射免疫治療のために選択する工程とを含む方法を提供する。いくつかの実施形態では、対象は、ヒトである。
本明細書に開示される方法のいくつかの実施形態では、複合体によって放出される放射能レベルは、陽電子放出断層撮影法または単光子放出コンピュータ断層撮影法を使用して検出される。追加的にまたは代替的に、本明細書に開示される方法のいくつかの実施形態では、対象は、がんと診断されている、またはがんを有すると疑われている。がんは、乳がん、結腸直腸がん、子宮頸部がん、卵巣がん、肝がん、膀胱がん、ヘパトーマ、肝細胞癌、脳がん、肺がん、胃がん（ｇａｓｔｒｉｃ ｏｒ ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）、膵がん、甲状腺がん、腎臓または腎がん、前立腺がん、黒色腫、肉腫、癌腫、ウィルムス腫瘍、子宮内膜がん、神経膠芽細胞腫、扁平上皮がん、星細胞腫、唾液腺癌、外陰部がん、陰茎癌、および頭頸部がんからなる群から選択され得る。いくつかの実施形態では、脳がんは、下垂体腺腫、髄膜腫、神経芽腫、または頭蓋咽頭腫である。
追加的にまたは代替的に、本明細書に開示される方法のいくつかの実施形態では、複合体は、静脈内に、筋肉内に、動脈内に、くも膜下腔内に、関節包内に、眼窩内に、皮内に、腹腔内に、経気管的に、皮下に、脳室内に、経口的にまたは鼻腔内に投与される。ある特定の実施形態では、複合体は、対象の脳脊髄液または血液中に投与される。
本明細書に開示される方法のいくつかの実施形態では、複合体によって放出される放射能レベルは、複合体が投与された後４～２４時間の間に検出される。本明細書に開示される方法のある特定の実施形態では、複合体によって放出される放射能レベルは、組織１グラム当たりの注射用量の百分率（％ＩＤ／ｇ）として表される。いくつかの実施形態では、腫瘍組織と正常組織との放射能レベルの比は、約２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１、１５：１、２０：１、２５：１、３０：１、３５：１、４０：１、４５：１、５０：１、５５：１、６０：１、６５：１、７０：１、７５：１、８０：１、８５：１、９０：１、９５：１または１００：１である。
別の態様では、本開示は、がんと診断された対象において放射線治療に対する腫瘍の感受性を高めるための方法であって、（ａ）腫瘍抗原標的を発現している腫瘍に局在するように構成された抗ＤＯＴＡ二重特異性抗体の有効量を対象に投与する工程と、（ｂ）抗ＤＯＴＡ二重特異性抗体に結合するように構成された、式ＩＩのビスキレートの有効量を対象に投与する工程とを含む方法を提供する。いくつかの実施形態では、方法は、ビスキレートの投与前に、クリアリング剤（ｃｌｅａｒｉｎｇ ａｇｅｎｔ）の有効量を対象に投与する工程をさらに含む。クリアリング剤は、５００ｋＤアミノデキストラン－ＤＯＴＡコンジュゲート（例えば、５００ｋＤデキストラン－ＤＯＴＡ－Ｂｎ（Ｙ）、５００ｋＤデキストラン－ＤＯＴＡ－Ｂｎ（Ｌｕ）、または５００ｋＤデキストラン－ＤＯＴＡ－Ｂｎ（Ｉｎ）等）であり得る。いくつかの実施形態では、対象は、ヒトである。
追加的にまたは代替的に、方法のいくつかの実施形態では、腫瘍抗原標的は、ＧＰＡ３３、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＧＤ２、ＭＡＧＥ－１、ＭＡＧＥ－３、ＢＡＧＥ、ＧＡＧＥ－１、ＧＡＧＥ－２、ＭＵＭ－１、ＣＤＫ４、Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ、ｐ１５、ｇｐ７５、ベータ－カテニン、ＥｒｂＢ２、がん抗原１２５（ＣＡ－１２５）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＲＡＧＥ、ＭＡＲＴ（黒色腫抗原）、ＭＵＣ－１、ＭＵＣ－２、ＭＵＣ－３、ＭＵＣ－４、ＭＵＣ－５ａｃ、ＭＵＣ－１６、ＭＵＣ－１７、チロシナーゼ、Ｐｍｅｌ１７（ｇｐ１００）、ＧｎＴ－ＶイントロンＶ配列（Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＶイントロンＶ配列）、前立腺がんｐｓｍ、ＰＲＡＭＥ（黒色腫抗原）、β－カテニン、ＥＢＮＡ（エプスタイン・バーウイルス核抗原）１～６、ｐ５３、肺耐性タンパク質（ＬＲＰ）Ｂｃｌ－２、前立腺特異性抗原（ＰＳＡ）、Ｋｉ－６７、ＣＥＡＣＡＭ６、結腸特異性抗原ｐ（ＣＳＡｐ）、ＨＬＡ－ＤＲ、ＣＤ４０、ＣＤ７４、ＣＤ１３８、ＥＧＦＲ、ＥＧＰ－１、ＥＧＰ－２、ＶＥＧＦ、ＰｌＧＦ、インスリン様成長因子（ＩＬＧＦ）、テネイシン、血小板由来成長因子、ＩＬ－６、ＣＤ２０、ＣＤ１９、ＰＳＭＡ、ＣＤ３３、ＣＤ１２３、ＭＥＴ、ＤＬＬ４、Ａｎｇ－２、ＨＥＲ３、ＩＧＦ－１Ｒ、ＣＤ３０、ＴＡＧ－７２、ＳＰＥＡＰ、ＣＤ４５、Ｌ１－ＣＡＭ、ルイスＹ（Ｌｅy）抗原、Ｅ－カドヘリン、Ｖ－カドヘリン、およびＥｐＣＡＭからなる群から選択される。
追加的にまたは代替的に、方法のいくつかの実施形態では、抗ＤＯＴＡ二重特異性抗体および／またはビスキレートは、静脈内に、筋肉内に、動脈内に、くも膜下腔内に、関節包内に、眼窩内に、皮内に、腹腔内に、経気管的に、皮下に、脳室内に、経口的にまたは鼻腔内に投与される。
一態様では、本開示は、がんと診断された対象において放射線治療に対する腫瘍の感受性を高めるための方法であって、式ＩＩのビスキレート、ならびに該ビスキレートおよび腫瘍抗原標的を認識し、結合する二重特異性抗体を含む複合体の有効量を対象に投与する工程であって、複合体が、複合体の二重特異性抗体によって認識される腫瘍抗原標的を発現している腫瘍に局在するように構成されている、工程を含む方法を提供する。複合体は、静脈内に、筋肉内に、動脈内に、くも膜下腔内に、関節包内に、眼窩内に、皮内に、腹腔内に、経気管的に、皮下に、脳室内に、経口的にまたは鼻腔内に投与され得る。いくつかの実施形態では、対象は、ヒトである。
別の態様では、本開示は、それを必要とする対象においてがんを処置するための方法であって、（ａ）腫瘍抗原標的を発現している腫瘍に局在するように構成された抗ＤＯＴＡ二重特異性抗体の有効量を対象に投与する工程と、（ｂ）抗ＤＯＴＡ二重特異性抗体に結合するように構成された、式ＩＩのビスキレートの有効量を対象に投与する工程とを含む方法を提供する。ある特定の実施形態では、方法は、ビスキレートの投与前に、クリアリング剤の有効量を対象に投与する工程をさらに含む。それを必要とする対象においてがんを処置するための方法であって、式ＩＩのビスキレート、ならびに該ビスキレートおよび腫瘍抗原標的を認識し、結合する二重特異性抗体を含む複合体の有効量を対象に投与する工程であって、複合体が、複合体の二重特異性抗体によって認識される腫瘍抗原標的を発現している腫瘍に局在するように構成されている、工程を含む方法もまた本明細書で提供される。
がんを処置するための方法は、ナイトロジェンマスタード、エチレンイミン誘導体、スルホン酸アルキル、ニトロソウレア、ゲムシタビン、トリアゼン、葉酸類似体、アントラサイクリン、タキサン、ＣＯＸ－２阻害剤、ピリミジン類似体、プリン類似体、抗生物質、酵素阻害剤、エピポドフィロトキシン、白金配位錯体、ビンカアルカロイド、置換尿素、メチルヒドラジン誘導体、副腎皮質抑制剤、ホルモン拮抗薬、エンドスタチン、タキソール、カンプトテシン、ＳＮ－３８、ドキソルビシン、ドキソルビシン類似体、代謝拮抗物質、アルキル化剤、抗有糸***薬、抗血管新生剤、チロシンキナーゼ阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、熱ショックタンパク質（ＨＳＰ９０）阻害剤、プロテオソーム阻害剤、ＨＤＡＣ阻害剤、アポトーシス促進剤、メトトレキサートおよびＣＰＴ－１１からなる群から選択される少なくとも１種の化学療法剤を対象に順次、別個に、または同時に投与する工程をさらに含み得る。いくつかの実施形態では、がんは、乳がん、結腸直腸がん、子宮頸部がん、卵巣がん、肝がん、膀胱がん、ヘパトーマ、肝細胞癌、脳がん、肺がん、胃がん、膵がん、甲状腺がん、腎臓または腎がん、前立腺がん、黒色腫、肉腫、癌腫、ウィルムス腫瘍、子宮内膜がん、神経膠芽細胞腫、扁平上皮がん、星細胞腫、唾液腺癌、外陰部がん、陰茎癌、および頭頸部がんからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、対象は、ヒトである。
患者においてがんを処置または診断するのに好適な構成成分を含有するキットもまた本明細書に開示される。一態様では、キットは、本技術のＤＯＴＡハプテン組成物、少なくとも１種の抗ＤＯＴＡ二重特異性抗体、および使用説明書を含む。キットは、クリアリング剤（例えば、ＤＯＴＡにコンジュゲートされた５００ｋＤａアミノデキストラン）および／または１種もしくは複数の放射性核種をさらに含み得る。
本技術のＤＯＴＡ－ハプテン（別名プロテウス－ＤＯＴＡ）（化学式：Ｃ50Ｈ80ＬｕＮ11Ｏ19Ｓ3-；精密質量：１３４５．４８；分子量：１３４６．２８）の構造を示す図である。分子の四角で囲まれた部分は、抗ＤＯＴＡ－ハプテン抗体一本鎖可変断片Ｃ８２５によってＫd＝１０ｐＭで認識される非放射性ベンジル－ＤＯＴＡ（Ｌｕ）ハプテンである。分子の空いている３アームのＤＯＴＡ部分は、225Ａｃ、68Ｇａ、および64Ｃｕを含む、治療および／または画像化に関連する多様な放射性金属を収容することができる。 腫瘍を担持する無胸腺ヌードマウスにおける［225Ａｃプロテウス－ＤＯＴＡ］と複合体化された二重特異性抗体（ＢｓＡｂ）抗ＨＥＲ２－Ｃ８２５または［225Ａｃプロテウス－ＤＯＴＡ］ハプテン単独のいずれかの生体内分布を示す図である。225Ａｃ－プロテウス－ＤＯＴＡハプテンを外側尾静脈から静脈内注射し、臓器採取および放射能判定のために、４時間後に安楽死させた。アスタリスク（＊）は、検出限界を下回るレベルを示す。皮下ＢＴ４７４腫瘍を有するヌードマウスの２つの群（各３匹のマウス）を、［225Ａｃプロテウス－ＤＯＴＡ］のみ（０．５１ｎｍｏｌ／マウス；約３０ｎＣｉの225Ａｃ／マウス）またはＰＤ１０で精製された［抗ＨＥＲ２－Ｃ８２５／［225Ａｃプロテウス－ＤＯＴＡ］複合体（推定１．７９ｎｍｏｌの225Ａｃプロテウス－ＤＯＴＡ／マウス、１．０ｎｍｏｌの抗体／マウス；１００ｎＣｉの225Ａｃ／マウス）のいずれかで処置し、ｅｘ ｖｉｖｏでの生体内分布アッセイのために、注射後４時間で屠殺した。組織サンプルを、平衡状態で翌日にガンマ計数器において読み取った。 腫瘍を担持する無胸腺ヌードマウスにおける事前標的化された［225Ａｃプロテウス－ＤＯＴＡ］ハプテンの生体内分布を示す図である。ｈｕＧＰＡ３３－Ｃ８２５ ＢｓＡｂ、クリアリング剤および［225Ａｃプロテウス－ＤＯＴＡ］ハプテンを静脈内注射（外側尾静脈から）した後に、動物を、臓器採取および放射能判定のために、２４時間後に安楽死させた。アスタリスク（＊）は、検出限界を下回るレベルを示す。 ルテチウム－ＤＯＴＡキレートの可能なジアステレオ異性体間の相互変換を示す図である。 ビス－ＤＯＴＡモノルテチウム錯体の合成スキームを示す図である。 抗ＨＥＲ２－Ｃ８２５または抗ＨＥＲ２ ＩｇＧの［225Ａｃプロテウス－ＤＯＴＡ］とのｉｎ ｖｉｔｒｏでの混合と、それに続くサイズ排除クロマトグラフィーを示す図である。点線は、カラム製造業者によって指定された空隙容量を示す。精製された［225Ａｃプロテウス－ＤＯＴＡ］ハプテンを標準物質として使用した。 ｔ＝０分で［68Ｇａ－プロテウス－ＤＯＴＡ］を皮下投与したＮＣＩ－Ｎ８７腫瘍を担持するヌードマウスからの動的ＰＥＴ（注射後０～１５分）、静的ＰＥＴ（注射後５１または５６分）、およびｅｘ ｖｉｖｏでの生体内分布データ（注射後２時間）を示す図である。２匹の個々のマウスについて、減衰補正された血液および腎臓の時間－放射能曲線（ＴＡＣ）を示す。動物の各々についての血液－ＴＡＣを、別個に、非線形二相減衰方程式に曲線適合させた。マウス１／マウス２についての（ｉ）急速相パーセント、（ｉｉ）半減期（緩徐相；分）、（ｉｉｉ）半減期（急速相；分）、および（ｉｖ）Ｒ2値は、それぞれ、４６／５６、１３．２／１３．７、１．４／０．９４、および０．９５／０．９９であった。 抗ＧＤ２－ＤＯＴＡ－ＰＲＩＴを用いた225Ａｃ－ＤＯＴＡ－Ｂｎおよび177Ｌｕ－ＤＯＴＡ－Ｂｎの事前標的化の比較を示す図である。右側脇腹に皮下ＧＤ２発現ＩＭＲ－３２ヒト神経芽腫異種移植片を担持する雌の無胸腺ヌードマウスに、３種の別個の試薬：（１）ｈｕ３Ｆ８－Ｃ８２５（０．２５ｍｇ、１．１９ｎｍｏｌ）［ｔ＝－２８時間（ｈ）］、続いて（２）０．１ｍｇの５００ｋＤデキストラン－ＤＯＴＡ－Ｂｎ（Ｙ）（０．２ｎｍｏｌのＣＡ；１４６のＤＯＴＡ－Ｂｎ（Ｙ）／１ｍｏｌのデキストラン、２９ｎｍｏｌのＤＯＴＡ－Ｂｎ（Ｙ））［ｔ＝－４時間］、ならびに（３）等モル量の177Ｌｕ－または225Ａｃ－ＤＯＴＡ－Ｂｎのいずれか（それぞれ、５０μＣｉおよび１００μＣｉの177Ｌｕおよび225Ａｃ、８～１０ｐｍｏｌ）［ｔ＝０時間］を外側尾静脈から静脈内（ｉ．ｖ．）注射した。マウスを、腫瘍および選択された正常組織の生体内分布アッセイのために、放射性トレーサーの注射後２４時間で屠殺した。平均腫瘍質量は、以下のとおりであった（平均±ＳＤとして提示されている）：177Ｌｕおよび225Ａｃコホートについて、それぞれ、０．７７±０．６２ｇおよび０．４９±０．２８ｇ。放射能濃度データは、平均％ＩＤ／ｇ±平均の標準誤差（ＳＥＭ）として表される。腫瘍対組織比の誤差は、平均の標準誤差の幾何平均として算出される。太字で強調されたスチューデントのｔ検定のｐ値は、有意とみなされる（ｐ＜０．０５）。 腫瘍のないヌードマウスにおける放射標識されたプロテウス－ＤＯＴＡのｉｎ ｖｉｖｏでの生体内分布および薬物動態を示す図である。サロゲート［111Ｉｎ］プロテウス－ＤＯＴＡの血中半減期を決定した。点線は、半減期を算出するために使用された非線形二相減衰解析（Ｒ2＝０．９１３）を示す。データは、平均±ＳＤとして提示されている。 腫瘍のないヌードマウスにおける放射標識されたプロテウス－ＤＯＴＡのｉｎ ｖｉｖｏでの生体内分布および薬物動態を示す図である。放射標識されたプロテウス－ＤＯＴＡトレーサーを、マウスの群に外側尾静脈から静脈内注射し、臓器採取および放射能のアッセイのために、１～４時間後に安楽死させた。データは、平均±ＳＤとして提示されている。 健康なヌードマウスにおける漸増用量の［225Ａｃ］プロテウス－ＤＯＴＡの毒物学研究を示す図である。最大耐容用量には到達しなかった。処置された動物の体重を、処置前のベースライン体重に対する百分率としてプロットした。アスタリスク（＊）は、安楽死を必要とするまたは死亡して発見されたマウスを示す。データは、平均±ＳＤとして提示されている。 種々の用量レベルの［225Ａｃ］プロテウス－ＤＯＴＡで処置された腫瘍のない健康な雌の無胸腺ヌードマウスの剖検時に取得された１４５日での選択された臓器の質量を示す図である。臓器の質量に有意な群差は観察されなかった。 腫瘍のない健康な無胸腺ｎｕ／ｎｕ雌マウスにおける注射後２４０分（ｎ＝５匹のマウス；静脈内に与えた）での［111Ｉｎ］プロテウス－ＤＯＴＡ（７４０ｋＢｑ［２０μＣｉ］／３．３８ｎｍｏｌ）の生体内分布を示す図である。
本方法のある特定の態様、方式、実施形態、変形形態および特徴は、本技術の実質的な理解を与えるために、下記に様々な詳細度で説明されることを認識すべきである。
本方法の実施においては、分子生物学、タンパク質生化学、細胞生物学、微生物学および組換えＤＮＡにおける多くの従来の技法が使用される。例えば、Sambrook and Russell eds. (2001) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3rd edition；the series Ausubel et al. eds. (2007) Current Protocols in Molecular Biology；the series Methods in Enzymology (Academic Press, Inc., N.Y.)；MacPherson et al. (1991) PCR 1: A Practical Approach (IRL Press at Oxford University Press)；MacPherson et al. (1995) PCR 2: A Practical Approach；Harlow and Lane eds. (1999) Antibodies, A Laboratory Manual；Freshney (2005) Culture of Animal Cells: A Manual of Basic Technique, 5th edition；Gait ed. (1984) Oligonucleotide Synthesis；米国特許第４，６８３，１９５号；Hames and Higgins eds. (1984) Nucleic Acid Hybridization；Anderson (1999) Nucleic Acid Hybridization；Hames and Higgins eds. (1984) Transcription and Translation；Immobilized Cells and Enzymes (IRL Press (1986))；Perbal (1984) A Practical Guide to Molecular Cloning；Miller and Calos eds. (1987) Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells (Cold Spring Harbor Laboratory)；Makrides ed. (2003) Gene Transfer and Expression in Mammalian Cells；Mayer and Walker eds. (1987) Immunochemical Methods in Cell and Molecular Biology (Academic Press, London)；およびHerzenberg et al. eds (1996) Weir's Handbook of Experimental Immunologyを参照されたい。
本技術の組成物は、画像診断／線量測定およびＰＲＩＴ（例えば、アルファ粒子放射免疫治療）において有用である新規なＤＯＴＡ－ハプテンを含む。本明細書に開示される組成物は、標的化放射線治療のためのアクチニウム－２２５（225Ａｃ）のｉｎ ｖｉｖｏでの効率的な抗ＤＯＴＡ二重特異性抗体媒介腫瘍事前標的化を可能にする。ＤＯＴＡ－ＰＲＩＴプラットフォームは、（１）抗腫瘍抗原抗体（ＩｇＧ部分）およびｐＭの親和性の抗ＤＯＴＡ－ハプテン一本鎖可変断片ｓｃＦｖ「Ｃ８２５」の抗体配列を含むＩｇＧ－一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）二重特異性抗体構築物（ＩｇＧ－ｓｃＦｖ）、（２）５００ｋＤデキストラン－ＤＯＴＡ－ハプテンクリアリング剤、ならびに（３）本技術の放射標識されたＤＯＴＡハプテン組成物の投与を含む、３段階の事前標的化戦略を伴う。
以前の研究は、ＧＰＡ３３発現結腸がん異種移植片を担持する無胸腺ヌードマウスのセラノスティックなベータ粒子放射免疫治療（ＲＩＴ）またはｉｎ ｖｉｖｏ陽電子放出断層撮影法（ＰＥＴ）のために、それぞれ、抗ＧＰＡ３３－ＤＯＴＡ－ＰＲＩＴを使用して、177Ｌｕ－または86Ｙ－Ｓ－２－（４－アミノベンジル）－１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン四酢酸キレート（ＤＯＴＡ－Ｂｎ）ハプテンを事前標的化できることを実証している。しかしながら、モデルＰＲＩＴシステムを使用するｉｎ ｖｉｖｏでの225Ａｃ－ＤＯＴＡ－Ｂｎを用いた事前標的化は、注射後２４時間で225Ａｃ－ＤＯＴＡ－Ｂｎの著明でない腫瘍内取り込み（＜１％ＩＤ／ｇ）をもたらした。図８を参照されたい。したがって、従来のＤＯＴＡ－ハプテンは、225Ａｃ等の高線エネルギー付与（ＬＥＴ）のアルファ粒子放出同位体を伴うＤＯＴＡ－ＰＲＩＴ放射線治療用途に適していない。
