JP7256824B2 - 粒子状製剤用の凍結保護剤 - Google Patents
粒子状製剤用の凍結保護剤 Download PDFInfo
- Publication number
- JP7256824B2 JP7256824B2 JP2020559465A JP2020559465A JP7256824B2 JP 7256824 B2 JP7256824 B2 JP 7256824B2 JP 2020559465 A JP2020559465 A JP 2020559465A JP 2020559465 A JP2020559465 A JP 2020559465A JP 7256824 B2 JP7256824 B2 JP 7256824B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- composition
- mrna
- nano
- cationic
- therapeutically active
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
- A61K47/10—Alcohols; Phenols; Salts thereof, e.g. glycerol; Polyethylene glycols [PEG]; Poloxamers; PEG/POE alkyl ethers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
- A61K31/7105—Natural ribonucleic acids, i.e. containing only riboses attached to adenine, guanine, cytosine or uracil and having 3'-5' phosphodiester links
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/24—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing atoms other than carbon, hydrogen, oxygen, halogen, nitrogen or sulfur, e.g. cyclomethicone or phospholipids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/28—Steroids, e.g. cholesterol, bile acids or glycyrrhetinic acid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
- A61K47/549—Sugars, nucleosides, nucleotides or nucleic acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
- A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
- A61K48/0008—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'non-active' part of the composition delivered, e.g. wherein such 'non-active' part is not delivered simultaneously with the 'active' part of the composition
- A61K48/0025—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'non-active' part of the composition delivered, e.g. wherein such 'non-active' part is not delivered simultaneously with the 'active' part of the composition wherein the non-active part clearly interacts with the delivered nucleic acid
- A61K48/0033—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'non-active' part of the composition delivered, e.g. wherein such 'non-active' part is not delivered simultaneously with the 'active' part of the composition wherein the non-active part clearly interacts with the delivered nucleic acid the non-active part being non-polymeric
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
- A61K48/0008—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'non-active' part of the composition delivered, e.g. wherein such 'non-active' part is not delivered simultaneously with the 'active' part of the composition
- A61K48/0025—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'non-active' part of the composition delivered, e.g. wherein such 'non-active' part is not delivered simultaneously with the 'active' part of the composition wherein the non-active part clearly interacts with the delivered nucleic acid
- A61K48/0041—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'non-active' part of the composition delivered, e.g. wherein such 'non-active' part is not delivered simultaneously with the 'active' part of the composition wherein the non-active part clearly interacts with the delivered nucleic acid the non-active part being polymeric
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
- A61K48/0075—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the delivery route, e.g. oral, subcutaneous
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0043—Nose
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/007—Pulmonary tract; Aromatherapy
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/007—Pulmonary tract; Aromatherapy
- A61K9/0073—Sprays or powders for inhalation; Aerolised or nebulised preparations generated by other means than thermal energy
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/127—Liposomes
- A61K9/1271—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes, liposomes coated with polymers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/127—Liposomes
- A61K9/1271—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes, liposomes coated with polymers
- A61K9/1272—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes, liposomes coated with polymers with substantial amounts of non-phosphatidyl, i.e. non-acylglycerophosphate, surfactants as bilayer-forming substances, e.g. cationic lipids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
- A61K9/16—Agglomerates; Granulates; Microbeadlets ; Microspheres; Pellets; Solid products obtained by spray drying, spray freeze drying, spray congealing,(multiple) emulsion solvent evaporation or extraction
- A61K9/1605—Excipients; Inactive ingredients
- A61K9/1617—Organic compounds, e.g. phospholipids, fats
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
- A61K9/16—Agglomerates; Granulates; Microbeadlets ; Microspheres; Pellets; Solid products obtained by spray drying, spray freeze drying, spray congealing,(multiple) emulsion solvent evaporation or extraction
- A61K9/1682—Processes
