JP6859357B2 - 敗血症の複数種類の病原因子の吸着材料及びその製造方法並びに用途 - Google Patents

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Description

本発明は医薬技術分野に属し、特に敗血症の複数種類の病原因子の吸着材料及びその製造方法並びに用途に関する。
敗血症とは、感染性因子を介した全身性炎症反応症候群（ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｓｙｎｄｒｏｍｅ、ＳＩＲＳ）であって、毎年世界で１９００万人に達する人々が発症し、現在患者の死の主要な要因であり、理想的な治療手段はまだない。研究によると、細菌、ウイルス及び真菌のような病原体によって放出される病原体関連分子パターン（ｐａｔｈｏｇｅｎ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｐａｔｔｅｒｎ、ＰＡＭＰ）は、敗血症を誘発する主要な病原因子であり、現在既知の病原体関連分子は主に、細菌由来の内毒素（リポ多糖）、細菌ゲノムＤＮＡ、ペプチドグリカン、テイコ酸、ウイルス由来のウイルスＲＮＡ及び真菌由来のザイモサン等を含む。このため、研究者らは、ポリミキシンＢ、脂質Ａモノクローナル抗体、殺菌／透過性増加タンパク質、阻害性オリゴヌクレオチド等の多くのアンタゴニストを開発し、主に細菌内毒素及び細菌ゲノムＤＮＡに対するものであり、多くは前臨床又は臨床研究段階であって、まだ臨床的に使用されていない。薬物治療に加えて、血液浄化治療も敗血症を治療する有効な手段であると考えられている。いわゆる血液浄化処置とは、患者の血液を体外に取り出し、特殊な浄化装置を介して血液中の病原因子を除去し、血液を浄化して、病気を治療することを目的とする。血液浄化治療装置は、通常、ポンプ、循環血液回路、血液浄化及び関連する制御成分からなる。ここで、病原因子の吸着の役割を果たす吸着材料は、血液浄化治療装置の核心部分である。
敗血症の血液浄化治療は、病原体関連分子を吸着する作用を有する吸着材料を用いて、患者の血液中の病原体関連分子を吸着して除去する。現在、日本の研究者は既に内毒素吸着材料Ｔｏｒａｙｍｙｘｉｎを開発し、これはポリスチレン繊維担体と担体に共有結合したポリミキシンＢからなり、日本（１９９４年）とヨーロッパ（２００２年）で既に販売され、また、米国では第ＩＩＩ相臨床試験が実施されている。このような吸着材料は、内毒素を効果的に吸着し、良好な生体適合性を有し、敗血症の血液浄化治療に適している（Ｈｉｓａｔａｋａ Ｓｈｏｊｉ．Ｅｘｔｒａｃｏｒｐｏｒｅａｌ ｅｎｄｏｔｏｘｉｎ ｒｅｍｏｖａｌ ｆｏｒ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｓｅｐｓｉｓ：ｅｎｄｏｔｏｘｉｎ ａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ ｃａｒｔｒｉｄｇｅ（Ｔｏｒａｙｍｙｘｉｎ）．Ｔｈｅｒ Ａｐｈｅｒ Ｄｉａｌ．２００３；７（１）：１０８−１１４．）。別の例として、特許番号ＺＬ０３１４４３８３．４の発明特許には、天然又は合成ポリマー材料を担体とし、ジメチルアミンをリガンドとして調製された内毒素吸着材料が開示され、患者の血液中の内毒素の除去に使用できる。特許番号ＺＬ０３１４４２３１．５の発明特許には、球状アガロースゲルを担体とし、有効量の親和性リガンドが固定された吸着材料が開示され、血液灌流によって血液中の内毒素を効果的に吸着できる。特許番号ＺＬ２００７１００１２５０１．１の発明特許には、アガロースゲルを担体とし、スペーサー分子によって第四級アンモニウムカチオンと疎水性分子二種類の基を結合する吸着材料が開示され、血漿中の内毒素を除去するために使用できる。発明特許ＣＮ１０１３２２９３３Ｂ及びＣＮ１０１３２２９３４Ｂにはいずれにも球状多孔質セルロースを担体とし、多能性Ｂを固定することによって得られた内毒素吸着材料が開示されている。発明特許ＣＮ１０２２４７８１７Ｂには、分子クラスターを機能基とする内毒素吸着材料及びその製造方法が開示されている。国際出願番号ＰＣＴ／ＡＴ２０１０／００００１７の発明特許には、水不溶性多孔質支持体及び担体上に固定化されたポリミキシンＢからなる内毒素吸着材料が開示されている。国際出願番号ＰＣＴ／ＡＴ２０１１／０００２７３の発明特許には、水不溶性の多孔性担体、及び担体の表面に非共有結合されたポリミキシンＢとアルブミンからなるエンドトキシン内毒素吸着材料が開示されている。発明特許ＣＮ１０３７６９０６０Ａには、セファロース、ポリビニルアルコール、セルロース又はポリスチレンを担体とし、ケタミンＢが結合された吸着剤が開示され、内毒素、細菌ゲノムＤＮＡ及びペプチドグリカンを吸着できる。しかしながら、上記吸着材料は、内毒素等の少数の病原体関連分子しか吸着できず、他の病原体関連分子には無効であるため、他の病原体関連分子に誘発された敗血症は治療効果を発揮し難い。従って、より広いスペクトルとより強い吸着能力を有する収着材料を開発することが重要である。
本発明の目的とは、現在の吸着材料の吸着能力での不足に対して、敗血症の複数種類の病原因子吸着材料を提供し、当該吸着材料は、血液等の流体中から例えば細菌内毒素、細菌ゲノムＤＮＡ、ペプチドグリカン、テイコ酸、ウイルスＲＮＡ及びザイモサンのような敗血症の複数種類の病原因子を吸着し、これら病原体関連分子を除去することによって敗血症を治療することである。
本発明の技術内容は以下の通りである。