対照的に、本明細書に開示されるＤＯＴＡハプテン組成物は、（ａ）固形腫瘍の効率的なｉｎ ｖｉｖｏでの事前標的化アルファ粒子放射線治療を可能にし、（ｂ）望まれない腎臓／全身保持なしに完全な腎クリアランスを呈し、かつ（ｃ）抗ＤＯＴＡ二重特異性抗体（例えば、抗ＨＥＲ２－Ｃ８２５）に高親和性で結合することができる（すなわち、本技術のＤＯＴＡハプテン組成物のＡｃ－225－ＤＯＴＡ部分は、ＤＯＴＡハプテン組成物のルテチウム－ＤＯＴＡ部分と抗ＤＯＴＡ二重特異性抗体との相互作用を立体的に遮断しない）。
定義
別段の定義がない限り、本明細書で使用されるすべての技術的および科学的用語は、一般に、本技術が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書および添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」および「その（ｔｈｅ）」は、内容上明確に別段の指示がない限り、複数の指示対象を含む。例えば、「１個の細胞」への言及は、２個以上の細胞の組合せを含むなどである。一般に、本明細書で使用される命名法、ならびに下記の細胞培養、分子遺伝学、有機化学、分析化学および核酸化学およびハイブリダイゼーションにおける実験室手順は、当技術分野で周知であり、かつ一般的に用いられるものである。
本明細書で使用される場合、数に関する「約」という用語は、一般に、別段の記載がない限りまたは文脈から別段に明らかでない限り、その数のいずれかの方向（それを超えるまたはそれ未満）での１％、５％、または１０％の範囲内に入る数を含む（そのような数が可能値の０％未満となるまたは１００％を超える場合を除く）と解釈される。
本明細書に記載された化合物の薬学的に許容される塩は、本技術の範囲内にあり、所望の薬理活性を保持し、かつ生物学的に望ましくないものでない酸または塩基付加塩を含む（例えば、塩は、過度に毒性、アレルギー性、または刺激性でなく、生物学的に利用可能である）。本技術の化合物が、例えば、アミノ基等の塩基性基を有する場合、薬学的に許容される塩は、無機酸（塩酸、ヒドロホウ酸（ｈｙｄｒｏｂｏｒｉｃ ａｃｉｄ）、硝酸、硫酸、およびリン酸等）、有機酸（例えば、アルギネート、ギ酸、酢酸、安息香酸、グルコン酸、フマル酸、シュウ酸、酒石酸、乳酸、マレイン酸、クエン酸、コハク酸、リンゴ酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ナフタレンスルホン酸、およびｐ－トルエンスルホン酸）または酸性アミノ酸（アスパラギン酸およびグルタミン酸等）と形成することができる。本技術の化合物が、例えば、カルボン酸基等の酸性基を有する場合、これは、アルカリおよびアルカリ土類金属等の金属（例えば、Ｎａ+、Ｌｉ+、Ｋ+、Ｃａ2+、Ｍｇ2+、Ｚｎ2+）、アンモニアもしくは有機アミン（例えば、ジシクロヘキシルアミン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、ピリジン、ピコリン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン）または塩基性アミノ酸（例えば、アルギニン、リシンおよびオルニチン）と塩を形成することができる。そのような塩は、化合物の単離および精製の間にｉｎ ｓｉｔｕで、または精製された化合物をその遊離塩基もしくは遊離酸形態でそれぞれ好適な酸もしくは塩基と別個に反応させ、こうして形成された塩を単離することによって調製することができる。
本明細書で使用される場合、薬剤または薬物の対象への「投与」は、化合物をその意図された機能を果たすために対象に導入または送達する任意の経路を含む。投与は、任意の好適な経路によって、例えば経口的に、鼻腔内に、非経口的に（静脈内に、筋肉内に、腹腔内に、もしくは皮下に）、直腸に、または局所的に行うことができる。投与は、自己投与および他者による投与を含む。
本明細書で使用される場合、「抗体」という用語は、免疫グロブリンまたは免疫グロブリン様分子を総称的に指し、例として、限定はしないが、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭ、それらの組合せ、ならびに任意の脊椎動物において、例えば、ヒト、ヤギ、ウサギおよびマウス等の哺乳動物、およびサメ免疫グロブリン等の非哺乳動物種において免疫応答の間に産生される類似の分子を含む。本明細書で使用される場合、「抗体」（「無傷の免疫グロブリン」を含む）および「抗原結合断片」は、他の分子への結合を実質的に排除して、目的の分子（または目的の高度に類似した分子の群）に特異的に結合する（例えば、目的の分子に対して、生体サンプル中の他の分子に対する結合定数よりも約１０3Ｍ-1倍大きい、約１０4Ｍ-1倍大きいまたは約１０5Ｍ-1倍大きい結合定数を有する抗体および抗体断片）。「抗体」という用語はまた、キメラ抗体（例えば、ヒト化マウス抗体）、ヘテロコンジュゲート抗体（二重特異性抗体等）等の遺伝子操作された形態を含む。Pierce Catalog and Handbook, 1994-1995 (Pierce Chemical Co., Rockford, Ill.)；Kuby, J., Immunology, 3rd Ed., W.H. Freeman & Co., New York, 1997も参照されたい。
より詳細には、抗体は、抗原のエピトープを特異的に認識し、結合する、少なくとも軽鎖免疫グロブリン可変領域または重鎖免疫グロブリン可変領域を含むポリペプチドリガンドを指す。抗体は、重鎖および軽鎖から構成され、それらは各々、可変重鎖（ＶH）領域および可変軽鎖（ＶL）領域と称される可変領域を有する。併せて、ＶH領域およびＶL領域は、抗体によって認識される抗原の結合を担う。典型的に、免疫グロブリンは、ジスルフィド結合によって相互接続された重（Ｈ）鎖および軽（Ｌ）鎖を有する。軽鎖には２つのタイプ、ラムダ（λ）およびカッパ（κ）が存在する。抗体分子の機能活性を決定する５つの主な重鎖クラス（またはアイソタイプ）：ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡおよびＩｇＥが存在する。各重鎖および軽鎖は、定常領域および可変領域（領域は「ドメイン」としても知られている）を含有する。組み合わさって、重鎖および軽鎖可変領域は、抗原に特異的に結合する。軽鎖および重鎖可変領域は、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」とも呼ばれる３つの超可変領域によって中断された「フレームワーク」領域を含有する。フレームワーク領域およびＣＤＲの範囲は定義されている（参照により本明細書に組み込まれる、Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, U.S. Department of Health and Human Services, 1991を参照されたい）。Ｋａｂａｔデータベースは、現在オンラインで維持されている。異なる軽鎖または重鎖のフレームワーク領域の配列は、種内で相対的に保存されている。抗体のフレームワーク領域、すなわち、構成要素である軽鎖および重鎖の組み合わされたフレームワーク領域は、大部分がβシート配座をとり、ＣＤＲは、βシート構造を接続し、いくつかの場合にはβシート構造の一部を形成するループを形成する。したがって、フレームワーク領域は、鎖間の非共有結合的相互作用によってＣＤＲを正しい配向に位置させることを可能にする足場を形成するように作用する。
ＣＤＲは、主として、抗原のエピトープへの結合を担う。各鎖のＣＤＲは、典型的に、Ｎ末端から順に番号付けされてＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と称され、また、典型的に、特定のＣＤＲが位置する鎖によって特定される。したがって、ＶH ＣＤＲ３は、それが存在する抗体の重鎖の可変ドメインに位置するのに対し、ＶL ＣＤＲ１は、それが存在する抗体の軽鎖の可変ドメイン由来のＣＤＲ１である。標的タンパク質（例えば、ＨＥＲ２）または分子（例えば、ＤＯＴＡ）に結合する抗体は、特異的なＶH領域およびＶL領域配列を有し、したがって、特異的なＣＤＲ配列を有する。異なる特異性（すなわち、異なる抗原に対する異なる組合せ部位）を有する抗体は、異なるＣＤＲを有する。抗体によって変化するのはＣＤＲであるが、ＣＤＲ内の限定された数のアミノ酸位置のみが抗原結合に直接関与する。ＣＤＲ内のこれらの位置は、特異性決定残基（ＳＤＲ）と呼ばれる。抗体の例は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、組換え抗体、多重特異性抗体、二重特異性抗体、および抗体断片を含む。抗体は、抗原に特異的に結合する。
「二重特異性抗体」は、２種の異なる抗原に同時に結合することができる抗体である。二重特異性抗体（ＢｓＡｂ）および二重特異性抗体断片（ＢｓＦａｂ）は、例えば、腫瘍関連抗原（例えば、ＨＥＲ２）に特異的に結合する少なくとも１つのアーム、および治療または診断剤を担持する標的化可能なコンジュゲート（例えば、プロテウス－ＤＯＴＡ）に特異的に結合する少なくとも１つの他のアームを有し得る。多様な異なる二重特異性抗体構造が当技術分野で知られている。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体における各結合部分は、異なるモノクローナル抗体由来のＶHおよび／またはＶL領域を含む。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、第１のモノクローナル抗体由来のＣＤＲを含有するＶHおよび／またはＶL領域を有する免疫グロブリン分子、ならびに第２のモノクローナル抗体由来のＣＤＲを含有するＶHおよび／またはＶL領域を有する抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）、Ｆ（ａｂ’）2、Ｆｄ、Ｆｖ、ｄＡＢ、ｓｃＦｖ等）を含む。
本明細書で使用される場合、「ダイアボディ」という用語は、２つの抗原結合部位を有する小さい抗体断片であって、同じポリペプチド鎖中の軽鎖可変ドメイン（ＶL）に接続された重鎖可変ドメイン（ＶH）（ＶHＶL）を含む断片を指す。同じ鎖上の２つのドメイン間の対合を可能にするには短すぎるリンカーを使用することによって、それらのドメインが別の鎖の相補的ドメインとの対合を強いられ、２つの抗原結合部位を作り出す。ダイアボディは、例えば、ＥＰ４０４，０９７；ＷＯ９３／１１１６１；および30 Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90: 6444-6448 (1993)により詳細に記載されている。
本明細書で使用される場合、「一本鎖抗体」または「一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）」という用語は、Ｆｖ断片の２つのドメイン、ＶLおよびＶHの抗体融合分子を指す。一本鎖抗体分子は、いくつかの個々の分子を含むポリマー、例えば、ダイマー、トリマーまたは他のポリマーを含み得る。さらに、Ｆv断片の２つのドメイン、ＶLおよびＶHは、別個の遺伝子によってコードされるが、組換え方法を使用して、ＶLおよびＶH領域が対合して一価の分子（一本鎖Ｆv（ｓｃＦv）として知られている）を形成する単一のタンパク質鎖としてそれらを作製することを可能にする合成リンカーによって、それらを連結することができる。Bird et al. (1988) Science 242:423-426およびHuston et al. (1988) Proc. Natl. Acad Sci. USA 85:5879-5883。そのような一本鎖抗体は、組換え技法または無傷の抗体の酵素的もしくは化学的切断によって調製することができる。
本明細書で使用される場合、「無傷の抗体」または「無傷の免疫グロブリン」という用語は、ジスルフィド結合によって相互接続された少なくとも２つの重（Ｈ）鎖ポリペプチドおよび２つの軽（Ｌ）鎖ポリペプチドを有する抗体または免疫グロブリンを意味する。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書ではＨＣＶＲまたはＶHと略称する）および重鎖定常領域から構成される。重鎖定常領域は、３つのドメイン、ＣＨ1、ＣＨ2およびＣＨ3から構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書ではＬＣＶＲまたはＶLと略称する）および軽鎖定常領域から構成される。軽鎖定常領域は、１つのドメイン、ＣLから構成される。ＶHおよびＶL領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と称されるより保存された領域が組み入れられた、相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される超可変性領域にさらに細分することができる。各ＶHおよびＶLは、３つのＣＤＲおよび４つのＦＲから構成され、アミノ末端からカルボキシル末端へ以下の順序：ＦＲ1、ＣＤＲ1、ＦＲ2、ＣＤＲ2、ＦＲ3、ＣＤＲ3、ＦＲ4で配置される。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含有する。抗体の定常領域は、免疫系の様々な細胞（例えば、エフェクター細胞）および古典的補体系の第１成分（Ｃｌｑ）を含む、宿主組織または因子への免疫グロブリンの結合を媒介することができる。
本明細書で使用される場合、「抗原」は、抗体が選択的に結合することができる分子を指す。標的抗原は、タンパク質（例えば、抗原ペプチド）、炭水化物、核酸、脂質、ハプテン、または他の天然に存在するもしくは合成の化合物であり得る。抗原はまた、対象において免疫応答を発生させるために動物対象に投与され得る。
本明細書で使用される場合、「抗原結合断片」という用語は、抗原への結合を担うポリペプチドの一部を保有する全免疫グロブリン構造の断片を指す。本技術において有用な抗原結合断片の例は、ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）2、ｓｃＦｖＦｃ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’およびＦ（ａｂ’）2、ダイアボディ；線状抗体；一本鎖抗体分子；ならびに抗体断片から形成された多重特異性抗体を含む。
「結合親和性」とは、分子（例えば、抗体）の単一の結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）との非共有結合的相互作用の合計の強度を意味する。分子ＸのそのパートナーＹに対する親和性は、一般に、解離定数（Ｋd）によって表すことができる。親和性は、本明細書に記載されたものを含む、当技術分野で知られている標準的な方法によって測定することができる。低親和性複合体は、一般に抗原から容易に解離する傾向がある抗体を含有するのに対し、高親和性複合体は、一般により長い持続期間にわたって抗原に結合したままである傾向がある抗体を含有する。
本明細書で使用される場合、「クリアリング剤」は、対象の血液区画内に存在する過剰の二機能性抗体に結合して、腎臓による迅速なクリアランスを容易にする薬剤である。ハプテン投与前のクリアリング剤の使用は、ＰＲＩＴシステムにおけるより良好な腫瘍対バックグラウンド比を容易にする。クリアリング剤の例は、５００ｋＤデキストラン－ＤＯＴＡ－Ｂｎ（Ｙ）（Orcutt et al., Mol Cancer Ther. 11(6): 1365-1372 (2012)）、５００ｋＤアミノデキストラン－ＤＯＴＡコンジュゲート、事前標的化抗体に対する抗体等を含む。
本明細書で使用される場合、「対照」は、実験において比較目的で使用される代替サンプルである。対照は、「陽性」または「陰性」であり得る。例えば、実験の目的が特定のタイプの疾患または状態の処置に対する治療剤の効力の相関を決定することである場合、陽性対照（所望の治療効果を呈することが知られている化合物または組成物）および陰性対照（治療を受けないまたはプラセボを受ける対象またはサンプル）が典型的に用いられる。
本明細書で使用される場合、組成物の「有効量」という用語は、所望の予防または治療効果を達成するのに十分な分量であり、例えば、処置されている疾患、例えば、標的ポリペプチドに関連する疾患または医学的状態（例えば、乳がん、結腸直腸がん、脳がん等）に関連する症状の減少を生じさせる量である。対象に投与される本技術の組成物の量は、疾患の程度、タイプおよび重症度ならびに個体の特徴、例えば全般的な健康状態、年齢、性別、体重および薬物への耐性によって決まる。当業者は、これらのおよび他の因子に応じて適切な投与量を決定することができる。本技術の組成物はまた、１種または複数の追加の治療化合物と組み合わせて投与することができる。
本明細書で使用される場合、「エピトープ」という用語は、抗体への特異的結合が可能な抗原決定基を意味する。エピトープは、通常は、分子の化学的に活性な表面基からなり、通常は、特定の３次元構造特徴、および特定の電荷特徴を有する。
本明細書で使用される場合、「無限バインダー」は、結合の際に二重特異性抗体と金属キレートとの高度に特異的な永久的結合を形成することによって特徴付けられる抗金属キレート二重特異性抗体を指す。Corneillie et al., J. Inorganic Biochemistry 100:882-890 (2006)を参照されたい。
本明細書で使用される場合、「サンプル」という用語は、対象または単離された微生物から取得された臨床サンプルを指す。ある特定の実施形態では、サンプルは、対象から採取された組織、体液、または微生物等の、生物学的供給源から取得される（すなわち、「生体サンプル」）。サンプル供給源は、粘液、痰、気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬ）、気管支洗浄液（ＢＷ）、全血、体液、脳脊髄液（ＣＳＦ）、尿、血漿、血清、または組織を含むがこれらに限定されない。
本明細書で使用される場合、「別個の」治療的使用という用語は、少なくとも２種の活性成分を、異なる経路によって、同時にまたは実質的に同時に投与することを指す。
本明細書で使用される場合、「順次の」治療的使用という用語は、少なくとも２種の活性成分を、異なる時点で投与することを指し、投与経路は同一であるかまたは異なる。より詳細には、順次使用は、活性成分の１種を、他の活性成分の投与が開始する前に全部投与することを指す。したがって、活性成分の１種を、他の活性成分を投与する前に数分、数時間、または数日にわたって投与することが可能である。この場合、同時の処置は存在しない。
本明細書で使用される場合、「同時の」治療的使用という用語は、少なくとも２種の活性成分を、同じ経路によって、かつ同時にまたは実質的に同時に投与することを指す。
本明細書で使用される場合、「特異的に結合する」は、分子（例えば、抗体）が、別の分子（例えば、抗原）を認識し、結合するが、その他の分子を実質的に認識し、結合しないことを指す。本明細書で使用される「特異的結合」、特定の分子（例えば、抗原、または抗原上のエピトープ）「に特異的に結合する」、または「に特異的」であるという用語は、例えば、それが結合する分子に対して約１０-4Ｍ、１０-5Ｍ、１０-6Ｍ、１０-7Ｍ、１０-8Ｍ、１０-9Ｍ、１０-10Ｍ、１０-11Ｍ、または１０-12ＭのＫdを有する分子によって表され得る。
本明細書で使用される場合、「対象」、「個体」、または「患者」という用語は、区別なく使用され、個々の生物、脊椎動物、哺乳動物、またはヒトを指す。ある特定の実施形態では、個体、患者または対象は、ヒトである。