- A61K9/1688—Processes resulting in pure drug agglomerate optionally containing up to 5% of excipient
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
- A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
- A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
- A61K9/5107—Excipients; Inactive ingredients
- A61K9/5123—Organic compounds, e.g. fats, sugars
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
- A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
- A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
- A61K9/5192—Processes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/111—General methods applicable to biologically active non-coding nucleic acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2320/00—Applications; Uses
- C12N2320/30—Special therapeutic applications
- C12N2320/32—Special delivery means, e.g. tissue-specific
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Otolaryngology (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Optics & Photonics (AREA)
- Nanotechnology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Description
(i)液相に懸濁されている治療活性剤のナノまたはマイクロ粒子製剤(nano- or
microparticle formulation)、および
(ii)1つまたは2つのヒドロキシ基で置換されたC3~C5アルカンから選択される、少なくとも1つの凍結保護添加剤
を含む、組成物を提供する。
(i)治療活性剤のナノまたはマイクロ粒子製剤、および
(ii)1つまたは2つのヒドロキシ基で置換されたC3~C5アルカンから選択される、少なくとも1つの凍結保護添加剤
を含み、
第一の態様による組成物を凍結することにより得られる、固体組成物を提供する。
a)液相に懸濁されている治療活性剤のナノまたはマイクロ粒子製剤を生成すること、および
b)1つまたは2つのヒドロキシ基で置換されたC3~C5アルカンから選択される、少なくとも1つの凍結保護添加剤を液相に添加すること
を含み、凍結保護添加剤の液相への添加が、液相に懸濁されているナノまたはマイクロ粒子製剤を生成する前、生成する間、または生成した後に達成することができる、
方法に関する。
a)液相に懸濁されている治療活性剤のナノまたはマイクロ粒子製剤を生成すること、および
b)1つまたは2つのヒドロキシ基で置換されたC3~C5アルカンから選択される、少なくとも1つの凍結保護添加剤を液相に添加すること
を含み、凍結保護添加剤の液相への添加が、液相に懸濁されているナノまたはマイクロ粒子製剤を生成する前、生成する間、または生成した後に達成することができる、
方法により、上記の第一の態様による組成物を調製する、第一のステップ、
ならびに、第一のステップで得られる組成物を凍結する、第二のステップ
を含む、方法を提供する。
本発明による組成物は、治療活性剤のナノまたはマイクロ粒子製剤を含む。様々な治療活性剤は、このような粒子製剤に適していると知られている。この文脈では、治療的活性への言及は、疾患または障害を処置するために患者に投与される薬剤、ならびに、疾患または障害が患者に影響を及ぼすのを防ぐために投与される薬剤を含む。
本発明による組成物(すなわち、懸濁組成物および固体組成物)は、治療活性剤のナノまたはマイクロ粒子製剤を含む。当業者に理解されるであろう通り、「または(or)」は、別段の具体的な指示がない限り、非排他的に本文脈において使用される。ゆえに、ナノまたはマイクロ粒子製剤への言及は、治療活性剤を含むナノ粒子を含有する製剤、治療活性剤を含むマイクロ粒子を含有する製剤、ならびに、治療活性剤を含むナノ粒子およびマイクロ粒子の両方を含有する製剤を包含する。便宜上、「ナノまたはマイクロ粒子製剤」は、本明細書での発明の議論において、「粒子製剤」または「粒子状製剤」と省略することができる。同様に、ナノまたはマイクロ粒子とは、「粒子」を指すことができる。
aは、1であり、bは、2~4の整数であるか、または、aは、2~4の整数であり、bは、1であり、
pは、1または2であり、
mは、1または2であり、nは、0または1であり、かつ、m+nは、2以上であり、
R2~R5は、互いに独立して、水素、-CH2-CH(OH)-R7基、-CH(R7)-CH2-OH基、-CH2-CH2-(C=O)-O-R7基、-CH2-CH2-(C=O)-NH-R7基、または-CH2-R7基(式中、R7は、1つのC-C二重結合を有するC3~C18アルキルまたはC3~C18アルケニルから選択される)、アミノ基に対する保護基、ならびにポリ(エチレングリコール)鎖から選択され、
R6は、水素、-CH2-CH(OH)-R7基、-CH(R7)-CH-OH基、-CH2-CH2-(C=O)-O-R7基、-CH2-CH2-(C=O)-NH-R7基、または-CH2-R7基(式中、R7は、1つのC-C二重結合を有するC3~C18アルキルまたはC3~C18アルケニルから選択される)、アミノ基に対する保護基、-C(NH)-NH2、ポリ(エチレングリコール)鎖、ならびに受容体リガンドから選択され、
式(II)で示される窒素原子の1つまたは複数は、プロトン化して、式(II)のカチオン性基をもたらすことができる)。
aは、1であり、bは、2~4の整数であるか、または、aは、2~4の整数であり、bは、1であり、
pは、1または2であり、
mは、1または2であり、nは、0または1であり、かつ、m+nは、2以上であり、
R2~R5は、互いに独立して、水素、-CH2-CH(OH)-R7基、-CH(R7)-CH2-OH基、-CH2-CH2-(C=O)-O-R7基、または-CH2-CH2-(C=O)-NH-R7基、または-CH2-R7基(式中、R7は、1つのC-C二重結合を有するC3~C18アルキルまたはC3~C18アルケニルから選択される)、アミノ基に対する保護基、-C(NH)-NH2、ならびにポリ(エチレングリコール)鎖から選択され、
式(III)で示される窒素原子の1つまたは複数は、プロトン化して、式(III)のカチオン性基をもたらすことができる)。
aは、1であり、bは、2~4の整数であるか、または、aは、2~4の整数であり、bは、1であり、
pは、1または2であり、
mは、1または2であり、nは、0または1であり、かつ、m+nは、2以上であり、
R1~R6は、互いに独立して、水素、-CH2-CH(OH)-R7基、-CH(R7)-CH2-OH基、-CH2-CH2-(C=O)-O-R7基、-CH2-CH2-(C=O)-NH-R7基、または-CH2-R7基(式中、R7は、1つのC-C二重結合を有するC3~C18アルキルまたはC3~C18アルケニルから選択される)、アミノ基に対する保護基、-C(NH)-NH2、ポリ(エチレングリコール)鎖、および受容体リガンドから選択されるが、ただし、R1~R6の少なくとも2つの残基は、-CH2-CH(OH)-R7基、-CH(R7)-CH2-OH基、-CH2-CH2-(C=O)-O-R7基、-CH2-CH2-(C=O)-NH-R7基、または-CH2-R7基(式中、R7は、1つのC-C二重結合を有するC3~C18アルキルまたはC3~C18アルケニルから選択される)であり、
式(IV)で示される窒素原子の1つまたは複数は、プロトン化して、式(IV)のカチオン性リピドイドをもたらすことができる)。
ナノまたはマイクロ粒子製剤に加える追加成分として、本発明による組成物は、1つまたは2つのヒドロキシ基で置換されたC3~C5アルカンから選択される、凍結保護添加剤を含む。当業者に理解されるであろう通り、これらの置換されたアルカンは、直鎖または分岐アルカンであり得る。これらは、3~5個の炭素原子を有する。ヒドロキシ置換基の数によって、モノもしくはジアルコール、または、アルカノールもしくはアルカンジオールと称すことができる。
上記の通り、本発明は、第一の態様として、懸濁組成物を、第二の態様として、固体組成物を提供し、各々は、上記でさらに詳述している、治療活性剤のナノまたはマイクロ粒子製剤、および凍結保護添加剤を含む。
(i)液相に懸濁されている治療活性剤のナノまたはマイクロ粒子製剤、および
(ii)1つまたは2つのヒドロキシ基で置換されたC3~C5アルカンから選択される、少なくとも1つの凍結保護添加剤
を含む。
(i)治療活性剤のナノまたはマイクロ粒子製剤、および
(ii)1つまたは2つのヒドロキシ基で置換されたC3~C5アルカンから選択される、少なくとも1つの凍結保護添加剤
を含み、
第一の態様による組成物を凍結することにより得られる。
本発明の第一の態様による懸濁組成物は、対象に、そこに含有される治療活性剤を投与するのに適している。上記で説明した通り、組成物は、他の凍結保護剤を含有する粒子組成物と比較して、凍結の間または凍結後の粒子の凝集を防ぎ、気道へ、または気道を介する投与、特に、経肺投与または経鼻投与に対する機能性を維持しながら、凍結状態を維持することができるという予想外の利点を有する。したがって、懸濁組成物の投与の好ましい経路は、気道へ、または気道を介する投与、特に、経肺投与または経鼻投与である。
本発明のさらなる態様は、上記の第一の態様による組成物の調製のための方法であって、
a)液相に懸濁されている治療活性剤のナノまたはマイクロ粒子製剤を生成すること、および
b)1つまたは2つのヒドロキシ基で置換されたC3~C5アルカンから選択される、少なくとも1つの凍結保護添加剤を液相に添加すること
を含み、凍結保護添加剤の液相への添加が、液相に懸濁されている粒子製剤を生成する前、生成する間、または生成した後に達成することができる、
方法に関する。
a)液相に懸濁されている治療活性剤のナノまたはマイクロ粒子製剤を生成すること、および
b)1つまたは2つのヒドロキシ基で置換されたC3~C5アルカンから選択される、少なくとも1つの凍結保護添加剤を液相に添加すること
を含み、凍結保護添加剤の液相への添加が、液相に懸濁されている粒子製剤を生成する前、生成する間、または生成した後に達成することができる、
