JP6876764B2 - Detection or quantification method, resonant additive, resonant structure usage and container - Google Patents
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Description
本発明は、検出又は定量方法、共振性添加剤、共振性構造体の使用方法及び容器に関する。 The present invention relates to detection or quantification methods, resonant additives, methods of using resonant structures and containers.
従来から、被検体中の検出対象を検出する方法として、ラテックス凝集法が行われてきた。ラテックス凝集法とは、例えば、生体試料等の流体中における抗原を検出する場合、流体と、抗原に特異的に結合する抗体もしくはそのフラグメントを担持させたラテックスとを混合して、ラテックスの凝集の程度を測定することにより、抗原を検出又は定量する方法である（例えば、特許文献１参照）。 Conventionally, a latex agglutination method has been performed as a method for detecting a detection target in a subject. In the latex agglutination method, for example, when an antigen is detected in a fluid such as a biological sample, the fluid is mixed with an antibody that specifically binds to the antigen or a latex carrying a fragment thereof to aggregate the latex. It is a method of detecting or quantifying an antigen by measuring the degree (see, for example, Patent Document 1).
このラテックス凝集法によれば、検体として添加された抗原が複数のラテックス結合抗体を架橋させ、ラテックスの凝集を促す。しかし、抗原が微量の場合、その架橋が起こりにくいため、ラテックスが十分に凝集せず、凝集しても検出感度以下となって検出できない。このため、微量の抗原を迅速に検出することが困難であった。 According to this latex agglutination method, the antigen added as a sample crosslinks a plurality of latex-binding antibodies and promotes latex agglutination. However, when the amount of the antigen is very small, the cross-linking is unlikely to occur, so that the latex does not sufficiently aggregate, and even if it aggregates, the detection sensitivity becomes lower than the detection sensitivity. Therefore, it has been difficult to quickly detect a trace amount of antigen.
そこで、ＥＬＩＳＡ法やＣＬＥＩＡ法といった酵素基質反応を利用する方法も広く採用されている。これらの方法では、例えば、抗原に特異的に結合する一次抗体を抗原に結合させ、この一次抗体に酵素を有する二次抗体を結合させる。ここで、酵素の基質を添加し、酵素が触媒する反応の程度を測定することで、抗原を検出又は定量する。これらの方法によれば、例えば基質として発色試薬又は発光試薬を用いると、基質添加後の発色又は発光の検出感度が高い。 Therefore, a method using an enzyme substrate reaction such as an ELISA method or a CLEIA method is also widely adopted. In these methods, for example, a primary antibody that specifically binds to an antigen is bound to the antigen, and a secondary antibody having an enzyme is bound to this primary antibody. Here, the substrate of the enzyme is added, and the degree of the reaction catalyzed by the enzyme is measured to detect or quantify the antigen. According to these methods, for example, when a color-developing reagent or a luminescent reagent is used as the substrate, the detection sensitivity of color-developing or luminescence after the addition of the substrate is high.
検体と試薬とを反応させるための撹拌の時間を短縮するため、検体と試薬とを含む液体試料に、共振周波数帯内の音波を放射させて音響流を生じさせる撹拌装置が提案されている（例えば、特許文献２参照）。しかし、この音波は、反応容器の壁面に取り付けられた発音部から生じ、容器内の液体試料の全体を撹拌すべく、数ＭＨｚ〜数百ＭＨｚ程度の高周波を要する。そのため、蛋白質等の測定対象が熱変性するおそれがある。蛋白質の熱変性等の、液体試料に対するダメージを最小限にするためには、音波発生時間を瞬時に抑える必要があり、撹拌が不十分となるおそれもあった。 In order to shorten the stirring time for reacting the sample and the reagent, a stirring device has been proposed in which a liquid sample containing the sample and the reagent is radiated with sound waves in the resonance frequency band to generate an acoustic flow ( For example, see Patent Document 2). However, this sound wave is generated from a sounding portion attached to the wall surface of the reaction vessel, and requires a high frequency of about several MHz to several hundred MHz in order to agitate the entire liquid sample in the vessel. Therefore, the measurement target of protein or the like may be thermally denatured. In order to minimize damage to the liquid sample such as heat denaturation of protein, it is necessary to instantly suppress the sound wave generation time, and there is a possibility that stirring may be insufficient.
また、ＥＬＩＳＡ法において、チップ・コーン内壁に固相化した捕獲抗体と、検体中の抗原との接触を迅速に行うため、共振を利用することが提案されている（例えば、特許文献３参照）。しかし、この共振も溶液全体に生じさせるものである。また、共振を起こす周波数で、チップ・コーン内において、これに対面するウェル内の試薬等を吸入／排出動作を行う必要があり、特別な装置を要する。 Further, in the ELISA method, it has been proposed to utilize resonance in order to rapidly contact the captured antibody immobilized on the inner wall of the chip cone with the antigen in the sample (see, for example, Patent Document 3). .. However, this resonance also occurs in the entire solution. Further, it is necessary to perform an suction / discharge operation of a reagent or the like in a well facing the chip cone at a frequency at which resonance occurs, which requires a special device.
本発明は、以上の実情に鑑みてなされたものであり、蛋白質の熱変性等の、検体に対するダメージを起こすことなく、抗原抗体反応等における結合、凝集等を促進することを目的とする。 The present invention has been made in view of the above circumstances, and an object of the present invention is to promote binding, aggregation, etc. in an antigen-antibody reaction, etc., without causing damage to a sample such as heat denaturation of a protein.
本発明者らは、結合、凝集等が行われる反応場において、分散媒又は溶媒ではなく分散質である構造体を共振させることにより、振動による反応物質の接触機会を増やすことができ、その結果、結合、凝集等を促進することができることを見出し、本発明を完成するに至った。具体的には、本発明は以下のようである。 By resonating a structure that is a dispersoid rather than a dispersion medium or solvent in a reaction field where bonding, agglomeration, etc. are performed, the present inventors can increase the contact opportunity of the reactants by vibration, and as a result. , Bonding, aggregation and the like can be promoted, and the present invention has been completed. Specifically, the present invention is as follows.
［１］検体中の検出対象を検出又は定量する方法であって、
前記検出対象に対する第１の親和性物質と、共振性構造体と、前記検体とを混合し、
前記共振性構造体に固有の振動数の波動の付与により前記共振性構造体を共振させ、
前記第１の親和性物質と前記検出対象とを含む複合体について判定を行う工程を含む、方法。
［２］前記第１の親和性物質と、前記共振性構造体と、前記検体と、更に、前記検出対象に対する第２の親和性物質とを混合し、
前記第１の親和性物質及び前記第２の親和性物質は、前記検出対象の異なる部位において、同時に前記検出対象に結合できるものである、［１］に記載の方法。
［３］前記第１の親和性物質又は前記第２の親和性物質は、標識用酵素と結合しており、
前記方法は、前記判定を行う前又は前記判定を行う際に、前記複合体に存在する前記標識用酵素とその基質とを反応させることを更に含む、［２］に記載の方法。
［４］前記共振性構造体は、単一物質による中実粒子、中空部分の一部に構造物を有していてもよい中空粒子、及び、金属と有機ポリマーとからなる複合粒子からなる群より選択される少なくとも１種以上の粒子である、［１］〜［３］の何れか１項に記載の方法。
［５］前記共振性構造体は、平均粒子径が０・００１〜５００μｍである、［１］〜［４］の何れか１項に記載の方法。
［６］物質Ａと、前記物質Ａに対する親和性物質とを相互作用させる方法であって、
前記物質Ａと前記親和性物質と共振性構造体とを混合し、
前記共振性構造体に固有の振動数の波動の付与により前記共振性構造体を共振させる工程を含む、方法。
［７］検出対象を検出及び／又は定量するための試験液に添加するための共振性添加剤であって、
前記試験液は、前記検出対象に対する第１の親和性物質を含み、
前記共振性添加剤は、固有の振動数の波動の付与により共振する共振性構造体を有している、共振性添加剤。
［８］検出対象を検出及び／又は定量するための試験液に添加して、固有の振動数の波動の付与により共振させる、共振性構造体の使用方法であって、
前記試験液は、前記検出対象に対する第１の親和性物質を含む、使用方法。
［９］検出対象を検出及び／又は定量するための容器であって、
前記容器は、固有の振動数の波動の付与により共振する共振体を含む、容器。
［１０］前記共振体は、検出及び／又は定量のための透過光を遮断しない箇所にある、［９］に記載の容器。
［１１］物質Ａと、前記物質Ａに対する親和性物質とを相互作用させる方法であって、
前記物質Ａ及び前記親和性物質は、［９］又は［１０］に記載の容器に保持された流体に存在しており、
前記容器に含まれる共振体を前記共振体に固有の振動数の波動の付与により共振させる工程を含む、方法。
[1] A method for detecting or quantifying a detection target in a sample.
The first affinity substance for the detection target, the resonant structure, and the sample are mixed.
The resonant structure is resonated by applying a wave of a frequency peculiar to the resonant structure.
A method comprising a step of determining a complex containing the first affinity substance and the detection target.
[2] The first affinity substance, the resonant structure, the sample, and the second affinity substance for the detection target are mixed.
The method according to [1], wherein the first affinity substance and the second affinity substance can simultaneously bind to the detection target at different sites of the detection target.
[3] The first affinity substance or the second affinity substance is bound to a labeling enzyme and is bound to the labeling enzyme.
The method according to [2], further comprising reacting the labeling enzyme present in the complex with a substrate thereof before or when making the determination.
[4] The resonant structure is a group consisting of solid particles made of a single substance, hollow particles which may have a structure in a part of a hollow portion, and composite particles composed of a metal and an organic polymer. The method according to any one of [1] to [3], which is at least one or more particles selected from the above.
[5] The method according to any one of [1] to [4], wherein the resonant structure has an average particle size of 0.001 to 500 μm.