本明細書で使用される場合、「治療剤」という用語は、有効量で存在する場合に、それを必要とする対象に対して所望の治療効果を生じる化合物を意味することが意図されている。
本明細書で使用される「処置する」または「処置」は、対象、例えばヒトにおける本明細書に記載された疾患または障害の処置を包含し、（ｉ）疾患もしくは障害を阻害すること、すなわち、その発症を阻止すること；（ｉｉ）疾患もしくは障害を軽減すること、すなわち、障害の退行を引き起こすこと；（ｉｉｉ）障害の進行を緩徐化すること；および／または（ｉｖ）疾患もしくは障害の１つもしくは複数の症状を阻害し、軽減し、もしくはその進行を緩徐化することを含む。「がんを処置する」とは、がんに関連する症状が、例えば、緩和され、低減され、治癒し、または寛解の状態に置かれることを意味する。
本明細書に記載された疾患の様々な処置方式は、完全な処置を含むが完全に満たない処置も含む「実質的な」処置であって、何らかの生物学的にまたは医学的に関連する結果が達成されるものを意味することが意図されていることもまた認識すべきである。処置は、慢性疾患の継続的な長期処置、または急性状態の処置のための単回、もしくは数回の投与であり得る。
事前標的化放射免疫治療（ＰＲＩＴ）
事前標的化は、骨髄等の正常組織に対する望ましくない毒性の一因となる、腫瘍標的化抗体の緩徐な血液クリアランスを解決する多段階プロセスである。事前標的化においては、放射性核種または他の診断または治療剤を低分子ハプテンに付着させる。ハプテンおよび標的抗原に対する結合部位を有する事前標的化二重特異性抗体を最初に投与する。次いで、非結合抗体を循環から排出させ、その後、ハプテンを投与する。
ＤＯＴＡ－ＰＲＩＴは、ベータ放出放射性同位体（例えば、ルテチウム－１７７）をＧＤ２またはＧＰＡ３３発現ヒト癌異種移植片に有効に標的化し、それにより、骨髄および腎臓等の正常組織に対する毒性を低減するために使用されている。ベータ粒子放出（例えば、177Ｌｕ－ＤＯＴＡ－Ｂｎハプテンからの）は、１～１０ｎｍおよび０．１～１ＭｅＶのエネルギーの範囲を有する低線エネルギー付与であると考えられる。ＤＯＴＡ－ＰＲＩＴは、ルテチウムおよびイットリウムのベータ粒子放出放射性同位体（それぞれ、177Ｌｕおよび90Ｙ）の標的化に最適に適しており、その理由は、抗ＤＯＴＡ Ｃ８２５（抗ＤＯＴＡ ｓｃＦｖ）は、そのような放射性ランタニドを含有するＤＯＴＡ錯体にｐＭの親和性で結合するからである。
しかしながら、固形腫瘍は、一般に、放射線耐性である。他方で、アルファ粒子放射線治療（例えば、225Ａｃ－ＤＯＴＡ－ハプテンを用いる）は、５０～８０μｍおよび５～８ＭｅＶのエネルギーの範囲を有する高線エネルギー付与のアルファ粒子放出によって、最小限の二次的損傷で高度に強力な殺細胞活性を生じさせる。より長い距離にわたってそのエネルギーを与えることができるベータ粒子とは異なり、アルファ粒子放射線治療は、がん再発の主要な原因となり得る微小残存病変を含む、小体積の腫瘍に対して高い治療可能性を有する。したがって、ベータ粒子と比較してより大きい治療可能性を有する、アルファ粒子放出体を用いたＤＯＴＡ－ＰＲＩＴ放射線治療の有効性を高めることが必要である。
Ｃ８２５の固有の限定は、ｓｃＦｖが様々な抗ＤＯＴＡ－ハプテンに対して有する結合親和性の変化であり、これは、三価希土類のイオン半径に高度に依存する。以前のモデル化研究は、１００ｐＭのハプテン結合親和性が、ＰＲＩＴにおける電離放射線の効率的な送達のために必要とされ（高い抗原密度および飽和ＢｓＡｂ用量の条件を想定する）、具体的には血管腫瘍および微小転移における最大限に近いハプテン保持を達成するために必要とされることを実証している。Ｃ８２５は、Ｙ、Ｌｕ、またはＧｄのＤＯＴＡ－Ｂｎ［Ｓ－２－（４－アミノベンジル）－１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン四酢酸キレート］錯体に、それぞれ、１５．４±２．０ｐＭ、１０．８±２．５ｐＭ、または３４．０±５．３ｐＭのＫd（平衡解離定数、平均±ＳＤとして）で結合することが示された。対照的に、ＩｎまたはＧａを含有するＤＯＴＡ－Ｂｎ錯体に対するＫdは、１．０１±０．０４ｎＭまたは５２±１２ｎＭであった。したがって、ＤＯＴＡ－ＰＲＩＴは、ベータ粒子放出体であるイットリウム－９０およびルテチウム－１７７の標的化によく適しているが、アルファ粒子放出体（例えば、アクチニウム同位体）に適合する可能性は低い。
225Ａｃに対するＫdはｉｎ ｖｉｔｒｏで特徴付けられなかったが、予備実験は、モデルＤＯＴＡ－ＰＲＩＴシステム（抗ＧＤ２－ＤＯＴＡ－ＰＲＩＴ）を使用するｉｎ ｖｉｖｏでの225Ａｃ－ＤＯＴＡ－Ｂｎを用いた事前標的化が、等モルの投与された177Ｌｕ－ＤＯＴＡ－Ｂｎと比較して、注射後２４時間で225Ａｃ－ＤＯＴＡ－Ｂｎの統計的に有意（ｐ≦０．００５；対応のない両側のスチューデントのｔ検定）かつ著明でない腫瘍内取り込み（％ＩＤ／ｇとして；平均±標準偏差（ＳＤ）；225Ａｃ－ＤＯＴＡ－Ｂｎ（ｎ＝５）について：０．８２±０．１７；177Ｌｕ－ＤＯＴＡ－Ｂｎ（ｎ＝５）について：１０．２９±２．８７）をもたらしたことを示している。図８を参照されたい。血液または腎臓等の正常組織において大きな差は観察されず（血液について：225Ａｃ－または177Ｌｕ－ＤＯＴＡ－Ｂｎについて、それぞれ、０．３３±０．０３または０．４９±０．０９；腎臓について：225Ａｃ－または177Ｌｕ－ＤＯＴＡ－Ｂｎについて、それぞれ、０．６５±０．１５または０．８３±０．１０；いずれもｐ＞０．０５）、これは、２種のトレーサーのｉｎ ｖｉｖｏ結果が類似しており、ｉｎ ｖｉｖｏでの安定性が腫瘍局在の限定因子ではなかった可能性が高いことを示唆している。
本技術の組成物
ＤＯＴＡは、生理学的条件下で不可逆的である安定な金属錯体を形成する大環状キレート剤である。ＤＯＴＡは、４０５ダルトンの分子量を有し、迅速な拡散および腎クリアランスを呈する。ＤＯＴＡおよびそのバリアントは、常磁性金属および放射性核種を含む広範な金属をキレートする。例示的な金属は、イットリウム、インジウム、ガリウム、ガドリニウム、ユウロピウム、テルビウム、ルテチウム、銅、ビスマス、アクチニウムおよびすべてのランタニド金属を含む。
一態様では、本開示は、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩
Figure 0007270596000003
 (I)
（式中、Ｍ1は、175Ｌｕ3+、45Ｓｃ3+、69Ｇａ3+、71Ｇａ3+、89Ｙ3+、113Ｉｎ3+、115Ｉｎ3+、139Ｌａ3+、136Ｃｅ3+、138Ｃｅ3+、140Ｃｅ3+、142Ｃｅ3+、151Ｅｕ3+、153Ｅｕ3+、159Ｔｂ3+、154Ｇｄ3+、155Ｇｄ3+、156Ｇｄ3+、157Ｇｄ3+、158Ｇｄ3+、または160Ｇｄ3+であり、Ｘ1、Ｘ2、Ｘ3、およびＸ4は、各々独立して、孤立電子対（すなわち、酸素アニオンを与える）またはＨであり、Ｘ5、Ｘ6、およびＸ7は、各々独立して、孤立電子対（すなわち、酸素アニオンを与える）またはＨであり、Ｙ1は、ＯまたはＳであり、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、または２２である）
を提供する。ある特定の実施形態では、ｎは、３である。ある特定の実施形態では、ｎは、３であり、Ｙ1は、Ｓである。
化合物のいくつかの実施形態では、Ｘ1、Ｘ2、Ｘ3、およびＸ4のうち少なくとも２つは、各々独立して、孤立電子対である。化合物のある特定の実施形態では、Ｘ1、Ｘ2、Ｘ3、およびＸ4のうち３つは、各々独立して、孤立電子対であり、残りのＸ1、Ｘ2、Ｘ3、またはＸ4は、Ｈである。
別の態様では、本開示は、式Ｉの上記化合物のいずれかおよび放射性核種カチオンを含むビスキレートを提供する。いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物は、放射性核種カチオンに、約１ｐＭ～１ｎＭ（例えば、約１～１０ｐＭ；１～１００ｐＭ；５～５０ｐＭ；１００～５００ｐＭ；または５００ｐＭ～１ｎＭ）のＫdで結合することができる。いくつかの実施形態では、Ｋdは、約１ｎＭ～約１ｐＭの範囲内、例えば、約１ｎＭ、９５０ｐＭ、９００ｐＭ、８５０ｐＭ、８００ｐＭ、７５０ｐＭ、７００ｐＭ、６５０ｐＭ、６００ｐＭ、５５０ｐＭ、５００ｐＭ、４５０ｐＭ、４００ｐＭ、３５０ｐＭ、３００ｐＭ、２５０ｐＭ、２００ｐＭ、１５０ｐＭ、１００ｐＭ、９０ｐＭ、８０ｐＭ、７０ｐＭ、６０ｐＭ、５０ｐＭ、４０ｐＭ、３０ｐＭ、２０ｐＭ、１０ｐＭ、９ｐＭ、８ｐＭ、７ｐＭ、６ｐＭ、５ｐＭ、４ｐＭ、３ｐＭ、２．５ｐＭ、２ｐＭ、または１ｐＭ以下である。いくつかの実施形態では、ビスキレートは、式ＩＩのビスキレートまたはその薬学的に許容される塩
Figure 0007270596000004
 (II)
（式中、Ｍ1は、175Ｌｕ3+、45Ｓｃ3+、69Ｇａ3+、71Ｇａ3+、89Ｙ3+、113Ｉｎ3+、115Ｉｎ3+、139Ｌａ3+、136Ｃｅ3+、138Ｃｅ3+、140Ｃｅ3+、142Ｃｅ3+、151Ｅｕ3+、153Ｅｕ3+、159Ｔｂ3+、154Ｇｄ3+、155Ｇｄ3+、156Ｇｄ3+、157Ｇｄ3+、158Ｇｄ3+、または160Ｇｄ3+であり、Ｍ2は、放射性核種カチオンであり、Ｘ1、Ｘ2、Ｘ3、およびＸ4は、各々独立して、孤立電子対（すなわち、酸素アニオンを与える）またはＨであり、Ｘ5、Ｘ6、およびＸ7は、各々独立して、孤立電子対（すなわち、酸素アニオンを与える）またはＨであり、Ｙ1は、ＯまたはＳであり、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、または２２である）
である。ある特定の実施形態では、ｎは、３である。ある特定の実施形態では、ｎは、３であり、Ｙ1は、Ｓである。
ビスキレートのいくつかの実施形態では、Ｘ5、Ｘ6、およびＸ7のうち少なくとも２つは、各々独立して、孤立電子対である。追加的にまたは代替的に、ビスキレートのいくつかの実施形態では、放射性核種カチオンは、二価カチオンまたは三価カチオンである。放射性核種カチオンは、アルファ粒子放出同位体、ベータ粒子放出同位体、オージェ放出体、またはそれらのいずれか２種以上の組合せであり得る。アルファ粒子放出同位体の例は、213Ｂｉ、211Ａｔ、225Ａｃ、152Ｄｙ、212Ｂｉ、223Ｒａ、219Ｒｎ、215Ｐｏ、211Ｂｉ、221Ｆｒ、217Ａｔ、および255Ｆｍを含むがこれらに限定されない。ベータ粒子放出同位体の例は、86Ｙ、90Ｙ、89Ｓｒ、165Ｄｙ、186Ｒｅ、188Ｒｅ、177Ｌｕ、および67Ｃｕを含むがこれらに限定されない。オージェ放出体の例は、111Ｉｎ、67Ｇａ、51Ｃｒ、58Ｃｏ、99mＴｃ、103mＲｈ、195mＰｔ、119Ｓｂ、161Ｈｏ、189mＯｓ、192Ｉｒ、201Ｔｌ、および203Ｐｂを含む。ビスキレートのいくつかの実施形態では、放射性核種カチオンは、68Ｇａ、227Ｔｈ、または64Ｃｕである。
いくつかの実施形態では、放射性核種カチオンは、２０～６，０００ｋｅＶの範囲内の崩壊エネルギーを有する。崩壊エネルギーは、オージェ放出体については６０～２００ｋｅＶ、ベータ放出体については１００～２，５００ｋｅＶ、およびアルファ放出体については４，０００～６，０００ｋｅＶの範囲内であり得る。有用なベータ粒子放出核種の最大崩壊エネルギーは、２０～５，０００ｋｅＶ、１００～４，０００ｋｅＶ、または５００～２，５００ｋｅＶの範囲であり得る。有用なオージェ放出体の崩壊エネルギーは、＜１，０００ｋｅＶ、＜１００ｋｅＶ、または＜７０ｋｅＶであり得る。有用なアルファ粒子放出放射性核種の崩壊エネルギーは、２，０００～１０，０００ｋｅＶ、３，０００～８，０００ｋｅＶ、または４，０００～７，０００ｋｅＶの範囲であり得る。
別の態様では、本開示は、式Ｉの化合物、ならびに該化合物および腫瘍抗原標的を認識し、結合する二重特異性抗体を含む複合体を提供する。本開示はまた、式ＩＩのビスキレート、ならびに該ビスキレートおよび腫瘍抗原標的に結合する二重特異性抗体を含む複合体を提供する。本明細書に開示される複合体の上記実施形態のいずれかでは、二重特異性抗体は、無限バインダー（ｉｎｆｉｎｉｔｅ ｂｉｎｄｅｒ）であり得る。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、Ｃ８２５（Cheal et al., Mol Cancer Ther. 13(7):1803-12 (2014)を参照されたい）または２Ｄ１２．５（Corneillie et al., J. Inorganic Biochemistry 100:882-890 (2006)）の抗原結合断片を含む。追加的にまたは代替的に、本明細書に開示される複合体の上記実施形態のいずれかでは、二重特異性抗体は、Ｇ５４Ｃ置換を有するＣ８２５の抗原結合断片を含む。追加的にまたは代替的に、本明細書に開示される複合体の上記実施形態のいずれかでは、二重特異性抗体は、Ｇ５４Ｃ置換を有する２Ｄ１２．５の抗原結合断片を含む。
本明細書に開示される複合体の上記実施形態のいずれかでは、腫瘍抗原標的は、ＧＰＡ３３、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＧＤ２、ＭＡＧＥ－１、ＭＡＧＥ－３、ＢＡＧＥ、ＧＡＧＥ－１、ＧＡＧＥ－２、ＭＵＭ－１、ＣＤＫ４、Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ、ｐ１５、ｇｐ７５、ベータ－カテニン、ＥｒｂＢ２、がん抗原１２５（ＣＡ－１２５）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＲＡＧＥ、ＭＡＲＴ（黒色腫抗原）、ＭＵＣ－１、ＭＵＣ－２、ＭＵＣ－３、ＭＵＣ－４、ＭＵＣ－５ａｃ、ＭＵＣ－１６、ＭＵＣ－１７、チロシナーゼ、Ｐｍｅｌ１７（ｇｐ１００）、ＧｎＴ－ＶイントロンＶ配列（Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ（ａｃｅｔｙｌｇｌｕｃｏａｍｉｎｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ）ＶイントロンＶ配列）、前立腺がんｐｓｍ、ＰＲＡＭＥ（黒色腫抗原）、β－カテニン、ＥＢＮＡ（エプスタイン・バーウイルス核抗原）１～６、ｐ５３、肺耐性タンパク質（ＬＲＰ）Ｂｃｌ－２、前立腺特異性抗原（ＰＳＡ）、Ｋｉ－６７、ＣＥＡＣＡＭ６、結腸特異性抗原ｐ（ＣＳＡｐ）、ＨＬＡ－ＤＲ、ＣＤ４０、ＣＤ７４、ＣＤ１３８、ＥＧＦＲ、ＥＧＰ－１、ＥＧＰ－２、ＶＥＧＦ、ＰｌＧＦ、インスリン様成長因子（ＩＬＧＦ）、テネイシン、血小板由来成長因子、ＩＬ－６、ＣＤ２０、ＣＤ１９、ＰＳＭＡ、ＣＤ３３、ＣＤ１２３、ＭＥＴ、ＤＬＬ４、Ａｎｇ－２、ＨＥＲ３、ＩＧＦ－１Ｒ、ＣＤ３０、ＴＡＧ－７２、ＳＰＥＡＰ、ＣＤ４５、Ｌ１－ＣＡＭ、ルイスＹ（Ｌｅy）抗原、Ｅ－カドヘリン、Ｖ－カドヘリン、およびＥｐＣＡＭからなる群から選択される。追加的にまたは代替的に、複合体のいくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、化合物またはビスキレートに、１００ｎＭ～９５ｎＭ、９５～９０ｎＭ、９０～８５ｎＭ、８５～８０ｎＭ、８０～７５ｎＭ、７５～７０ｎＭ、７０～６５ｎＭ、６５～６０ｎＭ、６０～５５ｎＭ、５５～５０ｎＭ、５０～４５ｎＭ、４５～４０ｎＭ、４０～３５ｎＭ、３５～３０ｎＭ、３０～２５ｎＭ、２５～２０ｎＭ、２０～１５ｎＭ、１５～１０ｎＭ、１０～５ｎＭ、５～１ｎＭ、１ｎＭ～９５０ｐＭ、９５０ｐＭ～９００ｐＭ、９００ｐＭ～８５０ｐＭ、８５０ｐＭ～８００ｐＭ、８００ｐＭ～７５０ｐＭ、７５０ｐＭ～７００ｐＭ、７００ｐＭ～６５０ｐＭ、６５０ｐＭ～６００ｐＭ、６００ｐＭ～５５０ｐＭ、５５０ｐＭ～５００ｐＭ、５００ｐＭ～４５０ｐＭ、４５０ｐＭ～４００ｐＭ、４００ｐＭ～３５０ｐＭ、３５０ｐＭ～３００ｐＭ、３００ｐＭ～２５０ｐＭ、２５０ｐＭ～２００ｐＭ、２００ｐＭ～１５０ｐＭ、１５０ｐＭ～１００ｐＭ、１００ｐＭ～５０ｐＭ、５０ｐＭ～４０ｐＭ、４０ｐＭ～３０ｐＭ、３０ｐＭ～２０ｐＭ、２０ｐＭ～１０ｐＭ、９ｐＭ、８ｐＭ、７ｐＭ、６ｐＭ、５ｐＭ、４ｐＭ、３ｐＭ、２．５ｐＭ、２ｐＭ、１．５ｐＭ、または１ｐＭ以下のＫdで結合する。
本技術の診断および治療方法
一態様では、本開示は、それを必要とする対象において固形腫瘍を検出するための方法であって、（ａ）式ＩＩのビスキレート、ならびに該ビスキレートおよび腫瘍抗原標的に結合する二重特異性抗体を含む複合体の有効量を対象に投与する工程であって、複合体が、複合体の二重特異性抗体によって認識される腫瘍抗原標的を発現している固形腫瘍に局在するように構成されている、工程と、（ｂ）基準値よりも高い、複合体によって放出される放射能レベルを検出することによって、対象における固形腫瘍の存在を検出する工程とを含む方法を提供する。いくつかの実施形態では、対象は、ヒトである。
別の態様では、本開示は、対象を事前標的化放射免疫治療のために選択するための方法であって、（ａ）式ＩＩのビスキレート、ならびに該ビスキレートおよび腫瘍抗原標的に結合する二重特異性抗体を含む複合体の有効量を対象に投与する工程であって、複合体が、複合体の二重特異性抗体によって認識される腫瘍抗原標的を発現している固形腫瘍に局在するように構成されている、工程と、（ｂ）複合体によって放出される放射能レベルを検出する工程と、（ｃ）複合体によって放出される放射能レベルが基準値よりも高い場合に、対象を事前標的化放射免疫治療のために選択する工程とを含む方法を提供する。いくつかの実施形態では、対象は、ヒトである。
本明細書に開示される方法のいくつかの実施形態では、複合体によって放出される放射能レベルは、陽電子放出断層撮影法または単光子放出コンピュータ断層撮影法を使用して検出される。追加的にまたは代替的に、本明細書に開示される方法のいくつかの実施形態では、対象は、がんと診断されている、またはがんを有すると疑われている。がんは、乳がん、結腸直腸がん、子宮頸部がん、卵巣がん、肝がん、膀胱がん、ヘパトーマ、肝細胞癌、脳がん、肺がん、胃がん（ｇａｓｔｒｉｃ ｏｒ ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）、膵がん、甲状腺がん、腎臓または腎がん、前立腺がん、黒色腫、肉腫、癌腫、ウィルムス腫瘍、子宮内膜がん、神経膠芽細胞腫、扁平上皮がん、星細胞腫、唾液腺癌、外陰部がん、陰茎癌、および頭頸部がんからなる群から選択され得る。いくつかの実施形態では、脳がんは、下垂体腺腫、髄膜腫、神経芽腫、または頭蓋咽頭腫である。
追加的にまたは代替的に、本明細書に開示される方法のいくつかの実施形態では、複合体は、静脈内に、筋肉内に、動脈内に、くも膜下腔内に、関節包内に、眼窩内に、皮内に、腹腔内に、経気管的に、皮下に、脳室内に、経口的にまたは鼻腔内に投与される。ある特定の実施形態では、複合体は、対象の脳脊髄液または血液中に投与される。
本明細書に開示される方法のいくつかの実施形態では、複合体によって放出される放射能レベルは、複合体が投与された後４～２４時間の間に検出される。本明細書に開示される方法のある特定の実施形態では、複合体によって放出される放射能レベルは、組織１グラム当たりの注射用量の百分率（％ＩＤ／ｇ）として表される。基準値は、非腫瘍（正常）組織中に存在する放射能レベルを測定し、非腫瘍（正常）組織中に存在する平均放射能レベル±標準偏差を計算することによって算出され得る。いくつかの実施形態では、基準値は、標準取り込み値（ＳＵＶ）である。Thie JA, J Nucl Med. 45(9):1431-4 (2004)を参照されたい。いくつかの実施形態では、腫瘍組織と正常組織との放射能レベルの比は、約２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１、１５：１、２０：１、２５：１、３０：１、３５：１、４０：１、４５：１、５０：１、５５：１、６０：１、６５：１、７０：１、７５：１、８０：１、８５：１、９０：１、９５：１または１００：１である。