流体中の複数種類の敗血症病原因子を吸着する吸着材料のリガンドの製造方法であって、以下のステップを有する：
１）ジクロロメタン中において、化合物１とジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネートが反応して化合物２を生成し、反応温度は２０〜３０℃であり、化合物１とジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネートとの当量比は１：０．５〜２であり、反応方程式は、
Figure 0006859357
 であり、
２）メタノールアンモニア飽和溶液中において、化合物２はレイニーニッケルと水素の存在下で、水素化還元を経て化合物３を生成し、反応温度は２０〜５０℃であり、圧力は１〜１０ＭＰａであり、レイニーニッケルの質量は化合物２の質量の１０％〜５０％であり、反応方程式は、
Figure 0006859357
 であり、
３）エタノール又はメタノール中において、化合物３とα、β−不飽和ニトリルが反応して化合物４を生成し、反応温度は２０〜５０℃であり、化合物３とα、β−不飽和ニトリルとの当量比は１：２〜３であり、反応方程式は、
Figure 0006859357
 であり、
４）ジクロロメタン中において、化合物５とＮ−ヒドロキシスクシンイミドは、ジシクロヘキシルカルボジイミド及び４−ジメチルアミノピリジンの存在下で反応して化合物６を生成し、反応温度は２０〜３０℃であり、化合物５とＮ−ヒドロキシスクシンイミドとの当量比は１：１〜２であり、反応方程式は、
Figure 0006859357
 であり、
５）ジオキサン中において、化合物４と化合物６が反応して化合物７を生成し、反応温度は３０〜５０℃であり、化合物４と化合物６との当量比は１：１〜２であり、反応方程式は、
Figure 0006859357
 であり、
６）ジオキサン中において、化合物７とＮ−ベンジルスクシンイミドカーボネートが反応して化合物８を生成し、反応温度は３０〜５０℃であり、化合物７とＮ−ベンジルスクシンイミドカーボネートとの当量比は１：１〜２であり、反応方程式は、
Figure 0006859357
 であり、
７）エタノール又はメタノール中において、化合物８とジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネートは、レイニーニッケル及び水素の存在下で反応して化合物９を生成し、反応温度は３０〜５０℃であり、化合物８とジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネートとの当量比は１：０．５〜３であり、圧力は１〜１０ＭＰａであり、レイニーニッケルの質量は化合物８の質量の１０％〜５０％であり、反応方程式は、
Figure 0006859357
 であり、
８）メタノール中において、化合物９はパラジウム炭素及び水素の存在下で反応して化合物１０を生成し、反応温度は２０〜５０℃であり、圧力は常圧から１０ＭＰａであり、パラジウム炭素の質量は化合物９の質量の１０％〜３０％であり、反応方程式は、
Figure 0006859357
 であり、
９）ジクロロメタン中において、化合物１０と無水コハク酸は、４−ジメチルアミノピリジンの存在下で反応して化合物１１を生成し、反応温度は２０〜３０℃であり、化合物１０と無水コハク酸との当量比は１：１〜２であり、反応方程式は、
Figure 0006859357
 であり、
１０）酢酸エチル中において、化合物１１とＮ−ヒドロキシスクシンイミドは反応して化合物１２を生成し、反応温度は２０〜３０℃であり、化合物１１とＮ−ヒドロキシスクシンイミドとの当量比は１：１〜２であり、反応方程式は、
Figure 0006859357
 である。
前記敗血症の複数種類の病原因子は、細菌内毒素、細菌ゲノムＤＮＡ、ペプチドグリカン、テイコ酸、ウイルスｓｓＲＮＡ、ウイルスＲＮＡ及び／又はザイモサン等の多病原体関連分子を含む。
前記流体は、ヒト血液又は血漿又は薬物注射又は液体生物学試薬である。
敗血症の複数種類の病原因子の吸着材料は、リガンドと担体が結合して組成され、その分子構造は、
Figure 0006859357
 であり、
前記担体は、アミノ化アガロース又はアミノ化ポリスチレン樹脂である。
敗血症の複数種類の病原因子吸着材料の製造方法であって、以下のステップを有する：
１）テトラヒドロフラン又はテトラヒドロフラン水溶液又はエタノール水溶液中において、化合物１２と担体Ｍが反応して化合物１３を生成し、化合物１２と担体Ｍとの質量比は０．０１〜１：１００であり、反応方程式は、
Figure 0006859357
 であり、
２）担体残留アミノ基の封止：
Ｎ、Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン中において、化合物１３に無水酢酸を追加し、反応
して担体残留アミノ基が封止された粗生成物を取得し、化合物１３と無水酢酸との当量比
は１：１〜２であり、反応方程式は、
Figure 0006859357
 であり、
３）最終生成物の製造：
メタノール中において、氷浴下で粗生成物に濃度が２〜６Ｍである塩酸メタノール溶液を追加し、反応して最終生成物ＭＴＡＭを取得し、粗生成物と塩酸メタノール溶液との体積比は１：０．５〜１．５であり、反応方程式は、
Figure 0006859357
 である。
本発明による敗血症の複数種類の病原因子吸着材料が、敗血症血液浄化治療装置の製造における用途であって、具体的に浄化治療装置の製造における吸着カラムに用いられる。
出願人の実験結果は、以下のことを示す。
（１）リガンドが共有結合によって担体に効果的に接続される。
