JP7093766B2 - 検体検出システム - Google Patents
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Description
このような検体検出方法としては、例えば、試料液に含まれる測定対象物質である抗原と、標識物質で標識された抗体または抗原との抗原抗体反応を利用して、測定対象物質の有無やその量を測定する免疫測定法(イムノアッセイ)が知られている。
例えば、蛍光免疫測定法を利用した検体検出装置としては、ナノメートルレベルなどの微細領域中で電子と光が共鳴することにより、高い光出力を得る現象(表面プラズモン共鳴(SPR:Surface Plasmon Resonance)現象)を応用し、例えば、生体内の極微少なアラナイトの検出を行うようにした表面プラズモン共鳴装置(以下、「SPR装置」とも言う)が挙げられる。
アナライトを捕捉する反応場を内部に有するセンサーチップを用いて、アナライトの検出を行う検体検出システムであって、
前記センサーチップに対して接触して配置される接触式温調ユニットと、
前記センサーチップに対して非接触に配置される非接触式温調ユニットと、を備え、
前記接触式温調ユニットは、第1温調手段と、該第1温調手段と前記センサーチップとの間の温度を測定する第1温度センサーとを備え、前記第1温度センサーの出力値と所定の第1温調手段目標温度とに基づき前記第1温調手段がフィードバック制御され、
前記非接触式温調ユニットは、第2温調手段と、前記第2温調手段と前記センサーチップとの間の温度を測定する第2温度センサーとを備え、前記第2温度センサーの出力値と所定の第2温調手段目標温度とに基づき前記第2温調手段がフィードバック制御される。
図1は、本発明の一実施形態に係る表面プラズモン励起増強蛍光分光測定装置(SPFS装置)の構成を説明するための模式図である。
反応場目標温度Tは、反応場に固定化されたリガンドの種類や、アナライトの種類などによって適宜変更される。反応場目標温度Tは、一般的には、24℃~26℃、もしくは、35℃~37℃に設定することができる。本実施形態において、反応場目標温度Tは36℃である。また、SPFS装置10は室温に設置され、本実施形態において環境温度t3は25℃である。
第1温調手段目標温度T1は、反応場目標温度Tと近い温度に設定することが望ましい。第1温調手段目標温度T1と反応場目標温度Tとの差|T-T1|は、誘電体部材102や伝熱部材61bの材質及び形状などにより、熱伝達の温度勾配を考慮して適宜設定することができる。第1温調手段目標温度T1と反応場目標温度Tとの差|T-T1|を熱伝達の温度勾配程度として、反応場目標温度Tと第1温調手段目標温度T1とを近い温度に設定することで、センサーチップ100が第1温調手段61により過剰に温調されることを防ぎ、反応場を反応場目標温度Tに安定して制御することができる。本実施形態において、第1温調手段目標温度T1は36.5℃であり、第1温調手段目標温度T1と反応場目標温度Tとの差|T-T1|は0.5℃である。
そして制御部80は、送液ユニット40を操作して、流路112内の測定液を排出し、液貯留部材108のウェル108a内の試料液を流路112内に導入する(S180)。流路112内では、抗原抗体反応(1次反応)によって、金属膜104上の反応場にアナライトが捕捉される。
なお、本実施形態では、1次反応(S180)の前に、増強角検出(S150)、光学ブランク値測定(S160)を実施しているが、1次反応(S180)の後に、増強角検出(S150)、光学ブランク値測定(S160)を実施するようにしてもよい。
図4は、本実施形態におけるSPFS装置を用いてセンサーチップの温調を行った際の経過時間と反応場温度との関係を示すグラフである。
この実施例では、下記表1に示す条件でSPFS装置10を動作させ、経過時間と反応場温度を測定した。
実施例1-2及び実施例1-3では、環境温度と反応場目標温度Tとの差が大きいため、検体検出の初期段階である領域1と、2次反応や洗浄など各工程に要する時間が短く、液交換の頻度が高い領域3において、第2温調手段目標温度T2を領域2よりも高く設定している。
領域1では、a=0,b=-0.15,c=41.5
領域3では、a=-0.01,b=0.2,c=40となる条件で第2温調手段目標温度T2を設定し、制御している。
図5は、比較例1として、センサーチップの温調を行った際の経過時間と反応場温度との関係を示すグラフである。
この比較例1で使用したSPFS装置は、上記実施形態におけるSPFS装置10と同一の装置構成であり、下記表2に示すように、各工程における第2温調手段目標温度T2を変更せずに温調を行っている。また、第2温調手段目標温度T2の設定値は、最も厳密な温度制御が必要な領域3において、反応場が反応場目標温度Tとなる値に設定した。
比較例1-2、比較例1-3では、第2温調手段目標温度T2が反応場目標温度Tよりも比較的高い値であるため、反応時間が長い1次反応中(領域2)において、非接触式温調ユニット70による過度な加熱となり、反応場の温度が反応場目標温度Tよりも高くなりすぎてしまった。
図6は、比較例2として、センサーチップの温調を行った際の経過時間と反応場温度との関係を示すグラフである。
この比較例2で使用したSPFS装置は、上記実施形態におけるSPFS装置10と同一の装置構成であり、下記表3に示すように、環境温度によらず、第2温調手段目標温度T2を一定として温調を行っている。
比較例2-2、比較例2-3では、反応場目標温度Tと比較して環境温度が低いため、比較例2-1に比べて各領域での昇温速度が遅く、2次反応中(領域3)の反応場の温度は、反応場目標温度Tに達していない。