別の態様では、本開示は、がんと診断された対象において放射線治療に対する腫瘍の感受性を高めるための方法であって、（ａ）腫瘍抗原標的を発現している腫瘍に局在するように構成された抗ＤＯＴＡ二重特異性抗体の有効量を対象に投与する工程と、（ｂ）抗ＤＯＴＡ二重特異性抗体に結合するように構成された、式ＩＩのビスキレートの有効量を対象に投与する工程とを含む方法を提供する。いくつかの実施形態では、対象は、ヒトである。抗ＤＯＴＡ二重特異性抗体は、それが腫瘍細胞を飽和するのに十分な条件下でかつ十分な期間にわたって（例えば、投薬レジメンに従って）投与される。いくつかの実施形態では、抗ＤＯＴＡ二重特異性抗体の投与の後に、非結合の抗ＤＯＴＡ二重特異性抗体が血流から除去される。いくつかの実施形態では、式ＩＩのビスキレートは、非結合の抗ＤＯＴＡ二重特異性抗体のクリアランスを可能にするのに十分であり得る期間の後に投与される。
ビスキレートは、抗ＤＯＴＡ二重特異性抗体の投与後１分～４日以上の間の任意の時点で投与され得る。例えば、いくつかの実施形態では、ビスキレートは、抗ＤＯＴＡ二重特異性抗体の投与後、１分、２分、３分、４分、５分、１０分、１５分、２０分、２５分、３０分、３５分、４０分、４５分、５０分、５５分、１時間、１．２５時間、１．５時間、１．７５時間、２時間、２．５時間、３時間、３．５時間、４時間、４．５時間、５時間、５．５時間、６時間、６．５時間、７時間、７．５時間、８時間、８．５時間、９時間、９．５時間、１０時間、１１時間、１２時間、１３時間、１４時間、１５時間、１６時間、１７時間、１８時間、１９時間、２０時間、２１時間、２２時間、２３時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、またはその中の任意の範囲で投与される。代替的に、ビスキレートは、抗ＤＯＴＡ二重特異性抗体の投与から４日以上後の任意の時点で投与され得る。
追加的にまたは代替的に、いくつかの実施形態では、方法は、ビスキレートの投与前に、クリアリング剤の有効量を対象に投与する工程をさらに含む。クリアリング剤は、Ｃ８２５－ハプテンとコンジュゲートすることができる任意の分子（デキストランまたはデンドリマーまたはポリマー）であり得る。いくつかの実施形態では、クリアリング剤は、２０００ｋＤ、１５００ｋＤ、１０００ｋＤ、９００ｋＤ、８００ｋＤ、７００ｋＤ、６００ｋＤ、５００ｋＤ、４００ｋＤ、３００ｋＤ、２００ｋＤ、１００ｋＤ、９０ｋＤ、８０ｋＤ、７０ｋＤ、６０ｋＤ、５０ｋＤ、４０ｋＤ、３０ｋＤ、２０ｋＤ、１０ｋＤ、または５ｋＤ以下である。いくつかの実施形態では、クリアリング剤は、５００ｋＤアミノデキストラン－ＤＯＴＡコンジュゲート（例えば、５００ｋＤデキストラン－ＤＯＴＡ－Ｂｎ（Ｙ）、５００ｋＤデキストラン－ＤＯＴＡ－Ｂｎ（Ｌｕ）、または５００ｋＤデキストラン－ＤＯＴＡ－Ｂｎ（Ｉｎ）等）である。
いくつかの実施形態では、クリアリング剤および式ＩＩのビスキレートは、抗ＤＯＴＡ二重特異性抗体をさらに投与することなく投与される。例えば、いくつかの実施形態では、抗ＤＯＴＡ二重特異性抗体は、（ｉ）抗ＤＯＴＡ二重特異性抗体を（任意に関連する腫瘍細胞が飽和されるように）投与すること、（ｉｉ）式ＩＩのビスキレートおよび任意にクリアリング剤を投与すること、（ｉｉｉ）抗ＤＯＴＡ二重特異性抗体を追加投与することなく、式ＩＩのビスキレートおよび／またはクリアリング剤を任意に追加投与することの少なくとも１サイクルを含むレジメンに従って投与される。いくつかの実施形態では、方法は、複数のそのようなサイクル（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれを超えるサイクル）を含み得る。
追加的にまたは代替的に、方法のいくつかの実施形態では、腫瘍抗原標的は、ＧＰＡ３３、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＧＤ２、ＭＡＧＥ－１、ＭＡＧＥ－３、ＢＡＧＥ、ＧＡＧＥ－１、ＧＡＧＥ－２、ＭＵＭ－１、ＣＤＫ４、Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ、ｐ１５、ｇｐ７５、ベータ－カテニン、ＥｒｂＢ２、がん抗原１２５（ＣＡ－１２５）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＲＡＧＥ、ＭＡＲＴ（黒色腫抗原）、ＭＵＣ－１、ＭＵＣ－２、ＭＵＣ－３、ＭＵＣ－４、ＭＵＣ－５ａｃ、ＭＵＣ－１６、ＭＵＣ－１７、チロシナーゼ、Ｐｍｅｌ１７（ｇｐ１００）、ＧｎＴ－ＶイントロンＶ配列（Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＶイントロンＶ配列）、前立腺がんｐｓｍ、ＰＲＡＭＥ（黒色腫抗原）、β－カテニン、ＥＢＮＡ（エプスタイン・バーウイルス核抗原）１～６、ｐ５３、肺耐性タンパク質（ＬＲＰ）Ｂｃｌ－２、前立腺特異性抗原（ＰＳＡ）、Ｋｉ－６７、ＣＥＡＣＡＭ６、結腸特異性抗原ｐ（ＣＳＡｐ）、ＨＬＡ－ＤＲ、ＣＤ４０、ＣＤ７４、ＣＤ１３８、ＥＧＦＲ、ＥＧＰ－１、ＥＧＰ－２、ＶＥＧＦ、ＰｌＧＦ、インスリン様成長因子（ＩＬＧＦ）、テネイシン、血小板由来成長因子、ＩＬ－６、ＣＤ２０、ＣＤ１９、ＰＳＭＡ、ＣＤ３３、ＣＤ１２３、ＭＥＴ、ＤＬＬ４、Ａｎｇ－２、ＨＥＲ３、ＩＧＦ－１Ｒ、ＣＤ３０、ＴＡＧ－７２、ＳＰＥＡＰ、ＣＤ４５、Ｌ１－ＣＡＭ、ルイスＹ（Ｌｅy）抗原、Ｅ－カドヘリン、Ｖ－カドヘリン、およびＥｐＣＡＭからなる群から選択される。
追加的にまたは代替的に、方法のいくつかの実施形態では、抗ＤＯＴＡ二重特異性抗体および／またはビスキレートは、静脈内に、筋肉内に、動脈内に、くも膜下腔内に、関節包内に、眼窩内に、皮内に、腹腔内に、経気管的に、皮下に、脳室内に、経口的にまたは鼻腔内に投与される。
一態様では、本開示は、がんと診断された対象において放射線治療に対する腫瘍の感受性を高めるための方法であって、式ＩＩのビスキレート、ならびに該ビスキレートおよび腫瘍抗原標的を認識し、結合する二重特異性抗体を含む複合体の有効量を対象に投与する工程であって、複合体が、複合体の二重特異性抗体によって認識される腫瘍抗原標的を発現している腫瘍に局在するように構成されている、工程を含む方法を提供する。複合体は、静脈内に、筋肉内に、動脈内に、くも膜下腔内に、関節包内に、眼窩内に、皮内に、腹腔内に、経気管的に、皮下に、脳室内に、経口的にまたは鼻腔内に投与され得る。いくつかの実施形態では、対象は、ヒトである。
別の態様では、本開示は、それを必要とする対象においてがんを処置するための方法であって、（ａ）腫瘍抗原標的を発現している腫瘍に局在するように構成された抗ＤＯＴＡ二重特異性抗体の有効量を対象に投与する工程と、（ｂ）抗ＤＯＴＡ二重特異性抗体に結合するように構成された、式ＩＩのビスキレートの有効量を対象に投与する工程とを含む方法を提供する。抗ＤＯＴＡ二重特異性抗体は、それが腫瘍細胞を飽和するのに十分な条件下でかつ十分な期間にわたって（例えば、投薬レジメンに従って）投与される。いくつかの実施形態では、抗ＤＯＴＡ二重特異性抗体の投与の後に、非結合の抗ＤＯＴＡ二重特異性抗体が血流から除去される。いくつかの実施形態では、式ＩＩのビスキレートは、非結合の抗ＤＯＴＡ二重特異性抗体のクリアランスを可能にするのに十分であり得る期間の後に投与される。いくつかの実施形態では、対象は、ヒトである。
したがって、いくつかの実施形態では、方法は、ビスキレートの投与前に、クリアリング剤の有効量を対象に投与する工程をさらに含む。ビスキレートは、抗ＤＯＴＡ二重特異性抗体の投与後１分～４日以上の間の任意の時点で投与され得る。例えば、いくつかの実施形態では、ビスキレートは、抗ＤＯＴＡ二重特異性抗体の投与後、１分、２分、３分、４分、５分、１０分、１５分、２０分、２５分、３０分、３５分、４０分、４５分、５０分、５５分、１時間、１．２５時間、１．５時間、１．７５時間、２時間、２．５時間、３時間、３．５時間、４時間、４．５時間、５時間、５．５時間、６時間、６．５時間、７時間、７．５時間、８時間、８．５時間、９時間、９．５時間、１０時間、１１時間、１２時間、１３時間、１４時間、１５時間、１６時間、１７時間、１８時間、１９時間、２０時間、２１時間、２２時間、２３時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、またはその中の任意の範囲で投与される。代替的に、ビスキレートは、抗ＤＯＴＡ二重特異性抗体の投与から４日以上後の任意の時点で投与され得る。
クリアリング剤は、５００ｋＤアミノデキストラン－ＤＯＴＡコンジュゲート（例えば、５００ｋＤデキストラン－ＤＯＴＡ－Ｂｎ（Ｙ）、５００ｋＤデキストラン－ＤＯＴＡ－Ｂｎ（Ｌｕ）、または５００ｋＤデキストラン－ＤＯＴＡ－Ｂｎ（Ｉｎ）等）であり得る。いくつかの実施形態では、クリアリング剤および式ＩＩのビスキレートは、抗ＤＯＴＡ二重特異性抗体をさらに投与することなく投与される。例えば、いくつかの実施形態では、抗ＤＯＴＡ二重特異性抗体は、（ｉ）抗ＤＯＴＡ二重特異性抗体を（任意に関連する腫瘍細胞が飽和されるように）投与すること、（ｉｉ）式ＩＩのビスキレートおよび任意にクリアリング剤を投与すること、（ｉｉｉ）抗ＤＯＴＡ二重特異性抗体を追加投与することなく、式ＩＩのビスキレートおよび／またはクリアリング剤を任意に追加投与することの少なくとも１サイクルを含むレジメンに従って投与される。いくつかの実施形態では、方法は、複数のそのようなサイクル（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれを超えるサイクル）を含み得る。
それを必要とする対象においてがんを処置するための方法であって、式ＩＩのビスキレート、ならびに該ビスキレートおよび腫瘍抗原標的を認識し、結合する二重特異性抗体を含む複合体の有効量を対象に投与する工程であって、複合体が、複合体の二重特異性抗体によって認識される腫瘍抗原標的を発現している腫瘍に局在するように構成されている、工程を含む方法もまた本明細書で提供される。そのような複合体の治療有効性は、曲線下面積（ＡＵＣ）腫瘍：ＡＵＣ正常組織比を計算することによって決定され得る。いくつかの実施形態では、複合体は、約２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１、１５：１、２０：１、２５：１、３０：１、３５：１、４０：１、４５：１、５０：１、５５：１、６０：１、６５：１、７０：１、７５：１、８０：１、８５：１、９０：１、９５：１または１００：１のＡＵＣ腫瘍：ＡＵＣ正常組織比を有する。
がんを処置するための方法は、ナイトロジェンマスタード、エチレンイミン誘導体、スルホン酸アルキル、ニトロソウレア、ゲムシタビン、トリアゼン、葉酸類似体、アントラサイクリン、タキサン、ＣＯＸ－２阻害剤、ピリミジン類似体、プリン類似体、抗生物質、酵素阻害剤、エピポドフィロトキシン、白金配位錯体、ビンカアルカロイド、置換尿素、メチルヒドラジン誘導体、副腎皮質抑制剤、ホルモン拮抗薬、エンドスタチン、タキソール、カンプトテシン、ＳＮ－３８、ドキソルビシン、ドキソルビシン類似体、代謝拮抗物質、アルキル化剤、抗有糸***薬、抗血管新生剤、チロシンキナーゼ阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、熱ショックタンパク質（ＨＳＰ９０）阻害剤、プロテオソーム阻害剤、ＨＤＡＣ阻害剤、アポトーシス促進剤、メトトレキサートおよびＣＰＴ－１１からなる群から選択される少なくとも１種の化学療法剤を対象に順次、別個に、または同時に投与する工程をさらに含み得る。いくつかの実施形態では、がんは、乳がん、結腸直腸がん、子宮頸部がん、卵巣がん、肝がん、膀胱がん、ヘパトーマ、肝細胞癌、脳がん、肺がん、胃がん、膵がん、甲状腺がん、腎臓または腎がん、前立腺がん、黒色腫、肉腫、癌腫、ウィルムス腫瘍、子宮内膜がん、神経膠芽細胞腫、扁平上皮がん、星細胞腫、唾液腺癌、外陰部がん、陰茎癌、および頭頸部がんからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、対象は、ヒトである。
キット
本技術は、患者においてがんを処置または診断するのに好適な構成成分を含有するキットを提供する。一態様では、キットは、本技術のＤＯＴＡハプテン、少なくとも１種の抗ＤＯＴＡ ＢｓＡｂ、および使用説明書を含む。キットは、クリアリング剤（例えば、ＤＯＴＡにコンジュゲートされた５００ｋＤａアミノデキストランもしくは５００ｋＤデキストラン－ＤＯＴＡ－Ｂｎ（Ｙ））および／または１種もしくは複数の放射性核種をさらに含み得る。
いくつかの実施形態では、少なくとも１種の抗ＤＯＴＡ ＢｓＡｂは、ＧＰＡ３３、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＧＤ２、ＭＡＧＥ－１、ＭＡＧＥ－３、ＢＡＧＥ、ＧＡＧＥ－１、ＧＡＧＥ－２、ＭＵＭ－１、ＣＤＫ４、Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ、ｐ１５、ｇｐ７５、ベータ－カテニン、ＥｒｂＢ２、がん抗原１２５（ＣＡ－１２５）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＲＡＧＥ、ＭＡＲＴ（黒色腫抗原）、ＭＵＣ－１、ＭＵＣ－２、ＭＵＣ－３、ＭＵＣ－４、ＭＵＣ－５ａｃ、ＭＵＣ－１６、ＭＵＣ－１７、チロシナーゼ、Ｐｍｅｌ１７（ｇｐ１００）、ＧｎＴ－ＶイントロンＶ配列（Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＶイントロンＶ配列）、前立腺がんｐｓｍ、ＰＲＡＭＥ（黒色腫抗原）、β－カテニン、ＥＢＮＡ（エプスタイン・バーウイルス核抗原）１～６、ｐ５３、肺耐性タンパク質（ＬＲＰ）Ｂｃｌ－２、前立腺特異性抗原（ＰＳＡ）、およびＫｉ－６７からなる群から選択される腫瘍抗原標的に結合する。追加的にまたは代替的に、いくつかの実施形態では、少なくとも１種の抗ＤＯＴＡ ＢｓＡｂは、ＣＥＡＣＡＭ６、結腸特異性抗原ｐ（ＣＳＡｐ）、ＨＬＡ－ＤＲ、ＣＤ４０、ＣＤ７４、ＣＤ１３８、ＥＧＦＲ、ＥＧＰ－１、ＥＧＰ－２、ＶＥＧＦ、ＰｌＧＦ、インスリン様成長因子（ＩＬＧＦ）、テネイシン、血小板由来成長因子、ＩＬ－６、ＣＤ２０、ＣＤ１９、ＰＳＭＡ、ＣＤ３３、ＣＤ１２３、ＭＥＴ、ＤＬＬ４、Ａｎｇ－２、ＨＥＲ３、ＩＧＦ－１Ｒ、ＣＤ３０、ＴＡＧ－７２、ＳＰＥＡＰ、ＣＤ４５、Ｌ１－ＣＡＭ、ルイスＹ（Ｌｅy）抗原、Ｅ－カドヘリン、Ｖ－カドヘリン、およびＥｐＣＡＭからなる群から選択される腫瘍抗原標的に結合する。少なくとも１種の抗ＤＯＴＡ ＢｓＡｂは、抗体の滅菌液体製剤または滅菌凍結乾燥調製物を含有する充填済みシリンジまたは自己注射ペンの形態で提供され得る（例えば、Kivitz et al., Clin. Ther. 28:1619-29 (2006)）。
追加的にまたは代替的に、本技術のキットのいくつかの実施形態では、１種または複数の放射性核種は、213Ｂｉ、211Ａｔ、225Ａｃ、152Ｄｙ、212Ｂｉ、223Ｒａ、219Ｒｎ、215Ｐｏ、211Ｂｉ、221Ｆｒ、217Ａｔ、および255Ｆｍの中から選択される。追加的にまたは代替的に、ある特定の実施形態では、１種または複数の放射性核種は、86Ｙ、90Ｙ、89Ｓｒ、165Ｄｙ、186Ｒｅ、188Ｒｅ、177Ｌｕ、67Ｃｕ、111Ｉｎ、67Ｇａ、51Ｃｒ、58Ｃｏ、99mＴｃ、103mＲｈ、195mＰｔ、119Ｓｂ、161Ｈｏ、189mＯｓ、192Ｉｒ、201Ｔｌ、203Ｐｂ、68Ｇａ、227Ｔｈ、および64Ｃｕからなる群から選択される。
キット構成成分が経口投与用に製剤化されていない場合、キット構成成分を他の何らかの経路によって送達することが可能なデバイスが含まれ得る。そのようなデバイスの例は、（非経口投与用の）シリンジまたは吸入デバイスを含む。
キット構成成分は、一緒に包装されるかまたは２つ以上の容器に分離され得る。いくつかの実施形態では、容器は、復元に好適なＤＯＴＡハプテンおよび／またはＢｓＡｂ組成物の滅菌凍結乾燥製剤を含有するバイアルであり得る。キットはまた、他の試薬の復元および／または希釈に好適な１種または複数の緩衝液を含有し得る。使用され得る他の容器は、パウチ、トレイ、箱、チューブなどを含むがこれらに限定されない。キット構成成分は、容器内に包装され、滅菌状態で維持され得る。
（実施例１）
本技術の組成物を作製するための材料および方法
全般。ＤＯＴＡ－Ｂｎ－イソチオシアネート（ｐ－ＳＣＮ－Ｂｎ－ＤＯＴＡ）は、Ｍａｃｒｏｃｙｃｌｉｃｓ，Ｉｎｃ．（Ｐｌａｎｏ、ＴＸ）から購入し、アミン－ＰＥＧ4－ＤＯＴＡは、ＣｈｅＭａｔｅｃｈ（Ｄｉｊｏｎ、フランス）から購入した。Ｏｐｔｉｍａ（商標）グレード塩酸は、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）から購入した。Ｃｈｅｌｅｘ－１００樹脂、２００～４００メッシュは、Ｂｉｏ－Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｈｅｒｃｕｌｅｓ、ＣＡ）から購入した。ＰＤ－１０ゲル濾過サイズ排除カラム（８．３ｍＬのＳｅｐｈａｄｅｘ（商標）Ｇ－２５樹脂／カラムを含有する）は、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ、ＰＡ）から購入した。他のすべての試薬および合成グレードの化学物質は、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）から購入し、さらに精製することなく使用した。ＨＰＬＣ分析（ＨＰＬＣグレード）および化合物精製に使用するすべての溶媒もまた、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）から購入した。すべての緩衝液および溶液は、超純水（１８ＭΩ－ｃｍの抵抗率）を使用して調製した。
すべての液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ／ＭＳ）データは、以下の機器：２７６７ Ｓａｍｐｌｅ Ｍａｎａｇｅｒ、２５４５ Ｂｉｎａｒｙ Ｇｒａｄｉｅｎｔ Ｍｏｄｕｌｅ、Ｓｙｓｔｅｍ Ｆｌｕｉｄｉｃｓ Ｏｒｇａｎｉｚｅｒ、２４２４ Ｅｖａｐｏｒａｔｉｖｅ Ｌｉｇｈｔ Ｓｃａｔｔｅｒｉｎｇ Ｄｅｔｅｃｔｏｒ、２９９８ Ｐｈｏｔｏｄｉｏｄｅ Ａｒｒａｙ Ｄｅｔｅｃｔｏｒ、３１００ Ｍａｓｓ Ｄｅｔｅｃｔｏｒを含む、Ｗａｔｅｒｓ Ａｕｔｏｐｕｒｅシステム（Ｍｉｌｆｏｒｄ、ＭＡ）を使用して取得した。ＨＰＬＣ溶媒（溶媒Ａ、水中０．０５％ＴＦＡ；溶媒Ｂ、アセトニトリル中０．０５％ＴＦＡ）は、使用前に濾過した。分析方法は、１０分間で５～２５％の溶媒Ｂ、１．２ｍＬ／分の流速であった。分析カラム：Ｗａｔｅｒｓ ＸＢｒｉｄｇｅ ＢＥＨ３００（Ｍｉｌｆｏｒｄ、ＭＡ）、Ｃ４、３．５μｍ、４．６×５０ｍｍおよびＣ１８、４μｍ、４．６×５０ｍｍ。分取方法：３０分間で５～２５％の溶媒Ｂ、２０ｍＬ／分の流速。分取カラム：Ｗａｔｅｒｓ ＸＢｒｉｄｇｅ Ｐｒｅｐ（Ｍｉｌｆｏｒｄ、ＭＡ）Ｃ１８、４μｍ、Ｏｐｔｉｍｕｍ Ｂｅｄ Ｄｅｎｓｉｔｙ、１９×１５０ｍｍ。
すべてのＮＭＲデータは、Ｂｒｕｋｅｒ ＡＶ５００またはＡＶ６００機器（Ｂｒｕｋｅｒ、Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ、ＭＡ）のいずれかを用いて周囲温度で取得した。以下の略語を使用した：一重線（ｓ）、広幅一重線（ｂｓ）、二重線（ｄ）、三重線（ｔ）、四重線（ｑ）、五重線（ｐｅｎｔｅｔ）（ｐ）、二重線の二重線（ｄｄ）、多重線（ｍ）。
すべてのＰＥＴ画像化実験は、Ｆｏｃｕｓ １２０ ＭｉｃｒｏＰＥＴカメラ（Ｓｉｅｍｅｎｓ、Ｋｎｏｘｖｉｌｌｅ、ＴＮ）専用小動物スキャナーで実行した。
