JP7106340B2 - Blood-brain barrier protectant - Google Patents
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Description
本発明は、血液脳関門保護剤に関する。 The present invention relates to a blood-brain barrier protective agent.
血液脳関門（Ｂｌｏｏｄ－Ｂｒａｉｎ Ｂａｒｒｉｅｒ：ＢＢＢ）は、循環血液と脳内の間の自由な物質交換を制限する機構である。ＢＢＢは、循環血液に存在する有害物質から脳を守り、脳の恒常性維持に貢献している。ＢＢＢの本体は脳毛細血管の内皮細胞であり、ここには、タイトジャンクションによって結合した内皮細胞の周囲にペリサイト、アストロサイトの２種類の細胞及び２枚の基底膜が存在している。ＢＢＢを構築しているタイトジャンクションは、Ｃｌａｕｄｉｎ、Ｏｃｃｌｕｄｉｎ、ｊｕｎｃｔｉｏｎａｌ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｍｏｌｅｃｕｌｅ（ＪＡＭ）などの膜貫通型タンパク質や、ＺＯ－１，２，３、Ａｃｔｉｎなどの細胞質内に存在するタンパク質で構成されており、ジッパー構造とも呼ばれている。これらの構造によって、ＢＢＢは、細胞間隙への物質の移動を制限することができる。ＢＢＢが破綻、すなわちＢＢＢの透過性が増大すると、血管内の有害物質が脳内に漏出し、脳組織が傷害されることで、脳の血管障害、炎症、神経障害等の様々な疾患や障害をもたらす。したがって、ＢＢＢを破綻から保護することは、それら疾患や障害の予防又は改善にとって有効である。 The blood-brain barrier (BBB) is a mechanism that restricts free exchange of substances between the circulating blood and the brain. The BBB protects the brain from harmful substances present in the circulating blood and contributes to the maintenance of brain homeostasis. The body of the BBB is endothelial cells of brain capillaries, and two types of cells, pericytes and astrocytes, and two basement membranes are present around the endothelial cells connected by tight junctions. The tight junctions that make up the BBB are composed of transmembrane proteins such as Claudin, Occludin, and junctional adhesion molecules (JAM), and cytoplasmic proteins such as ZO-1, 2, 3, and actin. , is also called a zipper structure. These structures allow the BBB to restrict the movement of substances into the intercellular space. When the BBB breaks down, that is, when the permeability of the BBB increases, toxic substances in the blood vessels leak into the brain, and brain tissue is damaged, resulting in various diseases and disorders such as cerebral vascular disease, inflammation, and neuropathy. bring. Therefore, protecting the BBB from disruption is effective in preventing or ameliorating these diseases and disorders.
ＢＢＢを構成するタイトジャンクションタンパク質のなかで、Ｃｌａｕｄｉｎは、タイトジャンクション構造に最も重要であると考えられている。ＢＢＢでは、ｃｌａｕｄｉｎファミリーのなかでもＣｌａｕｄｉｎ－５が主に発現している。Ｃｌａｕｄｉｎ－５は脊椎動物においては血管内皮細胞に高く発現し、脳内では主に脳毛細血管内皮細胞に発現していることが報告されている（非特許文献１）。脳血管内皮細胞を用いたＢＢＢモデルにおいて、Ｃｌａｕｄｉｎ－５をｓｉＲＮＡで欠失させるとＢＢＢの透過性が増加すること（非特許文献２）、Ｃｌａｕｄｉｎ－５ノックアウトマウスにおけるＢＢＢ透過性の増大や致死性（非特許文献３）が報告されている。以上のことから、ＢＢＢにおけるＣｌａｕｄｉｎ－５の減少はＢＢＢの破綻を招き、ＢＢＢにおけるＣｌａｕｄｉｎ－５の発現を増加させることでＢＢＢを保護できると考えられる。 Among the tight junction proteins that make up the BBB, Claudin is believed to be the most important for tight junction structure. Among the claudin family members, Claudin-5 is mainly expressed in the BBB. It has been reported that Claudin-5 is highly expressed in vascular endothelial cells in vertebrates, and expressed mainly in brain capillary endothelial cells in the brain (Non-Patent Document 1). In a BBB model using cerebral vascular endothelial cells, deletion of Claudin-5 with siRNA increases BBB permeability (Non-Patent Document 2), increased BBB permeability and lethality in Claudin-5 knockout mice (Non-Patent Document 3) has been reported. Based on the above, it is considered that a decrease in Claudin-5 in the BBB leads to disruption of the BBB, and an increase in the expression of Claudin-5 in the BBB can protect the BBB.
またＢＢＢの破綻の原因の一つとして、ＨＭＧＢ１（Ｈｉｇｈ Ｍｏｂｉｌｉｔｙ Ｇｒｏｕｐ Ｂｏｘ １）の発現増加が報告されている。ＨＭＧＢ１は、主に細胞の核内に存在してクロマチンの構造の安定化、又は遺伝子の転写反応に関与するタンパク質として同定されており、さらに細胞質や細胞外において免疫や炎症を制御する役割を担っている（非特許文献４）。ｉｎ ｖｉｔｒｏ血液脳関門モデルを用いた実験系において、ＨＭＧＢ１で血管内皮細胞を処置することでＢＢＢの透過性は増大したが、ＨＭＧＢ１とともに抗ＨＭＧＢ１抗体を用いることでＢＢＢ透過性の増大は抑制したことが報告されている（非特許文献５）。また、ＨＭＧＢ１処置によりＢＢＢを構成している内皮細胞やペリサイト、アストロサイトの形態が変化し、透過性が増大したことが報告されている（非特許文献６）。実際に、抗ＨＭＧＢ１抗体は外傷性脳損傷による脳浮腫を抑制することができることが報告されており、そのメカニズムとして抗ＨＭＧＢ１抗体がＢＢＢ破綻を抑制したためであると考察されている（非特許文献７）。以上のことから、ＢＢＢにおけるＨＭＧＢ１の増加はＢＢＢの破綻につながり、ＢＢＢにおけるＨＭＧＢ１の発現を抑制することでＢＢＢを保護できると考えられる。 In addition, increased expression of HMGB1 (High Mobility Group Box 1) has been reported as one of the causes of BBB disruption. HMGB1 has been identified as a protein that exists mainly in the nucleus of cells and is involved in the stabilization of chromatin structure or gene transcription reaction, and also plays a role in regulating immunity and inflammation in the cytoplasm and extracellularly. (Non-Patent Document 4). In an experimental system using an in vitro blood-brain barrier model, BBB permeability was increased by treating vascular endothelial cells with HMGB1, but the increase in BBB permeability was suppressed by using an anti-HMGB1 antibody together with HMGB1. has been reported (Non-Patent Document 5). In addition, it has been reported that HMGB1 treatment changed the morphology of endothelial cells, pericytes, and astrocytes, which constitute the BBB, and increased permeability (Non-Patent Document 6). In fact, it has been reported that an anti-HMGB1 antibody can suppress cerebral edema caused by traumatic brain injury, and the mechanism is considered to be that the anti-HMGB1 antibody suppresses BBB disruption (Non-Patent Document 7). ). From the above, it is considered that an increase in HMGB1 in the BBB leads to disruption of the BBB, and suppression of HMGB1 expression in the BBB can protect the BBB.
これまでにＢＢＢに着目した薬剤として、メトホルミン又はブホルミンを有効成分とする、血液脳関門機能を強化することにより疾患を予防、抑制又は改善する医薬（特許文献１）、プロスタサイクリン受容体アゴニスト又はプロスタサイクリン産生促進物質を含有する血管透過性亢進抑制剤（特許文献２）、及びプロサイモシンα又はその部分ペプチドを有効成分として含む血液脳関門障害を伴う疾患の治療剤（特許文献３）が開示されている。しかし、これらはＣｌａｕｄｉｎ－５の発現や活性の増加や、ＨＭＧＢ１の発現や活性の抑制を意図するものではない。 Drugs focused on the BBB include drugs containing metformin or buformin as an active ingredient and preventing, suppressing, or improving disease by strengthening the blood-brain barrier function (Patent Document 1), prostacyclin receptor agonists, or prostacyclin receptor agonists. A vascular hyperpermeability inhibitor containing a cyclin production-promoting substance (Patent Document 2) and a therapeutic agent for diseases associated with blood-brain barrier disorders containing prothymosin α or a partial peptide thereof as an active ingredient (Patent Document 3) have been disclosed. there is However, these are not intended to increase the expression or activity of Claudin-5 or suppress the expression or activity of HMGB1.
クロロゲン酸類は、コーヒーポリフェノール（ｃｏｆｆｅｅ ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌ：ＣＰＰ）の１種であり、主にキナ酸にフェノール基が様々な位置で結合したモノ及びジエステルである。また、クロロゲン酸類については、これまでげっ歯類の末梢において抗酸化作用、抗不安作用、抗炎症作用、鎮痛作用、解熱作用を有すること、ならびに中枢神経系においてアミロイドβ誘導毒性及び酸化ストレスから神経細胞を保護する作用を有することが報告されている（特許文献４）。しかしながら、これまでにクロロゲン酸類の血液脳関門への影響に関する報告はない。マウスの腹腔から採取したマクロファージをリポ多糖（Lipopolysaccharide：LPS）で刺激をするとＨＭＧＢ１の発現が上昇するが、クロロゲン酸類で処置するとその上昇が抑制されることが報告されている（非特許文献８）。一方で、マクロファージは脳内にはほとんど存在しておらず、かつクロロゲン酸類がＢＢＢを通過して脳内に移行することもこれまで報告されていないことから、経口摂取したクロロゲン酸類が脳内のＨＭＧＢ１発現を抑制するかは未だ不明である。また、クロロゲン酸類の経口摂取が体内のＣｌａｕｄｉｎ－５の発現を上昇させることもこれまで報告されていない。 Chlorogenic acids are one type of coffee polyphenol (CPP), and are mainly mono- and diesters in which phenol groups are bonded to quinic acid at various positions. Chlorogenic acids have been found to have antioxidant, anxiolytic, anti-inflammatory, analgesic, and antipyretic effects in the periphery of rodents, as well as amyloid-β-induced toxicity and oxidative stress in the central nervous system. It has been reported to have a cell-protecting action (Patent Document 4). However, there has been no report on the effects of chlorogenic acids on the blood-brain barrier. It has been reported that stimulation of macrophages collected from the peritoneal cavity of mice with lipopolysaccharide (LPS) increases the expression of HMGB1, but treatment with chlorogenic acids suppresses the increase (Non-Patent Document 8). . On the other hand, macrophages are almost non-existent in the brain, and it has not been reported that chlorogenic acids pass through the BBB and migrate into the brain. Whether it suppresses HMGB1 expression is still unknown. Also, it has not been reported that oral intake of chlorogenic acids increases the expression of Claudin-5 in the body.
本発明は、Ｃｌａｕｄｉｎ－５の発現を促進、又は脳内のＨＭＧＢ１の発現を抑制して、血液脳関門の破綻を抑制する物質を提供する。 The present invention provides substances that promote the expression of Claudin-5 or suppress the expression of HMGB1 in the brain, thereby suppressing the breakdown of the blood-brain barrier.
本発明者らは、クロロゲン酸類が、Ｃｌａｕｄｉｎ－５の発現を促進すること、脳内のＨＭＧＢ１の発現を抑制すること、及びそれによって血液脳関門を破綻から保護することができることを見出した。 The inventors have found that chlorogenic acids can promote the expression of Claudin-5, suppress the expression of HMGB1 in the brain, and thereby protect the blood-brain barrier from breakdown.
したがって、本発明は、クロロゲン酸類又はその塩を有効成分とする、Ｃｌａｕｄｉｎ－５発現促進剤を提供する。
また本発明は、クロロゲン酸類又はその塩を有効成分とする、脳内ＨＭＧＢ１発現抑制剤を提供する。
また本発明は、クロロゲン酸類又はその塩を有効成分とする、血液脳関門保護剤を提供する。
また本発明は、クロロゲン酸類又はその塩を有効成分とする、血液脳関門の機能低下の予防又は改善剤を提供する。
また本発明は、クロロゲン酸類又はその塩を有効成分とする、血液脳関門の破綻に起因する疾患又は状態の予防又は改善剤を提供する。
Accordingly, the present invention provides Claudin-5 expression promoters containing chlorogenic acids or salts thereof as active ingredients.
The present invention also provides an intracerebral HMGB1 expression inhibitor containing a chlorogenic acid or a salt thereof as an active ingredient.
The present invention also provides a blood-brain barrier protective agent containing chlorogenic acids or salts thereof as active ingredients.
The present invention also provides agents for preventing or improving blood-brain barrier dysfunction, containing chlorogenic acids or salts thereof as active ingredients.
The present invention also provides a prophylactic or ameliorating agent for diseases or conditions caused by blood-brain barrier disruption, containing chlorogenic acids or salts thereof as active ingredients.
本発明によれば、Ｃｌａｕｄｉｎ－５の発現を促進すること、及び脳内のＨＭＧＢ１の発現を抑制することができる。また本発明によれば、Ｃｌａｕｄｉｎ－５の発現促進又は脳内ＨＭＧＢ１の発現抑制を介して、血液脳関門を保護し、又はその破綻を効果的に抑制することができる。本発明は、血液脳関門の保護、及び血液脳関門の破綻に起因する種々の状態又は疾患の予防又は改善に有効である。 According to the present invention, the expression of Claudin-5 can be promoted and the expression of HMGB1 in the brain can be suppressed. Further, according to the present invention, the blood-brain barrier can be protected or its breakdown can be effectively suppressed through promotion of Claudin-5 expression or suppression of intracerebral HMGB1 expression. INDUSTRIAL APPLICABILITY The present invention is effective in protecting the blood-brain barrier and preventing or ameliorating various conditions or diseases caused by disruption of the blood-brain barrier.
血液脳関門（Ｂｌｏｏｄ－Ｂｒａｉｎ Ｂａｒｒｉｅｒ：ＢＢＢ）が破綻すると、血管内の有害物質が脳内に漏出し、それによって脳組織が傷害されることで、様々な疾患や障害が引き起こされる。ＢＢＢ破綻により生じる疾患や障害としては、例えば、血中アルブミンやナトリウムの脳浸潤による脳出血又は脳血管障害；白血球の脳浸潤による脳症（白質脳症など）；炎症性サイトカインの脳内移行による自己免疫性中枢神経疾患（視神経脊髄炎、急性散在性脳脊髄炎、炎症性脱髄性多発神経炎など）；ウイルスやアレルギー物質の脳内移行による脳感染症又はアナフィラキシー；薬物の脳内移行の増大による振戦や異常行動といった薬物有害事象の発生；その他有害物質の脳内移行による脳・脊髄外傷、及びそれによる振戦、せん妄、異常行動、眠気、意識障害、強迫性障害等の発生、などが挙げられる（例えば、特許文献１、Cell, 2015, 163(5):1064-1078、Nat Med, 2013, 19(12):1584-1596、Neuron, 2008, 57(2):178-201を参照）。 When the blood-brain barrier (BBB) is broken, harmful substances in the blood vessels leak into the brain, which damages brain tissue and causes various diseases and disorders. Diseases and disorders caused by BBB disruption include, for example, cerebral hemorrhage or cerebrovascular disorder due to brain infiltration of blood albumin or sodium; encephalopathy due to leukocyte infiltration (leukoencephalopathy); CNS diseases (neuromyelitis optica, acute disseminated encephalomyelitis, inflammatory demyelinating polyneuropathy, etc.); brain infections or anaphylaxis due to intracerebral migration of viruses or allergens; tremors due to increased intracerebral migration of drugs Occurrence of adverse drug events such as warfare and abnormal behavior; brain and spinal cord trauma due to migration of other harmful substances into the brain, and the resulting occurrence of tremor, delirium, abnormal behavior, drowsiness, disturbance of consciousness, obsessive-compulsive disorder, etc. (See, for example, Patent Document 1, Cell, 2015, 163(5):1064-1078, Nat Med, 2013, 19(12):1584-1596, Neuron, 2008, 57(2):178-201) .
