JP7241029B2 - Fragile retention device with injection mechanism - Google Patents

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Description

本発明は、注入機構を具備する脆弱物保持デバイスに関する。 The present invention relates to a fragile object retention device with an injection mechanism.

近年、重症心不全治療の解決策として新しい再生医療の開発が進められている。その一例として、重症心筋梗塞等において組織工学を応用した温度応答性培養皿を用いて作製したシート状細胞培養物を心臓表面に適用する手法などが試みられている。シート状細胞培養物を用いる手法は、大量の細胞を広範囲に安全に移植することが可能であり、例えば、心筋梗塞（心筋梗塞に伴う慢性心不全を含む）、拡張型心筋症、虚血性心筋症、収縮機能障害（例えば、左室収縮機能障害）を伴う心疾患（例えば、心不全、特に慢性心不全）などの治療にとくに有用である。 In recent years, new regenerative medicine has been developed as a solution for treating severe heart failure. As an example, a method of applying a sheet-like cell culture prepared using a tissue-engineered temperature-responsive culture dish to the surface of the heart has been attempted for severe myocardial infarction and the like. Techniques using sheet-like cell cultures can safely transplant a large amount of cells over a wide area. , particularly useful in the treatment of heart disease (eg, heart failure, especially chronic heart failure) associated with systolic dysfunction (eg, left ventricular systolic dysfunction).

このようなシート状細胞培養物を臨床応用するには、例えば、作製されたシート状細胞培養物を保存液と共に容器内に収容し、移植が行われる集中治療室などに移送する必要がある。しかしながら、シート状細胞培養物は絶対的な物理的強度が低く、容器を移送する際などに生じる振動で、皺、破れ、破損などが生じることから、この移送作業には高度な技術が要求され、かつ細心の注意を払う必要がある。 For clinical application of such a sheet-like cell culture, for example, it is necessary to store the prepared sheet-like cell culture in a container together with a preservation solution and transport it to an intensive care unit or the like where transplantation is performed. However, the absolute physical strength of sheet-like cell cultures is low, and the vibrations that occur when the container is transported cause wrinkles, tears, and breakage. , and must be very careful.

このようなニーズに応えるために、種々の方法や容器が開発されている。たとえば、下記特許文献１には、培養細胞シートを運搬するための包装体が記載されている。かかる包装体は、リッドで密封する際に若干の液体培地と共に空気を排除して液密にすることによって、運搬時に液体培地中を気泡が移動したりすることがないため、培養細胞シートのズレや欠損を防止できるようになっている。しかしながら、かかる包装体を用いた場合、リッドで密閉する際に押し出された液体が周囲を汚染してしまうなどの問題がある。 Various methods and containers have been developed to meet such needs. For example, Patent Literature 1 below describes a package for transporting cultured cell sheets. When such a package is sealed with a lid, air is removed together with a small amount of the liquid medium to make it liquid-tight, so that air bubbles do not move in the liquid medium during transportation, so that the cultured cell sheet does not shift. and loss can be prevented. However, when such a package is used, there is a problem that the liquid pushed out when the package is sealed with a lid contaminates the surroundings.

さらに、下記特許文献２に記載された膜状組織の保存輸送容器は、収容部内を気体層が形成されることがない程度に保存液で満たして液密にすることで、保存液が波打ったり流動したりせず、結果的に、膜状組織に振動が伝わらず、膜状組織の破損を防止できるようになっている。しかしながら、かかる容器を用いた場合、収容部内に気体が残留してしまうなどの問題がある。 Furthermore, the container for storing and transporting a membranous tissue described in Patent Document 2 below is filled with a storage solution to the extent that a gas layer is not formed in the storage portion to make it liquid-tight, so that the storage solution undulates. As a result, no vibration is transmitted to the membranous tissue, and damage to the membranous tissue can be prevented. However, when such a container is used, there is a problem that gas remains in the container.

さらに、下記特許文献３に記載された細胞シート搬送容器は、搬送元や搬送先の医療現場で入手及び利用可能な汎用シャーレと組み合わせて、容器の内部空間全てを培養液で完全に満たすことが可能であり、これにより、搬送中に細胞シートの損傷の一因となっていた空気を容器の内部空間から排除できるようになっている。しかしながら、かかる容器を用いた場合、搬送先で培養液を容器の外へ排出してから蓋を外すなどの作業が必要である。 Furthermore, the cell sheet transport container described in Patent Document 3 below can be combined with a general-purpose petri dish that can be obtained and used at the medical site of the transport source or the transport destination, and the entire internal space of the container can be completely filled with the culture solution. This allows the exclusion of air from the interior space of the container that has contributed to damage to the cell sheet during transport. However, when such a container is used, it is necessary to remove the lid after discharging the culture medium to the outside of the container at the destination.

特開２００９－８９７１５号公報JP 2009-89715 A 特開２０１２－１３０３１１号公報JP 2012-130311 A 国際公開第２０１３／１７６１０６号公報International Publication No. 2013/176106

上述のように脆弱な細胞シートを安全に移送するための容器が開発されている。またこのような容器は、容器内を液密にして気泡の移動が起こらないような工夫がなされている。 Containers have been developed for safely transporting fragile cell sheets as described above. In addition, such a container is devised so that the inside of the container is liquid-tight to prevent air bubbles from moving.

しかしながら、容器内を完全な液密状態にするには高度な技術が要求される。特に、液体は非圧縮性であるため、蓋と容器とで取り囲まれた空間を液密にした状態で、蓋を取り外すことは困難である。また、蓋部材を脱着して液密状態を形成する一連の作業中に液体が周囲に漏出してしまうことがある。 However, a high level of technology is required to make the inside of the container completely liquid-tight. In particular, since the liquid is incompressible, it is difficult to remove the lid while keeping the space enclosed by the lid and container liquid-tight. In addition, the liquid may leak to the surroundings during a series of operations for attaching and detaching the lid member to form a liquid-tight state.

本発明はこのような点を考慮してなされたものであり、簡単な作業で効率よく液密状態を達成することができるデバイスを提供することを目的とする。 SUMMARY OF THE INVENTION The present invention has been made in consideration of such points, and an object of the present invention is to provide a device capable of achieving a liquid-tight state efficiently with a simple operation.

すなわち本発明は、以下に関する。
［１］脆弱物を収容するための容器と、容器内を上部空間と下部空間に仕切り、該下部空間を密閉するための蓋部材とを含む、デバイスであって、蓋部材を容器に取り付けて蓋部材に設けられた注入口から液体を注入して注入口を閉塞することで、下部空間の液密を達成することができる、前記デバイス。
［２］注入口が容器の周縁部付近に位置づけられる、［１］に記載のデバイス。
［３］蓋部材の少なくとも一部がドーム形状の凸部を有し、該凸部の頂部に注入口が設けられる、［１］または［２］に記載のデバイス。
［４］蓋部材を容器に取り付けた状態で、蓋部材の注入口の高さが容器の縁部の高さ以下になるように構成される、［１］～［３］のいずれかに記載のデバイス。That is, the present invention relates to the following.
[1] A device including a container for housing a fragile object and a lid member for partitioning the interior of the container into an upper space and a lower space and sealing the lower space, wherein the lid member is attached to the container The above-described device, wherein the lower space can be made liquid-tight by injecting liquid from an injection port provided in the lid member and closing the injection port.
[2] The device of [1], wherein the inlet is positioned near the periphery of the container.
[3] The device according to [1] or [2], wherein at least part of the lid member has a dome-shaped protrusion, and an injection port is provided at the top of the protrusion.
[4] According to any one of [1] to [3], wherein the height of the injection port of the lid member is equal to or less than the height of the edge of the container when the lid member is attached to the container. device.

［５］容器を密閉するためのカバー部材をさらに含む、［１］～［４］のいずれかに記載のデバイス。
［６］蓋部材と容器との間に介在する緩衝部材をさらに含む、［１］～［５］のいずれかに記載のデバイス。
［７］脆弱物がシート状細胞培養物である、［１］～［６］のいずれかに記載のデバイス。
［８］シート状細胞培養物が、積層体である、［７］に記載のデバイス。[5] The device according to any one of [1] to [4], further comprising a cover member for sealing the container.
[6] The device according to any one of [1] to [5], further comprising a cushioning member interposed between the lid member and the container.
[7] The device according to any one of [1] to [6], wherein the fragile object is a sheet-like cell culture.
[8] The device according to [7], wherein the sheet-like cell culture is a laminate.