合成。ＤＯＴＡ錯体等の金属がロードされた有機錯体は、異性を呈する場合がある（Aime et al., Inorg Chem. 36(10):2059-2068 (1997)）。この現象は、ルテチウム－ＤＯＴＡ錯体に存在する。図４に示すように、２種の単離された異性体は、錯体の正四角反柱形の（ｓｑｕａｒｅ ａｎｔｉｐｒｉｓｍａｔｉｃ）ジアステレオ異性体間の相互変換に起因し得る。２種のルテチウム－ＤＯＴＡ異性体はまた、クロマトグラフデータおよびプロトンＮＭＲデータの差を呈した。本明細書に記載された実験では、主要な異性体（図４中の構造Ｉに対応する）のみを生物学的活性について判定した。
ビス－ＤＯＴＡモノルテチウム錯体の合成。ＤＯＴＡ－Ｂｎ－イソチオシアネートを、金属ローディングならびに後続の精製および凍結乾燥の間のその相対的安定性により、合成のための出発試薬として選択した。加水分解された可能性があるイソチオシアネート誘導体を最適化または再利用する試みはなされなかった（図５）。ＤＯＴＡ等の高い金属錯化能を有する分子を伴うすべての実験は、無金属ＨＣｌで予備洗浄し、高純度水（例えば、ガラス蒸留水）ですすぎ、かつオーブン乾燥したガラス器具内で実行した。クロマトグラフィーは、錯化剤への金属カラム壁から浸出または抽出された金属のローディングを避けるために、手動で装填したガラスカラムで行った。逆相精製は、Ｃ－１８シリカゲルを手動でゆるく装填した清浄な無金属ガラスカラムで行った。最終錯体中の含水量は測定されなかった。
ＤＯＴＡへのルテチウムのローディング（ｐ－ＳＣＮ－Ｂｎ－ＤＯＴＡ・Ｌｕ3+錯体の形成）。ＬｕＣｌ3・６Ｈ2Ｏ（１２７ｍｇ、３２６μｍｏｌ）を０．４ｍＬの０．４Ｍ酢酸ナトリウム溶液に添加した。次いで、ｐ－ＳＣＮ－Ｂｎ－ＤＯＴＡ（４５ｍｇ、６５μｍｏｌ）を、シリンジによって溶液中に導入した。得られた混合物を室温で終夜撹拌した。逆相Ｃ－１８カラムを用いて、水中０～４０％アセトニトリルを勾配として使用して、精製を実施した。適切な画分をプールし、凍結乾燥して、１８ｍｇ（収率３８％）の所望の錯体を白色固体として得た。
ルテチウムのビス－ＤＯＴＡモノ錯体（プロテウス－ＤＯＴＡ）。ｐ－ＳＣＮ－Ｂｎ－ＤＯＴＡ・Ｌｕ3+錯体（１８ｍｇ、２４．９μｍｏｌ）およびＮＨ2－ＰＥＧ－４－ＤＯＴＡ（１７ｍｇ、２４．４μｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（０．４ｍＬ）に添加し、続いてＥｔ3Ｎ（２０μＬ、１４０μｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で３時間撹拌した。溶媒を高真空下で除去し、残渣を、逆相Ｃ－１８カラムを用いて、水中０～２０％アセトニトリルを勾配として使用して精製して、２種の異性体を得た。第２の溶出画分を、逆相Ｃ－１８カラムで、水中０～８％アセトニトリルを勾配として使用して再精製した。適切な画分をプールし、凍結乾燥した。第１の溶出異性体（２．１ｍｇ、６．４％）、第２の異性体（１１．２ｍｇ、３４％）を、トリエチルアンモニウム塩として単離した（図４を参照されたい）。
第１の異性体：LC/MS m/z 1346.7 [C50H81LuN11O19S (M+H)の計算値1346.5]. 1H NMR (600 MHz, D2O, ppm), δ 7.25 (d, 2 H, J = 8.0 Hz), 7.19 (d, 2 H, J = 8.0 Hz), 3.75-3.21 (m, 55), 3.12 -2.84 (m, 17 H), 2.77-2.42 (m, 3 H), 1.20 (t, 8 H, J = 7.3 Hz).
第２の異性体：LC/MS m/z 1346.7 [C50H81LuN11O19S (M+H)の計算値1346.5]. 1H NMR (600 MHz, D2O, ppm), δ 7.24-7.20 (m, 4 H), 3.75-3.00 (m, 57), 2.84-2.81 (m, 2 H), 2.77-2.74 (m, 1 H), 2.72-2.64 (m, 2 H), 2.61-2.51 (m, 3 H), 2.50-2.47 (m, 1 H), 2.44-2.38 (m, 2 H), 2.19 (m, 1 H).
ＬＣ／ＭＳ：５～２５％アセトニトリル（ＡＣＮ）（０．０５％ＴＦＡ）／水（０．０５％ＴＦＡ）を使用する。
プロテウス－ＤＯＴＡの225Ａｃ放射化学反応。無担体222Ａｃ（５．８０×１０4Ｃｉ／ｇ）は、乾固硝酸塩残渣として、オークリッジ国立研究所から取得した。硝酸222Ａｃは、後続の放射化学反応のために、０．２Ｍ Ｏｐｔｉｍａ（商標）グレード塩酸に溶解した。７７５に設定したＣＲＣ－１５Ｒ放射性同位体較正器（Ｃａｐｉｎｔｅｃ，Ｉｎｃ．、Ｆｌｏｒｈａｍ Ｐａｒｋ、ＮＪ）を使用して、225Ａｃ放射能を測定し、表示された放射能値に５を乗じた；測定用ウェルの底部の中心にサンプルを置いた。水および緩衝液は、Ｃｈｅｌｅｘ－１００樹脂のカラムに通過させ、続いて滅菌フィルターデバイス（０．２２または０．４５μＭ）を通して濾過することによって、無金属および滅菌状態にした。最初に、プロテウス－ＤＯＴＡを１０ｍｇ／ｍＬで水に懸濁させ、直ちに１．８ｍＬ Ｎｕｎｃバイアルに移し、未使用のストックを速やかに－２０℃で保管した。［225Ａｃ］プロテウス－ＤＯＴＡを調製するために、２０μＬの無担体（５．８０×１０4Ｃｉ／ｇ）硝酸アクチニウム－２２５（６６μＣｉ）を、１００μＬの１０ｍｇ／ｍＬプロテウス－ＤＯＴＡ（１ｍｇ；０．７４１μｍｏｌ）と１．８ｍＬ Ｎｕｎｃバイアル中で混合した。次に、１５μＬのＬ－アスコルビン酸溶液（１５０ｇ／Ｌ）および１００μＬの３Ｍ酢酸アンモニウム溶液を添加した。
溶液のｐＨは、１μＬの反応混合物をＨｙｄｒｉｏｎ ｐＨ試験紙にスポットすることによって、約５．５であると確認された（範囲：５．０～９．０）。反応物を６０℃で３０分間インキュベートし、次いで、６ｍＬの滅菌等張生理食塩溶液（ＮＳＳ）で予め平衡化した自製のイオン交換カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｃ－２５カラム）を使用して精製した。反応混合物をカラムに添加し、４ｍＬのＮＳＳで溶出させた。６６．０μＣｉがロードされ、６２．０μＣｉが通過画分において得られたことから、９４％の放射化学反応回収収率が達成された。最終比放射能は、０．０６Ｃｉ／ｇまたは８４Ｃｉ／ｍｏｌであった。
プロテウス－ＤＯＴＡの68Ｇａ放射化学反応。ヌードマウスの動的陽電子放出画像化を用いて68Ｇａプロテウス－ＤＯＴＡの薬物動態を研究するために、プロテウス－ＤＯＴＡをガリウム－６８（68Ｇａ）で放射標識した。68Ｇａは、０．３Ｎ ＨＣｌを使用してオーストラリア原子力科学技術機構のジェネレータから溶出させ、続いて自動溶出制御器システムを使用してイオン交換カラム（ＢｉｏＲａｄアニオン交換カラム）で濃縮した。濃縮された68Ｇａを、６００μＬの体積の０．５Ｍ ＫＯＨ溶液を使用して、［68Ｇａ］－Ｋ［Ｇａ（ＯＨ）4］として、イオン交換樹脂から溶出させた。溶液を中和および酸性化するために、２５μＬの氷酢酸（０．５Ｍ ＫＯＨ １００μＬ当たり＞３μＬ）を５００μＬの溶出液に添加した。ｐＨは、ｐＨ試験紙によって＜５であった。プロテウス－ＤＯＴＡの68Ｇａ－放射化学反応のために、１０μｇのプロテウス－ＤＯＴＡ（ＭＷ１３４７、７．４ｎｍｏｌのリガンド）を含有するエッペンドルフに、５３０μＬの中和した［68Ｇａ］－Ｋ［Ｇａ（ＯＨ）4］を添加し、９５℃で１０分間加熱した。放射標識インキュベーション期間の後に、［68Ｇａ］プロテウス－ＤＯＴＡおよび少量の遊離68Ｇａを含有する反応混合物を、１ｍＬの９５％エタノール（ＵＳＰ注射用）および２．５ｍＬの純水を通過させることによって予め状態調節したＳｔｒａｔａ（商標）－Ｘカートリッジ（３３μｍ Ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ Ｒｅｖｅｒｓｅｄ Ｐｈａｓｅ Ｃ－１８ ３０ｍｇ／１ｍＬ ＃８Ｂ－Ｓ１００－ＴＡＫ、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ（登録商標）Ｉｎｃ．、Ｔｏｒｒａｎｃｅ、ＣＡ、米国）を通して取り上げた。次いで、カートリッジを３ｍＬの水ですすいで残存する遊離68Ｇａを除去し、最後に、精製された［68Ｇａ］プロテウス－ＤＯＴＡを３００μＬのエタノール（１００％）中に溶出させた。放射化学的純度をｒａｄｉｏＨＰＬＣによって決定し、これは＞９８％の純度を示した。ＨＰＬＣは、Ｃ－１８ ＲＰ ＨＰＬＣカラム（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ（登録商標）Ｌｕｎａ Ｃ－１８、５μｍ １００Å、２５０×４．６ｍｍ）で、３～１０分の０．１％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）中１０～９５％アセトニトリルの勾配溶媒系を使用して、１ｍＬ／分の流速で実施した。上記条件下で、純粋な生成物が、約９．７分の保持時間で、幅広いピークとして溶出する。最終比放射能は、約２．７ｍＣｉ／７．４ｎｍｏｌ＝３６５ｍＣｉ／μｍｏｌであった。反応を後日に反復すると、最終比放射能は、１ｍＣｉ／７．４ｎｍｏｌ＝１３５ｍＣｉ／μｍｏｌであった。
細胞培養。ＧＰＡ３３（＋）ヒト結腸直腸がん（ＣＲＣ）細胞株ＳＷ１２２２は、Ｌｕｄｗｉｇ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、ＮＹ）から取得し、連続継代によって増殖させた。ＨＥＲ２（＋）乳がん細胞株ＢＴ－４７４、ＨＥＲ２（＋）胃がん細胞株ＮＣＩ－Ｎ８７、およびＧＤ２（＋）神経芽腫細胞株ＩＭＲ－３２は、アメリカ培養細胞系統保存機関（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）（Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ）から取得した。ＳＷ１２２２細胞は、１０％熱不活性化ウシ胎仔血清、２．０ｍＭグルタミン、１００単位／ｍＬのペニシリン、および１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシンを補充した最小必須培地中で培養した。ＢＴ－４７４細胞は、非必須アミノ酸（０．１ｍＭ）、１０％熱不活性化ウシ胎仔血清、１００単位／ｍＬのペニシリン、および１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシンを補充したダルベッコ改変イーグル高グルコース／Ｆ－１２培地中で培養した。ＮＣＩ－Ｎ８７およびＩＭＲ－３２細胞は、１０％熱不活性化ウシ胎仔血清、１００単位／ｍＬのペニシリン、および１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシンを補充したＲＰＭＩ培地中で培養した。すべての細胞は、５％ＣＯ2（ｇ）を含有する３７℃環境に維持した。細胞株を受け取り次第、培養を確立し、継代を３か月未満に限定するために少量のアリコートで冷凍保存し、市販のキット（Ｌｏｎｚａ、Ｂａｓｅｌ、スイス）を使用してマイコプラズマ陰性について定期的に試験した。カルシウムおよびマグネシウムを含まないハンクス緩衝塩溶液中の０．２５％トリプシン／０．５３ｍＭ ＥＤＴＡの溶液を、細胞継代および収穫の間のトリプシン処理に使用した。
動物のケア。すべての静脈内注射について、マウスをヒートランプで穏やかに温め、保定器に載せた。外側尾静脈注射を行う前に、マウスの尾をアルコールパッドで滅菌した。すべての動物実験は、動物福祉に関するアメリカ国立衛生研究所の指針に従う、Ｍｅｍｏｒｉａｌ Ｓｌｏａｎ Ｋｅｔｔｅｒｉｎｇ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｎｔｅｒの動物実験委員会（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）によって承認されたプロトコルに準拠して行った。
動物モデル。無胸腺ｎｕ／ｎｕ雌マウス（６～８週齢；Ｈａｒｌａｎ／Ｅｎｖｉｇｏ）を、ビバリウム内で少なくとも１週間馴化させた。ＢＴ－４７４腫瘍モデルのみについて、マウスに、細胞の接種の３日前に、トロカール注射によって、エストロゲン（１７β－エストラジオール；０．７２ｍｇ／ペレット６０日放出；Ｉｎｎｏｖａｔｉｖｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ）を埋め込んだ。すべての腫瘍の確立のために、マウスの群に、培地と再構成基底膜（ＢＤ Ｍａｔｒｉｇｅｌ（商標）、Ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｉｖｅ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ Ｉｎｃ．、Ｂｅｄｆｏｒｄ、ＭＡ）の１：１混合物の２００μＬ細胞懸濁液中の５．０×１０6個の細胞を、下脇腹に皮下注射によって接種し、楕円体の体積を求める公式を使用して、確立された腫瘍（１００～３００ｍｍ3）が、７～１０日（ＳＷ１２２２）または３～４週間（ＢＴ－４７４、ＮＣＩ－Ｎ８７、もしくはＩＭＲ－３２）以内に観察された。
生体内分布実験。抗ＧＰＡ３３ ＤＯＴＡ－ＰＲＩＴの処置サイクルは、尾静脈からの３種の別個の静脈内注射：ｔ＝－２８時間での０．２５ｍｇのｈｕＡ３３－Ｃ８２５抗体（ＷＯ２０１６／１３０５３９に記載されている）、次いでｔ＝－４時間での６２．５μｇのクリアリング剤（５００ｋＤデキストラン－ＤＯＴＡ－Ｂｎ（Ｙ））、およびｔ＝０での［225Ａｃ］プロテウス－ＤＯＴＡからなっていた。放射性ハプテンまたは抗ＨＥＲ２－Ｃ８２５／［225Ａｃ］プロテウス－ＤＯＴＡを追跡するｅｘ ｖｉｖｏでの生体内分布分析のために、マウスをＣＯ2（ｇ）窒息によって安楽死させ、腫瘍および選択された臓器を収穫し、水ですすぎ、空気乾燥し、秤量し、ガンマシンチレーション計数（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ Ｗａｌｌａｃ Ｗｉｚａｒｄ ３”、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）によってラジオアッセイした。計数率をバックグラウンドおよび減衰補正し、同位体に特有のシステム較正係数を使用して放射能に変換し、投与放射能に対して正規化し、１グラム当たりの注射用量のパーセント（％ＩＤ／ｇ）の平均±１標準偏差として表した。腫瘍および様々な組織中の放射能濃度の差を、適切な場合、スチューデントの対応のないｔ検定によって分析した。
［225Ａｃ］プロテウス－ＤＯＴＡのＤＯＴＡ－ＰＲＩＴ ＢｓＡｂとのｉｎ ｖｉｔｒｏでの混合と、それに続くｉｎ ｖｉｖｏでの標的化研究。［225Ａｃ］プロテウス－ＤＯＴＡを０．０６Ｃｉ／ｇまたは８４Ｃｉ／ｍｏｌの最終比放射能に調製した。［225Ａｃ］プロテウス－ＤＯＴＡを室温で１週間保管した後、１４５μＬの６．９１ｍｇ／ｍＬの抗ＨＥＲ２－Ｃ８２５（４．８ｎｍｏｌのＢｓＡｂまたは９．６ｎｍｏｌのＣ８２５）および９０μＬの［225Ａｃ］プロテウス－ＤＯＴＡ（４８８ｎＣｉ／８．６４ｎｍｏｌ）を室温で１時間混合すること（最終体積２３５μＬ）からなるｉｎ ｖｉｔｒｏでの混合実験。対照として、１ｍｇのトラスツズマブ（６．６７ｎｍｏｌ）もまた、抗ＨＥＲ２－Ｃ８２５と同じ様式で、９０μＬの［225Ａｃ］プロテウス－ＤＯＴＡ（４６８ｎＣｉ／８．６４ｎｍｏｌ）とｉｎ ｖｉｔｒｏで混合した。これらの２種の溶液を、別個に、生理食塩水＋１％ヒト血清アルブミンで予め平衡化したＰＤ－１０サイズ排除カラムにかけ、９０μＬ（４８８ｎＣｉ／８．６４ｎｍｏｌ）の［225Ａｃ］プロテウス－ＤＯＴＡのみのカラム溶出と比較した。溶出画分を、ガンマ計数器で、オープンウィンドウ設定を使用して計数した。
［68Ｇａ］プロテウス－ＤＯＴＡを用いたＰＥＴ画像化および生体内分布研究。［68Ｇａ］プロテウス－ＤＯＴＡを約２．７ｍＣｉ／７．４ｎｍｏｌ＝３６５ｍＣｉ／μｍｏｌの最終比放射能に調製した。ＨＥＲ２発現ＮＣＩ－Ｎ８７ヒト胃癌皮下異種移植片を担持するヌードマウス（ｎ＝４）に、１１３～１４０μＣｉ（３１０～３８４ｐｍｏｌ）の［68Ｇａ］プロテウス－ＤＯＴＡを注射し、注射後（ｐ．ｉ．）１５分（ｍｉｎ）間動的陽電子放出画像化を用いて（ｎ＝２）、または注射後１時間で静的画像化を用いて（ｎ＝４）画像化した。次いで、すべての動物を、ｅｘ ｖｉｖｏでの生体内分布分析のために、注射後２時間で屠殺した。リストモードデータを、以下のプロトコル：１２×１０秒、６×３０秒、５×６０秒、４×３００秒、３０分、合計２４のフレームを使用してヒストグラム化した。心臓（心臓の流出物としての血液について）および腎臓の周囲に関心領域を描出して、放射能濃度（％ＩＤ／ｇとして）を決定した。
抗ＧＰＡ３３－ＤＯＴＡ－ＰＲＩＴ＋［225Ａｃ］プロテウス－ＤＯＴＡを用いたｉｎ ｖｉｖｏでの標的化後の生体内分布研究。［225Ａｃ］プロテウス－ＤＯＴＡを０．２０Ｃｉ／ｇまたは２７４Ｃｉ／ｍｏｌの最終比放射能に調製し、調製から２４～４８時間以内に動物の群に注射した。ｈｕＡ３３－Ｃ８２５およびクリアリング剤の注射を受けた動物に、おおよそ２４時間前に調製された１８２ｐｍｏｌ／５０ｎＣｉの［225Ａｃ］プロテウス－ＤＯＴＡを注射した。翌日に、動物を、腫瘍および選択された正常組織における［225Ａｃ］プロテウス－ＤＯＴＡの注射後２４時間でのｅｘ ｖｉｖｏでの生体内分布判定のために屠殺した。非腫瘍担持動物の対照群に、おおよそ４８時間前に調製された１９８ｐｍｏｌ／５０ｎＣｉの［225Ａｃ］プロテウス－ＤＯＴＡを注射し、正常組織におけるｅｘ ｖｉｖｏでの生体内分布判定のために、［225Ａｃ］プロテウス－ＤＯＴＡの注射後１時間で屠殺した。屠体の放射能は、この研究の間に収集されなかった。
［111Ｉｎ］プロテウス－ＤＯＴＡの調製。類似の放射化学的方法を使用して、［111Ｉｎ］プロテウス－ＤＯＴＡを、［111Ｉｎ］塩化インジウム（Ｎｕｃｌｅａｒ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｉｎｃ．、Ｒｏｃｋａｗａｙ、ＮＪ；２４９ＭＢｑ［６．７３ｍＣｉ］）および１５０μＬの１０ｍｇ／ｍＬプロテウス－ＤＯＴＡ（１．５ｍｇ；１．１１μｍｏｌ）から調製した。［111Ｉｎ］プロテウス－ＤＯＴＡの収率は、＞９８％であり、最終比放射能は、１６２．８ＧＢｑ／ｇ［４．４Ｃｉ／ｇ］または２．２８Ｅ５ＧＢｑ／ｍｏｌ［６１６０Ｃｉ／ｍｏｌ］であった。この調製物を薬物動態研究に使用した。マウスへの投与前に、［111Ｉｎ］プロテウス－ＤＯＴＡを、［68Ｇａ］プロテウス－ＤＯＴＡについて記載されたＳｔｒａｔａ（商標）－Ｘカートリッジ（３３μｍ Ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ Ｒｅｖｅｒｓｅｄ Ｐｈａｓｅ Ｃ－１８ ３０ｍｇ／１ｍＬ ＃８Ｂ－Ｓ１００－ＴＡＫ、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ（登録商標）Ｉｎｃ．、Ｔｏｒｒａｎｃｅ、ＣＡ、米国）を使用して精製し、放射化学的純度は、過剰のＢｓＡｂを用いたｉｎ ｖｉｔｒｏ結合アッセイを使用してまたは放射能検出（ｒａｄｉｏｄｅｔｅｃｔｉｏｎ）と組み合わせた分析用逆相ＨＰＬＣによって、＞９８％であると確認された。
（実施例２）
本技術の組成物を用いたｉｎ ｖｉｔｒｏ研究
本実施例は、本技術の組成物が事前標的化放射免疫治療に有用であることを実証する。
プロテウス－ＤＯＴＡは、ＰＥＧリンカーによって隔てられたベンジル－ＤＯＴＡ－Ｌｕ錯体に付着した、３アームのＤＯＴＡキレート剤（225Ａｃとの安定な錯体を効率的に形成する）を含有する。図１を参照されたい。プロテウス－ＤＯＴＡは、２種の二官能性ＤＯＴＡキレーター：市販の２，２’，２’’－（１０－（１７－アミノ－２－オキソ－６，９，１２，１５－テトラオキサ－３－アザヘプタデシル）－１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７－トリイル）三酢酸（アミン－ＰＥＧ4－ＤＯＴＡ）、ならびに市販のｐ－ＳＣＮ－Ｂｎ－ＤＯＴＡおよびＬｕＣｌ3・６Ｈ2Ｏから調製された２－（４－イソチオシアナトベンジル）－１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－四酢酸の非放射性ルテチウム錯体（ｐ－ＳＣＮ－Ｂｎ－ＤＯＴＡ・Ｌｕ3+錯体）を混合することによって合成した。セミ分取Ｃ－１８高圧液体クロマトグラフィーを使用して、プロテウス－ＤＯＴＡが、非常に高い純度（＞９８％）および３４％の全収率で調製された。