Ｃｌａｕｄｉｎ－５は、タイトジャンクションの構築に関与する膜貫通型タンパク質である。ＢＢＢでは、ｃｌａｕｄｉｎファミリーのうちＣｌａｕｄｉｎ－５が主に発現している。ＢＢＢのタイトジャンクションを構成するタンパク質のなかで、Ｃｌａｕｄｉｎは最も重要であると考えられている。Ｃｌａｕｄｉｎ－５を欠失させるとＢＢＢの透過性が増加すること（非特許文献２）、Ｃｌａｕｄｉｎ－５ノックアウトマウスにおけるＢＢＢ透過性の増大や致死性（非特許文献３）が報告されている。したがって、Ｃｌａｕｄｉｎ－５の発現減少はＢＢＢの破綻を招き、一方Ｃｌａｕｄｉｎ－５の発現増加は、ＢＢＢのタイトジャンクションを強化し、ＢＢＢを保護する。 Claudin-5 is a transmembrane protein involved in the assembly of tight junctions. In the BBB, Claudin-5 is mainly expressed in the claudin family. Claudin is considered to be the most important protein that constitutes the tight junctions of the BBB. It has been reported that deletion of Claudin-5 increases BBB permeability (Non-Patent Document 2), and increased BBB permeability and lethality in Claudin-5 knockout mice (Non-Patent Document 3). Thus, decreased expression of Claudin-5 leads to disruption of the BBB, while increased expression of Claudin-5 strengthens BBB tight junctions and protects the BBB.
ＨＭＧＢ１（Ｈｉｇｈ Ｍｏｂｉｌｉｔｙ Ｇｒｏｕｐ Ｂｏｘ １）は、様々な細胞の核内に存在するタンパク質で、クロマチンの構造の安定化、又は遺伝子の転写反応に役割を担うタンパク質として同定された。また近年では、ＨＭＧＢ１について、一部が細胞質内にも存在すること、炎症応答や感染に際しては細胞外にまで放出され、炎症性サイトカインとして機能し、炎症応答を促進すること、及び細胞外から取りこまれた核酸の認識やオートファジーの誘導に関与していることが明らかとなっている（非特許文献４）。また、ＢＢＢにおけるＨＭＧＢ１の増加はＢＢＢを構成する脳血管内皮細胞、アストロサイト、ペリサイトの構造を変化させ、ＢＢＢの透過性の増大をもたらすことから（非特許文献５～６）、ＨＭＧＢ１は血液脳関門破綻関連因子であると考えられている。したがって、ＨＭＧＢ１の増加は、ＢＢＢの破綻を促進し、それに起因する上述したような様々な疾患又は状態を引き起こす。 HMGB1 (High Mobility Group Box 1) is a protein present in the nucleus of various cells, and has been identified as a protein that plays a role in stabilization of chromatin structure or gene transcription reaction. In recent years, HMGB1 has also been found to exist partially in the cytoplasm, to be released extracellularly during inflammatory response and infection, to function as an inflammatory cytokine to promote inflammatory response, and to be removed from the extracellular It has been clarified that it is involved in the recognition of inserted nucleic acids and the induction of autophagy (Non-Patent Document 4). In addition, an increase in HMGB1 in the BBB changes the structure of cerebral vascular endothelial cells, astrocytes, and pericytes that constitute the BBB, resulting in an increase in the permeability of the BBB (Non-Patent Documents 5-6). It is considered to be a brain barrier disruption-related factor. Therefore, an increase in HMGB1 promotes BBB disruption, resulting in various diseases or conditions as described above.
クロロゲン酸類は、後述の実施例に示すとおり、脳内におけるＣｌａｕｄｉｎ－５の発現を促進し、ＨＭＧＢ１の発現を抑制する作用を有する。これまで、クロロゲン酸類がＣｌａｕｄｉｎ－５に対して作用するという報告はなかった。またこれまで、経口摂取されたクロロゲン酸類がＢＢＢで保護された脳内にあるＨＭＧＢ１に対して作用するという報告はなかった。Ｃｌａｕｄｉｎ－５の発現を促進すれば、脳を囲むＢＢＢを強化することができる。また脳内のＨＭＧＢ１の発現を抑制すれば、脳を囲むＢＢＢに対するＨＭＧＢ１の作用を抑制することができる。したがって、クロロゲン酸類は、Ｃｌａｕｄｉｎ－５発現促進、脳内のＨＭＧＢ１発現抑制、ＢＢＢの保護、ＢＢＢの機能低下の予防又は改善、及びＢＢＢの破綻に起因する疾患又は状態の予防又は改善のために有効である。 Chlorogenic acids have the effect of promoting the expression of Claudin-5 in the brain and suppressing the expression of HMGB1, as shown in Examples below. So far, there have been no reports that chlorogenic acids act on Claudin-5. Also, there has been no report to date that orally ingested chlorogenic acids act on HMGB1 in the brain protected by the BBB. Enhancing expression of Claudin-5 can strengthen the BBB that surrounds the brain. In addition, if the expression of HMGB1 in the brain is suppressed, the action of HMGB1 on the BBB surrounding the brain can be suppressed. Therefore, chlorogenic acids are effective for promoting Claudin-5 expression, suppressing HMGB1 expression in the brain, protecting the BBB, preventing or improving BBB dysfunction, and preventing or improving diseases or conditions caused by BBB disruption. is.
本明細書において、「Ｃｌａｕｄｉｎ－５」とは、配列番号１で表されるアミノ酸配列と９５％以上配列同一なアミノ酸配列からなるヒトＣｌａｕｄｉｎ－５、又はそのホモログをいい、それらの代表的な例としては、Ｇｅｎｅ ＩＤ：７１２２で表されるヒトＣｌａｕｄｉｎ－５（配列番号１）、及びＧｅｎｅ ＩＤ：１２７４１で表されるマウスＣｌａｕｄｉｎ－５（配列番号２）が挙げられる。これら「Ｃｌａｕｄｉｎ－５」は、ＢＢＢタイトジャンクションを構成する膜タンパク質であり、その発現増加はＢＢＢタイトジャンクションを強化し、ＢＢＢの保護に働く。 As used herein, "Claudin-5" refers to human Claudin-5 consisting of an amino acid sequence that is 95% or more identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, or a homologue thereof, and representative examples thereof. These include human Claudin-5 represented by Gene ID: 7122 (SEQ ID NO: 1) and mouse Claudin-5 represented by Gene ID: 12741 (SEQ ID NO: 2). These "Claudin-5" are membrane proteins that constitute BBB tight junctions, and increased expression thereof strengthens BBB tight junctions and acts to protect the BBB.
本明細書において、「Ｃｌａｕｄｉｎ－５発現」とは、血管内皮細胞におけるＣｌａｕｄｉｎ－５の発現をいい、好ましくは脳毛細血管の内皮細胞におけるＣｌａｕｄｉｎ－５発現をいい、より好ましくは大脳皮質又は海馬を囲むＢＢＢの血管内皮細胞におけるＣｌａｕｄｉｎ－５の発現をいう。 As used herein, "Claudin-5 expression" refers to Claudin-5 expression in vascular endothelial cells, preferably Claudin-5 expression in endothelial cells of brain capillaries, more preferably cerebral cortex or hippocampus. Refers to Claudin-5 expression in vascular endothelial cells of the surrounding BBB.
本明細書において、「ＨＭＧＢ１」とは、配列番号３で表されるアミノ酸配列と９５％以上配列同一なアミノ酸配列からなるヒトＨＭＧＢ１、又はそのホモログをいい、それらの代表的な例としては、Ｇｅｎｅ ＩＤ：３１４６で表されるヒトＨＭＧＢ１（配列番号３）、及びＧｅｎｅ ＩＤ：１５２８９で表されるマウスＨＭＧＢ１（配列番号４）が挙げられる。これら「ＨＭＧＢ１」は、細胞の核内に存在し、その発現増加はＢＢＢの透過性の増大をもたらす。 As used herein, "HMGB1" refers to human HMGB1 consisting of an amino acid sequence that is 95% or more identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 3, or a homologue thereof. Human HMGB1 represented by ID: 3146 (SEQ ID NO: 3) and mouse HMGB1 represented by Gene ID: 15289 (SEQ ID NO: 4). These "HMGB1" are present in the nucleus of cells and their increased expression leads to increased permeability of the BBB.
本明細書において、「脳内ＨＭＧＢ１発現」とは、ＢＢＢに保護された脳組織の細胞、好ましくは大脳皮質の細胞におけるＨＭＧＢ１の発現をいう。 As used herein, “brain HMGB1 expression” refers to expression of HMGB1 in cells of brain tissue protected by the BBB, preferably in cells of the cerebral cortex.
本明細書において、「血液脳関門（ＢＢＢ）の保護」とは、ＢＢＢを破綻から保護することをいう。ＢＢＢが破綻すると、ＢＢＢの透過性が増大して、これまでＢＢＢにより脳への侵入を遮られていた血管内の有害物質が脳内に漏出する。したがって、ＢＢＢの破綻は、ＢＢＢの機能低下をもたらす。 As used herein, "blood-brain barrier (BBB) protection" refers to protecting the BBB from disruption. When the BBB ruptures, the permeability of the BBB increases, and toxic substances in the blood vessels that were previously blocked from entering the brain by the BBB leak into the brain. Therefore, disruption of the BBB results in functional deterioration of the BBB.
本明細書において、「血液脳関門（ＢＢＢ）破綻に起因する疾患又は状態」とは、ＢＢＢの破綻によりそのバリア機能が障害されることに起因して生じる疾患又は状態をいい、その例としては、脳内出血、脳血管障害、視神経脊髄炎、白質脳症、急性散在性脳脊髄炎、炎症性脱髄性多発神経炎、脳感染症、アナフィラキシー、脳腫瘍、脳・脊髄外傷、振戦、せん妄、異常行動、眠気、意識障害、強迫性障害等が挙げられる。 As used herein, the term "disease or condition caused by blood-brain barrier (BBB) disruption" refers to a disease or condition caused by impaired barrier function due to BBB disruption, examples of which include , intracerebral hemorrhage, cerebrovascular disease, neuromyelitis optica, leukoencephalopathy, acute disseminated encephalomyelitis, inflammatory demyelinating polyneuropathy, brain infection, anaphylaxis, brain tumor, brain/spinal cord injury, tremor, delirium, abnormality behavior, drowsiness, disturbance of consciousness, obsessive-compulsive disorder, and the like.
本明細書において、「血液脳関門（ＢＢＢ）破綻に起因する疾患又は状態の予防又は改善」とは、好ましくは、脳内出血、脳血管障害、視神経脊髄炎、白質脳症、急性散在性脳脊髄炎、炎症性脱髄性多発神経炎、脳感染症、アナフィラキシー、脳腫瘍、脳・脊髄外傷、振戦、せん妄、異常行動、眠気、意識障害、及び強迫性障害からなる群より選択される１種以上の疾患又は状態の予防又は改善をいう。 As used herein, "prevention or amelioration of diseases or conditions caused by blood-brain barrier (BBB) disruption" preferably refers to intracerebral hemorrhage, cerebrovascular disease, neuromyelitis optica, leukoencephalopathy, acute disseminated encephalomyelitis. , inflammatory demyelinating polyneuropathy, brain infection, anaphylaxis, brain tumor, brain/spinal cord injury, tremor, delirium, abnormal behavior, drowsiness, disturbance of consciousness, and obsessive-compulsive disorder. refers to the prevention or amelioration of diseases or conditions of
本明細書において、「予防」とは、個体における疾患、症状もしくは状態の発症の防止、抑制又は遅延、あるいは個体の疾患、症状もしくは状態の発症の危険性を低下させることをいう。また本明細書において、「改善」とは、疾患、症状もしくは状態の好転、疾患、症状もしくは状態の悪化の防止、抑制又は遅延、あるいは疾患、症状もしくは状態の進行の逆転、防止、抑制又は遅延をいう。 As used herein, "prevention" refers to preventing, inhibiting or delaying the onset of a disease, symptom or condition in an individual or reducing an individual's risk of developing a disease, symptom or condition. As used herein, "improvement" means amelioration of a disease, symptom or condition, prevention, suppression or delay of worsening of a disease, symptom or condition, or reversal, prevention, suppression or delay of progression of a disease, symptom or condition. Say.
本明細書において、「非治療的」とは、医療行為を含まない概念、すなわち人間を手術、治療又は診断する方法を含まない概念、より具体的には医師又は医師の指示を受けた者が人間に対して手術、治療又は診断を実施する方法を含まない概念である。 As used herein, the term "non-therapeutic" refers to a concept that does not include medical practice, i.e., a concept that does not include methods of surgery, treatment or diagnosis of humans, more specifically a doctor or a person under the direction of a doctor It is a concept that does not include methods of performing surgery, therapy or diagnosis on humans.
本発明で用いられるクロロゲン酸類の例としては、３－カフェオイルキナ酸（３－ＣＱＡ）、４－カフェオイルキナ酸（４－ＣＱＡ）及び５－カフェオイルキナ酸（５－ＣＱＡ）を含むモノカフェオイルキナ酸；３－フェルロイルキナ酸（３－ＦＱＡ）、４－フェルロイルキナ酸（４－ＦＱＡ）及び５－フェルロイルキナ酸（５－ＦＱＡ）を含むモノフェルロイルキナ酸；ならびに、３，４－ジカフェオイルキナ酸（３，４－ｄｉＣＱＡ）、３，５－ジカフェオイルキナ酸（３，５－ｄｉＣＱＡ）及び４，５－ジカフェオイルキナ酸（４，５－ｄｉＣＱＡ）を含むジカフェオイルキナ酸、が挙げられる。本発明で用いるクロロゲン酸類は、上記に挙げた化合物のいずれか１種又は２種以上の組み合わせであり得る。 Examples of chlorogenic acids used in the present invention include 3-caffeoylquinic acid (3-CQA), 4-caffeoylquinic acid (4-CQA) and 5-caffeoylquinic acid (5-CQA) caffeoylquinic acid; monoferuloylquinic acids, including 3-feruloylquinic acid (3-FQA), 4-feruloylquinic acid (4-FQA) and 5-feruloylquinic acid (5-FQA); and 3,4-dicaffeoylquinic acid (3,4-diCQA), 3,5-dicaffeoylquinic acid (3,5-diCQA) and 4,5-dicaffeoylquinic acid (4,5-diCQA) and dicaffeoylquinic acid, including The chlorogenic acids used in the present invention may be any one of the above-listed compounds or a combination of two or more thereof.
Ｃｌａｕｄｉｎ－５発現促進又はＨＭＧＢ１発現抑制の観点からは、本発明で用いられるクロロゲン酸類は、好ましくは３－ＣＱＡ、４－ＣＱＡ、５－ＣＱＡからなる群より選択される１種以上のモノカフェオイルキナ酸を含み、より好ましくは５－ＣＱＡを含む。好適には、本発明で用いられるクロロゲン酸類中における５－ＣＱＡの含量は、その全量中、１５質量％以上が好ましく、２５質量％以上がより好ましく、３５質量％以上がさらに好ましい。 From the viewpoint of promoting Claudin-5 expression or suppressing HMGB1 expression, the chlorogenic acids used in the present invention are preferably one or more monocaffeoyl selected from the group consisting of 3-CQA, 4-CQA, and 5-CQA. It contains quinic acid, more preferably 5-CQA. Preferably, the content of 5-CQA in the chlorogenic acids used in the present invention is preferably 15% by mass or more, more preferably 25% by mass or more, and even more preferably 35% by mass or more.
クロロゲン酸類は、これを含有する天然物、特に植物から抽出することもでき、化学合成により工業的に製造することもできる。クロロゲン酸類には、立体異性体が存在し、本発明では、それらの純粋な立体異性体又はそれらの立体異性体の混合物を用いることができる。 Chlorogenic acids can be extracted from natural products containing them, particularly plants, or can be industrially produced by chemical synthesis. Chlorogenic acids have stereoisomers, and in the present invention, pure stereoisomers thereof or mixtures of those stereoisomers can be used.
