JP6851868B2 - ビタミンｄ３安定化組成物 - Google Patents

Description

本発明は、ビタミンＤ３安定化組成物に関する。

ビタミンＤ（ｖｉｔａｍｉｎ Ｄ）は、ビタミンの一種であり、脂溶性ビタミンに分類される。ビタミンＤはさらにビタミンＤ２（エルゴカルシフェロール、Ｅｒｇｏｃａｌｃｉｆｅｒｏｌ）とビタミンＤ３（コレカルシフェロール、Ｃｈｏｌｅｃａｌｃｉｆｅｒｏｌ）に分けられる。ビタミンＤ２は植物に、ビタミンＤ３は動物に多く含まれ、ヒトではビタミンＤ３が重要な働きを果たしている。
ビタミンＤ３（コレカルシフェロール）は、肝臓においてＣ２５の位置でヒドロキシ化の代謝を受け、２５−ヒドロキシコレカルシフェロール（別名：２５（ＯＨ）Ｄ３、カルシフェジオール）へと変化し肝細胞に貯えられ、必要なときにα−グロブリンと結合しリンパ液中に放出される。この代謝物を含めてビタミンＤ３として利用されている。
近年、このビタミンＤ３の代謝物である２５−ヒドロキシコレカルシフェロールの作用が注目を集めている。例えば筋肉の発達促進（特許文献１）、高血糖の改善（特許文献２）、生殖能力の改善（特許文献３）、エオタキシンの増加に伴って発症するアレルギー疾患の改善（特許文献４）などが代表的である。
また、その他の新たな用途開発も始まっている。

一方、２５−ヒドロキシコレカルシフェロールやコレカルシフェロールは、化学的に極めて不安定なことが知られている。特に酸化による影響が大きい。通常、空気中で酸化されてその活性を速やかに消失することが知られている。特許文献５には、ビタミンＤと油成分、ポリグリセリン脂肪酸エステル多価アルコールを含む安定なマイクロエマルジョンの技術が開示されている。特許文献６には、活性型ビタミンＤ類を塩基性高分子物質中に
分散してなる安定化組成物が記載されている。特許文献７には、ビタミンＤ３類とジブチルヒドロキシトルエンまたはブチルヒドロキシアニソールを低級アルコールに溶解後、賦形剤として結晶セルロースまたは結晶セルロース・カルボキシメチルセルロースナトリウムのみを加えてビタミンＤ３類を吸着せしめ、次いで低級アルコールを留去して得られる安定なビタミンＤ３類が記載されている。特許文献８には、結晶セルロースまたは結晶セルロース・カルボキメチルセルロースナトリウムのみを賦形剤として添加することを特徴とする安定なビタミンＤ３類含有製剤の製造技術が開示されている。

特表２０１１−５１１８２８号公報 特表２０１１−５１１８２７号公報 特表２００９−５０４６９９号公報 特表２０１３−５４５７６６号公報 特開平１１−２３６３３０号公報 特開平０５−２７９２６０号公報 特許第２９６３７１８号公報 特許第２９１４６９０号公報

本発明者らは、活性型である２５−ヒドロキシコレカルシフェロールの安定化を研究しているが、２５−ヒドロキシコレカルシフェロールやビタミンＤ３（コレカルシフェロール）が特定の脂肪酸エステルによって安定性が増加する現象を見いだした。このような現象は従来技術には記載されていない。本発明者らは、この現象について研究を重ね、本発
明を完成させた。

すなわち、本発明は、ビタミンＤ３が安定化された組成物を提供することを課題とする。

本発明の主な構成は以下の通りである。
１．ビタミンＤ３とモノラウリン酸ソルビタン又はグリセリン重合度１〜５のグリセリン脂肪酸エステルからなる組成物。
２．ビタミンＤ３が、コレカルシフェロール及び／又は活性型ビタミンＤ３である１に記
載の組成物。
３．活性型ビタミンＤ３が、２５−ヒドロキシコレカルシフェロールである２に記載の組
成物。
４．モノラウリン酸ソルビタン又はグリセリン重合度１〜５のグリセリン脂肪酸エステルとビタミンＤ３のエタノール溶液を混合し、ついでエタノールを含む混合溶液を減圧乾燥することを特徴とするビタミンＤ３の安定化組成物を製造する方法。