プロテウス－ＤＯＴＡの放射化学反応は、乾固硝酸塩残渣としての無担体225Ａｃ（５．８０×１０4Ｃｉ／ｇ）を使用して遂行された。225Ａｃ標識プロテウス－ＤＯＴＡ（［225Ａｃ］プロテウス－ＤＯＴＡ）（ｎ＝３）が、９４～１００％の放射化学的収率で、高純度で、かつ８４～２７４Ｃｉ／ｍｏｌの間の比放射能で得られ、これは、プロテウス－ＤＯＴＡのＢｎ－ＤＯＴＡ－Ｌｕ部分が３アームのＤＯＴＡキレーター部分による225Ａｃ－放射性金属錯体化を妨げないことを示唆している。
図６は、ｉｎ ｖｉｔｒｏでの混合研究と、それに続く高分子量のＢｓＡｂ／［225Ａｃ］プロテウス－ＤＯＴＡ複合体（約２１２ｋＤ）を遊離［225Ａｃ］プロテウス－ＤＯＴＡ（約１．５ｋＤ）から分離するためのサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）を使用して、ＤＯＴＡ－ＰＲＩＴ ＢｓＡｂ（抗ＨＥＲ２－Ｃ８２５）の［225Ａｃ］プロテウス－ＤＯＴＡとの結合が実証されたことを示す。これは、［225Ａｃ］プロテウス－ＤＯＴＡに対してわずかにモル過剰のＢｓＡｂ（約２１０ｋＤ）（９．６ｎｍｏｌのＣ８２５／８．６ｎｍｏｌの［225Ａｃ］プロテウス－ＤＯＴＡ）を混合し、続いて室温で１時間インキュベートすることによって行った。複合体形成がＣ８２５ ｓｃＦｖの存在に依存していたことを示すために、ＢｓＡｂに対応する親ＩｇＧ（１５０ｋＤ）（ＩｇＧ＋［225Ａｃ］プロテウス－ＤＯＴＡ）または［225Ａｃ］プロテウス－ＤＯＴＡ単独のいずれかを用いた対照研究を並行して行った。
図６に示すように、ＢｓＡｂ＋［225Ａｃ］プロテウス－ＤＯＴＡの溶出プロファイルには明確な差が存在し、回収された225Ａｃ放射能の８９％が、恐らくＢｓＡｂ／［225Ａｃ］プロテウス－ＤＯＴＡ複合体として、最初の４．１ｍＬ以内に溶出した。それと比較して、対照（ＩｇＧ＋［225Ａｃ］プロテウス－ＤＯＴＡまたは［225Ａｃ］プロテウス－ＤＯＴＡ）は、それぞれ、最初の４．１ｍＬ以内に９．７％および９．３％の225Ａｃ放射能の溶出を示した一方で、残りの放射能（約９０％）は、４．６～７．１ｍＬの溶出体積の間で収集された溶出画分に回収された。
これらの結果は、（ａ）本技術のプロテウス－ＤＯＴＡハプテンの形態がＤＯＴＡ－ＢｓＡｂの認識および結合活性に悪影響を及ぼさないこと、ならびに（ｂ）本技術のプロテウス－ＤＯＴＡハプテン中の非放射性ルテチウムの存在が225Ａｃ放射化学反応を妨げないことを実証する。したがって、本明細書に開示される組成物は、事前標的化放射免疫治療方法において有用である。
（実施例３）
本技術の組成物を用いたｉｎ ｖｉｖｏ研究
本実施例は、本技術の組成物がｉｎ ｖｉｖｏ画像診断方法および事前標的化放射免疫治療に有用であることを実証する。
単離されたＢｓＡｂ／［225Ａｃ］プロテウス－ＤＯＴＡ複合体がｉｎ ｖｉｖｏで腫瘍に標的化できるか否かを決定するために、ＳＥＣ精製の後に、皮下ＨＥＲ２発現ＢＴ－４７４異種移植片を担持する無胸腺ヌードマウス（ｎ＝３）の２つの群で生体内分布アッセイを実行した。最大の放射能を含有する２つのＢｓＡｂ／［225Ａｃ］プロテウス－ＤＯＴＡ画分（画分５および６、それぞれ、３．１～３．６ｍＬおよび３．６～４．１ｍＬの溶出に対応する；合計回収放射能の８３％）を合わせ（合計体積：１ｍＬ）、異種移植片を担持するマウスの群に、２５０μＬのＰＤ１０で精製された抗ＨＥＲ２－Ｃ８２５／［225Ａｃ］プロテウス－ＤＯＴＡ溶液（１．０ｎｍｏｌの抗ＨＥＲ２－Ｃ８２５／マウス；３．７ｋＢｑ［１００ｎＣｉ］）または２５０μＬの合計体積で製剤化された［225Ａｃ］プロテウス－ＤＯＴＡ（０．５１ｎｍｏｌ、１．１ｋＢｑ［３０ｎＣｉ］）のいずれかを、外側尾静脈に静脈内注射し、ｅｘ ｖｉｖｏでの生体内分布判定のために、注射後４時間で屠殺した。
図２は、注射後４時間で、抗ＨＥＲ２－Ｃ８２５／［225Ａｃ］プロテウス－ＤＯＴＡはｉｎ ｖｉｖｏで腫瘍に標的化することができた一方で、［225Ａｃ］プロテウス－ＤＯＴＡは無視可能な腫瘍集積を示した（それぞれ、１２．４±３．９２％注射用量毎グラム（％ＩＤ／ｇ）または０．５０±０．３４％ＩＤ／ｇ）ことを示す。さらに、すべてのアッセイされた組織が、［225Ａｃ］プロテウス－ＤＯＴＡについて≦約２％ＩＤ／ｇの取り込みを示し、これは、腎***および最小限の組織内保持を示唆している。抗ＨＥＲ２－Ｃ８２５ ＢｓＡｂ／［225Ａｃ］プロテウス－ＤＯＴＡの血中放射能は、注射後４時間で腫瘍よりも大きく（２２．６±４．１８％ＩＤ／ｇ）、これは、ＢｓＡｂ／［225Ａｃ］プロテウス－ＤＯＴＡが血漿中で相対的に安定であり、動物をより後の時点で安楽死させた場合にさらなる腫瘍集積が生じていた可能性があることを示唆している。
ＮＣＩ－Ｎ８７腫瘍を担持するマウスに、ＰＥＴ画像化サロゲート、［68Ｇａ］プロテウス－ＤＯＴＡを注射することによって、プロテウス－ＤＯＴＡの血中半減期をさらに調査した。動的ＰＥＴ画像化および生体内分布研究の組合せを使用して、マウス１／マウス２についての急速相パーセント、半減期（緩徐相；分）、半減期（急速相；分）、およびＲ2値は、それぞれ、４６／５６、１３．２／１３．７、１．４／０．９４、および０．９５／０．９９であると算出された。図７および表１は、高い腎臓内取り込みと、それに続く迅速なクリアランスによって明らかである迅速な腎***を示す。
Figure 0007270596000005
放射標識されたプロテウス－ＤＯＴＡをＤＯＴＡ－ＰＲＩＴに使用できることを実証するために、ＧＰＡ３３発現ＳＷ１２２２異種移植片を担持する無胸腺ヌードマウスの群に、［225Ａｃ］プロテウス－ＤＯＴＡ（１８２ｐｍｏｌ、１．８５ｋＢｑ［５０ｎＣｉ］）の投与の２８時間前または４時間前のいずれかに、ＢｓＡｂ ｈｕＡ３３－Ｃ８２５（１．１９ｎｍｏｌ）およびクリアリング剤を注射した。［225Ａｃ］プロテウス－ＤＯＴＡ調製物の正常組織内取り込みを評価するために、健康なヌードマウスの対照群に、［225Ａｃ］プロテウス－ＤＯＴＡのみ（１９８ｐｍｏｌ、１．８５ｋＢｑ［５０ｎＣｉ］）を注射した。
生体内分布判定のために、ＰＲＩＴを受けたマウスを、［225Ａｃ］プロテウス－ＤＯＴＡの注射後２４時間で屠殺した一方で、［225Ａｃ］プロテウス－ＤＯＴＡのみを与えたマウスを、注射後１時間で屠殺した。表２および図３に示すように、ＢｓＡｂ ｈｕＡ３３－Ｃ８２５を用いたＰＲＩＴを受けた動物について、注射後２４時間での血液、腫瘍、および腎臓内取り込みは、それぞれ、０．９４±０．２６％ＩＤ／ｇ、１６．７１±２．９５％ＩＤ／ｇ、および１．０８±０．５５％ＩＤ／ｇであり、血液および腎臓について、それぞれ、約１８：１および１６：１の腫瘍対臓器放射能比に対応していた。［225Ａｃ］プロテウス－ＤＯＴＡ単独の血液および腎臓内取り込みは、注射後１時間で０．３１±０．５４％ＩＤ／ｇおよび０．６３±０．４１％ＩＤ／ｇであり、これは、迅速な腎クリアランスおよび無視可能な正常組織内取り込みを示している。
Figure 0007270596000006
本技術のプロテウス－ＤＯＴＡハプテンを用いたＤＯＴＡ－ＰＲＩＴの間に観察された高度の腫瘍浸透は重要であり、その理由は、すべてのＤＯＴＡハプテンがＰＲＩＴの間の腫瘍集積の促進において等しく有効であるとは限らないからである。例えば、モデルＰＲＩＴシステムを使用するｉｎ ｖｉｖｏでの225Ａｃ－ＤＯＴＡ－Ｂｎを用いた事前標的化は、注射後２４時間で225Ａｃ－ＤＯＴＡ－Ｂｎの著明でない腫瘍内取り込み（＜１％ＩＤ／ｇ）をもたらした。図８を参照されたい。
これらの結果は、（ａ）本技術のプロテウス－ＤＯＴＡハプテンの形態がＤＯＴＡ－ＢｓＡｂの認識および結合活性を損なわない（すなわち、ＤＯＴＡ－ＢｓＡｂが放射標識されたプロテウス－ＤＯＴＡハプテンおよび腫瘍抗原標的、例えば、ＧＰＡ３３またはＨＥＲ２の両方に有効に結合できる）こと、（ｂ）本技術のプロテウス－ＤＯＴＡハプテン中の非放射性ルテチウムの存在が225Ａｃ放射化学反応を妨げないこと、ならびに（ｃ）本技術のプロテウス－ＤＯＴＡハプテンを使用して、ｉｎ ｖｉｖｏでの腫瘍結合を保持し、かつ／またはＤＯＴＡ－ＰＲＩＴを用いたｉｎ ｖｉｖｏでの事前標的化に有用である放射標識されたＢｓＡｂ複合体を作製できることを実証する。したがって、本技術の組成物は、ｉｎ ｖｉｖｏ画像診断方法および事前標的化放射免疫治療に有用である。
（実施例４）
本技術の組成物のｉｎ ｖｉｖｏでの生体内分布、クリアランス、および毒性プロファイル
［111Ｉｎ］プロテウス－ＤＯＴＡを［225Ａｃ］プロテウス－ＤＯＴＡのサロゲートとして使用する腫瘍のないヌードマウスでの初期実験では、［111Ｉｎ］プロテウス－ＤＯＴＡの血中半減期は、二相性であると決定され、７．４９分（アルファ；８７．７％）および２４．８分（ベータ）の半減期であった（Ｒ2＝０．９１３）（図９（Ａ））。トレーサーの注射後２４０分（４時間）で実行された生体内分布アッセイは、低い腎臓保持（０．９６±０．２５；ｎ＝５；平均±ＳＤ）を含め、非常にわずかな正常組織内取り込み（組織１グラム当たりの注射放射能のパーセント；％ＩＡ／ｇとして）を示した。図９（Ｂ）を参照されたい。組織解剖の後に、屠体を線量較正器においてアッセイして、残りの111Ｉｎ放射能（０．９５２±０．１６２％ＩＤ；ｎ＝５；平均±ＳＤ）を決定した。図１２を参照されたい。
腫瘍のないヌードマウスにおける［225Ａｃ］プロテウス－ＤＯＴＡの生体内分布研究の間に、［225Ａｃ］プロテウス－ＤＯＴＡの血液、肝臓、および腎臓内取り込みは、注射後１時間で０．３１±０．５４、０．０４±０．０６、および０．６３±０．４１％ＩＤ／ｇであり、これは、許容されるｉｎ ｖｉｖｏでの安定性および無視可能な腎臓保持を示している。図９（Ｂ）を参照されたい。
健康なマウスにおける［225Ａｃ］Ｐｒ－ＤＯＴＡの毒物学研究。［225Ａｃ］プロテウス－ＤＯＴＡに起因する病的状態および組織病理学的損傷を評価するために、用量漸増毒性研究を実施した。腫瘍のないヌードマウスの群を種々の用量レベルの［225Ａｃ］プロテウス－ＤＯＴＡ（０、０．２５、０．５、１、２、４、または８μＣｉ／マウス；各用量レベル当たりｎ＝５）の単回ボーラス静脈内注射で処置し、処置により誘導される毒性を明らかにするため、注射後１４５日間、毎日モニタリングし、最大で週に２回秤量した。予定外の死亡例（マウスの死亡が見付かったかまたは疾病が見付かり、安楽死させた）は、病理学的検査に供された。要約すると、毒性は観察されず（＞１０％の体重低下として定義される；図１０）、放射線誘導性の組織学的臓器損傷（例えば、腎臓変性）は、１４５日で実施された剖検時に、いずれの用量レベルでも観察されなかった。臓器の質量に有意な群差は観察されなかった（例えば、腎臓、肝臓、または脾臓の縮小なし；図１１）。合計３匹の予定外の死亡例が発生した：０．５μＣｉ用量群から２／５；１匹は３６日目に２０％の体重低下により剖検に供された－重大な病理学的または組織病理学的病変は観察されず、血液学および血液生化学的検査で重要な所見は観察されなかった；また、その時点までに、もう１匹のマウスの死亡が１４４日目に見付かり、剖検は不可能であった。加えて、８μＣｉ群からの１匹のマウスを、ブドウ球菌細菌感染により、１２３日後に安楽死させた。このマウスにおける重要な所見は、組織球性および好酸球性心筋炎（ｍｙｏｃａｒｄｉｓ）、好酸球性間質性肺炎、軟部組織出血、顕著な血小板減少症、ならびに網状赤血球の上昇を伴う軽度の貧血であった。心筋炎、肺炎（ｐｎｅｍｏｎｉａ）、および軽度の貧血は、予定された屠殺時に観察されたいくつかの所見に関連していた。二次出血を伴う血小板減少症は、この研究における他のマウスにおいては観察されなかった。血液生化学的検査は著変なしであった。
［225Ａｃ］プロテウス－ＤＯＴＡの投与に関連すると思われた１つの組織病理学的病変は、いくつかの臓器における組織球性および好酸球性炎症であった。これらは、複数の臓器：心臓、肺、腎臓、脾臓、肝臓、膀胱に影響を及ぼす（ただし、影響を受けた各マウスは、通常は、これらの臓器のうち１つまたは２つのみに病変を有していた）好酸球およびマクロファージから主に構成される炎症性病変であった。明白な用量応答が存在した（８μＣｉ群では３／５匹のマウスが影響を受け、４μＣｉでは１／５、２μＣｉでは１／５、１μＣｉでは０／５、０．５μＣｉでは０／４、０．２５μＣｉでは０／５であった）。マウスをＤＯＴＡ－ＰＲＩＴ＋177Ｌｕ－ＤＯＴＡ－Ｂｎで処置してから１００～２００日後の毒性研究の間に、類似の病変が観察された（Cheal, S. M. et al., J Nucl Med 58, 1735-1742 (2017)）。血球数に基づいて、最高用量群（８μＣｉ）において赤血球量の軽度（約１０％）の減少が観察されたが、いかなる臨床徴候または症状も伴わなかった。血液生化学的検査で、［225Ａｃ］プロテウス－ＤＯＴＡの効果は、いずれの用量レベルでも観察されなかった（ｎ＝２９）。
これらの結果は、［225Ａｃ］プロテウス－ＤＯＴＡが非毒性であり、８μＣｉ（２９６ｋＢｑ）／マウスもの高用量で骨髄、肝臓、または腎臓等の正常組織に対する急性または慢性の放射線損傷が観察されなかったことを実証する。これらのデータは、長期的な腎毒性が報告されている（例えば、１６週間で１６０ｋＢｑの用量の［225Ａｃ］ＤＯＴＡ－ｃ（ＲＧＤｙＫ）6での糸球体の喪失；１年で１４．８ｋＢｑの用量の225Ａｃ標識抗ラットＨＥＲ－２／ｎｅｕモノクローナル抗体での腎臓皮質の尿細管上皮の喪失に起因する皮質組織の破壊；Song, H. et al., Cancer research 69, 8941-8948 (2009)を参照されたい）225Ａｃの副生成物（ｂｉｐｒｏｄｕｃｔ）、221Ｆｒおよび213Ｂｉが、腎臓に認識できるほどに集積しなかった可能性が高いことを示唆している。
［225Ａｃ］プロテウス－ＤＯＴＡの効率的かつ特異的な腫瘍標的化。予備実験は、抗原および［225Ａｃ］プロテウス－ＤＯＴＡのＬｕ－ＤＯＴＡ部分に対するＢｓＡｂの結合アビディティの保持を示した。ｉｎ ｖｉｖｏでの効率的な腫瘍標的化のために［225Ａｃ］プロテウス－ＤＯＴＡをＤＯＴＡ－ＰＲＩＴと組み合わせて使用できることを実証するために、ＧＰＡ３３発現ＳＷ１２２２異種移植片を担持するヌードマウスの群に、［225Ａｃ］プロテウス－ＤＯＴＡ（１８２ｐｍｏｌ、１．８５ｋＢｑ［５０ｎＣｉ］）の投与の２８時間前にＢｓＡｂ ｈｕＡ３３－Ｃ８２５（２５０μｇ；１．１９ｎｍｏｌ）を静脈内注射し、４時間前にクリアリング剤（６２．５μｇ；０．１２５ｎｍｏｌのデキストラン；７．６２５ｎｍｏｌの（Ｙ）ＤＯＴＡ）を静脈内注射した。これらのマウスを、生体内分布アッセイのために、［225Ａｃ］プロテウス－ＤＯＴＡの注射後２４時間で屠殺した。すべての動物を、生体内分布のために、注射後２４時間で屠殺した。［225Ａｃ］プロテウス－ＤＯＴＡを用いた事前標的化放射免疫治療を受けた動物について、注射後２４時間での血液、腫瘍、および腎臓内取り込み（組織１グラム当たりの注射放射能のパーセント；％ＩＡ／ｇとして）は、それぞれ、０．９４±０．２６、１６．７１±２．９５、および１．０８±０．５５であり、血液および腎臓について、それぞれ、約１８：１および１６：１の腫瘍対臓器放射能比に対応していた。注射後２４時間での組織１グラム当たりの注射放射能のパーセント；％ＩＡ／ｇ）としての肝臓内取り込みは、１．４０±０．４７であり、骨内取り込みは、検出不能であった。これらの腫瘍対臓器放射能比は、同じ動物モデルにおいてトレーサー177Ｌｕ－ＤＯＴＡ－Ｂｎまたは86Ｙ－ＤＯＴＡ－Ｂｎを使用する抗ＧＰＡ３３－ＤＯＴＡ－ＰＲＩＴを用いて行われた以前の生体内分布研究で、注射後２４時間で両方のＤＯＴＡ－ハプテンについての平均腫瘍内取り込みが約８％ＩＤ／ｇ（（いずれのＭ－ＤＯＴＡ－Ｂｎハプテンについても１．８５～８．８ＭＢｑ；１０～５０ｐｍｏｌ）（Cheal, S. M. et al., Eur J Nucl Med Mol Imaging 43, 925-937 (2016)を参照されたい）であったことと類似しており、これは、Ｃ８２５の［225Ａｃ］プロテウス－ＤＯＴＡに対する親和性が類似していたことを示唆している。
トレーサー用量の放射標識されたプロテウス－ＤＯＴＡを用いた研究に加えて、ｉｎ ｖｉｖｏ競合研究を使用して、放射標識されたプロテウス－ＤＯＴＡの絶対的な腫瘍内取り込みの上限を決定した。腫瘍を担持するマウスの群に、２桁（約１７０～３３８００ｐｍｏｌ）に及ぶ広い質量範囲のプロテウス－ＤＯＴＡを投薬した後２４時間で生体内分布実験を実行し、約６０ｐｍｏｌのＤＯＴＡ－ハプテン／１グラムのＳＷ１２２２腫瘍の最大腫瘍内取り込み（「Ｂｍａｘ」）が示された。これらの結果は、同じシステムにおいて事前標的化された177Ｌｕ－ＤＯＴＡ－Ｂｎを用いて達成された結果（６００ｐｍｏｌの静脈内投与用量で約６０ｐｍｏｌ／ｇ）と同等である。事前標的化されたプロテウス－ＤＯＴＡの最大腫瘍内取り込みがＳＷ１２２２腫瘍１グラム当たり６２ｐｍｏｌであることに基づいて、定量的ＲＣＹで現在達成されるＳＡで、腫瘍１グラム当たり約１８０ｎＣｉの225Ａｃを局在させることができる。
したがって、本技術の組成物は、ｉｎ ｖｉｖｏ画像診断方法および事前標的化放射免疫治療に有用である。
均等物
本技術は、本出願に記載された特定の実施形態によって限定されるべきではなく、それらは、本技術の個々の態様の単なる例示として意図されている。当業者には明白であるように、本技術の趣旨および範囲から逸脱することなく、本技術の多くの改変および変形を行うことができる。本明細書に挙げられた方法および装置に加えて、本技術の範囲内にある機能的に均等な方法および装置は、前述の説明から当業者には明白である。そのような改変および変形は、本技術の範囲内に入ることが意図されている。本技術は、特定の方法、試薬、化合物、組成物または生物学的系に限定されず、当然ながら、それらは変化し得ることを理解すべきである。本明細書で使用される専門用語は、特定の実施形態を説明するためのものにすぎず、限定することは意図されていないこともまた理解すべきである。
加えて、本開示の特徴または態様がマーカッシュ群によって記載されている場合、それにより、本開示はまた、マーカッシュ群のいずれかの個々の構成要素または構成要素の部分群によって記載されていることが当業者には認識される。
当業者によって理解されるように、あらゆる目的で、特に記述説明の提供に関して、本明細書に開示されるすべての範囲はまた、そのあらゆる可能な部分範囲および部分範囲の組合せを包含する。任意の列挙された範囲は、同範囲が少なくとも等しい２分の１、３分の１、４分の１、５分の１、１０分の１等に分割されることを十分に説明し、可能にすると容易に認識され得る。非限定的な例として、本明細書で論じられた各範囲は、下部の３分の１、中央の３分の１および上部の３分の１等に容易に分割することができる。同じく当業者によって理解されるように、例えば「最大で」、「少なくとも」、「を超える」、「未満」などのすべての文言は、記述された数を含み、上記で論じられた部分範囲にその後分割することができる範囲を指す。最後に、当業者によって理解されるように、範囲は、各個々の構成要素を含む。したがって、例えば、１～３個の細胞を有する群は、１、２、または３個の細胞を有する群を指す。同様に、１～５個の細胞を有する群は、１、２、３、４、または５個の細胞を有する群を指すなどである。
本明細書で言及または引用されたすべての特許、特許出願、仮出願、および刊行物は、本明細書の明示的な教示と矛盾しない限り、すべての図および表を含め、その全体が参照により組み込まれる。