[6] A method of interacting a substance A with a substance having an affinity for the substance A.
The substance A, the affinity substance, and the resonant structure are mixed, and the substance A is mixed.
A method comprising the step of resonating the resonant structure by applying a wave of a frequency peculiar to the resonant structure.
[7] A resonant additive to be added to a test solution for detecting and / or quantifying a detection target.
The test solution contains a first affinity substance for the detection target, and contains the test solution.
The resonant additive is a resonant additive having a resonant structure that resonates by applying a wave of a unique frequency.
[8] A method of using a resonant structure, which is added to a test solution for detecting and / or quantifying a detection target and resonated by applying a wave of a specific frequency.
The method of use, wherein the test solution contains a first affinity substance for the detection target.
[9] A container for detecting and / or quantifying a detection target.
The container is a container containing a resonator that resonates by applying a wave of a unique frequency.
[10] The container according to [9], wherein the resonator is located at a position where it does not block transmitted light for detection and / or quantification.
[11] A method of interacting a substance A with a substance having an affinity for the substance A.
The substance A and the affinity substance are present in the fluid held in the container according to [9] or [10].
A method comprising a step of resonating a resonator contained in the container by applying a wave having a frequency peculiar to the resonator.
本明細書において、「第１の親和性物質」及び「第２の親和性物質」を総称して「親和性物質」ということがある。また、後述する「本発明の第１の検出又は定量方法」及び「本発明の第２の検出又は定量方法」を総称して「本発明の検出又は定量方法」ということがある。 In the present specification, the "first affinity substance" and the "second affinity substance" may be collectively referred to as "affinity substance". In addition, the "first detection or quantification method of the present invention" and the "second detection or quantification method of the present invention" described later may be collectively referred to as the "detection or quantification method of the present invention".
本発明によれば、検出対象と、検出対象に対する親和性物質との反応場において、共振性構造体を存在させて共振させることにより、反応場に振動が伝達し、ひいては、反応場に存在する親和性物質にも振動が伝達する。反応場に検出対象が存在すれば、検出対象にも振動が伝達する。これらの振動により、検出対象と親和性物質との接触機会を増やすことができる。その結果、検出対象と親和性物質との結合が促進される。かかる結合の促進により、検出対象と親和性物質とを含む複合体が容易に形成され、この複合体の凝集も促進される。 According to the present invention, in the reaction field between the detection target and the substance having an affinity for the detection target, the vibration is transmitted to the reaction field by causing the resonance structure to exist and resonate, and thus exists in the reaction field. Vibration is also transmitted to the affinity substance. If there is a detection target in the reaction field, vibration is transmitted to the detection target as well. These vibrations can increase the chances of contact between the detection target and the affinity substance. As a result, the binding between the detection target and the affinity substance is promoted. By promoting such binding, a complex containing the detection target and the affinity substance is easily formed, and aggregation of this complex is also promoted.
また、本発明によれば、共振性構造体を共振させるために付与する波動は、低エネルギーで済む。従って、蛋白質の熱変性等の、検体に対するダメージを起こすことがない。また、低エネルギーの波動の付与でよいため、従来の共振による撹拌法よりも、波動を比較的長時間付与することもできるので、結合、凝集等の促進に十分な振動を与えることができる。 Further, according to the present invention, the wave motion applied to resonate the resonant structure requires low energy. Therefore, it does not cause damage to the sample such as heat denaturation of protein. Further, since it is sufficient to apply a low-energy wave, the wave can be applied for a relatively long time as compared with the conventional stirring method by resonance, so that sufficient vibration can be applied to promote coupling, aggregation, and the like.
従って、本発明によれば、検出対象がごく微量であっても、検出精度を高めることができる。また、結合、凝集等の時間の短縮を図ることができる。更に、非常に狭い反応場であっても結合、凝集等を促進することができるので、従来のセル、ウェル等のみならず、例えば、マイクロ化学プロセス、マイクロ流路、マイクロリアクター等における反応等にも利用することができる。
本発明は、抗原抗体反応を利用する、生体試料等の検体における検出対象の検出及び定量に好適である。
Therefore, according to the present invention, the detection accuracy can be improved even if the detection target is a very small amount. In addition, the time for binding, agglomeration, etc. can be shortened. Furthermore, since binding, aggregation, etc. can be promoted even in a very narrow reaction field, not only conventional cells, wells, etc., but also reactions in, for example, microchemical processes, microchannels, microreactors, etc. Can also be used.
The present invention is suitable for detecting and quantifying a detection target in a sample such as a biological sample using an antigen-antibody reaction.
以下、本発明の実施形態について、説明する。 Hereinafter, embodiments of the present invention will be described.
＜検出又は定量する方法＞
本発明の検出又は定量する方法は、検体と、少なくとも第１の親和性物質と共振性構造体とを混合し、共振性構造体に固有の振動数（本明細書において、「固有振動数」ということがある。）の波動の付与により、共振性構造体を共振させ、第１の親和性物質と検出対象とを含む複合体について判定を行う工程を含む。
本発明において、共振性構造体は、第１の親和性物質と分離したものである。
<Method of detection or quantification>
In the method for detecting or quantifying the present invention, a sample is mixed with at least the first affinity substance and the resonant structure, and the frequency inherent in the resonant structure (in the present specification, "natural frequency"). This includes a step of resonating the resonant structure by applying the wave motion of () and determining the complex containing the first affinity substance and the detection target.
In the present invention, the resonant structure is separated from the first affinity substance.
本明細書において、「結合する」、「結合している」等の用語は、特に別の記載をしない限り、原則として、直接若しくは間接的に結合すること又はその状態を含む。本明細書において、例えばＡとＢとについて、「直接結合する」、「直接結合している」等の用語は、ＡとＢとが間に何も介在させることなく結合すること又はその状態を意味する。また、本明細書において、例えばＡとＢとについて、「間接的に結合する」、「間接的に結合している」等の用語は、ＡとＢとが間に他の分子等を介在して結合すること又はその状態を意味する。 In the present specification, terms such as "combined" and "combined" include, in principle, directly or indirectly combining or a state thereof, unless otherwise specified. In the present specification, for example, with respect to A and B, terms such as "directly coupled" and "directly coupled" refer to the fact that A and B are coupled without any intervention or a state thereof. means. Further, in the present specification, for example, with respect to A and B, terms such as "indirectly bound" and "indirectly bound" include other molecules or the like between A and B. Means that they are combined or their state.
（共振性構造体）
本発明において、共振性構造体は、共振性構造体に固有の振動数の波動の付与により共振するものであれば特に限定されず、例えば、単一物質による中実粒子であってもよく、本明細書において、「中実粒子」は、中身の詰まった粒子である。中実粒子は、後述の中空粒子における中空部分を有さないことが好ましい。共振性構造体は、また、シェル部分と該シェル部分に囲まれた中空部分とからなる中空粒子、金属と有機ポリマーとからなる複合粒子等であってもよい。前者の中空粒子としては、例えば、ポリスチレン等の有機ポリマーからなるもの等が挙げられ、構造としては、例えば、中空部分の一部に棒状、メッシュ状等の構造物を有していてもよい。後者の複合粒子としては、例えば、鉄等の金属とポリスチレン等の有機ポリマーとからなるもの等が挙げられ、構造としては、例えば、金属からなる粒子に有機ポリマーからなるコーティングを施した構造、金属からなるコア部分と該コア部分を包囲し有機ポリマーからなるシェル部分とからなるコアシェル構造、その他の、有機ポリマーからなる粒子の一部分が金属に代わった構造に相当する構造、等が挙げられ、また、前者の有機ポリマーからなる中空粒子と、その中空部分の一部に存在する棒状、メッシュ状等の構造物が金属からなる複合粒子等であってもよい。
(Resonant structure)
In the present invention, the resonant structure is not particularly limited as long as it resonates by applying a wave of a frequency peculiar to the resonant structure, and may be, for example, a solid particle made of a single substance. As used herein, a "solid particle" is a solid particle. It is preferable that the solid particles do not have a hollow portion in the hollow particles described later. The resonant structure may also be hollow particles composed of a shell portion and a hollow portion surrounded by the shell portion, composite particles composed of a metal and an organic polymer, and the like. Examples of the former hollow particles include those made of an organic polymer such as polystyrene, and as the structure, for example, a rod-shaped or mesh-shaped structure may be provided in a part of the hollow portion. Examples of the latter composite particles include those composed of a metal such as iron and an organic polymer such as polystyrene, and examples of the structure include a structure in which particles made of metal are coated with an organic polymer and a metal. A core-shell structure composed of a core portion composed of a core portion and a shell portion composed of an organic polymer surrounding the core portion, and other structures corresponding to a structure in which a part of particles made of an organic polymer is replaced with a metal, and the like can be mentioned. The former hollow particles made of an organic polymer and composite particles in which a rod-shaped or mesh-shaped structure existing in a part of the hollow portion is made of a metal may be used.
本発明において、共振性構造体は、必ずしも球形又は球に準じる形状である必要はなく、多様な形態を有することができる。
共振性構造体は、例えば上述のように、構造体であるので、共振性構造体に固有の周波数の波動を付与することにより、共振し、共振による振動を反応場に連続的に伝達することができる。
In the present invention, the resonant structure does not necessarily have to be spherical or have a shape similar to a sphere, and can have various forms.
Since the resonant structure is, for example, as described above, it resonates by applying a wave of a frequency peculiar to the resonant structure, and the vibration due to the resonance is continuously transmitted to the reaction field. Can be done.