（２）吸着材料は、血漿中の細菌内毒素、細菌ゲノムＤＮＡ、ペプチドグリカン、テイコ酸、ウイルスＲＮＡ及びザイモサンに対して有意な吸着作用を有する。
病原体関連分子は敗血症の主要な病原因子であって、医薬品でも良いし血液浄化治療でも良いし、患者の体内からこれら分子を排除することは敗血症の治療にとってとても重要である。本発明は、新規の多病原体関連分子吸着作用を有するリガンドを応じる担体に結合させ、担体は、アガロース又はポリスチレン樹脂であり、このような担体は臨床的に広く使用され、良好な血液適合性を有することが証明されている。本発明の材料は血液浄化治療装置に適応され、血中細菌内毒素、細菌ゲノムＤＮＡ、ペプチドグリカン、テイコ酸、ウイルスＲＮＡ及びザイモサンを効果的に吸着でき、敗血症の血液浄化治療方面で重要な応用見通しを有する。同時に、当業者であれば、本発明材料の使用原理に基づいて、本発明が医学治療以外にも、例えば、医薬品、生物試薬等のような溶液中でも細菌内毒素、細菌ゲノムＤＮＡ、ペプチドグリカン、テイコ酸、ウイルスＲＮＡ及びザイモサンを除去できることが理解できる。
図１は、吸着材料の分子構造模式図である。 図２は、吸着材料の水中細菌内毒素に対する静的吸着検出結果である。 図３は、吸着材料の血漿中細菌内毒素に対する静的吸着検出結果である。 図４は、吸着材料の血漿中細菌内毒素に対する動的吸着検出結果である。 図５は、吸着材料の血漿中細菌内毒素、細菌ゲノムＤＮＡ、ペプチドグリカン、テイコ酸、ウイルスｓｓＲＮＡ、ウイルスｄｓＲＮＡ及びザイモサンに対する静的吸着検出結果であり、ここで、５Ａは、吸着材料の細菌内毒素に対する吸着能力測定結果であり、５Ｂは、吸着材料の細菌ゲノムＤＮＡに対する吸着能力測定結果であり、５Ｃは、吸着材料のペプチドグリカンに対する吸着能力測定結果であり、５Ｄは、吸着材料のテイコ酸に対する吸着能力測定結果であり、５Ｅは、吸着材料のウイルスｓｓＲＮＡに対する吸着能力測定結果であり、５Ｆは、吸着材料のウイルスｄｓＲＮＡに対する吸着能力測定結果であり、５Ｇは、吸着材料のザイモサンに対する吸着能力測定結果である。 図６は、吸着材料の血漿中細菌内毒素、細菌ゲノムＤＮＡ、ペプチドグリカン、テイコ酸、ウイルスｓｓＲＮＡ、ウイルスｄｓＲＮＡ及びザイモサンに対する動的吸着検出結果である。ここで、６Ａは、吸着材料の細菌内毒素に対する吸着能力測定結果であり、ここで、６Ｂは、吸着材料の細菌ゲノムＤＮＡに対する吸着能力測定結果であり、６Ｃは、吸着材料のペプチドグリカンに対する吸着能力測定結果であり、６Ｄは、吸着材料のテイコ酸に対する吸着能力測定結果であり、６Ｅは、吸着材料のウイルスｓｓＲＮＡに対する吸着能力測定結果であり、６Ｆは、吸着材料のウイルスｄｓＲＮＡに対する吸着能力測定結果であり、６Ｇは、吸着材料のザイモサンに対する吸着能力測定結果である。 図７は、吸着材料の細菌溶解物（複数種類の病原体関連分子混合物）に対する静的吸着検出結果であり、ここで、７Ａは、吸着材料のエシェリヒア・コリ溶解物に対する吸着能力測定結果であり、７Ｂは、吸着材料のスタフィロコッカスアウレウス溶解物に対する吸着能力測定結果である。 図８は、吸着材料の細菌溶解物（複数種類の病原体関連分子混合物）に対する動的吸着検出結果である。ここで、８Ａは、吸着材料のエシェリヒア・コリ溶解物に対する吸着能力テスト結果であり、８Ｂは、吸着材料のスタフィロコッカスアウレウス溶解物に対する吸着能力テスト結果である。
以下、実施例は、本発明の詳細な説明に対する好ましい方案であって、いずれかの形で本発明を限定するものではない。
実施例において、使用される化学試薬はいずれも分析試薬であり、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社から購入された。実験用ＬＰＳ、ＬＴＡ及びザイモサンは、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社から購入され、ＣｐＧ ＤＮＡは生工生物工程（上海）株式会社から購入され、ＰＧＮ及びウイルスＲＮＡはＩｎｖｉｖｏｇｅｎ社から購入された。その他の試薬は特別な説明がない限り、いずれも市販の分析試薬を採用する。実施例において、英語略語はすべて、中国語で以下の意味を有する
Figure 0006859357
実施例１：リガンド１の製造
１．１実験方法：
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室温で６ｇのビス（２−シアノエチル）アミン（化合物１）を６０ｍＬのジクロロメタンに溶解させ、同当量のジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネートが含有されるジクロロメタン溶液を滴下し、１０時間反応させ、溶剤をスピン乾燥させ、水及び酢酸エチルを追加して３回抽出し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶剤をスピン乾燥させて化合物２を取得する。１１ｇの化合物２を４００ｍＬの飽和メタノールアンモニア溶液に溶解させ、１ｇのレイニーニッケルを追加し、４ＭＰａの水素を注入し、室温で７２時間反応させて、濾過させ、溶剤をスピン乾燥させて化合物３を取得する。５．２ｇの化合物３を４０ｍＬのエタノールに溶解させ、氷浴下で濃度１５Ｍのアクリロニトリルエタノール溶液を滴下し、４０℃で１０時間反応させ、溶剤をスピン乾燥させて化合物４を取得する。４．２ｇの３，４−ジメトキシベンゼンプロピオン酸（化合物５）をジクロロメタンに溶解させ、２．３ｇのＮ−ヒドロキシスクシンイミド、２．８ｇのジシクロヘキシルカルボジイミド及び０．５ｇの４−ジメチルアミノピリジンを追加し、室温で１２時間反応させ、濾過させ、溶剤をスピン乾燥させて化合物６を取得する。２ｇの化合物４を１５ｍＬのジオキサンに溶解させ、１．７６ｇ化合物６を追加し、５０℃で２４時間反応させて、化合物７を取得した後に、１．４８ｇのＮ−ベンジルスクシンイミドカーボネートを追加し、続いて２０時間反応させ、水及び酢酸エチルを追加して３回抽出し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶剤をスピン乾燥させて化合物８を取得する。１ｇの化合物８をエタノールに溶解させ、１ｇのジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート及び０．１ｇのレイニーニッケルを追加し、２ＭＰａの水素を注入し、４５℃で４８時間反応させ、濾過させ、溶剤をスピン乾燥させて化合物９を取得する。０．４４ｇの化合物９を５ｍＬのメタノールに溶解させ、４５ｍｇのパラジウム炭素を追加し、水素を注入し、３０℃で４８時間反応させ、濾過させ、溶剤をスピン乾燥させて化合物１０を取得する。０．４ｇの化合物１０をジクロロメタンに溶解させ、１２ｍｇの４−ジメチルアミノピリジン、８０ｍｇの無水コハク酸を追加し、２５℃で４８時間反応させ、溶剤をスピン乾燥させて化合物１１を取得した後に、５ｍＬの酢酸エチルを追加して溶解させ、９３ｍｇのＮ−ヒドロキシスクシンイミドを追加し、２５℃で７２時間反応させ、溶剤をスピン乾燥させて化合物１２（リガンド１）を取得する。
１．２実験結果：
リガンド１が取得され、マススペクトル検出によると、［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝９５７．５であり、核磁気共鳴分光法検出によると、６．８０−７．５４（ｍ、３Ｈ）、３．８６（ｓ、３Ｈ）、３．８５（ｓ、３Ｈ）、３．４０（ｂｒｓ、２Ｈ）、３．３４−３．２８（ｍ、３Ｈ）、３．２３−３．２１（ｍ、２Ｈ）、３．１５（ｂｒｓ、５Ｈ）、３．０９−２．９７（ｍ、５Ｈ）、２．９３−２．８９（ｍ、２Ｈ）、２．８２（ｂｒｓ、４Ｈ）、２．７４−２．６４（ｍ、３Ｈ）、２．５９−２．５７（ｍ、２Ｈ）、１．９０（ｓ、２Ｈ）、１．８１−１．７５（ｍ、５Ｈ）、１．６５−１．６３（ｍ、３Ｈ）、１．４４−１．４１（ｍ、２７Ｈ）であり、化学構造が以下の通りであることが確証された。
Figure 0006859357
実施例２：リガンド２の製造
２．１実験方法：
実施例１に記載の製造方法を採用し、反応は、同じ規模と条件で行われ、相違は、３、４−ジメトキシベンゼンプロピオン酸（化合物５）を３−フェニルプロピオン酸で置き換えることである。
２．２実験結果：
リガンド２が取得され、マススペクトル検出によると、［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝８９７．５であり、化学構造が以下の通りであることが確証された。
Figure 0006859357
実施例３：リガンド３の製造
３．１実験方法：
実施例１に記載の製造方法を採用し、反応は、同じ規模と条件で行われ、相違は、アクリロニトリルを３−ブテンニトリルで置き換えることである。
３．２実験結果：
リガンド３が取得され、マススペクトル検出によると、［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝９８５．５であり、化学構造が以下の通りであることが確証された。
Figure 0006859357
実施例４：リガンド４の製造
４．１実験方法：
実施例１に記載の製造方法を採用し、反応は、同じ規模と条件で行われ、相違は、３、４−ジメトキシベンゼンプロピオン酸（化合物５）を３、４−ジメトキシ安息香酸で置き換えることである。
４．２実験結果：
リガンド４が取得され、マススペクトル検出によると、［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝９２９．５であり、化学構造が以下の通りであることが確証された。
Figure 0006859357
実施例５：リガンド５の製造
５．１実験方法：
実施例１に記載の製造方法を採用し、反応は、同じ規模と条件で行われ、相違は、ビス（２−シアノエチル）アミン（化合物１）をイミノジアセトニトリルで置き換えることである。
５．２実験結果：
リガンド５が取得され、マススペクトル検出によると、［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ＝９２９．５であり、化学構造が以下の通りであることが確証された。
Figure 0006859357
実施例６：アガロースを担体とする敗血症の複数種類の病原因子吸着材料（ＭＴＡＭ０１Ｓ）の製造
６．１実験方法：
Figure 0006859357
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５ｍＬのアミノ化されたアミノ化アガロースゲル（北京韋氏博慧色譜科技有限公司から購入された）を２ｍＬのテトラヒドロフランに分散させた後に、２ｍｇのリガンド１を少量のテトラヒドロフランに溶解させて当該溶液中に滴下し、室温で４８時間反応させ、濾過させ、水で洗って、化合物１３を取得する。化合物１３へ０．５ｍＬの濃度が１０ｍＭであるＮ、Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを追加した後に、０．８ｍＬの無水酢酸を追加し、室温で８時間反応させ、濾過させて、アミノ基が封止された粗生成物を取得する。粗生成物を３ｍＬのメタノールに溶解させ、氷浴下で２ｍＬの濃度が６である塩酸メタノール溶液を滴下し、室温で約２時間反応させ、濾過させ、水で洗って、最終生成物ＭＴＡＭ０１Ｓを取得する。