Claims (16)

  1. 式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩。
    Figure 0007270596000007
     (I)
    （式中、
    Ｍ1は、175Ｌｕ3+、45Ｓｃ3+、69Ｇａ3+、71Ｇａ3+、89Ｙ3+、113Ｉｎ3+、115Ｉｎ3+、139Ｌａ3+、136Ｃｅ3+、138Ｃｅ3+、140Ｃｅ3+、142Ｃｅ3+、151Ｅｕ3+、153Ｅｕ3+、159Ｔｂ3+、154Ｇｄ3+、155Ｇｄ3+、156Ｇｄ3+、157Ｇｄ3+、158Ｇｄ3+、または160Ｇｄ3+であり、
    Ｘ1、Ｘ2、Ｘ3、およびＸ4は、各々独立して、孤立電子対（すなわち、酸素アニオンを与える）またはＨであり、
    Ｘ5、Ｘ6、およびＸ7は、各々独立して、孤立電子対（すなわち、酸素アニオンを与える）またはＨであり、
    Ｙ1は、ＯまたはＳであり、
    ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、または２２であり、
    ここで（ｉ.）Ｘ1、Ｘ2、Ｘ3、およびＸ4のうち少なくとも２つは、各々独立して、孤立電子対であってもよく、または、（ｉｉ.）Ｘ1、Ｘ2、Ｘ3、およびＸ4のうち３つは、各々独立して、孤立電子対、残りのＸ1、Ｘ2、Ｘ3、またはＸ4は、Ｈであってもよい）
  2. 請求項１に記載の化合物および放射性核種カチオンを含むビスキレートであって、
    式ＩＩのビスキレートまたはその薬学的に許容される塩であってもよい、ビスキレート。
    Figure 0007270596000008
     (II)
    （式中、
    Ｍ1は、175Ｌｕ3+、45Ｓｃ3+、69Ｇａ3+、71Ｇａ3+、89Ｙ3+、113Ｉｎ3+、115Ｉｎ3+、139Ｌａ3+、136Ｃｅ3+、138Ｃｅ3+、140Ｃｅ3+、142Ｃｅ3+、151Ｅｕ3+、153Ｅｕ3+、159Ｔｂ3+、154Ｇｄ3+、155Ｇｄ3+、156Ｇｄ3+、157Ｇｄ3+、158Ｇｄ3+、または160Ｇｄ3+であり、
    Ｍ2は、放射性核種カチオンであり、前記放射性核種は、68Ｇａ、227Ｔｈ、または64Ｃｕであってもよく、
    Ｘ1、Ｘ2、Ｘ3、およびＸ4は、各々独立して、孤立電子対（すなわち、酸素アニオンを与える）またはＨであり、
    Ｘ5、Ｘ6、およびＸ7は、各々独立して、孤立電子対（すなわち、酸素アニオンを与える）またはＨであり、ここでＸ5、Ｘ6、およびＸ7のうち少なくとも２つは、各々独立して、孤立電子対であってもよく、
    Ｙ1は、ＯまたはＳであり、
    ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、または２２である）
  3. 放射性核種カチオンが、二価カチオンまたは三価カチオンであり、
    ここで前記放射性核種カチオンは、
    アルファ粒子放出同位体、ここで前記アルファ粒子放出同位体は、213Ｂｉ、211Ａｔ、225Ａｃ、152Ｄｙ、212Ｂｉ、223Ｒａ、219Ｒｎ、215Ｐｏ、211Ｂｉ、221Ｆｒ、217Ａｔ、および255Ｆｍからなる群から選択されてもよく、
    ベータ粒子放出同位体、ここで前記ベータ粒子放出同位体は、86Ｙ、90Ｙ、89Ｓｒ、165Ｄｙ、186Ｒｅ、188Ｒｅ、177Ｌｕ、および67Ｃｕからなる群から選択されてもよく、
    オージェ放出体、ここで前記オージェ放出体は、111Ｉｎ、67Ｇａ、51Ｃｒ、58Ｃｏ、99mＴｃ、103mＲｈ、195mＰｔ、119Ｓｂ、161Ｈｏ、189mＯｓ、192Ｉｒ、201Ｔｌ、および203Ｐｂからなる群から選択されてもよく、または
    それらのいずれか２種以上の組合せであってもよい、
    請求項２に記載のビスキレート。
  4. 請求項２～３のいずれか１項に記載のビスキレート、ならびに前記ビスキレートおよび腫瘍抗原標的に結合する抗ＤＯＴＡ二重特異性抗体を含む複合体。
  5. 前記腫瘍抗原標的は、ＧＰＡ３３、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＧＤ２、ＭＡＧＥ－１、ＭＡＧＥ－３、ＢＡＧＥ、ＧＡＧＥ－１、ＧＡＧＥ－２、ＭＵＭ－１、ＣＤＫ４、Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ、ｐ１５、ｇｐ７５、ベータ－カテニン、ＥｒｂＢ２、がん抗原１２５（ＣＡ－１２５）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＲＡＧＥ、ＭＡＲＴ（黒色腫抗原）、ＭＵＣ－１、ＭＵＣ－２、ＭＵＣ－３、ＭＵＣ－４、ＭＵＣ－５ａｃ、ＭＵＣ－１６、ＭＵＣ－１７、チロシナーゼ、Ｐｍｅｌ１７（ｇｐ１００）、ＧｎＴ－ＶイントロンＶ配列（Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＶイントロンＶ配列）、前立腺がんｐｓｍ、ＰＲＡＭＥ（黒色腫抗原）、β－カテニン、ＥＢＮＡ（エプスタイン・バーウイルス核抗原）１～６、ｐ５３、肺耐性タンパク質（ＬＲＰ）Ｂｃｌ－２、前立腺特異性抗原（ＰＳＡ）、Ｋｉ－６７、ＣＥＡＣＡＭ６、結腸特異性抗原ｐ（ＣＳＡｐ）、ＨＬＡ－ＤＲ、ＣＤ４０、ＣＤ７４、ＣＤ１３８、ＥＧＦＲ、ＥＧＰ－１、ＥＧＰ－２、ＶＥＧＦ、ＰｌＧＦ、インスリン様成長因子（ＩＬＧＦ）、テネイシン、血小板由来成長因子、ＩＬ－６、ＣＤ２０、ＣＤ１９、ＰＳＭＡ、ＣＤ３３、ＣＤ１２３、ＭＥＴ、ＤＬＬ４、Ａｎｇ－２、ＨＥＲ３、ＩＧＦ－１Ｒ、ＣＤ３０、ＴＡＧ－７２、ＳＰＥＡＰ、ＣＤ４５、Ｌ１－ＣＡＭ、ルイスＹ（Ｌｅ y ）抗原、Ｅ－カドヘリン、Ｖ－カドヘリン、およびＥｐＣＡＭからなる群から選択される、請求項４に記載の複合体。
  6. 請求項４又は５に記載の複合体を含む、それを必要とする対象における固形腫瘍の検出に用いるための組成物であって、前記検出は、
    請求項４又は５に記載の複合体の有効量を対象に投与する工程であって、複合体が、複合体の抗ＤＯＴＡ二重特異性抗体によって認識される腫瘍抗原標的を発現している固形腫瘍に局在するように構成されている、工程を含み、
    ここで、対象における固形腫瘍の存在は、基準値よりも高い、複合体によって放出される放射能レベルを検出することによって検出される、組成物。
  7. 請求項４又は５に記載の複合体を含む、事前標的化放射免疫治療のための対象の選択に用いるための組成物であって、前記選択は、
    請求項４又は５に記載の複合体の有効量を対象に投与する工程であって、複合体が、複合体の抗ＤＯＴＡ二重特異性抗体によって認識される腫瘍抗原標的を発現している固形腫瘍に局在するように構成されている、工程と、
    複合体によって放出される放射能レベルを検出する工程と、を含み、
    ここで複合体によって放出される放射能レベルが基準値よりも高い場合に、事前標的化放射免疫治療のための対象が選択される、組成物。
  8. 対象が、がんと診断されている、またはがんを有すると疑われており、ここで前記がんは、乳がん、結腸直腸がん、子宮頸部がん、卵巣がん、肝がん、膀胱がん、ヘパトーマ、肝細胞癌、脳がん、肺がん、胃がん、膵がん、甲状腺がん、腎臓または腎がん、前立腺がん、黒色腫、肉腫、癌腫、ウィルムス腫瘍、子宮内膜がん、神経膠芽細胞腫、扁平上皮がん、星細胞腫、唾液腺癌、外陰部がん、陰茎癌、頭頸部がん、下垂体腺腫、髄膜腫、神経芽腫、および頭蓋咽頭腫からなる群から選択されてもよい、請求項６または７に記載の組成物。
  9. 請求項２または３に記載のビスキレートを含む、がんと診断された対象において放射線治療に対する腫瘍の感受性を高める方法に用いるための組成物であって、前記方法は、
    （ａ）腫瘍抗原標的を発現している腫瘍に局在するように構成された抗ＤＯＴＡ二重特異性抗体の有効量を対象に投与する工程と、
    （ｂ）抗ＤＯＴＡ二重特異性抗体に結合するように構成された、請求項２～３のいずれか１項に記載のビスキレートの有効量を対象に投与する工程と
    を含む、組成物。
  10. 前記腫瘍抗原標的は、ＧＰＡ３３、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＧＤ２、ＭＡＧＥ－１、ＭＡＧＥ－３、ＢＡＧＥ、ＧＡＧＥ－１、ＧＡＧＥ－２、ＭＵＭ－１、ＣＤＫ４、Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ、ｐ１５、ｇｐ７５、ベータ－カテニン、ＥｒｂＢ２、がん抗原１２５（ＣＡ－１２５）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＲＡＧＥ、ＭＡＲＴ（黒色腫抗原）、ＭＵＣ－１、ＭＵＣ－２、ＭＵＣ－３、ＭＵＣ－４、ＭＵＣ－５ａｃ、ＭＵＣ－１６、ＭＵＣ－１７、チロシナーゼ、Ｐｍｅｌ１７（ｇｐ１００）、ＧｎＴ－ＶイントロンＶ配列（Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＶイントロンＶ配列）、前立腺がんｐｓｍ、ＰＲＡＭＥ（黒色腫抗原）、β－カテニン、ＥＢＮＡ（エプスタイン・バーウイルス核抗原）１～６、ｐ５３、肺耐性タンパク質（ＬＲＰ）Ｂｃｌ－２、前立腺特異性抗原（ＰＳＡ）、Ｋｉ－６７、ＣＥＡＣＡＭ６、結腸特異性抗原ｐ（ＣＳＡｐ）、ＨＬＡ－ＤＲ、ＣＤ４０、ＣＤ７４、ＣＤ１３８、ＥＧＦＲ、ＥＧＰ－１、ＥＧＰ－２、ＶＥＧＦ、ＰｌＧＦ、インスリン様成長因子（ＩＬＧＦ）、テネイシン、血小板由来成長因子、ＩＬ－６、ＣＤ２０、ＣＤ１９、ＰＳＭＡ、ＣＤ３３、ＣＤ１２３、ＭＥＴ、ＤＬＬ４、Ａｎｇ－２、ＨＥＲ３、ＩＧＦ－１Ｒ、ＣＤ３０、ＴＡＧ－７２、ＳＰＥＡＰ、ＣＤ４５、Ｌ１－ＣＡＭ、ルイスＹ（Ｌｅ y ）抗原、Ｅ－カドヘリン、Ｖ－カドヘリン、およびＥｐＣＡＭからなる群から選択される、請求項９に記載の組成物。
  11. 請求項４又は５に記載の複合体を含む、がんと診断された対象において放射線治療に対する腫瘍の感受性を高めるための方法に用いるための組成物であって、前記方法は、
    請求項４又は５に記載の複合体の有効量を対象に投与する工程であって、複合体が、複合体の抗ＤＯＴＡ二重特異性抗体によって認識される腫瘍抗原標的を発現している腫瘍に局在するように構成されている、工程
    を含み、前記複合体は、静脈内、筋肉内、動脈内、くも膜下腔内、関節包内、眼窩内、皮内、腹腔内、経気管的、皮下、脳室内、経口または鼻腔内投与用に製剤化されていてもよい、組成物。
  12. 請求項２または３に記載のビスキレートを含む、それを必要とする対象においてがんを処置するための方法に用いるための組成物であって、前記方法は、
    （ａ）腫瘍抗原標的を発現している腫瘍に局在するように構成された抗ＤＯＴＡ二重特異性抗体の有効量を対象に投与する工程と、
    （ｂ）抗ＤＯＴＡ二重特異性抗体に結合するように構成された、請求項２～３のいずれか１項に記載のビスキレートの有効量を対象に投与する工程と
    を含む、組成物。
  13. 前記方法が、ビスキレートの投与前にクリアリング剤の有効量を対象に投与する工程をさらに含む、請求項１２に記載の組成物。
  14. 前記方法が、ナイトロジェンマスタード、エチレンイミン誘導体、スルホン酸アルキル、ニトロソウレア、ゲムシタビン、トリアゼン、葉酸類似体、アントラサイクリン、タキサン、ＣＯＸ－２阻害剤、ピリミジン類似体、プリン類似体、抗生物質、酵素阻害剤、エピポドフィロトキシン、白金配位錯体、ビンカアルカロイド、置換尿素、メチルヒドラジン誘導体、副腎皮質抑制剤、ホルモン拮抗薬、エンドスタチン、タキソール、カンプトテシン、ＳＮ－３８、ドキソルビシン、ドキソルビシン類似体、代謝拮抗物質、アルキル化剤、抗有糸***薬、抗血管新生剤、チロシンキナーゼ阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、熱ショックタンパク質（ＨＳＰ９０）阻害剤、プロテオソーム阻害剤、ＨＤＡＣ阻害剤、アポトーシス促進剤、メトトレキサートおよびＣＰＴ－１１からなる群から選択される少なくとも１種の化学療法剤の順次、別個、または同時投与をさらに含む、請求項１２または１３に記載の組成物。
  15. がんが、乳がん、結腸直腸がん、子宮頸部がん、卵巣がん、肝がん、膀胱がん、ヘパトーマ、肝細胞癌、脳がん、肺がん、胃がん、膵がん、甲状腺がん、腎臓または腎がん、前立腺がん、黒色腫、肉腫、癌腫、ウィルムス腫瘍、子宮内膜がん、神経膠芽細胞腫、扁平上皮がん、星細胞腫、唾液腺癌、外陰部がん、陰茎癌、および頭頸部がんからなる群から選択される、請求項９～１４のいずれか１項に記載の組成物。
  16. （ｉ）請求項１に記載の化合物または請求項２もしくは３に記載のビスキレート、
    （ｉｉ）少なくとも１種の抗ＤＯＴＡ ＢｓＡｂ、および
    （ｉｉｉ）使用説明書
    を含むキットであって、
    クリアリング剤および／または１種もしくは複数の放射性核種をさらに含んでもよく、ここで前記クリアリング剤は、５００ｋＤアミノデキストラン－ＤＯＴＡコンジュゲートであってもよく、および／または、前記１種または複数の放射性核種は、213Ｂｉ、211Ａｔ、225Ａｃ、152Ｄｙ、212Ｂｉ、223Ｒａ、219Ｒｎ、215Ｐｏ、211Ｂｉ、221Ｆｒ、217Ａｔ、255Ｆｍ、86Ｙ、90Ｙ、89Ｓｒ、165Ｄｙ、186Ｒｅ、188Ｒｅ、177Ｌｕ、67Ｃｕ、111Ｉｎ、67Ｇａ、51Ｃｒ、58Ｃｏ、99mＴｃ、103mＲｈ、195mＰｔ、119Ｓｂ、161Ｈｏ、189mＯｓ、192Ｉｒ、201Ｔｌ、203Ｐｂ、68Ｇａ、227Ｔｈ、および64Ｃｕからなる群から選択されてもよい、キット。
JP2020500214A 2017-07-06 2018-07-05 抗ｄｏｔａ／抗腫瘍抗原二重特異性抗体による事前標的化放射免疫治療のためのｄｏｔａ－ハプテン組成物 Active JP7270596B2 (ja)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201762529363P 2017-07-06 2017-07-06
US62/529,363 2017-07-06
PCT/US2018/040911 WO2019010299A1 (en) 2017-07-06 2018-07-05 DOTA-HAPTENE COMPOSITIONS FOR RADIOIMMUNOTHERAPY PRECIBLED BY A BISPECIFIC ANTIGEN ANTI-DOTA / ANTI-TUMOR ANTIBODY