本発明のデバイスによれば、簡便な機構と、簡単な作業で効率よく液密状態を達成することができるため、作業性や製造コストの点において大きなメリットがある。そして、容器内を完全に液密状態にできるため、気泡（気体）が容器内にはいらず、移送中の容器の揺れなどによって気泡が容器内で動いて脆弱物を破損することがない。特に、脆弱物がシート状細胞培養物の積層体である場合に、気泡が移動して、積層体がズレたり欠損したりすることがない。したがって、液体中の脆弱物の形状を保持して変形を防止しつつ、長期保存することができる。 According to the device of the present invention, it is possible to efficiently achieve a liquid-tight state with a simple mechanism and simple work, so there are great merits in terms of workability and manufacturing cost. Since the inside of the container can be made completely liquid-tight, air bubbles (gas) do not enter the container, and air bubbles do not move inside the container due to shaking of the container during transportation and damage fragile objects. In particular, when the fragile object is a layered body of sheet-like cell cultures, the layered body is not displaced or damaged due to movement of air bubbles. Therefore, it is possible to store the fragile object for a long period of time while maintaining the shape of the fragile object in the liquid and preventing deformation.

本発明のデバイスは、液密状態を簡単に解除することができるため、例えば、作業者の蓋部材の無理な取り外しによる、容器の振動や液体の流動の発生を抑えることができ、脆弱物を破損することがない。また、周囲を汚染することなく作業を行うことができるため、シート状細胞培養物の作製に使用されるバイオクリーンルームや、シート状細胞培養物が使用される集中治療室など、清浄度が厳密に管理されている場所での使用に適している。 Since the device of the present invention can easily release the liquid-tight state, for example, it is possible to suppress the occurrence of container vibration and liquid flow caused by the worker's forcible removal of the lid member. It cannot be damaged. In addition, since the work can be performed without contaminating the surroundings, the cleanliness is strictly maintained in bio-clean rooms used for the preparation of sheet-like cell cultures and intensive care units where sheet-like cell cultures are used. Suitable for use in controlled locations.

図１は、本発明の第１実施形態に係るデバイス１の斜視図である。FIG. 1 is a perspective view of a device 1 according to a first embodiment of the invention. 図２は、第１実施形態に係るデバイス１の断面図である。FIG. 2 is a cross-sectional view of the device 1 according to the first embodiment. 図３は、第２実施形態に係るデバイス１Ａの断面図である。FIG. 3 is a cross-sectional view of device 1A according to the second embodiment.

本発明における脆弱物とは、物理的強度が低く、液体の揺れなどによって、破れ、破損、変形などが生じ得る物体をいう。かかる物体としては、薄肉部を有する物体、帯形状を有する物体、シート形状を有する物体などが挙げられる。かかるシート形状を有する物体としては、とくに限定されないが、シート状構造物、例えば、シート状細胞培養物などの、生体由来材料からなる平膜状の膜組織や、プラスチック、紙、織布、不織布、金属、高分子、脂質といった種々の材質のフィルム等が含まれる。これらのうち、液体中で難分解性のもの、液体中で難崩壊性のものなどが好ましい。シート状構造物は、多角形や円形などであってもよく、幅、厚み、直径などは一様であってもなくてもよい。本発明におけるシート状構造物は、１枚のみを単層の状態で使用してもよいし、２枚以上を重ねた積層体の状態で使用してもよい。後者の場合、積層体の各層は互いに連結していても、連結していなくてもよく、連結している場合は、重なり合っている部分が全て連結していても、部分的に連結していてもよい。 A fragile object in the present invention refers to an object that has low physical strength and can be torn, damaged, deformed, or the like by shaking of a liquid. Such an object includes an object having a thin portion, an object having a strip shape, an object having a sheet shape, and the like. Such a sheet-shaped object is not particularly limited, but a sheet-shaped structure, for example, a flat membrane-shaped membrane tissue made of a biological material such as a sheet-shaped cell culture, plastic, paper, woven fabric, non-woven fabric. , films of various materials such as metals, polymers, and lipids. Among these, those that are difficult to decompose in liquids and those that are difficult to disintegrate in liquids are preferred. The sheet-like structure may be polygonal, circular, or the like, and may or may not be uniform in width, thickness, diameter, and the like. The sheet-like structure in the present invention may be used in the form of a single layer, or may be used in the form of a layered body in which two or more layers are stacked. In the latter case, the layers of the laminate may or may not be connected to each other, and if connected, may be partially connected even if the overlapping portions are all connected. good too.

本発明において、シート状細胞培養物とは、細胞が互いに連結してシート状になったものをいう。細胞同士は、直接（接着分子などの細胞要素を介するものを含む）および／または介在物質を介して、互いに連結していてもよい。介在物質としては、細胞同士を少なくとも物理的（機械的）に連結し得る物質であれば特に限定されないが、例えば、細胞外マトリックスなどが挙げられる。介在物質は、好ましくは細胞由来のもの、特に、シート状細胞培養物を構成する細胞に由来するものである。細胞は少なくとも物理的（機械的）に連結されるが、さらに機能的、例えば、化学的、電気的に連結されてもよい。シート状細胞培養物は、１の細胞層から構成されるもの（単層）であっても、２以上の細胞層から構成されるもの（積層体（多層）、例えば、２層、３層、４層、５層、６層など）であってもよい。また、シート状細胞培養物は、細胞が明確な層構造を示すことなく、細胞１個分の厚みを超える厚みを有する３次元構造を有してもよい。例えば、シート状細胞培養物の垂直断面において、細胞が水平方向に均一に整列することなく、不均一に（例えば、モザイク状に）配置された状態で存在していてもよい。 In the present invention, a sheet-like cell culture refers to a sheet-like cell culture formed by connecting cells to each other. Cells may be connected to each other directly (including through cellular elements such as adhesion molecules) and/or through intermediaries. The intervening substance is not particularly limited as long as it is a substance capable of at least physically (mechanically) connecting cells to each other, and examples thereof include an extracellular matrix. The intervening substance is preferably derived from cells, particularly from cells constituting a sheet-like cell culture. The cells are at least physically (mechanically) linked, but may also be functionally linked, eg chemically, electrically. The sheet-like cell culture may be composed of one cell layer (single layer) or composed of two or more cell layers (laminate (multilayer), e.g., two layers, three layers, 4 layers, 5 layers, 6 layers, etc.). Moreover, the sheet-like cell culture may have a three-dimensional structure in which the cells do not exhibit a clear layered structure and have a thickness exceeding the thickness of a single cell. For example, in a vertical cross section of a sheet-like cell culture, the cells may be non-uniformly arranged (for example, in a mosaic pattern) without being evenly aligned in the horizontal direction.

本発明におけるシート状細胞培養物は、上記の構造を形成し得る任意の細胞から構成される。かかる細胞の例としては、限定されずに、接着細胞（付着性細胞）を含む。接着細胞は、例えば、接着性の体細胞（例えば、心筋細胞、線維芽細胞、上皮細胞、内皮細胞、肝細胞、膵細胞、腎細胞、副腎細胞、歯根膜細胞、歯肉細胞、骨膜細胞、皮膚細胞、滑膜細胞、軟骨細胞など）および幹細胞（例えば、筋芽細胞、心臓幹細胞などの組織幹細胞、胚性幹細胞、ｉＰＳ（induced pluripotent stem）細胞などの多能性幹細胞、間葉系幹細胞等）などを含む。体細胞は、幹細胞、特にｉＰＳ細胞から分化させたものであってもよい。シート状細胞培養物を形成し得る細胞の非限定例としては、例えば、筋芽細胞（例えば、骨格筋芽細胞など）、間葉系幹細胞（例えば、骨髄、脂肪組織、末梢血、皮膚、毛根、筋組織、子宮内膜、胎盤、臍帯血由来のものなど）、心筋細胞、線維芽細胞、心臓幹細胞、胚性幹細胞、ｉＰＳ細胞、滑膜細胞、軟骨細胞、上皮細胞（例えば、口腔粘膜上皮細胞、網膜色素上皮細胞、鼻粘膜上皮細胞など）、内皮細胞（例えば、血管内皮細胞など）、肝細胞（例えば、肝実質細胞など）、膵細胞（例えば、膵島細胞など）、腎細胞、副腎細胞、歯根膜細胞、歯肉細胞、骨膜細胞、皮膚細胞等が挙げられる。本明細書においては、単層の細胞培養物を形成するもの、例えば、筋芽細胞または心筋細胞などが好ましく、とくに好ましくは骨格筋芽細胞またはｉＰＳ細胞由来の心筋細胞である。 The sheet-like cell culture in the present invention is composed of any cells capable of forming the above structure. Examples of such cells include, without limitation, adherent cells (adherent cells). Adherent cells include, for example, adherent somatic cells (e.g., cardiomyocytes, fibroblasts, epithelial cells, endothelial cells, hepatocytes, pancreatic cells, kidney cells, adrenal cells, periodontal ligament cells, gingival cells, periosteal cells, skin cells, synovial cells, chondrocytes, etc.) and stem cells (e.g., myoblasts, tissue stem cells such as cardiac stem cells, embryonic stem cells, pluripotent stem cells such as iPS (induced pluripotent stem) cells, mesenchymal stem cells, etc.) and so on. Somatic cells may be differentiated from stem cells, particularly iPS cells. Non-limiting examples of cells that can form sheet-like cell cultures include myoblasts (e.g., skeletal myoblasts), mesenchymal stem cells (e.g., bone marrow, adipose tissue, peripheral blood, skin, hair roots, etc.). , muscle tissue, endometrium, placenta, those derived from umbilical cord blood, etc.), cardiomyocytes, fibroblasts, cardiac stem cells, embryonic stem cells, iPS cells, synovial cells, chondrocytes, epithelial cells (e.g., oral mucosal epithelium) cells, retinal pigment epithelial cells, nasal mucosal epithelial cells, etc.), endothelial cells (e.g., vascular endothelial cells, etc.), hepatocytes (e.g., hepatocytes, etc.), pancreatic cells (e.g., pancreatic islet cells, etc.), renal cells, adrenal glands cells, periodontal ligament cells, gingival cells, periosteal cells, skin cells and the like. In the present specification, those that form a monolayer cell culture, such as myoblasts or cardiomyocytes, are preferred, and skeletal myoblasts or iPS cell-derived cardiomyocytes are particularly preferred.