共振性構造体の平均粒子径の下限は、好ましくは０．００１μｍ、より好ましくは０．０１μｍ、更に好ましくは０．０５μｍ、更により好ましくは２０μｍであり、上限は、好ましくは５００μｍ、より好ましくは４００μｍ、更に好ましくは３００μｍ、更により好ましくは２８０μｍである。
本発明における共振性構造体は、上記数値範囲内の平均粒子径を有し、通常、親和性物質の平均粒子径が無視できる程度に大きいので、共振性構造体に固有の振動数の波動を付与することに対するエネルギー効率がよく、比較的低エネルギーの波動の付与によっても共振を起こすことができる。
The lower limit of the average particle size of the resonant structure is preferably 0.001 μm, more preferably 0.01 μm, even more preferably 0.05 μm, even more preferably 20 μm, and the upper limit is preferably 500 μm, more preferably. It is 400 μm, more preferably 300 μm, and even more preferably 280 μm.
The resonant structure in the present invention has an average particle diameter within the above numerical range, and usually, the average particle diameter of the affinity substance is so large that it can be ignored. The energy efficiency of the application is good, and resonance can be caused by the application of relatively low-energy waves.
共振性構造体は、上記のように比較的大きいので、沈降して反応場に振動を伝達できなくなることを防止するため、比重が小さいものが好ましい。共振性構造体は、低比重化の点で、上述のように、中空部分を有する構造、また、金属部分を有していても有機ポリマー部分をも有する複合構造が好ましく、共振による振動を反応場に伝達できる範囲であれば、前者の中空構造の場合、シェル部分が薄い方がより好ましく、後者の複合構造の場合、金属部分に対する有機ポリマー部分が多い方がより好ましい。 Since the resonant structure is relatively large as described above, it is preferable that the resonant structure has a small specific gravity in order to prevent it from settling and unable to transmit vibration to the reaction field. As described above, the resonant structure preferably has a hollow portion or a composite structure having a metal portion but also an organic polymer portion, and reacts to vibration due to resonance, as described above, in terms of low specific gravity. In the case of the former hollow structure, it is more preferable that the shell portion is thin, and in the case of the latter composite structure, it is more preferable that the organic polymer portion is larger than that of the metal portion, as long as it can be transmitted to the field.
本発明において、共振性構造体は、第１の親和性物質と結合しておらず、好ましくは、何にも係留されることなく独立して反応場に存在する。共振性構造体は、独立して反応場に散在することとなるので、共振により反応場に広く振動を伝達しやすく、反応場における検出対象と親和性物質との接触機会を増大することができる。 In the present invention, the resonant structure is not bound to the first affinity substance and preferably exists independently in the reaction field without being anchored to anything. Since the resonant structure is independently scattered in the reaction field, it is easy to widely transmit vibration to the reaction field by resonance, and it is possible to increase the contact opportunity between the detection target and the affinity substance in the reaction field. ..
共振性構造体としては、１種のみを用いてもよいし、２種以上を用いてもよい。 以上のように、検出対象と第１の親和性物質との接触の機会、また、更に後述の第２の親和性物質を含む場合、検出対象と第１の親和性物質と第２の親和性物質との接触の機会が増大され、相互間の結合を促進することができる。 As the resonant structure, only one type may be used, or two or more types may be used. As described above, the opportunity of contact between the detection target and the first affinity substance, and when the second affinity substance described later is included, the detection target and the first affinity substance and the second affinity Opportunities for contact with substances can be increased and binding between each other can be promoted.
（親和性物質）
第１の親和性物質は、固相と結合していることが好ましい。固相としては、特に限定されず、多様な形態であってよく、例えば、ラテックス粒子、磁気粒子、ビーズ、膜、マイクロタイターウェル等のウェル、スライド材、プレート、微小加工チップ、ペレット、ディスク、毛細管、中空繊維、針、固体繊維等が挙げられる。ビーズとしては、例えば、セルロース・ビーズ、気孔質ガラス・ビーズ、シリカ・ゲル、ジビニルベンゼンにより随意的に架橋されている低架橋度及び高架橋度ポリスチレン・ビーズ、グラフト化コ−ポリ・ビーズ、ポリ−アクリルアミド・ビーズ、ラテックス・ビーズ、Ｎ，Ｎ−ビス−アクリロイル・エチレン・ジアミンにより随意的に架橋されているジメチルアクリルアミド・ビーズ、及び疎水性ポリマーにより被覆されているガラス粒子等が挙げられ、また、アルカンチオレート誘導した金、ポリアミド、アクリル・コポリマー、ナイロン、デキストラン、ポリアクロレイン等を含む多様な組成物を含むものであってもよく、低架橋度及び高架橋度ポリスチレン・ビーズ等ポリスチレン・ビーズ、ポリ−アクリルアミド・ビーズが好ましく、ポリスチレン・ビーズがより好ましい。
(Affinity substance)
The first affinity substance is preferably bound to the solid phase. The solid phase is not particularly limited and may have various forms, for example, wells such as latex particles, magnetic particles, beads, films, microtiter wells, slide materials, plates, micromachined chips, pellets, disks, and the like. Capillaries, hollow fibers, needles, solid fibers and the like can be mentioned. Examples of the beads include cellulose beads, pore glass beads, silica gel, polystyrene beads having a low degree of cross-linking and a high degree of cross-linking optionally cross-linked by divinylbenzene, grafted co-poly beads, and poly-. Examples include acrylamide beads, latex beads, dimethylacrylamide beads optionally crosslinked with N, N-bis-acryloyl ethylene diamine, glass particles coated with a hydrophobic polymer, and the like. It may contain various compositions including alcantiolate-derived gold, polyamide, acrylic copolymer, nylon, dextran, polyacrolein and the like, and may contain polystyrene beads such as low-crosslinking and high-crosslinking polystyrene beads, poly. -Acrylamide beads are preferred, polystyrene beads are more preferred.
本明細書において、第１の親和性物質と、少なくとも固相とが結合している結合体を、第１の結合物ということがある。
本明細書において、後述する第２の親和性物質を用いない本発明の検出又は定量方法を、本発明の第１の検出又は定量方法ということがある。
本発明の第１の検出又は定量方法は、ラテックス凝集法に好適である。
In the present specification, a conjugate in which a first affinity substance and at least a solid phase are bonded may be referred to as a first conjugate.
In the present specification, the detection or quantification method of the present invention without using the second affinity substance described later may be referred to as the first detection or quantification method of the present invention.
The first detection or quantification method of the present invention is suitable for the latex agglutination method.
本発明の検出又は定量方法は、更に、検出対象に対する第２の親和性物質を用いるものであってもよい。
第１の親和性物質及び第２の親和性物質は、検出対象の異なる部位において、同時に検出対象に結合できるものである。
本明細書において、第２の親和性物質を用いる本発明の検出又は定量方法を、本発明の第２の検出又は定量方法ということがある。
The detection or quantification method of the present invention may further use a second affinity substance for the detection target.
The first affinity substance and the second affinity substance can bind to the detection target at the same time at different sites of the detection target.
In the present specification, the detection or quantification method of the present invention using the second affinity substance may be referred to as the second detection or quantification method of the present invention.
第１の親和性物質及び第２の親和性物質は、例えば、検出対象が抗原である場合、抗体であってよい。
ここで用いる抗体は、いかなるタイプの免疫グロブリン分子であってもよく、Ｆａｂ等の抗原結合部位を有する免疫グロブリン分子断片であってもよい。また、抗体は、モノクローナル抗体でもポリクローナル抗体でもよいが、抗原の異なる抗原決定基を認識するモノクローナル抗体であることが好ましい。
本発明の第２の検出又は定量方法において、第１の親和性物質及び第２の親和性物質は、検出対象である１種類の抗原について、異なる抗原認識部位を有する２種類のモノクローナル抗体であることが好ましい。
The first affinity substance and the second affinity substance may be, for example, an antibody when the detection target is an antigen.
The antibody used here may be any type of immunoglobulin molecule, or may be an immunoglobulin molecule fragment having an antigen-binding site such as Fab. The antibody may be a monoclonal antibody or a polyclonal antibody, but is preferably a monoclonal antibody that recognizes antigenic determinants having different antigens.
In the second detection or quantification method of the present invention, the first affinity substance and the second affinity substance are two kinds of monoclonal antibodies having different antigen recognition sites for one kind of antigen to be detected. Is preferable.
検出対象が抗体である場合、第１の親和性物質は、この抗体が認識する抗原決定基を有する抗原であってよい。本発明の第２の検出又は定量方法において、第２の親和性物質は、通常、検出対象である抗体に結合し得る第２の抗体である。 When the detection target is an antibody, the first affinity substance may be an antigen having an antigenic determinant recognized by this antibody. In the second detection or quantification method of the present invention, the second affinity substance is usually a second antibody capable of binding to the antibody to be detected.
（標識用酵素）
本発明の第２の検出又は定量方法において、第１の親和性物質又は第２の親和性物質は、標識用酵素と結合していてもよい。標識用酵素としては、ＥＬＩＳＡ法やＣＬＥＩＡ法といった酵素基質反応を利用する方法において使用されるもの等が挙げられ、具体的には、アルカリホスファターゼ、ホースラディッシュペルオキシダーゼ等が挙げられる。
標識用酵素は、第１の親和性物質又は第２の親和性物質に直接結合してよく、第１の親和性物質が固相と結合している場合、好ましくは第２の親和性物質に直接結合している。
(Enzyme for labeling)
In the second detection or quantification method of the present invention, the first affinity substance or the second affinity substance may be bound to the labeling enzyme. Examples of the labeling enzyme include those used in a method utilizing an enzyme substrate reaction such as an ELISA method and a CLEIA method, and specific examples thereof include alkaline phosphatase and horseradish peroxidase.
The labeling enzyme may bind directly to the first affinity substance or the second affinity substance, and when the first affinity substance is bound to the solid phase, it is preferably attached to the second affinity substance. It is directly connected.
