JP7222471B2 - 医薬品組成物及び化粧品組成物 - Google Patents
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Description
5mLのL-グルタミン(25030-081、Invitrogen)、5mLの非必須アミノ酸溶液(11140-050、Invitrogen)、1mLの2-メルカプトエタノール(21985-023、Invitrogen)、2.5mLのペニシリン/ストレプトマイシン(15140-122、Invitrogen)にDMEM/F12(10565-018、Invitrogen)、及び代替血清(KSR:KnockOut Serum Replacement、登録商標、10828028、Invitrogen)を加えて、全量が500mLの培地を作製した。当該培地に、0.2mLの10μg/mL bFGF(basic fibroblast growth factor、R and D)を添加し、幹細胞用培地とした。幹細胞用培地におけるbFGFの濃度は、4ng/mLであった。
実施例1と同様にヒトiPS細胞を維持培養した。その後、実施例1と同様に、ヒトiPS細胞を接着培養用シャーレから剥がし、シングルセルまで分割した。次に、ジェランガム及び10μmol/LのROCK阻害剤(Selleck)を添加してゲル化した幹細胞用培地にヒトiPS細胞を播種し、ヒトiPS細胞を21日間浮遊培養した。その間、二日に一度、ゲル化した幹細胞用培地を培養器に補充した。
実施例1と同様にヒトiPS細胞を維持培養した。その後、実施例1と同様に、ヒトiPS細胞を接着培養用シャーレから剥がし、シングルセルまで分割した。次に、ジェランガム、及び100μmol/LのROCK阻害剤(Selleck)を添加してゲル化した幹細胞用培地にヒトiPS細胞を播種し、ヒトiPS細胞を14日間浮遊培養した。その間、二日に一度、ゲル化した幹細胞用培地を培養器に補充した。
特開2016-128396号公報に記載の実施例に準じてヒトiPS細胞を培養した。すなわち、実施例1と同じ幹細胞用培地を用いて、接着培養用シャーレ上のフィーダー細胞上で、ヒトiPS細胞を接着維持培養した。ヒトiPS細胞は、1週間ごとに継代した。継代の際には、ヒトiPS細胞を、0.25%トリプシン、0.1mg/mLのコラゲナーゼIV、1mmol/LのCaCl2、及び20%のKSRを含む剥離溶液で処理した。
増殖培地Aとして、10%FBS及び1%ペニシリン-ストレプトマイシン添加DMEM培地を用意した。次に、成人由来正常ヒト線維芽細胞(KF-4109、Strain No.01035、クラボウ)を、濃度が5×103細胞/0.1mL/ウェルとなるよう増殖培地Aで懸濁し、96ウェルプレートに播種して、CO2インキュベーター内(5%CO2、37℃)で1日間培養した。
実施例4と同様に、増殖培地Aで成人由来正常ヒト線維芽細胞を1日間培養した。その後、濃度が1.00v/v%、10.00v/v%又は100.0v/v%である以外は、実施例4と同様に、一部のウェル内の増殖培地Aを、実施例1から3及び比較例に係る上清添加培地Aのそれぞれに置換した。
増殖培地Bとして、増殖添加剤(10μg/mLのインスリン、0.1ng/mLのhEGF、0.67μg/mLのハイドロコーチゾン、4μL/mLのウシ脳下垂体抽出液BPE)及び抗菌剤(50μg/mLのゲンタマイシン、50ng/mLのアンフォテリシン)を含む500mLの表皮細胞培地(HuMedia-KG2、クラボウ)を用意した。
増殖培地Cとして、専用添加剤(牛胎児血清、インスリン・トランスフェリン・トリヨードサイロニン混液、牛下垂体抽出液、サイプロテロンアセテート)添加済みの毛乳頭細胞専用培地(Cat.No.TMTPGM-250、TOYOBO)を用意した。次に、正常ヒト毛乳頭細胞(Cat.No.CA60205a、Lot.No.2868、TOYOBO)を、濃度が1.2×104細胞/0.3mL/ウェルとなるよう増殖培地Cで懸濁し、typeIコラーゲンコート48ウェルプレートに播種して、CO2インキュベーター内(5%CO2、37℃)で1日間培養した。
実施例7と同様に、増殖培地Cで正常ヒト毛乳頭細胞を1日間培養した。その後、濃度が0.3v/v%、30.0v/v%、又は100.0v/v%である以外は、実施例7と同様に、一部のウェル内の増殖培地Cを、実施例1から3及び比較例に係る上清添加培地Cのそれぞれに置換した。
Claims (24)
- iPS細胞をNANOG、OCT3/4、及びTRA 1-60が陽性である未分化状態を維持して浮遊培養した培地(アクチビンAを含む培地を除く。)の上清を含む、皮膚のシミ、しわ及びたるみのいずれかの形成防止及び改善剤。
- iPS細胞をNANOG、OCT3/4、及びTRA 1-60が陽性である未分化状態を維持して浮遊培養した培地の上清を含む、コラーゲン産生促進剤。
- iPS細胞をNANOG、OCT3/4、及びTRA 1-60が陽性である未分化状態を維持して浮遊培養した培地の上清を含む、ヒアルロン酸産生促進剤。
- iPS細胞をNANOG、OCT3/4、及びTRA 1-60が陽性である未分化状態を維持して浮遊培養した培地(アクチビンAを含む培地を除く。)の上清を含む、創傷治療剤。
- iPS細胞をNANOG、OCT3/4、及びTRA 1-60が陽性である未分化状態を維持して浮遊培養した培地の上清を含む、表皮細胞増殖促進剤。
- iPS細胞をNANOG、OCT3/4、及びTRA 1-60が陽性である未分化状態を維持して浮遊培養した培地の上清を含む、発毛剤。
- iPS細胞をNANOG、OCT3/4、及びTRA 1-60が陽性である未分化状態を維持して浮遊培養した培地の上清を含む、育毛剤。
- iPS細胞をNANOG、OCT3/4、及びTRA 1-60が陽性である未分化状態を維持して浮遊培養した培地の上清を含む、毛乳頭細胞の活性化剤。
- iPS細胞をNANOG、OCT3/4、及びTRA 1-60が陽性である未分化状態を維持して浮遊培養した培地の上清を含む、線維芽細胞成長因子ファミリー産生促進剤。
- iPS細胞をNANOG、OCT3/4、及びTRA 1-60が陽性である未分化状態を維持して浮遊培養した培地の上清を含む、血管内皮細胞増殖因子産生促進剤。
- iPS細胞をNANOG、OCT3/4、及びTRA 1-60が陽性である未分化状態を維持して浮遊培養した培地の上清を含む、線維芽細胞及び表皮細胞をストレスから保護する細胞保護剤。
- iPS細胞をNANOG、OCT3/4、及びTRA 1-60が陽性である未分化状態を維持して浮遊培養した培地の上清を含む、ストレスを受けた線維芽細胞及び表皮細胞の生存率を向上させる細胞生存率向上剤。
- iPS細胞をNANOG、OCT3/4、及びTRA 1-60が陽性である未分化状態を維持して接着培養した培地(アクチビンAを含む培地を除く。)の上清を含む、皮膚のシミ、しわ及びたるみのいずれかの形成防止及び改善剤。
- iPS細胞をNANOG、OCT3/4、及びTRA 1-60が陽性である未分化状態を維持して接着培養した培地の上清を含む、コラーゲン産生促進剤。
- iPS細胞をNANOG、OCT3/4、及びTRA 1-60が陽性である未分化状態を維持して接着培養した培地の上清を含む、ヒアルロン酸産生促進剤。
- iPS細胞をNANOG、OCT3/4、及びTRA 1-60が陽性である未分化状態を維持して接着培養した培地(アクチビンAを含む培地を除く。)の上清を含む、創傷治療剤。
- iPS細胞をNANOG、OCT3/4、及びTRA 1-60が陽性である未分化状態を維持して接着培養した培地の上清を含む、表皮細胞増殖促進剤。
- iPS細胞をNANOG、OCT3/4、及びTRA 1-60が陽性である未分化状態を維持して接着培養した培地の上清を含む、発毛剤。
- iPS細胞をNANOG、OCT3/4、及びTRA 1-60が陽性である未分化状態を維持して接着培養した培地の上清を含む、育毛剤。
- iPS細胞をNANOG、OCT3/4、及びTRA 1-60が陽性である未分化状態を維持して接着培養した培地の上清を含む、毛乳頭細胞の活性化剤。
- iPS細胞をNANOG、OCT3/4、及びTRA 1-60が陽性である未分化状態を維持して接着培養した培地の上清を含む、線維芽細胞成長因子ファミリー産生促進剤。
- iPS細胞をNANOG、OCT3/4、及びTRA 1-60が陽性である未分化状態を維持して接着培養した培地の上清を含む、血管内皮細胞増殖因子産生促進剤。
- iPS細胞をNANOG、OCT3/4、及びTRA 1-60が陽性である未分化状態を維持して接着培養した培地の上清を含む、線維芽細胞及び表皮細胞をストレスから保護する細胞保護剤。
- iPS細胞をNANOG、OCT3/4、及びTRA 1-60が陽性である未分化状態を維持して接着培養した培地の上清を含む、ストレスを受けた線維芽細胞及び表皮細胞の生存率を向上させる細胞生存率向上剤。
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