Publications (3)

Publication Number Publication Date
JP2020526522A JP2020526522A (ja) 2020-08-31
JP2020526522A5 JP2020526522A5 (ja) 2021-08-12
JP7270596B2 true JP7270596B2 (ja) 2023-05-10

Family

ID=64951242

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2020500214A Active JP7270596B2 (ja) 2017-07-06 2018-07-05 抗ｄｏｔａ／抗腫瘍抗原二重特異性抗体による事前標的化放射免疫治療のためのｄｏｔａ－ハプテン組成物

Country Status (7)

Country Link
US (1) US11565005B2 (ja)
EP (1) EP3648801A4 (ja)
JP (1) JP7270596B2 (ja)
CN (1) CN111050808A (ja)
AU (1) AU2018297272B2 (ja)
CA (1) CA3069140A1 (ja)
WO (1) WO2019010299A1 (ja)

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108434469A (zh) * 2018-05-29 2018-08-24 江苏省原子医学研究所 一种HER2亲合体的68Ga标记物及其制备方法、应用
EP3990022A4 (en) * 2019-06-26 2023-06-28 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Anti-cd33 antibodies for treating cancer
CA3184226A1 (en) * 2020-06-29 2022-01-06 Steven Larson Dota-hapten compositions for anti-dota/anti-tumor antigen bispecific antibody pretargeted radioimmunotherapy
EP4277668A1 (en) * 2021-01-13 2023-11-22 F. Hoffmann-La Roche AG Combination therapy
WO2022167052A1 (en) 2021-02-08 2022-08-11 Y-Mabs Therapeutics, Inc. Use of ascorbic acid as stabilizing agent for anti b7-h3 antibodies
TW202333794A (zh) 2021-12-15 2023-09-01 美商Ｙ單克隆抗體製藥有限公司 包含sada複合物的調配物
TW202330592A (zh) 2021-12-15 2023-08-01 美商Ｙ單克隆抗體製藥有限公司 具有經減少之多聚化(MULTIMERISATION)的scFv及抗體

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2015171792A1 (en) 2014-05-06 2015-11-12 The Johns Hopkins University Metal/radiometal-labeled psma inhibitors for psma-targeted imaging and radiotherapy

Family Cites Families (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US656939A (en) * 1900-02-05 1900-08-28 Wilson William Cuspidor.
US4683195A (en) 1986-01-30 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or-cloning nucleic acid sequences
DE3713842A1 (de) * 1987-04-22 1988-11-17 Schering Ag Substituierte cyclische komplexbildner, komplexe und komplexsalze, verfahren zu deren herstellung und diese enthaltende pharmazeutische mittel
DE3920358A1 (de) 1989-06-22 1991-01-17 Behringwerke Ag Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente antikoerperkonstrukte, ihre herstellung und verwendung
US5446145A (en) * 1990-01-19 1995-08-29 Nycomed Salutar, Inc. Polychelant compounds
US5972307A (en) * 1989-10-23 1999-10-26 Nycomed Salutar, Inc. Dichelants
JPH07501451A (ja) 1991-11-25 1995-02-16 エンゾン・インコーポレイテッド 多価抗原結合タンパク質
US6022966A (en) * 1993-11-22 2000-02-08 Neorx Corporation Pretargeting methods and compounds
EP2403530B1 (en) * 2009-02-27 2016-05-11 Massachusetts Institute of Technology Engineered proteins with high affinity for dota chelates
WO2012085789A1 (en) 2010-12-21 2012-06-28 Koninklijke Philips Electronics N.V. Agents for clearing biomolecules from circulation
CA2976074A1 (en) 2015-02-09 2016-08-18 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Multi-specific antibodies with affinity for human a33 antigen and dota metal complex and uses thereof
CA3093694A1 (en) * 2018-03-12 2019-09-19 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Bispecific binding agents and uses thereof

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2015171792A1 (en) 2014-05-06 2015-11-12 The Johns Hopkins University Metal/radiometal-labeled psma inhibitors for psma-targeted imaging and radiotherapy

Also Published As

Publication number Publication date
AU2018297272A1 (en) 2020-01-30
EP3648801A4 (en) 2021-04-28
CA3069140A1 (en) 2019-01-10
AU2018297272B2 (en) 2022-10-27
US11565005B2 (en) 2023-01-31
US20210145988A1 (en) 2021-05-20
EP3648801A1 (en) 2020-05-13
WO2019010299A1 (en) 2019-01-10
CN111050808A (zh) 2020-04-21
JP2020526522A (ja) 2020-08-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7270596B2 (ja) 抗ｄｏｔａ／抗腫瘍抗原二重特異性抗体による事前標的化放射免疫治療のためのｄｏｔａ－ハプテン組成物
Tolmachev et al. Affibody molecules: potential for in vivo imaging of molecular targets for cancer therapy
US10100125B2 (en) Humanised anti kallikrein-2 antibody
Chomet et al. State of the art in radiolabeling of antibodies with common and uncommon radiometals for preclinical and clinical immuno-PET
US20030176784A1 (en) Labeling targeting agents with gallium-68 and gallium-67
Moreau et al. DOTAGA-trastuzumab. A new antibody conjugate targeting HER2/Neu antigen for diagnostic purposes
BR112020012099A2 (pt) radiomarcação de polipeptídeos
Satpati Recent breakthrough in 68Ga-radiopharmaceuticals cold kits for convenient PET radiopharmacy
US20090208410A1 (en) Ed-b fibronectin as stratification marker for anti-tumor drugs
US20230095707A1 (en) Multimodal fluorine-cy3/5/7-dota-hapten compositions, diagnostics, fluorescence guided surgery and radioimmunotherapy
Goldsmith et al. An overview of the diagnostic and therapeutic use of monoclonal antibodies in medicine
Postupalenko et al. Template directed synthesis of antibody Fc conjugates with concomitant ligand release
JP2009292815A (ja) 腫瘍診断に使用するための抗−Ｍｅｔモノクローナル抗体、そのフラグメントおよび誘導体、対応する組成物およびキット
US20230256121A1 (en) Dota-hapten compositions for anti-dota/anti-tumor antigen bispecific antibody pretargeted radioimmunotherapy
Tolmachev et al. Influence of an aliphatic linker between DOTA and synthetic ZHER2: 342 Affibody molecule on targeting properties of the 111In-labeled conjugate
Tran et al. Comparison of benzoate-and dodecaborate-based linkers for attachment of radioiodine to HER2-targeting Affibody ligand
US11413354B2 (en) N-acetylgalactosamino dendron-clearing agent for dota-pretargeted radioimmunotherapy
US20200197547A1 (en) Anti-mesothelin radiolabelled single domain antibodies suitable for the imaging and treatment of cancers
WO2012032043A1 (en) 212 pb imaging
JP2021511068A (ja) Ｃｅｎｔｒｉｎ−１に対する抗体、作製方法、及びその使用
EA044225B1 (ru) Применение очищающего агента на основе дендронов n-ацетилгалактозамина в предварительно направленной радиоиммунотерапии с хелатором dota
TW202233247A (zh) 抗ｈｅｒ２抗體之放射性複合體及放射性醫藥

Legal Events

Date Code Title Description
A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20210630

A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20210630

A977 Report on retrieval

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007

Effective date: 20220623

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20220727

A601 Written request for extension of time

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601

Effective date: 20221026

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20221226

TRDD Decision of grant or rejection written
A01 Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01

Effective date: 20230327

A61 First payment of annual fees (during grant procedure)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61

Effective date: 20230425

R150 Certificate of patent or registration of utility model

Ref document number: 7270596

Country of ref document: JP

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150