（磁性物質）
本発明の第２の検出又は定量方法において、第１の親和性物質又は第２の親和性物質は、更に、磁性物質と結合していてもよい。磁性物質は、好ましくは微粒子状である。本発明の第２の検出又は定量方法において、磁性物質を用いることにより、磁力を付加することで、凝集した磁性物質を分離することができ、検出精度を向上することができる。
(Magnetic material)
In the second detection or quantification method of the present invention, the first affinity substance or the second affinity substance may be further bound to the magnetic substance. The magnetic material is preferably in the form of fine particles. By using a magnetic substance in the second detection or quantification method of the present invention, the aggregated magnetic substance can be separated by applying a magnetic force, and the detection accuracy can be improved.
本明細書において、第２の親和性物質と、少なくとも、標識用酵素及び／又は磁性物質とが結合している結合体を、第２の結合物ということがある。 In the present specification, a conjugate in which a second affinity substance is bound to at least a labeling enzyme and / or a magnetic substance may be referred to as a second conjugate.
本発明の第２の検出又は定量方法は、ＥＬＩＳＡ法やＣＬＥＩＡ法（化学発光酵素免疫測定法）といった酵素基質反応を利用する方法に好適である。 The second detection or quantification method of the present invention is suitable for a method utilizing an enzyme substrate reaction such as an ELISA method or a CLEIA method (chemiluminescent enzyme immunoassay).
（本発明の検出又は定量方法において用いる上記成分の作製方法）
第１の結合物は、第１の親和性物質と例えば固相とを結合することによって作製する。また、第２の親和性物質が第２の結合物を構成する場合、第２の親和性物質と第２の結合物の他の構成物とを結合することによって作製する。
(Method for producing the above components used in the detection or quantification method of the present invention)
The first conjugate is made by binding the first affinity substance to, for example, the solid phase. Further, when the second affinity substance constitutes the second conjugate, it is produced by binding the second affinity substance and another constituent of the second conjugate.
例えば、親和性物質が抗体又は抗原であり、固相と直接結合させる場合、物理吸着法、化学結合法等の常法を用いることができる。また、例えば、親和性物質と標識用酵素とを直接結合する場合、常法を用いることができる。更に、親和性物質と磁性物質とを結合する場合、特に限定されないが、例えば、特殊な官能基に対する化学結合法を用いることができ、具体的には、親和性物質及び磁性物質の双方に、互いに親和性の物質（例えば、アビジン及びビオチン、グルタチオン及びグルタチオンＳトランスフェラーゼ）を結合させ、これらの物質を介して親和性物質と磁性物質とを間接的に結合させてもよい。
共振性構造体は、例えば、物理吸着法、化学結合法等の常法により作製することができる。
For example, when the affinity substance is an antibody or an antigen and is directly bonded to the solid phase, a conventional method such as a physical adsorption method or a chemical bonding method can be used. Further, for example, when directly binding the affinity substance and the labeling enzyme, a conventional method can be used. Further, when the affinity substance and the magnetic substance are bonded, for example, a chemical bonding method for a special functional group can be used without particular limitation, and specifically, both the affinity substance and the magnetic substance can be bonded. Substances having an affinity for each other (for example, avidin and biotin, glutathione and glutathione S transferase) may be bound to each other, and the affinity substance and the magnetic substance may be indirectly bound via these substances.
The resonant structure can be produced by, for example, a conventional method such as a physical adsorption method or a chemical bonding method.
（検出方法）
本発明における検出方法は、検体と、少なくとも第１の親和性物質と共振性構造体とを混合し、共振性構造体に固有の振動数の波動の付与により共振性構造体を共振させ、第１の親和性物質と検出対象とを含む複合体の有無を判定する工程を含む。
(Detection method)
In the detection method in the present invention, a sample is mixed with at least a first affinity substance and a resonant structure, and the resonant structure is resonated by applying a wave of a frequency peculiar to the resonant structure to resonate the resonant structure. The step of determining the presence or absence of a complex containing the affinity substance of 1 and the detection target is included.
（混合）
まず、第１の親和性物質と、共振性構造体と、検体とを容器内で混合する。この場合、市販のキット等、第１の親和性物質を含むが共振性構造体を含まないキット又は試験液に、共振性構造体と検体とを添加してもよい。第１の親和性物質は、第１の結合物を構成していてもよい。
また、更に、第２の親和性物質を混合してもよい。第２の親和性物質は、第２の結合物を構成していてもよい。混合は、例えば、第１の親和性物質、第２の親和性物質及び共振性構造体を含む試験液を保持する容器に、検体を投入することができる。この場合、市販のキット等、第１の親和性物質及び第２の親和性物質を含むが共振性構造体を含まないキット又は試験液に、共振性構造体と検体とを添加してもよい。
(mixture)
First, the first affinity substance, the resonant structure, and the sample are mixed in the container. In this case, the resonant structure and the sample may be added to a kit or test solution containing the first affinity substance but not the resonant structure, such as a commercially available kit. The first affinity substance may constitute the first conjugate.
Further, a second affinity substance may be further mixed. The second affinity substance may constitute a second conjugate. For mixing, for example, the sample can be placed in a container holding a test solution containing the first affinity substance, the second affinity substance, and the resonant structure. In this case, the resonant structure and the sample may be added to a kit or test solution containing the first affinity substance and the second affinity substance but not the resonant structure, such as a commercially available kit. ..
（凝集）
得られる混合物に対し、共振性構造体に固有の振動数の波動を付与し、共振性構造体を共振させる。混合物に、相互に固有振動数が異なる２種以上の共振性構造体が存在する場合、それぞれの共振性構造体に固有の振動数の波動をそれぞれ付与してよい。
(Aggregation)
A wave of a frequency peculiar to the resonant structure is applied to the obtained mixture to resonate the resonant structure. When two or more kinds of resonant structures having different natural frequencies are present in the mixture, a wave having a unique frequency may be applied to each resonant structure.
共振性構造体に固有の振動数の波動の付与により、共振性構造体の共振が惹起され、混合物において共振性構造体を取り囲む場（反応場）に振動が伝達する。混合物及び反応場は液体なので、反応場に存在する第１の親和性物質にも振動が伝達する。反応場に検出対象が存在すれば、更に検出対象にも振動が伝達する。検体に検出対象が存在する場合、これらの振動により、検出対象と第１の親和性物質との接触機会が増えることとなり、その結果、検出対象と第１の親和性物質との結合が促進される。この結合により、第１の親和性物質と検出対象とを含む複合体が形成され、凝集する。 Resonance of the resonant structure is evoked by applying a wave of a frequency peculiar to the resonant structure, and the vibration is transmitted to a field (reaction field) surrounding the resonant structure in the mixture. Since the mixture and the reaction field are liquids, vibrations are also transmitted to the first affinity substance present in the reaction field. If there is a detection target in the reaction field, vibration is further transmitted to the detection target. When a detection target is present in the sample, these vibrations increase the chances of contact between the detection target and the first affinity substance, and as a result, the binding between the detection target and the first affinity substance is promoted. To. By this binding, a complex containing the first affinity substance and the detection target is formed and aggregates.
混合物に第２の親和性物質が存在する場合、上記共振性構造体の共振に基づき反応場に伝達した振動により、反応場に存在する第２の親和性物質にも振動が伝達する。検出対象が存在する場合、これらの振動により、検出対象と、第１の親和性物質及び第２の親和性物質との接触機会が増えることとなり、その結果、検出対象と、第１の親和性物質及び第２の親和性物質との結合が促進される。第１の親和性物質と検出対象とを含む複合体は、更に、第２の親和性物質を含むこととなり、凝集する。 When a second affinity substance is present in the mixture, the vibration transmitted to the reaction field based on the resonance of the resonant structure also transmits the vibration to the second affinity substance existing in the reaction field. If there is a detection target, these vibrations increase the chances of contact between the detection target and the first and second affinity substances, and as a result, the detection target and the first affinity. Binding to the substance and the second affinity substance is promoted. The complex containing the first affinity substance and the detection target further contains the second affinity substance and aggregates.
以上の現象を、図を参照しながら説明する。尚、各図に示す本発明の実施態様はあくまでも一実施態様にすぎず、これらに限定されない。 The above phenomenon will be described with reference to the drawings. It should be noted that the embodiments of the present invention shown in each figure are merely one embodiment and are not limited thereto.