方法により、上記の第一の態様による組成物を調製する、第一のステップ、
ならびに、第一のステップで得られる組成物を凍結する、第二のステップ
を含む、方法により調製することができる。
a)液相に懸濁されている治療活性剤のナノまたはマイクロ粒子製剤を生成すること、および
b)1つまたは2つのヒドロキシ基で置換されたC3~C5アルカンから選択される、少なくとも1つの凍結保護添加剤を液相に添加すること
を含み、凍結保護添加剤の液相への添加が、液相に懸濁されている粒子製剤を生成する前、生成する間、または生成した後に達成することができる、
方法により、上記の第一の態様による組成物を調製する、第一のステップ、
第一のステップで得られる組成物を凍結する、第二のステップ
ならびに、第二のステップで得られる凍結した組成物を解凍する、第三のステップ
を含む、方法を提供する。
さらに、本発明は、治療活性剤のナノまたはマイクロ粒子製剤を保存する方法であって、本発明の上記の第一の態様による組成物、すなわち、
(i)液相に懸濁されている治療活性剤のナノまたはマイクロ粒子製剤、および
(ii)1つまたは2つのヒドロキシ基で置換されたC3~C5アルカンから選択される、少なくとも1つの凍結保護添加剤
を含む、組成物を生成すること、
ならびに、組成物を凍結すること
を含む、方法を提供する。
(ii)1つまたは2つのヒドロキシ基で置換されたC3~C5アルカンから選択される、少なくとも1つの凍結保護添加剤
を含む、組成物。
繰返し単位(1)、(2)、(3)、および/または(4)の窒素原子の1つまたは複数が、プロトン化して、ポリマーのカチオン性電荷をもたらすことができる、
項目10または11に記載の組成物。
(ii)1つまたは2つのヒドロキシ基で置換されたC3~C5アルカンから選択される、少なくとも1つの凍結保護添加剤
を含み、項目1から22のいずれか一項に記載の組成物を凍結することにより得られる、固体組成物。
a)液相に懸濁されている治療活性剤のナノまたはマイクロ粒子製剤を生成すること、および
b)1つまたは2つのヒドロキシ基で置換されたC3~C5アルカンから選択される、少なくとも1つの凍結保護添加剤を液相に添加すること
を含み、凍結保護添加剤の液相への添加が、液相に懸濁されている粒子製剤を生成する前、生成する間、または生成した後に達成することができる、
方法。
a)液相に懸濁されている治療活性剤のナノまたはマイクロ粒子製剤を生成すること、および
b)1つまたは2つのヒドロキシ基で置換されたC3~C5アルカンから選択される、少なくとも1つの凍結保護添加剤を液相に添加すること
を含み、凍結保護添加剤の液相への添加が、液相に懸濁されている粒子製剤を生成する前、生成する間、または生成した後に達成することができる、
方法により、上記の第一の態様による組成物を調製する、第一のステップ、
ならびに、第一のステップで得られる組成物を凍結する、第二のステップ
を含む、方法。
ナノまたはマイクロ粒子製剤のための凍結保護添加剤としての、異なるクラスの分子のスクリーニング。
複合体形成
分岐ポリ(エチレンイミン)(brPEI)とルシフェラーゼをコードするmRNAとの複合体を、0.25mg/mLの最終濃度で形成した。標準的な混合法で、mRNAを水で希釈して、0.5mg/mLの濃度にした。同じ体積のbrPEI溶液を、水中で0.65mg/mLの濃度で調製した。ナノまたはマイクロ粒子を、電子式ピペット(Mettler-Toledo、E4 LTS 1000μL)を使用して、mRNA溶液をbrPEI溶液に注入し、続いて混合することにより形成した。混合後、複合体を、使用前に氷上で20分間インキュベートした。
粒径を決定するために、100μLの粒子の懸濁液を、キュベット(Brand、UV-cuvette Micro)に充填し、Malvern ZetaSizer Nano ZS(Malvern Instruments)を使用して測定し、nm単位で、流体力学的直径および平均流体力学的直径(z平均)を得た。懸濁媒体として、示した通り、水、または凍結保護添加剤を含有する水を使用した。
製剤を、2×(20/10/2%)添加剤溶液(表1)で1:2希釈し、二重に分割した。得られた各製剤の1つのサンプルを、添加剤の存在下で、サイズ決定(Malvern Zetasizer NanoZS)のために使用した。残りのサンプルを-20℃で16時間凍結し、室温で解凍し、溶液が室温に達する前に直ちに氷上で保管した。解凍した各製剤を、次いで、サイズ決定(Malvern Zetasizer NanoZS)のために使用し、以下の等式にしたがって、凍結前と解凍後の製剤の%サイズずれについて比較した。dhは、z平均粒径を示す。
A549細胞を、10%のウシ胎児血清(FBS)および1%のペニシリン/ストレプトマイシン(P/S)を添加したMEM培地で、37℃、5%のCO2で培養した。細胞を、トランスフェクションの24時間前に、96ウェルプレートでの100μL培地に、20000細胞/ウェルで播種した。トランスフェクションの日に、培地を、FBSおよびペニシリン/ストレプトマイシンを含まないMEMで置き換え、続いて、二重に、60μL/ウェルに複合化したmRNAを添加した。トランスフェクションの4時間後、培地を、10%のFBSおよび1%のP/Sを伴うMEMで置き換えた。プレートを、37℃、5%のCO2で24時間インキュベートした。インキュベートの24時間後、培地を除去し、細胞を、100μLの溶解緩衝液(25mMのトリスHCl、0.1%のTritonX-100、pH7.8)に溶解し、600rpmで30分間、プレート振とう機でインキュベートした。次に、各ウェルから50μLの細胞溶解物を、96ウェルプレートに移し、リポーターホタルルシフェラーゼの活性を、ルシフェリン緩衝液(0.47mMのD-ルシフェリン、0.27mMの補酵素A、3.33mMのDTT、0.53mMのATP、1.1mMのMgCO3、2.7mMのMgSO4、20mMのトリシン、0.1mMのEDTA)の添加後、Tecan Infinite 200 PROでの生物発光強度により測定した。
複合体を、以下の変更を加えた上で、「複合体形成」および「凍結-解凍チャレンジ」に記載の通りに調製した。4mLの複合体溶液を、0.5mg/mLのmRNA濃度で調製し、二倍濃縮した添加剤溶液で1:2希釈して、0.25mg/mLの最終mRNA濃度を得た(8mL)。サンプルを、動物への噴霧まで凍結したままにした。
動物を、Buxco Small Size Mass Dosing Chamber(Data Sciences International、Germany)に設置した。製剤を、室温で解凍し、室温に達する前に砕氷上に置き、次いで、空気循環速度3L/分、デューティーサイクル100%で、Aeroneb Solo Nebulizer(Aeroneb、Germany)を使用して噴霧した。
適用の24時間後、動物を、フェンタニル/ミダゾラム/メデトミジン(0.05/5.0/0.5mg/kg BW)の腹腔内注射を通して、十分な麻酔下に置いた。50μLのD-ルシフェリン(リン酸緩衝化生理食塩水中に溶解して30mg/mL、pH7)を、吸引経路(鼻孔に直接適用した後の溶液の吸入)を介して適用し、100μLのD-ルシフェリンを、腹腔内注射により全身に適用した。ルシフェリン投与の10分後、マウスを、頸椎脱臼により安楽死させた。右心を介したPBSでの潅流後、肺を外植した。生物発光を、ビンニング設定を8にし、曝露時間5分で、Xenogen IVIS Luminar XR(Caliper LifeSciences)を使用して測定した。生物発光を定量化し、Living Image Software4.4(Xenogen)を使用して分析した。過飽和した画像(線形範囲外の発現の検出)の場合、曝露時間を1分に減らした。生物発光を、器官当たりの全光束(光子/秒)として測定した。過飽和の見られない画像のみを、分析に使用した。肺を、急速に凍結し、-80℃で保管した。
解凍した器官を秤量し、外植した肺の片方を、FastPrep°-24Homogenisator(MP Biomedicals)を使用して、溶解緩衝液でホモジナイズした。100μLのルシフェリン緩衝液を、75μLの遠心分離した溶解物に、Lumat LB 9507 Luminometer(Berthold Technologies)により自動的に添加した。ルシフェラーゼ活性を、RLU/秒で測定し、RLU/器官に変換した。
1回の凍結-解凍サイクル後のポリマー/mRNA製剤の粒子凝集を防ぐ能力を、当該技術分野で、凍結保護添加剤として確立した化合物を含む、様々な種類の添加剤に対して示した。1,2-プロパンジオールを使用する組成物は、本発明による組成物であり、他の組成物は、参考組成物である。流体力学的粒径は、凍結前に評価した。-20℃で16時間後、製剤を解凍し、流体力学的粒径を再び測定した。凍結前、および解凍後の粒子間のサイズ差は、表1bに表示する。高い数値は、サイズの大幅な増加を示し、それゆえ、凝集を示す。
1,2-プロパンジオール(プロピレングリコール、PG)は、粒子凝集を防ぐ添加剤として同定されており、新規に製剤化されたbrPEI/mRNAナノまたはマイクロ粒子と比較して、1回の凍結-解凍サイクルに続く、インビボでの噴霧後の製剤のトランスフェクション効率を維持する。
ナノまたはマイクロ粒子に対する凍結保護剤として、1,2-プロパンジオールに構造的に関連する、異なる添加剤の比較。
複合体形成
分岐ポリ(エチレンイミン)(brPEI)とルシフェラーゼをコードするmRNAとの複合体を、0.25mg/mLの最終濃度で形成した。標準的な混合法で、mRNAを水で希釈して、0.5mg/mLの濃度にした。同じ体積のbrPEI溶液を、水中で0.65mg/mLの濃度で調製した。ナノ粒子を、電子式ピペット(Mettler-Toledo、E4 LTS 1000μL)を使用して、mRNA溶液をbrPEI溶液に注入し、続いて混合することにより形成した。混合後、複合体を、使用前に氷上で20分間インキュベートした。
粒径を決定するために、100μLの粒子の懸濁液を、キュベット(Brand、UV-cuvette Micro)に充填し、Malvern ZetaSizer Nano ZS(Malvern Instruments)を使用して測定し、nm単位で、流体力学的直径および平均流体力学的直径(z平均)を得た。懸濁媒体として、示した通り、水、または凍結保護添加剤を含有する水を使用した。
製剤を、2×(20/10/2%)添加剤溶液(表6)で1:2希釈し、二重に分割した。いくつかの添加剤の溶解度が限られていたので、以下の物質を、低下させた濃度で試験した(表6を参照のこと):2-メチル-1,4-ブタンジオール、ペンタエリスリトール。得られた各製剤の1つのサンプルを、添加剤の存在下で、サイズ決定(Malvern Zetasizer NanoZS)のために使用した。残りのサンプルを-20℃で16時間凍結し、室温で解凍し、溶液が室温に達する前に直ちに氷上で保管した。解凍した各製剤の1つのサンプルを、次いで、サイズ決定(Malvern Zetasizer NanoZS)のために使用し、以下の等式にしたがって、凍結前と解凍後の製剤の%サイズずれについて比較した。dhは、z平均粒径を示す。