図7は、比較例3として、センサーチップの温調を行った際の経過時間と反応場温度との関係を示すグラフである。
この比較例3で使用したSPFS装置は、上記実施形態におけるSPFS装置10と同一の装置構成であり、下記表4に示すように、非接触式温調ユニット70を動作させずに、接触式温調ユニット60のみで温調を行っている。
図8は、接触式温調ユニットの変形例を示す模式図である。図8に示す接触式温調ユニット60は、基本的には、図1に示す接触式温調ユニット60と同様な構成であるため、同一の構成部材には同一の符号を付して、その詳細な説明を省略する。
また、図示しないが、伝熱部材61bを用いず、誘電体部材102の下面102dに温調素子61aを接触するように構成することもできる。
図9は、非接触式温調ユニットの変形例を示す模式図である。図9に示す非接触式温調ユニット70は、基本的には、図1に示す非接触式温調ユニット70と同様な構成であるため、同一の構成部材には同一の符号を付して、その詳細な説明を省略する。
このように、ピペットチップ45、ピペットチップ45内に採取された液体、センサーチップ100を同時に加熱または冷却することにより、反応場の温度を迅速に反応場目標温度Tに近づけ、かつ、反応場目標温度Tに維持することが容易となる。
図10は、センサーチップの変形例を示す模式図である。図10に示すセンサーチップ100は、基本的には、図1に示すセンサーチップ100と同様な構成であるため、同一の構成部材には同一の符号を付して、その詳細な説明を省略する。
12 筐体
13a 吸気口
13b 排気口
14 ファン
15 第3温度センサー
20 励起光照射ユニット
21 光源ユニット
22 角度調整機構
23 光源制御部
30 蛍光検出ユニット
31 受光ユニット
32 レンズ
33 光学フィルター
34 レンズ
35 受光センサー
37 位置切替機構
38 センサー制御部
40 送液ユニット
41 シリンジポンプ
42 シリンジ
43 プランジャー
44 送液ポンプ駆動機構
45 ピペットチップ
46 ピペットノズル
50 搬送ユニット
52 搬送ステージ
54 チップホルダー
60 接触式温調ユニット
61 第1温調手段
61a 温調素子
61b 伝熱部材
61b' 孔部
62 第1温度センサー
70 非接触式温調ユニット
71 第2温調手段
72 第2温度センサー
73 送風手段
74 シリンジ用筐体
74a シリンジ用孔
80 制御部
100 センサーチップ
102 誘電体部材
102a 入射面
102b 成膜面
102c 出射面
102d 下面
104 金属膜
106 流路形成部材
106a 上面
106b 側面
106c 下面
107 ウェル部材
107a ウェル
108 液貯留部材
108a ウェル
110 流路溝
110a 第1貫通孔
110b 第2貫通孔
111 多層フィルム
112 流路
Claims (6)
- アナライトを捕捉する反応場を内部に有するセンサーチップを用いて、アナライトの検出を行う検体検出システムであって、
前記センサーチップに対して接触して配置される接触式温調ユニットと、
前記センサーチップに対して非接触に配置される非接触式温調ユニットと、を備え、
前記接触式温調ユニットは、第1温調手段と、該第1温調手段と前記センサーチップとの間の温度を測定する第1温度センサーとを備え、前記第1温度センサーの出力値と所定の第1温調手段目標温度とに基づき前記第1温調手段がフィードバック制御され、
前記非接触式温調ユニットは、第2温調手段と、該第2温調手段と前記センサーチップとの間の温度を測定する第2温度センサーとを備え、前記第2温度センサーの出力値と所定の第2温調手段目標温度とに基づき前記第2温調手段がフィードバック制御され、
前記検体検出システムが設置される環境の温度が測定される第3温度センサーをさらに備え、
前記第3温度センサーの出力値に基づき、前記第2温調手段目標温度が設定され、
前記第3温度センサーで測定された温度t3と、前記第2温調手段目標温度T2とが、下記式(1)となるように設定される検体検出システム。
- 前記検体検出システムが、複数の工程からなる検体検出手順を実行するように構成され、
前記第2温調手段目標温度T2は、各工程において変更可能である請求項1または2に記載の検体検出システム。 - 前記センサーチップに液体を導入する時間が短い工程ほど、前記反応場の目標温度Tと前記第2温調手段目標温度T2との差|T-T2|が大きくなるように、前記第2温調手段目標温度T2が設定される請求項3に記載の検体検出システム。
- 前記センサーチップに液体を導入する送液ユニットをさらに備え、
前記送液ユニットは、前記液体を採取して、前記センサーチップに該液体を供給するノズル及びシリンジポンプを少なくとも含み、
前記非接触式温調ユニットは、内部に液体を吸排する前記ノズルの加熱または冷却を行う請求項1から4のいずれかに記載の検体検出システム。 - 前記センサーチップが、
誘電体部材と、
前記誘電体部材の上面に隣接する金属膜と、
前記金属膜の上面に隣接する反応場と、
前記反応場の上面に配置される液保持部材と、を備えるとともに、
前記検体検出システムが、
前記金属膜に前記誘電体部材を介して励起光を照射する励起光照射ユニットと、
前記金属膜に照射された励起光に基づき、前記反応場に捕捉された蛍光標識された前記アナライトから生じる蛍光を検出する蛍光検出ユニットと、を備える請求項1から5のいずれかに記載の検体検出システム。
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