好ましくは、本発明で用いるクロロゲン酸類は、それらを含有する植物から抽出することができる。クロロゲン酸類を含有する植物の例としては、コーヒー、キャベツ、レタス、アーチチョーク、トマト、ナス、ジャガイモ、ニンジン、リンゴ、ナシ、プラム、モモ、アプリコット、チェリー、ヒマワリ、モロヘイヤ、カンショ、南天の葉、ブルーベリー、小麦、シモン葉、マツ科植物の球果、マツ科植物の種子殻、ウメの果実、フキタンポポ、ブドウ科植物などが挙げられる。 Preferably, the chlorogenic acids used in the present invention can be extracted from plants containing them. Examples of plants containing chlorogenic acids include coffee, cabbage, lettuce, artichokes, tomatoes, eggplants, potatoes, carrots, apples, pears, plums, peaches, apricots, cherries, sunflowers, molokhiya, kansho, leaves of Nanten, Examples include blueberries, wheat, lemon leaves, cones of pinaceous plants, seed husks of pinaceous plants, plum fruits, coltsfoot, and grape family plants.
より好ましくは、クロロゲン酸類は、コーヒー生豆、焙煎コーヒー豆、南天の葉、リンゴ未熟果、ヒマワリ種等より抽出することができる。なかでも、クロロゲン酸類含量等の点から、コーヒー生豆、焙煎コーヒー豆などのコーヒー豆が、本発明で好ましく用いられる。例えば、アカネ科コーヒー（Coffee arabica LINNE）の種子より、温時アスコルビン酸、クエン酸酸性水溶液又は熱水で抽出した後、必要に応じてろ過、活性炭及びイオン交換樹脂処理することでクロロゲン酸類を含む生コーヒー豆抽出物を調製することができる。あるいは焙煎コーヒー豆からクロロゲン酸類を含む抽出物を調製しても良い。該コーヒー豆としては、中焙煎コーヒー豆（Ｌ値：１６．８を超え２４．２以下）、浅焙煎コーヒー豆（Ｌ値：２４．２を超え３０．２以下）、微焙煎コーヒー豆（Ｌ値：３０．２を超える）、及び生コーヒー豆が好ましく、生コーヒー豆がより好ましいが、深焙煎コーヒー豆（Ｌ値：１６．８以下）を使用することもできる。本明細書において「Ｌ値」とは、黒をＬ値０とし、また白をＬ値１００として、焙煎コーヒー豆の明度を色差計で測定したものである。又は、本発明では、市販の生コーヒー豆抽出物、リンゴ抽出物、ヒマワリ種抽出物を、クロロゲン酸類原料として用いることができる。 More preferably, chlorogenic acids can be extracted from green coffee beans, roasted coffee beans, Nanten leaves, immature apples, sunflower seeds, and the like. Among them, coffee beans such as green coffee beans and roasted coffee beans are preferably used in the present invention in terms of chlorogenic acid content and the like. For example, the seeds of Rubiaceae coffee (Coffee arabica LINNE) are extracted with hot ascorbic acid, citric acid acidic aqueous solution, or hot water, and then filtered, if necessary, treated with activated carbon and ion-exchange resin to contain chlorogenic acids. A green coffee bean extract can be prepared. Alternatively, an extract containing chlorogenic acids may be prepared from roasted coffee beans. The coffee beans include medium-roasted coffee beans (L value: more than 16.8 and 24.2 or less), lightly roasted coffee beans (L value: more than 24.2 and 30.2 or less), and lightly roasted coffee. Beans (L value: more than 30.2) and green coffee beans are preferred, green coffee beans are more preferred, but dark roasted coffee beans (L value: 16.8 or less) can also be used. In the present specification, the "L value" is obtained by measuring the lightness of roasted coffee beans with a color difference meter, with the L value being 0 for black and the L value being 100 for white. Alternatively, in the present invention, commercially available green coffee bean extracts, apple extracts, and sunflower seed extracts can be used as raw materials for chlorogenic acids.
本発明で用いられるコーヒー豆抽出物は、カフェイン含量が低いことが好ましい。該コーヒー豆抽出物におけるカフェインとクロロゲン酸類との質量比（カフェイン／クロロゲン酸類）は、風味の観点から、０．０５以下が好ましく、０．０３以下がより好ましく、０．０２以下がさらに好ましく、０．００５以下がさらに好ましく、０．００３以下がさらに好ましく、０．００１以下がさらに好ましい。なお、カフェイン／クロロゲン酸類の比の下限は特に限定されず、０であってもよい。 The coffee bean extract used in the present invention preferably has a low caffeine content. From the viewpoint of flavor, the mass ratio of caffeine and chlorogenic acids (caffeine/chlorogenic acids) in the coffee bean extract is preferably 0.05 or less, more preferably 0.03 or less, and further preferably 0.02 or less. It is preferably 0.005 or less, more preferably 0.003 or less, even more preferably 0.001 or less. The lower limit of the ratio of caffeine/chlorogenic acids is not particularly limited, and may be zero.
本発明で用いられるコーヒー豆抽出物の好ましい例としては、カフェインとクロロゲン酸類との質量比（カフェイン／クロロゲン酸類）が０．０２以下、かつクロロゲン酸類全量中の５－ＣＱＡの含量（５－ＣＱＡ／全クロロゲン酸類）が３５質量％以上の生コーヒー豆抽出物が挙げられる。より好ましい例としては、（カフェイン／クロロゲン酸類）が０．００１以下、かつ（５－ＣＱＡ／全クロロゲン酸類）が３５質量％以上の生コーヒー豆抽出物が挙げられる。 A preferred example of the coffee bean extract used in the present invention has a mass ratio of caffeine and chlorogenic acids (caffeine/chlorogenic acids) of 0.02 or less, and a content of 5-CQA in the total amount of chlorogenic acids (5 -CQA/total chlorogenic acids) is 35 mass% or more green coffee bean extract. A more preferable example is a green coffee bean extract having (caffeine/chlorogenic acids) of 0.001 or less and (5-CQA/total chlorogenic acids) of 35% by mass or more.
クロロゲン酸類は、塩にすることにより水溶性を向上させ、生理学的有効性を増大させることができる。本発明で用いられるクロロゲン酸類の塩としては、薬学的に許容される塩が好ましい。このような塩形成用の塩基物質としては、例えば、水酸化リチウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等のアルカリ金属の水酸化物；水酸化マグネシウム、水酸化カルシウム等のアルカリ土類金属の水酸化物；水酸化アンモニウム等の無機塩基；アルギニン、リジン、ヒスチジン、オルニチン等の塩基性アミノ酸；モノエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン等の有機塩基が用いられるが、このうち、アルカリ金属又はアルカリ土類金属の水酸化物が好ましい。好ましいクロロゲン酸類の塩の例としては、ナトリウム、カリウム等のアルカリ金属塩、マグネシウム、カルシウム等のアルカリ土類金属塩、モノエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン等の有機アミン塩、アルギニン、リジン、ヒスチジン、オルニチン等の塩基性アミノ酸塩が挙げられる。これらのクロロゲン酸類の塩は、上述したクロロゲン酸類を含有する植物から抽出することができる。 Chlorogenic acids can be salted to improve their water solubility and increase their physiological effectiveness. Pharmaceutically acceptable salts are preferred as the salts of chlorogenic acids used in the present invention. Examples of base substances for forming such salts include alkali metal hydroxides such as lithium hydroxide, sodium hydroxide and potassium hydroxide; alkaline earth metal hydroxides such as magnesium hydroxide and calcium hydroxide; inorganic bases such as ammonium hydroxide; basic amino acids such as arginine, lysine, histidine and ornithine; organic bases such as monoethanolamine, diethanolamine and triethanolamine. Metal hydroxides are preferred. Preferred examples of salts of chlorogenic acids include alkali metal salts such as sodium and potassium, alkaline earth metal salts such as magnesium and calcium, organic amine salts such as monoethanolamine, diethanolamine and triethanolamine, arginine, lysine and histidine. and basic amino acid salts such as ornithine. These salts of chlorogenic acids can be extracted from plants containing the above-described chlorogenic acids.
本発明において、クロロゲン酸類又はその塩は、それらを含む植物抽出物の形態で使用することができる。該植物抽出物としては、上述した植物の抽出物の他、市販のクロロゲン酸類含有製剤を使用してもよく、例えば、フレーバーホルダーＲＣ（長谷川香料（株））、生コーヒー豆エキスＰ（オリザ油化社製）、スベトール（Ｎｕｒｅｘ Ｉｎｃ.製）、ＯＸＣＨ１００（東洋発酵社製）等が挙げられる。 In the present invention, chlorogenic acids or salts thereof can be used in the form of plant extracts containing them. As the plant extract, in addition to the plant extracts described above, commercially available preparations containing chlorogenic acids may be used. chemical company), Subetol (manufactured by Nurex Inc.), OXCH100 (manufactured by Toyo Hakko Co., Ltd.), and the like.
一態様において、本発明は、クロロゲン酸類又はその塩を有効成分とする、Ｃｌａｕｄｉｎ－５発現促進剤を提供する。また本発明は、クロロゲン酸類又はその塩を有効成分とする、脳内ＨＭＧＢ１発現抑制剤を提供する。また本発明は、クロロゲン酸類又はその塩を有効成分とする、血液脳関門保護剤を提供する。また本発明は、クロロゲン酸類又はその塩を有効成分とする、血液脳関門の機能低下の予防又は改善剤を提供する。また本発明は、クロロゲン酸類又はその塩を有効成分とする、血液脳関門の破綻に起因する疾患又は状態の予防又は改善剤を提供する。
別の態様において、本発明は、Ｃｌａｕｄｉｎ－５発現促進剤、脳内ＨＭＧＢ１発現抑制剤、血液脳関門保護剤、血液脳関門の機能低下の予防又は改善剤、あるいは血液脳関門の破綻に起因する疾患又は状態の予防又は改善剤の製造のための、クロロゲン酸類又はその塩の使用を提供する。
一実施形態において、当該剤は、クロロゲン酸類又はその塩から本質的に構成され得る。別の一実施形態において、当該剤は、少なくともクロロゲン酸類又はその塩を含有する組成物であり得る。当該組成物の例としては、後述する医薬品、医薬部外品、食品などが挙げられる。
In one aspect, the present invention provides a Claudin-5 expression promoter containing chlorogenic acids or salts thereof as an active ingredient. The present invention also provides an intracerebral HMGB1 expression inhibitor containing a chlorogenic acid or a salt thereof as an active ingredient. The present invention also provides a blood-brain barrier protective agent containing chlorogenic acids or salts thereof as active ingredients. The present invention also provides agents for preventing or improving blood-brain barrier dysfunction, containing chlorogenic acids or salts thereof as active ingredients. The present invention also provides a prophylactic or ameliorating agent for diseases or conditions caused by blood-brain barrier disruption, containing chlorogenic acids or salts thereof as active ingredients.
In another aspect, the present invention provides a Claudin-5 expression promoter, an intracerebral HMGB1 expression inhibitor, a blood-brain barrier protective agent, an agent for preventing or improving the functional deterioration of the blood-brain barrier, or caused by disruption of the blood-brain barrier. Provided is the use of chlorogenic acids or salts thereof for the production of prophylactic or ameliorating agents for diseases or conditions.
In one embodiment, the agent may consist essentially of chlorogenic acids or salts thereof. In another embodiment, the agent may be a composition containing at least chlorogenic acids or salts thereof. Examples of the composition include pharmaceuticals, quasi-drugs, foods, etc., which will be described later.
また別の態様において、本発明は、Ｃｌａｕｄｉｎ－５発現促進、脳内ＨＭＧＢ１発現抑制、血液脳関門保護、血液脳関門の機能低下の予防又は改善、あるいは血液脳関門の破綻に起因する疾患又は状態の予防又は改善のための、クロロゲン酸類又はその塩の使用を提供する。
さらに別の態様において、本発明は、Ｃｌａｕｄｉｎ－５発現促進、脳内ＨＭＧＢ１発現抑制、血液脳関門保護、血液脳関門の機能低下の予防又は改善、あるいは血液脳関門の破綻に起因する疾患又は状態の予防又は改善に使用するための、クロロゲン酸類又はその塩を提供する。
In another aspect, the present invention provides Claudin-5 expression enhancement, brain HMGB1 expression suppression, blood-brain barrier protection, prevention or improvement of blood-brain barrier dysfunction, or diseases or conditions caused by blood-brain barrier breakdown. Use of chlorogenic acids or salts thereof for the prevention or improvement of
In still another aspect, the present invention provides Claudin-5 expression enhancement, brain HMGB1 expression suppression, blood-brain barrier protection, prevention or amelioration of functional deterioration of the blood-brain barrier, or diseases or conditions caused by disruption of the blood-brain barrier. To provide chlorogenic acids or salts thereof for use in the prevention or improvement of
当該本発明による使用は、治療的使用であっても非治療的使用であってもよい。治療的使用の例としては、上述したＢＢＢの破綻に起因する疾患又は状態の治療又は改善を必要とする者に対する使用が挙げられる。非治療的使用とは、健常者を含む、医師にＢＢＢ破綻に起因する疾患又は状態を有すると診断されていないが、ＢＢＢ破綻に起因する疾患又は状態を予防したい者、例えば高齢者等に対する使用が挙げられる。 The use according to the invention may be a therapeutic use or a non-therapeutic use. Examples of therapeutic uses include those in need of treatment or amelioration of diseases or conditions resulting from BBB disruption as described above. Non-therapeutic use refers to use for persons, including healthy individuals, who have not been diagnosed as having a disease or condition caused by BBB disruption by a doctor, but who wish to prevent a disease or condition caused by BBB disruption, such as the elderly. is mentioned.
本発明において、クロロゲン酸類又はその塩は、ヒト及び非ヒト動物のいずれに対しても使用することができる。非ヒト動物としては、非ヒト哺乳動物、鳥類などが挙げられ、非ヒト哺乳動物としては、例えば、類人猿、その他霊長類、マウス、ラット、ハムスター、イヌ、ネコ、及びコンパニオン動物などが挙げられる。 In the present invention, chlorogenic acids or salts thereof can be used for both humans and non-human animals. Non-human animals include non-human mammals, birds, etc. Non-human mammals include, for example, apes, other primates, mice, rats, hamsters, dogs, cats, and companion animals.
本発明において、クロロゲン酸類又はその塩は、医薬品、医薬部外品又は食品（非ヒト動物用食品を含む）等に対して、Ｃｌａｕｄｉｎ－５発現促進、脳内ＨＭＧＢ１発現抑制、ＢＢＢ保護、ＢＢＢの機能低下の予防又は改善、あるいはＢＢＢの破綻に起因する疾患又は状態の予防又は改善の機能を付与するための有効成分として使用することができる。 In the present invention, chlorogenic acids or salts thereof promote Claudin-5 expression, suppress brain HMGB1 expression, protect BBB, and suppress BBB in pharmaceuticals, quasi-drugs, or foods (including non-human animal foods). It can be used as an active ingredient for imparting the function of preventing or improving function deterioration, or preventing or improving diseases or conditions caused by BBB breakdown.
当該医薬品（医薬部外品も含む）は、Ｃｌａｕｄｉｎ－５発現促進、脳内ＨＭＧＢ１発現抑制、ＢＢＢ保護、ＢＢＢの機能低下の予防又は改善、あるいはＢＢＢの破綻に起因する疾患又は状態の予防又は改善のための医薬品であり、クロロゲン酸類又はその塩を、当該機能のための有効成分として含有する。さらに、該医薬品は、該有効成分の機能が失われない限りにおいて、必要に応じて薬学的に許容される担体、又は他の有効成分、薬理成分等を含有していてもよい。 The drug (including quasi-drugs) promotes Claudin-5 expression, suppresses HMGB1 expression in the brain, protects the BBB, prevents or improves BBB function deterioration, or prevents or improves diseases or conditions caused by BBB breakdown. and contains chlorogenic acids or salts thereof as active ingredients for this function. Furthermore, the drug may contain a pharmaceutically acceptable carrier or other active ingredient, pharmacological ingredient, etc. as necessary, as long as the function of the active ingredient is not lost.
当該医薬品（医薬部外品も含む）の投与形態は、経口投与及び非経口投与の何れであってもよいが、経口投与が好ましい。該医薬品の剤形は、経口又は非経口的に投与可能な剤形であれば特に限定されず、例えば注射剤、坐剤、吸入剤、経皮吸収剤、各種外用剤、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、液剤、シロップ剤等の何れでもよく、また、このような種々の剤形の製剤は、クロロゲン酸類又はその塩を、薬学的に許容される担体（例えば賦形剤、結合剤、増量剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤、分散剤、緩衝剤、保存剤、嬌味剤、香料、被膜剤、希釈剤等）、他の薬効成分等と適宜組み合わせて、定法に従って調製することができる。 The dosage form of the drug (including quasi-drugs) may be either oral administration or parenteral administration, but oral administration is preferred. The dosage form of the drug is not particularly limited as long as it can be administered orally or parenterally. Any of granules, powders, liquids, syrups, etc., may be used, and preparations of such various dosage forms include chlorogenic acids or salts thereof added with pharmaceutically acceptable carriers (e.g., excipients, binders, etc.). , extenders, disintegrants, surfactants, lubricants, dispersants, buffers, preservatives, flavoring agents, fragrances, coating agents, diluents, etc.), other medicinal ingredients, etc. can be prepared.
当該医薬品（医薬部外品も含む）におけるクロロゲン酸類又はその塩の含有量は、特に限定されないが、その全質量中、クロロゲン酸類換算で、好ましくは０．０１質量％以上、より好ましくは０．１質量％以上、さらに好ましくは０．５質量％以上、さらにより好ましくは１．０質量％以上、なお好ましくは１０質量％以上であり、かつ好ましくは９５質量％以下、より好ましくは８０質量％以下、さらに好ましくは６０質量％以下である。さらに、当該含有量の例として、全質量中、０．０１～９５質量％、０．０１～８０質量％、０．０１～６０質量％、０．１～９５質量％、０．１～８０質量％、０．１～６０質量％、０．５～９５質量％、０．５～８０質量％、０．５～６０質量％、１．０～９５質量％、１．０～８０質量％、１．０～６０質量％、１０～９５質量％、１０～８０質量％、及び１０～６０質量％が挙げられる。 The content of chlorogenic acids or salts thereof in the drug (including quasi-drugs) is not particularly limited, but is preferably 0.01% by mass or more, more preferably 0.01% by mass or more in terms of chlorogenic acids in the total mass. 1% by mass or more, more preferably 0.5% by mass or more, still more preferably 1.0% by mass or more, still more preferably 10% by mass or more, and preferably 95% by mass or less, more preferably 80% by mass 60% by mass or less, more preferably 60% by mass or less. Furthermore, examples of the content include 0.01 to 95% by mass, 0.01 to 80% by mass, 0.01 to 60% by mass, 0.1 to 95% by mass, and 0.1 to 80% by mass of the total mass. % by mass, 0.1 to 60% by mass, 0.5 to 95% by mass, 0.5 to 80% by mass, 0.5 to 60% by mass, 1.0 to 95% by mass, 1.0 to 80% by mass , 1.0 to 60% by weight, 10 to 95% by weight, 10 to 80% by weight, and 10 to 60% by weight.
当該食品は、Ｃｌａｕｄｉｎ－５発現促進、脳内ＨＭＧＢ１発現抑制、ＢＢＢ保護、ＢＢＢの機能低下の予防又は改善、あるいはＢＢＢの破綻に起因する疾患又は状態の予防又は改善の機能を提供するための食品であり、クロロゲン酸類又はその塩を、当該機能のための有効成分として含有する。該食品には、Ｃｌａｕｄｉｎ－５発現促進、脳内ＨＭＧＢ１発現抑制、ＢＢＢ保護、ＢＢＢの機能低下の予防又は改善、あるいはＢＢＢの破綻に起因する疾患又は状態の予防又は改善をコンセプトとし、必要に応じてその旨を表示した病者用食品、及び栄養機能食品、特定保健用食品、機能性表示食品等の保健機能食品が包含される。 The food is a food for providing the functions of promoting Claudin-5 expression, suppressing HMGB1 expression in the brain, protecting the BBB, preventing or ameliorating BBB dysfunction, or preventing or ameliorating diseases or conditions caused by BBB disruption. and contains chlorogenic acids or salts thereof as active ingredients for the function. The food is based on the concept of promoting Claudin-5 expression, suppressing HMGB1 expression in the brain, protecting the BBB, preventing or improving BBB function deterioration, or preventing or improving diseases or conditions caused by BBB breakdown. Foods with health claims such as foods with nutrient function claims, foods with specified health uses, and foods with function claims are included.
本発明により提供される食品は飲料を含む。したがって、当該食品を飲食品と言い換えることができる。当該食品の形態は、固形、半固形又は液状（例えば飲料）であり得る。該食品の例としては、パン類、麺類、飯類、クッキー等の菓子類、ゼリー類、乳製品、スープ類、冷凍食品、インスタント食品、でんぷん加工製品、加工魚肉製品、その他加工食品、調味料、栄養補助食品、及び茶飲料、コーヒー飲料、果実飲料、炭酸飲料、乳飲料、ゼリー状飲料、ニアウォーター等の飲料、ならびにそれらの原料が挙げられる。あるいは、該食品は、錠剤、カプセル、顆粒、粉末、液剤、シロップなどの経口投与製剤の形態を有するサプリメントであってもよい。 Food products provided by the present invention include beverages. Therefore, the food can be called food and drink. The form of the food can be solid, semi-solid or liquid (eg beverage). Examples of such foods include breads, noodles, rice, confectionery such as cookies, jellies, dairy products, soups, frozen foods, instant foods, processed starch products, processed fish products, other processed foods, and seasonings. , dietary supplements, and beverages such as tea beverages, coffee beverages, fruit beverages, carbonated beverages, milk beverages, jelly beverages, near water, and raw materials thereof. Alternatively, the food may be a supplement having the form of oral dosage formulations such as tablets, capsules, granules, powders, liquids and syrups.
当該食品は、クロロゲン酸類又はその塩を、任意の食品材料又は食品に許容される添加物（例えば溶剤、軟化剤、油、乳化剤、防腐剤、香科、甘味料、安定剤、着色剤、紫外線吸収剤、酸化防止剤、保湿剤、増粘剤、固着剤、分散剤、湿潤剤等）と適宜組み合わせて、定法に従って調製することができる。 The food contains chlorogenic acids or their salts as any food material or additives acceptable for food (for example, solvents, softeners, oils, emulsifiers, preservatives, fragrances, sweeteners, stabilizers, coloring agents, ultraviolet rays Absorbents, antioxidants, humectants, thickeners, sticking agents, dispersants, wetting agents, etc.) can be appropriately combined and prepared according to a conventional method.
当該食品中における、クロロゲン酸類又はその塩の含有量は、特に限定されないが、その全質量中、クロロゲン酸類換算で、好ましくは０．０００１質量％以上、より好ましくは０．００１質量％以上、さらに好ましくは０．０１質量％以上、さらにより好ましくは０．１質量％以上、なお好ましくは０．５質量％以上、なお好ましくは１質量％以上であり、かつ好ましくは５０質量％以下、より好ましくは２０質量％以下、さらに好ましくは１０質量％以下である。さらに、当該含有量の例として、全質量中、０．０００１～５０質量％、０．０００１～２０質量％、０．０００１～１０質量％、０．００１～５０質量％、０．００１～２０質量％、０．００１～１０質量％、０．０１～５０質量％、０．０１～２０質量％、０．０１～１０質量％、０．１～５０質量％、０．１～２０質量％、０．１～１０質量％、０．５～５０質量％、０．５～２０質量％、０．５～１０質量％、１～５０質量％、１～２０質量％、及び１～１０質量％が挙げられる。 The content of chlorogenic acids or salts thereof in the food is not particularly limited, but is preferably 0.0001% by mass or more, more preferably 0.001% by mass or more, and more preferably 0.001% by mass or more in terms of chlorogenic acids in the total mass. Preferably 0.01% by mass or more, still more preferably 0.1% by mass or more, still more preferably 0.5% by mass or more, still more preferably 1% by mass or more, and preferably 50% by mass or less, more preferably is 20% by mass or less, more preferably 10% by mass or less. Furthermore, examples of the content include 0.0001 to 50% by mass, 0.0001 to 20% by mass, 0.0001 to 10% by mass, 0.001 to 50% by mass, and 0.001 to 20% by mass of the total mass. % by mass, 0.001 to 10% by mass, 0.01 to 50% by mass, 0.01 to 20% by mass, 0.01 to 10% by mass, 0.1 to 50% by mass, 0.1 to 20% by mass , 0.1 to 10% by weight, 0.5 to 50% by weight, 0.5 to 20% by weight, 0.5 to 10% by weight, 1 to 50% by weight, 1 to 20% by weight, and 1 to 10% by weight %.
なお別の態様において、本発明は、対象のＣｌａｕｄｉｎ－５発現促進方法を提供する。また本発明は、対象の脳内ＨＭＧＢ１発現抑制方法を提供する。また本発明は、対象のＢＢＢ保護方法を提供する。また本発明は、対象のＢＢＢの機能低下の予防又は改善方法を提供する。また本発明は、対象のＢＢＢの破綻に起因する疾患又は状態の予防又は改善方法を提供する。当該方法は、対象に、クロロゲン酸類又はその塩を有効量で投与することを含む。当該方法は、治療的方法であっても非治療的方法であってもよい。 In yet another aspect, the invention provides a method of enhancing Claudin-5 expression in a subject. The present invention also provides a method for suppressing HMGB1 expression in the brain of a subject. The present invention also provides a method for BBB protection of a subject. The present invention also provides a method for preventing or improving BBB dysfunction in a subject. The present invention also provides a method for preventing or ameliorating a disease or condition caused by BBB disruption in a subject. The method comprises administering to the subject an effective amount of chlorogenic acids or salts thereof. The method may be therapeutic or non-therapeutic.
当該本発明の方法における対象としては、Ｃｌａｕｄｉｎ－５発現促進、脳内ＨＭＧＢ１発現抑制、ＢＢＢ保護、ＢＢＢの機能低下の予防又は改善、あるいはＢＢＢの破綻に起因する疾患又は状態の予防又は改善が所望されるか、それらを必要とする動物が挙げられる。動物としては、ＢＢＢを有する動物であれば特に限定されないが、上述したヒト及び非ヒト動物が挙げられ、より好ましくはヒトである。 Desirable subjects for the method of the present invention include promotion of Claudin-5 expression, suppression of HMGB1 expression in the brain, protection of the BBB, prevention or amelioration of functional deterioration of the BBB, or prevention or amelioration of diseases or conditions caused by disruption of the BBB. animals in need of them. The animal is not particularly limited as long as it has a BBB, and includes the above-mentioned humans and non-human animals, more preferably humans.
当該本発明の方法における投与の有効量は、対象のＣｌａｕｄｉｎ－５発現促進又は脳内ＨＭＧＢ１発現抑制を達成できる量であり得る。好ましくは、有効量とは、投与群のＣｌａｕｄｉｎ－５発現又は脳内ＨＭＧＢ１発現を、未投与群と比べて統計的に有意に低下させることができる量である。本発明において、クロロゲン酸類又はその塩の投与量及び投与計画は、対象の種、体重、性別、年齢、状態、又はその他の要因に従って当業者により適宜決定されればよい。限定ではないが、本発明によるクロロゲン酸類又はその塩の投与量（クロロゲン酸類換算）は、例えば成人１人１日当たり、好ましくは１ｍｇ以上、より好ましくは５ｍｇ以上、さらに好ましくは１５ｍｇ以上であり、かつ好ましくは１０ｇ以下、より好ましくは５ｇ以下、さらに好ましくは１ｇ以下である。上記の用量を、例えば、１日に１回、２回又は３回以上に分け、数週間～数ヶ月間継続して投与することが好ましい。また経口投与が好ましい。 An effective amount to be administered in the method of the present invention can be an amount capable of achieving promotion of Claudin-5 expression or suppression of intracerebral HMGB1 expression in a subject. Preferably, the effective amount is an amount capable of statistically significantly reducing Claudin-5 expression or brain HMGB1 expression in the administration group compared to the non-administration group. In the present invention, the dose and administration regimen of chlorogenic acids or salts thereof may be appropriately determined by those skilled in the art according to the subject species, body weight, sex, age, condition, or other factors. Although not limited, the dose of chlorogenic acids or salts thereof according to the present invention (in terms of chlorogenic acids) is, for example, preferably 1 mg or more, more preferably 5 mg or more, and still more preferably 15 mg or more per adult per day, and It is preferably 10 g or less, more preferably 5 g or less, still more preferably 1 g or less. It is preferable to administer the above doses, for example, once, twice, or three times or more daily, continuously for several weeks to several months. Oral administration is also preferred.
本発明はまた、例示的実施形態として以下の物質、製造方法、用途、方法等を包含する。但し、本発明はこれらの実施形態に限定されない。 The present invention also includes the following materials, manufacturing methods, uses, methods, etc. as exemplary embodiments. However, the invention is not limited to these embodiments.
〔１〕クロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物を有効成分とする、Ｃｌａｕｄｉｎ－５発現促進剤。
〔２〕クロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物を有効成分とする、脳内ＨＭＧＢ１発現抑制剤。
〔３〕クロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物を有効成分とする、血液脳関門保護剤。
〔４〕クロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物を有効成分とする、血液脳関門の機能低下の予防又は改善剤。
〔５〕クロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物を有効成分とする、血液脳関門の破綻に起因する疾患又は状態の予防又は改善剤。
〔６〕好ましくは、前記血液脳関門の破綻に起因する疾患又は状態が、脳内出血、脳血管障害、視神経脊髄炎、白質脳症、急性散在性脳脊髄炎、炎症性脱髄性多発神経炎、脳感染症、アナフィラキシー、脳腫瘍、脳・脊髄外傷、振戦、せん妄、異常行動、眠気、意識障害、及び強迫性障害からなる群より選択される少なくとも１種である、〔５〕記載の剤。
〔７〕好ましくは、前記クロロゲン酸類が、３－カフェオイルキナ酸、４－カフェオイルキナ酸、５－カフェオイルキナ酸、３－フェルロイルキナ酸、４－フェルロイルキナ酸、５－フェルロイルキナ酸、３，４－ジカフェオイルキナ酸、３，５－ジカフェオイルキナ酸及び４，５－ジカフェオイルキナ酸からなる群より選択される少なくとも１種である、〔１〕～〔６〕のいずれか１項記載の剤。
〔８〕好ましくは、前記剤が医薬品又は医薬部外品であり、かつクロロゲン酸類を０．０１～９５質量％、０．０１～８０質量％、０．０１～６０質量％、０．１～９５質量％、０．１～８０質量％、０．１～６０質量％、０．５～９５質量％、０．５～８０質量％、０．５～６０質量％、１．０～９５質量％、１．０～８０質量％、１．０～６０質量％、１０～９５質量％、１０～８０質量％、又は１０～６０質量％含有する、〔１〕～〔７〕のいずれか１項記載の剤。
〔９〕好ましくは、前記剤が食品であり、かつクロロゲン酸類を０．０００１～５０質量％、０．０００１～２０質量％、０．０００１～１０質量％、０．００１～５０質量％、０．００１～２０質量％、０．００１～１０質量％、０．０１～５０質量％、０．０１～２０質量％、０．０１～１０質量％、０．１～５０質量％、０．１～２０質量％、０．１～１０質量％、０．５～５０質量％、０．５～２０質量％、０．５～１０質量％、１～５０質量％、１～２０質量％、又は１～１０質量％含有する、〔１〕～〔７〕のいずれか１項記載の剤。
〔１０〕好ましくは経口剤である、〔１〕～〔９〕のいずれか１項記載の剤。
〔１１〕前記植物抽出物が、好ましくはコーヒー豆抽出物であり、より好ましくは生コーヒー豆抽出物である、〔１〕～〔１０〕のいずれか１項記載の剤。
〔１２〕前記生コーヒー豆抽出物が、
好ましくは、カフェインとクロロゲン酸類との質量比が０．０２以下、クロロゲン酸類全量中の５－カフェオイルキナ酸の含量が３５質量％以上の生コーヒー豆抽出物であり、
より好ましくは、カフェインとクロロゲン酸類との質量比が０．００１以下、クロロゲン酸類全量中の５－カフェオイルキナ酸の含量が３５質量％以上の生コーヒー豆抽出物である、
〔１１〕記載の剤。
[1] A Claudin-5 expression promoter containing chlorogenic acids or salts thereof, or a plant extract containing them as an active ingredient.
[2] A brain HMGB1 expression inhibitor containing chlorogenic acids or salts thereof, or a plant extract containing them as an active ingredient.
[3] A blood-brain barrier protective agent containing, as an active ingredient, chlorogenic acids or salts thereof, or a plant extract containing them.
[4] A preventive or ameliorating agent for the functional deterioration of the blood-brain barrier, comprising chlorogenic acids, salts thereof, or plant extracts containing them as active ingredients.
[5] A prophylactic or ameliorating agent for diseases or conditions caused by disruption of the blood-brain barrier, comprising chlorogenic acids or salts thereof, or plant extracts containing them as active ingredients.
[6] Preferably, the disease or condition caused by disruption of the blood-brain barrier is intracerebral hemorrhage, cerebrovascular disorder, neuromyelitis optica, leukoencephalopathy, acute disseminated encephalomyelitis, inflammatory demyelinating polyneuropathy, The agent of [5], which is at least one selected from the group consisting of brain infection, anaphylaxis, brain tumor, brain/spinal cord injury, tremor, delirium, abnormal behavior, drowsiness, disturbance of consciousness, and obsessive-compulsive disorder.
[7] Preferably, the chlorogenic acids are 3-caffeoylquinic acid, 4-caffeoylquinic acid, 5-caffeoylquinic acid, 3-feruloylquinic acid, 4-feruloylquinic acid, 5-feruloylquinic acid at least one selected from the group consisting of ruquinic acid, 3,4-dicaffeoylquinic acid, 3,5-dicaffeoylquinic acid and 4,5-dicaffeoylquinic acid [1] to [ 6], the agent according to any one of the above items.
[8] Preferably, the agent is a drug or quasi-drug, and the chlorogenic acids are 0.01 to 95% by mass, 0.01 to 80% by mass, 0.01 to 60% by mass, 0.1 to 95% by mass, 0.1-80% by mass, 0.1-60% by mass, 0.5-95% by mass, 0.5-80% by mass, 0.5-60% by mass, 1.0-95% by mass %, 1.0 to 80% by mass, 1.0 to 60% by mass, 10 to 95% by mass, 10 to 80% by mass, or 10 to 60% by mass, any one of [1] to [7] The agent described in the paragraph.
[9] Preferably, the agent is a food, and the chlorogenic acids are 0.0001 to 50% by mass, 0.0001 to 20% by mass, 0.0001 to 10% by mass, 0.001 to 50% by mass, 0 0.001 to 20% by mass, 0.001 to 10% by mass, 0.01 to 50% by mass, 0.01 to 20% by mass, 0.01 to 10% by mass, 0.1 to 50% by mass, 0.1 ~20% by mass, 0.1 to 10% by mass, 0.5 to 50% by mass, 0.5 to 20% by mass, 0.5 to 10% by mass, 1 to 50% by mass, 1 to 20% by mass, or The agent according to any one of [1] to [7], containing 1 to 10% by mass.
[10] The agent according to any one of [1] to [9], which is preferably an oral agent.
[11] The agent according to any one of [1] to [10], wherein the plant extract is preferably a coffee bean extract, more preferably a green coffee bean extract.
[12] The green coffee bean extract is
Preferably, a green coffee bean extract having a mass ratio of caffeine to chlorogenic acids of 0.02 or less and a content of 5-caffeoylquinic acid in the total amount of chlorogenic acids of 35% by mass or more,
More preferably, the raw coffee bean extract has a mass ratio of caffeine to chlorogenic acids of 0.001 or less and a content of 5-caffeoylquinic acid in the total amount of chlorogenic acids of 35% by mass or more.
[11] The agent described.
〔１３〕Ｃｌａｕｄｉｎ－５発現促進剤の製造のための、クロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物の使用。
〔１４〕脳内ＨＭＧＢ１発現抑制剤の製造のための、クロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物の使用。
〔１５〕血液脳関門保護剤の製造のための、クロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物の使用。
〔１６〕血液脳関門の機能低下の予防又は改善剤の製造のための、クロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物の使用。
〔１７〕血液脳関門の破綻に起因する疾患又は状態の予防又は改善剤の製造のための、クロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物の使用。
〔１８〕好ましくは、前記Ｃｌａｕｄｉｎ－５発現促進剤が、血液脳関門の破綻に起因する疾患又は状態の予防又は改善を必要とする者におけるＣｌａｕｄｉｎ－５発現促進のために使用される、〔１３〕記載の使用。
〔１９〕好ましくは、前記脳内ＨＭＧＢ１発現抑制剤が、血液脳関門の破綻に起因する疾患又は状態の予防又は改善を必要とする者における脳内ＨＭＧＢ１発現抑制のために使用される、〔１４〕記載の使用。
〔２０〕好ましくは、前記血液脳関門保護剤が、血液脳関門の破綻に起因する疾患又は状態の予防又は改善を必要とする者における血液脳関門保護のために使用される、〔１５〕記載の使用。
〔２１〕好ましくは、前記血液脳関門の機能低下の予防又は改善剤が、血液脳関門の破綻に起因する疾患又は状態の予防又は改善を必要とする者における血液脳関門の機能低下の予防又は改善のために使用される、〔１６〕記載の使用。
〔２２〕好ましくは、前記血液脳関門の破綻に起因する疾患又は状態が、脳内出血、脳血管障害、視神経脊髄炎、白質脳症、急性散在性脳脊髄炎、炎症性脱髄性多発神経炎、脳感染症、アナフィラキシー、脳腫瘍、脳・脊髄外傷、振戦、せん妄、異常行動、眠気、意識障害、及び強迫性障害からなる群より選択される少なくとも１種である、〔１７〕～〔２１〕のいずれか１項記載の使用。
〔２３〕好ましくは、前記クロロゲン酸類が、３－カフェオイルキナ酸、４－カフェオイルキナ酸、５－カフェオイルキナ酸、３－フェルロイルキナ酸、４－フェルロイルキナ酸、５－フェルロイルキナ酸、３，４－ジカフェオイルキナ酸、３，５－ジカフェオイルキナ酸及び４，５－ジカフェオイルキナ酸からなる群より選択される少なくとも１種である、〔１３〕～〔２２〕のいずれか１項記載の使用。
〔２４〕好ましくは、前記剤が医薬品又は医薬部外品であり、かつクロロゲン酸類を０．０１～９５質量％、０．０１～８０質量％、０．０１～６０質量％、０．１～９５質量％、０．１～８０質量％、０．１～６０質量％、０．５～９５質量％、０．５～８０質量％、０．５～６０質量％、１．０～９５質量％、１．０～８０質量％、１．０～６０質量％、１０～９５質量％、１０～８０質量％、又は１０～６０質量％含有する、〔１３〕～〔２３〕のいずれか１項記載の使用。
〔２５〕好ましくは、前記剤が食品であり、かつクロロゲン酸類を０．０００１～５０質量％、０．０００１～２０質量％、０．０００１～１０質量％、０．００１～５０質量％、０．００１～２０質量％、０．００１～１０質量％、０．０１～５０質量％、０．０１～２０質量％、０．０１～１０質量％、０．１～５０質量％、０．１～２０質量％、０．１～１０質量％、０．５～５０質量％、０．５～２０質量％、０．５～１０質量％、１～５０質量％、１～２０質量％、又は１～１０質量％含有する、〔１３〕～〔２３〕のいずれか１項記載の使用。
〔２６〕好ましくは、前記剤が経口剤である、〔１３〕～〔２５〕のいずれか１項記載の使用。
〔２７〕前記植物抽出物が、好ましくはコーヒー豆抽出物であり、より好ましくは生コーヒー豆抽出物である、〔１３〕～〔２６〕のいずれか１項記載の使用。
〔２８〕前記生コーヒー豆抽出物が、
好ましくは、カフェインとクロロゲン酸類との質量比が０．０２以下、クロロゲン酸類全量中の５－カフェオイルキナ酸の含量が３５質量％以上の生コーヒー豆抽出物であり、
より好ましくは、カフェインとクロロゲン酸類との質量比が０．００１以下、クロロゲン酸類全量中の５－カフェオイルキナ酸の含量が３５質量％以上の生コーヒー豆抽出物である、
〔２７〕記載の使用。
[13] Use of chlorogenic acids or salts thereof, or plant extracts containing them, for producing a Claudin-5 expression promoter.
[14] Use of chlorogenic acids or salts thereof, or plant extracts containing them, for producing an intracerebral HMGB1 expression inhibitor.
[15] Use of chlorogenic acids or salts thereof, or plant extracts containing them, for the production of a blood-brain barrier protective agent.
[16] Use of chlorogenic acids or salts thereof, or plant extracts containing them, for the production of an agent for preventing or improving blood-brain barrier dysfunction.
[17] Use of chlorogenic acids or salts thereof, or plant extracts containing them, for the production of a preventive or ameliorating agent for diseases or conditions caused by disruption of the blood-brain barrier.
[18] Preferably, the Claudin-5 expression promoter is used to promote Claudin-5 expression in a person in need of prevention or amelioration of a disease or condition caused by disruption of the blood-brain barrier [13 ] use described.
[19] Preferably, the agent for suppressing brain HMGB1 expression is used for suppressing brain HMGB1 expression in a person in need of prevention or amelioration of a disease or condition caused by disruption of the blood-brain barrier [14 ] use described.
[20] Preferably, the agent for protecting the blood-brain barrier is used for blood-brain barrier protection in a person in need of prevention or improvement of a disease or condition caused by disruption of the blood-brain barrier. Use of.
[21] Preferably, the agent for preventing or improving blood-brain barrier dysfunction prevents or improves blood-brain barrier dysfunction in a person in need of prevention or amelioration of a disease or condition caused by disruption of the blood-brain barrier. The use according to [16], which is used for improvement.
[22] Preferably, the disease or condition caused by disruption of the blood-brain barrier is intracerebral hemorrhage, cerebrovascular disorder, neuromyelitis optica, leukoencephalopathy, acute disseminated encephalomyelitis, inflammatory demyelinating polyneuropathy, At least one selected from the group consisting of brain infection, anaphylaxis, brain tumor, brain/spinal cord trauma, tremor, delirium, abnormal behavior, drowsiness, disturbance of consciousness, and obsessive-compulsive disorder [17]-[21] Use according to any one of
[23] Preferably, the chlorogenic acids are 3-caffeoylquinic acid, 4-caffeoylquinic acid, 5-caffeoylquinic acid, 3-feruloylquinic acid, 4-feruloylquinic acid, and 5-feruloylquinic acid. at least one selected from the group consisting of ruquinic acid, 3,4-dicaffeoylquinic acid, 3,5-dicaffeoylquinic acid and 4,5-dicaffeoylquinic acid [13] to [ 22].
[24] Preferably, the agent is a drug or quasi-drug, and the chlorogenic acids are 0.01 to 95% by mass, 0.01 to 80% by mass, 0.01 to 60% by mass, 0.1 to 95% by mass, 0.1-80% by mass, 0.1-60% by mass, 0.5-95% by mass, 0.5-80% by mass, 0.5-60% by mass, 1.0-95% by mass %, 1.0 to 80% by mass, 1.0 to 60% by mass, 10 to 95% by mass, 10 to 80% by mass, or 10 to 60% by mass, any one of [13] to [23] USE OF SECTION.
[25] Preferably, the agent is a food, and 0.0001 to 50% by mass, 0.0001 to 20% by mass, 0.0001 to 10% by mass, 0.001 to 50% by mass, 0.0001 to 20% by mass of chlorogenic acids 0.001 to 20% by mass, 0.001 to 10% by mass, 0.01 to 50% by mass, 0.01 to 20% by mass, 0.01 to 10% by mass, 0.1 to 50% by mass, 0.1 ~20% by mass, 0.1 to 10% by mass, 0.5 to 50% by mass, 0.5 to 20% by mass, 0.5 to 10% by mass, 1 to 50% by mass, 1 to 20% by mass, or The use according to any one of [13] to [23], containing 1 to 10% by mass.
[26] The use according to any one of [13] to [25], wherein the agent is preferably an oral agent.
[27] The use according to any one of [13] to [26], wherein the plant extract is preferably a coffee bean extract, more preferably a green coffee bean extract.
[28] The green coffee bean extract is
Preferably, a green coffee bean extract having a mass ratio of caffeine to chlorogenic acids of 0.02 or less and a content of 5-caffeoylquinic acid in the total amount of chlorogenic acids of 35% by mass or more,
More preferably, the raw coffee bean extract has a mass ratio of caffeine to chlorogenic acids of 0.001 or less and a content of 5-caffeoylquinic acid in the total amount of chlorogenic acids of 35% by mass or more.
[27] The use described.
〔２９〕Ｃｌａｕｄｉｎ－５発現促進のための、クロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物の使用。
〔３０〕脳内ＨＭＧＢ１発現抑制のための、クロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物の使用。
〔３１〕血液脳関門保護のための、クロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物の使用。
〔３２〕血液脳関門の機能低下の予防又は改善のための、クロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物の使用。
〔３３〕血液脳関門の破綻に起因する疾患又は状態の予防又は改善のための、クロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物の使用。
〔３４〕好ましくは、前記クロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物が、血液脳関門の破綻に起因する疾患又は状態の予防又は改善を必要とする者におけるＣｌａｕｄｉｎ－５発現促進のために使用される、〔２９〕記載の使用。
〔３５〕好ましくは、前記クロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物が、血液脳関門の破綻に起因する疾患又は状態の予防又は改善を必要とする者における脳内ＨＭＧＢ１発現抑制のために使用される、〔３０〕記載の使用。
〔３６〕好ましくは、前記クロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物が、血液脳関門の破綻に起因する疾患又は状態の予防又は改善を必要とする者における血液脳関門保護のために使用される、〔３１〕記載の使用。
〔３７〕好ましくは、前記クロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物が、血液脳関門の破綻に起因する疾患又は状態の予防又は改善を必要とする者における血液脳関門の機能低下の予防又は改善のために使用される、〔３２〕記載の使用。
〔３８〕好ましくは、前記血液脳関門の破綻に起因する疾患又は状態が、脳内出血、脳血管障害、視神経脊髄炎、白質脳症、急性散在性脳脊髄炎、炎症性脱髄性多発神経炎、脳感染症、アナフィラキシー、脳腫瘍、脳・脊髄外傷、振戦、せん妄、異常行動、眠気、意識障害、及び強迫性障害からなる群より選択される少なくとも１種である、〔３３〕～〔３７〕のいずれか１項記載の使用。
〔３９〕好ましくは、前記クロロゲン酸類が、３－カフェオイルキナ酸、４－カフェオイルキナ酸、５－カフェオイルキナ酸、３－フェルロイルキナ酸、４－フェルロイルキナ酸、５－フェルロイルキナ酸、３，４－ジカフェオイルキナ酸、３，５－ジカフェオイルキナ酸及び４，５－ジカフェオイルキナ酸からなる群より選択される少なくとも１種である、〔２９〕～〔３８〕のいずれか１項記載の使用。
〔４０〕好ましくは、前記クロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物が、該クロロゲン酸類を０．０１～９５質量％、０．０１～８０質量％、０．０１～６０質量％、０．１～９５質量％、０．１～８０質量％、０．１～６０質量％、０．５～９５質量％、０．５～８０質量％、０．５～６０質量％、１．０～９５質量％、１．０～８０質量％、１．０～６０質量％、１０～９５質量％、１０～８０質量％、又は１０～６０質量％含有する医薬品又は医薬部外品の形態で使用される、〔２９〕～〔３９〕のいずれか１項記載の使用。
〔４１〕好ましくは、前記クロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物が、該クロロゲン酸類を０．０００１～５０質量％、０．０００１～２０質量％、０．０００１～１０質量％、０．００１～５０質量％、０．００１～２０質量％、０．００１～１０質量％、０．０１～５０質量％、０．０１～２０質量％、０．０１～１０質量％、０．１～５０質量％、０．１～２０質量％、０．１～１０質量％、０．５～５０質量％、０．５～２０質量％、０．５～１０質量％、１～５０質量％、１～２０質量％、又は１～１０質量％含有する食品の形態で使用される、〔２９〕～〔３９〕のいずれか１項記載の使用。
〔４２〕前記クロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物の成人１人１日当たりの投与量が、クロロゲン酸類換算で、好ましくは１ｍｇ以上、より好ましくは５ｍｇ以上、さらに好ましくは１５ｍｇ以上であり、かつ好ましくは１０ｇ以下、より好ましくは５ｇ以下、さらに好ましくは１ｇ以下である、〔２９〕～〔４１〕のいずれか１項記載の使用。
〔４３〕好ましくは、前記クロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物が経口投与される、〔２９〕～〔４２〕のいずれか１項記載の使用。
〔４４〕前記植物抽出物が、好ましくはコーヒー豆抽出物であり、より好ましくは生コーヒー豆抽出物である、〔２９〕～〔４３〕のいずれか１項記載の使用。
〔４５〕前記生コーヒー豆抽出物が、
好ましくは、カフェインとクロロゲン酸類との質量比が０．０２以下、クロロゲン酸類全量中の５－カフェオイルキナ酸の含量が３５質量％以上の生コーヒー豆抽出物であり、
より好ましくは、カフェインとクロロゲン酸類との質量比が０．００１以下、クロロゲン酸類全量中の５－カフェオイルキナ酸の含量が３５質量％以上の生コーヒー豆抽出物である、
〔４４〕記載の使用。
[29] Use of chlorogenic acids or salts thereof, or plant extracts containing them, for promoting Claudin-5 expression.
[30] Use of chlorogenic acids or salts thereof, or plant extracts containing them, for suppressing expression of HMGB1 in the brain.
[31] Use of chlorogenic acids or salts thereof, or plant extracts containing them, for protecting the blood-brain barrier.
[32] Use of chlorogenic acids or salts thereof, or plant extracts containing them, for the prevention or amelioration of hypofunction of the blood-brain barrier.
[33] Use of chlorogenic acids or salts thereof, or plant extracts containing them, for the prevention or amelioration of diseases or conditions caused by disruption of the blood-brain barrier.
[34] Preferably, the chlorogenic acids or salts thereof, or plant extracts containing them, promote Claudin-5 expression in a person in need of prevention or improvement of a disease or condition caused by disruption of the blood-brain barrier. The use according to [29], which is used for
[35] Preferably, the chlorogenic acids or salts thereof, or a plant extract containing them, suppresses brain HMGB1 expression in a person in need of prevention or amelioration of a disease or condition caused by disruption of the blood-brain barrier. The use according to [30], which is used for
[36] Preferably, the chlorogenic acids or salts thereof, or a plant extract containing them, is for blood-brain barrier protection in a person in need of prevention or improvement of a disease or condition caused by disruption of the blood-brain barrier. The use according to [31], which is used for
[37] Preferably, the chlorogenic acids or salts thereof, or plant extracts containing the same reduce the function of the blood-brain barrier in a person in need of prevention or improvement of a disease or condition caused by disruption of the blood-brain barrier. The use of [32], which is used for the prevention or improvement of
[38] Preferably, the disease or condition caused by disruption of the blood-brain barrier is intracerebral hemorrhage, cerebrovascular disorder, neuromyelitis optica, leukoencephalopathy, acute disseminated encephalomyelitis, inflammatory demyelinating polyneuropathy, At least one selected from the group consisting of brain infection, anaphylaxis, brain tumor, brain/spinal cord injury, tremor, delirium, abnormal behavior, drowsiness, disturbance of consciousness, and obsessive-compulsive disorder [33]-[37] Use according to any one of
[39] Preferably, the chlorogenic acids are 3-caffeoylquinic acid, 4-caffeoylquinic acid, 5-caffeoylquinic acid, 3-feruloylquinic acid, 4-feruloylquinic acid, and 5-feruloylquinic acid. [29] to [29]-[ 38].
[40] Preferably, the chlorogenic acids or salts thereof, or the plant extracts containing them contain 0.01 to 95% by mass, 0.01 to 80% by mass, or 0.01 to 60% by mass of the chlorogenic acids. , 0.1 to 95% by mass, 0.1 to 80% by mass, 0.1 to 60% by mass, 0.5 to 95% by mass, 0.5 to 80% by mass, 0.5 to 60% by mass, 1 .0 to 95% by mass, 1.0 to 80% by mass, 1.0 to 60% by mass, 10 to 95% by mass, 10 to 80% by mass, or 10 to 60% by mass of pharmaceuticals or quasi-drugs containing The use according to any one of [29] to [39], which is used in the form of
[41] Preferably, the chlorogenic acids or salts thereof, or plant extracts containing them contain 0.0001 to 50% by mass, 0.0001 to 20% by mass, or 0.0001 to 10% by mass of the chlorogenic acids. , 0.001 to 50% by weight, 0.001 to 20% by weight, 0.001 to 10% by weight, 0.01 to 50% by weight, 0.01 to 20% by weight, 0.01 to 10% by weight, 0 .1-50% by mass, 0.1-20% by mass, 0.1-10% by mass, 0.5-50% by mass, 0.5-20% by mass, 0.5-10% by mass, 1-50% by mass The use according to any one of [29] to [39], which is used in the form of a food containing 1 to 20% by mass, or 1 to 10% by mass.
[42] The dose of the chlorogenic acids or salts thereof, or the plant extract containing them, per adult per day, in terms of chlorogenic acids, is preferably 1 mg or more, more preferably 5 mg or more, and still more preferably 15 mg or more. and preferably 10 g or less, more preferably 5 g or less, still more preferably 1 g or less, the use according to any one of [29] to [41].
[43] The use according to any one of [29] to [42], wherein the chlorogenic acids or salts thereof, or plant extracts containing them are preferably orally administered.
[44] The use according to any one of [29] to [43], wherein the plant extract is preferably a coffee bean extract, more preferably a green coffee bean extract.
[45] The green coffee bean extract is
Preferably, a green coffee bean extract having a mass ratio of caffeine to chlorogenic acids of 0.02 or less and a content of 5-caffeoylquinic acid in the total amount of chlorogenic acids of 35% by mass or more,
More preferably, the raw coffee bean extract has a mass ratio of caffeine to chlorogenic acids of 0.001 or less and a content of 5-caffeoylquinic acid in the total amount of chlorogenic acids of 35% by mass or more.
[44] The use described.
〔４６〕Ｃｌａｕｄｉｎ－５発現促進に使用するための、クロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物。
〔４７〕脳内ＨＭＧＢ１発現抑制に使用するための、クロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物。
〔４８〕血液脳関門保護に使用するための、クロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物。
〔４９〕血液脳関門の機能低下の予防又は改善に使用するための、クロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物。
〔５０〕血液脳関門の破綻に起因する疾患又は状態の予防又は改善に使用するための、クロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物。
〔５１〕好ましくは、血液脳関門の破綻に起因する疾患又は状態の予防又は改善を必要とする者におけるＣｌａｕｄｉｎ－５発現促進のために使用される、〔４６〕記載のクロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物。
〔５２〕好ましくは、血液脳関門の破綻に起因する疾患又は状態の予防又は改善を必要とする者における脳内ＨＭＧＢ１発現抑制のために使用される、〔４７〕記載のクロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物。
〔５３〕好ましくは、血液脳関門の破綻に起因する疾患又は状態の予防又は改善を必要とする者における血液脳関門保護のために使用される、〔４８〕記載のクロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物。
〔５４〕好ましくは、血液脳関門の破綻に起因する疾患又は状態の予防又は改善を必要とする者における血液脳関門の機能低下の予防又は改善のために使用される、〔４９〕記載のクロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物。
〔５５〕好ましくは、前記血液脳関門の破綻に起因する疾患又は状態が、脳内出血、脳血管障害、視神経脊髄炎、白質脳症、急性散在性脳脊髄炎、炎症性脱髄性多発神経炎、脳感染症、アナフィラキシー、脳腫瘍、脳・脊髄外傷、振戦、せん妄、異常行動、眠気、意識障害、及び強迫性障害からなる群より選択される少なくとも１種である、〔５０〕～〔５４〕のいずれか１項記載のクロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物。
〔５６〕好ましくは、前記クロロゲン酸類が、３－カフェオイルキナ酸、４－カフェオイルキナ酸、５－カフェオイルキナ酸、３－フェルロイルキナ酸、４－フェルロイルキナ酸、５－フェルロイルキナ酸、３，４－ジカフェオイルキナ酸、３，５－ジカフェオイルキナ酸及び４，５－ジカフェオイルキナ酸からなる群より選択される少なくとも１種である、〔４６〕～〔５５〕のいずれか１項記載のクロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物。
〔５７〕好ましくは、前記クロロゲン酸類を０．０１～９５質量％、０．０１～８０質量％、０．０１～６０質量％、０．１～９５質量％、０．１～８０質量％、０．１～６０質量％、０．５～９５質量％、０．５～８０質量％、０．５～６０質量％、１．０～９５質量％、１．０～８０質量％、１．０～６０質量％、１０～９５質量％、１０～８０質量％、又は１０～６０質量％含有する医薬品又は医薬部外品の形態で使用される、〔４６〕～〔５６〕のいずれか１項記載のクロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物。
〔５８〕好ましくは、前記クロロゲン酸類を０．０００１～５０質量％、０．０００１～２０質量％、０．０００１～１０質量％、０．００１～５０質量％、０．００１～２０質量％、０．００１～１０質量％、０．０１～５０質量％、０．０１～２０質量％、０．０１～１０質量％、０．１～５０質量％、０．１～２０質量％、０．１～１０質量％、０．５～５０質量％、０．５～２０質量％、０．５～１０質量％、１～５０質量％、１～２０質量％、又は１～１０質量％含有する食品の形態で使用される、〔４６〕～〔５６〕のいずれか１項記載のクロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物。
〔５９〕成人１人１日当たりの投与量が、クロロゲン酸類換算で、好ましくは１ｍｇ以上、より好ましくは５ｍｇ以上、さらに好ましくは１５ｍｇ以上であり、かつ好ましくは１０ｇ以下、より好ましくは５ｇ以下、さらに好ましくは１ｇ以下である、〔４６〕～〔５８〕のいずれか１項記載のクロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物。
〔６０〕好ましくは経口投与される、〔４６〕～〔５９〕のいずれか１項記載のクロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物。
〔６１〕前記植物抽出物が、好ましくはコーヒー豆抽出物であり、より好ましくは生コーヒー豆抽出物である、〔４６〕～〔６０〕のいずれか１項記載のクロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物。
〔６２〕前記生コーヒー豆抽出物が、
好ましくは、カフェインとクロロゲン酸類との質量比が０．０２以下、クロロゲン酸類全量中の５－カフェオイルキナ酸の含量が３５質量％以上の生コーヒー豆抽出物であり、
より好ましくは、カフェインとクロロゲン酸類との質量比が０．００１以下、クロロゲン酸類全量中の５－カフェオイルキナ酸の含量が３５質量％以上の生コーヒー豆抽出物である、
〔６１〕記載のクロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物。
[46] A chlorogenic acid or a salt thereof, or a plant extract containing them, for use in promoting Claudin-5 expression.
[47] A chlorogenic acid or a salt thereof, or a plant extract containing them, for use in suppressing HMGB1 expression in the brain.
[48] A chlorogenic acid or a salt thereof, or a plant extract containing them, for use in protecting the blood-brain barrier.
[49] A chlorogenic acid or a salt thereof, or a plant extract containing them, for use in preventing or ameliorating hypofunction of the blood-brain barrier.
[50] Chlorogenic acids or salts thereof, or plant extracts containing them, for use in preventing or improving diseases or conditions caused by disruption of the blood-brain barrier.
[51] The chlorogenic acids or salts thereof of [46], which are preferably used for promoting Claudin-5 expression in a person in need of prevention or amelioration of a disease or condition caused by disruption of the blood-brain barrier, or plant extracts containing them.
[52] The chlorogenic acids or salts thereof of [47], which are preferably used for suppressing brain HMGB1 expression in a person in need of prevention or amelioration of a disease or condition caused by disruption of the blood-brain barrier, or plant extracts containing them.
[53] The chlorogenic acids or salts thereof of [48], which are preferably used to protect the blood-brain barrier in a person in need of prevention or improvement of a disease or condition caused by disruption of the blood-brain barrier, or Plant extracts containing them.
[54] The chlorogen of [49], which is preferably used for the prevention or amelioration of functional deterioration of the blood-brain barrier in a person in need of prevention or amelioration of a disease or condition caused by disruption of the blood-brain barrier. Acids or salts thereof, or plant extracts containing them.
[55] Preferably, the disease or condition caused by disruption of the blood-brain barrier is intracerebral hemorrhage, cerebrovascular disorder, neuromyelitis optica, leukoencephalopathy, acute disseminated encephalomyelitis, inflammatory demyelinating polyneuropathy, At least one selected from the group consisting of brain infection, anaphylaxis, brain tumor, brain/spinal cord trauma, tremor, delirium, abnormal behavior, drowsiness, disturbance of consciousness, and obsessive-compulsive disorder [50] to [54] Chlorogenic acids or salts thereof according to any one of the above, or plant extracts containing them.
[56] Preferably, the chlorogenic acids are 3-caffeoylquinic acid, 4-caffeoylquinic acid, 5-caffeoylquinic acid, 3-feruloylquinic acid, 4-feruloylquinic acid, 5-feruloylquinic acid [46] to [46]-[ 55], the chlorogenic acids or salts thereof, or plant extracts containing them.
[57] Preferably, the chlorogenic acids are 0.01 to 95% by mass, 0.01 to 80% by mass, 0.01 to 60% by mass, 0.1 to 95% by mass, 0.1 to 80% by mass, 0.1 to 60% by mass, 0.5 to 95% by mass, 0.5 to 80% by mass, 0.5 to 60% by mass, 1.0 to 95% by mass, 1.0 to 80% by mass, 1. Any one of [46] to [56], which is used in the form of pharmaceuticals or quasi-drugs containing 0 to 60% by mass, 10 to 95% by mass, 10 to 80% by mass, or 10 to 60% by mass 1. Chlorogenic acids or salts thereof, or plant extracts containing them.
[58] Preferably, the chlorogenic acids are 0.0001 to 50% by mass, 0.0001 to 20% by mass, 0.0001 to 10% by mass, 0.001 to 50% by mass, 0.001 to 20% by mass, 0.001-10% by mass, 0.01-50% by mass, 0.01-20% by mass, 0.01-10% by mass, 0.1-50% by mass, 0.1-20% by mass, 0.01-10% by mass 1 to 10% by mass, 0.5 to 50% by mass, 0.5 to 20% by mass, 0.5 to 10% by mass, 1 to 50% by mass, 1 to 20% by mass, or 1 to 10% by mass Chlorogenic acids or salts thereof according to any one of [46] to [56], or plant extracts containing them, which are used in the form of foods.
[59] The daily dosage for an adult, in terms of chlorogenic acids, is preferably 1 mg or more, more preferably 5 mg or more, still more preferably 15 mg or more, and is preferably 10 g or less, more preferably 5 g or less, and further The chlorogenic acids or salts thereof according to any one of [46] to [58], or a plant extract containing them, preferably 1 g or less.
[60] The chlorogenic acids or salts thereof according to any one of [46] to [59], which are preferably orally administered, or plant extracts containing them.
[61] The chlorogenic acids or salts thereof according to any one of [46] to [60], wherein the plant extract is preferably a coffee bean extract, more preferably a green coffee bean extract, or Plant extracts containing them.
[62] The green coffee bean extract is
Preferably, a green coffee bean extract having a mass ratio of caffeine to chlorogenic acids of 0.02 or less and a content of 5-caffeoylquinic acid in the total amount of chlorogenic acids of 35% by mass or more,
More preferably, the raw coffee bean extract has a mass ratio of caffeine to chlorogenic acids of 0.001 or less and a content of 5-caffeoylquinic acid in the total amount of chlorogenic acids of 35% by mass or more.
The chlorogenic acids of [61] or salts thereof, or plant extracts containing them.