本発明の第１の検出又は定量方法の一実施態様としては、例えば、図１に示すように、検出対象５０が抗原５１である場合、第１の結合物１０は、固相１１としてラテックス粒子と、抗原５１に対する第１の親和性物質として抗体１２とが結合してなる。
本発明の第１の検出又は定量方法の別の一実施態様としては、例えば、図２に示すように、検出対象５０が抗体５２である場合、第１の結合物１０は、固相１１としてラテックス粒子と、抗体５２に対する第１の親和性物質として抗原１３とが結合してなる。
上記何れの一実施態様においても、混合物には共振性構造体４０が散在する。
In one embodiment of the first detection or quantification method of the present invention, for example, as shown in FIG. 1, when the
In another embodiment of the first detection or quantification method of the present invention, for example, as shown in FIG. 2, when the
In any one of the above embodiments, the
図１及び図２において、上記本発明の第１の検出又は定量方法の一実施態様のそれぞれに検体を投入して混合した後、共振性構造体に固有の振動数の波動を付与すると、共振性構造体４０が共振する。共振による振動は、共振性構造体４０を取り囲む反応場にも伝達する。そして、反応場に存在する第１の親和性物質である抗体１２及び抗原１３にも伝達する。反応場に検出対象５０である抗原５１又は抗体５２が存在する場合、抗原５１及び抗体５２にも振動が更に伝達し得る。これらの振動により、抗原５１と抗体１２との接触機会、及び、抗体５２と抗原１３との接触機会がそれぞれ増えることとなる。その結果、抗原５１と抗体１２との結合、及び、抗体５２と抗原１３との結合が、促進される。この結合により、抗原５１及び抗体１２を少なくとも含む複合体、並びに、抗体５２及び抗原１３を少なくとも含む複合体が形成され、凝集する。
In FIGS. 1 and 2, when a sample is charged into each of the first embodiment of the detection or quantification method of the present invention and mixed, and then a wave of a frequency peculiar to the resonant structure is applied, resonance occurs. The
本発明の第２の検出又は定量方法の一実施態様としては、例えば、図３に示すように、検出対象５０が抗原５１である場合、第１の結合物１０は、固相１１と、抗原５１に対する第１の親和性物質として抗体１２とが結合してなる。この一実施態様の検出又は定量方法には、更に、抗原５１に対する第２の親和性物質として抗体２２を含む。抗体２２は、任意に、標識用酵素３０を結合して、第２の結合物２０を構成していてもよい。固相１１は、磁性物質であってもよい。抗体１２及び抗体２２は、抗原５１の異なる部位（抗原決定基）において、同時に抗原５１に結合することができるモノクローナル抗体である。
In one embodiment of the second detection or quantification method of the present invention, for example, as shown in FIG. 3, when the
本発明の第２の検出又は定量方法の別の一実施態様としては、例えば、図４に示すように、検出対象５０が抗体５２である場合、第１の結合物１０は、固相１１と、抗体５２に対する第１の親和性物質として抗原１３とが結合してなる。この一実施態様の検出又は定量方法は、更に、抗体５２に対する第２の親和性物質として抗体２３を含む。抗体２３は、任意に、標識用酵素３０を結合して、第２の結合物２０を構成していてもよい。固相１１は、磁性物質であってもよい。抗原１３及び抗体２３は、抗体５２の異なる部位（ＦａｂとＦｃ）において、同時に抗体５２に結合することができる。
In another embodiment of the second detection or quantification method of the present invention, for example, when the
図３及び図４において、上記本発明の第２の検出又は定量方法の一実施態様のそれぞれに検体を投入して混合した後、共振性構造体に固有の振動数の波動を付与すると、本発明の第１の検出又は定量方法の一実施態様における複合体の形成に際し、第２の親和性物質である抗体２２又は抗原２３が加わることになる。その際、共振性構造体４０の共振に基づく反応場の振動により、抗体２２及び抗原２３にも振動が伝達する。
具体的には、共振性構造体４０の共振に基づき接触機会が増えたことにより、抗体１２、抗原５１及び抗体２２の結合、並びに、抗原１３、抗体５２及び抗体２３の結合が、それぞれ促進される。この結合により、抗体１２、固相１１、抗原５１及び抗体２２を少なくとも含む複合体、並びに、抗原１３、固相１１、抗体５２及び抗体２３を少なくとも含む複合体がそれぞれ形成され、凝集する。
In FIGS. 3 and 4, a sample is charged into each of the first embodiments of the second detection or quantification method of the present invention, mixed, and then a wave of a frequency peculiar to the resonant structure is applied. Upon forming the complex in one embodiment of the first detection or quantification method of the invention, the second affinity substance,
Specifically, the increase in contact opportunities based on the resonance of the
本発明において、付与する波動は、共振性構造体に共振を起こすものであれば特に限定されないが、例えば、蛋白質の熱変性等の、検体に対するダメージを起こさない範囲で、下記ストークス−アインシュタインの式（１）において拡散係数Ｄができるだけ最大となるような波動を付与することが好ましい。
ｄ＝κＴ／３πη０Ｄ 式（１）
（上記式において、ｄは共振性構造体の粒子径、κはボルツマン定数、Ｔは共振性構造体が存在する反応場の絶対温度、η０は共振性構造体が存在する反応場の粘度率、Ｄは共振性構造体の拡散係数を表す。）
拡散係数Ｄは、分子のブラウン運動を示す係数であり、例えば、レーザー回折法による回折散乱パターンを測定することにより、求めることができ、本発明に関しては、例えば、測定セル中の共振性構造体に照射して反射され、測定セル外に設置されたピンホールを抜け出たレーザー光を光電子増倍管を用いて増倍した後、キュムラント法及びヒストグラム法解析により、求めることができる。
In the present invention, the applied wave is not particularly limited as long as it resonates with the resonant structure, but the following Stokes-Einstein equation is used as long as it does not cause damage to the sample such as heat denaturation of protein. In (1), it is preferable to apply a wave that maximizes the diffusion coefficient D as much as possible.
d = κT / 3πη 0 D equation (1)
(In the above equation, d is the particle size of the resonant structure, κ is the Boltzmann constant, T is the absolute temperature of the reaction field where the resonant structure is present, and η 0 is the viscosity of the reaction field where the resonant structure is present. , D represents the diffusion coefficient of the resonant structure.)
The diffusion coefficient D is a coefficient indicating the brown motion of the molecule, and can be obtained by, for example, measuring the diffraction scattering pattern by a laser diffraction method. In the present invention, for example, the resonant structure in the measurement cell. The laser beam that has been reflected by irradiation and has escaped from the pinhole installed outside the measurement cell is multiplied by a photomultiplier tube, and then can be obtained by the Cumulant method and the histogram method analysis.
本発明において、付与する波動の種類としては、例えば、共振性構造体に固有の振動数の波動であればよく、例えば、低周波〜超音波〜中波等が挙げられる。
付与する波動の周波数、時間、出力等の条件は、用いる共振性構造体の固有振動数、材質、大きさ等に応じて選択することができる。
In the present invention, the type of wave applied may be, for example, a wave having a frequency peculiar to the resonant structure, and examples thereof include low frequency, ultrasonic wave, and medium wave.
Conditions such as the frequency, time, and output of the wave to be applied can be selected according to the natural frequency, material, size, and the like of the resonant structure to be used.
付与する波動の周波数は、共振させる対象である、共振性構造体の固有振動数とする。付与する波動の周波数としては、振動幅が大きい波長となる周波数が好ましく、より低いエネルギーでより高い振動幅となる波長となる周波数がより好ましく、また、共振性構造体が粒度分布のあるものである場合、分布の大きい粒度を有するものに合せて選択することが好ましい。 The frequency of the applied wave is the natural frequency of the resonant structure to be resonated. As the frequency of the wave to be applied, a frequency having a wavelength having a large vibration width is preferable, a frequency having a wavelength having a higher vibration width with a lower energy is more preferable, and the resonant structure has a particle size distribution. In some cases, it is preferable to select the one having a large grain size of distribution.
付与する波動の周波数の下限は、好ましくは１０Ｈｚ、より好ましくは１５Ｈｚであり、上限は、好ましくは３ＭＨｚ、より好ましくは２ＭＨｚである。
本発明において、使用する装置が発する波動の周波数が定まっている場合等、使用する周波数に応じて共振性構造体として具体的に何を用いるかを選択してもよい。
The lower limit of the frequency of the wave to be applied is preferably 10 Hz, more preferably 15 Hz, and the upper limit is preferably 3 MHz, more preferably 2 MHz.
In the present invention, when the frequency of the wave generated by the apparatus to be used is fixed, what is specifically used as the resonant structure may be selected according to the frequency to be used.
付与する波動の出力の下限は、特にないが、好ましくは１Ｗ、より好ましくは５Ｗであり、上限は、好ましくは２２００Ｗ、より好ましくは２０００Ｗである。
本発明においては、従来の共振による撹拌法よりも、上記のように出力を比較的低く抑えることができるので、波動を比較的長時間付与することができ、結合、凝集等の促進に十分な振動を与えることができる。また、反応場の温度上昇を小さく抑えることができるので、蛋白質の熱変性等の、検体に対するダメージを起こすことがない。
The lower limit of the output of the wave to be applied is not particularly limited, but is preferably 1 W, more preferably 5 W, and the upper limit is preferably 2200 W, more preferably 2000 W.
In the present invention, since the output can be suppressed to be relatively low as described above as compared with the conventional stirring method by resonance, the wave motion can be applied for a relatively long time, which is sufficient for promoting coupling, aggregation and the like. Vibration can be given. In addition, since the temperature rise in the reaction field can be suppressed to a small value, damage to the sample such as heat denaturation of proteins does not occur.
共振性構造体に固有の振動数の波動を付与する方法としては、例えば、ピエゾ素子、水晶振動子、ダイナミック型スピーカー等が挙げられ、ピエゾ素子が好ましい。
ピエゾ素子を用いる場合、付与する波動の周波数の下限は、好ましくは１０Ｈｚ、より好ましくは１５Ｈｚであり、上限は、好ましくは１０ＭＨｚ、より好ましくは２ＭＨｚであり、付与する波動の出力の下限は、好ましくは５Ｗ、より好ましくは１０Ｗであり、上限は、好ましくは２２００Ｗ、より好ましくは２０００Ｗである。
Examples of the method of imparting a wave of a frequency peculiar to the resonant structure include a piezo element, a crystal oscillator, a dynamic speaker, and the like, and the piezo element is preferable.
When a piezo element is used, the lower limit of the frequency of the applied wave is preferably 10 Hz, more preferably 15 Hz, the upper limit is preferably 10 MHz, more preferably 2 MHz, and the lower limit of the output of the applied wave is preferable. Is 5W, more preferably 10W, and the upper limit is preferably 2200W, more preferably 2000W.
（判定を行う工程）
判定を行う工程としては、具体的には、検出する方法の場合、第１の親和性物質と検出対象とを含む複合体の有無を判定する工程であり、定量する方法の場合、上記複合体に基づく濁度を測定し、検出対象の量と濁度との相関式に基づいて、検体中の検出対象の量を算出する工程である。
(Process to make a judgment)
Specifically, in the case of the detection method, the determination step is a step of determining the presence or absence of a complex containing the first affinity substance and the detection target, and in the case of the quantification method, the above-mentioned complex. This is a step of measuring the turbidity based on the above and calculating the amount of the detection target in the sample based on the correlation formula between the amount of the detection target and the turbidity.
第１の親和性物質又は第２の親和性物質が標識用酵素と結合している場合、複合体に存在する標識用酵素とその基質とを反応させる。基質としては、従来用いられる、発色性、蛍光性又は発光性の基質等が挙げられる。基質を加えることにより、検出可能な信号を生じさせることができ、上記濁度測定に代えることができる。基質の添加は、判定を行う前又は前記判定を行う際に行うことができる。 When the first affinity substance or the second affinity substance is bound to the labeling enzyme, the labeling enzyme present in the complex is reacted with the substrate thereof. Examples of the substrate include conventionally used color-developing, fluorescent or luminescent substrates and the like. By adding a substrate, a detectable signal can be generated, which can replace the turbidity measurement described above. The addition of the substrate can be performed before the determination or when the determination is made.
（判定）
検出対象を含む複合体の有無の判定は、例えば目視又は濁度測定で行うことができる。濁度は光散乱装置での光透過率から算出でき、濁度が高ければ複合体が凝集されており、検出物質の存在が示唆される。ここで、使用する光の波長は、磁性物質等の粒径等に応じ所望の検出感度が得られるよう適宜設定されてよい。光の波長は、従来汎用の装置を利用できる点で、可視光の範囲内（例えば、５５０ｎｍ）であることが好ましい。
(Judgment)
The presence or absence of the complex containing the detection target can be determined, for example, visually or by turbidity measurement. The turbidity can be calculated from the light transmittance of the light scattering device, and if the turbidity is high, the complex is aggregated, suggesting the presence of the detected substance. Here, the wavelength of the light used may be appropriately set so as to obtain a desired detection sensitivity according to the particle size of the magnetic substance or the like. The wavelength of light is preferably within the range of visible light (for example, 550 nm) in that a conventional general-purpose device can be used.
目視又は濁度測定は、一定の時点で断続的に行ってもよいし、経時的に連続して行ってもよい。また、ある時点における濁度測定値と、他の時点における濁度測定値との差に基づいて判定を行ってもよい。 The visual or turbidity measurement may be performed intermittently at a certain point in time or continuously over time. Further, the determination may be made based on the difference between the turbidity measurement value at a certain time point and the turbidity measurement value at another time point.
尚、本発明の検出又は定量方法における「濁度測定」には、濁度を直接的に測定することのみならず、濁度を反映するパラメータを測定することも包含される。かかるパラメータとしては、複数時点での濁度測定値の差異、分離された凝集物量、分離後の非凝集物の濁度等が挙げられる。ここで、複数時点のうちの１点は、例えば、検出対象が非存在である陰性対照に磁力を付加した際、濁度が最大値となる時点近傍であることが好ましい。これにより、別の時点での濁度測定値との差異が大きくなり、検出対象の量をより正確に定量できることになる。 The "turbidity measurement" in the detection or quantification method of the present invention includes not only direct measurement of turbidity but also measurement of parameters reflecting turbidity. Examples of such parameters include a difference in turbidity measurement values at a plurality of time points, the amount of aggregates separated, the turbidity of non-aggregates after separation, and the like. Here, it is preferable that one of the plurality of time points is near the time point where the turbidity becomes the maximum value when a magnetic force is applied to the negative control in which the detection target does not exist. As a result, the difference from the turbidity measurement value at another time point becomes large, and the amount of the detection target can be quantified more accurately.
（定量方法）
本発明における定量方法は、検体と、少なくとも第１の親和性物質と共振性構造体とを混合し、共振性構造体に固有の振動数の波動の付与により共振性構造体を共振させ、第１の親和性物質と検出対象とを含む複合体に基づく濁度、即ち、共振により得られる混合物の濁度を測定し、検出対象の量と濁度との相関式に基づいて、検体中の検出対象の量を算出する。前半部分の手順は前述した検出方法と類似するので、説明を省略する。
(Quantitative method)
In the quantification method in the present invention, a sample is mixed with at least the first affinity substance and the resonant structure, and the resonant structure is resonated by applying a wave of a frequency peculiar to the resonant structure to resonate the resonant structure. The turbidity based on the complex containing the affinity substance of 1 and the detection target, that is, the turbidity of the mixture obtained by resonance is measured, and the turbidity in the sample is based on the correlation formula between the amount of the detection target and the turbidity. Calculate the amount to be detected. Since the procedure of the first half is similar to the detection method described above, the description thereof will be omitted.
（相関式）
検出対象の量と濁度との相関式は、予め作成しておく。この相関式を構成する検出対象の量と濁度との測定は、データが多い程に信頼性の高い相関式が得られる。そこでデータは、２以上の検出対象の量に関するものであればよく、３点以上の検出対象の量に関するものであることが好ましい。
ここで、検出対象の量と濁度との相関式は、検出対象の量と濁度との直接的な相関を示す式のみならず、検出対象の量と濁度を反映するパラメータとの相関式であってもよい。
(Correlation formula)
The correlation equation between the amount to be detected and the turbidity is created in advance. As for the measurement of the amount of the detection target and the turbidity that constitute this correlation equation, the more data there is, the more reliable the correlation equation can be obtained. Therefore, the data may be related to the amount of two or more detection targets, and is preferably related to the amount of three or more detection targets.
Here, the correlation equation between the amount of the detection target and the turbidity is not only the equation showing the direct correlation between the amount of the detection target and the turbidity, but also the correlation between the amount of the detection target and the parameter reflecting the turbidity. It may be an expression.
（算出）
混合物の濁度測定値を、作成した相関式に代入することによって、検体中の検出対象の量を算出できる。
(Calculation)
By substituting the measured turbidity value of the mixture into the created correlation equation, the amount of the detection target in the sample can be calculated.
（分離）
磁性物質が含まれる場合、本発明の検出又は定量方法は、磁力を付加することで、凝集した磁性物質を分離することを更に含むことが好ましい。これによって、凝集した磁性物質が、非凝集状態の磁性物質を含む夾雑物から分離される。このため、分離した磁性物質の量、溶媒に分散した際の光透過率等の測定値は、夾雑物の影響が除外され、検出物質の存在をより忠実に反映したものとなる。
(Separation)
When a magnetic substance is contained, the detection or quantification method of the present invention preferably further comprises separating the aggregated magnetic substance by applying a magnetic force. As a result, the aggregated magnetic substance is separated from the contaminants containing the non-aggregated magnetic substance. Therefore, the measured values such as the amount of the separated magnetic substance and the light transmittance when dispersed in the solvent exclude the influence of impurities and more faithfully reflect the existence of the detected substance.
磁力の付加は、磁性物質に磁石を接近させて行うことができる。この磁石の磁力は、用いる磁性物質が有する磁力の大きさによって異なる。磁石としては、例えばマグナ社製ネオジ磁石が挙げられる。 The magnetic force can be added by bringing the magnet close to the magnetic substance. The magnetic force of this magnet depends on the magnitude of the magnetic force of the magnetic substance used. Examples of the magnet include neodymium magnets manufactured by Magna.
また、磁力の付加は、判定若しくは濁度の測定の前、又は、判定若しくは濁度の測定と同時並行して行ってよいが、工程に費やされる時間を短縮化できる点で同時並行が好ましい。尚、磁力を付加すると、凝集した磁性物質は夾雑物を巻き込んで分離されるため、分離後における混合物の濁度は、夾雑物が存在していた場合の方がむしろ小さくなるものと推測される。 Further, the magnetic force may be added before the determination or the measurement of the turbidity, or in parallel with the determination or the measurement of the turbidity, but the simultaneous parallel is preferable in that the time spent in the process can be shortened. When a magnetic force is applied, the aggregated magnetic substance is separated by entraining the contaminants, so it is presumed that the turbidity of the mixture after separation is rather smaller when the contaminants are present. ..
（検出対象）
検体中の検出対象としては、臨床診断に利用される物質が挙げられ、具体的には、体液、尿、喀痰、糞便中等に含まれるヒトイムノグロブリンＧ、ヒトイムノグロブリンＭ、ヒトイムノグロブリンＡ、ヒトイムノグロブリンＥ、ヒトアルブミン、ヒトフィブリノーゲン（フィブリン及びそれらの分解産物）、α−フェトプロテイン（ＡＦＰ）、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）、ミオグロビン、ガン胎児性抗原、肝炎ウイルス抗原、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）、ヒト胎盤性ラクトーゲン（ＨＰＬ）、ＨＩＶウイルス抗原、アレルゲン、細菌毒素、細菌抗原、酵素、ホルモン（例えば、ヒト甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）、インスリン等）、核酸、ＰＣＲ等により増幅された核酸、サイトカイン、薬剤等が挙げられる。
(Detection target)
Examples of detection targets in the sample include substances used for clinical diagnosis. Specifically, human immunoglobulin G, human immunoglobulin M, human immunoglobulin A, etc. contained in body fluids, urine, sputum, feces, etc. Human immunoglobulin E, human albumin, human fibrinogen (fibrin and its degradation products), α-fetoprotein (AFP), C-reactive protein (CRP), myoglobin, cancer fetal antigen, hepatitis virus antigen, human chorionic gonadotropin ( hCG), human placental lactogen (HPL), HIV virus antigen, allergen, bacterial toxin, bacterial antigen, enzyme, hormone (eg, human thyroid stimulating hormone (TSH), insulin, etc.), nucleic acid, nucleic acid amplified by PCR, etc. , Antigens, drugs and the like.
＜共振性添加剤＞
検出対象を検出及び／又は定量するための試験液に添加するための共振性添加剤であって、試験液は、検出対象に対する第１の親和性物質を含み、固有の振動数の波動の付与により共振する共振性構造体を有している、共振性添加剤もまた、本発明の一つである。
共振性添加剤としては、例えば、共振性構造体として上述したもの等が挙げられる。検出対象としては、例えば、抗原、抗体等の免疫学的検出対象が挙げられる。親和性物質としては、例えば、抗体、抗原等が挙げられる。
<Resonant additive>
A resonant additive for addition to a test solution for detecting and / or quantifying a detection target, wherein the test solution contains a first affinity substance for the detection target and imparts a wave of a unique frequency. A resonant additive having a resonant structure that resonates with is also one of the present inventions.
Examples of the resonant additive include those described above as the resonant structure. Examples of the detection target include immunological detection targets such as antigens and antibodies. Examples of the affinity substance include an antibody, an antigen and the like.
＜共振性構造体の使用方法＞
上記試験液に添加して、固有の振動数の波動の付与により共振させる、共振性構造体の使用方法もまた、本発明の一つである。
<How to use the resonant structure>
A method of using a resonant structure that is added to the test solution and resonated by applying a wave of a unique frequency is also one of the present inventions.
＜共振性構造体を用いて相互作用させる方法＞
物質Ａと、物質Ａに対する親和性物質とを相互作用させる方法であって、物質Ａと親和性物質と共振性構造体とを混合し、共振性構造体に固有の振動数の波動の付与により共振性構造体を共振させる工程を含む、方法もまた、本発明の一つである。
物質Ａとしては、特に限定されず、検出対象として上述したものであってもよいが、抗原抗体反応における反応物質に限らず幅広く選択することができる。物質Ａに対する親和性物質としては、抗原、抗体等の上述したものであってもよいが、抗原抗体反応に限らず、物質Ａと相互作用し得る物質であってよい。相互作用としては、物質Ａと親和性物質との結合、配位、包接等であってよく、更に反応等に進んでもよい。物質Ａ及び親和性物質は、本明細書において便宜上「物質」と称するが、例えば、低分子又は高分子の化合物であってもよい。共振性構造体及び付与する波動としては、上述のものを用いることができる。
本発明の相互作用させる方法は、共振性構造体を共振させることにより、物質Ａと親和性物質との相互作用を促進することができる。
<Method of interacting with a resonant structure>
This is a method of interacting substance A with a substance that has an affinity for substance A. By mixing substance A, an affinity substance, and a resonant structure, and imparting a wave of a frequency peculiar to the resonant structure. A method comprising the step of resonating a resonant structure is also one of the present inventions.
The substance A is not particularly limited and may be the one described above as a detection target, but is not limited to the reactant in the antigen-antibody reaction and can be widely selected. The affinity substance for the substance A may be the above-mentioned substances such as an antigen and an antibody, but is not limited to the antigen-antibody reaction and may be a substance capable of interacting with the substance A. The interaction may be binding, coordination, inclusion or the like of substance A and an affinity substance, and may further proceed to reaction or the like. The substance A and the affinity substance are referred to as "substances" for convenience in the present specification, but may be, for example, low molecular weight or high molecular weight compounds. As the resonant structure and the wave to be applied, the above-mentioned ones can be used.
The interaction method of the present invention can promote the interaction between the substance A and the affinity substance by resonating the resonant structure.
本発明の共振性添加剤、本発明の共振性構造体の使用方法及び本発明の相互作用させる方法は、共振性添加剤又は共振性構造体を共振によりいわば分子レベルによる撹拌子として機能させることができる。そして、共振性構造体を取り囲む反応場に存在する親和性物質と、検出対象若しくは物質Ａとの相互作用を、微小な反応場において、反応場及びその周囲へのダメージを抑えつつ、可能とする。従って、本発明の共振性構造体及び本発明の相互作用させる方法は、従来のセル、ウェル等のみならず、例えば、マイクロ化学プロセス、マイクロ流路、マイクロリアクター等における反応等にも幅広く利用することができる。 The resonant additive of the present invention, the method of using the resonant structure of the present invention, and the method of interacting with the present invention are to make the resonant additive or the resonant structure function as a stirrer at the molecular level by resonance. Can be done. Then, the interaction between the affinity substance existing in the reaction field surrounding the resonant structure and the detection target or the substance A is made possible in a minute reaction field while suppressing damage to the reaction field and its surroundings. .. Therefore, the resonant structure of the present invention and the method of interacting with the present invention are widely used not only for conventional cells, wells, etc., but also for reactions in, for example, microchemical processes, microchannels, microreactors, etc. be able to.
＜容器＞
検出対象を検出及び／又は定量するための容器であって、固有の振動数の波動の付与により共振する共振体を含む、容器もまた、本発明の一つである。
本発明の容器は、共振体に固有の振動数の波動を付与して共振体の共振を惹起することにより、容器の内部に保持する液体等の流体に、共振による振動を伝達することができ、流体に存在する反応物質を相互に接触させる機会を増やすことができる。その結果、反応物質の結合、配位等の相互作用を促進することができる。従って、本発明によれば、反応物質がごく微量であっても、相互作用の効率を高めることができる。また、相互作用の時間短縮を図ることができる。
<Container>
A container for detecting and / or quantifying a detection target, which includes a resonator that resonates by applying a wave of a unique frequency, is also one of the present inventions.
The container of the present invention can transmit the vibration due to resonance to a fluid such as a liquid held inside the container by applying a wave of a frequency peculiar to the resonator to induce resonance of the resonator. , The chances of bringing the reactants present in the fluid into contact with each other can be increased. As a result, interactions such as binding and coordination of reactants can be promoted. Therefore, according to the present invention, the efficiency of interaction can be enhanced even if the amount of the reactant is very small. In addition, the interaction time can be shortened.
本明細書において、本発明の容器に関して「反応物質」とは、容器の内部に保持される流体に存在する２以上の化合物等の物質であって、相互作用を行い得るものを意味する。「反応物質」は、化学反応における出発物質のみならず、反応中間体、触媒等をも含む概念であり、また、生体試料等の検体における検出対象の検出、定量等に関与する検出対象（抗原、抗体等）、検出対象に対する親和性物質（抗体、抗原等）をも含む概念である。
本明細書において、本発明の容器に関して「相互作用」は、反応物質の結合、配位、包接を含む概念であり、例えば、検出対象と、検出対象に対する親和性物質との結合等であってもよい。「相互作用」は、更に反応等に進んだものであってもよい。
In the present specification, the "reactant" with respect to the container of the present invention means a substance such as two or more compounds existing in the fluid held inside the container and capable of interacting with each other. "Reactive substance" is a concept that includes not only a starting substance in a chemical reaction but also a reaction intermediate, a catalyst, etc., and a detection target (antigen) involved in detection, quantification, etc. of a detection target in a sample such as a biological sample. , Antibodies, etc.), and substances that have an affinity for the detection target (antibodies, antigens, etc.).
In the present specification, "interaction" with respect to the container of the present invention is a concept including binding, coordination, and inclusion of a reactant, for example, a binding between a detection target and an affinity substance for the detection target. You may. The "interaction" may be a reaction or the like.
本発明の容器としては、特に限定されないが、例えば、濁度、吸光度等の測定等に用いられるセル等が挙げられる。本発明によれば、セルのように、通常、内部に撹拌子を入れることができず、また、外部から容器全体を振動させること等による撹拌が困難な容器であっても、容器自体に共振体を含め、共振体に共振を惹起することにより、容器の内部に保持される液体等を容易に撹拌することができる。 The container of the present invention is not particularly limited, and examples thereof include cells used for measuring turbidity, absorbance, and the like. According to the present invention, even a container such as a cell, in which a stirrer cannot normally be inserted inside and it is difficult to stir by vibrating the entire container from the outside, resonates with the container itself. By inducing resonance in the resonator including the body, the liquid or the like held inside the container can be easily agitated.
共振体は、検出及び／又は定量のための透過光を遮断しない箇所にあることが好ましく、そのような箇所であって容器の壁面及び／又は底面にあることがより好ましい。
共振体は、共振による振動を、容器の内部に保持される流体に伝達しやすい箇所に備えることが好ましく、例えば、容器の内壁における側面及び／又は底面に備えることができる。
The resonator is preferably located at a location that does not block transmitted light for detection and / or quantification, and more preferably at such a location on the wall surface and / or bottom surface of the container.
The resonator is preferably provided at a position where vibration due to resonance is easily transmitted to the fluid held inside the container, and can be provided, for example, on the side surface and / or the bottom surface of the inner wall of the container.
共振体としては、固有の振動数の波動の付与により共振し得る固体であり、容器に含めることに適するものであれば特に限定されず、例えば、ガラス、金属等が挙げられる。共振体としては、容器の内部に保持する流体との相互作用を最小にし、また、メンテナンスの点で、ガラスが好ましい。
共振体としては、容器本体よりも低出力の波動により共振するものが好ましく、また、容器本体とは不連続の構造体であることが好ましい。
共振体の形状としては、特に限定されない。
The resonator is a solid that can resonate by applying a wave of a specific frequency, and is not particularly limited as long as it is suitable for inclusion in a container, and examples thereof include glass and metal. As the resonator, glass is preferable in terms of maintenance and minimizing interaction with the fluid held inside the container.
The resonator preferably resonates with a wave of lower output than the container body, and preferably has a structure discontinuous with the container body.
The shape of the resonator is not particularly limited.
共振体の大きさとしては、特に限定されないが、容器全体の内壁の総表面積に占める共振体の総表面積の割合の下限は、好ましくは０．１％であり、上限は、好ましくは９０％である。
本発明の容器は、共振体を容器の一部に含むことにより、容器の全体を共振体とする場合に比べ容器の劣化を防ぐことができる。また、本発明の容器は、共振体を好ましくは上記範囲内の総表面積の割合で含むので、容器の劣化を防ぐとともに、共振に基づき容器内の流体に振動を十分伝達することができる。
The size of the resonator is not particularly limited, but the lower limit of the ratio of the total surface area of the resonator to the total surface area of the inner wall of the entire container is preferably 0.1%, and the upper limit is preferably 90%. is there.