１．２実験結果：
吸着材料ＭＴＡＭ０１Ｓが取得され、濃度が２０％であるエタノール溶液中に保存し、構造は図１に示す通りであって、担体部分はアガロースゲルである。
実施例７：ポリスチレン樹脂を担体とする多病原体関連分子吸着材料（ＭＴＡＭ０１Ｐ）の製造
７．１実験方法：
実施例６に記載の製造方法を採用し、反応は、同じ規模と条件で行われ、相違は、アミノ化アガロースゲルをアミノメチル化ポリ（スチレン−ｃｏ−ジビニルベンゼン）（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社から購入された）で置き換えることである。
７．２実験結果：
吸着材料ＭＴＡＭ０１Ｐが取得され、濃度が２０％であるエタノール溶液中に保存し、構造は図１に示す通りであって、担体部分はポリスチレン樹脂である。
実施例８：ＭＴＡＭ０１Ｓ及びＭＴＡＭ０１Ｐが水中細菌内毒素（ＬＰＳ）に対する静的吸着能力検出
８．１実験方法：
０．５ｍｌの内毒素（１μｇ／ｍｌ）を取ってそれぞれ０．５ｍｌのアガロース樹脂（Ｓ担体）、ポリスチレン樹脂（Ｐ担体）、ＭＴＡＭ０１Ｓ又はＭＴＡＭ０１Ｐと同体積で混合させ、３７℃で振動して１時間反応させる。上清を遠心分離して内毒素レベルを検出する。検出方法は、中国薬典（二部）付録ＸＩ Ｅ細菌内毒素検査法及び文献「衛国、鄭江．細菌内毒素定量検出の影響因素分析及び対策．局解手術学雑誌、２００３、１２：２１５−２１６．」が参照できる。実験結果は、測定された内毒素値を吸着率に変換して示す。
８．２実験結果：
アガロース及びポリスチレン樹脂が水中内毒素に対する吸着率はわずか８．３１％及び８．３９％であり、担体自体は殆ど吸着能力を有さないことを示す。ＭＴＡＭ０１Ｓ及びＭＴＡＭ０１Ｐは内毒素に対して良好な吸着活性を有し、吸着率はそれぞれ９３．８３％及び８９．４１％に達し、結果は図２に示す通りである。
実施例９：ＭＴＡＭ０１Ｓ及びＭＴＡＭ０１Ｐが血漿中細菌内毒素（ＬＰＳ）に対する静的吸着能力検出
９．１実験方法：
ヒト血漿で溶解された内毒素（１μｇ／ｍｌ）０．５ｍｌを取ってそれぞれ０．５ｍｌアガロース樹脂（Ｓ担体）、ポリスチレン樹脂（Ｐ担体）、ＭＴＡＭ０１Ｓ又はＭＴＡＭ０１Ｐと同体積で混合させ、３７℃で振動して１時間反応させる。上清を遠心分離して内毒素レベルを検出し、検出方法は、実施例８と同じである。実験結果は、測定された内毒素値を吸着率に変換して示す。
９．２実験結果：
アガロース及びポリスチレン樹脂が血漿中内毒素に対する吸着率はわずか７．６１％及び８．２０％であり、担体自体は殆ど吸着能力を有さないことを示す。ＭＴＡＭ０１Ｓ及びＭＴＡＭ０１Ｐは血漿中内毒素に対して良好な吸着活性を有し、吸着率はそれぞれ９２．６７％及び８８．１０％に達し、結果は図３に示す通りである。
実施例１０：ＭＴＡＭ０１Ｓ及びＭＴＡＭ０１Ｐが血漿中細菌内毒素（ＬＰＳ）に対する動的吸着能力検出
１０．１実験方法：
１０ｍｌのアガロース樹脂（Ｓ担体）、ポリスチレン樹脂（Ｐ担体）、ＭＴＡＭ０１Ｓ及びＭＴＡＭ０１Ｐを取ってそれぞれ直径３センチメートル、高さ１５センチメートルのクロマトグラフィーカラム中に入れ、ヒト血漿で溶解された内毒素（１μｇ／ｍｌ）１０ｍｌを採取し、濾液を繰り返して８回採取し、毎回の濾液中の内毒素レベルを検出する。検出方法は、実施例８と同じである。実験結果は、測定された内毒素値を吸着率に変換して示す。
１０．２実験結果：
アガロース及びポリスチレン樹脂は内毒素を殆ど吸着しないが、ＭＴＡＭ０１Ｓ及びＭＴＡＭ０１Ｐは内毒素に対して良好な吸着作用を有し、吸着回数に比例し、最終的に吸着率は９２．８３％及び８５．９０％に達し、結果は図４に示す通りである。
実施例１１：ＭＴＡＭ０１Ｓ及びＭＴＡＭ０１Ｐが血漿中細菌内毒素（ＬＰＳ）、細菌ゲノムＤＮＡ（ＣｐＧ ＤＮＡ）、ペプチドグリカン（ＰＧＮ）、テイコ酸（ＬＴＡ）、ウイルスｓｓＲＮＡ、ウイルスｄｓＲＮＡ及びザイモサン（Ｚｙｍｏｓａｎ）に対する静的吸着能力検出
１１．１実験方法：
ヒト血漿で溶解された内毒素（１μｇ／ｍｌ）、細菌ゲノムＤＮＡ（１０μｇ／ｍｌ）、ペプチドグリカン（１０μｇ／ｍｌ）、テイコ酸（１０μｇ／ｍｌ）、ウイルスｓｓＲＮＡ（１０μｇ／ｍｌ）、ウイルスｄｓＲＮＡ（１０μｇ／ｍｌ）及びザイモサン（１０μｇ／ｍｌ）０．５ｍｌを取ってそれぞれ０．５ｍｌアガロース樹脂（Ｓ担体）、ポリスチレン樹脂（Ｐ担体）、ＭＴＡＭ０１Ｓ又はＭＴＡＭ０１Ｐと同体積で混合させ、３７℃で振動して１時間反応させる。遠心分離して上清２０μｌを取ってインビトロで培養したマウスマクロファージ株ＲＡＷ ２６４．７細胞（１×１０６／ｍｌ）中に追加し、共同で１２時間インキュベートさせ、吸着前後病原体関連分子含有の血漿が炎症反応細胞に対する刺激作用を検出した。具体的に、検出方法はｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社のマウスＥＬＩＳＡキットの操作説明書に従って行われ、主に以下のステップを含む。(1)ＲＡＷ ２６４．７細胞培養上清液を予め捕獲抗体が被覆されている９６ウェルプレート中に追加し、室温で２時間インキュベートさせ、ＰＢＳで５回洗浄する。(2)ビオチン標識一次抗体を追加し、室温で１時間インキュベートさせ、ＰＢＳで５洗浄する。(3)アビジン標識西洋ワサビペルオキシダーゼを追加し、室温で３０分間インキュベートさせ、ＰＢＳ回洗浄する。(4)着色液を追加し、３７℃で１０分間インキュベートさせ、停止液を追加する。(5)マイクロプレートリーダーの４５０ｎｍの波長を用いて光学濃度を測定した。実験結果では、炎症反応細胞に対してＴＮＦ−αを放出する抑制率によって、吸着材料が病原体関連分子に対する吸着能力を反映している。
１１．２実験結果：
アガロース及びポリスチレン樹脂はいずれかの病原体関連分子を処理する時にいずれにも吸着作用が無く、処理前後の血漿がＲＡＷ ２６４．７細胞を刺激してＴＮＦ−αを放出することに対して抑制作用が無いことを示す。ＭＴＡＭ０１Ｓ及びＭＴＡＭ０１Ｐ処理後の血漿が炎症反応細胞に対する刺激作用は明らかに減少されて、ＭＴＡＭ０１Ｓ及びＭＴＡＭ０１Ｐ吸着処理を経た後に、血漿中の病原体関連分子レベルが大幅に減少したことを示す。結果は図５に示す通りであり、ここで、図５Ａは、ＭＴＡＭ０１Ｓ及びＭＴＡＭ０１Ｐの細菌内毒素（ＬＰＳ）に対する吸着能力測定結果を示し、図５Ｂは、ＭＴＡＭ０１Ｓ及びＭＴＡＭ０１Ｐの細菌ゲノムＤＮＡ（ＣｐＧ ＤＮＡ）に対する吸着能力測定結果を示し、図５Ｃは、ＭＴＡＭ０１Ｓ及びＭＴＡＭ０１Ｐのペプチドグリカン（ＰＧＮ）に対する吸着能力測定結果を示し、図５Ｄは、ＭＴＡＭ０１Ｓ及びＭＴＡＭ０１Ｐのテイコ酸（ＬＴＡ）に対する吸着能力測定結果を示し、図５Ｅは、ＭＴＡＭ０１Ｓ及びＭＴＡＭ０１ＰのウイルスｓｓＲＮＡに対する吸着能力測定結果を示し、図５Ｆは、ＭＴＡＭ０１Ｓ及びＭＴＡＭ０１ＰのウイルスｄｓＲＮＡに対する吸着能力測定結果を示し、図５Ｇは、ＭＴＡＭ０１Ｓ及びＭＴＡＭ０１Ｐのザイモサン（Ｚｙｍｏｓａｎ）に対する吸着能力測定結果を示す。
実施例１２：ＭＴＡＭ０１Ｓ及びＭＴＡＭ０１Ｐが血漿中細菌内毒素（ＬＰＳ）、細菌ゲノムＤＮＡ（ＣｐＧ ＤＮＡ）、ペプチドグリカン（ＰＧＮ）、テイコ酸（ＬＴＡ）、ウイルスｓｓＲＮＡ、ウイルスｄｓＲＮＡ及びザイモサン（Ｚｙｍｏｓａｎ）に対する動的吸着能力検出
１２．１実験方法：
１０ｍｌのアガロース樹脂（Ｓ担体）、ポリスチレン樹脂（Ｐ担体）、ＭＴＡＭ０１Ｓ及びＭＴＡＭ０１Ｐを取ってそれぞれ直径３センチメートル、高さ１５センチメートルのクロマトグラフィーカラム中に入れ、１０ｍｌのヒト血漿で溶解された内毒素（１μｇ／ｍｌ）、細菌ゲノムＤＮＡ（１０μｇ／ｍｌ）、ペプチドグリカン（１０μｇ／ｍｌ）、テイコ酸（１０μｇ／ｍｌ）、ウイルスｓｓＲＮＡ（１０μｇ／ｍｌ）、ウイルスｄｓＲＮＡ（１０μｇ／ｍｌ）及びザイモサン（１０μｇ／ｍｌ）を採取し、濾液を繰り返して５回採取し、１、３及び５回目の濾液を各２０μｌずつ取ってＲＡＷ ２６４．７細胞を追加し、実施例１１に記載の方法で吸着前後病原体関連分子含有の血漿が炎症反応細胞に対する刺激作用を検出した。
１２．２実験結果：
アガロース及びポリスチレン樹脂はいずれかの病原体関連分子に対していずれにも吸着作用が無く、ＭＴＡＭ０１Ｓ及びＭＴＡＭ０１Ｐは各種類の病原体関連分子を明らかに吸着でき、吸着後の血漿が炎症反応細胞に対する刺激活性が明らかに減少したことを示し（ＴＮＦ−α放出は明らかに減少した）、ＭＴＡＭ０１Ｓ及びＭＴＡＭ０１Ｐ吸着処理を経た後に、血漿中病原体関連分子レベルが大幅に減少したことを示し、結果は図６に示す通りであり、ここで、図６Ａは、ＭＴＡＭ０１Ｓ及びＭＴＡＭ０１Ｐの細菌内毒素（ＬＰＳ）に対する吸着能力測定結果を示し、図６Ｂは、ＭＴＡＭ０１Ｓ及びＭＴＡＭ０１Ｐの細菌ゲノムＤＮＡ（ＣｐＧ ＤＮＡ）に対する吸着能力測定結果を示し、図６Ｃは、ＭＴＡＭ０１Ｓ及びＭＴＡＭ０１Ｐのペプチドグリカン（ＰＧＮ）に対する吸着能力測定結果を示し、図６Ｄは、ＭＴＡＭ０１Ｓ及びＭＴＡＭ０１Ｐのテイコ酸（ＬＴＡ）に対する吸着能力測定結果を示し、図６Ｅは、ＭＴＡＭ０１Ｓ及びＭＴＡＭ０１ＰのウイルスｓｓＲＮＡに対する吸着能力測定結果を示し、図６Ｆは、ＭＴＡＭ０１Ｓ及びＭＴＡＭ０１ＰのウイルスｄｓＲＮＡに対する吸着能力測定結果を示し、図６Ｇは、ＭＴＡＭ０１Ｓ及びＭＴＡＭ０１Ｐのザイモサン（Ｚｙｍｏｓａｎ）に対する吸着能力測定結果を示す。
実施例１３：ＭＴＡＭ０１Ｓ及びＭＴＡＭ０１Ｐが細菌溶解物（複数種類の病原体関連分子混合物）に対する静的吸着能力測定
１３．１実験方法：
培養したエシェリヒア・コリ及びスタフィロコッカスアウレウス菌液をそれぞれ体積比２：１で溶解緩衝液（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ ｐＨ ８．０、１０％グリシン、０．１％ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ１００、１００ｕｇ／ｍｌリゾチーム、１ｍＭ ＰＭＳＦ）へ追加し、超音波（３回、毎回２０秒）で細胞膜を破壊し、ヒト血漿を用いて超音波後の細菌溶解物を希釈し、濃度をそれぞれ１×１０８ＣＦＵ／ｍｌ（エシェリヒア・コリ）及び５×１０８ＣＦＵ／ｍｌ（スタフィロコッカスアウレウス）の細菌数として算出した。溶解物をそれぞれ０．５ｍｌアガロース樹脂（Ｓ担体）、ポリスチレン樹脂（Ｐ担体）、ＭＴＡＭ０１Ｓ又はＭＴＡＭ０１Ｐと同体積で混合させ、３７℃で振動して１時間反応させる。遠心分離して上清２０μｌを取ってインビトロで培養したマウスマクロファージ株ＲＡＷ ２６４．７細胞（１×１０６／ｍｌ）中に追加し、共同で１２時間インキュベートさせ、吸着前後の血漿が炎症反応細胞に対する刺激作用を検出し、検出方法は実施例１１と同じである。
１３．２実験結果：