〔６３〕Ｃｌａｕｄｉｎ－５発現促進方法であって、それを必要とする対象にクロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物を有効量で投与することを含む、方法。
〔６４〕脳内ＨＭＧＢ１発現抑制方法であって、それを必要とする対象にクロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物を有効量で投与することを含む、方法。
〔６５〕血液脳関門保護方法であって、それを必要とする対象にクロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物を有効量で投与することを含む、方法。
〔６６〕血液脳関門の機能低下の予防又は改善方法であって、それを必要とする対象にクロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物を有効量で投与することを含む、方法。
〔６７〕血液脳関門の破綻に起因する疾患又は状態の予防又は改善方法であって、それを必要とする対象にクロロゲン酸類もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物を有効量で投与することを含む、方法。
〔６８〕好ましくは、前記血液脳関門の破綻に起因する疾患又は状態が、脳内出血、脳血管障害、視神経脊髄炎、白質脳症、急性散在性脳脊髄炎、炎症性脱髄性多発神経炎、脳感染症、アナフィラキシー、脳腫瘍、脳・脊髄外傷、振戦、せん妄、異常行動、眠気、意識障害、及び強迫性障害からなる群より選択される少なくとも１種である、〔６７〕記載の方法。
〔６９〕好ましくは、前記クロロゲン酸類が、３－カフェオイルキナ酸、４－カフェオイルキナ酸、５－カフェオイルキナ酸、３－フェルロイルキナ酸、４－フェルロイルキナ酸、５－フェルロイルキナ酸、３，４－ジカフェオイルキナ酸、３，５－ジカフェオイルキナ酸及び４，５－ジカフェオイルキナ酸からなる群より選択される少なくとも１種である、〔６３〕～〔６８〕のいずれか１項記載の方法。
〔７０〕好ましくは、前記クロロゲン酸類又はその塩もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物が、該クロロゲン酸類を０．０１～９５質量％、０．０１～８０質量％、０．０１～６０質量％、０．１～９５質量％、０．１～８０質量％、０．１～６０質量％、０．５～９５質量％、０．５～８０質量％、０．５～６０質量％、１．０～９５質量％、１．０～８０質量％、１．０～６０質量％、１０～９５質量％、１０～８０質量％、又は１０～６０質量％含有する医薬品又は医薬部外品の形態で投与される、〔６３〕～〔６９〕のいずれか１項記載の方法。
〔７１〕好ましくは、前記クロロゲン酸類又はその塩もしくはその塩、又はそれらを含有する植物抽出物が、該クロロゲン酸類を０．０００１～５０質量％、０．０００１～２０質量％、０．０００１～１０質量％、０．００１～５０質量％、０．００１～２０質量％、０．００１～１０質量％、０．０１～５０質量％、０．０１～２０質量％、０．０１～１０質量％、０．１～５０質量％、０．１～２０質量％、０．１～１０質量％、０．５～５０質量％、０．５～２０質量％、０．５～１０質量％、１～５０質量％、１～２０質量％、又は１～１０質量％含有する食品の形態で投与される、〔６３〕～〔６９〕のいずれか１項記載の方法。
〔７２〕前記有効量が、成人１人１日当たり、クロロゲン酸類換算で、好ましくは１ｍｇ以上、より好ましくは５ｍｇ以上、さらに好ましくは１５ｍｇ以上であり、かつ好ましくは１０ｇ以下、より好ましくは５ｇ以下、さらに好ましくは１ｇ以下である、〔６３〕～〔７１〕のいずれか１項記載の方法。
〔７３〕好ましくは前記投与が経口投与である、〔６３〕～〔７２〕のいずれか１項記載の方法。
〔７４〕前記植物抽出物が、好ましくはコーヒー豆抽出物であり、より好ましくは生コーヒー豆抽出物である、〔６３〕～〔７３〕のいずれか１項記載の方法。
〔７５〕前記生コーヒー豆抽出物が、
好ましくは、カフェインとクロロゲン酸類との質量比が０．０２以下、クロロゲン酸類全量中の５－カフェオイルキナ酸の含量が３５質量％以上の生コーヒー豆抽出物であり、
より好ましくは、カフェインとクロロゲン酸類との質量比が０．００１以下、クロロゲン酸類全量中の５－カフェオイルキナ酸の含量が３５質量％以上の生コーヒー豆抽出物である、
〔７４〕記載の方法。
[63] A method for promoting Claudin-5 expression, comprising administering an effective amount of chlorogenic acids or salts thereof, or a plant extract containing them to a subject in need thereof.
[64] A method for suppressing expression of HMGB1 in the brain, comprising administering an effective amount of chlorogenic acids or salts thereof, or a plant extract containing them to a subject in need thereof.
[65] A method for protecting the blood-brain barrier, comprising administering an effective amount of chlorogenic acids or salts thereof, or a plant extract containing them to a subject in need thereof.
[66] A method for preventing or improving blood-brain barrier dysfunction, comprising administering an effective amount of chlorogenic acids or salts thereof, or a plant extract containing them to a subject in need thereof. .
[67] A method for preventing or ameliorating a disease or condition caused by disruption of the blood-brain barrier, comprising administering an effective amount of chlorogenic acids or salts thereof, or a plant extract containing them to a subject in need thereof. method, including
[68] Preferably, the disease or condition caused by disruption of the blood-brain barrier is intracerebral hemorrhage, cerebrovascular disorder, neuromyelitis optica, leukoencephalopathy, acute disseminated encephalomyelitis, inflammatory demyelinating polyneuropathy, The method of [67], which is at least one selected from the group consisting of brain infection, anaphylaxis, brain tumor, brain/spinal cord trauma, tremor, delirium, abnormal behavior, drowsiness, disturbance of consciousness, and obsessive-compulsive disorder.
[69] Preferably, the chlorogenic acids are 3-caffeoylquinic acid, 4-caffeoylquinic acid, 5-caffeoylquinic acid, 3-feruloylquinic acid, 4-feruloylquinic acid, and 5-feruloylquinic acid. at least one selected from the group consisting of luquinic acid, 3,4-dicaffeoylquinic acid, 3,5-dicaffeoylquinic acid and 4,5-dicaffeoylquinic acid [63] to [ 68].
[70] Preferably, the chlorogenic acids, salts thereof, salts thereof, or plant extracts containing them contain 0.01 to 95 mass% of the chlorogenic acids, 0.01 to 80 mass%, 0.01 to 60% by mass, 0.1 to 95% by mass, 0.1 to 80% by mass, 0.1 to 60% by mass, 0.5 to 95% by mass, 0.5 to 80% by mass, 0.5 to 60% by mass %, 1.0 to 95% by mass, 1.0 to 80% by mass, 1.0 to 60% by mass, 10 to 95% by mass, 10 to 80% by mass, or 10 to 60% by mass The method of any one of [63] to [69], which is administered in the form of an external product.
[71] Preferably, the chlorogenic acids, salts thereof, salts thereof, or plant extracts containing them contain the chlorogenic acids in an amount of 0.0001 to 50% by mass, 0.0001 to 20% by mass, 0.0001 to 10% by mass, 0.001 to 50% by mass, 0.001 to 20% by mass, 0.001 to 10% by mass, 0.01 to 50% by mass, 0.01 to 20% by mass, 0.01 to 10% by mass %, 0.1 to 50% by mass, 0.1 to 20% by mass, 0.1 to 10% by mass, 0.5 to 50% by mass, 0.5 to 20% by mass, 0.5 to 10% by mass, The method according to any one of [63] to [69], which is administered in the form of food containing 1 to 50% by mass, 1 to 20% by mass, or 1 to 10% by mass.
[72] the effective amount is preferably 1 mg or more, more preferably 5 mg or more, still more preferably 15 mg or more, and preferably 10 g or less, more preferably 5 g or less per adult per day in terms of chlorogenic acids; The method according to any one of [63] to [71], which is more preferably 1 g or less.
[73] The method of any one of [63] to [72], wherein said administration is preferably oral administration.
[74] The method according to any one of [63] to [73], wherein the plant extract is preferably a coffee bean extract, more preferably a green coffee bean extract.
[75] The green coffee bean extract is
Preferably, a green coffee bean extract having a mass ratio of caffeine to chlorogenic acids of 0.02 or less and a content of 5-caffeoylquinic acid in the total amount of chlorogenic acids of 35% by mass or more,
More preferably, the raw coffee bean extract has a mass ratio of caffeine to chlorogenic acids of 0.001 or less and a content of 5-caffeoylquinic acid in the total amount of chlorogenic acids of 35% by mass or more.
[74] The method described.
以下、実施例に基づき本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。 EXAMPLES The present invention will be described in more detail below based on examples, but the present invention is not limited to these.
製造例１ クロロゲン酸類含有組成物の調製
１）ロブスタ種のコーヒー生豆を熱水にて抽出し、得られた抽出液をスプレードライにて乾燥し、粗クロロゲン酸類含有組成物を得た。該粗クロロゲン酸類含有組成物の組成は、クロロゲン酸類３２．３質量％、カフェイン９．８質量％、質量比（カフェイン／クロロゲン類）が０．３０３、質量比（（Ｋ＋Ｎａ）／クロロゲン酸類）が０．２４であった。
２）該粗クロロゲン酸類含有組成物１８９ｇを、エタノール濃度５２．４質量％のエタノール水溶液７５６ｇ、酸性白土（ミズカエース＃６００、水澤化学社製）９４．５ｇ、ろ過助剤（ソルカフロック、新日鉱プロキュアメント社製）１０．７ｇと混合することにより、クロロゲン酸類含有スラリー１０５１ｇを得た。該クロロゲン酸類含有スラリーのｐＨは５．７であった。
３）該クロロゲン酸類含有スラリー１０５１ｇと、続いてエタノール濃度５２．４質量％のエタノール水溶液１８９ｇを、プレコート剤として珪藻土を堆積させた２号濾紙にてろ過し、ろ過液１０５４ｇを回収した。
４）次いで、活性炭（白鷺ＷＨ２Ｃ、日本エンバイロケミカルズ社製）を１３２ｍＬ充填したカラムと、Ｈ形カチオン交換樹脂（ＳＫ１ＢＨ、三菱化学社製）を１０５ｍＬ充填したカラムとを連結し、これに、該ろ過液１０１９ｇを通液し、続いてエタノール濃度５２．４質量％のエタノール水溶液２３１ｇを通液して、溶出したカラム処理液１０７２ｇを回収した。ろ過液中のクロロゲン酸類含量に対する活性炭の使用量は、０．８１質量倍（ｇ／ｇ）であった。イオン交換樹脂の使用量は、粗クロロゲン酸類含有組成物中の固形分含量に対して０．７４（ｍＬ／ｇ）であった。
５）該カラム処理液１０３８ｇを、０．２μｍメンブランフィルターにてろ過した後、ロータリーエバポレーターにてエタノールを留去して、クロロゲン酸類含有液２２５ｇを得た。該クロロゲン酸類含有液の組成は、クロロゲン酸類２２．６質量％、カフェイン０．２９質量％、質量比（カフェイン／クロロゲン酸類）が０．０１３、エタノール０質量％で、かつそのｐＨは３．１であった。
６）該クロロゲン酸類含有液を蒸留水にて希釈し、クロロゲン酸類濃度を３質量％に調整した。得られた希釈液１０ｇを遠心管に取り、３０００ｒｐｍ、１５℃、６０分間遠心分離し、上清を凍結乾燥処理して、クロロゲン酸類含有精製コーヒーポリフェノール（ＣＰＰ）を得た。該ＣＰＰ中におけるクロロゲン酸類とカフェインとの質量比は上記５）と同様であった。また該ＣＰＰ中、クロロゲン酸類全量中の５－カフェオイルキナ酸（５－ＣＱＡ）の含量は４５．６質量％であり、モノカフェオイルキナ酸及びモノフェルロイルキナ酸（３－ＣＱＡ、４－ＣＱＡ、５－ＣＱＡ、３－ＦＱＡ、４－ＦＱＡ及び５－ＦＱＡ）の合計量中における５－ＣＱＡの含量は３６．９質量％であった。該ＣＰＰ中のクロロゲン酸類の組成比を表１に示す。
Production Example 1 Preparation of Composition Containing Chlorogenic Acids 1) Robusta green coffee beans were extracted with hot water, and the resulting extract was dried by spray drying to obtain a crude composition containing chlorogenic acids. The composition of the crude chlorogenic acids-containing composition is 32.3% by mass of chlorogenic acids, 9.8% by mass of caffeine, a mass ratio (caffeine/chlorogens) of 0.303, and a mass ratio of ((K + Na)/chlorogenic acids ) was 0.24.
2) 189 g of the crude chlorogenic acids-containing composition was mixed with 756 g of an ethanol aqueous solution having an ethanol concentration of 52.4% by mass, 94.5 g of acid clay (Mizuka Ace #600, manufactured by Mizusawa Chemical Co., Ltd.), a filter aid (Solka Floc, Shin Nikko Procurement 1051 g of chlorogenic acid-containing slurry was obtained by mixing with 10.7 g of chlorogenic acids. The pH of the slurry containing chlorogenic acids was 5.7.
3) 1051 g of the slurry containing chlorogenic acids and subsequently 189 g of an ethanol aqueous solution having an ethanol concentration of 52.4% by mass were filtered through No. 2 filter paper on which diatomaceous earth was deposited as a precoating agent, and 1054 g of filtrate was recovered.
4) Next, a column packed with 132 mL of activated carbon (Shirasagi WH2C, manufactured by Nippon EnviroChemicals) and a column packed with 105 mL of H-type cation exchange resin (SK1BH, manufactured by Mitsubishi Chemical) were connected, and the filtration was performed. 1019 g of the liquid was passed through, and then 231 g of an ethanol aqueous solution having an ethanol concentration of 52.4% by mass was passed through, and 1072 g of the eluted column-treated liquid was recovered. The amount of activated carbon used relative to the content of chlorogenic acids in the filtrate was 0.81 mass times (g/g). The amount of ion exchange resin used was 0.74 (mL/g) relative to the solid content in the crude chlorogenic acids-containing composition.
5) After filtering 1038 g of the column-treated liquid with a 0.2 μm membrane filter, ethanol was distilled off with a rotary evaporator to obtain 225 g of a liquid containing chlorogenic acids. The composition of the chlorogenic acids-containing liquid is 22.6% by mass of chlorogenic acids, 0.29% by mass of caffeine, a mass ratio (caffeine/chlorogenic acids) of 0.013, 0% by mass of ethanol, and a pH of 3. .1.
6) The chlorogenic acids-containing liquid was diluted with distilled water to adjust the chlorogenic acids concentration to 3% by mass. 10 g of the obtained diluted solution was taken in a centrifuge tube and centrifuged at 3000 rpm, 15° C. for 60 minutes, and the supernatant was freeze-dried to obtain purified coffee polyphenol (CPP) containing chlorogenic acids. The mass ratio of chlorogenic acids and caffeine in the CPP was the same as in 5) above. In the CPP, the content of 5-caffeoylquinic acid (5-CQA) in the total amount of chlorogenic acids is 45.6% by mass, monocaffeoylquinic acid and monoferuloylquinic acid (3-CQA, 4- The content of 5-CQA in the total amount of CQA, 5-CQA, 3-FQA, 4-FQA and 5-FQA) was 36.9% by mass. Table 1 shows the composition ratio of chlorogenic acids in the CPP.
試験例１ 健常マウスでのクロロゲン酸類によるＨＭＧＢ１発現抑制
（動物）
試験にはＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス（雄、８週齢）（日本クレア）を用いた。マウスは室温２２±２℃、湿度５５±１０％、照明１２時間サイクル（７：００ａ．ｍ．～７：００ｐ．ｍ．）で飼育し、餌及び水は自由摂取とした。
Test Example 1 Suppression of HMGB1 Expression by Chlorogenic Acids in Healthy Mice (Animals)
C57BL/6J mice (male, 8 weeks old) (CLEA Japan) were used for the test. The mice were kept at a room temperature of 22±2° C., humidity of 55±10%, and a lighting cycle of 12 hours (7:00 am to 7:00 pm), and were given food and water ad libitum.
（方法）
試験期間中、動物を（I）対照食群、（II）クロロゲン酸類０．５％食群、及び（III）クロロゲン酸類１％食群の３群に分け、それぞれに一ヶ月間継続的に以下の餌を与えた。
（I）対照食群：クロロゲン酸類非添加の餌（コーン油１０％、カゼイン２０％、セルロース４％、ミネラル３．５％、ビタミン１％、ポテトスターチ６１．５％）
（II）クロロゲン酸類０．５％食群：クロロゲン酸類を０．５質量％含む餌（コーン油１０％、カゼイン２０％、セルロース４％、ミネラル３．５％、ビタミン１％、ポテトスターチ６０．５％、製造例１で得たＣＰＰ（表１記載の組成でクロロゲン酸類含有）１％）
（III）クロロゲン酸類１％食群：クロロゲン酸類を１質量％含む餌（コーン油１０％、カゼイン２０％、セルロース４％、ミネラル３．５％、ビタミン１％、ポテトスターチ５９．５％、製造例１で得たＣＰＰ（表１記載の組成でクロロゲン酸類含有）２％）
(Method)
During the test period, the animals were divided into three groups: (I) a control diet group, (II) a 0.5% chlorogenic acids diet group, and (III) a 1% chlorogenic acids diet group. fed.