本発明によりビタミンＤ３が安定化された組成物を提供できる。本発明により得られた組成物は、ビタミンＤ３が長時間安定である。また本発明の組成物は、水に溶解又は分散するため、食品や医薬品の原料として極めて有用である。

本発明の組成物の２５（ＯＨ）Ｄ３安定性試験の結果を示すグラフである。

本発明は、活性型ビタミンＤ３と、水溶性セルロース誘導体からなる組成物に係る発明である。
本発明に用いられるビタミンＤ３は、コレカルシフェロールと活性型ビタミンＤ３類である。
活性型ビタミンＤ３類としては、１α，２５−（ＯＨ）２−Ｄ３（２５−ヒドロキシコレカルシフェロール）、１α−ヒドロキシビタミンＤ３（１α−ＯＨ−Ｄ３）、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３（１α，２５−（ＯＨ）２−Ｄ３）、１α，２４−ジヒドロキシビタミンＤ３（１α，２４−（ＯＨ）２−Ｄ３）、１α，２４，２５−トリヒドロキシビタミンＤ３（１α，２４，２５−（ＯＨ）３−Ｄ３）、１α−ヒドロキシ−２４−オキソビタミンＤ３、１α，２５−ジヒドロキシ−２４−オキソビタミンＤ３、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３−２６，２３−ラクトン、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３−２６，２３−パーオキシラクトン、２６，２６，２６，２７，２７，２７−ヘキサフルオロ−１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３などの１α位に水酸基を有する活性型ビタミンＤ３類、あるいは２５−ヒドロキシビタミンＤ３（２５−ＯＨ−Ｄ３）、２４−ヒドロキシビタミンＤ３（２４−ＯＨ−Ｄ３）、２４−オキソビタミンＤ３、２４，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３（２４，２５−（ＯＨ）２−Ｄ３）、２５−ヒドロキシ−２４−オキソビタミンＤ３、２５−ヒドロキシビタミンＤ３−２６，２３−ラクトン、２５−ヒドロキシビタミンＤ３−２６，２３−パーオキシラクトンなどの１α位に水酸基を有しない活性型ビタミンＤ３類などが挙げられる。

これらの活性型ビタミンＤ３類の中でも１α，２５−（ＯＨ）２−Ｄ３（２５−ヒドロキシコレカルシフェロール又は「２５（ＯＨ）Ｄ３」）が好ましい。

本発明で用いるグリセリン脂肪酸エステルは、グリセリンの持つ３つのヒドロキシ基のうち１つないし２つに脂肪酸がエステル結合したもので、代表的な食品用乳化剤である。本発明に使用するグリセリン脂肪酸エステルは、グリセリン重合度１〜５が好ましい。

ソルビタン脂肪酸エステルは、ソルビタンと脂肪酸のエステルで、食品用乳化剤や化粧
品・工業用界面活性剤として、単独または他の界面活性剤と配合して用いられる。
ソルビタンには水酸基が４つあり、それぞれに各種の脂肪酸がエステル結合するため、
種類は多様である。本発明の目的にはモノラウリン酸ソルビタン（ソルビトール型）を示すものが適する。

本発明の組成物を得るためには、ビタミンＤ３をエタノールなどの溶媒に溶解させる。溶媒としては水又はエタノールが好ましい。この溶液をグリセリン脂肪酸エステル及び／又はソルビタン脂肪酸エステルと均質に混合し、混合終了後ビタミンＤ３を含むグリセリン脂肪酸エステル及び／又はソルビタン脂肪酸エステルの溶液を乾燥装置で乾燥させて溶媒を除去することで得ることができる。混合に当たっては、ビタミンＤ３が可能な限り小粒子として分散されるように混合する。必要に応じて高圧ホモジナイザーを用いることもできる。乾燥に当たっては、できるだけ低温で行うことが好ましく、真空凍結乾燥や減圧乾燥などの方法を採用することがより好ましい。

グリセリン脂肪酸エステル及び／又はソルビタン脂肪酸エステルとビタミンＤ３は、グリセリン脂肪酸エステル及び／又はソルビタン脂肪酸エステル１０００質量部当たりコレカルシフェロール及び／又は２５−ヒドロキシコレカルシフェロールを０．１〜１０質量部の比率となるようにすることが好ましい。
かくして得られる組成物は、グリセリン脂肪酸エステル及び／又はソルビタン脂肪酸エステル中に活性型ビタミンが分散した状態であって、グリセリン脂肪酸エステル及び／又はソルビタン脂肪酸エステルが水に溶解分散するとともに、水溶液中や油に速やかに溶解する。
またこの組成物は、澱粉や糖を加えて粉末とすることも可能である。

以下に試験例を示し、本発明を説明する。
＜グリセリン脂肪酸エステル及び／又はソルビタン脂肪酸エステルによるビタミンＤ３の安定性試験＞
（１）ビタミンＤ３
下記の表１に示すビタミンＤ３を用いて試験をおこなった。

（２）使用グリセリン脂肪酸エステル及びソルビタン脂肪酸エステル
グリセリン脂肪酸エステル及びソルビタン脂肪酸エステル類として下記の表２に示す化合物を試験に用いた。

（３）試験方法
＜試料の調製＞
１）コレカルシフェロールの調製
コレカルシフェロール結晶粉末１７５μｇを無水エタノール１７５０ｍｇに溶解させ溶液とした。
この溶液１．７５ｇを、バイアル瓶に予め秤量してあった各グリセリン脂肪酸エステル及び／又はソルビタン脂肪酸エステル１ｇに加え、ボルテックスミキサーを用いて３分間撹拌混合した。その後、エタノールを減圧乾燥して除去し、試料を得た。

２）２５（ＯＨ）Ｄ３の調製
（２５（ＯＨ）Ｄ３）１０．２０５ｍｇを無水エタノール５００ｇに溶解させ溶液とした。この溶液２．５ｇをバイアル瓶に予め秤量してあったグリセリン脂肪酸エステル又はソルビタン脂肪酸エステル１ｇに加え、ボルテックスミキサーを用いて３分間撹拌混合した。その後、エタノールを減圧乾燥し、試料を得た。

３）安定性試験
上記試料を６０℃の恒温槽で２週間保存し、ビタミンＤ３の残存率を測定した。
＜コレカルシフェロールの分析方法＞
１．コレカルシフェロール含有試料約０．０１ｇを精密に量り、２０ｍＬ程度の容器に入れ、１０ｍＬのホールピペットにてエタノールを加え撹拌し、５分間超音波にかけ撹拌後約１ｍＬをエッペンチューブに採取し、１５０００ｐｒｍ ５分間遠心する。上清を試料溶液とする。
２．コレカルシフェロール標準品を１ｍｇ／ｍＬとなるようエタノールにて調整する。つ
いで、０．１、０．５、１．０、５．０、１０．０μｇ／ｍＬとなるようエタノール溶液にて適宜希釈し、標準溶液とする。
試料溶液及び標準溶液それぞれ１０μＬを以下の条件の高速液体クロマトグラフィーに注入し、コレカルシフェロールのピーク面積を求め、標準溶液のコレカルシフェロールのピーク面積から検量線（ｙ＝ｂｘ＋ａ：ａ＝切片、ｂ＝傾き）を求め、下記に示した計算法に従って試料のコレカルシフェロールの含量を求める。
３．測定条件
検出器 ： 紫外吸光光度計（測定波長 ２６５ｎｍ）
カラム ： 内径４．６ｍｍ、長さ２５０ｍｍのステンレス管に粒径５μｍのオクタデシル化シリカゲルを充填したもの（Ｃａｐｃｅｌｌｐａｋ Ｃ−１８ ＵＧ−１２０ 株式会社資生堂製）
カラム温度： ４０℃
移動相 ： ８０％アセトニトリル水溶液
流速 ： １ｍＬ／分
４．計算法
コレカルシフェロール含量（μｇ／ｇ）＝（試料溶液のコレカルシフェロール面積−切片）／傾き×定容量／試料採取量×純度

＜２５（ＯＨ）Ｄ３の分析方法＞
１．２５（ＯＨ）Ｄ３含有試料約０．１ｇを２０ｍＬ程度の容器に精密に量り、１０ｍＬのホールピペットにてエタノールを加え撹拌し、１０分間超音波にかけ撹拌後約１ｍＬをエッペンチューブに移し、１５０００ｐｒｍ ５分間遠心する。上清を試料溶液とする。
２．２５（ＯＨ）Ｄ３標準品を１ｍｇ／ｍＬとなるようエタノールにて調整後、０．１、０．２、０．５、１．０、２．０μｇ／ｍＬとなるようエタノール溶液にて適宜希釈し、標準溶液とする。試料溶液及び標準溶液それぞれ１０μＬを以下の条件の高速液体クロマトグラフィーに注入し、２５（ＯＨ）Ｄ３のピーク面積を求め、標準溶液の２５（ＯＨ）Ｄ３のピーク面積から検量線（ｙ＝ｂｘ＋ａ：ａ＝切片、ｂ＝傾き）を求め、下記に示した計算法に従って試料の２５（ＯＨ）Ｄ３含量を求める。
３．測定条件
検出器 ： 紫外吸光光度計（測定波長 ２６５ｎｍ）
カラム ： 内径４．６ｍｍ、長さ２５０ｍｍのステンレス管に粒径５μｍのオクタデシル化シリカゲルを充填したもの（Ｃａｐｃｅｌｌｐａｋ Ｃ−１８ ＵＧ−１２０ 株式会社資生堂製）
カラム温度： ４０℃
移動相 ： ８０％アセトニトリル水溶液
流速 ： １ｍＬ／分
４．計算法
２５（ＯＨ）Ｄ３含量（μｇ／ｇ）＝（試料溶液の２５（ＯＨ）Ｄ３面積−切片）／傾き×定容量／試料採取量×純度

（３）結果
各試料の安定性試験結果を表３及び図１に示す。なお結果は、保存期間経過後の残存率で表している。

コレカルシフェロールは縮合リシノレイン酸ペンタグリセリン、オレイン酸モノ・ジグリセリド、トリオレイン酸ペンタグリセリン（サンソフトＮｏ．８１８Ｒ、サンソフトＯ−３０Ｖ、サンソフトＡ−１７３Ｅ）により安定化する。しかし、デカオレイン酸デカグリセリン、ペンタオレイン酸デカグリセリンにはこのような効果が確認できなかった。すなわちコレカルシフェロールの安定化には、グリセリン脂肪酸エステルのグリセリン重合度が関係していることが考えられる。すなわちグリセリン重合度は、５以下であることが好ましいことが予想された。
一方２５（ＯＨ）Ｄ３は、モノラウリン酸ソルビタン（Ｌ−３００）、縮合リシノレイン酸ペンタグリセリン（サンソフトＮｏ．８１８Ｒ）、モノオレイン酸ペンタグリセリン（サンソフトＡ−１７１Ｅ）、モノグリセリド（エマルジーＭＨ）によって安定化することが確認できた。

Claims (2)

1. ２５−ヒドロキシコレカルシフェロールと縮合リシノレイン酸ペンタグリセリン又はモノオレイン酸ペンタグリセリンを含有する組成物。
2. 縮合リシノレイン酸ペンタグリセリン又はモノオレイン酸ペンタグリセリンと２５−ヒドロキシコレカルシフェロールのエタノール溶液を混合し、ついでエタノールを含む混合溶液を減圧乾燥することを特徴とする請求項１に記載の組成物を製造する方法。

Images