アガロース及びポリスチレン樹脂自体は各類の細菌病原体関連分子に対していずれも吸着作用を有さず、ＭＴＡＭ０１Ｓ及びＭＴＡＭ０１Ｐはエシェリヒア・コリ（グラム陰性菌）及びスタフィロコッカスアウレウス（グラム陽性菌）由来の病原体関連分子混合物に対していずれも良好な吸着活性を有し、ＭＴＡＭ０１Ｓ及びＭＴＡＭ０１Ｐ吸着後の細菌溶解物の炎症反応細胞に対する刺激活性が明らかに減少した（ＴＮＦ−α放出は明らかに減少した）ことを示し、結果は図７に示す通りであり、ここで、図７Ａは、ＭＴＡＭ０１Ｓ及びＭＴＡＭ０１Ｐのエシェリヒア・コリ溶解物に対する吸着能力測定結果を示し、図７Ｂは、ＭＴＡＭ０１Ｓ及びＭＴＡＭ０１Ｐのスタフィロコッカスアウレウス溶解物に対する吸着能力測定結果を示す。
実施例１４：ＭＴＡＭ０１Ｓ及びＭＴＡＭ０１Ｐが細菌溶解物（複数種類の病原体関連分子混合物）に対する動的吸着能力測定
１４．１実験方法：
１０ｍｌのアガロース樹脂（Ｓ担体）、ポリスチレン樹脂（Ｐ担体）、ＭＴＡＭ０１Ｓ及びＭＴＡＭ０１Ｐを取ってそれぞれ直径３センチメートル、高さ１５センチメートルのクロマトグラフィーカラム中に入れる。実施例１０に記載の方法でエシェリヒア・コリ及びスタフィロコッカスアウレウス溶解物を製造する。１０ｍｌのヒト血漿で希釈された細菌溶解物を採取し、濾液を繰り返して５回採取し、１、３及び５回目の濾液を各２０μｌずつ取ってＲＡＷ２６４．７細胞を追加し、実施例１１に記載の方法で吸着前後細菌溶解物が炎症反応細胞に対する刺激作用を検出する。
１４．２実験結果：
アガロース及びポリスチレン樹脂自体は各類の細菌病原体関連分子に対していずれも吸着作用を有せず、ＭＴＡＭ０１Ｓ及びＭＴＡＭ０１Ｐはエシェリヒア・コリ（グラム陰性菌）及びスタフィロコッカスアウレウス（グラム陽性菌）由来の病原体関連分子混合物を吸着でき、ＭＴＡＭ０１Ｓ及びＭＴＡＭ０１Ｐ吸着後の細菌溶解物の炎症反応細胞に対する刺激活性が明らかに減少した（ＴＮＦ−α放出は明らかに減少した）ことを示し、結果は図８に示す通りであり、ここで、図８Ａは、ＭＴＡＭ０１Ｓ及びＭＴＡＭ０１Ｐのエシェリヒア・コリ溶解物に対する吸着能力測定結果を示し、図８Ｂは、ＭＴＡＭ０１Ｓ及びＭＴＡＭ０１Ｐのスタフィロコッカスアウレウス溶解物に対する吸着能力測定結果を示す。
実施例１５：リガンド２〜５に基づく吸着材料の製造
１５．１実験方法：
実施例６に記載の製造方法を採用し、反応は、同じ規模と条件で行われ、相違は、リガンド１をリガンド２又はリガンド３又はリガンド４又はリガンド５で置き換え、リガンド２〜５がそれぞれアミノ化アガロースゲル又はアミノ化ポリスチレン樹脂と結合することである。
１５．２実験結果：
アガロースゲルを担体とし、リガンド２をリガンドとする吸着材料ＭＴＡＭ０２Ｓ；アガロースゲルを担体とし、リガンド３をリガンドとする吸着材料ＭＴＡＭ０３Ｓ；アガロースゲルを担体とし、リガンド４をリガンドとする吸着材料ＭＴＡＭ０４Ｓ；アガロースゲルを担体とし、リガンド５をリガンドとする吸着材料ＭＴＡＭ０５Ｓ；ポリスチレン樹脂を担体とし、リガンド２をリガンドとする吸着材料ＭＴＡＭ０２Ｐ；ポリスチレン樹脂を担体とし、リガンド３をリガンドとする吸着材料ＭＴＡＭ０３Ｐ；ポリスチレン樹脂を担体とし、リガンド４をリガンドとする吸着材料ＭＴＡＭ０４Ｐ；ポリスチレン樹脂を担体とし、リガンド５をリガンドとする吸着材料ＭＴＡＭ０５Ｐが取得される。
実施例１６：ＭＴＡＭ０２〜０５Ｓ及びＭＴＡＭ０２〜０５Ｐが血漿中細菌内毒素（ＬＰＳ）、細菌ゲノムＤＮＡ（ＣｐＧ ＤＮＡ）、ペプチドグリカン（ＰＧＮ）、テイコ酸（ＬＴＡ）、ウイルスｓｓＲＮＡ、ウイルスｄｓＲＮＡ及びザイモサン（Ｚｙｍｏｓａｎ）に対する動的吸着能力検出
１６．１実験方法：
実施例１２に記載の製造方法を採用し、反応は、同じ規模と条件で行われ、相違は、吸着材料ＭＴＡＭ０１Ｓ及びＭＴＡＭ０１ＰそれぞれをＭＴＡＭ０２〜０５Ｓ及びＭＴＡＭ０２〜０５Ｐに置き換える。
１６．２実験結果：
ＭＴＡＭ０２〜０５Ｓ及びＭＴＡＭ０２〜０５Ｐも明らかに各種類の病原体関連分子を吸着でき、吸着後の血漿の炎症反応細胞に対する刺激活性が明らかに減少したことを示した（ＴＮＦ−α放出は明らかに減少した）。５回の濾過吸着処理を経た後に、病原体関連分子が、炎症反応細胞を刺激してＴＮＦ−αを放出することに対する抑制率によって、吸着材料の病原体関連分子に対する吸着能力を示し、結果は表１に示す通りである。
Figure 0006859357
上記実験によると、本発明の吸着材料は血漿等流体中の細菌内毒素、細菌ゲノムＤＮＡ、ペプチドグリカン、テイコ酸、ウイルスＲＮＡ及びザイモサンのいずれに対して明らかな吸着作用を有し、吸着処理後の血漿は免疫細胞の刺激作用を明らかに抑制し、敗血症患者の血液浄化に適応できる。

Claims (7)

  1. 流体中の複数種類の敗血症病原因子を吸着する吸着材料のリガンドの製造方法であって、以下のステップを有する：
    １）ジクロロメタン中において、化合物１とジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネートが反応して化合物２を生成し、反応温度は２０〜３０℃であり、化合物１とジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネートとの当量比は１：０．５〜２であり、反応方程式は、
    Figure 0006859357
     であり、
    ２）メタノールアンモニア飽和溶液中において、化合物２はレイニーニッケルと水素の存在下で、水素化還元を経て化合物３を生成し、反応温度は２０〜５０℃であり、圧力は１〜１０ＭＰａであり、レイニーニッケルの質量は化合物２の質量の１０％〜５０％であり、反応方程式は、
    Figure 0006859357
     であり、
    ３）エタノール又はメタノール中において、化合物３とα、β−不飽和ニトリルが反応して化合物４を生成し、反応温度は２０〜５０℃であり、化合物３とα、β−不飽和ニトリルとの当量比は１：２〜３であり、反応方程式は、
    Figure 0006859357
     であり、
    ４）ジクロロメタン中において、化合物５とＮ−ヒドロキシスクシンイミドは、ジシクロヘキシルカルボジイミド及び４−ジメチルアミノピリジンの存在下で反応して化合物６を生成し、反応温度は２０〜３０℃であり、化合物５とＮ−ヒドロキシスクシンイミドとの当量比は１：１〜２であり、反応方程式は、
    Figure 0006859357
     であり、
    ５）ジオキサン中において、化合物４と化合物６が反応して化合物７を生成し、反応温度は３０〜５０℃であり、化合物４と化合物６との当量比は１：１〜２であり、反応方程式は、
    Figure 0006859357
     であり、
    ６）ジオキサン中において、化合物７とＮ−ベンジルスクシンイミドカーボネートが反応して化合物８を生成し、反応温度は３０〜５０℃であり、化合物７とＮ−ベンジルスクシンイミドカーボネートとの当量比は１：１〜２であり、反応方程式は、
    Figure 0006859357
     であり、
    ７）エタノール又はメタノール中において、化合物８とジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネートは、レイニーニッケル及び水素の存在下で反応して化合物９を生成し、反応温度は３０〜５０℃であり、化合物８とジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネートとの当量比は１：０．５〜３であり、圧力は１〜１０ＭＰａであり、レイニーニッケルの質量は化合物８の質量の１０％〜５０％であり、反応方程式は、
    Figure 0006859357
     であり、
    ８）メタノール中において、化合物９はパラジウム炭素及び水素の存在下で反応して化合物１０を生成し、反応温度は２０〜５０℃であり、圧力は常圧から１０ＭＰａであり、パラジウム炭素の質量は化合物９の質量の１０％〜３０％であり、反応方程式は、
    Figure 0006859357
     であり、
    ９）ジクロロメタン中において、化合物１０と無水コハク酸は、４−ジメチルアミノピリジンの存在下で反応して化合物１１を生成し、反応温度は２０〜３０℃であり、化合物１０と無水コハク酸との当量比は１：１〜２であり、反応方程式は、
    Figure 0006859357
     であり、
    １０）酢酸エチル中において、化合物１１とＮ−ヒドロキシスクシンイミドは反応して化合物１２を生成し、反応温度は２０〜３０℃であり、化合物１１とＮ−ヒドロキシスクシンイミドとの当量比は１：１〜２であり、反応方程式は、
    Figure 0006859357
     であることを特徴とする方法,
    ここで、ｎ １ ＝２又は３；ｎ ２ ＝１又は２；ｎ ３ ＝１又は２；ｎ ４ ＝２又は３；ｎ ５ ＝０又は２。
  2. 前記敗血症の複数種類の病原因子は、細菌内毒素、細菌ゲノムＤＮＡ、ペプチドグリカン、テイコ酸、ウイルスｓｓＲＮＡ、ウイルスＲＮＡ及び／又はザイモサン等の多病原体関連分子を含むことを特徴とする請求項１に記載の方法。
  3. 前記流体は、ヒト血液又は血漿又は薬物注射又は液体生物学試薬であることを特徴とする請求項１に記載の方法。
  4. 敗血症の複数種類の病原因子の吸着材料であって、
    前記材料は、請求項１〜３のいずれか１項に記載のリガンドと担体が結合して組成され、その分子構造は、
    Figure 0006859357
     であることを特徴とする材料。
  5. 前記担体は、アミノ化アガロース又はアミノ化ポリスチレン樹脂であることを特徴とする請求項４に記載の材料。
  6. 敗血症の複数種類の病原因子吸着材料の製造方法であって、以下のステップを有する：
    １）テトラヒドロフラン又はテトラヒドロフラン水溶液又はエタノール水溶液中において、化合物１２と担体Ｍが反応して化合物１３を生成し、化合物１２と担体Ｍとの質量比は０．０１〜１：１００であり、反応方程式は、
    Figure 0006859357
     であり、
    ２）担体残留アミノ基の封止：
    Ｎ、Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン中において、化合物１３に無水酢酸を追加し、反応して担体残留アミノ基が封止された粗生成物を取得し、化合物１３と無水酢酸との当量比は１：１〜２であり、反応方程式は、
    Figure 0006859357
     であり、
    ３）最終生成物の製造：
    メタノール中において、氷浴下で粗生成物に濃度が２〜６Ｍである塩酸メタノール溶液を追加し、反応して最終生成物ＭＴＡＭを取得し、粗生成物と塩酸メタノール溶液との体積比は１：０．５〜１．５であり、反応方程式は、
    Figure 0006859357
     であることを特徴とする敗血症の複数種類の病原因子吸着材料の製造方法，
    ここで、ｎ １ ＝２又は３；ｎ ２ ＝１又は２；ｎ ３ ＝１又は２；ｎ ４ ＝２又は３；ｎ ５ ＝０又は２。
  7. 請求項４又は５に記載の吸着材料を含む敗血症血液浄化治療装置。
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