(I) Control diet group: diet without chlorogenic acids (10% corn oil, 20% casein, 4% cellulose, 3.5% minerals, 1% vitamins, 61.5% potato starch)
(II) 0.5% chlorogenic acids diet group: feed containing 0.5% by mass of chlorogenic acids (corn oil 10%, casein 20%, cellulose 4%, minerals 3.5%, vitamins 1%, potato starch 60%). 5%, CPP obtained in Production Example 1 (containing chlorogenic acids in the composition shown in Table 1) 1%)
(III) 1% chlorogenic acids diet group: feed containing 1% by mass of chlorogenic acids (10% corn oil, 20% casein, 4% cellulose, 3.5% minerals, 1% vitamins, 59.5% potato starch, manufactured CPP obtained in Example 1 (composition shown in Table 1 containing chlorogenic acids) 2%)
試験期間終了後、動物をイソフルランによる深麻酔下にてヘパリン（５Ｕ／ｍＬ）含有ＰＢＳで灌流し、脳を摘出した。摘出した脳から大脳皮質を分離し、ＲＮＡ分解阻害液（ＲＮＡ ｌａｔｅｒ ｓｏｌｕｔｉｏｎ，Ａｍｂｉｏｎ）に浸漬した後、ビーズホモジナイザーを用いて破砕し、ＲＮｅａｓｙ（登録商標）Ｐｌｕｓ Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ Ｍｉｎｉ ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ）にて総ＲＮＡを調製した。抽出した総ＲＮＡをＨｉｇｈ Ｃａｐａｃｉｔｙ ＲＮＡ－ｔｏ－ｃＤＮＡ ｋｉｔ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて、添付のプロトコールに従って逆転写反応を行い、ｃＤＮＡ合成を行った。 After the end of the test period, the animals were perfused with PBS containing heparin (5 U/mL) under deep anesthesia with isoflurane, and the brain was excised. The cerebral cortex was separated from the excised brain, immersed in RNA later solution, Ambion, disrupted using a bead homogenizer, and total RNA was collected using RNeasy (registered trademark) Plus Universal Mini kit (QIAGEN). was prepared. Using High Capacity RNA-to-cDNA kit (Applied Biosystems), the extracted total RNA was subjected to reverse transcription reaction according to the attached protocol to synthesize cDNA.
得られたｃＤＮＡを鋳型に、ＴａｑＭａｎ（登録商標）Ｆａｓｔ Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ ＰＣＲ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）及びＡＢＩ Ｐｒｉｓｍ ７７００（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて、定量的ＰＣＲを行った。定量的ＰＣＲに使用したＴａｑＭａｎ（登録商標）Ｇｅｎｅは、ＨＭＧＢ１：Ｍｍ００８４９８０５＿ｇＨ、ＧＡＰＤＨ：Ｍｍ９９９９９９１５＿ｇ１であった。ＨＭＧＢ１遺伝子の発現量は、ＧＡＰＤＨ（Ｇｌｙｃｅｒａｌｄｅｈｙｄｅ－３－Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ Ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ）遺伝子発現量で補正した。測定した発現量から、対照食群の平均値を１とする相対発現量を各群について求めた。 Using the resulting cDNA as a template, quantitative PCR was performed using TaqMan (registered trademark) Fast Universal PCR Master Mix (Applied Biosystems) and ABI Prism 7700 (Applied Biosystems). The TaqMan® Gene used for quantitative PCR was HMGB1: Mm00849805_gH, GAPDH: Mm99999915_g1. The HMGB1 gene expression level was corrected with the GAPDH (Glyceraldehyde-3-Phosphate Dehydrogenase) gene expression level. Based on the measured expression levels, relative expression levels were determined for each group, with the average value for the control diet group being set to 1.
（結果）
結果を表２に示す。クロロゲン酸類を含む餌を摂取したクロロゲン酸類食群の大脳皮質では、血液脳関門破綻関連因子であるＨＭＧＢ１の発現が遺伝子レベルで抑制されていた。このＨＭＧＢ１の発現抑制レベルは、摂取した餌のクロロゲン酸類含量に依存していた。このことから、クロロゲン酸類が、脳内のＨＭＧＢ１発現を抑制し、血液脳関門を保護する作用を有することが示された。
(result)
Table 2 shows the results. In the cerebral cortex of the chlorogenic acid diet group that ingested the diet containing chlorogenic acids, the expression of HMGB1, a blood-brain barrier disruption-related factor, was suppressed at the gene level. This suppression level of HMGB1 expression was dependent on the chlorogenic acid content of the ingested feed. This indicates that chlorogenic acids have the effect of suppressing HMGB1 expression in the brain and protecting the blood-brain barrier.
試験例２ 健常マウスでのクロロゲン酸類摂取によるＣｌａｕｄｉｎ－５発現上昇
（方法）
試験例１と同様の手順で、（I）対照食群、（II）クロロゲン酸類０．５％食群、及び（III）クロロゲン酸類１％食群のマウスをそれぞれ一ヶ月間飼育した後、マウスの大脳皮質及び海馬から総ＲＮＡを調製し、ｃＤＮＡを合成した。得られたｃＤＮＡを鋳型に、試験例１と同様の手順で定量的ＰＣＲを行った。定量的ＰＣＲに使用したＴａｑＭａｎ（登録商標）Ｇｅｎｅは、Ｃｌａｕｄｉｎ－５：Ｍｍ００７２７０１２＿ｓ１、ＧＡＰＤＨ：Ｍｍ９９９９９９１５＿ｇ１であった。Ｃｌａｕｄｉｎ－５遺伝子の発現量は、ＧＡＰＤＨ遺伝子発現量で補正した。測定した発現量から、対照食群の平均値を１とする相対発現量を各群について求めた。
Test Example 2 Upregulation of Claudin-5 Expression by Ingestion of Chlorogenic Acids in Healthy Mice (Method)
In the same manner as in Test Example 1, (I) control diet group, (II) 0.5% chlorogenic acids diet group, and (III) 1% chlorogenic acids diet group were each fed for one month, and then the mice were fed. Total RNA was prepared from cerebral cortex and hippocampus, and cDNA was synthesized. Quantitative PCR was performed in the same manner as in Test Example 1 using the resulting cDNA as a template. The TaqMan® Gene used for quantitative PCR was Claudin-5: Mm00727012_s1, GAPDH: Mm99999915_g1. The expression level of the Claudin-5 gene was corrected with the expression level of the GAPDH gene. Based on the measured expression levels, relative expression levels were determined for each group, with the average value for the control diet group being set to 1.
（結果）
結果を表３に示す。クロロゲン酸類を含む餌を摂取したクロロゲン酸類食群の大脳皮質及び海馬では、血液脳関門のタイトジャンクションタンパク質であるＣｌａｕｄｉｎ－５の発現が遺伝子レベルで上昇した。このことから、クロロゲン酸類が、健常マウスの脳内のＣｌａｕｄｉｎ－５の発現を上昇させ、血液脳関門を保護する作用を有することが示された。
(result)
Table 3 shows the results. In the cerebral cortex and hippocampus of the chlorogenic acid diet group, the expression of Claudin-5, a blood-brain barrier tight junction protein, increased at the gene level. This indicates that chlorogenic acids have the effect of increasing the expression of Claudin-5 in the brain of healthy mice and protecting the blood-brain barrier.
試験例３ 老化促進モデルマウスでのクロロゲン酸類摂取によるＣｌａｕｄｉｎ－５発現上昇とＨＭＧＢ１発現抑制
（動物）
試験には老化促進モデルマウスＳＡＭＰ８（雄、１２週齢）及びその対照（正常老化）マウスＳＡＭＲ１（雄、１２週齢）（日本エスエルシー）を用いた。マウスは室温２２±２℃、湿度５５±１０％、照明１２時間サイクル（７：００ａ．ｍ．～７：００ｐ．ｍ．）で飼育し、餌及び水は自由摂取とした。
Test Example 3 Upregulation of Claudin-5 Expression and Suppression of HMGB1 Expression by Ingestion of Chlorogenic Acids in Accelerated Aging Model Mice (Animals)
The accelerated aging model mouse SAMP8 (male, 12 weeks old) and its control (normal aging) mouse SAMR1 (male, 12 weeks old) (Japan SLC) were used in the test. The mice were kept at a room temperature of 22±2° C., humidity of 55±10%, and a lighting cycle of 12 hours (7:00 am to 7:00 pm), and were given food and water ad libitum.
（方法）
試験期間中、動物を（I）ＳＡＭＰ８対照食群、（II）ＳＡＭＰ８クロロゲン酸類１％食群、及び（III）ＳＡＭＰ８ ５－カフェオイルキナ酸０．８％食群、（IV）ＳＡＭＲ１対照食群の４群に分け、それぞれに一ヶ月間継続的に以下の餌を与えた。
（I）ＳＡＭＰ８対照食群、及び（IV）ＳＡＭＲ１対照食群：クロロゲン酸類非添加の餌（コーン油１０％、カゼイン２０％、セルロース４％、ミネラル３．５％、ビタミン１％、ポテトスターチ６１．５％）
（II）ＳＡＭＰ８クロロゲン酸類１％食群：クロロゲン酸類を１質量％含む餌（コーン油１０％、カゼイン２０％、セルロース４％、ミネラル３．５％、ビタミン１％、ポテトスターチ５９．５％、製造例１で得たＣＰＰ（表１記載の組成でクロロゲン酸類含有）２％）
（III）ＳＡＭＰ８ ５－カフェオイルキナ酸０．８％食群：クロロゲン酸類を０．８質量％含む餌（コーン油１０％、カゼイン２０％、セルロース４％、ミネラル３．５％、ビタミン１％、ポテトスターチ６０．７％、５－カフェオイルキナ酸（Ｃａｙｍａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ：品番７０９３０）０．８％）
(Method)
During the test period, the animals were divided into (I) SAMP8 control diet group, (II) SAMP8 1% chlorogenic acids diet group, and (III) SAMP8 5-caffeoylquinic acid 0.8% diet group, (IV) SAMR1 control diet group. The rats were divided into four groups, each of which was fed the following food continuously for one month.
(I) SAMP8 control diet group and (IV) SAMR1 control diet group: diet without chlorogenic acids (10% corn oil, 20% casein, 4% cellulose, 3.5% minerals, 1% vitamins, 61% potato starch .5%)
(II) SAMP8 chlorogenic acids 1% diet group: feed containing 1% by mass of chlorogenic acids (10% corn oil, 20% casein, 4% cellulose, 3.5% minerals, 1% vitamins, 59.5% potato starch, CPP obtained in Production Example 1 (containing chlorogenic acids in the composition shown in Table 1) 2%)
(III) SAMP8 5-caffeoylquinic acid 0.8% diet group: feed containing 0.8% by mass of chlorogenic acids (10% corn oil, 20% casein, 4% cellulose, 3.5% minerals, 1% vitamins , potato starch 60.7%, 5-caffeoylquinic acid (Cayman Chemical: product number 70930) 0.8%)
試験期間終了後、試験例１と同様の手順で、マウスの大脳皮質及び海馬から総ＲＮＡを調製してｃＤＮＡを合成し、これを鋳型としてＨＭＧＢ１及びＣｌａｕｄｉｎ－５について定量的ＰＣＲを行った。定量的ＰＣＲに使用したＴａｑＭａｎ（登録商標）Ｇｅｎｅは、ＨＭＧＢ１：Ｍｍ００８４９８０５＿ｇＨ、Ｃｌａｕｄｉｎ－５：Ｍｍ００７２７０１２＿ｓ１、ＧＡＰＤＨ：Ｍｍ９９９９９９１５＿ｇ１であった。ＨＭＧＢ１とＣｌａｕｄｉｎ－５遺伝子の発現量は、ＧＡＰＤＨ遺伝子発現量で補正した。測定した発現量から、ＳＡＭＰ８対照食群の平均値を１とする相対発現量を各群について求めた。 After the test period, total RNA was prepared from mouse cerebral cortex and hippocampus in the same manner as in Test Example 1 to synthesize cDNA, which was then used as a template to perform quantitative PCR for HMGB1 and Claudin-5. The TaqMan® Gene used for quantitative PCR was HMGB1: Mm00849805_gH, Claudin-5: Mm00727012_s1, GAPDH: Mm99999915_g1. The expression levels of HMGB1 and Claudin-5 genes were corrected with the expression level of GAPDH gene. Based on the measured expression levels, relative expression levels were determined for each group, with the average value of the SAMP8 control diet group being set to 1.
（結果）
Ｃｌａｕｄｉｎ－５の発現量を表４に示す。対照食群マウスの大脳皮質におけるＣｌａｕｄｉｎ－５遺伝子発現量は、老化促進モデルマウスＳＡＭＰ８（I群）と比較して正常老化マウスＳＡＭＲ１（IV群）で有意に高値であった。また、クロロゲン酸類１％食群（II群）及び５－カフェオイルキナ酸０．８％食群（III群）の大脳皮質におけるＣｌａｕｄｉｎ－５遺伝子発現量は、ＳＡＭＰ８対照食群（I群）と比較して有意に高値であった。海馬においても、ＳＡＭＰ８クロロゲン酸類１％食群（II群）では、ＳＡＭＰ８対照食群（I群）と比較してＣｌａｕｄｉｎ－５の遺伝子発現量が有意に高値であった。これらの結果から、クロロゲン酸類が、Ｃｌａｕｄｉｎ－５の発現を促進することで老化によるＣｌａｕｄｉｎ－５の発現低下を抑制し、血液脳関門を保護する作用を有することが示された。
(result)
Table 4 shows the expression level of Claudin-5. The level of Claudin-5 gene expression in the cerebral cortex of control diet group mice was significantly higher in normal aged mice SAMR1 (group IV) than in accelerated aging model mice SAMP8 (group I). In addition, the Claudin-5 gene expression level in the cerebral cortex of the chlorogenic acids 1% diet group (II group) and the 5-caffeoylquinic acid 0.8% diet group (III group) was higher than that of the SAMP8 control diet group (I group). It was significantly higher than that. In the hippocampus, the Claudin-5 gene expression level was significantly higher in the SAMP8 chlorogenic acid 1% diet group (II group) than in the SAMP8 control diet group (I group). These results indicate that chlorogenic acids inhibit the decline in Claudin-5 expression due to aging by promoting the expression of Claudin-5, and have the effect of protecting the blood-brain barrier.
ＨＭＧＢ１の発現量を表５に示す。大脳皮質におけるＨＭＧＢ１の遺伝子発現量は、ＳＡＭＰ８対照食群（I群）と比較してＳＡＭＲ１対照食群（IV群）で有意に低かった。またＳＡＭＰ８クロロゲン酸類１％食群（II群）及びＳＡＭＰ８ ５－カフェオイルキナ酸０．８％食群（III群）では、ＳＡＭＰ８対照食群（I群）と比べてＨＭＧＢ１発現量の有意な低下又は低下傾向がみられた。これらの結果から、クロロゲン酸類は老化によるＨＭＧＢ１の遺伝子発現上昇を抑制し、血液脳関門を保護する作用を有することが示された。 Table 5 shows the expression level of HMGB1. The gene expression level of HMGB1 in the cerebral cortex was significantly lower in the SAMR1 control diet group (IV group) than in the SAMP8 control diet group (I group). In addition, in the SAMP8 chlorogenic acids 1% diet group (II group) and the SAMP8 5-caffeoylquinic acid 0.8% diet group (III group), the HMGB1 expression level significantly decreased compared to the SAMP8 control diet group (I group). Or a downward trend was observed. These results indicate that chlorogenic acids have the effect of suppressing the increase in gene expression of HMGB1 due to aging and protecting the blood-brain barrier.
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