細胞は、細胞培養物による治療が可能な任意の生物に由来し得る。かかる生物には、とくに限定されないが、例えば、ヒト、非ヒト霊長類、イヌ、ネコ、ブタ、ウマ、ヤギ、ヒツジなどが含まれる。また、シート状細胞培養物の形成に用いる細胞は１種類のみであってもよいが、２種類以上の細胞を用いることもできる。本発明の好ましい態様において、細胞培養物を形成する細胞が２種類以上ある場合、最も多い細胞の比率（純度）は、細胞培養物製造終了時において、例えば骨格筋芽細胞の場合、６５％以上、好ましくは７０％以上、より好ましくは７５％以上である。 Cells can be derived from any organism amenable to treatment by cell culture. Such organisms include, but are not limited to, humans, non-human primates, dogs, cats, pigs, horses, goats, sheep, and the like. In addition, only one type of cell may be used to form the sheet-like cell culture, but two or more types of cells may be used. In a preferred embodiment of the present invention, when there are two or more types of cells forming a cell culture, the ratio (purity) of the largest number of cells is 65% or more at the end of cell culture production, for example, in the case of skeletal myoblasts. , preferably 70% or more, more preferably 75% or more.

本発明におけるシート状細胞培養物は、スキャフォールド（細胞培養時の足場）に細胞を播種し、培養することによって得られるシート形状の培養組織などでもよいが、好ましくは、細胞培養物を構成する細胞由来の物質のみからなり、それら以外の物質を含まない。
シート状細胞培養物は、任意の既知の手法によって製造されたものであってよい。The sheet-shaped cell culture in the present invention may be a sheet-shaped cultured tissue obtained by seeding cells on a scaffold (scaffold for cell culture) and culturing, but preferably constitutes a cell culture. Consists only of cell-derived substances and does not contain other substances.
Sheet-like cell cultures may be produced by any known technique.

本発明の一態様において、シート状細胞培養物は、シート状骨格筋芽細胞培養物である。これは、シート状骨格筋芽細胞培養物は、その一部をつかむと自重で破断するほど脆弱であるがゆえに、従来単体で移送することができないばかりか、一度折り重なると元の形状に戻すことが極めて困難なため、液中でシート形状を維持することに大きな意義があるからである。 In one aspect of the invention, the sheet-like cell culture is a sheet-like skeletal myoblast culture. This is because the sheet-shaped skeletal myoblast culture is so fragile that it breaks under its own weight when part of it is grasped, so it cannot be transported alone, and once folded, it cannot be restored to its original shape. is extremely difficult, and it is of great significance to maintain the sheet shape in the liquid.

本発明において、容器は、内部に脆弱物、液体などを収容でき、液体が漏出しないものであればとくに限定されず、市販の容器を含む任意のものを用いることができる。容器の材料としては、例えば、ポリエチレン、ポリプロピレン、テフロン（登録商標）、ポリエチレンテレフタレート、ポリメチルメタクリレート、ナイロン６，６、ポリビニルアルコール、セルロース、シリコン、ポリスチレン、ガラス、ポリアクリルアミド、ポリジメチルアクリルアミド、金属（例えば、鉄、ステンレス、アルミニウム、銅、真鍮）等が挙げられるがこれに限定されない。また、容器は、脆弱物の形状を維持するための少なくとも１つの平坦な底面を有することが好ましく、例えば、シャーレ、細胞培養皿、細胞培養ボトルなどが挙げられるがこれに限定されない。平坦な底面の面積は、特に限定されないが、典型的には、１．１３～７８．５ｃｍ２、好ましくは１２．６～７８．５ｃｍ２、より好ましくは９．１～６０．８ｃｍ２である。In the present invention, the container is not particularly limited as long as it can accommodate a fragile object, liquid, etc. inside and the liquid does not leak, and any container including commercially available containers can be used. Materials for the container include, for example, polyethylene, polypropylene, Teflon (registered trademark), polyethylene terephthalate, polymethyl methacrylate, nylon 6,6, polyvinyl alcohol, cellulose, silicon, polystyrene, glass, polyacrylamide, polydimethylacrylamide, metal ( Examples include, but are not limited to, iron, stainless steel, aluminum, copper, and brass. In addition, the container preferably has at least one flat bottom surface for maintaining the shape of the fragile object, and examples thereof include, but are not limited to petri dishes, cell culture dishes, and cell culture bottles. The area of the flat bottom is not particularly limited, but is typically 1.13 to 78.5 cm 2 , preferably 12.6 to 78.5 cm 2 , more preferably 9.1 to 60.8 cm 2 .

本発明において、容器内の液体は、少なくとも１種の成分から構成され、その成分としてはとくに限定されないが、例えば、水、水溶液、非水溶液、懸濁液、乳液などの液体から構成される。
本明細書における液または液体とは、全体として流動性を有する流体であればよく、細胞足場などの固形物質や気泡などその他非液体成分を含んでもよい。In the present invention, the liquid in the container is composed of at least one component, and the component is not particularly limited.
The term “liquid” or “liquid” as used herein may be any fluid that has fluidity as a whole, and may include solid substances such as cell scaffolds and other non-liquid components such as air bubbles.

容器内の液体を構成する成分は、脆弱物に与える影響が少ないものであればとくに限定されない。脆弱物が生体由来材料からなる膜である場合、容器内の液体を構成する成分は、生物学的安定性や長期保存可能性の観点から、生体適合性のもの、すなわち、生体組織や細胞に対して炎症反応、免疫反応、中毒反応などの望まない作用を起こさないか、少なくともかかる作用が小さいものが好ましく、例えば、水、生理食塩水、生理緩衝液（例えば、ＨＢＳＳ、ＰＢＳ、ＥＢＳＳ、Ｈｅｐｅｓ、重炭酸ナトリウム等）、培地（例えば、ＤＭＥＭ、ＭＥＭ、Ｆ１２、ＤＭＥＭ／Ｆ１２、ＤＭＥ、ＲＰＭＩ１６４０、ＭＣＤＢ、Ｌ１５、ＳｋＢＭ、ＲＩＴＣ８０－７、ＩＭＤＭ等）、糖液（スクロース溶液、Ｆｉｃｏｌｌ－ｐａｑｕｅ（登録商標）ＰＬＵＳ等）、海水、血清含有溶液、レノグラフィン（登録商標）溶液、メトリザミド溶液、メグルミン溶液、グリセリン、エチレングリコール、アンモニア、ベンゼン、トルエン、アセトン、エチルアルコール、ベンゾール、オイル、ミネラルオイル、動物脂、植物油、オリーブ油、コロイド溶液、流動パラフィン、テレピン油、アマニ油、ヒマシ油などが挙げられる。 The components that make up the liquid in the container are not particularly limited as long as they have little effect on fragile objects. When the fragile object is a membrane made of a material derived from a living body, the components that make up the liquid in the container should be biocompatible, that is, biocompatible with living tissue and cells, from the viewpoint of biological stability and long-term storage potential. On the other hand, those that do not cause undesirable effects such as inflammatory reactions, immune reactions, and toxic reactions, or at least those that cause such effects to a small extent, are preferred. , sodium bicarbonate, etc.), medium (e.g., DMEM, MEM, F12, DMEM/F12, DME, RPMI1640, MCDB, L15, SkBM, RITC80-7, IMDM, etc.), sugar solution (sucrose solution, Ficoll-paque (registered PLUS, etc.), seawater, serum-containing solution, renographin (registered trademark) solution, metrizamide solution, meglumine solution, glycerin, ethylene glycol, ammonia, benzene, toluene, acetone, ethyl alcohol, benzol, oil, mineral oil, animal Fats, vegetable oils, olive oils, colloidal solutions, liquid paraffin, turpentine oil, linseed oil, castor oil and the like.