By including the resonator as a part of the container, the container of the present invention can prevent deterioration of the container as compared with the case where the entire container is the resonator. Further, since the container of the present invention preferably contains the resonator in the ratio of the total surface area within the above range, deterioration of the container can be prevented and vibration can be sufficiently transmitted to the fluid in the container based on the resonance.
本発明の容器において、付与する波動としては、共振体に共振を惹起するものであれば特に限定されず、具体的には共振性に固有の振動数の波動であればよく、例えば、超音波、マイクロ波等が挙げられ、低周波が好ましい。
付与する波動の周波数、時間、出力等の条件は、用いる共振体の材質、大きさ、固有振動数等に応じて選択することができる。
In the container of the present invention, the wave applied is not particularly limited as long as it causes resonance in the resonator, and specifically, it may be a wave having a frequency peculiar to resonance, for example, ultrasonic waves. , Microwave and the like, and low frequency is preferable.
Conditions such as the frequency, time, and output of the wave to be applied can be selected according to the material, size, natural frequency, and the like of the resonator to be used.
付与する波動の周波数は、共振体の固有振動数とする。付与する波動の周波数の下限は、好ましくは１０Ｈｚ、より好ましくは１５Ｈｚであり、上限は、好ましくは１０ＭＨｚ、より好ましくは２ＭＨｚである。 The frequency of the applied wave is the natural frequency of the resonator. The lower limit of the frequency of the wave to be applied is preferably 10 Hz, more preferably 15 Hz, and the upper limit is preferably 10 MHz, more preferably 2 MHz.
付与する波動の出力の下限は、特にないが、好ましくは１Ｗ、より好ましくは５Ｗであり、上限は、好ましくは２２００Ｗ、より好ましくは２０００Ｗである。
本発明においては、従来の共振による撹拌法よりも、上記のように出力を比較的低く抑えることができるので、波動を比較的長時間付与することができ、反応の促進に十分な振動を与えることができる。また、蛋白質の熱変性等の、検体に対するダメージを起こすことがない。
The lower limit of the output of the wave to be applied is not particularly limited, but is preferably 1 W, more preferably 5 W, and the upper limit is preferably 2200 W, more preferably 2000 W.
In the present invention, since the output can be suppressed to be relatively low as described above as compared with the conventional stirring method by resonance, the wave motion can be applied for a relatively long time, and sufficient vibration is given to promote the reaction. be able to. In addition, it does not cause damage to the sample such as heat denaturation of protein.
波動を付与する方法としては、例えば、ピエゾ素子、圧電子等が挙げられ、ピエゾ素子が好ましい。
波動は、本発明の容器が例えば濁度等の測定に用いられるセルである場合、濁度等の測定装置において、濁度等の測定と実質的に同時に付与することが好ましい。
Examples of the method for imparting a wave include a piezo element, a pressure electron, and the like, and the piezo element is preferable.
When the container of the present invention is, for example, a cell used for measuring turbidity or the like, it is preferable that the wave motion is applied substantially at the same time as the measurement of turbidity or the like in a measuring device for turbidity or the like.
本発明の容器は、波動を付与する波動発生装置に備え付けられるもの、又は、波動発生装置を備えるものであってもよい。
本発明の容器の一実施態様としては、例えば、図５に示すように、濁度測定のためのセル２であり、該セルの内容物に対して波動を付与するための波動発生装置１に備え付けられるものであってもよい。図５において、波動発生装置１からセル２に対する図中の矢印で表される波動が付与される方向は、図中のセル２を図の向こう側から手前側に透過する矢印で表される濁度測定のための光の照射方向と直交するが、これに限定されず、両者の方向がいかなる角度を形成するものであってもよく、例えば、平行であってもよいが平行の場合は付与する波動と濁度測定のための光とはそれらの発生装置に影響しないように重ならないことが好ましい。
The container of the present invention may be provided with a wave generator that imparts wave motion, or may be provided with a wave generator.
One embodiment of the container of the present invention is, for example, as shown in FIG. 5, a
本発明の容器の別の一実施態様としては、例えば、図６に示すように、血液、尿その他の体液等の成分等について主に比色分析による定量分析を自動化した臨床用生化学自動分析装置のうちディスクリート方式における反応容器３であり、波動発生装置を備えるものであってもよい。波動発生装置１は、試薬分注部６１、６２及び６３、撹拌部６４及び６５、測光部６６並びに洗浄エリア６７等の各機構間の空隙に備えることができる。従って、本発明の反応容器３は、例えば、既存のディスクリート方式臨床用生化学自動分析装置における反応容器の代替として用いることができ、波動発生装置１も既存の装置に備えることが可能である。波動発生装置１は、また、図６に示すように複数個を備えてもよいし、１個であってもよい。
As another embodiment of the container of the present invention, for example, as shown in FIG. 6, clinical biochemical automatic analysis that automates quantitative analysis mainly by colorimetric analysis of components such as blood, urine and other body fluids. Among the devices, the reaction vessel 3 in the discrete system may be provided with a wave generator. The wave generator 1 can be provided in the gap between each mechanism such as the
〔本発明の容器の作製方法〕
容器の所定の箇所に共振体を備える。例えば、容器の共振体以外の部分を予め作製し、所定の箇所に共振体を嵌め込み固定化する等により、作製することができる。共振体がガラスである場合、容器を作製する過程において所定の箇所に共振体を載置し、容器の他の部分と一緒に最終形態に成形することもできる。
[Method for producing a container of the present invention]
A resonator is provided at a predetermined position in the container. For example, a portion other than the resonator of the container can be manufactured in advance, and the resonator can be fitted and fixed at a predetermined position. When the resonator is glass, the resonator can be placed at a predetermined position in the process of manufacturing the container and molded into the final form together with other parts of the container.
＜上記容器を用いて相互作用させる方法＞
物質Ａと、物質Ａに対する親和性物質とを相互作用させる方法であって、物質Ａ及び親和性物質は上記本発明の容器に保持された流体に存在しており、容器に含まれる共振体を共振体に固有の振動数の波動の付与により共振させる工程を含む、方法もまた、本発明の一つである。
物質Ａとしては、特に限定されず、検出対象として上述したものであってもよいが、抗原抗体反応における反応物質に限らず幅広く選択することができる。物質Ａに対する親和性物質としては、抗原、抗体等の上述したものであってもよいが、抗原抗体反応に限らず、物質Ａと相互作用し得る物質であってよい。相互作用としては、物質Ａと親和性物質との結合、配位、包接等であってよく、更に反応等に進んでもよい。物質Ａ及び親和性物質は、本明細書において便宜上「物質」と称するが、例えば、低分子又は高分子の化合物であってもよい。物質Ａ及び親和性物質が存在する流体としては、例えば、親和性物質を含む試験液であってよい。付与する波動としては、上述のものを用いることができる。
本発明の相互作用させる方法は、本発明の容器に含まれる共振体を共振体に固有の振動数の波動を付与して共振させることにより、容器に保持された流体に振動を伝達することができ、流体に存在する物質Ａと親和性物質との相互作用を促進することができる。
<Method of interacting with the above container>
It is a method of interacting the substance A with the substance having an affinity for the substance A, and the substance A and the affinity substance are present in the fluid held in the container of the present invention, and the resonator contained in the container is used. A method including a step of resonating by applying a wave of a frequency peculiar to a resonator is also one of the present inventions.
The substance A is not particularly limited and may be the one described above as a detection target, but is not limited to the reactant in the antigen-antibody reaction and can be widely selected. The affinity substance for the substance A may be the above-mentioned substances such as an antigen and an antibody, but is not limited to the antigen-antibody reaction and may be a substance capable of interacting with the substance A. The interaction may be binding, coordination, inclusion or the like of substance A and an affinity substance, and may further proceed to reaction or the like. The substance A and the affinity substance are referred to as "substances" for convenience in the present specification, but may be, for example, low molecular weight or high molecular weight compounds. The fluid in which the substance A and the affinity substance are present may be, for example, a test solution containing the affinity substance. As the wave motion to be applied, the above-mentioned one can be used.
The method of interacting with the present invention is to transmit the vibration to the fluid held in the container by resonating the resonator contained in the container of the present invention by applying a wave of a frequency peculiar to the resonator. It is possible to promote the interaction between the substance A existing in the fluid and the affinity substance.
１ 波動発生装置
１０ 第１の結合物
１１ 固相
１２ 第１の親和性物質としての抗体
１３ 第１の親和性物質としての抗原
２０ 第２の結合物
２２、２３ 第２の親和性物質としての抗体
３０ 標識用酵素
４０ 共振性構造体
５０ 検出対象
５１ 検出対象としての抗原
５２ 検出対象としての抗体
1
Claims (6)
前記容器は、固有の振動数の波動の付与により共振する共振体を含み、
前記共振体は、ガラス又は金属からなり、検出及び／又は定量のための透過光を遮断しない箇所にある、容器。 A container for detecting and / or quantifying a detection target by a method including a step of resonating a resonator contained in the container by applying a wave of a frequency peculiar to the resonator.
The container contains a resonator that resonates due to the application of a wave of a unique frequency.
A container in which the resonator is made of glass or metal and does not block transmitted light for detection and / or quantification.
前記物質Ａ及び前記親和性物質は、請求項１〜５の何れか１項に記載の容器に保持された流体に存在しており、
前記容器に含まれる共振体を前記共振体に固有の振動数の波動の付与により共振させる工程を含む、方法。 A method of interacting a substance A with a substance having an affinity for the substance A.
The substance A and the affinity substance are present in the fluid held in the container according to any one of claims 1 to 5.
A method comprising a step of resonating a resonator contained in the container by applying a wave having a frequency peculiar to the resonator.
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