複合体を、以下の変更を加えた上で、「複合体形成」および「凍結-解凍チャレンジ」に記載の通りに調製した。4mLの複合体溶液を、0.5mg/mLの濃度で調製し、二倍濃縮した添加剤溶液で1:2希釈して、0.25mg/mLの最終mRNA濃度を得た(8mL)。サンプルを、動物への噴霧まで凍結したままにした。
動物を、Buxco Small Size Mass Dosing Chamber(Data Sciences International、Germany)に設置した。製剤を、室温で解凍し、室温に達する前に砕氷上に置き、次いで、空気循環速度3L/分、デューティーサイクル100%で、Aeroneb Solo Nebulizer(Aeroneb、Germany)を使用して噴霧した。
適用の24時間後、動物を、フェンタニル/ミダゾラム/メデトミジン(0.05/5.0/0.5mg/kg BW)の腹腔内注射を通して、十分な麻酔下に置いた。50μLのD-ルシフェリン(リン酸緩衝化生理食塩水中に溶解して30mg/mL、pH7)を、吸引経路(鼻孔に直接適用した後の溶液の吸入)を介して適用し、100μLのD-ルシフェリンを、腹腔内注射により全身に適用した。ルシフェリン投与の10分後、マウスを、頸椎脱臼により安楽死させた。右心を介したPBSでの潅流後、肺を外植した。生物発光を、ビンニング設定を8にし、曝露時間5分で、Xenogen IVIS Luminar XR(Caliper LifeSciences)を使用して測定した。生物発光を定量化し、Living Image Software4.4(Xenogen)を使用して分析した。過飽和した画像(線形範囲外の発現の検出)の場合、曝露時間を1分に減らした。生物発光を、器官当たりの全光束(光子/秒で)として測定した。過飽和の見られない画像のみを、分析に使用した。肺を、急速に凍結し、-80℃で保管した。
器官を秤量し、外植した肺の片方を、FastPrep°-24Homogenisator(MP Biomedicals)を使用して、溶解緩衝液でホモジナイズした。100μLのルシフェリン緩衝液を、75μLの遠心分離した溶解物に、Lumat LB 9507 Luminometer(Berthold Technologies)により自動的に添加した。ルシフェラーゼ活性を、RLU/秒で測定し、RLU/器官に変換した。
実施例Iは、1,2-プロパンジオールが、インビボでの活性を維持しながら、凍結中のナノまたはマイクロ粒子凝集を防ぐのに対して、グリセロール(化学的類似性を有する分子)は、インビボでの活性を維持せずに、凍結中の凝集を防ぐことを示す。この試験の結果は、1,2-プロパンジオールと構造的に関連するC3~C5アルカノールおよびアルカンジオールが、1回の凍結-解凍チャレンジの間の凝集を防ぐことができ、続く噴霧後のトランスフェクション効率を維持することができることを示す。複合体を形成し、添加剤溶液(水中)で混合して、表6に列挙している最終添加剤濃度を得た。
この研究では、1,2-プロパンジオールと構造的に関連するアルカノール/アルカンジオールが、1回の凍結-解凍サイクル後、マウス肺への噴霧の後の複合体のトランスフェクション効率を維持する能力を有することが実証されている。粒子の凝集または障害が、非機能性製剤をもたらすので、最初に、生物物理学的特性を、凍結前、および1回の凍結-解凍サイクル後に分析した。実施例Iからの知見が、1,2-プロパンジオールおよびグリセロールが粒子サイズを保存するので、再現され得た。先の研究ですでに実証されているように、粒子サイズの保存により、マウスへの噴霧の後に、機能性粒子は自動的に得られなかった。
様々なmRNA濃度、および/または様々なN/P比での凍結製剤。
複合体形成
分岐(ポリエチレンイミン)(brPEI)、P7(直鎖(ポリエチレンイミン-co-プロピレンイミン)、MW:20kDa)、またはP12(直鎖(ポリエチレンイミン-co-プロピレンイミン)、MW:24kDa)と、ルシフェラーゼをコードするmRNAとの複合体を、0.25mg/mLの濃度で形成した。標準的な混合法で、mRNAを希釈して、水中で0.5mg/mLの濃度にした。同じ体積のポリマー溶液を、水中で0.65mg/mLの濃度で調製した。ナノ粒子を製剤化するために、電子式ピペット(Mettler-Toledo、E4 LTS 1000μL)を使用して、mRNA溶液をbrPEI溶液に注入し、続いて混合した。混合後、複合体を、使用前に氷上で20分間インキュベートした。
使用前に、Amicon(登録商標)Ultra-15遠心ろ過ユニット(Merck Millipore、PLHK Ultracel-PL膜、100kDa分画分子量)の膜を、15mLの水(500×g)で洗浄した。次いで、ポリプレックス製剤を、ろ過ユニットに移し、500×g、4℃で遠心分離した。5分間隔で、過濃縮を避けるために流体レベルを確認し、溶液を1mLのピペットで完全に混合した。各間隔で、サンプル濃度を、核酸濃度の分光光度的評価によりモニタリングした(A260)。この方法を、所望の濃度に達するまで繰り返した。
粒径を決定するために、200μLの粒子の懸濁液を、キュベット(Brand、UV-cuvette Micro)に充填し、Malvern ZetaSizer Nano ZS(Malvern Instruments)を使用して測定し、nm単位で、流体力学的直径および平均流体力学的直径(z平均)を得た。懸濁媒体として、示した通り、水、または凍結保護添加剤を含有する水を使用した。
ポリプレックスサイズの最初の決定(Malvern Zetasizer NanoZS)の後、製剤を、96ウェル薄型PCRプレート(透明、RNAseおよびDNaseを含まない)に分散させ、2×(20/10/2%)添加剤溶液(表1)で1:2希釈した。得られた各製剤の1つのサンプルを、サイズ決定(Malvern Zetasizer NanoZS)のために使用した。残りのサンプルを-20℃で約16時間凍結し、室温で解凍し、溶液が室温に達する前に直ちに氷上で保管した。解凍した各製剤の1つのサンプルを、次いで、サイズ決定(Malvern Zetasizer NanoZS)のために使用し、以下の等式にしたがって、凍結前と解凍後の製剤の%サイズずれについて比較した。dhは、z平均粒径を示す。
ナノまたはマイクロ粒子用の凍結保護剤として作用する、請求に係るクラスの同定された分子の能力もまた、高いmRNA濃度および/または低いN/P比で、この実験において示された。この目的のため、1,2-プロパンジオールを、代表的な添加剤として選んだ。表8は、異なるmRNA濃度(0.25、1.1または2.3mg/mL)および異なるN/P比(N/P4または10)で凍結した複合体の凍結前対解凍後の%粒子サイズずれを示す。利用したmRNA/ポリマー/1,2-プロパンジオールの重量比は、表9で報告されている。
実施例IIIは、粒子サイズが、凍結の間、mRNA比ならびにmRNA濃度に対して、ポリマーから独立して維持することができることを実証する。
異なるポリカチオン(混合前に添加)に対する同定された添加剤の凍結保護的性質
複合体形成
3つの異なるポリマー構造体:分岐ポリ(エチレンイミン)(brPEI、25kDa)、直鎖ポリ(エチレンイミン-プロピレンイミン)(P7、20kDa)、または直鎖ポリ(エチレンイミン-プロピレンイミン)(P12、24kDa)を使用して、カチオン性ポリマーとルシフェラーゼをコードするmRNAとの複合体を形成した。
乾燥2-エチル-2-オキサゾリンと乾燥2-エチル-2-オキサジンとの混合物を、アセトニトリル中でトリフル酸メチルと組み合わせた。130℃、窒素雰囲気下で30時間、重合を行った。重合を、水を加えて停止し、130℃で3時間、インキュベートした。ポリマーは、冷たいジエチルエーテル中、3回の沈殿ステップにより得た。加水分解のために、ポリマーを、濃塩酸に溶解し、130℃で30時間、インキュベートした。ポリマー溶液のpHを、NaOHでpH10に調節した。精製を脱イオン水に対する透析を介して行い、続いて凍結乾燥を行った。2-エチル-2-オキサゾリンの2-エチル-2-オキサジンに対する比の変更により、得られるエチレンイミン(C2)対プロピレンイミン(C3)の比を、ポリマー内で変更することができる。トリフル酸メチルの使用量と共に、分子量を制御することができる。
粒径を決定するために、100μLの粒子の懸濁液を、キュベット(Brand、UV-cuvette Micro)に充填し、Malvern ZetaSizer Nano ZS(Malvern Instruments)を使用して測定し、nm単位で、流体力学的直径および平均流体力学的直径(z平均)を得た。懸濁媒体として、示した通り、水、または凍結保護添加剤を含有する水を使用した。
得られた各製剤の1つのサンプルを、サイズ決定(Malvern Zetasizer NanoZS)のために使用した。残りのサンプルを-20℃で16時間凍結し、室温で解凍し、溶液が室温に達する前に直ちに氷上で保管した。解凍した各製剤の1つのサンプルを、次いで、サイズ決定(Malvern Zetasizer NanoZS)のために使用し、以下の等式にしたがって、凍結前と解凍後の製剤の%サイズずれについて比較した。
複合体を、N/P4、8mLの体積で、「複合体形成」および「凍結-解凍チャレンジ」に記載の通りに調製した。サンプルを、動物への噴霧まで凍結したままにした。
動物を、Buxco Small Size Mass Dosing Chamber(Data Sciences International、Germany)に設置した。製剤を、室温で解凍し、室温に達する前に砕氷上に置き、次いで、空気循環速度3L/分、デューティーサイクル100%で、Aeroneb Solo Nebulizer(Aeroneb、Germany)を使用して噴霧した。
適用の24時間後、動物を、フェンタニル/ミダゾラム/メデトミジン(0.05/5.0/0.5mg/kg BW)の腹腔内注射を通して、十分な麻酔下に置いた。50μLのD-ルシフェリン(リン酸緩衝化生理食塩水中に溶解して30mg/mL、pH7)を、吸引経路(鼻孔に直接適用した後の溶液の吸入)を介して適用し、100μLのD-ルシフェリンを、腹腔内注射により全身に適用した。ルシフェリン投与の10分後、マウスを、頸椎脱臼により安楽死させた。右心を介したPBSでの潅流後、肺を外植した。生物発光を、ビンニング設定を8にし、曝露時間5分で、Xenogen IVIS Luminar XR(Caliper LifeSciences)を使用して測定した。生物発光を定量化し、Living Image Software4.4(Xenogen)を使用して分析した。過飽和した画像(線形範囲外の発現の検出)の場合、曝露時間を1分に減らした。生物発光を、器官当たりの全光束(光子/秒で)として測定した。過飽和の見られない画像のみを、分析に使用した。肺を、急速に凍結し、-80℃で保管した。
器官を秤量し、外植した肺の片方を、FastPrep°-24Homogenisator(MP Biomedicals)を使用して、溶解緩衝液でホモジナイズした。100μLのルシフェリン緩衝液を、75μLの遠心分離した溶解物に、Lumat LB 9507 Luminometer(Berthold Technologies)により自動的に添加した。ルシフェラーゼ活性を、RLU/秒で測定し、RLU/器官に変換した。
実施例I~IIIは、分岐ポリ(エチレンイミン)で形成される粒子のみの異なる条件において、インビボでの効率を維持しながら、凝集を防ぐことに対する添加剤の効率を実証する。これら添加剤の機能性が、ポリマー特性から独立していることを実証するために、異なる種類のポリマーを試験した。1,2-プロパンジオールを、例示的な添加剤として選んだ。ポリマーは、分岐の種類(分岐および直鎖)、分子量(20kDa、24kDa、および25kDa)、モノマー組成(ポリ(エチレンイミン)、およびポリ(エチレンイミン-プロピレンイミン))、ならびにN/P比(4、6、および10)において変化した。選ばれたポリマーは、噴霧後の機能性がすでに証明されている。2つの異なる添加剤濃度に対して、凍結前と解凍後の粒子の%サイズずれの結果を、表10におけるサイズずれとして示す。N/P比(N/P4)もまた、インビボでの機能性に対して試験した。効率データの概要は、図4ならびに表13で得られる。利用したmRNA/ポリマー/1,2-プロパンジオールの重量比は、表12および表14bで報告されている。
この実験で示される通り、1,2-プロパンジオールの安定化効果は、ポリマーの分岐の種類、分子量、モノマー組成、ならびにN/P比から独立している。これら全てのパラメータの変化により、1回の凍結-解凍チャレンジの後に、無傷の複合体が得られる。加えて、肺内適用後のこれら複合体の機能性は、インビボでの実験で実証された。リポータータンパク質の発現レベルについて、5%または10%の1,2-プロパンジオール中で凍結した同じ複合体と比較して、新規の複合体では、著しい差は検出されなかった。分岐ポリ(エチレンイミン)対ポリ(エチレンイミン-プロピレンイミン)の効率の一般的な差は、国際公開第2013182683号パンフレットの記述と完全に一致している。加えて、この実験では、添加剤の添加の時点が、その機能性に影響を及ぼさないことが確認された。添加剤を、この実験において、実験IおよびIIでの複合化後にナノ粒子に添加しながら、1,2-プロパンジオールを、mRNA溶液で混合する前にポリマー溶液に添加した。
凍結した複合体の安定性
複合体形成
分岐(ポリエチレンイミン)(brPEI)とルシフェラーゼをコードするmRNAとの複合体を、0.25mg/mlの濃度で形成した。標準的な混合法で、mRNAを水中で希釈して、0.5mg/mLの濃度にした。同じ体積のbrPEI溶液を、水または10%の1,2-プロパンジオールのいずれかの中で、0.65mg/mLの濃度で調製した。ナノ粒子を製剤化するために、電子式ピペット(Mettler-Toledo、E4 LTS 1000μL)を使用して、mRNA溶液をbrPEI溶液に注入し、続いて混合した。混合後、複合体を、使用前に氷上で20分間インキュベートした。
ポリプレックスサイズの最初の決定(Malvern Zetasizer NanoZS)の後、100μLの3通りの各製剤を、-20℃で示した時間、凍結させて保管し、室温で解凍し、溶液が室温に達する前に直ちに氷上で保管した。解凍した各製剤の1つのサンプルを、次いで、サイズ決定(Malvern Zetasizer NanoZS)のために使用し、以下の等式にしたがって、凍結前と解凍後の製剤の%サイズずれについて比較した。dhは、z平均粒径を示す。
ナノ粒子製剤を水中で希釈して、0.2mg/mLのmRNAにした。5μLのこの希釈液を、3μLの40mg/mLのヘパリン、2μLの2%v/vのTritonX-100、および10μLのホルムアミドで処置した。混合物を、完全に粒子崩壊するために70℃で15分間インキュベートし、次いで、砕氷上で保持した。核酸断片の分析を、次いで、キャピラリー電気泳動(Advanced Analytical Fragment Analyzer、PROSize2.0)で行った。処置した製剤(mRNA処置)からの全長mRNAに対するシグナルを、参照として製剤で使用された、同じロットの新規で複合化していないmRNA(mRNA参考)のシグナルと比較し、以下の式にしたがって、mRNA完全性[%]として表した。
mRNAに基づくナノまたはマイクロ粒子の重要なパラメータは、複合体におけるmRNA安定性である。表15に示す通り、25℃で複合体を保管することにより、複合化したmRNAの急速な分解をもたらす。この実験では、複合化したRNAの安定性への、複合体を凍結する能力の影響を試験した。第一のセットでは、複合体を、RNAで形成し、良好な性能の添加剤の群の例示的な候補としての1,2-プロパンジオールの添加後に凍結した。複合体中のmRNAの完全性(全長mRNAの量)を試験した後、凍結し、-20℃で1週間保管した。新規で複合化していないmRNAを測定し、参考として100%に設定した。結果は、表16に概説する。
記載した実験は、長期間の保管に対するナノまたはマイクロ粒子を凍結する能力の強力な利点を示す。室温で保管した複合体が、数時間以内にmRNAの分解プロセスをもたらすと同時に、凍結状態で保管した複合体により、少なくとも8週間、完全に保存したmRNAをもたらす。
脂質に基づく製剤用の凍結保護剤としての1,2-プロパンジオール
複合体形成
脂質成分(カチオン性リピドイド、ヘルパー脂質コレステロール、およびPEG脂質)を可溶化し、イソプロパノールに混合し、1:4の体積比でクエン酸緩衝液(10mMのクエン酸、150mMのNaCl、pH4.5)中のmRNA溶液に注入し、0.2mg/mLのmRNA濃度をもたらした。複合体を、室温で20分間インキュベートした。インキュベート後、溶液を、16時間、水に対して透析した。透析後のmRNAの濃度は、0.13mg/mLであった。mRNAの濃度が0.2または0.5mg/mLに達するために、粒子を、45℃で、SpeedVac(Concentrator Plus、Eppendorf)において濃縮した。
粒径を決定するために、200μLの粒子の懸濁液を、キュベット(Brand、UV-cuvette Micro)に充填し、Malvern ZetaSizer Nano ZS(Malvern Instruments)を使用して測定し、nm単位で、流体力学的直径および平均流体力学的直径(z平均)を得た。懸濁媒体として、示した通り、水、または凍結保護添加剤を含有する水を使用した。
製剤を、2×(20または10%)1,2-プロパンジオール溶液で1:2希釈し、異なるサンプルに分割した。得られた各製剤の1つのサンプルを、添加剤の存在下で、サイズ決定(Malvern Zetasizer NanoZS)のために使用した。残りのサンプルを-20℃で16時間凍結し、室温で解凍し、溶液が室温に達する前に直ちに氷上で保管した。解凍した各製剤の1つのサンプルを、次いで、サイズ決定(Malvern Zetasizer NanoZS)のために使用し、以下の等式にしたがって、凍結前と解凍後の製剤の%サイズずれについて比較した。dhは、z平均粒径を示す。
50μLの複合体溶液を、イソフルラン吸入麻酔下で、MicroSprayer 1Aデバイス(PennCentury、USA)を使用して気管内に適用した。
適用の24時間後、動物を、フェンタニル/ミダゾラム/メデトミジン(0.05/5.0/0.5mg/kg BW)の腹腔内注射を通して、十分な麻酔下に置いた。50μLのD-ルシフェリン(リン酸緩衝化生理食塩水中に溶解して30mg/mL、pH7)を、吸引経路(鼻孔に直接適用した後の溶液の吸入)を介して適用し、100μLのD-ルシフェリンを、腹腔内注射により全身に適用した。ルシフェリン投与の10分後、マウスを、頸椎脱臼により安楽死させた。右心を介したPBSでの潅流後、肺を外植した。生物発光を、ビンニング設定を8にし、曝露時間5分で、Xenogen IVIS Luminar XR(Caliper LifeSciences)を使用して測定した。生物発光を定量化し、Living Image Software4.4(Xenogen)を使用して分析した。過飽和した画像(線形範囲外の発現の検出)の場合、曝露時間を1分に減らした。生物発光を、器官当たりの全光束(光子/秒で)として測定した。過飽和の見られない画像のみを、分析に使用した。肺を、急速に凍結し、-80℃で保管した。
解凍した器官を秤量し、外植した肺の片方を、FastPrep°-24Homogenisator(MP Biomedicals)を使用して、溶解緩衝液でホモジナイズした。100μLのルシフェリン緩衝液を、75μLの遠心分離した溶解物に、Lumat LB 9507 Luminometer(Berthold Technologies)により自動的に添加した。ルシフェラーゼ活性を、RLU/秒で測定し、RLU/器官に変換した。
この実施例では、脂質に基づく複合体用の凍結保護剤として、本明細書で定義された添加剤の適性が実証された。第一のステップでは、ナノ粒子を形成し、添加剤の存在または非存在下で、1回の凍結-解凍サイクルを行った。サイズを、凍結前、および解凍後に測定した。1,2-プロパンジオールを、物質の群の代表例として選んだ。実験は、異なる複合体濃度(0.2および0.5mg/mL)、ならびに異なる添加剤濃度(5%および10%(w/v))で行った。サイズ差は、表18bに概説する。
この実施例に示されたデータでは、1,2-プロパンジオールが、ポリマーに基づく複
合体だけでなく、凝集を防ぎ、インビボでの活性を保持する脂質に基づく複合体の凍結も
可能にすることが示されている。
本発明の様々な実施形態を以下に示す。
1.(i)液相に懸濁されている治療活性剤のナノまたはマイクロ粒子製剤、および
(ii)1つまたは2つのヒドロキシ基で置換されたC3~C5アルカンから選択される、少なくとも1つの凍結保護添加剤
を含む、組成物。
2.前記治療活性剤が、核酸である、上記1に記載の組成物。
3.前記治療活性剤が、mRNAである、上記2に記載の組成物。
4.前記ナノまたはマイクロ粒子製剤が、1~4000nm、より好ましくは2~2500nm、最も好ましくは5~1000nmの範囲の平均粒径を示す、上記1から3のいずれかに記載の組成物。
5.前記治療活性剤が、核酸であり、前記ナノまたはマイクロ粒子製剤の粒子が、前記核酸およびカチオン性賦形剤を含む、上記2から4のいずれかに記載の組成物。
6.前記粒子製剤の粒子が、核酸と、カチオン性賦形剤としてのカチオン性オリゴマーまたはカチオン性ポリマーとで形成される複合体の形態で核酸を含む、上記5に記載の組成物。
7.前記粒子製剤の粒子が、核酸と、カチオン性賦形剤としてのカチオン性脂質またはカチオン性リピドイドとで形成される複合体の形態で核酸を含む、上記5に記載の組成物。
8.前記凍結保護添加剤が、少なくとも二級ヒドロキシ基を含む、上記1から7のいずれかに記載の組成物。
9.前記凍結保護添加剤が、1,2-プロパンジオール、2-プロパノール、1,2-ブタンジオール、および1,3-ブタンジオールから選択される、上記8に記載の組成物。
10.前記凍結保護添加剤が、1,2-プロパンジオールである、上記9に記載の組成物。
11.前記凍結保護添加剤が、液相の体積を基準として0.5~50%w/vの濃度で含有される、上記1から10のいずれかに記載の組成物。
12.(i)治療活性剤のナノまたはマイクロ粒子製剤、および
(ii)1つまたは2つのヒドロキシ基で置換されたC3~C5アルカンから選択される、少なくとも1つの凍結保護添加剤