脆弱物がシート状細胞培養物である場合、容器内の液体を構成する成分は、細胞を安定して保存することができ、細胞生存に必要な最低限の酸素や栄養等を含み、細胞を浸透圧等により破壊しないものが好ましく、例えば、生理食塩水、生理緩衝液（例えば、ＨＢＳＳ、ＰＢＳ、ＥＢＳＳ、Ｈｅｐｅｓ、重炭酸ナトリウム等）、培地（例えば、ＤＭＥＭ、ＭＥＭ、Ｆ１２、ＤＭＥＭ／Ｆ１２、ＤＭＥ、ＲＰＭＩ１６４０、ＭＣＤＢ、Ｌ１５、ＳｋＢＭ、ＲＩＴＣ８０－７、ＩＭＤＭ等）、糖液（スクロース溶液、Ｆｉｃｏｌｌ－ｐａｑｕｅ ＰＬＵＳ（登録商標）等）などが挙げられるが、これらに限定されない。 When the fragile object is a sheet-like cell culture, the components that make up the liquid in the container can stably store the cells, contain the minimum amount of oxygen and nutrients necessary for cell survival, and keep the cells alive. Those that are not destroyed by osmotic pressure or the like are preferable, and examples include physiological saline, physiological buffers (e.g., HBSS, PBS, EBSS, Hepes, sodium bicarbonate, etc.), media (e.g., DMEM, MEM, F12, DMEM/F12, DME, RPMI1640, MCDB, L15, SkBM, RITC80-7, IMDM, etc.), sugar solution (sucrose solution, Ficoll-paque PLUS (registered trademark), etc.) and the like, but are not limited thereto.

容器内の液体の量は、蓋部材を容器に取り付けた状態で脆弱物を保持できる程度であって、容器の底部と蓋部材の頂部との間に形成される液嵩が、脆弱物が揺動しない程度の高さであればとくに限定されない。本発明の一態様において、シート状細胞培養物の直径は約３５～５５ｍｍであり、面積は６ｃｍ２以上である。上記液嵩は、シート状細胞培養物の直径に関わらず、例えば、１．０ｍｍ～２０．０ｍｍである。The amount of liquid in the container is such that the fragile object can be held with the lid member attached to the container, and the liquid volume formed between the bottom of the container and the top of the lid member is such that the fragile object is shaken. There is no particular limitation as long as the height is such that it does not move. In one aspect of the invention, the sheet-like cell culture has a diameter of about 35-55 mm and an area of 6 cm 2 or more. The liquid volume is, for example, 1.0 mm to 20.0 mm regardless of the diameter of the sheet-like cell culture.

本発明において、蓋部材は、容器を密閉できるものであればとくに限定されない。蓋部材の材料としては、例えば、ポリエチレン、ポリプロピレン、テフロン（登録商標）、ポリエチレンテレフタレート、ポリメチルメタクリレート、ナイロン６，６、ポリビニルアルコール、セルロース、シリコン、ポリスチレン、ガラス、ポリアクリルアミド、ポリジメチルアクリルアミド、金属（例えば、鉄、ステンレス、アルミニウム、銅、真鍮）等が挙げられるがこれに限定されない。 In the present invention, the lid member is not particularly limited as long as it can seal the container. Materials for the lid member include, for example, polyethylene, polypropylene, Teflon (registered trademark), polyethylene terephthalate, polymethylmethacrylate, nylon 6,6, polyvinyl alcohol, cellulose, silicon, polystyrene, glass, polyacrylamide, polydimethylacrylamide, and metals. (for example, iron, stainless steel, aluminum, copper, brass) and the like, but are not limited thereto.

本発明において、蓋部材および容器の形状は、蓋部材と容器とが係合可能で、かかる係合により密閉空間が形成され得る限り、特に限定されない。例えば、容器が汎用シャーレである場合は、蓋部材の形状を円形にすることが好ましい。また、蓋部材および／または容器を光透過性の材料で構成することで、容器に収容されている脆弱物の状態や、液体中の気泡の有無を確認できるようにしてもよい。 In the present invention, the shapes of the lid member and the container are not particularly limited as long as the lid member and the container can be engaged with each other and a sealed space can be formed by such engagement. For example, when the container is a general-purpose Petri dish, the shape of the lid member is preferably circular. Also, the lid member and/or the container may be made of a light-transmitting material so that the state of the fragile material contained in the container and the presence or absence of air bubbles in the liquid can be checked.

本発明において、「容器内を上部空間と下部空間に仕切り」とは、液体、気体、脆弱物などを収容することができる容器の収容空間を上側と下側で仕切ることをいう。したがって、「下部空間を密閉するための蓋部材」は、容器および蓋部材で形成される閉空間を密閉し、「容器を密閉するためのカバー部材」は、蓋部材、容器およびカバー部材で形成される閉空間を密閉することを意味する。さらに、「液密空間」とは、蓋部材と容器とが密着して形成された密閉空間が液体で満たされている状態をいう。 In the present invention, "partitioning the inside of a container into an upper space and a lower space" refers to partitioning the upper and lower sides of a storage space of a container that can store liquids, gases, fragile substances, and the like. Therefore, the "lid member for sealing the lower space" seals the closed space formed by the container and the lid member, and the "cover member for sealing the container" is formed by the lid member, the container, and the cover member. It means to seal a closed space that is closed. Further, the term "liquid-tight space" refers to a state in which a sealed space formed by the lid member and the container being in close contact with each other is filled with liquid.

本発明において、「蓋部材に設けられた注入口」とは、液体をスポイトなどを使用して注入することができる、蓋部材に設けられた開口部をいう。注入口は、液体の粘度などにより毛細管現象が起こり、蓋部材を容器から取り外す際に注入口が液体で閉塞されてしまうなどの問題を避けるために、十分な大きさを有することが好ましい。注入口の直径は、例えば、約３～６０ｍｍ、好ましくは約１０～６０ｍｍ、より好ましくは約４０～６０ｍｍとすることができる。 In the present invention, the "injection port provided in the lid member" refers to an opening provided in the lid member through which a liquid can be injected using a dropper or the like. The injection port preferably has a sufficient size to avoid problems such as capillarity caused by the viscosity of the liquid and the liquid clogging the injection port when the lid member is removed from the container. The inlet diameter can be, for example, about 3-60 mm, preferably about 10-60 mm, more preferably about 40-60 mm.

本発明において、蓋部材の凸部とは、例えば、蓋部材の突き出ている部分、膨らんでいる部分などをいう。凸部の形状は、自由に設定することができるが、少なくともその一部をドーム形状とすることが好ましい。また、ドーム形状の頂部が、蓋部材の縁部付近に位置づけられるように設計することが好ましい。頂部を有するドーム形状とは、ドーム形状部分の水平断面積が垂直上方に向かうほど小さくなることをいう。ドーム形状部分の曲面形状としては、双曲面形状、放物面形状、半球面形状、円錐面形状、角錐面形状などが挙げられるが、これに限定されない。 In the present invention, the protruding portion of the lid member refers to, for example, a projecting portion or a bulging portion of the lid member. The shape of the convex portion can be freely set, but it is preferable that at least a portion of the convex portion be dome-shaped. It is also preferred that the dome-shaped top is designed to be positioned near the edge of the lid member. A dome shape having a top portion means that the horizontal cross-sectional area of the dome shape portion decreases as it goes vertically upward. The curved surface shape of the dome-shaped portion includes, but is not limited to, a hyperboloid shape, a paraboloid shape, a hemispherical shape, a conical surface shape, a pyramidal surface shape, and the like.

本発明において、脆弱物は液体が収容された容器内の液体中に保持される。脆弱物の液体中での位置は、特に限定されないが、蓋部材を容器に取り付けて密閉空間を形成した状態で、蓋部材と脆弱物とが接触しない位置に配置される（または接触してもよい）。好ましくは、脆弱物は、容器の液体中で、容器の底面上、底面付近などに配置される。 In the present invention, the fragile object is held in liquid within a container containing the liquid. The position of the fragile object in the liquid is not particularly limited, but in a state where the lid member is attached to the container to form a closed space, the lid member and the fragile object are arranged at a position where they do not contact (or even if they contact) good). Preferably, the frangible object is located in the liquid of the container, on, near the bottom, etc. of the container.

〔第１実施形態〕
本発明の一側面は、脆弱物を収容するための容器と、容器内を上部空間と下部空間に仕切り、該下部空間を密閉するための蓋部材とを含む、デバイスであって、蓋部材を容器に取り付けて蓋部材に設けられた注入口から液体を注入して注入口を閉塞することで、下部空間の液密を達成することができる、前記デバイスに関する。[First embodiment]
One aspect of the present invention is a device including a container for housing a fragile object, and a lid member for dividing the interior of the container into an upper space and a lower space and sealing the lower space, wherein the lid member is The device is attached to a container and injects a liquid through an inlet provided in a lid member to close the inlet, thereby achieving liquid-tightness in the lower space.

以下、本発明の好適な実施形態について、図面を参照しつつ詳細に説明する。
まず、本発明の第１実施形態について説明する。
図１は、本発明の第１実施形態に係るデバイス１の斜視図、図２は、第１実施形態に係るデバイス１の断面図、図３は、第１実施形態の第１変形例に係るデバイス１Ａの断面図である。なお、本願における各図において、説明を容易とするため、各部材の大きさは、適宜強調されており、図示の各部材は、実際の大きさを示すものではない。Preferred embodiments of the present invention will now be described in detail with reference to the drawings.
First, a first embodiment of the present invention will be described.
1 is a perspective view of the device 1 according to the first embodiment of the present invention, FIG. 2 is a cross-sectional view of the device 1 according to the first embodiment, and FIG. 3 is a first modification of the first embodiment. It is a sectional view of device 1A. In addition, in each drawing in the present application, the size of each member is appropriately emphasized for ease of explanation, and each member shown does not indicate the actual size.

図１に示すように、本発明の第１実施形態に係るデバイス１は、容器２、容器２内を上部空間と下部空間に仕切るための蓋部材３を含み、容器を密閉するためのカバー部材４を含んでもよい。容器２は、開口部を取り囲む縁部２１を有する汎用シャーレの形状を有しており、脆弱物Ｓなどを収容できる収容空間を構成する。蓋部材３は、天板部３１と天板部３１の周縁から延伸する筒状壁３３、３４を含む。天板部３１は、容器２の内周面に密着して容器２内を上部空間と下部空間に仕切り、下部空間を密閉することができる。カバー部材４は、容器２を覆って縁部２１に密着し、容器２を密閉することができる。すなわち、容器２に蓋部材３を取り付け、さらにその上からカバー部材４を取り付けることで、容器２の下部空間を蓋部材３で密閉し、容器２の上部空間をカバー部材４で密閉することができる。天板部３１の周縁部付近には開口部３５が設けられている。 As shown in FIG. 1, the device 1 according to the first embodiment of the present invention includes a container 2, a lid member 3 for partitioning the inside of the container 2 into an upper space and a lower space, and a cover member for sealing the container. 4 may be included. The container 2 has the shape of a general-purpose petri dish having a rim 21 surrounding the opening, and constitutes a storage space in which fragile objects S and the like can be stored. The lid member 3 includes a top plate portion 31 and cylindrical walls 33 and 34 extending from the periphery of the top plate portion 31 . The top plate portion 31 can be in close contact with the inner peripheral surface of the container 2 to partition the interior of the container 2 into an upper space and a lower space, thereby hermetically sealing the lower space. The cover member 4 can cover the container 2 and adhere to the rim 21 to seal the container 2 . That is, by attaching the lid member 3 to the container 2 and further attaching the cover member 4 from above, it is possible to seal the lower space of the container 2 with the lid member 3 and seal the upper space of the container 2 with the cover member 4. can. An opening 35 is provided near the periphery of the top plate 31 .

図１Ａに示すように、蓋部材３は、天板部３１の周縁から下方に延伸する下側筒状壁３３と天板部３１の周縁から上方に延伸する上側筒状壁３４とを含む。下側筒状壁３３および上側筒状壁３４は共に、容器２の内周面に密着するように構成されている。すなわち、天板部３１の直径は、容器２の内径と略同一であり、天板部３１を容器２に取り付けると、天板部３１の周縁部が容器２の内側面に密着し、天板部３１と容器２の内面とで密閉される下部空間Ｐを形成することができる。上側筒状壁３４の上端部３６の外径は容器２の内径より大きく、縁部２１に載置できるように構成されている。蓋部材３の天板部３１の周縁部付近には、注入口３５が設けられており、蓋部材３を容器２に取り付けた状態で、蓋部材３の注入口３５の高さが容器２の縁部２１の高さ以下になるように構成されている。 As shown in FIG. 1A , the lid member 3 includes a lower tubular wall 33 extending downward from the peripheral edge of the top plate portion 31 and an upper tubular wall 34 extending upward from the peripheral edge of the top plate portion 31 . Both the lower tubular wall 33 and the upper tubular wall 34 are configured to closely contact the inner peripheral surface of the container 2 . That is, the diameter of the top plate portion 31 is substantially the same as the inner diameter of the container 2, and when the top plate portion 31 is attached to the container 2, the peripheral portion of the top plate portion 31 is in close contact with the inner surface of the container 2, and the top plate A sealed lower space P can be formed by the portion 31 and the inner surface of the container 2 . The outer diameter of the upper end 36 of the upper tubular wall 34 is greater than the inner diameter of the container 2 and is configured to rest on the rim 21 . An injection port 35 is provided near the peripheral edge of the top plate portion 31 of the lid member 3 , and when the lid member 3 is attached to the container 2 , the height of the injection port 35 of the lid member 3 is the height of the container 2 . It is configured so as to be equal to or lower than the height of the edge portion 21 .

図２Ｂに示すように、デバイス１を使用する際は、容器２の下部空間に液体Ｌおよび脆弱物Ｓを収容し、蓋部材３を容器２に取り付ける。上側筒状壁３４の上端部３６は、蓋部材３を容器２内へ押し込む際のストッパーとしての役目を果たす。すなわち、蓋部材３を容器２内へ押し込む際に、上側筒状壁３４の上端部３６が縁部２１上で係止するため、天板部３１を必要以上に押し込んで脆弱物Ｓを傷つけることがない。また、下側筒状壁３３も同様の効果を奏する。上側筒状壁３４の上端部３６は、蓋部材３を容器２に取り付けた際に、容器２の縁部２１上に位置するため、上側筒状壁３４の上端部３６を掴んで引き上げることで、容器２内空間に位置する天板部３１を簡単に取り外すことができる。 As shown in FIG. 2B, when using the device 1 , the lower space of the container 2 contains the liquid L and the fragile object S, and the lid member 3 is attached to the container 2 . The upper end 36 of the upper tubular wall 34 serves as a stopper when pushing the lid member 3 into the container 2 . That is, when the lid member 3 is pushed into the container 2, the upper end portion 36 of the upper cylindrical wall 34 is locked on the edge portion 21, so that the top plate portion 31 is pushed more than necessary to damage the fragile object S. There is no Further, the lower cylindrical wall 33 also has the same effect. Since the upper end portion 36 of the upper cylindrical wall 34 is located on the edge portion 21 of the container 2 when the lid member 3 is attached to the container 2, the upper end portion 36 of the upper cylindrical wall 34 can be grasped and pulled up. , the top plate portion 31 located in the inner space of the container 2 can be easily removed.

そして、スポイトなどを利用して注入口３５から液体Ｌをゆっくりと注入し、下部空間Ｐを液体Ｌで満たす。この際に、注入口３５は天板部３１の周縁部付近、すなわち、天板部３１の中央部から離れた位置に配置されているため、注入口３５から注入された液体Ｌが脆弱物上に落水して、脆弱物を直接的に傷つけるようなことを防ぐことができる。また、注入口３５から液体Ｌを注入する際に液体Ｌが溢れ出た場合であっても、注入口３５は容器２の縁部２１よりも低い位置にあるため、天板部３１と容器２の開口部とで囲まれた上部空間Ｕ内に留まり、容器２の外に漏出することがなく衛生的である。そして、注入口３５に栓体３７を取り付けることで、下部空間Ｐを液密状態にすることができる。その後、容器２の上にさらにカバー部材４を被せて密閉することで、移送中であっても上部空間Ｕ内の液体Ｌが漏出することがない。 Then, the lower space P is filled with the liquid L by slowly injecting the liquid L from the injection port 35 using a dropper or the like. At this time, since the injection port 35 is arranged near the peripheral portion of the top plate portion 31, that is, at a position away from the central portion of the top plate portion 31, the liquid L injected from the injection port 35 is placed on the fragile object. It is possible to prevent direct damage to fragile objects by falling into the water. Further, even if the liquid L overflows when the liquid L is injected from the injection port 35, the injection port 35 is positioned lower than the edge 21 of the container 2. It stays in the upper space U surrounded by the opening of , and is hygienic without leaking out of the container 2 . By attaching the plug 37 to the inlet 35, the lower space P can be liquid-tight. After that, the container 2 is further covered with the cover member 4 to seal the container 2, so that the liquid L in the upper space U does not leak even during transfer.

脆弱物Ｓを使用する際は、まずカバー部材４および栓体３７を取り外し、下部空間Ｐの液密状態を解除した上で、蓋部材３を取り外す。液体は非圧縮性であるため、蓋部材３と容器２とで取り囲まれた下部空間Ｐを液密にした状態で、蓋部材３を取り外すことは一般的に困難であるが、注入口３５を開放して液密状態を解除することで、蓋部材３を簡単に取り外すことができる。上部空間Ｕ内の液体Ｌは、蓋部材３を簡単に取り外す際に注入口３５を通って下部空間Ｐ内に戻るため、容器２から漏出することがない。本発明のデバイス１においては、液密状態において液面が容器２の縁部２１よりも下に位置し、蓋部材３を取り外しても液体Ｌが容器２から漏出することがないため、事前にスポイトなどで液体Ｌを排出する必要はない。 When using the fragile object S, the cover member 4 and the stopper 37 are first removed, the liquid-tight state of the lower space P is released, and then the lid member 3 is removed. Since the liquid is incompressible, it is generally difficult to remove the lid member 3 while the lower space P surrounded by the lid member 3 and the container 2 is liquid-tight. The lid member 3 can be easily removed by opening it to release the liquid-tight state. The liquid L in the upper space U does not leak from the container 2 because it returns to the lower space P through the inlet 35 when the lid member 3 is simply removed. In the device 1 of the present invention, the liquid surface is located below the edge 21 of the container 2 in the liquid-tight state, and the liquid L does not leak from the container 2 even when the lid member 3 is removed. There is no need to discharge the liquid L with a dropper or the like.

以上、本発明の第１実施形態に係るデバイス１によれば、簡便な機構と、簡単な作業で効率よく液密状態を達成することができるため、作業性や製造コストの点において大きなメリットがある。そして、容器内を完全に液密状態にできるため、気泡（気体）が容器内にはいらず、移送中の容器の揺れなどによって気泡が容器内で動いて脆弱物を破損することがない。特に、脆弱物がシート状細胞培養物の積層体である場合に、気泡が移動して、積層体がズレたり欠損したりすることがない。したがって、液体中の脆弱物の形状を保持して変形を防止しつつ、長期保存することができる。 As described above, according to the device 1 according to the first embodiment of the present invention, it is possible to efficiently achieve a liquid-tight state with a simple mechanism and a simple operation, so there are great advantages in terms of workability and manufacturing cost. be. Since the inside of the container can be made completely liquid-tight, air bubbles (gas) do not enter the container, and air bubbles do not move inside the container due to shaking of the container during transportation and damage fragile objects. In particular, when the fragile object is a layered body of sheet-like cell cultures, the layered body is not displaced or damaged due to movement of air bubbles. Therefore, it is possible to store the fragile object for a long period of time while maintaining the shape of the fragile object in the liquid and preventing deformation.

また、本発明の第１実施形態に係るデバイス１は、液密状態を簡単に解除することができるため、例えば、作業者の蓋部材の無理な取り外しによる、容器の振動や液体の流動の発生を抑えることができ、脆弱物を破損することがない。また、周囲を汚染することなく作業を行うことができるため、シート状細胞培養物の作製に使用されるバイオクリーンルームや、シート状細胞培養物が使用される集中治療室など、清浄度が厳密に管理されている場所での使用に適している。 In addition, since the liquid-tight state of the device 1 according to the first embodiment of the present invention can be easily released, for example, when the lid member is forcibly removed by the operator, vibration of the container or flow of the liquid may occur. can be suppressed, and fragile objects are not damaged. In addition, since the work can be performed without contaminating the surroundings, the cleanliness is strictly maintained in bio-clean rooms used for the preparation of sheet-like cell cultures and intensive care units where sheet-like cell cultures are used. Suitable for use in controlled locations.

本実施形態は、種々の変形例を有することができる。例えば、蓋部材３は、下側筒状壁３３および／または上側筒状壁３４を有さなくてもよい。すなわち、蓋部材３は、すくなくとも天板部３１および注入口３５を有していればよく、この場合は、天板部３１の周縁部と容器２の内面とを係合させて、下部空間Ｐと上部空間Ｕが形成されるようにしてもよい。蓋部材３を着脱する際は、注入口３５にピンセットなどで引っ掛けて、上下に動かすようにしてもよい。蓋部材３が下側筒状壁３３を有する場合は、下側筒状壁３３と容器２の底面とを係合させることで下部空間Ｐを構成してもよい。デバイス１の垂直方向および水平方向の寸法誤差を吸収するために、容器２と蓋部材３との間、蓋部材３とカバー部材４との間、容器２とカバー部材４との間などに弾性材料で成型されたパッキンリングを適宜入れてもよいし、デバイス１の少なくとも一部を弾性材料で成型してもよい。 This embodiment can have various modifications. For example, lid member 3 may not have lower tubular wall 33 and/or upper tubular wall 34 . That is, the lid member 3 should have at least the top plate portion 31 and the injection port 35. In this case, the peripheral edge portion of the top plate portion 31 and the inner surface of the container 2 are engaged to form the lower space P. and an upper space U may be formed. When the lid member 3 is attached or detached, it may be moved up and down by hooking the inlet 35 with tweezers or the like. When the lid member 3 has a lower tubular wall 33 , the lower space P may be formed by engaging the lower tubular wall 33 with the bottom surface of the container 2 . In order to absorb dimensional errors in the vertical and horizontal directions of the device 1, an elastic material is provided between the container 2 and the lid member 3, between the lid member 3 and the cover member 4, between the container 2 and the cover member 4, etc. A packing ring molded from a material may be included as appropriate, and at least a portion of the device 1 may be molded from an elastic material.

〔第２実施形態〕
次に、本発明の第２実施形態について説明する。以下、第１実施形態との相違点について詳細に説明し、同様の事項については、説明を省略する。なお、本願における各図において、説明を容易とするため、各部材の大きさは、適宜強調されており、図示の各部材は、実際の大きさを示すものではない。[Second embodiment]
Next, a second embodiment of the invention will be described. Differences from the first embodiment will be described in detail below, and descriptions of the same items will be omitted. In addition, in each drawing in the present application, the size of each member is appropriately emphasized for ease of explanation, and each member shown does not indicate the actual size.

図３Ａに示すように、本発明の第２実施形態に係るデバイス１Ａは、容器２Ａ、容器２Ａ内を上部空間と下部空間に仕切るための蓋部材３Ａを含み、容器を密閉するためのカバー部材４を含んでもよい。容器２Ａは、上部２２および下部２３を含む有底筒状の容器であり、下部２３は、脆弱物Ｓなどを収容できる空間を構成する。上部２２の内径は下部２３の内径より大きく、上部２２と下部２３との境界に段差部２４が設けられている。蓋部材３Ａの天板部３１の直径は、容器２Ａ上部２２の内径より小さく、容器２Ａ下部２３の内径より大きく、天板部３１を段差部２４上に載置することができる。天板部３１はドーム形状の凸部３２を有し、凸部３２の頂部には注入口３５が設けられている。凸部３２の高さは、容器２Ａ上部２２の高さと略同じであり、蓋部材３Ａを容器２Ａに取り付けた状態で、蓋部材３Ａの注入口３５の高さが容器２Ａの縁部２１の高さ以下になるように構成されている。 As shown in FIG. 3A, a device 1A according to the second embodiment of the present invention includes a container 2A, a lid member 3A for partitioning the interior of the container 2A into an upper space and a lower space, and a cover member for sealing the container. 4 may be included. The container 2A is a bottomed cylindrical container including an upper portion 22 and a lower portion 23, and the lower portion 23 forms a space in which a fragile object S or the like can be accommodated. The inner diameter of the upper portion 22 is larger than the inner diameter of the lower portion 23 , and a stepped portion 24 is provided at the boundary between the upper portion 22 and the lower portion 23 . The diameter of the top plate portion 31 of the lid member 3A is smaller than the inner diameter of the upper portion 22 of the container 2A and larger than the inner diameter of the lower portion 23 of the container 2A, so that the top plate portion 31 can be placed on the stepped portion 24 . The top plate portion 31 has a dome-shaped convex portion 32 , and an injection port 35 is provided at the top of the convex portion 32 . The height of the convex portion 32 is substantially the same as the height of the upper portion 22 of the container 2A. It is configured to be below height.

カバー部材４Ａは、天板部４１と天板部４１の周縁から垂下する筒状スカート壁４２および筒状スカート壁４２の内周面に設けられる雌ネジ部４３を含む。雌ネジ部４３は、容器２Ａの外周面に設けられる雄ネジ部２５と螺合し、カバー部材４Ａを容器２Ａに螺着させることができる。本実施形態において、デバイス１Ａは、緩衝部材Ｂをさらに含んでもよい。緩衝部材Ｂの直径は、容器２Ａ上部２２の内径より小さく、容器２Ａ下部２３の内径より大きく、緩衝部材Ｂを段差部２４上に載置することができる。緩衝部材Ｂは、複数の小孔が設けられた液体Ｌ透過性の板状部材である。 The cover member 4</b>A includes a top plate portion 41 , a tubular skirt wall 42 hanging down from the peripheral edge of the top plate portion 41 , and a female screw portion 43 provided on the inner peripheral surface of the tubular skirt wall 42 . The female threaded portion 43 can be screwed with the male threaded portion 25 provided on the outer peripheral surface of the container 2A, and the cover member 4A can be screwed onto the container 2A. The device 1A may further include a cushioning member B in this embodiment. The diameter of the cushioning member B is smaller than the inner diameter of the upper portion 22 of the container 2A and larger than the inner diameter of the lower portion 23 of the container 2A, so that the cushioning member B can be placed on the stepped portion 24 . The cushioning member B is a plate-like member that is permeable to the liquid L and provided with a plurality of small holes.

図３Ａおよび図３Ｂに示すように、デバイス１Ａを使用する際は、容器２Ａの下部２３に液体Ｌおよび脆弱物Ｓを収容し、段差部２４に緩衝部材Ｂを載置する。そして、緩衝部材Ｂの上に蓋部材３Ａを載置して、注入口３５からさらに液体Ｌを注入する。注入された液体Ｌは緩衝部材Ｂで緩衝されるため、脆弱物上に落水して、脆弱物を直接的に傷つけるようなことを防ぐことができる。液体Ｌは、緩衝部材Ｂの小孔を通過して緩やかに下部２３空間を満たし、さらに蓋部材３Ａと緩衝部材Ｂとの間の凸部３２内空間を満たす。この際に、液面に気泡などが存在する場合、気泡はドーム形状の凸部３２の曲面に沿って上方に押し出される。すなわち、凸部３２は水平面に対して傾斜しているため、気泡に浮力が掛りやすく、気泡を確実に押し出すことができる。 As shown in FIGS. 3A and 3B, when using the device 1A, the lower portion 23 of the container 2A contains the liquid L and the fragile object S, and the buffer member B is placed on the stepped portion 24 . Then, the lid member 3A is placed on the buffer member B, and the liquid L is further injected from the injection port 35. As shown in FIG. Since the injected liquid L is buffered by the buffer member B, it is possible to prevent the fragile object from being directly damaged by falling on the fragile object. The liquid L passes through the small holes of the cushioning member B and gently fills the space in the lower part 23 and further fills the space in the protrusion 32 between the lid member 3A and the cushioning member B. As shown in FIG. At this time, if bubbles or the like exist on the liquid surface, the bubbles are pushed upward along the curved surface of the dome-shaped convex portion 32 . That is, since the convex portion 32 is inclined with respect to the horizontal plane, buoyancy is easily applied to the bubbles, and the bubbles can be reliably pushed out.

また、注入口３５から液体Ｌを注入する際に液体Ｌが溢れ出た場合であっても、液体Ｌは凸部３２に沿って、凸部３２と容器２Ａの上部２２との間の空間Ｇに溜まり、容器２Ａの外に漏出することがなく衛生的である。そして、カバー部材４Ａを容器２Ａに被せ、雌ネジ部４３と雄ネジ部２５とを螺合させて、カバー部材４Ａを容器２Ａに螺着させる。これにより、カバー部材４Ａと容器２Ａの段差部２４との間で蓋部材３Ａおよび緩衝部材Ｂを挟持して密着性を高めることができる。そして、カバー部材４Ａの内面を注入口３５に押し付けることで注入口３５を閉塞して、蓋部材３Ａと容器２Ａとで囲まれた空間を液密状態にすることができる。液密性を高めるために、注入口３５を取り囲むようにパッキンリングを配置して、カバー部材４Ａと蓋部材３Ａとの間で挟持してもよい。 Further, even if the liquid L overflows when the liquid L is injected from the injection port 35, the liquid L flows along the convex portion 32 and flows into the space G between the convex portion 32 and the upper portion 22 of the container 2A. It is hygienic because it does not accumulate in the container 2A and does not leak out of the container 2A. Then, the container 2A is covered with the cover member 4A, and the female screw portion 43 and the male screw portion 25 are screwed together to screw the cover member 4A onto the container 2A. As a result, the cover member 3A and the cushioning member B can be sandwiched between the cover member 4A and the stepped portion 24 of the container 2A to enhance the adhesion. By pressing the inner surface of the cover member 4A against the injection port 35, the injection port 35 can be closed and the space surrounded by the lid member 3A and the container 2A can be liquid-tight. In order to improve the liquid-tightness, a packing ring may be arranged so as to surround the injection port 35 and sandwiched between the cover member 4A and the lid member 3A.

脆弱物Ｓを使用する際は、カバー部材４を取り外して液密状態を解除した上で、蓋部材３Ａを取り外す。凸部３２内の液体Ｌは空間Ｇに受容されるため、容器２Ａから漏出することがない。本発明のデバイス１Ａにおいては、液密状態において液面が容器２Ａの縁部２１の高さにあり、蓋部材３Ａを取り外しても液体Ｌが容器２Ａから漏出することがないため、事前にスポイトなどで液体Ｌを排出する必要はない。また、蓋部材３Ａを取り外した際に凸部３２内の液体Ｌが容器２Ａ内で流動するが、緩衝部材Ｂによって流動が緩和されるため、脆弱物Ｓの損傷を防ぐことができる。次に緩衝部材Ｂを取り外して、脆弱物Ｓを取り出して使用する。 When using the fragile object S, the cover member 4 is removed to release the liquid-tight state, and then the lid member 3A is removed. Since the liquid L in the convex portion 32 is received in the space G, it does not leak out of the container 2A. In the device 1A of the present invention, the liquid surface is at the height of the edge 21 of the container 2A in the liquid-tight state, and the liquid L does not leak from the container 2A even when the lid member 3A is removed. It is not necessary to discharge the liquid L by, for example. Further, when the lid member 3A is removed, the liquid L in the convex portion 32 flows in the container 2A, but the flow is moderated by the buffer member B, so damage to the fragile object S can be prevented. Next, the cushioning member B is removed, and the fragile object S is taken out and used.

以上、本発明の第２実施形態に係るデバイス１Ａによれば、簡便な機構と、簡単な作業で効率よく液密状態を達成することができるため、作業性や製造コストの点において大きなメリットがある。そして、容器内を完全に液密状態にできるため、気泡（気体）が容器内にはいらず、移送中の容器の揺れなどによって気泡が容器内で動いて脆弱物を破損することがない。特に、脆弱物がシート状細胞培養物の積層体である場合に、気泡が移動して、積層体がズレたり欠損したりすることがない。したがって、液体中の脆弱物の形状を保持して変形を防止しつつ、長期保存することができる。 As described above, according to the device 1A according to the second embodiment of the present invention, it is possible to efficiently achieve a liquid-tight state with a simple mechanism and simple work, so there are great advantages in terms of workability and manufacturing cost. be. Since the inside of the container can be made completely liquid-tight, air bubbles (gas) do not enter the container, and air bubbles do not move inside the container due to shaking of the container during transportation and damage fragile objects. In particular, when the fragile object is a layered body of sheet-like cell cultures, the layered body is not displaced or damaged due to movement of air bubbles. Therefore, it is possible to store the fragile object for a long period of time while maintaining the shape of the fragile object in the liquid and preventing deformation.

また、本発明の第２実施形態に係るデバイス１Ａは、液密状態を簡単に解除することができるため、例えば、作業者の蓋部材の無理な取り外しによる、容器の振動や液体の流動の発生を抑えることができ、脆弱物を破損することがない。また、周囲を汚染することなく作業を行うことができるため、シート状細胞培養物の作製に使用されるバイオクリーンルームや、シート状細胞培養物が使用される集中治療室など、清浄度が厳密に管理されている場所での使用に適している。 In addition, since the liquid-tight state of the device 1A according to the second embodiment of the present invention can be easily released, for example, when the operator forcibly removes the cover member, the container vibrates or the liquid flows. can be suppressed, and fragile objects are not damaged. In addition, since the work can be performed without contaminating the surroundings, the cleanliness is strictly maintained in bio-clean rooms used for the preparation of sheet-like cell cultures and intensive care units where sheet-like cell cultures are used. Suitable for use in controlled locations.

本実施形態は、種々の変形例を有することができる。例えば、凸部３２の注入口３５が容器２Ａ下部２３の周縁部付近に位置づけられるように、頂部が容器２Ａ下部２３の周縁部付近に位置づけられるように凸部３２のドーム形状を設計してもよい。これにより、注入口３５から注入された液体Ｌが脆弱物を傷つけるようなことを防ぐことができる。この場合は、緩衝部材Ｂを省略してもよい。カバー部材４Ａに天板部４１から下方に突出する凸部を設け、かかる凸部で蓋部材３Ａの注入口３５を閉塞するようにしてもよい。この場合は、蓋部材３Ａの凸部３２の高さを低く、すなわち、凸部３２内の液体Ｌの量を少なくできるため水流の発生を抑えることができる。デバイス１Ａの垂直方向および水平方向の寸法誤差を吸収するために、弾性シール材を各部材間に配置してもよい。 This embodiment can have various modifications. For example, the dome shape of the protrusion 32 may be designed such that the injection port 35 of the protrusion 32 is positioned near the periphery of the lower portion 23 of the container 2A and the top is positioned near the periphery of the lower portion 23 of the container 2A. good. This can prevent the liquid L injected from the injection port 35 from damaging fragile objects. In this case, the cushioning member B may be omitted. The cover member 4A may be provided with a convex portion projecting downward from the top plate portion 41, and the injection port 35 of the lid member 3A may be closed by the convex portion. In this case, the height of the convex portion 32 of the lid member 3A can be lowered, that is, the amount of the liquid L in the convex portion 32 can be reduced, so that generation of water flow can be suppressed. An elastic sealing material may be placed between each member to absorb vertical and horizontal dimensional errors of the device 1A.

以上、本発明を図示の実施形態について説明したが、本発明はこれに限定されるものではない。第１および第２実施形態における蓋部材３および３Ａと、容器２および２Ａと、カバー部材４および４Ａと、緩衝部材Ｂは、自由に組み合わせることができる。例えば、蓋部材３の注入口３５の真下に注入口３５と略同じ大きさの緩衝部材Ｂを連結部材で連結して、液体の流動を抑えるようにしてもよい。デバイス１Ａの螺合機構をデバイス１に適用してもよい。当業者は様々な公知の機構をデバイスに適用して、蓋部材と容器、カバー部材と容器とを密着させることができる。
本発明においては、各構成は、同様の機能を発揮し得る任意のものと置換することができ、あるいは、任意の構成を付加することもできる。Although the present invention has been described with reference to the illustrated embodiments, the present invention is not limited thereto. The lid members 3 and 3A, the containers 2 and 2A, the cover members 4 and 4A, and the buffer member B in the first and second embodiments can be freely combined. For example, a buffer member B having substantially the same size as the inlet 35 may be connected directly below the inlet 35 of the lid member 3 with a connecting member to suppress the flow of the liquid. You may apply the screwing mechanism of the device 1A to the device 1. FIG. A person skilled in the art can apply various known mechanisms to the device to bring the lid member and the container and the cover member and the container into close contact.
In the present invention, each component can be replaced with any one capable of exhibiting a similar function, or any component can be added.

本発明のデバイスを用いた脆弱物の使用は、例えば以下の工程によって順次行うことができる。
（１）容器の下部空間に液体および脆弱物を収容する。
（２）蓋部材で下部空間を密閉する。
（３）注入口からさらに液体を注入して下部空間を液体で満たす。
（４）注入口を閉塞して液密空間を形成する。
（５）デバイスを移送する。
（６）注入口を開放して液密状態を解除する。
（７）蓋部材を容器から取り外す。
（８）脆弱物を取り出して使用する。The use of fragile materials with the device of the present invention can be performed sequentially, for example by the following steps.
(1) A liquid and a fragile object are stored in the lower space of the container.
(2) The lid member seals the lower space.
(3) Filling the lower space with liquid by injecting further liquid from the inlet.
(4) Close the inlet to form a liquid-tight space.
(5) transport the device;
(6) Release the liquid-tight state by opening the inlet.
(7) Remove the lid member from the container.
(8) Take out and use fragile objects.

１、１Ａ デバイス
２、２Ａ 容器
２１ 縁部
２２ 上部
２３ 下部
２４ 段差部
２５ 雄ネジ部
３、３Ａ 蓋部材
３１ 天板部
３２ 凸部
３３ 下側筒状壁
３４ 上側筒状壁
３５ 注入口
３６ 上端部
３７ 栓体
４、４Ａ カバー部材
４１ 天板部
４２ 筒状スカート壁
４３ 雌ネジ部1, 1A Device 2, 2A Container 21 Edge 22 Upper part 23 Lower part 24 Stepped part 25 Male screw part 3, 3A Lid member 31 Top plate part 32 Protruding part 33 Lower cylindrical wall 34 Upper cylindrical wall 35 Inlet 36 Upper end Portion 37 Plug 4, 4A Cover member 41 Top plate portion 42 Cylindrical skirt wall 43 Female screw portion

Claims (6)

シート状細胞培養物を収容するための容器と、容器内を上部空間と下部空間に仕切り、該下部空間を密閉するための蓋部材とを含む、デバイスであって、蓋部材を容器に取り付けて蓋部材に設けられた注入口から液体を注入して注入口を閉塞することで、下部空間の液密を達成することができ、注入口が容器の周縁部付近に位置づけられる、前記デバイス。 A device comprising a container for containing a sheet-shaped cell culture , and a lid member for partitioning the interior of the container into an upper space and a lower space and sealing the lower space, wherein the lid member is attached to the container The above device, wherein the lower space can be liquid-tight by injecting a liquid through an inlet provided in the lid member and closing the inlet, wherein the inlet is positioned near the periphery of the container . 蓋部材の少なくとも一部がドーム形状の凸部を有し、該凸部の頂部に注入口が設けられる、請求項１に記載のデバイス。 2. The device of claim 1 , wherein at least a portion of the lid member has a dome-shaped projection, and an injection port is provided at the top of the projection. 蓋部材を容器に取り付けた状態で、蓋部材の注入口の高さが容器の縁部の高さ以下になるように構成される、請求項１または２に記載のデバイス。 3. The device of claim 1 or 2 , wherein the lid member is configured such that the height of the inlet of the lid member is equal to or less than the height of the rim of the container when the lid member is attached to the container. 容器を密閉するためのカバー部材をさらに含む、請求項１～３のいずれか一項に記載のデバイス。 The device of any one of claims 1-3 , further comprising a cover member for sealing the container. 蓋部材と容器との間に介在する緩衝部材をさらに含む、請求項１～４のいずれか一項に記載のデバイス。 The device according to any one of claims 1 to 4 , further comprising a cushioning member interposed between the lid member and the container. シート状細胞培養物が、積層体である、請求項１～５のいずれか一項に記載のデバイス。 The device according to any one of claims 1 to 5 , wherein the sheet-like cell culture is a laminate.
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