JP7109301B2 - ヘパリン誘発性血小板減少症の診断用結合アッセイ - Google Patents
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Description
i.サンプルを、
・ヘパリンもしくはPF4結合非分枝状多糖もしくはPF4結合多価陰イオンと一緒に、または
・PF4/ヘパリン複合体、もしくは非分枝状多糖もしくは多価陰イオンと共にPF4から構成された複合体と一緒に、および
・粒子状固相と一緒に
混合することによって反応混合物を用意する工程;
ii.反応混合物中の粒子状固相の凝集を測定する工程;
iii.このようにして測定した反応混合物中の凝集を、抗PF4/ヘパリン複合体抗体を含有していないことが既知のドナーからの体液サンプルを含有する反応混合物中の凝集に関する所定の基準値と比較する工程;ならびに
iv.反応混合物中の定量された凝集が基準値を超える場合、サンプル中の抗PF4/ヘパリン複合体抗体の存在を確定する工程
を含み、
ここで、粒子状固相は、単離FcγRIIaタンパク質で被覆されている。
a.ヘパリン、PF4結合非分枝状多糖、またはPF4結合多価陰イオン、またはPF4/ヘパリン複合体、または非分枝状多糖もしくは多価陰イオンと共にPF4から構成された複合体を含有する第1の試薬;および
b.単離FcγRIIaタンパク質で被覆されている粒子状固相を含有する第2の試薬を含有する。
・好ましくは、ヘパリン、未分画ヘパリン、分画ヘパリン、硫酸デキストラン、およびフコイダンからなる群からのPF4結合非分枝状多糖;または
・好ましくは、ポリビニル硫酸塩、ポリビニルスルホン酸塩、ポリビニルリン酸塩、ポリビニルホスホン酸塩、ポリスチレン硫酸塩、およびポリスチレンスルホン酸塩からなる群からのPF4結合多価陰イオン;または
・PF4/ヘパリン複合体;または
・非分枝状多糖もしくは多価陰イオンと共にPF4から構成された複合体
を含有することができる。
試薬1は、ヒト血小板濃縮物から単離したPF4タンパク質を未分画ヘパリン(UFH)と緩衝液中においてPF4タンパク質10μg:0.2U/mL(UFH)の比で混合することによって製造した。別法として、未分画ヘパリン(UFH)(0.2U/mL)のみを含有する試薬1を使用した。
Claims (11)
- 体液サンプル中の抗PF4/ヘパリン複合体抗体を検出する方法であって、
i.サンプルを、
・ヘパリンもしくはPF4結合非分枝状多糖もしくはPF4結合多価陰イオンと一緒に、または
・PF4/ヘパリン複合体、もしくは非分枝状多糖もしくは多価陰イオンと共にPF4から構成された複合体と一緒に、および
・粒子状固相と一緒に
混合することによって反応混合物を用意する工程;ならびに
ii.反応混合物中の粒子状固相の凝集を測定する工程;
iii.このようにして測定した反応混合物中の凝集を、抗PF4/ヘパリン複合体抗体を含有していないことが既知のドナーからの体液サンプルを含有する反応混合物中の凝集に関する所定の基準値と比較する工程;ならびに
iv.反応混合物中の定量された凝集が基準値を超える場合、サンプル中の抗PF4/ヘパリン複合体抗体の存在を確定する工程
を含み、
粒子状固相は、単離FcγRIIaタンパク質で被覆されており、
粒子状固相は、非細胞粒子である、前記方法。 - 反応混合物中の粒子状固相の凝集は、測光法で測定される、請求項1に記載の方法。
- 粒子状固相の第1の分画は、シグナル形成系の第1の成分に結合しており、粒子状固相の第2の分画は、シグナル形成系の第2の成分に結合しており、シグナル形成系の第1および第2の成分が互いに非常に接近した場合、シグナル形成系の第1および第2の成分が相互作用して、検出可能なシグナルが形成されるようになり、形成されるシグナルに基づいて、反応混合物中の粒子状固相の凝集が測定される、請求項1に記載の方法。
- シグナル形成系の第1の成分は化学発光剤であり、シグナル形成系の第2の成分は光増
感剤であり、またはその逆であり、反応混合物中の化学発光が測定される、請求項3に記載の方法。 - ヘパリン誘発性血小板減少症を診断するための方法であって、請求項1~4のいずれか1項に記載の方法を使用して、患者からの体液サンプル中の抗PF4/ヘパリン複合体抗体の存在を検出する、前記方法。
- 請求項1~5のいずれか1項に記載の方法を実行するためのアッセイキットであって、以下の成分:
a.ヘパリン、PF4結合非分枝状多糖、またはPF4結合多価陰イオン、またはPF4/ヘパリン複合体、または非分枝状多糖もしくは多価陰イオンと共にPF4から構成された複合体を含有する第1の試薬;および
b.単離FcγRIIaタンパク質で被覆されている粒子状固相を含有する第2の試薬を含有し、
粒子状固相は、非細胞粒子である、前記アッセイキット。 - 以下の成分:
c.単離FcγRIIaタンパク質で被覆されている粒子状固相を含有する第3の試薬をさらに含み、
第2の試薬の粒子状固相は、シグナル形成系の第1の成分に結合しており、第3の試薬の粒子状固相は、シグナル形成系の第2の成分に結合しており、シグナル形成系の第1および第2の成分が互いに非常に接近した場合、シグナル形成系の第1および第2の成分は相互作用して、検出可能なシグナルが形成されるようになる、請求項6に記載のアッセイキット。 - シグナル形成系の第1の成分は化学発光剤であり、シグナル形成系の第2の成分は光増感剤であり、またはその逆である、請求項7に記載のアッセイキット。
- 粒子状固相はラテックス粒子である、請求項6~8のいずれか1項に記載のアッセイキット。
- 第1の試薬中に存在するヘパリン、PF4結合非分枝状多糖、もしくはPF4結合多価陰イオン、または第1の試薬中に存在するPF4/ヘパリン複合体、または非分枝状多糖もしくは多価陰イオンと共にPF4から構成された複合体は、さらなる粒子状固相に結合されている、請求項6~9のいずれか1項に記載のアッセイキット。
- 前記さらなる粒子状固相がラテックス粒子である、請求項10に記載のアッセイキット。
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