を含み、上記1から11のいずれかに記載の組成物を凍結することにより得られる、固体組成物。
13.上記1から11のいずれかに記載の組成物を調製するための方法であって、
a)液相に懸濁されている治療活性剤のナノまたはマイクロ粒子製剤を生成すること、および
b)1つまたは2つのヒドロキシ基で置換されたC3~C5アルカンから選択される、少なくとも1つの凍結保護添加剤を前記液相に添加すること
を含み、前記凍結保護添加剤の前記液相への添加が、前記液相に懸濁されている前記粒子製剤を生成する前、生成する間、または生成した後に達成することができる、
方法。
14.上記12に記載の固体組成物を調製するための方法であって、
a)液相に懸濁されている治療活性剤のナノまたはマイクロ粒子製剤を生成すること、および
b)1つまたは2つのヒドロキシ基で置換されたC3~C5アルカンから選択される、少なくとも1つの凍結保護添加剤を前記液相に添加すること
を含み、前記凍結保護添加剤の前記液相への添加が、前記液相に懸濁されている前記粒子製剤を生成する前、生成する間、または生成した後に達成することができる、
方法により、上記の第一の態様による組成物を調製する、第一のステップ、
ならびに、第一のステップで得られる前記組成物を凍結する、第二のステップ
を含む、方法。
15.治療活性剤のナノまたはマイクロ粒子製剤を保存する方法であって、上記1から11のいずれかに記載の懸濁組成物を生成すること、および前記組成物を凍結することを含む、方法。
16.治療活性剤のナノまたはマイクロ粒子製剤を含む組成物に対する凍結保護添加剤として、1つまたは2つのヒドロキシ基で置換されたC3~C5アルカンから選択される化合物の使用。
17.液体に懸濁されている粒子状組成物からエアゾール剤を形成するための、または、このような組成物を噴霧するためのデバイスであって、上記1から11のいずれかに記載の組成物を含む、デバイス。
18.定量吸入器、ネブライザー、および鼻噴射デバイスから選択される吸入器である、上記17に記載のデバイス。
19.疾患の処置または予防での使用のための、上記1から11のいずれかに記載の組成物であって、気道へ、または気道を介して投与される、組成物。
20.経肺投与を介して、または経鼻投与を介して投与される、上記19に記載の使用のための組成物。
Claims (14)
- 液体に懸濁されている粒子状組成物からエアゾール剤を形成するための、または、このような組成物を噴霧するためのデバイスであって、前記デバイスが、
(i)液相に懸濁されている治療活性剤のナノまたはマイクロ粒子製剤、および
(ii)1つまたは2つのヒドロキシ基で置換されたC3~C5アルカンから選択される、少なくとも1つの凍結保護添加剤
を含む、組成物を含み、
前記治療活性剤が、核酸である、デバイス。 - 前記治療活性剤が、mRNAである、請求項1に記載のデバイス。
- 前記ナノまたはマイクロ粒子製剤が、1~4000nm、より好ましくは2~2500nm、最も好ましくは5~1000nmの範囲の平均粒径を示す、請求項1または2に記載のデバイス。
- 前記ナノまたはマイクロ粒子製剤の粒子が、前記核酸およびカチオン性賦形剤を含む、請求項1から3のいずれか一項に記載のデバイス。
- 前記粒子製剤の粒子が、核酸と、カチオン性賦形剤としてのカチオン性オリゴマーまたはカチオン性ポリマーとで形成される複合体の形態で核酸を含む、請求項4に記載のデバイス。
- 前記粒子製剤の粒子が、核酸と、カチオン性賦形剤としてのカチオン性脂質またはカチオン性リピドイドとで形成される複合体の形態で核酸を含む、請求項4に記載のデバイス。
- 前記凍結保護添加剤が、少なくとも二級ヒドロキシ基を含む、請求項1から6のいずれか一項に記載のデバイス。
- 前記凍結保護添加剤が、1,2-プロパンジオール、2-プロパノール、1,2-ブタンジオール、および1,3-ブタンジオールから選択される、請求項7に記載のデバイス。
- 前記凍結保護添加剤が、1,2-プロパンジオールである、請求項8に記載のデバイス。
- 前記凍結保護添加剤が、液相の体積を基準として0.5~50%w/vの濃度で組成物中に含有される、請求項1から9のいずれか一項に記載のデバイス。
- 定量吸入器、ネブライザー、および鼻噴射デバイスから選択される吸入器である、請求項1から10のいずれか一項に記載のデバイス。
- 請求項1から11のいずれか一項に記載のデバイスから得ることができる、エアロゾル。
- 疾患の処置または予防での使用のための組成物であって、前記組成物が、
(i)液相に懸濁されている治療活性剤のナノまたはマイクロ粒子製剤、および
(ii)1つまたは2つのヒドロキシ基で置換されたC3~C5アルカンから選択される、少なくとも1つの凍結保護添加剤
を含み、
前記治療活性剤が、核酸である、
気道へ、または気道を介して投与される、組成物。 - 経肺投与を介して、または経鼻投与を介して投与される、請求項13に記載の使用のための組成物。
Applications Claiming Priority (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP18169325 | 2018-04-25 | ||
EP18169325.0 | 2018-04-25 | ||
EP18189010.4 | 2018-08-14 | ||
EP18189010 | 2018-08-14 | ||
PCT/EP2019/060646 WO2019207061A1 (en) | 2018-04-25 | 2019-04-25 | Cryoprotective agents for particulate formulations |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2021522248A JP2021522248A (ja) | 2021-08-30 |
JPWO2019207061A5 JPWO2019207061A5 (ja) | 2022-04-28 |
JP7256824B2 true JP7256824B2 (ja) | 2023-04-12 |
Family
ID=66240151
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2020558887A Pending JP2021522228A (ja) | 2018-04-25 | 2019-04-25 | Rnaの送達用の脂質に基づく製剤 |
JP2020559465A Active JP7256824B2 (ja) | 2018-04-25 | 2019-04-25 | 粒子状製剤用の凍結保護剤 |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2020558887A Pending JP2021522228A (ja) | 2018-04-25 | 2019-04-25 | Rnaの送達用の脂質に基づく製剤 |
Country Status (13)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US20210137846A1 (ja) |
EP (3) | EP4311541A3 (ja) |
JP (2) | JP2021522228A (ja) |
KR (2) | KR20210022535A (ja) |
CN (2) | CN112153985B (ja) |
AU (2) | AU2019258678A1 (ja) |
BR (2) | BR112020021054A2 (ja) |
CA (2) | CA3098262A1 (ja) |
ES (2) | ES2960936T3 (ja) |
MX (2) | MX2020011167A (ja) |
PL (1) | PL3784285T3 (ja) |
WO (2) | WO2019207061A1 (ja) |
ZA (1) | ZA202006026B (ja) |
Families Citing this family (21)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
AU2012267578B2 (en) | 2011-06-08 | 2017-04-20 | Translate Bio, Inc. | Cleavable lipids |
BR112013031553A2 (pt) | 2011-06-08 | 2020-11-10 | Shire Human Genetic Therapies, Inc. | composições, mrna que codifica para uma hgla e seu uso, uso de pelo menos uma molécula de mrna e um veículo de transferência e uso de um mrna que codifica para proteína exógena |
JP6283655B2 (ja) | 2012-03-29 | 2018-02-21 | シャイアー ヒューマン ジェネティック セラピーズ インコーポレイテッド | イオン化可能なカチオン性脂質 |
IL305374A (en) | 2013-03-14 | 2023-10-01 | Ethris Gmbh | CFTR mRNA Assemblies and Related Methods and Uses |
ES2708562T3 (es) | 2013-03-14 | 2019-04-10 | Translate Bio Inc | Evaluación cuantitativa de la eficacidad de tapa de ARN mensajero |
KR102096796B1 (ko) | 2013-10-22 | 2020-05-27 | 샤이어 휴먼 지네틱 테라피즈 인크. | 메신저 rna의 전달을 위한 지질 제형 |
EP3587409B8 (en) | 2014-05-30 | 2022-07-13 | Translate Bio, Inc. | Biodegradable lipids for delivery of nucleic acids |
IL310050A (en) | 2016-11-10 | 2024-03-01 | Translate Bio Inc | An improved ICE-based lipid nanoparticle formulation for delivery of mRNA |
MA47605A (fr) | 2017-02-27 | 2020-01-01 | Translate Bio Inc | Procédés de purification d'arn messager |
US11530298B2 (en) | 2017-06-12 | 2022-12-20 | Translate Bio, Inc. | Poly(phosphoesters) for delivery of nucleic acids |
AU2018392716A1 (en) | 2017-12-20 | 2020-06-18 | Translate Bio, Inc. | Improved composition and methods for treatment of ornithine transcarbamylase deficiency |
US20210137846A1 (en) * | 2018-04-25 | 2021-05-13 | Ethris Gmbh | Cryoprotective agents for particulate formulations |
AU2019271215A1 (en) | 2018-05-16 | 2020-12-03 | Translate Bio, Inc. | Ribose cationic lipids |
EP3802558A1 (en) | 2018-05-30 | 2021-04-14 | Translate Bio, Inc. | Cationic lipids comprising a steroidal moiety |
EP3836903B1 (en) * | 2018-08-14 | 2024-05-01 | Ethris GmbH | Lipid-based formulations containing salts for the delivery of rna |
US11174500B2 (en) | 2018-08-24 | 2021-11-16 | Translate Bio, Inc. | Methods for purification of messenger RNA |
US20220087935A1 (en) | 2019-01-07 | 2022-03-24 | Translate Bio, Inc. | Composition and Methods for Treatment of Primary Ciliary Dyskinesia |
MX2021013954A (es) | 2019-05-15 | 2022-03-11 | Translate Bio Inc | Métodos de purificación de arn mensajero. |
EP4048692A2 (en) | 2019-10-24 | 2022-08-31 | NovaGo Therapeutics AG | Novel anti-nogo-a antibodies |
CN115427021A (zh) | 2020-02-25 | 2022-12-02 | 翻译生物公司 | 制备负载mrna的脂质纳米颗粒的改进方法 |
US20230242624A1 (en) | 2020-06-02 | 2023-08-03 | Neurimmune Ag | HUMAN ANTIBODIES AGAINST SEVERE ACUTE RESPIRATORY SYNDROME CORONAVIRUS-2 (SARS-CoV-2) |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2002500203A (ja) | 1998-01-08 | 2002-01-08 | リサーチ ディベロップメント ファンデーション | 噴霧化中の安定化脂質・dna製剤 |
JP2009518306A (ja) | 2005-12-02 | 2009-05-07 | ノバルティス アーゲー | 免疫原性組成物で使用するためのナノ粒子 |
JP2016524898A (ja) | 2013-06-28 | 2016-08-22 | エスリス ゲーエムベーハーethris GmbH | 細胞内へのrna導入用組成物 |
WO2018011406A1 (en) | 2016-07-15 | 2018-01-18 | Biontech Rna Pharmaceuticals Gmbh | Formulation for administration of rna |
Family Cites Families (32)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4711955A (en) | 1981-04-17 | 1987-12-08 | Yale University | Modified nucleotides and methods of preparing and using same |
CA1223831A (en) | 1982-06-23 | 1987-07-07 | Dean Engelhardt | Modified nucleotides, methods of preparing and utilizing and compositions containing the same |
JPS607932A (ja) * | 1983-06-29 | 1985-01-16 | Dai Ichi Seiyaku Co Ltd | リポソーム懸濁液およびその製法 |
US5792608A (en) | 1991-12-12 | 1998-08-11 | Gilead Sciences, Inc. | Nuclease stable and binding competent oligomers and methods for their use |
US5525711A (en) | 1994-05-18 | 1996-06-11 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Pteridine nucleotide analogs as fluorescent DNA probes |
US5840710A (en) | 1994-12-09 | 1998-11-24 | Genzyme Corporation | Cationic amphiphiles containing ester or ether-linked lipophilic groups for intracellular delivery of therapeutic molecules |
JPH11504631A (ja) * | 1995-04-25 | 1999-04-27 | バイカル インコーポレイテッド | Dna/脂質複合体の単一バイアル製剤 |
US6017700A (en) | 1995-08-04 | 2000-01-25 | Bayer Corporation | Cationic oligonucleotides, and related methods of synthesis and use |
BRPI9810945B8 (pt) * | 1997-06-27 | 2021-05-25 | Abraxis Bioscience Inc | formulações de agentes farmacológicos, métodos para sua preparação e métodos para uso das mesmas |
CA2609260A1 (en) * | 2004-06-02 | 2005-12-22 | Sourcepharm, Inc. | Rna-containing microvesicles and methods therefor |
CN1981044B (zh) * | 2004-06-07 | 2010-05-05 | 普洛体维生物治疗公司 | 包封干扰rna的脂质 |
SI3611266T1 (sl) | 2005-08-23 | 2023-02-28 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Modificirani nukleozidi, ki vsebujejo RNA, in postopki za njihovo uporabo |
RU2451022C2 (ru) | 2005-12-15 | 2012-05-20 | Сантр Насьональ Де Ля Решерш Сьентифик (Снрс) | Катионные олигонуклеотиды, автоматизированные способы их получения и их применение |
WO2010045512A2 (en) * | 2008-10-16 | 2010-04-22 | Mdrna , Inc. | Processes and compositions for liposomal and efficient delivery of gene silencing therapeutics |
CN104910025B (zh) | 2008-11-07 | 2019-07-16 | 麻省理工学院 | 氨基醇类脂质和其用途 |
CN105255881A (zh) | 2009-07-31 | 2016-01-20 | 埃泽瑞斯公司 | 用于蛋白质表达的具有未修饰和修饰核苷酸的组合的rna |
EP3296398A1 (en) * | 2009-12-07 | 2018-03-21 | Arbutus Biopharma Corporation | Compositions for nucleic acid delivery |
EP2338520A1 (de) | 2009-12-21 | 2011-06-29 | Ludwig Maximilians Universität | Konjugat mit Zielfindungsligand und dessen Verwendung |
CA2836317A1 (en) * | 2011-05-16 | 2012-11-22 | Rasmus Irming Jolck | Charge triggering of self-organized nanoparticles |
US9428535B2 (en) | 2011-10-03 | 2016-08-30 | Moderna Therapeutics, Inc. | Modified nucleosides, nucleotides, and nucleic acids, and uses thereof |
GB201118704D0 (en) * | 2011-10-28 | 2011-12-14 | Univ Oxford | Cystic fibrosis treatment |
EP2791160B1 (en) * | 2011-12-16 | 2022-03-02 | ModernaTX, Inc. | Modified mrna compositions |
CN104349794B (zh) | 2012-06-08 | 2019-01-04 | 埃泽瑞斯公司 | 信使rna的肺递送 |
US10130649B2 (en) * | 2013-03-15 | 2018-11-20 | Translate Bio, Inc. | Synergistic enhancement of the delivery of nucleic acids via blended formulations |
AU2014348212C1 (en) | 2013-11-18 | 2018-11-29 | Arcturus Therapeutics, Inc. | Ionizable cationic lipid for RNA delivery |
AU2014384269A1 (en) * | 2014-02-26 | 2016-09-08 | Ethris Gmbh | Compositions for gastrointestinal administration of RNA |
CA2968060C (en) | 2014-11-18 | 2023-06-20 | Arcturus Therapeutics, Inc. | Ionizable cationic lipid for rna delivery |
EP3034539A1 (en) | 2014-12-19 | 2016-06-22 | Ethris GmbH | Compositions for introducing nucleic acid into cells |
CA2974503A1 (en) | 2015-01-21 | 2016-07-28 | Phaserx, Inc. | Methods, compositions, and systems for delivering therapeutic and diagnostic agents into cells |
WO2016118724A1 (en) * | 2015-01-21 | 2016-07-28 | Moderna Therapeutics, Inc. | Lipid nanoparticle compositions |
WO2018089540A1 (en) * | 2016-11-08 | 2018-05-17 | Modernatx, Inc. | Stabilized formulations of lipid nanoparticles |
US20210137846A1 (en) * | 2018-04-25 | 2021-05-13 | Ethris Gmbh | Cryoprotective agents for particulate formulations |
-
2019
- 2019-04-25 US US17/050,440 patent/US20210137846A1/en active Pending
- 2019-04-25 MX MX2020011167A patent/MX2020011167A/es unknown
- 2019-04-25 CA CA3098262A patent/CA3098262A1/en active Pending
- 2019-04-25 WO PCT/EP2019/060646 patent/WO2019207061A1/en unknown
- 2019-04-25 BR BR112020021054-4A patent/BR112020021054A2/pt unknown
- 2019-04-25 JP JP2020558887A patent/JP2021522228A/ja active Pending
- 2019-04-25 WO PCT/EP2019/060644 patent/WO2019207060A1/en unknown
- 2019-04-25 CN CN201980034447.1A patent/CN112153985B/zh active Active
- 2019-04-25 BR BR112020021037-4A patent/BR112020021037A2/pt unknown
- 2019-04-25 ES ES19718759T patent/ES2960936T3/es active Active
- 2019-04-25 US US17/050,441 patent/US20210137840A1/en active Pending
- 2019-04-25 ES ES19718760T patent/ES2960939T3/es active Active
- 2019-04-25 CN CN201980034487.6A patent/CN112153986B/zh active Active
- 2019-04-25 CA CA3098259A patent/CA3098259C/en active Active
- 2019-04-25 EP EP23187109.6A patent/EP4311541A3/en active Pending
- 2019-04-25 EP EP19718759.4A patent/EP3784284B1/en active Active
- 2019-04-25 KR KR1020207030470A patent/KR20210022535A/ko unknown
- 2019-04-25 AU AU2019258678A patent/AU2019258678A1/en active Pending
- 2019-04-25 PL PL19718760.2T patent/PL3784285T3/pl unknown
- 2019-04-25 AU AU2019258679A patent/AU2019258679A1/en active Pending
- 2019-04-25 MX MX2020011166A patent/MX2020011166A/es unknown
- 2019-04-25 KR KR1020207030471A patent/KR20210021943A/ko unknown
- 2019-04-25 EP EP19718760.2A patent/EP3784285B1/en active Active
- 2019-04-25 JP JP2020559465A patent/JP7256824B2/ja active Active
-
2020
- 2020-09-29 ZA ZA2020/06026A patent/ZA202006026B/en unknown
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2002500203A (ja) | 1998-01-08 | 2002-01-08 | リサーチ ディベロップメント ファンデーション | 噴霧化中の安定化脂質・dna製剤 |
JP2009518306A (ja) | 2005-12-02 | 2009-05-07 | ノバルティス アーゲー | 免疫原性組成物で使用するためのナノ粒子 |
JP2016524898A (ja) | 2013-06-28 | 2016-08-22 | エスリス ゲーエムベーハーethris GmbH | 細胞内へのrna導入用組成物 |
WO2018011406A1 (en) | 2016-07-15 | 2018-01-18 | Biontech Rna Pharmaceuticals Gmbh | Formulation for administration of rna |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP7256824B2 (ja) | 粒子状製剤用の凍結保護剤 | |
Yin et al. | Non-viral vectors for gene-based therapy | |
CN102231979B (zh) | 基因沉默治疗剂的脂质体有效递送方法和组合物 | |
Ko et al. | Self-assembling micelle-like nanoparticles based on phospholipid–polyethyleneimine conjugates for systemic gene delivery | |
KR101948839B1 (ko) | 음이온성 약물 함유 약제학적 조성물 및 그 제조방법 | |
CN103906504B (zh) | 制备用于药物递送的脂质纳米颗粒的方法 | |
KR102285326B1 (ko) | Rna를 세포에 도입하기 위한 조성물 | |
KR101870316B1 (ko) | 음이온성 약물을 함유하는 고분자 미셀의 제조방법 | |
Li et al. | Ionizable lipid-assisted efficient hepatic delivery of gene editing elements for oncotherapy | |
CA2971284C (en) | Compositions for introducing nucleic acid into cells | |
JP5860409B2 (ja) | 徐放性核酸マトリックス組成物 | |
Salmasi et al. | Heterocyclic amine-modified polyethylenimine as gene carriers for transfection of mammalian cells | |
Steele et al. | Factors influencing polycation/siRNA colloidal stability toward aerosol lung delivery | |
RU2820713C2 (ru) | Криопротективные агенты для содержащих частицы составов | |
KR101949507B1 (ko) | Kras를 표적으로 하는 핵산 함유 약제학적 조성물 및 그 제조방법 | |
EP4306133A1 (en) | Composition for administration of double-stranded oligonucleotide structures using ultrasonic nebulizer for prevention or treatment of respiratory viral infection including covid-19, pulmonary fibrosis caused by viral infection, or respiratory diseases | |
RU2815001C2 (ru) | Составы на основе липидов для доставки рнк | |
Grant-Serroukh | Lipid nanoparticles for mRNA-mediated cancer therapy | |
CN114605338A (zh) | 一种含尿嘧啶衍生物的纳米粒、核酸纳米复合物及其制备方法和用途 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20220420 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20220420 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20230217 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20230307 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20230331 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7256824 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |