JP7186094B2 - インターロイキン17受容体mRNAの特異的ノックダウンのためのアンチセンスオリゴヌクレオチド(ASO)を提示するリポソーム系球状核酸(SNA)構築物 - Google Patents
インターロイキン17受容体mRNAの特異的ノックダウンのためのアンチセンスオリゴヌクレオチド(ASO)を提示するリポソーム系球状核酸(SNA)構築物 Download PDFInfo
- Publication number
- JP7186094B2 JP7186094B2 JP2018558339A JP2018558339A JP7186094B2 JP 7186094 B2 JP7186094 B2 JP 7186094B2 JP 2018558339 A JP2018558339 A JP 2018558339A JP 2018558339 A JP2018558339 A JP 2018558339A JP 7186094 B2 JP7186094 B2 JP 7186094B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- gene
- sna
- oligonucleotide
- maso
- antisense oligonucleotide
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
- A61K31/712—Nucleic acids or oligonucleotides having modified sugars, i.e. other than ribose or 2'-deoxyribose
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
- A61K31/7125—Nucleic acids or oligonucleotides having modified internucleoside linkage, i.e. other than 3'-5' phosphodiesters
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
- A61K31/713—Double-stranded nucleic acids or oligonucleotides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
- A61K47/554—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound the modifying agent being a steroid plant sterol, glycyrrhetic acid, enoxolone or bile acid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
- A61K47/6905—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a colloid or an emulsion
- A61K47/6911—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a colloid or an emulsion the form being a liposome
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/02—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by special physical form
- A61K8/14—Liposomes; Vesicles
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
- A61K8/64—Proteins; Peptides; Derivatives or degradation products thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
- A61P29/02—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID] without antiinflammatory effect
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/111—General methods applicable to biologically active non-coding nucleic acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
- C12N15/1136—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against growth factors, growth regulators, cytokines, lymphokines or hormones
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
- C12N15/1138—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against receptors or cell surface proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
- A61K2800/10—General cosmetic use
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
- A61K2800/40—Chemical, physico-chemical or functional or structural properties of particular ingredients
- A61K2800/41—Particular ingredients further characterized by their size
- A61K2800/413—Nanosized, i.e. having sizes below 100 nm
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
- A61K47/10—Alcohols; Phenols; Salts thereof, e.g. glycerol; Polyethylene glycols [PEG]; Poloxamers; PEG/POE alkyl ethers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
- A61K47/14—Esters of carboxylic acids, e.g. fatty acid monoglycerides, medium-chain triglycerides, parabens or PEG fatty acid esters
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0014—Skin, i.e. galenical aspects of topical compositions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/06—Ointments; Bases therefor; Other semi-solid forms, e.g. creams, sticks, gels
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/11—Antisense
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
- C12N2310/315—Phosphorothioates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/34—Spatial arrangement of the modifications
- C12N2310/341—Gapmers, i.e. of the type ===---===
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/35—Nature of the modification
- C12N2310/351—Conjugate
- C12N2310/3515—Lipophilic moiety, e.g. cholesterol
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/50—Physical structure
- C12N2310/51—Physical structure in polymeric form, e.g. multimers, concatemers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2320/00—Applications; Uses
- C12N2320/30—Special therapeutic applications
- C12N2320/31—Combination therapy
Description
本願は、2016年5月6日出願の米国仮出願通しNo.62/333,082の米国特許法第119条(e)の下における利益を請求し、その内容全体は参照によって本明細書に組み込まれる。
mGmUmAmGmGmGmCmGmUG*T*G*T*G*G*mGmUmC/isp18//isp18//3CholTEG/(配列番号291)を含むオリゴヌクレオチドを包含し、オリゴヌクレオチドは長さ20ヌクレオチドであり、mは2'Oメチルであり、*はホスホロチオエート修飾である。
mGmCmUmUmGmGG*C*A*G*G*T*mGmGmUmGmAmA/isp18//isp18//3CholTEG/(配列番号225);
mCmCmCmAmCmAmGG*G*G*C*A*T*mGmUmAmGmU/isp18//isp18//3CholTEG/(配列番号288);および
mGmUmAmGmGmGmCmGmUG*T*G*T*G*G*mGmUmC/isp18//isp18//3CholTEG/(配列番号291)からなる群から選択され、-はホスホジエステル結合を言い、*はホスホロチオエート結合を言い、mはOメチルを言う。
mGmCmUmUmGmGG*C*A*G*G*T*mGmGmUmGmAmA/isp18//isp18//3CholTEG/(配列番号225);
mCmCmCmAmCmAmGG*G*G*C*A*T*mGmUmAmGmU/isp18//isp18//3CholTEG/(配列番号288);および
mGmUmAmGmGmGmCmGmUG*T*G*T*G*G*mGmUmC/isp18//isp18//3CholTEG/(配列番号291)からなる群から選択され、-はホスホジエステル結合を言い、*はホスホロチオエート結合を言い、mはOメチルを言う。
mCmCmCmAmCmAmGG*G*G*C*A*T*mGmUmAmGmU/isp18//isp18//3CholTEG/(配列番号288)、少なくとも0.0003801%のDOPC、少なくとも25%のジエチレングリコールモノエチルエーテル(Transcutol P)、少なくとも5%のグリセリン、少なくとも1%のヒドロキシエチルセルロース、少なくとも0.15%のメチルパラベン、少なくとも0.05%のプロピルパラベン、少なくとも0.1%のEDTA二ナトリウム、少なくとも0.2%のピロ亜硫酸ナトリウム、および少なくとも68.5%の水を包含する。
mCmCmCmAmCmAmGG*G*G*C*A*T*mGmUmAmGmU/isp18//isp18//3CholTEG/(配列番号288)、少なくとも0.03801%のDOPC、少なくとも25%のジエチレングリコールモノエチルエーテル(Transcutol P)、少なくとも5%のグリセリン、少なくとも1%のヒドロキシエチルセルロース、少なくとも0.15%のメチルパラベン、少なくとも0.05%のプロピルパラベン、少なくとも0.1%のEDTA二ナトリウム、少なくとも0.2%のピロ亜硫酸ナトリウム、および少なくとも68.45%の水を包含する。
mCmCmCmAmCmAmGG*G*G*C*A*T*mGmUmAmGmU/isp18//isp18//3CholTEG/(配列番号288)、少なくとも0.2655%のDOPC、少なくとも25%のジエチレングリコールモノエチルエーテル(Transcutol P)、少なくとも5%のグリセリン、少なくとも1%のヒドロキシエチルセルロース、少なくとも0.15%のメチルパラベン、少なくとも0.05%のプロピルパラベン、少なくとも0.1%のEDTA二ナトリウム、少なくとも0.2%のピロ亜硫酸ナトリウム、および少なくとも68.2%の水を含む。
mCmCmCmAmCmAmGG*G*G*C*A*T*mGmUmAmGmU/isp18//isp18//3CholTEG/(配列番号288)、少なくとも2.655%のDOPC、少なくとも25%のジエチレングリコールモノエチルエーテル(Transcutol P)、少なくとも5%のグリセリン、少なくとも1%のヒドロキシエチルセルロース、少なくとも0.15%のメチルパラベン、少なくとも0.05%のプロピルパラベン、少なくとも0.1%のEDTA二ナトリウム、少なくとも0.2%のピロ亜硫酸ナトリウム、および少なくとも65.7%の水を含む。
mCmCmCmAmCmAmGG*G*G*C*A*T*mGmUmAmGmU/isp18//isp18//3CholTEG/(配列番号288)、少なくとも26.55%のDOPC、少なくとも25%のジエチレングリコールモノエチルエーテル(Transcutol P)、少なくとも5%のグリセリン、少なくとも1%のヒドロキシエチルセルロース、少なくとも0.15%のメチルパラベン、少なくとも0.05%のプロピルパラベン、少なくとも0.1%のEDTA二ナトリウム、少なくとも0.2%のピロ亜硫酸ナトリウム、および少なくとも40.5%の水を含む。
1 ctgggcccgg gctggaagcc ggaagcgagc aaagtggagc cgactcgaac tccaccgcgg
61 aaaagaaagc ctcagaacgt tcgttcgctg cgtccccagc cggggccgag ccctccgcga
121 cgccagccgg gccatggggg ccgcacgcag cccgccgtcc gctgtcccgg ggcccctgct
181 ggggctgctc ctgctgctcc tgggcgtgct ggccccgggt ggcgcctccc tgcgactcct
241 ggaccaccgg gcgctggtct gctcccagcc ggggctaaac tgcacggtca agaatagtac
301 ctgcctggat gacagctgga ttcaccctcg aaacctgacc ccctcctccc caaaggacct
361 gcagatccag ctgcactttg cccacaccca acaaggagac ctgttccccg tggctcacat
421 cgaatggaca ctgcagacag acgccagcat cctgtacctc gagggtgcag agttatctgt
481 cctgcagctg aacaccaatg aacgtttgtg cgtcaggttt gagtttctgt ccaaactgag
541 gcatcaccac aggcggtggc gttttacctt cagccacttt gtggttgacc ctgaccagga
601 atatgaggtg accgttcacc acctgcccaa gcccatccct gatggggacc caaaccacca
661 gtccaagaat ttccttgtgc ctgactgtga gcacgccagg atgaaggtaa ccacgccatg
721 catgagctca ggcagcctgt gggaccccaa catcaccgtg gagaccctgg aggcccacca
781 gctgcgtgtg agcttcaccc tgtggaacga atctacccat taccagatcc tgctgaccag
841 ttttccgcac atggagaacc acagttgctt tgagcacatg caccacatac ctgcgcccag
901 accagaagag ttccaccagc gatccaacgt cacactcact ctacgcaacc ttaaagggtg
961 ctgtcgccac caagtgcaga tccagccctt cttcagcagc tgcctcaatg actgcctcag
1021 acactccgcg actgtttcct gcccagaaat gccagacact ccagaaccaa ttccggacta
1081 catgcccctg tgggtgtact ggttcatcac gggcatctcc atcctgctgg tgggctccgt
1141 catcctgctc atcgtctgca tgacctggag gctagctggg cctggaagtg aaaaatacag
1201 tgatgacacc aaatacaccg atggcctgcc tgcggctgac ctgatccccc caccgctgaa
1261 gcccaggaag gtctggatca tctactcagc cgaccacccc ctctacgtgg acgtggtcct
1321 gaaattcgcc cagttcctgc tcaccgcctg cggcacggaa gtggccctgg acctgctgga
1381 agagcaggcc atctcggagg caggagtcat gacctgggtg ggccgtcaga agcaggagat
1441 ggtggagagc aactctaaga tcatcgtcct gtgctcccgc ggcacgcgcg ccaagtggca
1501 ggcgctcctg ggccgggggg cgcctgtgcg gctgcgctgc gaccacggaa agcccgtggg
1561 ggacctgttc actgcagcca tgaacatgat cctcccggac ttcaagaggc cagcctgctt
1621 cggcacctac gtagtctgct acttcagcga ggtcagctgt gacggcgacg tccccgacct
1681 gttcggcgcg gcgccgcggt acccgctcat ggacaggttc gaggaggtgt acttccgcat
1741 ccaggacctg gagatgttcc agccgggccg catgcaccgc gtaggggagc tgtcggggga
1801 caactacctg cggagcccgg gcggcaggca gctccgcgcc gccctggaca ggttccggga
1861 ctggcaggtc cgctgtcccg actggttcga atgtgagaac ctctactcag cagatgacca
1921 ggatgccccg tccctggacg aagaggtgtt tgaggagcca ctgctgcctc cgggaaccgg
1981 catcgtgaag cgggcgcccc tggtgcgcga gcctggctcc caggcctgcc tggccataga
2041 cccgctggtc ggggaggaag gaggagcagc agtggcaaag ctggaacctc acctgcagcc
2101 ccggggtcag ccagcgccgc agcccctcca caccctggtg ctcgccgcag aggagggggc
2161 cctggtggcc gcggtggagc ctgggcccct ggctgacggt gccgcagtcc ggctggcact
2221 ggcgggggag ggcgaggcct gcccgctgct gggcagcccg ggcgctgggc gaaatagcgt
2281 cctcttcctc cccgtggacc ccgaggactc gccccttggc agcagcaccc ccatggcgtc
2341 tcctgacctc cttccagagg acgtgaggga gcacctcgaa ggcttgatgc tctcgctctt
2401 cgagcagagt ctgagctgcc aggcccaggg gggctgcagt agacccgcca tggtcctcac
2461 agacccacac acgccctacg aggaggagca gcggcagtca gtgcagtctg accagggcta
2521 catctccagg agctccccgc agccccccga gggactcacg gaaatggagg aagaggagga
2581 agaggagcag gacccaggga agccggccct gccactctct cccgaggacc tggagagcct
2641 gaggagcctc cagcggcagc tgcttttccg ccagctgcag aagaactcgg gctgggacac
2701 gatggggtca gagtcagagg ggcccagtgc atgagggcgg ctccccaggg accgcccaga
2761 tcccagcttt gagagaggag tgtgtgtgca cgtattcatc tgtgtgtaca tgtctgcatg
2821 tgtatatgtt cgtgtgtgaa atgtaggctt taaaatgtaa atgtctggat tttaatccca
2881 ggcatccctc ctaacttttc tttgtgcagc ggtctggtta tcgtctatcc ccaggggaat
2941 ccacacagcc cgctcccagg agctaatggt agagcgtcct tgaggctcca ttattcgttc
3001 attcagcatt tattgtgcac ctactatgtg gcgggcattt gggataccaa gataaattgc
3061 atgcggcatg gccccagcca tgaaggaact taaccgctag tgccgaggac acgttaaacg
3121 aacaggatgg gccgggcacg gtggctcacg cctgtaatcc cagcacactg ggaggccgag
3181 gcaggtggat cactctgagg tcaggagttt gagccagcct ggccaacatg gtgaaacccc
3241 atctccacta aaaatagaaa aattagccgg gcatggtgac acatgcctgt agtcctagct
3301 acttgggagg ctgaggcagg agaattgctt gaatctggga ggcagaggtt gcagtgagcc
3361 gagattgtgc cattgcactg cagcctggat gacagagcga gactctatct caaaaaaaaa
3421 aaaaaaaaaa gatggtcacg cgggatgtaa acgctgaatg ggccaggtgc agtggctcat
3481 gcttgtaatc ccagcacttt gggaaggcga ggcaggtgga ttgcttgagc tcaggagttc
3541 aagaccagcc tgggcgacat agtgagacct catctctacc taaatttttt tttagtcagt
3601 catggtggca catgcctgta gtcccagcta ctcgggaggc tgatgccaga tgatcacttg
3661 agcccaggag gtagaggctg cagtgagcta taatggtacc attgcaatcc agcctgggca
3721 gcagagtgag accctgtctc aaaaaaaata aaaaagtaga aagatggagt ggaagcctgc
3781 ccagggttgt gagcatgcac gggaaaggca cccaggtcag gggggatccc cgaggagatg
3841 cctgagctga aggattgtgg ttggggaaag cgtagtccca gcaaggaagc agtttgtggg
3901 taagtgctgg gaggtgagtg gagtgagctt gtcagggagc tgctggtgga gcctggaggg
3961 gaaggaggga ggcagtgaga gagatcgggg tggggggtgg ggggatgtcg ccagagctca
4021 ggggtgggga cagccttgtg cgcatcagtc ctgaggcctg gggcaccttt cgtctgatga
4081 gcctctgcat ggagagaggc tgagggctaa acacagctgg atgtcacctg agttcattta
4141 taggaagaga gaaatgtcga ggtgaaacgt aaaagcatct ggcaggaagg tgagtctgaa
4201 gccctgcacc cgcgttccga ctatcagtgg ggagctgtta gcacgtagga ttcttcagag
4261 cagctgggct ggagctcccc tgagctcagg aagccccagg gtgcaagggc aaggaaatga
4321 ggggtggtgg gtcagtgaag atctgggcag accttgtgtg gggaaggggt gctgctgtga
4381 cttcagggtc tgaggtccaa agacagcatt tgaaaagagg ctctgaagcc agtgtttgaa
4441 gaatttgttc ctgaagtacc tcctgggggt aggctagagg cttctggctt cagggtcctg
4501 aagaacacat tgaggtgccg tctgacactg gaatagggtg cccttcattc ctatgcctga
4561 gtccttaact atatttccaa cctccagtga ggaggagaag attcggaaat gtgacaggag
4621 agcaaacagg acagtttgca tgtgtgtgtg cgcacacata catgtgcgtg aaagattatc
4681 aataaaagtg cataaatttg ttgatctggt aagagtttct agcaggaagg tcgagccact
4741 tactgtaggt caagaagttg ctagttgcgg agttttttct tgcagttaga ctttacctag
4801 tggtagcagg gccaccaaag ctctgtgtcc cagatggtgt atggcccata atccacccaa
4861 cagcagcaaa ggaccaggca aaggagaaca ggagcagaag cctcccagcc actagccttt
4921 tgggctcagt ctctccaata atcctggaga ggggcttcgt tgggtctgga cacctaccat
4981 gcattctgtg acctttccct agcttccaat aaataactgt ttgacgccca gagtacagga
5041 taccacaatg cactcttcct gcgtagagca catgttccca tctgctccca ttcctcagga
5101 accttgaatt ctagctctgc tggcctttga gcccatgcca gtaaatgtcc tgatgggcat
5161 tgcctactat ctccagggca gctgcctttg tcctcctaac agctttattg gagtacagtt
5221 cacttaccat acaatccaca attgaccctg cacaatttga tgccggttta gtatagtcac
5281 agttcagcag ccatcagcac agtcagtctt agagtttact acccccaaaa gaaatccagc
5341 cccccttagt caccacccca acctccccat ccctaggcac ccctaggcta ctttgatctc
5401 tgtagacttg cctcttctgg acatgacata gagaaaggag tcataaattc tccaaggtgt
5461 ctgtttcttc tttaatgtca ttccctgttt ctcctcacat tccctcccca tttcctgggc
5521 ccagtctcac actggtcctt gcttacccta aatgctatta attccatcac tctgagtatg
5581 gtgtttgctg tccgctgaat gccaagagct tcaagagtgt gtgtaaataa agccacacct
5641 ttatttttgt attattctga accatggcta ataaattgtt tcaccaagaa atgtctctct
5701 aagaacaggt gccctccacg ctgtgcccct cccacctctt cagctcgtct cctgagtgtg
5761 cagaggtggt tccggttggg aaagaagcag cggagcatct aaccatgcct gtgtccaggc
5821 cgattatgca cgcagccacc aacaagctcc caactcccgc gtagagtttc atgacttttt
5881 cctgcctact atcttgatcc tagttttttt tttgtttttt ttttttttaa ggaataatta
5941 ctttgattca aaaccagttt ctcttttctg cataggaagg tccttgaagg tgtttagggt
6001 ctaaaaaggg tggtgttcgg tctctgaaac atccattcag cagtttgagc tgggatctct
6061 gaatgcaagg gtatgatgga tatacttctt tcttgctttt gttgtgtttt ggttttttgt
6121 ttgtttttaa gtcagggtct ctctgtcacc aggctgtatt acagtggtgc aatcatggct
6181 cactgcagcc tcgacctccc aggctcaagc catctttcca cctcagcctg ccagtggcta
6241 gaactacagg cgtgcaccac tgtgcccggc taatttgtgt gtatatattt tgtagaaatg
6301 gggtttcacc atgttgtcca ggctggtcac gaactcctgg gctcaagcca tctgcccgcc
6361 tcatcctccc aaagtgctgg gattataggc ctgagcccac cgtgcctggc ctttcctgtt
6421 tatctttgaa aattaaatag ggcataagag agaagaagat gtacttacaa tgcagtgggt
6481 ggttttaact ctatagcctt tgggctctgt ggttggtgct ccccttccta aataaatgag
6541 gtgtatgcag ggccctcttc tgccttagcg ccctgccagc tgggactcca gcaaggcccg
6601 gggcacctga ggacagagtg agatggaggg ccgctgctcc agcagccggg cctgcatccc
6661 acaagtcaac tgtgtcggac agaggatcct tacaaagaag aggcagcagg gttgggggct
6721 ggccagctgc tcgtccgccc taggtagctt gctcatctgt aaagtgggtg gggcaggagt
6781 tcccacctca tggggtcctg gcaagcctgc agtatccccg agtggcacca gcctgcttct
6841 ggggcagagc agtttgtgcc ccctgaggta ccactgatcc tctttccctg ctattaggta
6901 ttgctctctt cctccggtgt ttgccttttc agattataga agtaatatgt gttcccatat
6961 ttggcgtctc tcaggagctc aggaagtact tggctgagtg aacatgtcca ttgtggaaaa
7021 atggcaacaa tatggattcc atgggtatat tttatagaag aatatgaaga aaagcagcta
7081 cccctaaacc cattgcacaa gctgttcatg ttaattctgt acccgacgct ttccccacgg
7141 ggcctcccct cactctgaaa tggcatccag gtccatcttg ccctccacct ctgcatggct
7201 ctccatgccc catcgcctct cccagatcct agcactgggt ccacactctc gccctgtcca
7261 tttaggttga tgaaagcagg cagtcacccg ggtgggccag tcttgcctgt gggaggaaca
7321 tgcagtctcc tgtctcatgg tttgaagtgt gccaggaagc ctggcccagc ccacctcccc
7381 ctggagtcct tcccaggagg aataacccct taggtcattg actataagat gagttcgctc
7441 actggatcct tcctctctga tgagacagga agaaggtaca cagtgaccag gtaggaggag
7501 gagagggagt agaaaggagg gatgcgggtg gctggtccct gcatttgcct gcttccctgc
7561 acgggtgtcc cactggccgc ctctgctcac cagtgtcatg ggattctctc agaagatgaa
7621 aacagcccct gcttttttgc tagaatggct gagctttcat ggaaaggaag ctggacccaa
7681 gcaacagccg actaccgaag gttgcctgga gcagtgcaga tgtgggagga agaagggcct
7741 tggtgcacac tggcttttct tcctgactgc aatgtggcat tgtgccagct acctcctctt
7801 tctcggcctc aggaaaatgg agagaaagca gccctgaagg tggctgtgac gagggaaggg
7861 gcagagggcc tgacagtcaa ccacgcgcta tattttcctg ttcttcctta gggcaagaac
7921 tgcatggcca gactcaggca aggcctaggt gtgggctggg cattgcctac acgtgaagag
7981 atcactccgc gtccctactg cacctgtcac aaagtgcctt ctgatatgcc tggcaaacca
8041 aaatcggtga gcgccagctt gcttccctag aagacatttc taaatattca taacatgctt
8101 gctcaaatca atcaccttat tttacatccg ctccagggag aaatgaagac atggtcctac
8161 gttgttctgt aattattttc tatgtaaatt ttgttccttg ttacaattat atatgtctta
8221 ggggaaagga ccatttcaca tgtgtcacct catgtgattc tcaccacagc cctgtgattg
8281 ctcctgtttt ataaataatg acatagttcc agttgatggc caaagccaca gctaacgaga
8341 ggcagagaga gctcaggctc ccaggagctt ccactctcag accttgcctc ccgggctgcc
8401 ctgagtgaaa cgcctgctta gcatttggca cagccagaag cagcaagcta gggtcacaac
8461 acagagaggg gctgtgtaat actggctgcc tctgtgctaa gaaaaaaaaa aaatcactgt
8521 gtgtttgttt attttggtgc aggcccagtg ttcttgctta gacttaatac tacccttcat
8581 gttaaaataa aaccaaacaa aaacccat(配列番号302)
MGAARSPPSAVPGPLLGLLLLLLGVLAPGGASLRLLDHRALVCSQPGLNCTVKNSTCLDDSWIHPRNLTPSSPKD
LQIQLHFAHTQQGDLFPVAHIEWTLQTDASILYLEGAELSVLQLNTNERLCVRFEFLSKLRHHHRRWRFTFSHFV
VDPDQEYEVTVHHLPKPIPDGDPNHQSKNFLVPDCEHARMKVTTPCMSSGSLWDPNITVETLEAHQLRVSFTLWN
ESTHYQILLTSFPHMENHSCFEHMHHIPAPRPEEFHQRSNVTLTLRNLKGCCRHQVQIQPFFSSCLNDCLRHSAT
VSCPEMPDTPEPIPDYMPLWVYWFITGISILLVGSVILLIVCMTWRLAGPGSEKYSDDTKYTDGLPAADLIPPPL
KPRKVWIIYSADHPLYVDVVLKFAQFLLTACGTEVALDLLEEQAISEAGVMTWVGRQKQEMVESNSKIIVLCSRG
TRAKWQALLGRGAPVRLRCDHGKPVGDLFTAAMNMILPDFKRPACFGTYVVCYFSEVSCDGDVPDLFGAAPRYPL
MDRFEEVYFRIQDLEMFQPGRMHRVGELSGDNYLRSPGGRQLRAALDRFRDWQVRCPDWFECENLYSADDQDAPS
LDEEVFEEPLLPPGTGIVKRAPLVREPGSQACLAIDPLVGEEGGAAVAKLEPHLQPRGQPAPQPLHTLVLAAEEG
ALVAAVEPGPLADGAAVRLALAGEGEACPLLGSPGAGRNSVLFLPVDPEDSPLGSSTPMASPDLLPEDVREHLEG
LMLSLFEQSLSCQAQGGCSRPAMVLTDPHTPYEEEQRQSVQSDQGYISRSSPQPPEGLTEMEEEEEEEQDPGKPA
LPLSPEDLESLRSLQRQLLFRQLQKNSGWDTMGSESEGPSA(配列番号305).
mGmCmUmUmGmGG*C*A*G*G*T*mGmGmUmGmAmA/isp18//isp18//3CholTEG/(配列番号225);
mCmCmCmAmCmAmGG*G*G*C*A*T*mGmUmAmGmU/isp18//isp18//3CholTEG/(配列番号288);
mGmUmAmGmGmGmCmGmUG*T*G*T*G*G*mGmUmC/isp18//isp18//3CholTEG/(配列番号291);
mGmCmUmUmGmGG*C*A*G*G*T*mGmGmUmGmAmA(配列番号225);
mCmCmCmAmCmAmGG*G*G*C*A*T*mGmUmAmGmU(配列番号288);
mGmUmAmGmGmGmCmGmUG*T*G*T*G*G*mGmUmC(配列番号291);GCUUGGGCAGGTGGUGAA(配列番号225);CCCACAGGGGCATGUAGU(配列番号288);もしくはGUAGGGCGUGTGTGGGUC(配列番号291)、またはその塩。
1 gggtctccgc gcccaggaaa gccccgcgcg gcgcgggcca gggaagggcc acccaggggt
61 cccccacttc ccgcttgggc gcccggacgg cgaatggagc aggggcgcgc agataattaa
121 agatttacac acagctggaa gaaatcatag agaagccggg cgtggtggct catgcctata
181 atcccagcac ttttggaggc tgaggcgggc agatcacttg agatcaggag ttcgagacca
241 gcctggtgcc ttggcatctc ccaatggggt ggctttgctc tgggctcctg ttccctgtga
301 gctgcctggt cctgctgcag gtggcaagct ctgggaacat gaaggtcttg caggagccca
361 cctgcgtctc cgactacatg agcatctcta cttgcgagtg gaagatgaat ggtcccacca
421 attgcagcac cgagctccgc ctgttgtacc agctggtttt tctgctctcc gaagcccaca
481 cgtgtatccc tgagaacaac ggaggcgcgg ggtgcgtgtg ccacctgctc atggatgacg
541 tggtcagtgc ggataactat acactggacc tgtgggctgg gcagcagctg ctgtggaagg
601 gctccttcaa gcccagcgag catgtgaaac ccagggcccc aggaaacctg acagttcaca
661 ccaatgtctc cgacactctg ctgctgacct ggagcaaccc gtatccccct gacaattacc
721 tgtataatca tctcacctat gcagtcaaca tttggagtga aaacgacccg gcagatttca
781 gaatctataa cgtgacctac ctagaaccct ccctccgcat cgcagccagc accctgaagt
841 ctgggatttc ctacagggca cgggtgaggg cctgggctca gtgctataac accacctgga
901 gtgagtggag ccccagcacc aagtggcaca actcctacag ggagcccttc gagcagcacc
961 tcctgctggg cgtcagcgtt tcctgcattg tcatcctggc cgtctgcctg ttgtgctatg
1021 tcagcatcac caagattaag aaagaatggt gggatcagat tcccaaccca gcccgcagcc
1081 gcctcgtggc tataataatc caggatgctc aggggtcaca gtgggagaag cggtcccgag
1141 gccaggaacc agccaagtgc ccacactgga agaattgtct taccaagctc ttgccctgtt
1201 ttctggagca caacatgaaa agggatgaag atcctcacaa ggctgccaaa gagatgcctt
1261 tccagggctc tggaaaatca gcatggtgcc cagtggagat cagcaagaca gtcctctggc
1321 cagagagcat cagcgtggtg cgatgtgtgg agttgtttga ggccccggtg gagtgtgagg
1381 aggaggagga ggtagaggaa gaaaaaggga gcttctgtgc atcgcctgag agcagcaggg
1441 atgacttcca ggagggaagg gagggcattg tggcccggct aacagagagc ctgttcctgg
1501 acctgctcgg agaggagaat gggggctttt gccagcagga catgggggag tcatgccttc
1561 ttccaccttc gggaagtacg agtgctcaca tgccctggga tgagttccca agtgcagggc
1621 ccaaggaggc acctccctgg ggcaaggagc agcctctcca cctggagcca agtcctcctg
1681 ccagcccgac ccagagtcca gacaacctga cttgcacaga gacgcccctc gtcatcgcag
1741 gcaaccctgc ttaccgcagc ttcagcaact ccctgagcca gtcaccgtgt cccagagagc
1801 tgggtccaga cccactgctg gccagacacc tggaggaagt agaacccgag atgccctgtg
1861 tcccccagct ctctgagcca accactgtgc cccaacctga gccagaaacc tgggagcaga
1921 tcctccgccg aaatgtcctc cagcatgggg cagctgcagc ccccgtctcg gcccccacca
1981 gtggctatca ggagtttgta catgcggtgg agcagggtgg cacccaggcc agtgcggtgg
2041 tgggcttggg tcccccagga gaggctggtt acaaggcctt ctcaagcctg cttgccagca
2101 gtgctgtgtc cccagagaaa tgtgggtttg gggctagcag tggggaagag gggtataagc
2161 ctttccaaga cctcattcct ggctgccctg gggaccctgc cccagtccct gtccccttgt
2221 tcacctttgg actggacagg gagccacctc gcagtccgca gagctcacat ctcccaagca
2281 gctccccaga gcacctgggt ctggagccgg gggaaaaggt agaggacatg ccaaagcccc
2341 cacttcccca ggagcaggcc acagaccccc ttgtggacag cctgggcagt ggcattgtct
2401 actcagccct tacctgccac ctgtgcggcc acctgaaaca gtgtcatggc caggaggatg
2461 gtggccagac ccctgtcatg gccagtcctt gctgtggctg ctgctgtgga gacaggtcct
2521 cgccccctac aacccccctg agggccccag acccctctcc aggtggggtt ccactggagg
2581 ccagtctgtg tccggcctcc ctggcaccct cgggcatctc agagaagagt aaatcctcat
2641 catccttcca tcctgcccct ggcaatgctc agagctcaag ccagaccccc aaaatcgtga
2701 actttgtctc cgtgggaccc acatacatga gggtctctta ggtgcatgtc ctcttgttgc
2761 tgagtctgca gatgaggact agggcttatc catgcctggg aaatgccacc tcctggaagg
2821 cagccaggct ggcagatttc caaaagactt gaagaaccat ggtatgaagg tgattggccc
2881 cactgacgtt ggcctaacac tgggctgcag agactggacc ccgcccagca ttgggctggg
2941 ctcgccacat cccatgagag tagagggcac tgggtcgccg tgccccacgg caggcccctg
3001 caggaaaact gaggcccttg ggcacctcga cttgtgaacg agttgttggc tgctccctcc
3061 acagcttctg cagcagactg tccctgttgt aactgcccaa ggcatgtttt gcccaccaga
3121 tcatggccca cgtggaggcc cacctgcctc tgtctcactg aactagaagc cgagcctaga
3181 aactaacaca gccatcaagg gaatgacttg ggcggccttg ggaaatcgat gagaaattga
3241 acttcaggga gggtggtcat tgcctagagg tgctcattca tttaacagag cttccttagg
3301 ttgatgctgg aggcagaatc ccggctgtca aggggtgttc agttaagggg agcaacagag
3361 gacatgaaaa attgctatga ctaaagcagg gacaatttgc tgccaaacac ccatgcccag
3421 ctgtatggct gggggctcct cgtatgcatg gaacccccag aataaatatg ctcagccacc
3481 ctgtgggccg ggcaatccag acagcaggca taaggcacca gttaccctgc atgttggccc
3541 agacctcagg tgctagggaa ggcgggaacc ttgggttgag taatgctcgt ctgtgtgttt
3601 tagtttcatc acctgttatc tgtgtttgct gaggagagtg gaacagaagg ggtggagttt
3661 tgtataaata aagtttcttt gtctctttaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa(配列番号306)
MGWLCSGLLF PVSCLVLLQV ASSGNMKVLQ EPTCVSDYMS ISTCEWKMNG
PTNCSTELRL LYQLVFLLSE AHTCIPENNG GAGCVCHLLM DDVVSADNYT
LDLWAGQQLL WKGSFKPSEH VKPRAPGNLT VHTNVSDTLL LTWSNPYPPD
NYLYNHLTYA VNIWSENDPA DFRIYNVTYL EPSLRIAAST LKSGISYRAR
VRAWAQCYNT TWSEWSPSTK WHNSYREPFE QHLLLGVSVS CIVILAVCLL
CYVSITKIKK EWWDQIPNPA RSRLVAIIIQ DAQGSQWEKR SRGQEPAKCP
HWKNCLTKLL PCFLEHNMKR DEDPHKAAKE MPFQGSGKSA WCPVEISKTV
LWPESISVVR CVELFEAPVE CEEEEEVEEE KGSFCASPES SRDDFQEGRE
GIVARLTESL FLDLLGEENG GFCQQDMGES CLLPPSGSTS AHMPWDEFPS
AGPKEAPPWG KEQPLHLEPS PPASPTQSPD NLTCTETPLV IAGNPAYRSF
SNSLSQSPCP RELGPDPLLA RHLEEVEPEM PCVPQLSEPT TVPQPEPETW
EQILRRNVLQ HGAAAAPVSA PTSGYQEFVH AVEQGGTQAS AVVGLGPPGE
AGYKAFSSLL ASSAVSPEKC GFGASSGEEG YKPFQDLIPG CPGDPAPVPV
PLFTFGLDRE PPRSPQSSHL PSSSPEHLGL EPGEKVEDMP KPPLPQEQAT
DPLVDSLGSG IVYSALTCHL CGHLKQCHGQ EDGGQTPVMA SPCCGCCCGD
RSSPPTTPLR APDPSPGGVP LEASLCPASL APSGISEKSK SSSSFHPAPG
NAQSSSQTPK IVNFVSVGPT YMRVS(配列番号309)
1 accaaacctc ttcgaggcac aaggcacaac aggctgctct gggattctct tcagccaatc
61 ttcattgctc aagtgtctga agcagccatg gcagaagtac ctgagctcgc cagtgaaatg
121 atggcttatt acagtggcaa tgaggatgac ttgttctttg aagctgatgg ccctaaacag
181 atgaagtgct ccttccagga cctggacctc tgccctctgg atggcggcat ccagctacga
241 atctccgacc accactacag caagggcttc aggcaggccg cgtcagttgt tgtggccatg
301 gacaagctga ggaagatgct ggttccctgc ccacagacct tccaggagaa tgacctgagc
361 accttctttc ccttcatctt tgaagaagaa cctatcttct tcgacacatg ggataacgag
421 gcttatgtgc acgatgcacc tgtacgatca ctgaactgca cgctccggga ctcacagcaa
481 aaaagcttgg tgatgtctgg tccatatgaa ctgaaagctc tccacctcca gggacaggat
541 atggagcaac aagtggtgtt ctccatgtcc tttgtacaag gagaagaaag taatgacaaa
601 atacctgtgg ccttgggcct caaggaaaag aatctgtacc tgtcctgcgt gttgaaagat
661 gataagccca ctctacagct ggagagtgta gatcccaaaa attacccaaa gaagaagatg
721 gaaaagcgat ttgtcttcaa caagatagaa atcaataaca agctggaatt tgagtctgcc
781 cagttcccca actggtacat cagcacctct caagcagaaa acatgcccgt cttcctggga
841 gggaccaaag gcggccagga tataactgac ttcaccatgc aatttgtgtc ttcctaaaga
901 gagctgtacc cagagagtcc tgtgctgaat gtggactcaa tccctagggc tggcagaaag
961 ggaacagaaa ggtttttgag tacggctata gcctggactt tcctgttgtc tacaccaatg
1021 cccaactgcc tgccttaggg tagtgctaag aggatctcct gtccatcagc caggacagtc
1081 agctctctcc tttcagggcc aatccccagc ccttttgttg agccaggcct ctctcacctc
1141 tcctactcac ttaaagcccg cctgacagaa accacggcca catttggttc taagaaaccc
1201 tctgtcattc gctcccacat tctgatgagc aaccgcttcc ctatttattt atttatttgt
1261 ttgtttgttt tattcattgg tctaatttat tcaaaggggg caagaagtag cagtgtctgt
1321 aaaagagcct agtttttaat agctatggaa tcaattcaat ttggactggt gtgctctctt
1381 taaatcaagt cctttaatta agactgaaaa tatataagct cagattattt aaatgggaat
1441 atttataaat gagcaaatat catactgttc aatggttctg aaataaactt cactgaag(配列番号307)
MAEVPELASE MMAYYSGNED DLFFEADGPK QMKCSFQDLD LCPLDGGIQL
RISDHHYSKG FRQAASVVVA MDKLRKMLVP CPQTFQENDL STFFPFIFEE
EPIFFDTWDN EAYVHDAPVR SLNCTLRDSQ QKSLVMSGPY ELKALHLQGQ
DMEQQVVFSM SFVQGEESND KIPVALGLKE KNLYLSCVLK DDKPTLQLES
VDPKNYPKKK MEKRFVFNKI EINNKLEFES AQFPNWYIST SQAENMPVFL
GGTKGGQDIT DFTMQFVSS(配列番号310)
1 aaactcacac aacaactctt ccccgctgag aggagacagc cagtgcgact ccaccctcca
61 gctcgacggc agccgccccg gccgacagcc ccgagacgac agcccggcgc gtcccggtcc
121 ccacctccga ccaccgccag cgctccaggc cccgccgctc cccgctcgcc gccaccgcgc
181 cctccgctcc gcccgcagtg ccaaccatga ccgccgccag tatgggcccc gtccgcgtcg
241 ccttcgtggt cctcctcgcc ctctgcagcc ggccggccgt cggccagaac tgcagcgggc
301 cgtgccggtg cccggacgag ccggcgccgc gctgcccggc gggcgtgagc ctcgtgctgg
361 acggctgcgg ctgctgccgc gtctgcgcca agcagctggg cgagctgtgc accgagcgcg
421 acccctgcga cccgcacaag ggcctcttct gtgacttcgg ctccccggcc aaccgcaaga
481 tcggcgtgtg caccgccaaa gatggtgctc cctgcatctt cggtggtacg gtgtaccgca
541 gcggagagtc cttccagagc agctgcaagt accagtgcac gtgcctggac ggggcggtgg
601 gctgcatgcc cctgtgcagc atggacgttc gtctgcccag ccctgactgc cccttcccga
661 ggagggtcaa gctgcccggg aaatgctgcg aggagtgggt gtgtgacgag cccaaggacc
721 aaaccgtggt tgggcctgcc ctcgcggctt accgactgga agacacgttt ggcccagacc
781 caactatgat tagagccaac tgcctggtcc agaccacaga gtggagcgcc tgttccaaga
841 cctgtgggat gggcatctcc acccgggtta ccaatgacaa cgcctcctgc aggctagaga
901 agcagagccg cctgtgcatg gtcaggcctt gcgaagctga cctggaagag aacattaaga
961 agggcaaaaa gtgcatccgt actcccaaaa tctccaagcc tatcaagttt gagctttctg
1021 gctgcaccag catgaagaca taccgagcta aattctgtgg agtatgtacc gacggccgat
1081 gctgcacccc ccacagaacc accaccctgc cggtggagtt caagtgccct gacggcgagg
1141 tcatgaagaa gaacatgatg ttcatcaaga cctgtgcctg ccattacaac tgtcccggag
1201 acaatgacat ctttgaatcg ctgtactaca ggaagatgta cggagacatg gcatgaagcc
1261 agagagtgag agacattaac tcattagact ggaacttgaa ctgattcaca tctcattttt
1321 ccgtaaaaat gatttcagta gcacaagtta tttaaatctg tttttctaac tgggggaaaa
1381 gattcccacc caattcaaaa cattgtgcca tgtcaaacaa atagtctatc aaccccagac
1441 actggtttga agaatgttaa gacttgacag tggaactaca ttagtacaca gcaccagaat
1501 gtatattaag gtgtggcttt aggagcagtg ggagggtacc agcagaaagg ttagtatcat
1561 cagatagcat cttatacgag taatatgcct gctatttgaa gtgtaattga gaaggaaaat
1621 tttagcgtgc tcactgacct gcctgtagcc ccagtgacag ctaggatgtg cattctccag
1681 ccatcaagag actgagtcaa gttgttcctt aagtcagaac agcagactca gctctgacat
1741 tctgattcga atgacactgt tcaggaatcg gaatcctgtc gattagactg gacagcttgt
1801 ggcaagtgaa tttgcctgta acaagccaga ttttttaaaa tttatattgt aaatattgtg
1861 tgtgtgtgtg tgtgtgtata tatatatata tgtacagtta tctaagttaa tttaaagttg
1921 tttgtgcctt tttatttttg tttttaatgc tttgatattt caatgttagc ctcaatttct
1981 gaacaccata ggtagaatgt aaagcttgtc tgatcgttca aagcatgaaa tggatactta
2041 tatggaaatt ctgctcagat agaatgacag tccgtcaaaa cagattgttt gcaaagggga
2101 ggcatcagtg tccttggcag gctgatttct aggtaggaaa tgtggtagcc tcacttttaa
2161 tgaacaaatg gcctttatta aaaactgagt gactctatat agctgatcag ttttttcacc
2221 tggaagcatt tgtttctact ttgatatgac tgtttttcgg acagtttatt tgttgagagt
2281 gtgaccaaaa gttacatgtt tgcacctttc tagttgaaaa taaagtgtat attttttcta
2341 taaaaaaaaa aaaaaaaa(配列番号308)
MTAASMGPVR VAFVVLLALC SRPAVGQNCS GPCRCPDEPA PRCPAGVSLV
LDGCGCCRVC AKQLGELCTE RDPCDPHKGL FCHFGSPANR KIGVCTAKDG
APCIFGGTVY RSGESFQSSC KYQCTCLDGA VGCMPLCSMD VRLPSPDCPF
PRRVKLPGKC CEEWVCDEPK DQTVVGPALA AYRLEDTFGP DPTMIRANCL
VQTTEWSACS KTCGMGISTR VTNDNASCRL EKQSRLCMVR PCEADLEENI
KKGKKCIRTP KISKPIKFEL SGCTSMKTYR AKFCGVCTDG RCCTPHRTTT
LPVEFKCPDG EVMKKNMMFI KTCACHYNCP GDNDIFESLY YRKMYGDMA(配列番号311)
1 gaattccggg tgatttcact cccggctgtc caggcttgtc ctgctacccc acccagcctt
61 tcctgaggcc tcaagcctgc caccaagccc ccagctcctt ctccccgcag gacccaaaca
121 caggcctcag gactcaacac agcttttccc tccaacccgt tttctctccc tcaacggact
181 cagctttctg aagcccctcc cagttctagt tctatctttt tcctgcatcc tgtctggaag
241 ttagaaggaa acagaccaca gacctggtcc ccaaaagaaa tggaggcaat aggttttgag
301 gggcatgggg acggggttca gcctccaggg tcctacacac aaatcagtca gtggcccaga
361 agacccccct cggaatcgga gcagggagga tggggagtgt gaggggtatc cttgatgctt
421 gtgtgtcccc aactttccaa atccccgccc ccgcgatgga gaagaaaccg agacagaagg
481 tgcagggccc actaccgctt cctccagatg agctcatggg tttctccacc aaggaagttt
541 tccgctggtt gaatgattct ttccccgccc tcctctcgcc ccagggacat ataaaggcag
601 ttgttggcac acccagccag cagacgctcc ctcagcaagg acagcagagg accagctaag
661 agggagagaa gcaactacag accccccctg aaaacaaccc tcagacgcca catcccctga
721 caagctgcca ggcaggttct cttcctctca catactgacc cacggcttca ccctctctcc
781 cctggaaagg acaccatgag cactgaaagc atgatccggg acgtggagct ggccgaggag
841 gcgctcccca agaagacagg ggggccccag ggctccaggc ggtgcttgtt cctcagcctc
901 ttctccttcc tgatcgtggc aggcgccacc acgctcttct gcctgctgca ctttggagtg
961 atcggccccc agagggaaga ggtgagtgcc tggccagcct tcatccactc tcccacccaa
1021 ggggaaatga gagacgcaag agagggagag agatgggatg ggtgaaagat gtgcgctgat
1081 agggagggat gagagagaaa aaaacatgga gaaagacggg gatgcagaaa gagatgtggc
1141 aagagatggg gaagagagag agagaaagat ggagagacag gatgtctggc acatggaagg
1201 tgctcactaa gtgtgtatgg agtgaatgaa tgaatgaatg aatgaacaag cagatatata
1261 aataagatat ggagacagat gtggggtgtg agaagagaga tgggggaaga aacaagtgat
1321 atgaataaag atggtgagac agaaagagcg ggaaatatga cagctaagga gagagatggg
1381 ggagataagg agagaagaag atagggtgtc tggcacacag aagacactca gggaaagagc
1441 tgttgaatgc tggaaggtga atacacagat gaatggagag agaaaaccag acacctcagg
1501 gctaagagcg caggccagac aggcagccag ctgttcctcc tttaagggtg actccctcga
1561 tgttaaccat tctccttctc cccaacagtt ccccagggac ctctctctaa tcagccctct
1621 ggcccaggca gtcagtaagt gtctccaaac ctctttccta attctgggtt tgggtttggg
1681 ggtagggtta gtaccggtat ggaagcagtg ggggaaattt aaagttttgg tcttggggga
1741 ggatggatgg aggtgaaagt aggggggtat tttctaggaa gtttaagggt ctcagctttt
1801 tcttttctct ctcctcttca ggatcatctt ctcgaacccc gagtgacaag cctgtagccc
1861 atgttgtagg taagagctct gaggatgtgt cttggaactt ggagggctag gatttgggga
1921 ttgaagcccg gctgatggta ggcagaactt ggagacaatg tgagaaggac tcgctgagct
1981 caagggaagg gtggaggaac agcacaggcc ttagtgggat actcagaacg tcatggccag
2041 gtgggatgtg ggatgacaga cagagaggac aggaaccgga tgtggggtgg gcagagctcg
2101 agggccagga tgtggagagt gaaccgacat ggccacactg actctcctct ccctctctcc
2161 ctccctccag caaaccctca agctgagggg cagctccagt ggctgaaccg ccgggccaat
2221 gccctcctgg ccaatggcgt ggagctgaga gataaccagc tggtggtgcc atcagagggc
2281 ctgtacctca tctactccca ggtcctcttc aagggccaag gctgcccctc cacccatgtg
2341 ctcctcaccc acaccatcag ccgcatcgcc gtctcctacc agaccaaggt caacctcctc
2401 tctgccatca agagcccctg ccagagggag accccagagg gggctgaggc caagccctgg
2461 tatgagccca tctatctggg aggggtcttc cagctggaga agggtgaccg actcagcgct
2521 gagatcaatc ggcccgacta tctcgacttt gccgagtctg ggcaggtcta ctttgggatc
2581 attgccctgt gaggaggacg aacatccaac cttcccaaac gcctcccctg ccccaatccc
2641 tttattaccc cctccttcag acaccctcaa cctcttctgg ctcaaaaaga gaattggggg
2701 cttagggtcg gaacccaagc ttagaacttt aagcaacaag accaccactt cgaaacctgg
2761 gattcaggaa tgtgtggcct gcacagtgaa gtgctggcaa ccactaagaa ttcaaactgg
2821 ggcctccaga actcactggg gcctacagct ttgatccctg acatctggaa tctggagacc
2881 agggagcctt tggttctggc cagaatgctg caggacttga gaagacctca cctagaaatt
2941 gacacaagtg gaccttaggc cttcctctct ccagatgttt ccagacttcc ttgagacacg
3001 gagcccagcc ctccccatgg agccagctcc ctctatttat gtttgcactt gtgattattt
3061 attatttatt tattatttat ttatttacag atgaatgtat ttatttggga gaccggggta
3121 tcctggggga cccaatgtag gagctgcctt ggctcagaca tgttttccgt gaaaacggag
3181 ctgaacaata ggctgttccc atgtagcccc ctggcctctg tgccttcttt tgattatgtt
3241 ttttaaaata tttatctgat taagttgtct aaacaatgct gatttggtga ccaactgtca
3301 ctcattgctg agcctctgct ccccagggga gttgtgtctg taatcgccct actattcagt
3361 ggcgagaaat aaagtttgct tagaaaagaa acatggtctc cttcttggaa ttaattctgc
3421 atctgcctct tcttgtgggt gggaagaagc tccctaagtc ctctctccac aggctttaag
3481 atccctcgga cccagtccca tccttagact cctagggccc tggagaccct acataaacaa
3541 agcccaacag aatattcccc atcccccagg aaacaagagc ctgaacctaa ttacctctcc
3601 ctcagggcat gggaatttcc aactctggga attc(配列番号304)
結果
実験1.標的化SNAを用いるインビトロのIL-17RA mRNAノックダウン
HFK細胞を、表1の配列の1つのASO配列それぞれを提示する294個のSNAによって処置し、ヒトIL-17RA mRNA発現をqRT-PCRによって測定した。これは2回行い、複数のアッセイにおいてIL-17RA mRNAの最も優れた阻害を示しかつ低いオフターゲット効果を有する3つのSNAを、化学修飾によるさらなる最適化のために選んだ。HFK細胞を、より大きいドーズ範囲において、IL17RA_219、IL17RA_282、IL17RA_285、または非相補的なコントロールどちらかの1つのASO配列を提示するSNAによって処置した。標的化SNAは、標的特異的なmRNA阻害をドーズ依存的な様式で実証しており、一方、非相補的なコントロールSNAは試験した全ての濃度において大した阻害を有さない(図1)。標的化SNAはHEKa細胞において類似のIL-17RA mRNA阻害を実証している。用量反応データを非線形当てはめとして分析することおよび半数阻害濃度(IC50)を計算することは、それぞれIL17RA_285、IL17RA_219、およびIL17RA_282について124.2、9.57、および34.64nMというIC50値をもたらす。これらの結果は、IL-17RA mRNAを標的化するSNAがHFK細胞において特異的な様式で遺伝子発現を有効に阻害し得るということを実証している。
ヒトIL-17RA mRNAを標的化するASO配列IL17RA_219またはIL17RA_282どちらかを提示するSNAによって外用処置されたヒト皮膚相当物モデルは、標的mRNA特異的な阻害をもたらした。実験1で収集された効能データを考慮に入れた後に、IL17RA_219およびIL17RA_282をさらなる試験のためのリード候補化合物として選んだ。ASOのIL17RA_219およびIL17RA_282は、IC50値と他のヒトmRNA配列に対する相同性(BLASTによって決定)と種間保存とのもっとも良好な組み合わせを見せた。IL-17RA mRNA発現は、ASO IL17RA_219またはASO IL17RA_282どちらかを提示するSNAによって48時間に渡って外用処置されたヒト皮膚相当物組織においては減少している。コントロールASOを提示するSNAによって処置された組織は、qRT-PCRによって測定されるIL-17RA mRNA発現のはっきりした減少を実証しない(図2)。さらに、IL17RA_219およびIL17RA_282は、HFKにおける毒性ならびにHFK、HEKa細胞、および4人の異なるドナーからのPBMCにおけるサイトカイン誘導を、最高で20μMのDNA濃度まで見せなかった。これらの理由で、IL17RA_219およびIL17RA_282がさらなる試験のために選ばれた。外用送達されるIL-17RAを標的化するSNAは、ヒト皮膚相当物モデルにおいてmRNA発現を特異的に阻害することが示された。
ヒトIL-17RA mRNAを標的化するASO配列IL17RA_219またはASO配列IL17RA_282どちらかを提示するSNAによって外用処置されたヒト皮膚外植片は、標的mRNA特異的な阻害をもたらした。IL-17RA mRNA発現は、ASO IL17RA_219またはASO IL17RA_282どちらかを提示するSNAによって96時間に渡って外用処置されたヒト皮膚外植片生検においては減少している。コントロールASOを提示するSNAによって処置された生検は、qRT-PCRによって測定されるIL-17RA mRNA発現のはっきりした減少を実証しない(図3)。外用送達されるIL-17RAを標的化するSNAは、ヒト皮膚外植片におけるmRNA発現を特異的に阻害し得る。
抗TNFまたは抗IL17RA ASO配列どちらかを提示するSNA同士を一緒に混合し、HFK細胞に共に投与した。混合SNAは、ASO配列同一性に対応する標的mRNA特異的なノックダウンを実証した(図4、図5)。
図4は、TNF mRNA発現が、抗TNF-SNAおよび抗IL17RA-SNAの混合物によって処置されたHFK細胞において減少したということを示している。図5は、IL17RA mRNA発現が、抗TNF-SNAおよび抗IL17RA-SNAの混合物によって処置されたHFK細胞において減少しているということを示している。コントロールSNAによって処置された細胞はTNF mRNAレベルのはっきりした減少を実証しない。
これらの結果は、1つよりも多くのmRNAを標的化するSNAの混合物が共に投与され、各標的に関して遺伝子ノックダウンを行い得るということを実証している。
1つ、2つ、または3つのASO配列を提示するSNAは、ASO配列同一性に対応するHFK細胞における標的mRNA特異的なノックダウンを実証した。2つのASO配列によって多重化されたSNAを用いて得られたデータのみ。SNAは、複数の治療モダリティーを提示することができるプラットフォームとして資することが示された。これらの結果は、1つよりも多くのmRNAを標的化するASO配列が同じSNA粒子上において共に送達され、各標的に関して遺伝子ノックダウンを行い得るということを実証している(図7、図8)。
2つの遺伝子標的が、ある関係する生物学的経路にある場合には、下流標的について相加的ノックダウン効果が観察され得る(図8)。TNFおよびIL17Aサイトカインシグナル伝達は、それらの炎症促進性特性について相加的および相乗的効果を有するということが示されている(3)。この関係性は、ある共有されるまたは高度に関係するシグナル伝達経路を指示しているが、厳密な関係性は良く理解されていない(4)。TNFサイトカインのmRNAおよびIL17Aの受容体IL17RAを標的化した。分泌されるTNFサイトカインの縮減はIL17RA受容体ターンオーバーおよび発現への効果を有するということが蓋然的である。
材料および方法
ヒト皮膚相当物モデルEpiDerm-FT(商標)およびヒト皮膚外植片組織については、処置は生物学的トリプリケートで適用した。組織を、IL17RA_219 ASOを提示するSNA、IL17RA_282 ASOを提示するSNA、非相補的なコントロールASOを提示するSNAどちらかによって外用処置し、または未処置のままにした。EpiDerm-FT(商標)組織は48時間に渡って処置し、ヒト皮膚外植片組織は96時間に渡って処置した。
多重SNA実験のためには、HFKを、5継代で、96ウェル組織培養プレートにウェルあたり17,000細胞の細胞密度で播種した。プレーティング後に、細胞をインキュベータ内に一晩静置した。細胞を、トリプリケートで、IL-17RA標的化アンチセンスSNA、TNF標的化アンチセンスSNA、1つよりも多くの転写物を標的化する多重SNA、または同じ「ギャップマー」設計および3'化学修飾を含む非相補的なコントロールSNA(NCBI Blastによって確認)どちらかによって、1000、100、10、および1nMの濃度で、フレッシュな維持培地中において処置した。
方法および材料
組織培養.単一のドナーからフレッシュに取得したエクスビボの健康なヒト皮膚を実験開始の日に受け入れ、直ちに調製した。使用に先だって、広範囲の伸展線条または傷のいずれかの面積に注意しながら皮膚を点検し、可視の穴またはダメージを有するいずれかの区域を取り除いた。ダーマトームを用いてドナーサンプルから全厚の皮膚を切り出した。もたらされた組織はインタクトな角質層、表皮、および真皮を含有した。外科的外植片からの皮下組織は残らなかった。皮膚を注意深く適当なサイズに切り、それをフランツセル中に置くときには皮膚を伸展させないように配慮した。それから、皮膚をフランツセル内にクランプ固定した。次に、37℃に予め加温した撹拌子およびレシーバー培地を各フランツセルに追加した。レシーバー培地は、2%ウシ胎児血清、50U/mLペニシリン、50mg/mLストレプトマイシン、0.25μg/mLアムホテリシンB、および10μg/mLゲンタマイシンを補ったダルベッコ改変イーグル培地からなった。フランツセル、外植片、およびレシーバー培地が平衡化することを最小で30分間に渡って許し、その後で各セルの培地の温度が37±1℃であることを検証した。セルの組み立ての間に導入されたいずれかの気泡を取り除いた。皮膚のインテグリティーは、セルをひっくり返すことによって、研究を開始することに先立って確認した。漏れが同定された場合には、漏れがなくなるまで皮膚およびドナーチャンバーを置き直した。実験の間中、皮膚は周囲湿度かつ32℃の表皮表面温度に維持し、これは外植片の真皮部分に接触する細胞培養培地を含有するレセプターチャンバーの37℃ウォータージャケット被覆を用いて制御した。
リポソームを、第1に250mgの1,2-ジオレオイル-sn-グリセロ-3-ホスホコリン(DOPC)をクロロホルム中に50mg/mLの終濃度に溶解することによって製剤化した。それから、溶媒を窒素下において取り除いて、薄い脂質フィルムを形成した。フィルムを一晩凍結乾燥して、全ての溶媒が取り除かれたことを保証した。爾後に、脂質フィルムを10mMリン酸緩衝生理食塩水(PBS)によって水和し、ソニケーション/凍結割断を用いて大きい単層小胞を形成した。それから、20nmという所望の個数平均直径が達成されるまで、それらの小胞を最高で25kpsiでマイクロフルイダイザーによって連続ホモジナイゼーションした。リポソーム濃度はコリン定量アッセイを用いて決定し、粒子サイズおよび分散は動的光散乱(DLS)によって測定した。
ヒトIL-17RAを標的化するSNA、化合物IL17RA_282を、30倍モル過剰のコレステロール修飾オリゴヌクレオチド配列番号288をPBS中のリポソーム懸濁液に混合し、次に4℃における一晩のインキュベーションをすることによって製剤化した。
それから、それらの薬製品を皮膚外植片に外用適用した。薬製品を投薬に先立ってピペットチップを用いて手短に混合した。ポジティブディスプレイスメントピペットを用いて、各薬製品の40μLを各フランツセルに外用投薬した。ピペットチップを用いて薬製品を均一に広げ、皮膚の露出表面積全体(1.0cm2)をカバーした。投薬後に、サンプリングポートを閉めて、研究の間の溶媒蒸発を防止した。実際の投薬時間を記録し、外植片は24時間に渡って周囲湿度かつ32℃の表皮表面温度に維持した。
蛋白質単離物を10%SDS-PAGEゲルにローディングし、ランし、Immobilon PSQ PVDF膜(ISEQ00010、Millipore)に一晩トランスファーした(22V)。膜を、Tween 20を含有するトリス緩衝生理食塩水(もたらされる緩衝液はTBSTと言われる)中において5%ドライミルクによって1時間に渡ってブロッキングし、次にTBSTによる5分洗浄をした。IL-17RAまたはβ-アクチン蛋白質を標的化するヒト特異的抗体を用いて、それらの特定の蛋白質の存在を探査した。IL-17RA蛋白質は抗IL-17RAウサギモノクローナル一次抗体を用いて検出され、150kDaという予測される分子量を有する蛋白質を検出することが示された(12661、Cell Signaling)。この抗体は使用に先立ってブロッキング緩衝液(TBST中の5%ドライミルク)によって1:500の比で希釈した。β-アクチン蛋白質は抗β-アクチンウサギモノクローナル一次抗体を用いて検出され、45kDaという予測される分子量を有する蛋白質を検出することが示された(4970、Cell Signaling)。この抗体は使用に先立ってブロッキング緩衝液によって1:1000の比で希釈した。一次抗体インキュベーションは4℃で一晩生起した。
インキュベーション期間後に、膜をTBSTによって2回リンスし、次に15分および5分のTBSTによる2つの連続した洗浄をした。次に、膜を、使用に先立ってブロッキング緩衝液によって1:1000の比で希釈した抗ウサギHRP二次抗体(7074、Cell Signaling)とインキュベーションした。二次抗体インキュベーションは室温で90分間に渡って生起した。それから、膜をTBSTによって2回リンスし、次に15分間および5分間のTBSTによる2つの連続した洗浄をした。それから、膜を蒸留水によって5分間に渡ってさらに2回洗浄した。爾後に、GE AmershamプライムECL試薬(RPN2232)を膜に追加し、室温で5分間に渡ってインキュベーションした。それから、膜を20秒の露光インターバルを用いて最高で2分間に渡ってBioRad GelDocイメージャーによってイメージングした。最後に、イメージをデンシトメトリーによって分析し、IL-17RAシグナルをβ-アクチンシグナルに対して正規化して、発現レベルを処置間で比較した。
ゲル基剤によって薬製品として製剤化されたIL-17RA mRNA標的化SNA(化合物IL17RA_282)は、24時間のみの処置後に、健康なヒト皮膚外植片においてIL-17RA mRNAのドーズ依存的なノックダウンを示した(図9)。ノックダウンは、未処置皮膚および0%含量薬製品両方と比較したときに観察された。0.007%含量薬製品による処置は、一元配置ANOVAによって未処置(p=0.0011)および0%含量薬製品(p<0.0001)と比較して統計的に有意なIL-17RA mRNA阻害をもたらした。ゲル基剤によって薬製品として製剤化されたIL-17RA mRNA標的化SNA(化合物IL17RA_282)は、24時間のみの処置後に、健康なヒト皮膚外植片においてIL-17RA蛋白質発現の阻害を示した(図10)。ノックダウンは、未処置皮膚および0%含量薬製品両方と比較したときに観察された。グラフは、ウエスタンブロット(挿入図)から収集された分析されたデンシトメトリーデータを表している。0.0007%ゲルによって処置された皮膚サンプルについては、蛋白質レベル分析を行うためには不十分な材料があった。
臨床データは、IL-17シグナル伝達経路が乾癬疾患状態を持続させることに有意な役割を果たしているということを示唆している。brodalumabのような現行のモノクローナル抗体治療は非常に有効な処置オプションを提供するが、それらは厄介な副作用プロファイルをもまた呈する。これはより安全な代替の治療ニーズを提示している。アンチセンステクノロジーは細胞のmRNAの発現を縮減し得る;しかしながら、アンチセンスオリゴヌクレオチドは一般的には細胞および皮膚への不良な取り込みを有する。対照的に、オリゴヌクレオチドがSNA幾何構造中に配置されるときには、それらは皮膚透過特性および増大した細胞取り込みを見せるということが見出された。これらの利点および乾癬処置の治療ニーズを考えると、皮膚のヒトIL-17RAを標的化するアンチセンスSNAに基づく治療は乾癬の有効な処置となり得る。
ここでは、ゲル基剤によって薬製品として製剤化されたIL-17RA mRNA標的化SNA(化合物IL17RA_282)が健康なヒト皮膚外植片に外用適用されるときには、IL-17RA mRNAおよび蛋白質両方のレベルで見られる薬力学的効果があるということが示された。薬製品の含量を増大させることは減少したIL-17RA発現をもたらす。
この研究において観察された応答は24時間処置のみを表している。複数のドーズによるより長い処置は、観察された阻害をさらに向上させるであろうということが予想される。乾癬において観察された疾患状態を維持することにおけるIL-17シグナル伝達の重要性を考えると、乾癬の処置のための強力な外用薬製品候補が提示されている。
方法および材料
組織培養.4つの皮膚生検(3mm直径)を、軽度から中等度の尋常性乾癬を有する8人の異なる患者のそれぞれから得た。生検は乾癬プラークから直接的にとった。単一の患者からとられ得る生検の限定された数が原因で、4つの生検のみが個人あたりとられた。生検はボランティアから約45分インターバルでとられ、研究室に輸送された(無菌の湿ガーゼで巻いた)。生検をとることとインキュベーションを開始することとの間の時間は5および7.5時間の間であった。生検をインサートウェルの膜内に位置させ、周囲CO2および湿度によって32℃で12ウェルプレート中においてインキュベーションした。膜を1mL細胞培養培地(ダルベッコ改変イーグル培地、1%ウシ胎児血清、1.25μg/mLアムホテリシンB、50μg/mLゲンタマイシン、および0.1U/mLペニシリン/ストレプトマイシン)中に浸漬して、真皮がウェル中において培地に接触し、表皮が空気に露出されるようにした。ウェルあたり1生検があった。12ウェルプレートの蓋を2つの無菌の1mLピペットチップを用いて上げて、水蒸気増加を限定した。薬製品によって処置された皮膚の合計のインキュベーション時間は21時間15分であった。
リポソームはAvanti Polar Lipids(アラバマ、USA)によって製剤化された。第1に、500gの1,2-ジオレオイル-sn-グリセロ-3-ホスホコリン(DOPC)をクロロホルム中に50mg/mLの終濃度に溶解した。それから、溶媒を窒素下において取り除いて、薄い脂質フィルムを形成した。フィルムを一晩凍結乾燥して、全ての溶媒が取り除かれたことを保証した。爾後に、脂質フィルムをHyclone無菌ヌクレアーゼ不含水(SH30538.03、GE)によって100mg/mLの濃度で水和し、ソニケーション/凍結割断を用いて大きい単層小胞を形成した。それから、20nmという個数平均直径が達成されるまで、それらの小胞を最高で25kpsiでマイクロフルイダイザーによって連続ホモジナイゼーションした。リポソーム溶液をタンジェンシャルフロー濾過(TFF)によって208mg/mLの脂質終濃度にさらに濃縮した。脂質濃度はコリン定量アッセイおよび核磁気共鳴分光法を用いて決定した。粒子サイズおよび分散は動的光散乱(DLS)によって測定した。
30倍モル過剰のコレステロール修飾全長オリゴヌクレオチドをHyclone無菌ヌクレアーゼ不含水(SH30538.03、GE)中のリポソーム懸濁液に混合し、次に4℃における一晩インキュベーションをすることによって、ヒトIL-17RAを標的化するSNAを製剤化した。
それから、IL17RA_282ゲルを8レプリケートで皮膚外植片に外用適用した。サンプル処理の間に、1.0%群の1つのサンプルが失われ、この群では7レプリケートのみをもたらした。各レプリケートは患者特異的な応答の正確な描写および比較のために異なる患者からとられた。IL17RA_282ゲルを投薬に先立ってピペットチップを用いて手短に混合した。各薬製品の10μLをポジティブディスプレイスメントピペットを用いて各3mm生検に外用投薬した。ピペットチップを用いて薬製品を均一に広げ、皮膚の露出表面積全体をカバーした。実際の投薬時間を記録し、外植片を21時間に渡って32℃かつ周囲湿度に維持した。
21時間インキュベーション期間の結末に、生検を各膜から取り除いた。PBSによって濡らした木綿の綿棒を用いて薬製品を取り除き、それから適用面積の水気を吸って乾かした。生検パンチをビーズ式ホモジナイザーによってRLT緩衝液(Qiagen)中でリシスし、ドライアイス上で研究施設に運送されるまで-80℃で凍結保管した。
IL17RA_282ゲルは、21時間の処置後のヒト乾癬皮膚生検におけるIL-17RA mRNAのドーズ依存的なノックダウンを示した(図11)。ノックダウンは、IL17RA_282含有ゲルを0%ゲル中含量処方と比較したときに観察された。IL17RA_282ゲルによる処置はIL-17RA mRNAの統計的に有意な縮減をもたらした。
ここでは、IL17RA_282ゲルがエクスビボのヒト乾癬皮膚生検に外用適用されるときには、IL-17RA mRNAのレベルで見られる薬力学的効果があるということが示された。この研究において観察された応答は21時間処置のみを表している。複数のドーズによるより長い処置は、観察された阻害をさらに向上させるであろうということが予想される。乾癬において観察される疾患状態を維持することにおけるIL-17シグナル伝達の重要性を考えると、乾癬の処置のための強力な外用薬製品候補が提示されている。
材料および方法
多重SNA合成.SNAは、100×モル過剰(別様に書かれていない限り)のコレステロール修飾オリゴヌクレオチドをPBS中のリポソーム懸濁液に混合することと、それらを光から保護して4℃で一晩保管することとによって製剤化した。4つの異なるオリゴヌクレオチドを合成プロセスに用いた:ヒトIL-4Rを標的化するアンチセンスオリゴヌクレオチド、ヒトIL-1βを標的化するアンチセンスオリゴヌクレオチド、ヒトCTGFを標的化するアンチセンスオリゴヌクレオチド、および既知の遺伝子に対していずれかの相補性を有さない(BLASTによって確認)同じ長さのコントロールオリゴヌクレオチド。一重SNAでは、オリゴヌクレオチド集団は33%の標的化アンチセンスオリゴヌクレオチドと66%のコントロールオリゴヌクレオチドとからなった。2つの異なる標的化SNAアンチセンスオリゴヌクレオチドを含有する多重SNAでは、オリゴヌクレオチド集団は33%の各標的化SNAアンチセンスオリゴヌクレオチドと残りの33%のコントロールオリゴヌクレオチドとからなった(図12)。3つの異なる標的化SNAアンチセンスオリゴヌクレオチドを含有する多重SNAでは、オリゴヌクレオチド集団は33%の各標的化SNAアンチセンスオリゴヌクレオチドからなった。コントロールSNAは100%のコントロールオリゴヌクレオチドからなった(図9)。
7つの異なるSNA構成を作って、3つの異なるmRNAが単一のSNA構築物を用いて標的化され得るかどうかを試験した。発現が機能的に互いに依存的でなくかつ単一の既知経路にはない3つのmRNAを選んだ。ある種のケースでは、特定の経路をコントロールするために、同じ経路の一部であるmRNA同士、例えばTNF、IL17、IL22を標的化することが有利であり得る。各個々のmRNA単独、mRNAの3つのペアを標的化するSNA、および全ての3つのmRNAを標的化し得る1つのSNA構成を合成した。コントロールオリゴヌクレオチドを用いて、各SNA構成が同じ数の標的化および非標的化オリゴヌクレオチドを有することを保証した。
細胞培養実験からの結果は、3つの異なるmRNAを標的化する単一のSNAが製剤化され得るということを実証している。選んだmRNAはインターロイキン4受容体(IL4R)、インターロイキン1ベータ(IL1b)、および結合組織成長因子(CTGF)であった。これらの標的は、他の実験において、これらのmRNAのいずれか1つをノックダウンすることが他の2つのレベルを有意に縮減しなかったということが注意されたので選ばれた。結果は、いずれかの単一のmRNAを標的化するアンチセンスオリゴヌクレオチドがSNA上に存在するときに、そのmRNAの発現がドーズ依存的な様式で縮減されるということを示している(IL4Rは図13、IL1bは図14、CTGFは図15)。この構成は3つよりも多くのmRNAを標的化するように拡張され得る。SNAあたりの合計のアンチセンス担持は、単一のSNA構成によって標的化され得るmRNAの数の理論的限界であり得る。
1. Banga RJ, Chernyak N, Narayan SP, Nguyen ST, Mirkin CA. Liposomal Spherical Nucleic Acids. J. Am. Chem. Soc. 2014 136: 9866-9869.
2. Ding Y and LawrenceCE. A Statistical Sampling Algorithm for RNA Secondary Structure Prediction. Nucleic Acids Res. 2003: 31: 7280-7301.
3. Chabaud Ml, Fossiez F, Taupin JL, Miossec P. Enhancing effect of IL-17 on IL-l-induced IL-6 and leukemia inhibitory factor production by rheumatoid arthritis synoviocytes and its regulation by Th2 cytokines. J Immunol. 1998 Jul 1;161(1):409-14.
4. Miossec P. Interleukin-17 in rheumatoid arthritis: if T cells were to contribute to inflammation and destruction through synergy. Arthritis Rheum. 2003 Mar;48(3):594-601.
均等物
Claims (25)
- 第1の遺伝子を標的化した長さ10から30個の連結されたヌクレオシドのアンチセンスオリゴヌクレオチドと第2の遺伝子を標的化した長さ10から30個の連結されたヌクレオシドのアンチセンスオリゴヌクレオチドとから構成されるオリゴヌクレオチドシェルを有するコアを含み、
コアが、リポソームコアであり、オリゴヌクレオチドシェルがコアの外面上に位置し、
第1の遺伝子を標的化したアンチセンスオリゴヌクレオチドおよび第2の遺伝子を標的化したアンチセンスオリゴヌクレオチドが、およその等モル量でオリゴヌクレオチドシェル中に存在する、多重アンチセンスオリゴヌクレオチド球状核酸(mASO-SNA)。 - 第1の遺伝子および第2の遺伝子が疾患に関連する、請求項1に記載のmASO-SNA。
- 疾患が炎症性障害である、請求項2に記載のmASO-SNA。
- 疾患が乾癬である、請求項2または3に記載のmASO-SNA。
- 第1の遺伝子および第2の遺伝子が標的経路に関連する、請求項1~4のいずれか一項に記載のmASO-SNA。
- さらに、第3の遺伝子を標的化した長さ12から30個の連結されたヌクレオシドのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む、請求項1~5のいずれか一項に記載のmASO-SNA。
- 第1の遺伝子がインターロイキン17受容体(IL-17RA)である、請求項1~6のいずれか一項に記載のmASO-SNA。
- 第2の遺伝子がTNFである、請求項1~7のいずれか一項に記載のmASO-SNA。
- 障害を処置するための方法において用いるための組成物であって、
該組成物が、第1の遺伝子を標的化した長さ10から30個の連結されたヌクレオシドのアンチセンスオリゴヌクレオチドと第2の遺伝子を標的化した長さ10から30個の連結されたヌクレオシドのアンチセンスオリゴヌクレオチドとから構成されるオリゴヌクレオチドシェルを有するコアを含む、多重アンチセンスオリゴヌクレオチド球状核酸(mASO-SNA)を、障害を処置するための有効量で含み、
コアが、リポソームコアであり、オリゴヌクレオチドシェルがコアの外面上に位置し、第1の遺伝子を標的化したアンチセンスオリゴヌクレオチドおよび第2の遺伝子を標的化したアンチセンスオリゴヌクレオチドが、およその等モル量でオリゴヌクレオチドシェル中に存在する、前記組成物。 - 障害が炎症性障害である、請求項9に記載の組成物。
- mASO-SNAが第1および第2の遺伝子の同時的なmRNAノックダウンを生ずる、請求項9に記載の組成物。
- 第1の遺伝子および第2の遺伝子がある標的経路に関連する、請求項9に記載の組成物。
- mASO-SNAが標的経路の相加的ノックダウンを生ずる、請求項12に記載の組成物。
- 障害が乾癬である、請求項9~13のいずれか一項に記載の組成物。
- インビボの遺伝子の発現レベルを縮減するための方法において用いるための組成物であって、
該組成物が、第1の遺伝子を標的化した長さ10から30個の連結されたヌクレオシドのアンチセンスオリゴヌクレオチドと第2の遺伝子を標的化した長さ10から30個の連結されたヌクレオシドのアンチセンスオリゴヌクレオチドとから構成されるオリゴヌクレオチドシェルを有するコアを含む、多重アンチセンスオリゴヌクレオチド球状核酸(mASO-SNA)を含む医薬組成物を、インビボの第1の遺伝子の発現レベルを縮減するための有効量で含み、
コアが、リポソームコアであり、オリゴヌクレオチドシェルがコアの外面上に位置し、第1の遺伝子を標的化したアンチセンスオリゴヌクレオチドおよび第2の遺伝子を標的化したアンチセンスオリゴヌクレオチドが、およその等モル量でオリゴヌクレオチドシェル中に存在する、前記組成物。 - 第1の遺伝子、第2の遺伝子および第3の遺伝子が標的経路に関連する、請求項6に記載のmASO-SNA。
- 第1の遺伝子および第2の遺伝子が異なる標的経路に関連する、請求項1~8のいずれか一項に記載のmASO-SNA。
- 第1の遺伝子、第2の遺伝子および第3の遺伝子が異なる標的経路に関連する、請求項6に記載のmASO-SNA。
- 第1の遺伝子がインターロイキン-4受容体(IL-4R)である、請求項1~6のいずれか一項に記載のmASO-SNA。
- 第2の遺伝子がインターロイキン-1ベータ(IL-1β)である、請求項1~8のいずれか一項に記載のmASO-SNA。
- 第3の遺伝子が結合組織成長因子(CTGF)である、請求項6に記載のmASO-SNA。
- 第1の遺伝子を標的化したアンチセンスオリゴヌクレオチド、第2の遺伝子を標的化したアンチセンスオリゴヌクレオチドおよび第3の遺伝子を標的化したアンチセンスオリゴヌクレオチドが、およその等モル量でオリゴヌクレオチドシェル中に存在する、請求項6に記載のmASO-SNA。
- 請求項1~8のいずれか一項に記載のmASO-SNAを含む、医薬組成物。
- 医薬組成物がさらにゲル基剤を含む、請求項23に記載の医薬組成物。
- 医薬組成物が1,2-ジオレオイル-sn-グリセロ-3-ホスホコリン(DOPC)、ジエチレングリコールモノエチルエーテル(Transcutol P)、グリセリン、ヒドロキシエチルセルロース、メチルパラベン、プロピルパラベン、EDTA二ナトリウム、ピロ亜硫酸ナトリウム、および水の1つ以上を含む、請求項23または24に記載の医薬組成物。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201662333082P | 2016-05-06 | 2016-05-06 | |
US62/333,082 | 2016-05-06 | ||
PCT/US2017/031428 WO2017193087A1 (en) | 2016-05-06 | 2017-05-05 | Liposomal spherical nucleic acid (sna) constructs prsenting antisense oligonucleotides(aso) for specific knockdown of interleukin 17 receptor mrna |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2019522462A JP2019522462A (ja) | 2019-08-15 |
JP2019522462A5 JP2019522462A5 (ja) | 2020-06-18 |
JP7186094B2 true JP7186094B2 (ja) | 2022-12-08 |
Family
ID=60203520
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2018558339A Active JP7186094B2 (ja) | 2016-05-06 | 2017-05-05 | インターロイキン17受容体mRNAの特異的ノックダウンのためのアンチセンスオリゴヌクレオチド(ASO)を提示するリポソーム系球状核酸(SNA)構築物 |
Country Status (8)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US11866700B2 (ja) |
EP (1) | EP3452598A4 (ja) |
JP (1) | JP7186094B2 (ja) |
KR (1) | KR102617833B1 (ja) |
CN (1) | CN109415731A (ja) |
AU (1) | AU2017261360A1 (ja) |
CA (1) | CA3023451A1 (ja) |
WO (1) | WO2017193087A1 (ja) |
Families Citing this family (14)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20100233270A1 (en) | 2009-01-08 | 2010-09-16 | Northwestern University | Delivery of Oligonucleotide-Functionalized Nanoparticles |
AU2011207563B2 (en) | 2010-01-19 | 2016-03-10 | Northwestern University | Synthetic nanostructures including nucleic acids and/or other entities |
JP6697384B2 (ja) | 2013-07-25 | 2020-05-20 | イグジキュア, インコーポレーテッドExicure, Inc. | 予防的および治療的使用のための免疫刺激剤としての球状の核酸ベース構築物 |
US10413565B2 (en) | 2014-04-30 | 2019-09-17 | Northwestern University | Nanostructures for modulating intercellular communication and uses thereof |
TR201908550T4 (tr) | 2014-06-04 | 2019-07-22 | Exicure Inc | Profilaktik veya terapötik uygulamalar için lipozomal sferik nükleik asitler tarafından immün modülatörlerin çok değerlikli teslimi. |
WO2016085986A1 (en) | 2014-11-24 | 2016-06-02 | Northwestern University | High density lipoprptein nanoparticles for inflammation |
CN110520408B (zh) * | 2017-03-29 | 2022-11-25 | 中国医学科学院基础医学研究所 | 化合物或中药提取物在制备核酸递送试剂中的应用及其相关产品 |
WO2018201090A1 (en) | 2017-04-28 | 2018-11-01 | Exicure, Inc. | Synthesis of spherical nucleic acids using lipophilic moieties |
US20210002640A1 (en) * | 2018-02-28 | 2021-01-07 | Exicure, Inc. | Liposomal spherical nucleic acid (sna) constructs for survival of motor neuron (sma) inhibitors |
WO2019168558A1 (en) * | 2018-02-28 | 2019-09-06 | Exicure, Inc. | Liposomal spherical nucleic acid (sna) constructs for survival of motor neuron (sma) inhibitors |
US20210269806A1 (en) * | 2018-06-20 | 2021-09-02 | Exicure, Inc. | Il-1 beta targeting spherical nucleic acids |
WO2020219985A1 (en) * | 2019-04-26 | 2020-10-29 | Exicure, Inc. | Administration of spherical nucleic acids for ophthalmological uses |
WO2021046254A1 (en) * | 2019-09-04 | 2021-03-11 | Exicure, Inc. | Liposomal spherical nucleic acid (sna) constructs for splice modulation |
US20210106525A1 (en) | 2019-10-11 | 2021-04-15 | Massachusetts Institute Of Technology | Formulations for gastrointestinal delivery of oligonucleotides |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2015523966A (ja) | 2012-05-16 | 2015-08-20 | アーディジェン, エルエルシー | 線維症および炎症状態を処置するための多標的調整 |
WO2016057549A1 (en) | 2014-10-06 | 2016-04-14 | Aurasense Therapeutics, Llc | Anti-tnf compounds |
JP2018503377A (ja) | 2015-01-14 | 2018-02-08 | イグジキュア, インコーポレーテッドExicure, Inc. | コアモチーフを備えた核酸ナノ構造 |
Family Cites Families (205)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5512439A (en) | 1988-11-21 | 1996-04-30 | Dynal As | Oligonucleotide-linked magnetic particles and uses thereof |
US5955589A (en) * | 1991-12-24 | 1999-09-21 | Isis Pharmaceuticals Inc. | Gapped 2' modified oligonucleotides |
US5264618A (en) | 1990-04-19 | 1993-11-23 | Vical, Inc. | Cationic lipids for intracellular delivery of biologically active molecules |
FR2677272B1 (fr) | 1991-06-05 | 1995-03-03 | Biovecteurs As | Vecteur particulaire a tropisme selectif, procede de preparation et composition pharmaceutique. |
JPH07508342A (ja) | 1992-04-22 | 1995-09-14 | エコール ポリテクニーク フェデラル ドゥ ローザンヌ(エーペーエフエル) | 脂質膜センサー |
US5472881A (en) | 1992-11-12 | 1995-12-05 | University Of Utah Research Foundation | Thiol labeling of DNA for attachment to gold surfaces |
US6274711B1 (en) | 1993-06-14 | 2001-08-14 | Inserm, Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale | Purified mammalian CTLA-8 antigens and related reagents |
US6429199B1 (en) | 1994-07-15 | 2002-08-06 | University Of Iowa Research Foundation | Immunostimulatory nucleic acid molecules for activating dendritic cells |
JP4373495B2 (ja) | 1995-03-23 | 2009-11-25 | イミュネックス・コーポレーション | Il−17受容体 |
US6902735B1 (en) | 1995-07-19 | 2005-06-07 | Genetics Institute, Llc | Antibodies to human IL-17F and other CTLA-8-related proteins |
US6361944B1 (en) | 1996-07-29 | 2002-03-26 | Nanosphere, Inc. | Nanoparticles having oligonucleotides attached thereto and uses therefor |
US6506564B1 (en) | 1996-07-29 | 2003-01-14 | Nanosphere, Inc. | Nanoparticles having oligonucleotides attached thereto and uses therefor |
EP1818417B1 (en) | 1996-07-29 | 2014-02-12 | Nanosphere, Inc. | Nanoparticles having oligonucleotides attached thereto and uses therefor |
US6056973A (en) | 1996-10-11 | 2000-05-02 | Sequus Pharmaceuticals, Inc. | Therapeutic liposome composition and method of preparation |
US6051698A (en) | 1997-06-06 | 2000-04-18 | Janjic; Nebojsa | Vascular endothelial growth factor (VEGF) nucleic acid ligand complexes |
DE69739375D1 (de) | 1996-11-27 | 2009-06-04 | Immunex Corp | Verfahren zur regulierung der stickstoffmonoxid-erzeugung |
US7005412B1 (en) | 1996-11-27 | 2006-02-28 | Immunex Corporation | Method of treating ulcerative colitis and Crohn's disease using IL-17 receptor proteins |
JP2001513776A (ja) | 1997-02-28 | 2001-09-04 | ユニバーシティ オブ アイオワ リサーチ ファウンデーション | LPS関連障害の処置における非メチル化CpGジヌクレオチドを含む核酸の使用 |
US6579520B2 (en) | 1998-05-15 | 2003-06-17 | Genentech, Inc. | IL-17 related mammalian cytokine polypeptides (IL-17E) |
US6569645B2 (en) | 1999-05-14 | 2003-05-27 | Genentech, Inc. | IL-17 homologous polypeptides and therapeutic uses thereof |
AU7690898A (en) | 1997-05-20 | 1998-12-11 | Ottawa Civic Hospital Loeb Research Institute | Vectors and methods for immunization or therapeutic protocols |
US6635443B1 (en) | 1997-09-17 | 2003-10-21 | Human Genome Sciences, Inc. | Polynucleotides encoding a novel interleukin receptor termed interleukin-17 receptor-like protein |
US6482923B1 (en) | 1997-09-17 | 2002-11-19 | Human Genome Sciences, Inc. | Interleukin 17-like receptor protein |
US6849719B2 (en) | 1997-09-17 | 2005-02-01 | Human Genome Sciences, Inc. | Antibody to an IL-17 receptor like protein |
AU1249299A (en) * | 1997-11-25 | 1999-06-15 | Brax Genomics Limited | Chimeric antisense oligonucleotides against tnf-alpha and their uses |
US6562578B1 (en) | 1999-01-11 | 2003-05-13 | Schering Corporation | IL-17-like cytokine binding compounds and antibodies |
AU2031399A (en) | 1998-01-09 | 1999-07-26 | Immunex Corporation | Human and murine il-17d, cytokine related to interleukin-17: dna and polypeptides |
JP2002510644A (ja) | 1998-04-03 | 2002-04-09 | ユニバーシティ オブ アイオワ リサーチ ファウンデーション | 免疫治療用オリゴヌクレオチドおよびサイトカインを用いる免疫系刺激のための方法および産物 |
EP3112468A1 (en) | 1998-05-15 | 2017-01-04 | Genentech, Inc. | Il-17 homologous polypeptides and therapeutic uses thereof |
JP3577586B2 (ja) | 1998-05-15 | 2004-10-13 | ジェネンテック・インコーポレーテッド | Il−17相同的ポリペプチドとその治療用途 |
US7771719B1 (en) | 2000-01-11 | 2010-08-10 | Genentech, Inc. | Pharmaceutical compositions, kits, and therapeutic uses of antagonist antibodies to IL-17E |
AUPP547398A0 (en) | 1998-08-26 | 1998-09-17 | Medvet Science Pty. Ltd. | Predictive assessment of certain skeletal disorders |
AU6277799A (en) | 1998-10-02 | 2000-04-26 | Eli Lilly And Company | Il-17 homolog nucleic acids, polypeptides, vectors, host cells, methods and usesthereof |
US6228642B1 (en) | 1998-10-05 | 2001-05-08 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense oligonucleotide modulation of tumor necrosis factor-(α) (TNF-α) expression |
DE19852729A1 (de) | 1998-11-16 | 2000-05-18 | Werner Reutter | Rekombinante Glycoproteine, Verfahren zu ihrer Herstellung, sie enthaltende Arzneimittel und ihre Verwendung |
EP1141297B1 (en) | 1999-01-11 | 2009-09-30 | Schering Corporation | Interleukin-17 related mammalian cytokines. polynucleotides encoding them . uses |
US8133734B2 (en) | 1999-03-16 | 2012-03-13 | Human Genome Sciences, Inc. | Kit comprising an antibody to interleukin 17 receptor-like protein |
EP1053751A1 (en) | 1999-05-17 | 2000-11-22 | Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) | Compositions and methods for treating cell proliferation disorders |
WO2001000876A1 (en) | 1999-06-25 | 2001-01-04 | Mirkin Chad A | Nanoparticles having oligonucleotides attached thereto and uses therefor |
EP1220684B2 (en) | 1999-09-27 | 2010-07-14 | Coley Pharmaceutical Group, Inc. | Methods related to immunostimulatory nucleic acid-induced interferon |
US6585947B1 (en) | 1999-10-22 | 2003-07-01 | The Board Of Trustess Of The University Of Illinois | Method for producing silicon nanoparticles |
US20040043397A1 (en) | 2000-01-11 | 2004-03-04 | Genentech, Inc. | IL-17 homologous polypeptides and therapeutic uses thereof |
WO2001057202A2 (en) | 2000-02-04 | 2001-08-09 | The Board Of Trustees Of The University Of Arkansas | Evi27 gene sequences and protein encoded thereby |
AR028210A1 (es) | 2000-02-08 | 2003-04-30 | Amgen Inc | Molcculas semejantes a il-17 y usos de las mismas |
US7833992B2 (en) | 2001-05-18 | 2010-11-16 | Merck Sharpe & Dohme | Conjugates and compositions for cellular delivery |
US7491805B2 (en) | 2001-05-18 | 2009-02-17 | Sirna Therapeutics, Inc. | Conjugates and compositions for cellular delivery |
US8202979B2 (en) | 2002-02-20 | 2012-06-19 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid |
US8273866B2 (en) | 2002-02-20 | 2012-09-25 | Merck Sharp & Dohme Corp. | RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (SINA) |
US6569419B2 (en) | 2000-02-29 | 2003-05-27 | Zymogenetics, Inc. | Methods for promoting production of myelin by Schwann cells |
AU2001241816A1 (en) | 2000-02-29 | 2001-09-12 | Zymogenetics Inc. | Methods for promoting production of myelin by schwann cells |
AR028256A1 (es) | 2000-03-16 | 2003-04-30 | Amgen Inc | Moleculas similares a receptores il-17 y usos de las mismas |
US7094566B2 (en) | 2000-03-16 | 2006-08-22 | Amgen Inc., | IL-17 receptor like molecules and uses thereof |
US7718397B2 (en) | 2000-03-21 | 2010-05-18 | Genentech, Inc. | Nucleic acids encoding receptor for IL-17 homologous polypeptides and uses thereof |
US20030096969A1 (en) | 2000-06-02 | 2003-05-22 | Genentech, Inc. | Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same |
US20030124092A1 (en) | 2001-06-21 | 2003-07-03 | Eugene Medlock | IL-17 like molecules and uses thereoflike molecules and uses thereof |
JP2004504064A (ja) | 2000-06-22 | 2004-02-12 | アムジエン・インコーポレーテツド | Il−17分子およびその用途 |
CN1341660A (zh) | 2000-09-07 | 2002-03-27 | 上海博德基因开发有限公司 | 一种新的多肽——人白细胞介素受体-配体(il-17b和il-17br)32.56和编码这种多肽的多核苷酸 |
AU2001296229A1 (en) | 2000-10-13 | 2002-04-29 | Eli Lilly And Company | Methods of using a human il-17-related polypeptide to treat disease |
EP1326626B1 (en) | 2000-10-18 | 2020-04-01 | Immunex Corporation | Methods for treating rheumatoid arthritis using il-17 antagonists |
WO2002038764A2 (en) | 2000-11-10 | 2002-05-16 | The Regents Of The University Of California | Il-17 receptor-like protein, uses thereof, and modulation of catabolic activity of il-17 cytokines on bone and cartilage |
US7083958B2 (en) | 2000-11-20 | 2006-08-01 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Membrane scaffold proteins |
US20090137416A1 (en) | 2001-01-16 | 2009-05-28 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Isolating Cells Expressing Secreted Proteins |
CA2435151A1 (en) | 2001-01-25 | 2002-12-27 | Zymogenetics, Inc. | Method for treating psoriasis |
WO2002064739A2 (en) | 2001-02-09 | 2002-08-22 | Johns Hopkins University | A cytokine related structurally to il-17 |
CA2452233A1 (en) | 2001-03-26 | 2002-10-03 | Zymogenetics, Inc. | Method of inducing proliferation of retinal stem cells |
GB0111279D0 (en) | 2001-05-10 | 2001-06-27 | Nycomed Imaging As | Radiolabelled liposomes |
WO2002092069A1 (en) * | 2001-05-11 | 2002-11-21 | Elan Corporation, Plc | Permeation enhancers |
US20090299045A1 (en) | 2001-05-18 | 2009-12-03 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA Interference Mediated Inhibition Of Interleukin and Interleukin Gene Expression Using Short Interfering Nucleic Acid (siNA) |
AU2002239726A1 (en) | 2001-05-25 | 2002-12-09 | Northwestern University | Non-alloying core shell nanoparticles |
CA2453417A1 (en) | 2001-07-10 | 2003-06-26 | North Carolina State University | Nanoparticle delivery vehicle |
US20040023382A1 (en) * | 2002-07-31 | 2004-02-05 | Isis Pharmaceuticals Inc. | Antisense modulation of PPP3CB expression |
US7923547B2 (en) | 2002-09-05 | 2011-04-12 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (siNA) |
WO2004042009A2 (en) | 2002-10-30 | 2004-05-21 | Genentech, Inc. | Inhibition of il-17 production |
US20040158051A1 (en) | 2002-11-19 | 2004-08-12 | Mihri Ozkan | Mono and dual conjugation of nanostructures and methods of making and using thereof |
EP1578419A4 (en) | 2002-12-30 | 2008-11-12 | 3M Innovative Properties Co | IMMUNOSTIMULATING COMBINATIONS |
EP1663316A2 (en) | 2003-09-25 | 2006-06-07 | Coley Pharmaceutical Group, Inc. | Nucleic acid lipophilic conjugates |
CN101454451A (zh) | 2003-10-30 | 2009-06-10 | 科勒制药有限公司 | 具有增强免疫刺激能力的c类寡核苷酸类似物 |
EP1547581A1 (en) | 2003-12-23 | 2005-06-29 | Vectron Therapeutics AG | Liposomal vaccine for the treatment of human hematological malignancies |
EP1550458A1 (en) | 2003-12-23 | 2005-07-06 | Vectron Therapeutics AG | Synergistic liposomal adjuvants |
WO2005108614A2 (en) | 2004-04-07 | 2005-11-17 | Northwestern University | Reversible and chemically programmable micelle assembly with dna block-copolymer amphiphiles |
JP2007535930A (ja) | 2004-05-03 | 2007-12-13 | シェーリング コーポレイション | 皮膚の炎症を予測するためのil−17発現の使用;処置方法 |
JP5398982B2 (ja) | 2004-05-24 | 2014-01-29 | ミダテック リミテッド | Rnaリガンドを含むナノ粒子 |
US7964196B2 (en) | 2004-05-25 | 2011-06-21 | Chimeros, Inc. | Self-assembling nanoparticle drug delivery system |
WO2006016978A1 (en) | 2004-06-30 | 2006-02-16 | Applera Corporation | Analog probe complexes |
WO2006015560A1 (de) | 2004-08-09 | 2006-02-16 | Mologen Ag | Immunmodulierendes mittel in verbindung mit chemotherapeutischen massnahmen |
US20060083781A1 (en) | 2004-10-14 | 2006-04-20 | Shastri V P | Functionalized solid lipid nanoparticles and methods of making and using same |
KR100721928B1 (ko) | 2004-11-05 | 2007-05-28 | 주식회사 바이오씨에스 | CpG 올리고데옥시뉴클레오티드를 함유하는 피부질환의치료 또는 예방용 약학적 조성물 |
CA2597724A1 (en) | 2005-02-14 | 2007-08-02 | Sirna Therapeutics, Inc. | Cationic lipids and formulated molecular compositions containing them |
AU2006214473A1 (en) * | 2005-02-14 | 2006-08-24 | Wyeth | Interleukin-17F antibodies and other IL-17F signaling antagonists and uses therefor |
US7404969B2 (en) | 2005-02-14 | 2008-07-29 | Sirna Therapeutics, Inc. | Lipid nanoparticle based compositions and methods for the delivery of biologically active molecules |
WO2006110350A2 (en) | 2005-03-29 | 2006-10-19 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Method of fabricating lipid bilayer membranes on solid supports |
EP1880019A1 (en) | 2005-05-12 | 2008-01-23 | Arizona Board Regents, a body corporate of the State of Arizona, acting for and on behalf of Arizona State University | Self-assembled nucleic acid nanoarrays and uses therefor |
WO2006138145A1 (en) | 2005-06-14 | 2006-12-28 | Northwestern University | Nucleic acid functionalized nanoparticles for therapeutic applications |
US8655675B2 (en) | 2005-06-30 | 2014-02-18 | Humana Inc. | System and method for providing individually tailored health-promoting information |
US8067571B2 (en) | 2005-07-13 | 2011-11-29 | Avi Biopharma, Inc. | Antibacterial antisense oligonucleotide and method |
WO2007047455A2 (en) | 2005-10-13 | 2007-04-26 | Northwestern University | Colorimetric screening of dna binding/intercalating agents with gold nanoparticle probes |
CA2628306C (en) | 2005-11-07 | 2014-06-17 | Sudhir Agrawal | Immunostimulatory oligonucleotide-based compounds with glycerol-linked dinucleotides and modified guanosines at cpg and uses thereof |
CN101351469A (zh) | 2005-11-07 | 2009-01-21 | 艾德拉药物股份有限公司 | 包含经修饰的免疫刺激性二核苷酸的基于寡核苷酸的化合物之免疫刺激特性 |
GB0523954D0 (en) | 2005-11-24 | 2006-01-04 | Ucb Celltech | Bioassays |
WO2007064857A2 (en) | 2005-12-01 | 2007-06-07 | Pronai Therapeutics, Inc. | Amphoteric liposome formulation |
US20090317802A1 (en) | 2005-12-09 | 2009-12-24 | Bhatia Sangeeta N | Compositions and Methods to Monitor RNA Delivery to Cells |
JP2009524430A (ja) | 2006-01-26 | 2009-07-02 | ユニバーシティ オブ マサチューセッツ | 治療的使用のためのrna干渉剤 |
US8361494B2 (en) | 2006-03-10 | 2013-01-29 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Biomimetic iron-oxide-containing lipoprotein and related materials |
GB0607866D0 (en) | 2006-04-20 | 2006-05-31 | Isis Innovation | Nanostructures |
WO2007137117A2 (en) | 2006-05-17 | 2007-11-29 | Massachusetts Institute Of Technology | Aptamer-directed drug delivery |
US20090280188A1 (en) | 2006-06-23 | 2009-11-12 | Northwestern University | Asymmetric functionalizated nanoparticles and methods of use |
JP2010500375A (ja) | 2006-08-08 | 2010-01-07 | ボード・オブ・リージエンツ,ザ・ユニバーシテイ・オブ・テキサス・システム | 活性剤の多段階送達 |
US20100099858A1 (en) | 2006-09-28 | 2010-04-22 | Mirkin Chad A | Maximizing Oligonucleotide Loading on Gold Nanoparticle |
JP2010520749A (ja) | 2007-02-27 | 2010-06-17 | ノースウェスタン ユニバーシティ | ナノ粒子への分子の結合 |
CA2682376C (en) | 2007-03-30 | 2015-10-06 | Hirofumi Takeuchi | Transpulmonary liposome for controlling drug arrival |
US20100144903A1 (en) | 2007-05-04 | 2010-06-10 | Cedars-Sinai Medical Center | Methods of diagnosis and treatment of crohn's disease |
US20100234579A1 (en) | 2007-05-10 | 2010-09-16 | North Western University | Silver nanoparticle binding agent conjugates based on moieties with triple cyclic disulfide anchoring groups |
EP2160464B1 (en) | 2007-05-30 | 2014-05-21 | Northwestern University | Nucleic acid functionalized nanoparticles for therapeutic applications |
CN103961315A (zh) | 2007-05-31 | 2014-08-06 | 安特里奥公司 | 核酸纳米粒子和其用途 |
EP2152897B1 (en) | 2007-06-05 | 2015-02-18 | Melica HB | Methods and materials related to hair pigmentation and cancer |
US20100272813A1 (en) | 2007-07-23 | 2010-10-28 | Aarhus Universitet | Nanoparticle-mediated treatment for inflammatory diseases |
US8563527B2 (en) | 2007-08-20 | 2013-10-22 | Pharmain Corporation | Oligonucleotide core carrier compositions for delivery of nucleic acid-containing therapeutic agents, methods of making and using the same |
WO2009026412A1 (en) * | 2007-08-21 | 2009-02-26 | Children's Medical Center Corporation | Treatment of airway hyperreactivity |
WO2009051451A2 (en) | 2007-10-17 | 2009-04-23 | Korea Advanced Institute Of Science And Technology | Ldl-like cationic nanoparticles for deliverying nucleic acid gene, method for preparing thereof and method for deliverying nucleic acid gene using the same |
US20100285111A1 (en) | 2007-11-09 | 2010-11-11 | Northeastern University | Self-assembling micelle-like nanoparticles for systemic gene delivery |
US20110020242A1 (en) | 2007-12-12 | 2011-01-27 | Gang Zheng | High-density lipoprotein-like peptide-phospholipid scaffold ("hpps") nanoparticles |
US8481508B2 (en) | 2008-02-21 | 2013-07-09 | University Of Kentucky Research Foundation | Ultra-small RNAs as toll-like receptor-3 antagonists |
EP2105145A1 (en) | 2008-03-27 | 2009-09-30 | ETH Zürich | Method for muscle-specific delivery lipid-conjugated oligonucleotides |
DK2288336T3 (en) | 2008-04-25 | 2017-03-13 | Univ Northwestern | NANOSTRUCTURES SUITABLE FOR COMPLEXATION OF CHOLESTEROL |
US8063131B2 (en) | 2008-06-18 | 2011-11-22 | University Of Washington | Nanoparticle-amphipol complexes for nucleic acid intracellular delivery and imaging |
KR20110044764A (ko) | 2008-07-28 | 2011-04-29 | 이데라 파마슈티칼즈, 인코포레이티드 | 안티센스 올리고누클레오티드에 의한 톨-유사 수용체 9 발현의 조절 |
EP2341914A2 (en) | 2008-08-04 | 2011-07-13 | Idera Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of toll-like receptor 3 expression by antisense oligonucleotides |
US20100047188A1 (en) | 2008-08-04 | 2010-02-25 | Idera Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of toll-like receptor 8 expression by antisense oligonucleotides |
US20110159011A1 (en) | 2008-08-28 | 2011-06-30 | Wyeth Llc | Uses of il-22, il-17, and il-1 family cytokines in autoimmune diseases |
US9139554B2 (en) | 2008-10-09 | 2015-09-22 | Tekmira Pharmaceuticals Corporation | Amino lipids and methods for the delivery of nucleic acids |
EP3335705A1 (en) | 2008-11-24 | 2018-06-20 | Northwestern University | Polyvalent rna-nanoparticle compositions |
US20100233270A1 (en) | 2009-01-08 | 2010-09-16 | Northwestern University | Delivery of Oligonucleotide-Functionalized Nanoparticles |
CN102307470B (zh) | 2009-01-08 | 2015-05-20 | 西北大学 | 通过多价寡核苷酸修饰的纳米颗粒缀合物抑制细菌蛋白的产生 |
EP2391717A1 (en) | 2009-01-28 | 2011-12-07 | Aarhus Universitet | Treatment of radiation-induced fibrosis |
WO2010091293A1 (en) | 2009-02-06 | 2010-08-12 | The Regents Of The University Of California | Plasmonic system for detecting binding of biological molecules |
CN108451968A (zh) | 2009-04-15 | 2018-08-28 | 西北大学 | 寡核苷酸功能化的纳米颗粒的递送 |
EP3305302B1 (en) | 2009-06-17 | 2018-09-19 | Biogen MA Inc. | Compositions and methods for modulation of smn2 splicing in a subject |
WO2011005942A2 (en) | 2009-07-08 | 2011-01-13 | Idera Pharmaceuticals, Inc. | Oligonucleotide-based compounds as inhibitors of toll-like receptors |
WO2011017382A2 (en) | 2009-08-03 | 2011-02-10 | The Regents Of The University Of California | Nanofibers and morphology shifting micelles |
US20120277283A1 (en) | 2009-08-04 | 2012-11-01 | Mirkin Chad A | Localized Delivery of Gold Nanoparticles for Therapeutic and Diagnostic Applications |
US20120269730A1 (en) | 2009-08-07 | 2012-10-25 | Northwestern University | Intracellular Delivery of Contrast Agents with Functionalized Nanoparticles |
ES2646097T3 (es) | 2009-08-27 | 2017-12-12 | Idera Pharmaceuticals, Inc. | Composición para inhibir la expresión de genes y sus usos |
US20120244230A1 (en) | 2009-09-01 | 2012-09-27 | Massachusetts Institute Of Technology | Polyvalent polynucleotide nanoparticle conjugates as delivery vehicles for a chemotherapeutic agent |
CA2772660A1 (en) | 2009-09-01 | 2011-03-10 | Northwestern University | Delivery of therapeutic agents using oligonucleotide-modified nanoparticles as carriers |
US20110111974A1 (en) | 2009-10-23 | 2011-05-12 | Northwestern University | Short Duplex Probes for Enhanced Target Hybridization |
DK2494075T3 (en) | 2009-10-30 | 2018-07-23 | Univ Northwestern | TABLE-MANAGED NANOCONJUGATES |
US9138418B2 (en) | 2009-12-09 | 2015-09-22 | William Marsh Rice University | Therapeutic compositions and methods for delivery of active agents cleavably linked to nanoparticles |
JP2013515697A (ja) * | 2009-12-23 | 2013-05-09 | マックスプランク−ゲセルシャフト・ツール・フェーデルング・デル・ヴィッセンシャフテン・エー・ファウ | インフルエンザ標的 |
EP2516647B1 (en) | 2009-12-24 | 2016-12-14 | BioMarin Technologies B.V. | Molecule for treating an inflammatory disorder |
WO2011079290A1 (en) | 2009-12-24 | 2011-06-30 | Northwestern University | Oligonucleotide specific uptake of nanoconjugates |
AU2011207563B2 (en) | 2010-01-19 | 2016-03-10 | Northwestern University | Synthetic nanostructures including nucleic acids and/or other entities |
US20130101512A1 (en) | 2010-03-12 | 2013-04-25 | Chad A. Mirkin | Crosslinked polynucleotide structure |
ES2816898T3 (es) * | 2010-05-13 | 2021-04-06 | Sarepta Therapeutics Inc | Compuestos que modulan la actividad de señalización de las interleucinas 17 y 23 |
KR101198715B1 (ko) | 2010-05-14 | 2012-11-13 | 한국생명공학연구원 | 핵산 및 친수성 음이온 화합물의 고효율 포획을 위한 비대칭 리포솜 및 이의 제조방법 |
WO2011156895A2 (en) | 2010-06-14 | 2011-12-22 | National Research Council Of Canada | Magnetic nanoparticles and uses thereof |
WO2012031205A2 (en) | 2010-09-03 | 2012-03-08 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Lipid-polymer hybrid particles |
US20120082616A1 (en) * | 2010-09-24 | 2012-04-05 | Mallinckrodt Llc | Aptamer Conjugates for Targeting of Therapeutic and/or Diagnostic Nanocarriers |
EP2632434A1 (en) | 2010-10-26 | 2013-09-04 | AC Immune S.A. | Liposome-based construct comprising a peptide modified through hydrophobic moieties |
ES2683161T3 (es) | 2011-06-10 | 2018-09-25 | Institut National De La Santé Et De La Recherche Médicale (Inserm) | Procedimientos de tratamiento de amaurosis congénita de Leber |
WO2013012628A2 (en) | 2011-07-15 | 2013-01-24 | The University Of Georgia Research Foundation, Inc. | Immune-stimulating photoactive hybrid nanoparticles |
CN104583415B (zh) | 2011-07-19 | 2018-04-03 | 国家生物技术研究所公司 | 新型il‑17r‑ecd突变体 |
WO2013036974A1 (en) | 2011-09-11 | 2013-03-14 | Aurasense, Llc | Cellular uptake control systems |
ES2856091T3 (es) | 2011-09-14 | 2021-09-27 | Univ Northwestern | Nanoconjugados capaces de atravesar la barrera hematoencefálica |
US9725716B2 (en) | 2011-12-06 | 2017-08-08 | Ohio State Innovation Foundation and Research Institute at Nationwide Children's Hospital | Non-ionic, low osmolar contrast agents for delivery of antisense oligonucleotides and treatment of disease |
WO2014025795A1 (en) | 2012-08-07 | 2014-02-13 | Northeastern University | Compositions for the delivery of rna and drugs into cells |
US9095625B2 (en) | 2012-08-31 | 2015-08-04 | University Of Massachusetts | Graft-copolymer stabilized metal nanoparticles |
CA2899155A1 (en) | 2013-02-05 | 2014-08-14 | 1Globe Health Institute Llc | Biodegradable and clinically-compatible nanoparticles as drug delivery carriers |
US9617544B2 (en) | 2013-04-11 | 2017-04-11 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Nanoparticle mediated delivery of siRNA |
US20160194642A1 (en) | 2013-07-25 | 2016-07-07 | Exicure, Inc | Spherical nucleic acid-based constructs as immunoregulatory agents |
JP6697384B2 (ja) | 2013-07-25 | 2020-05-20 | イグジキュア, インコーポレーテッドExicure, Inc. | 予防的および治療的使用のための免疫刺激剤としての球状の核酸ベース構築物 |
CA2932122C (en) | 2013-12-03 | 2022-04-19 | Northwestern University | Liposomal particles, methods of making same and uses thereof |
US20170175121A1 (en) | 2014-04-03 | 2017-06-22 | Exicure, Inc. | Self assembling nucleic acid nanostructures |
TR201908550T4 (tr) | 2014-06-04 | 2019-07-22 | Exicure Inc | Profilaktik veya terapötik uygulamalar için lipozomal sferik nükleik asitler tarafından immün modülatörlerin çok değerlikli teslimi. |
TW201620526A (zh) | 2014-06-17 | 2016-06-16 | 愛羅海德研究公司 | 用於抑制α-1抗胰蛋白酶基因表現之組合物及方法 |
CN106794256B (zh) | 2014-08-19 | 2021-04-30 | 西北大学 | 蛋白质/寡核苷酸核-壳纳米颗粒治疗剂 |
JP6607925B2 (ja) | 2014-08-20 | 2019-11-20 | ノースウェスタン ユニバーシティ | アンチセンス遺伝子調節のための生体適合性無限配位ポリマーナノ粒子−核酸抱合体 |
CN107109459A (zh) | 2014-11-05 | 2017-08-29 | 加利福尼亚大学董事会 | 用于分层对阻断pd1/pdl1轴的疗法的无响应者的方法 |
US11213593B2 (en) | 2014-11-21 | 2022-01-04 | Northwestern University | Sequence-specific cellular uptake of spherical nucleic acid nanoparticle conjugates |
US20180042848A1 (en) | 2015-02-18 | 2018-02-15 | Exicure, Inc. | Immuno-regulatory lipid containing spherical nucleic acids |
WO2016149323A1 (en) | 2015-03-16 | 2016-09-22 | Exicure, Inc. | Immunomodulatory spherical nucleic acids |
EP3322407A4 (en) | 2015-07-14 | 2019-07-10 | Exicure, Inc. | RELOCATION OF LIPID COMPLEXES IN CELLS INDUCED BY SPINICAL NUCLEIC ACIDS (SNA) |
AU2016312530A1 (en) | 2015-08-24 | 2018-03-01 | Halo-Bio Rnai Therapeutics, Inc. | Polynucleotide nanoparticles for the modulation of gene expression and uses thereof |
WO2017075038A1 (en) | 2015-10-26 | 2017-05-04 | Rana Therapeutics, Inc. | Nanoparticle formulations for delivery of nucleic acid complexes |
WO2017136467A1 (en) | 2016-02-01 | 2017-08-10 | Exicure, Inc. | Surface functionaliztion of liposomes and liposomal spherical nucleic acids (snas) |
US20170240960A1 (en) | 2016-02-24 | 2017-08-24 | Aurasense, Llc | Spherical nucleic acids (sna) flare based fluorescence in situ hybridization |
US11110168B2 (en) | 2016-03-15 | 2021-09-07 | North Carolina State University | Nanoparticles, controlled-release dosage forms, and methods for delivering an immunotherapeutic agent |
US20190142739A1 (en) | 2016-04-19 | 2019-05-16 | Exicure, Inc. | Topical administration of therapeutic agents and oligonucleotide formulations |
KR20190003985A (ko) | 2016-05-06 | 2019-01-10 | 엑시큐어, 인크. | 구형 핵산 tlr9 효능제 |
WO2018039629A2 (en) | 2016-08-25 | 2018-03-01 | Northwestern University | Micellar spherical nucleic acids from thermoresponsive, traceless templates |
WO2018152327A1 (en) | 2017-02-15 | 2018-08-23 | Northwestern University | Enhancing stability and immunomodulatory activity of liposomal spherical nucleic acids |
US20200248183A1 (en) | 2017-04-03 | 2020-08-06 | Subbarao Nallagatla | Tlr9-targeted spherical nucleic acids having potent antitumor activity |
WO2018201090A1 (en) | 2017-04-28 | 2018-11-01 | Exicure, Inc. | Synthesis of spherical nucleic acids using lipophilic moieties |
US11433131B2 (en) | 2017-05-11 | 2022-09-06 | Northwestern University | Adoptive cell therapy using spherical nucleic acids (SNAs) |
WO2018213585A1 (en) | 2017-05-17 | 2018-11-22 | Northwestern University | Conjugation of peptides to spherical nucleic acids (snas) using tracelless linkers |
US20200384104A1 (en) | 2017-12-15 | 2020-12-10 | Northwestern University | Structure-Function Relationships in the Development of Immunotherapeutic Agents |
WO2019168558A1 (en) | 2018-02-28 | 2019-09-06 | Exicure, Inc. | Liposomal spherical nucleic acid (sna) constructs for survival of motor neuron (sma) inhibitors |
US20210002640A1 (en) | 2018-02-28 | 2021-01-07 | Exicure, Inc. | Liposomal spherical nucleic acid (sna) constructs for survival of motor neuron (sma) inhibitors |
US20210269806A1 (en) | 2018-06-20 | 2021-09-02 | Exicure, Inc. | Il-1 beta targeting spherical nucleic acids |
EP3923957A4 (en) | 2019-02-12 | 2022-11-02 | Exicure Operating Company | COMBINED SPHERICAL NUCLEIC ACID AND CHECKPOINT INHIBITOR FOR ANTITUMORS THERAPY |
WO2021046254A1 (en) | 2019-09-04 | 2021-03-11 | Exicure, Inc. | Liposomal spherical nucleic acid (sna) constructs for splice modulation |
WO2021202557A1 (en) | 2020-03-30 | 2021-10-07 | Exicure Operating Company | Spherical nucleic acids (snas) for regulation of frataxin |
WO2022032182A1 (en) | 2020-08-07 | 2022-02-10 | Exicure Operating Company | Treatment of skin diseases and disorders using inhibitors of kallikrein-related peptidases (klk) |
US20230330129A1 (en) | 2020-08-11 | 2023-10-19 | Exicure Operating Company | Tumor necrosis factor receptor superfamily (tnfrsf) agonists, spherical nucleic acid (sna) tlr9 agonists and checkpoint inhibitors for antitumor therapy |
WO2022147541A1 (en) | 2021-01-04 | 2022-07-07 | Exicure Operating Company | Compounds for modulating scn9a expression |
WO2022150369A1 (en) | 2021-01-06 | 2022-07-14 | Exicure Operating Company | Compounds for the treatment of batten disease |
-
2017
- 2017-05-05 US US16/099,385 patent/US11866700B2/en active Active
- 2017-05-05 EP EP17793513.7A patent/EP3452598A4/en active Pending
- 2017-05-05 WO PCT/US2017/031428 patent/WO2017193087A1/en unknown
- 2017-05-05 CN CN201780038630.XA patent/CN109415731A/zh active Pending
- 2017-05-05 AU AU2017261360A patent/AU2017261360A1/en active Pending
- 2017-05-05 CA CA3023451A patent/CA3023451A1/en active Pending
- 2017-05-05 KR KR1020187034954A patent/KR102617833B1/ko active IP Right Grant
- 2017-05-05 JP JP2018558339A patent/JP7186094B2/ja active Active
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2015523966A (ja) | 2012-05-16 | 2015-08-20 | アーディジェン, エルエルシー | 線維症および炎症状態を処置するための多標的調整 |
WO2016057549A1 (en) | 2014-10-06 | 2016-04-14 | Aurasense Therapeutics, Llc | Anti-tnf compounds |
JP2018503377A (ja) | 2015-01-14 | 2018-02-08 | イグジキュア, インコーポレーテッドExicure, Inc. | コアモチーフを備えた核酸ナノ構造 |
Non-Patent Citations (5)
Title |
---|
COTTREZ F. et al.,Toxicology in Vitro,2015年02月24日,29,p.787-802 |
Drug Delivery System,2016年01月,Vol.31, No.1,pp.10-23 |
Drug Delivery System,2016年01月,Vol.31, No.1,pp.35-43 |
GILJOHANN D. A. et al.,Topically-delivered targeted gene suppression of immune activation in psoriasis.,Grantome, National Institutes of Health,Project # 1R41AR066438-01,2016年02月21日,Retrieved from wayback machine [Retrieved on 2021.5.27],URL: <https://web.archive.org/web/20160221072847/https://grantome.com/grant/NIH/R41-AR066438-01> |
ZHANG K. et al.,J. Am. Chem. Soc.,2012年,134,p.16488-16491 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US11866700B2 (en) | 2024-01-09 |
EP3452598A1 (en) | 2019-03-13 |
WO2017193087A8 (en) | 2018-02-01 |
EP3452598A4 (en) | 2020-04-29 |
KR20190003986A (ko) | 2019-01-10 |
JP2019522462A (ja) | 2019-08-15 |
CA3023451A1 (en) | 2017-11-09 |
CN109415731A (zh) | 2019-03-01 |
WO2017193087A1 (en) | 2017-11-09 |
AU2017261360A1 (en) | 2018-11-29 |
US20200308579A1 (en) | 2020-10-01 |
KR102617833B1 (ko) | 2023-12-27 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP7186094B2 (ja) | インターロイキン17受容体mRNAの特異的ノックダウンのためのアンチセンスオリゴヌクレオチド(ASO)を提示するリポソーム系球状核酸(SNA)構築物 | |
US10760080B2 (en) | Anti-TNF compounds | |
US11344504B1 (en) | Combinations of mRNAs encoding immune modulating polypeptides and uses thereof | |
US20210269806A1 (en) | Il-1 beta targeting spherical nucleic acids | |
KR20220026197A (ko) | 세포 투과성 핵산 복합체를 유효성분으로 함유하는 류마티스 관절염의 예방 또는 치료용 조성물 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20200507 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20200507 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20210611 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20210913 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20211210 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20220411 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20220711 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20220808 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20220927 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20221021 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20221128 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7186094 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |