JP6797111B2 - イヌpd−l1と結合するpd−l1抗体 - Google Patents
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Description
本出願は、2014年9月30日に出願された米国仮出願第62/057,541号および2015年6月8日に出願された米国仮出願第62/172,511号の利益を主張するものであり、これらの内容はいずれも参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
本発明の詳細な説明および実施例の全体にわたって、次の略語が用いられる:
ADCC 抗体依存性細胞傷害活性
CDC 補体依存性細胞傷害活性(cyotoxicity)
CDR ヒト抗体に関してKabatナンバリングシステムを用いて規定される、免疫グロブリン可変領域内の相補性決定領域
CHO チャイニーズハムスター卵巣
EC50 50%の有効性または結合をもたらす濃度
ELISA 酵素結合免疫吸着アッセイ
FR 抗体フレームワーク領域:CDR領域を除外した免疫グロブリン可変領域
HRP 西洋ワサビペルオキシダーゼ
IFN インターフェロン
IC50 50%阻害をもたらす濃度
IgG 免疫グロブリンG
Kabat Elvin A. Kabatが先駆けとなったヒト抗体に関する免疫グロブリンアラインメントおよびナンバリングシステム[Sequences of Proteins of Immunological Interest,5th Ed. Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,Md.(1991)]
mAb モノクローナル抗体(MabまたはMAbも)
MES 2−(N−モルフォリノ)エタンスルホン酸
MOA 作用メカニズム
NHS 正常ヒト血清
PCR ポリメラーゼ連鎖反応
PK 薬物動態学的
SEB スタフィロコッカス(Staphylococcus)エンテロトキシンB
TT 破傷風トキソイド
V領域 異なる抗体間で配列が変わるヒトIgG鎖のセグメント。軽鎖においてKabat残基109まで、重鎖においてKabat残基113まで広がっている。
VK 免疫グロブリンカッパ軽鎖可変領域
定義
本発明がより容易に理解され得るように、ある種の技術用語および科学用語を下に具体的に定義する。本書類のどこかで具体的に定義されないかぎり、本明細書中で用いられる全ての他の技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者により通例的に理解される意味を持つ。
本明細書中で用いられる抗体は、それがイヌ抗原、例えばイヌPD−L1のアミノ酸配列のその部分を含むポリペプチドに結合するが、イヌ抗原、例えばイヌPD−L1の配列のその部分を欠いた他のイヌタンパク質に結合しない場合に、所与の抗原配列(この場合、イヌ抗原、例えばイヌPD−L1のアミノ酸配列の部分)を含むポリペプチドに特異的に結合するといわれる。例えば、イヌPD−L1を含むポリペプチドに特異的に結合する抗体は、FLAG(登録商標)タグを付加した形態のイヌPD−L1に結合し得るが、他のFLAG(登録商標)タグを付加したイヌタンパク質に特異性を有して結合しない。抗体または抗体の抗原結合部位に由来する結合性化合物は、そのイヌ抗原またはそのバリアントもしくは変異タンパク質へのアフィニティーが試験された任意の他のイヌ抗原へのアフィニティーよりも少なくとも10倍大きい、より好ましくは少なくとも20倍大きい、およびよりいっそう好ましくは少なくとも100倍大きいとき、そのイヌ抗原またはそのバリアントもしくは変異タンパク質に「特異性を有して」結合する。
イヌにおいては、A、B、CおよびDと呼ばれる4つのIgG重鎖がある。これらの重鎖はイヌIgGの4つの異なるサブクラスを表し、IgGA、IgGB、IgGCおよびIgGDと呼ばれる。これら4つの重鎖のDNA配列およびアミノ酸配列は、Tangら[Vet.Immunol.Immunopathol.80:259−270(2001)]により最初に同定された。これらの重鎖に対するアミノ酸配列およびDNA配列は、GenBankデータベースからも入手可能である。例えば、IgGA重鎖のアミノ酸配列のアクセッション番号はAAL35301.1であり、IgGBのアクセッション番号はAAL35302.1であり、IgGCのアクセッション番号はAAL35303.1であり、IgGDのアクセッション番号は(AAL35304.1)である。イヌ抗体はまた2つのタイプの軽鎖、カッパおよびラムダを含有する。これらの軽鎖のDNA配列およびアミノ酸配列は、GenBankデータベースから入手することができる。例えば、カッパ軽鎖のアミノ酸配列のアクセッション番号はABY 57289.1であり、ラムダ軽鎖のアクセッション番号はABY 55569.1である。本発明において、4つのイヌIgG Fc断片の各々に対するアミノ酸配列は、上のTangらにより決定された、CH1ドメインおよびCH2ドメインの同定された境界に基づくものである。
1.エフェクター機能、例えば抗体依存性細胞傷害活性(ADCC)および補体依存性細胞傷害活性(CDC)などの欠如
2.インビボでの比較的長い半減期;および
3.工業的な標準技術、例えばプロテインAクロマトグラフィーに基づくものなどを用いて大規模で容易に精製されること
を持つ。
本発明はさらに、本明細書中に開示されているイヌ化マウス抗イヌPD−L1抗体およびその抗原結合断片の免疫グロブリン鎖をコードする核酸を含む(下の実施例を参照されたい)。
本発明のイヌ化マウス抗イヌPD−L1抗体は、下に詳述されているように、例えば抗体の特性を改良するため、親の(すなわちイヌの)モノクローナル抗体のイヌフレーム内に改変を包含するように操作することができる。
4F9および/または5F12と交差競合する交差遮断抗体およびその抗原結合断片は、イヌ化交差遮断抗体およびその抗原結合断片を包含するものであって、本発明の一部である。加えて、本発明の抗イヌPD−L1抗体または断片のいずれかと同じエピトープに結合する抗体およびその抗原結合断片もまた、本発明の一部を形成する。交差遮断抗体および抗原結合断片は、標準的な結合アッセイ(例えば、BIACore(登録商標)、ELISAまたはフローサイトメトリー)において4F9および/または5F12と交差競合するそれらの能力に基づいて同定することができる。例えば、組換えイヌPD−L1タンパク質をプレート上に固定化し、抗体のうちの1つを蛍光標識し、競合して標識抗体の結合を外す非標識抗体の能力を調べる標準的なELISAアッセイを用いることができる。加えて、またはあるいは、BIAcore(登録商標)解析を用いてその抗体の交差競合する能力を評価することもできる。試験抗体の、例えば4F9および/または5F12のイヌPD−L1への結合を阻害する能力は、試験抗体がイヌPD−L1への結合について4F9および/または5F12と競合することができ、それゆえに、いくつかの場合において4F9および/または5F12と同じイヌPD−L1上のエピトープに結合し得ることを実証するものである。より特定の実施形態において、4F9および/または5F12と交差競合し、また4F9および/または5F12と同じイヌPD−L1上のエピトープに結合する交差遮断抗体およびその抗原結合断片も本発明の一部である。
抗イヌPD−L1 mAbにより認識されるエピトープ(またはその部分)を含むペプチドおよびかかるペプチドを含む融合タンパク質は、PD−L1のPD−1への結合を遮断してT細胞活性化および免疫応答の亢進をもたらす抗体を誘導するためのワクチンとして用いられ得る。かかるワクチンは、疾患、例えばがんなどのための治療ワクチンとして、または他のワクチンへの免疫応答のエンハンサーとして作用させるのに有用であり得る。これらのペプチドをワクチンとして用いるため、1または複数のこれらのペプチドは、これらのペプチドの免疫原性を増強してペプチド特異的抗体を誘導するために化学的にまたは組換えDNA技術を通じてキャリアタンパク質にカップリングされ得る。ペプチドをキャリアタンパク質にカップリングする技術は、当業者に公知である。ペプチド(および対応する融合タンパク質)ワクチンは、例えば筋肉内(IM)、皮下(S/C)、経口、噴霧または卵内経路により、動物にワクチン接種するために用いられ得る(下も参照されたい)。かかるワクチンは、細菌、ウイルス、酵母またはバキュロウイルスのウイルス系から発現されたサブユニットタンパク質として用いられ得る。あるいはかかるペプチド(または融合タンパク質)ワクチンは、当業者に公知の方法により実行することができる、かかるペプチドまたは融合タンパク質を発現する種々のウイルスベクターまたは細菌ベクターの投与の後に送達され得る。ペプチドまたは融合タンパク質ワクチンは、1〜1000μgの用量で投与され得るものであり、アジュバントおよび許容される薬学的担体を含有してもよい。
イヌ化マウス抗イヌPD−L1抗体またはその抗原結合断片の医薬組成物または滅菌組成物を調製するため、これを薬学的に許容される担体または賦形剤と混合することができる[例えば、Remington’s Pharmaceutical Sciences and U.S.Pharmacopeia:National Formulary,Mack Publishing Company,Easton,PA(1984)を参照されたい]。
先に記載したように、イヌ化マウス抗イヌPD−L1抗体またはその抗原結合断片は、1または複数の他の治療薬(例えば化学療法薬など)と共に投与され得る。抗体は、治療薬と連結されていてもよく(免疫複合体として)、または治療薬と別に投与することもできる。後者(別投与)の場合、抗体は、治療薬の前、後もしくは同時に投与することができ、または他の公知の治療と共に投与することができる。
さらに提供されるのは、1または複数の構成成分を含むキットであって、これは、限定されるものではないが、本明細書中に論じられているPD−L1と特異的に結合する抗体または抗原結合断片(例えばイヌ化マウス抗イヌPD−L1抗体またはその抗原結合断片)を1または複数の付加的な構成成分を伴って包含するものであり、この付加的な構成成分には、限定されるものではないが本明細書中に論じられているイヌ化マウス抗イヌPD−1抗体もしくはその抗原結合断片、および/またはイヌ化マウス抗イヌCTLA−4抗体もしくはその抗原結合断片、薬学的に許容される担体および/または化学療法薬を包含するものである。代替的実施形態において、キットは、上で論じられているように、抗イヌPD−L1 mAbにより認識されるエピトープもしくはその部分(またはエピトープもしくはその部分を含む融合タンパク質)を含む1または複数のペプチドを含むことができる。結合性組成物および/または化学療法薬もしくはエピトープもしくはその部分を含むペプチド(またはエピトープもしくはその部分を含む融合タンパク質)は、医薬組成物中で、純粋な組成物としてまたは薬学的に許容される担体と組み合わせて製剤化することができる。
実施例1
イヌPD−1およびPD−L1
イヌPD−1およびPD−L1の配列:
2013年12月20日に出願された米国仮出願第61/918,946号および2014年7月30日に出願された第62/030,812号は、参照によりその全体が本明細書中に組み込まれ、配列番号49のイヌPD−1(cPD−1)に対する完全長ヌクレオチド配列[配列番号69はシグナル配列を包含する];配列番号50の対応する翻訳されたアミノ酸配列[配列番号70はシグナル配列を包含する];イヌPD−1の細胞外ドメイン(ECD)をコードするヌクレオチド配列、配列番号51;イヌPD−1のECDのアミノ酸配列、配列番号52;イヌPD−1 ECD+GTリンカーおよびヒトIgG1 Fc遺伝子のFc部のヌクレオチド配列、配列番号53;ならびにイヌPD−1 ECD+GTリンカーおよびヒトIgG1 Fc遺伝子のFc部のアミノ酸配列、配列番号54[配列番号81はシグナル配列を包含する]を提供する。
完全長イヌPD−1(cPD−1)をコードする核酸を、NCBI遺伝子バンクデータベースの検索を通じて同定した(アクセッション番号 XM_543338.4)。推定イヌPD−1タンパク質に相当する翻訳されたアミノ酸配列(アクセッション番号 XP_543338.3)を、遺伝子バンク(NCBI)タンパク質データベースの検索および同定されたアミノ酸配列とマウス、ネコおよびヒトのPD−1アミノ酸配列とのアラインメントを通じてさらに同定した。CHO細胞のためにコドン最適化された完全長イヌPD−1遺伝子に相当するDNA配列を合成し、p96793と名付けたプラスミド中にクローニングした。予測イヌPD−1のDNA配列およびタンパク質配列と既知のPD−1 DNA配列およびタンパク質配列との比較は、イヌPD−1の細胞外ドメイン(ECD)をコードするDNA配列およびイヌPD−1のECDのアミノ酸配列の同定を導いた。
完全長のイヌPD−L1をコードする核酸を、NCBI遺伝子バンクデータベースの検索を通じて同定した(アクセッション番号 XM_541302.4)。推定イヌPD−L1タンパク質に相当する翻訳されたアミノ酸配列(アクセッション番号 XP−541302.4)を、遺伝子バンク(NCBI)タンパク質データベースの検索および同定された配列と既知のPD−L1マウスおよびヒト配列とのアラインメントにより同定した。
PD−1ECD−HIS、PD−1ECD−Fc、PD−L1 ECD−HISおよびPD−L1ECD−Fcタンパク質をコードする発現プラスミドをHEK293細胞内にトランスフェクトし、Fc融合タンパク質に対してプロテインAを、またはHISタグ付加タンパク質に対してニッケル(Ni2+)カラムクロマトグラフィーを用いて、トランスフェクト細胞の上清からタンパク質を精製した。精製されたタンパク質を、下に詳述されているELISAまたは結合アッセイのために用いた。発現したタンパク質をSDS−PAGEゲルにより分析した。
ヌクレオチド配列 配列番号49はシグナル配列を伴わない。
完全長イヌPD−1 アミノ酸配列:シグナル配列は下線および太字
アミノ酸配列 配列番号50はシグナル配列を伴わない。
イヌPD−1細胞外ドメイン DNA配列:配列番号51(CHO細胞内での発現のためにコドン最適化されている)
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イヌPD−1細胞外ドメイン:配列番号52
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イヌPD−1細胞外ドメイン−ヒトIgG1 Fc DNA配列:配列番号53(HEK−293細胞内での発現のためにコドン最適化されている)
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イヌPD−1細胞外ドメイン−ヒトIgG1 Fc融合タンパク質:シグナル配列は下線および太字:アミノ酸配列番号54はシグナル配列を伴わない。
完全長イヌPD−L1 DNA配列:シグナル配列は下線および太字
ヌクレオチド配列 配列番号55はシグナル配列を伴わない。
完全長イヌPD−L1:シグナル配列は下線および太字
アミノ酸配列 配列番号56はシグナル配列を伴わない。
イヌPD−L1細胞外ドメイン DNA配列:配列番号57(CHO細胞内での発現のためにコドン最適化されている)
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イヌPD−L1細胞外ドメインタンパク質:配列番号58
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イヌPD−L1細胞外ドメイン−ヒトIgG1 Fc DNA配列:配列番号59(HEK−293細胞内での発現のためにコドン最適化されている)
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イヌPD−L1細胞外ドメイン−ヒトIgG1 Fc 融合タンパク質:配列番号60
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マウス抗イヌPD−L1抗体
抗イヌPD−L1モノクローナル抗体の作成:
計3匹のBalb/cマウスに17日の期間にわたって複数回の免疫(毎回10μgを使用)を行った。免疫した抗原はイヌPD−L1 ECD−Fc融合タンパク質であった。免疫の後、血清を各マウスから採取し、イヌPD−L1 ECD−HISタグ付加タンパク質との反応性を試験した。血清抗PD−L1 ECD−HIS力価が最も高かったマウスの脾臓細胞を、骨髄腫P3X63Ag8.653細胞株と融合した。融合の約2週間後、推定ハイブリドーマ細胞からの上清を、PD−L1 ECD−HISタグ付加タンパク質へのそれらの反応性についてELISAにより試験した。ELISAにおいて強陽性シグナルを生じたハイブリドーマを限界希釈によりサブクローニングし、イヌPD−L1 ECD−HISタグ付加タンパク質への反応性を再度試験した。
ハイブリドーマにより分泌された抗体の、イヌPD−L1のECDへの反応性をELISAにより確認した。ハイブリドーマ細胞を、10〜30日間、CELLineバイオリアクタ(Integra−biosciences)を用いて培養した。最初に細胞を、4mMのL−グルタミンおよび10%のGibcoからのUltra Low IgGウシ胎仔血清(FBS)を補充したDMEM中で維持した。ハイブリドーマ細胞を、FBS濃度を20%まで増加させた15mLの同培地中で約2×106細胞/mLの細胞密度で、CELLineバイオリアクタ細胞チャンバー内に接種した。外部チャンバーを1Lの栄養培地(4mM L−グルタミンおよび2%標準的FBSを有するDMEM)で満たした。細胞チャンバー内のハイブリドーマ細胞を3〜7日かけて約2.5×107細胞/mLまで増やした。次いで、10mLの細胞懸濁液を細胞チャンバーから回収し、新たな培地で置き換えて細胞を再度増やし、その後に回収した。この手法を、各ハイブリドーマのクローンから適当量のmAbを得るために必要なだけ繰り返した。回収した細胞懸濁液を遠心分離し、上清を0.2ミクロンろ過膜を通してろ過した。抗体精製のため、各クローンの上清を、自然流下によってProtein G Sepharose 4 Fastフロー5mLカラム(GE Healthcare)を用いて精製した。Tris−EDTA(TE)バッファー pH8.0での洗浄後、結合した抗体を0.1Mグリシンバッファー、pH2.7を用いて希釈し、その後に1M Tris、pH8.0を用いてpH中和を行った。Centriprep YM−10,10kDa NMWL遠心ろ過ユニット(Millipore)を用いて抗体を濃縮し、リン酸緩衝生理食塩水(PBS)にバッファー交換した。抗体濃度を分光光度法を用いて定量した。
完全長イヌPD−1遺伝子をプラスミドp96793内にクローニングした。このプラスミドにおいて、PD−1タンパク質の発現はhCMVプロモーターにより駆動される。CHO DXB11細胞(dhfr−)を、10%ウシ胎仔血清を補充したMEM−アルファ(Gibco)中で維持した。プラスミドp96793でのCHO細胞のトランスフェクションは、リポフェクトアミン(Invitrogen)を用いたリポソームを介した遺伝子送達によって、約6×106細胞を含有する75cm2フラスコ中で行った。48時間後、細胞を、10% FBSおよび400μg/mL ハイグロマイシンBを補充したヌクレオシドを含まないMEM−アルファ培地(選択培地)へと植え継いだ。限界希釈クローニングを、dhfr+、ハイグロマイシン抵抗性細胞のプールに対して実施した。イヌPD−1の発現について、免疫蛍光アッセイによりクローンを評価した。簡潔には、細胞単層を96ウェルプレート中で、80%アセトンで固定した。固定、乾燥させた細胞単層を次いでポリクローナルヤギ抗ヒトPD−1抗体(R&D Systems)と共に1時間インキュベートした。プレートをPBSで洗浄し、次いでフルオレセイン標識ウサギ抗ヤギIgG抗体(KPL)と共に1時間インキュベートした。プレートをPBSで洗浄した。蛍光を呈したクローンを増やし、細胞ストックを樹立した。
イヌPD−1を発現するCHO細胞株を基にした細胞ベースのELISA(CELISA)アッセイを用いて、イヌPD−L1とその受容体のイヌPD−1の間の相互作用を遮断する(例えば結合を遮断する)マウス抗イヌPD−L1抗体の能力を実証した。リガンド遮断は、イヌPD−L1/hFcタンパク質と共にこのアッセイを用いて次のように確認した:
1.96ウェルプレート内にcPD−1 CHO細胞を播種し、95〜100%コンフルエントまで細胞を増殖させる。
−3日目:1×103c/ウェル(1×105c/mL)
−2日目:2×104c/ウェル(2×105c/mL)
−1日目:4×104c/ウェル(4×105c/mL)
2.CHO培地中で抗cPDL1 mAbを3倍希釈する、30μg/mLから開始、100μL/ウェル。100μL/ウェルのCHO培地中にcPD−L1−hFcを4μg/mlになるように加え、希釈プレート中で37℃、5% CO2で振とうしながら60分間、共インキュベートする。
マウスVH鎖およびVL鎖のDNA配列ならびにそれらのCDRをコードするDNA配列を、標準的な分子生物学的方法を用いて、各ハイブリドーマからのmRNAの分離後に同定する。本明細書中に例示されている2つの抗体の軽鎖および重鎖の可変領域の配列は、下の表12中に与えられる。これらのハイブリドーマからのCDRの予測アミノ酸配列の配列番号は下の表2に収載される:
表2
CDRのアミノ酸配列
イヌ化およびイヌ化抗体の性質決定
イヌ化抗体を生産するため、イヌIgGの重鎖および軽鎖をコードするDNA配列を同定することが必要であった。イヌ重鎖のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列は、NCBI遺伝子データベースおよびタンパク質データベースから入手することができる。イヌIgGには4つの既知のIgGサブクラス:IgGA、IgGB、IgGCおよびIgGD、ならびに2つのタイプの軽鎖:カッパおよびラムダがある。表7は、改変されていないイヌFc断片のアミノ酸およびヌクレオチドの配列番号を収載している。
i)マウスmAbのVH鎖およびVL鎖のヌクレオチド配列を決定する;
ii)マウスmAbのH鎖CDRおよびL鎖CDRを同定する;
iii)イヌIgGの好適なH鎖およびL鎖を同定する;
iv)イヌIgG H鎖およびL鎖のヌクレオチド配列を決定する;
v)内因性のイヌH鎖CDRおよびL鎖CDRをコードするヌクレオチド配列を、それぞれのマウスCDRをコードするヌクレオチド配列で置き換える。また、いくつかのイヌフレームワーク残基をマウスフレームワーク領域から選択される残基で置き換えてもよい;
vi)ステップ(v)からのヌクレオチドを合成し、好適な発現プラスミド内に挿入し;適切な細胞、例えばHEK293細胞内にプラスミドをトランスフェクトする;
vii)HEK293上清からの発現抗体を精製する;そして
viii)イヌPD−L1への結合について精製抗体を試験する。
遺伝子改変イヌIgG
エフェクター機能を欠いたイヌIgGのバリアントを作成するため、多数の変異イヌIgGB重鎖を作成した[2014年7月30日に出願され、参照によりその全体が本明細書中に組み込まれる米国仮出願第62/030,812号を参照されたい]。これらのバリアントは、重鎖アミノ酸配列のFc部分中に、次の単一のまたは組み合わせた置換のうちの1つを包含し得る:P4A、D31A、N63A、G64P、T65A、A93GおよびP95A。バリアント重鎖(すなわちかかるアミノ酸置換を含有するもの)を発現プラスミド内にクローニングし、軽鎖をコードする遺伝子を含有するプラスミドと共にHEK293細胞にトランスフェクトした。HEK293細胞から発現され精製されたインタクトな抗体を、それらが免疫エフェクター機能を仲介する可能性を評価するため、FcγRIおよびC1qへの結合について調べた。表3は、遺伝子改変されたイヌ化重鎖、イヌ化重鎖;およびこれらの重鎖における遺伝子改変体をコードするプラスミドの例を収載している。バリアント重鎖を、遺伝子改変されたmAbにおけるエフェクター機能の評価のために用いた。全ての重鎖は、マウス抗イヌPD−1抗体からのCDRで構成されていた[上の米国仮出願第62/030,812号を参照されたい]。
cIgGB Fc[配列番号2]
LGGXSVFIFPPKPKDTLLIARTPEVTCVVVXLDPEDPEVQISWFVDGKQMQTAKTQPREEQFXXXYRVVSVLPIGHQDWLKGKQFTCKVNNKXLXSPIERTISKARGQAHQPSVYVLPPSREELSKNTVSLTCLIKDFFPPDIDVEWQSNGQQEPESKYRTTPPQLDEDGSYFLYSKLSVDKSRWQRGDTFICAVMHEALHNHYTQESLSHSPGK
cIgGB Fc[配列番号1]
ctgggcggcnnnagcgtgtttatttttccgccgaaaccgaaagataccctgctgattgcgcgcaccccggaagtgacctgcgtggtggtgnnnctggatccggaagatccggaagtgcagattagctggtttgtggatggcaaacagatgcagaccgcgaaaacccagccgcgcgaagaacagtttnnnnnnnnntatcgcgtggtgagcgtgctgccgattggccatcaggattggctgaaaggcaaacagtttacctgcaaagtgaacaacaaannnctgnnnagcccgattgaacgcaccattagcaaagcgcgcggccaggcgcatcagccgagcgtgtatgtgctgccgccgagccgcgaagaactgagcaaaaacaccgtgagcctgacctgcctgattaaagatttttttccgccggatattgatgtggaatggcagagcaacggccagcaggaaccggaaagcaaatatcgcaccaccccgccgcagctggatgaagatggcagctattttctgtatagcaaactgagcgtggataaaagccgctggcagcgcggcgatacctttatttgcgcggtgatgcatgaagcgctgcataaccattatacccaggaaagcctgagccatagcccgggcaaa
cIgGC Fc[配列番号4]
LGGXSVFIFPPKPKDILVTARTPTVTCVVVXLDPENPEVQISWFVDSKQVQTANTQPREEQSXXXYRVVSVLPIGHQDWLSGKQFKCKVNNKXLXSPIEEIISKTPGQAHQPNVYVLPPSRDEMSKNTVTLTCLVKDFFPPEIDVEWQSNGQQEPESKYRMTPPQLDEDGSYFLYSKLSVDKSRWQRGDTFICAVMHEALHNHYTQISLSHSPGK
cIgGC Fc[配列番号3]
ctgggcggcnnnagcgtgtttatttttccgccgaaaccgaaagatattctggtgaccgcgcgcaccccgaccgtgacctgcgtggtggtgnnnctggatccggaaaacccggaagtgcagattagctggtttgtggatagcaaacaggtgcagaccgcgaacacccagccgcgcgaagaacagagcnnnnnnnnntatcgcgtggtgagcgtgctgccgattggccatcaggattggctgagcggcaaacagtttaaatgcaaagtgaacaacaaannnctgnnnagcccgattgaagaaattattagcaaaaccccgggccaggcgcatcagccgaacgtgtatgtgctgccgccgagccgcgatgaaatgagcaaaaacaccgtgaccctgacctgcctggtgaaagatttttttccgccggaaattgatgtggaatggcagagcaacggccagcaggaaccggaaagcaaatatcgcatgaccccgccgcagctggatgaagatggcagctattttctgtatagcaaactgagcgtggataaaagccgctggcagcgcggcgatacctttatttgcgcggtgatgcatgaagcgctgcataaccattatacccagattagcctgagccatagcccgggcaaa
cIgGD Fc(DヒンジのS−−>P)fabアーム交換[配列番号6]
PKESTCKCIPPCPVPESLGGPSVFIFPPKPKDILRITRTPEITCVVLDLGREDPEVQISWFVDGKEVHTAKTQPREQQFNSTYRVVSVLPIEHQDWLTGKEFKCRVNHIGLPSPIERTISKARGQAHQPSVYVLPPSPKELSSSDTVTLTCLIKDFFPPEIDVEWQSNGQPEPESKYHTTAPQLDEDGSYFLYSKLSVDKSRWQQGDTFTCAVMHEALQNHYTDLSLSHSPGK
cIgGD Fc(DヒンジのS−−>P)fabアーム交換[配列番号5]
ccgaaagaaagcacctgcaaatgcattccgccgtgcccggtgccggaaagcctgggcggcccgagcgtgtttatttttccgccgaaaccgaaagatattctgcgcattacccgcaccccggaaattacctgcgtggtgctggatctgggccgcgaagatccggaagtgcagattagctggtttgtggatggcaaagaagtgcataccgcgaaaacccagccgcgcgaacagcagtttaacagcacctatcgcgtggtgagcgtgctgccgattgaacatcaggattggctgaccggcaaagaatttaaatgccgcgtgaaccatattggcctgccgagcccgattgaacgcaccattagcaaagcgcgcggccaggcgcatcagccgagcgtgtatgtgctgccgccgagcccgaaagaactgagcagcagcgataccgtgaccctgacctgcctgattaaagatttttttccgccggaaattgatgtggaatggcagagcaacggccagccggaaccggaaagcaaatatcataccaccgcgccgcagctggatgaagatggcagctattttctgtatagcaaactgagcgtggataaaagccgctggcagcagggcgatacctttacctgcgcggtgatgcatgaagcgctgcagaaccattataccgatctgagcctgagccatagcccgggcaaa
cIgGD Fc(Aヒンジ)fabアーム交換[配列番号8]
FNECRCTDTPPCPVPEPLGGPSVFIFPPKPKDILRITRTPEITCVVLDLGREDPEVQISWFVDGKEVHTAKTQPREQQFNSTYRVVSVLPIEHQDWLTGKEFKCRVNHIGLPSPIERTISKARGQAHQPSVYVLPPSPKELSSSDTVTLTCLIKDFFPPEIDVEWQSNGQPEPESKYHTTAPQLDEDGSYFLYSKLSVDKSRWQQGDTFTCAVMHEALQNHYTDLSLSHSPGK
cIgGD Fc(Aヒンジ)fabアーム交換[配列番号7]
tttaacgaatgccgctgcaccgataccccgccgtgcccggtgccggaaccgctgggcggcccgagcgtgtttatttttccgccgaaaccgaaagatattctgcgcattacccgcaccccggaaattacctgcgtggtgctggatctgggccgcgaagatccggaagtgcagattagctggtttgtggatggcaaagaagtgcataccgcgaaaacccagccgcgcgaacagcagtttaacagcacctatcgcgtggtgagcgtgctgccgattgaacatcaggattggctgaccggcaaagaatttaaatgccgcgtgaaccatattggcctgccgagcccgattgaacgcaccattagcaaagcgcgcggccaggcgcatcagccgagcgtgtatgtgctgccgccgagcccgaaagaactgagcagcagcgataccgtgaccctgacctgcctgattaaagatttttttccgccggaaattgatgtggaatggcagagcaacggccagccggaaccggaaagcaaatatcataccaccgcgccgcagctggatgaagatggcagctattttctgtatagcaaactgagcgtggataaaagccgctggcagcagggcgatacctttacctgcgcggtgatgcatgaagcgctgcagaac
cattataccgatctgagcctgagccatagcccgggcaaa
cIgGD Fc(Bヒンジ)fabアーム交換[配列番号10]
PKRENGRVPRPPDCPKCPAPEMLGGPSVFIFPPKPKDILRITRTPEITCVVLDLGREDPEVQISWFVDGKEVHTAKTQPREQQFNSTYRVVSVLPIEHQDWLTGKEFKCRVNHIGLPSPIERTISKARGQAHQPSVYVLPPSPKELSSSDTVTLTCLIKDFFPPEIDVEWQSNGQPEPESKYHTTAPQLDEDGSYFLYSKLSVDKSRWQQGDTFTCAVMHEALQNHYTDLSLSHSPGK
cIgGD Fc(Bヒンジ)fabアーム交換[配列番号9]
ccgaaacgcgaaaacggccgcgtgccgcgcccgccggattgcccgaaatgcccggcgccggaaatgctgggcggcccgagcgtgtttatttttccgccgaaaccgaaagatattctgcgcattacccgcaccccggaaattacctgcgtggtgctggatctgggccgcgaagatccggaagtgcagattagctggtttgtggatggcaaagaagtgcataccgcgaaaacccagccgcgcgaacagcagtttaacagcacctatcgcgtggtgagcgtgctgccgattgaacatcaggattggctgaccggcaaagaatttaaatgccgcgtgaaccatattggcctgccgagcccgattgaacgcaccattagcaaagcgcgcggccaggcgcatcagccgagcgtgtatgtgctgccgccgagcccgaaagaactgagcagcagcgataccgtgaccctgacctgcctgattaaagatttttttccgccggaaattgatgtggaatggcagagcaacggccagccggaaccggaaagcaaatatcataccaccgcgccgcagctggatgaagatggcagctattttctgtatagcaaactgagcgtggataaaagccgctggcagcagggcgatacctttacctgcgcggtgatgcatgaagcgctgcagaaccattataccgatctgagcctgagccatagcccgggcaaa
cIgGD Fc(Cヒンジ)fabアーム交換[配列番号12]
AKECECKCNCNNCPCPGCGLLGGPSVFIFPPKPKDILRITRTPEITCVVLDLGREDPEVQISWFVDGKEVHTAKTQPREQQFNSTYRVVSVLPIEHQDWLTGKEFKCRVNHIGLPSPIERTISKARGQAHQPSVYVLPPSPKELSSSDTVTLTCLIKDFFPPEIDVEWQSNGQPEPESKYHTTAPQLDEDGSYFLYSKLSVDKSRWQQGDTFTCAVMHEALQNHYTDLSLSHSPGK
cIgGD Fc(Cヒンジ)fabアーム交換[配列番号11]
gccaaggagtgcgagtgcaagtgcaactgcaacaactgcccctgccccggctgcggcctgctgggcggccccagcgtgttcatcttcccccccaagcccaaggacatcctgagaatcaccagaacccccgagatcacctgcgtggtgctggacctgggcagagaggaccccgaggtgcagatcagctggttcgtggacggcaaggaggtgcacaccgccaagacccagcccagagagcagcagttcaacagcacctacagagtggtgagcgtgctgcccatcgagcaccaggactggctgaccggcaaggagttcaagtgcagagtgaaccacatcggcctgcccagccccatcgagagaaccatcagcaaggccagaggccaggcccaccagcccagcgtgtacgtgctgccccccagccccaaggagctgagcagcagcgacaccgtgaccctgacctgcctgatcaaggacttcttcccccccgagatcgacgtggagtggcagagcaacggccagcccgagcccgagagcaagtaccacaccaccgccccccagctggacgaggacggcagctacttcctgtacagcaagctgagcgtggacaagagcagatggcagcagggcgacaccttcacctgcgccgtgatgcacgaggccctgcagaaccactacaccgacctgagcctgagccacagccccggcaag
野生型Fc
cIgGA Fc[配列番号62]
LGGPSVLIFPPKPKDILRITRTPEVTCVVLDLGREDPEVQISWFVDGKEVHTAKTQSREQQFNGTYRVVSVLPIEHQDWLTGKEFKCRVNHIDLPSPIERTISKARGRAHKPSVYVLPPSPKELSSSDTVSITCLIKDFYPPDIDVEWQSNGQQEPERKHRMTPPQLDEDGSYFLYSKLSVDKSRWQQGDPFTCAVMHETLQNHYTDLSLSHSPGK
cIgGA Fc[配列番号61]
ctgggcggccccagcgtgctgatcttcccccccaagcccaaggacatcctgagaatcaccagaacccccgaggtgacctgcgtggtgctggacctgggcagagaggaccccgaggtgcagatcagctggttcgtggacggcaaggaggtgcacaccgccaagacccagagcagagagcagcagttcaacggcacctacagagtggtgagcgtgctgcccatcgagcaccaggactggctgaccggcaaggagttcaagtgcagagtgaaccacatcgacctgcccagccccatcgagagaaccatcagcaaggccagaggcagagcccacaagcccagcgtgtacgtgctgccccccagccccaaggagctgagcagcagcgacaccgtgagcatcacctgcctgatcaaggacttctacccccccgacatcgacgtggagtggcagagcaacggccagcaggagcccgagagaaagcacagaatgacccccccccagctggacgaggacggcagctacttcctgtacagcaagctgagcgtggacaagagcagatggcagcagggcgaccccttcacctgcgccgtgatgcacgagaccctgcagaaccactacaccgacctgagcctgagccacagccccggcaag
cIgGD Fc[配列番号64]
LGGPSVFIFPPKPKDILRITRTPEITCVVLDLGREDPEVQISWFVDGKEVHTAKTQPREQQFNSTYRVVSVLPIEHQDWLTGKEFKCRVNHIGLPSPIERTISKARGQAHQPSVYVLPPSPKELSSSDTVTLTCLIKDFFPPEIDVEWQSNGQPEPESKYHTTAPQLDEDGSYFLYSKLSVDKSRWQQGDTFTCAVMHEALQNHYTDLSLSHSPGK
cIgGD Fc[配列番号63]
ctgggcggccccagcgtgttcatcttcccccccaagcccaaggacatcctgagaatcaccagaacccccgagatcacctgcgtggtgctggacctgggcagagaggaccccgaggtgcagatcagctggttcgtggacggcaaggaggtgcacaccgccaagacccagcccagagagcagcagttcaacagcacctacagagtggtgagcgtgctgcccatcgagcaccaggactggctgaccggcaaggagttcaagtgcagagtgaaccacatcggcctgcccagccccatcgagagaaccatcagcaaggccagaggccaggcccaccagcccagcgtgtacgtgctgccccccagccccaaggagctgagcagcagcgacaccgtgaccctgacctgcctgatcaaggacttcttcccccccgagatcgacgtggagtggcagagcaacggccagcccgagcccgagagcaagtaccacaccaccgccccccagctggacgaggacggcagctacttcctgtacagcaagctgagcgtggacaagagcagatggcagcagggcgacaccttcacctgcgccgtgatgcacgaggccctgcagaaccactacaccgacctgagcctgagccacagccccggcaag
cIgGB Fc[配列番号66]
LGGPSVFIFPPKPKDTLLIARTPEVTCVVVDLDPEDPEVQISWFVDGKQMQTAKTQPREEQFNGTYRVVSVLPIGHQDWLKGKQFTCKVNNKALPSPIERTISKARGQAHQPSVYVLPPSREELSKNTVSLTCLIKDFFPPDIDVEWQSNGQQEPESKYRTTPPQLDEDGSYFLYSKLSVDKSRWQRGDTFICAVMHEALHNHYTQESLSHSPGK
cIgGB Fc[配列番号65]
ctgggcggccccagcgtgttcatcttcccccccaagcccaaggacaccctgctgatcgccagaacccccgaggtgacctgcgtggtggtggacctggaccccgaggaccccgaggtgcagatcagctggttcgtggacggcaagcagatgcagaccgccaagacccagcccagagaggagcagttcaacggcacctacagagtggtgagcgtgctgcccatcggccaccaggactggctgaagggcaagcagttcacctgcaaggtgaacaacaaggccctgcccagccccatcgagagaaccatcagcaaggccagaggccaggcccaccagcccagcgtgtacgtgctgccccccagcagagaggagctgagcaagaacaccgtgagcctgacctgcctgatcaaggacttcttcccccccgacatcgacgtggagtggcagagcaacggccagcaggagcccgagagcaagtacagaaccacccccccccagctggacgaggacggcagctacttcctgtacagcaagctgagcgtggacaagagcagatggcagagaggcgacaccttcatctgcgccgtgatgcacgaggccctgcacaaccactacacccaggagagcctgagccacagccccggcaag
cIgGC Fc[配列番号68]
LGGPSVFIFPPKPKDILVTARTPTVTCVVVDLDPENPEVQISWFVDSKQVQTANTQPREEQSNGTYRVVSVLPIGHQDWLSGKQFKCKVNNKALPSPIEEIISKTPGQAHQPNVYVLPPSRDEMSKNTVTLTCLVKDFFPPEIDVEWQSNGQQEPESKYRMTPPQLDEDGSYFLYSKLSVDKSRWQRGDTFICAVMHEALHNHYTQISLSHSPGK
cIgGC Fc[配列番号67]
ctgggcggccccagcgtgttcatcttcccccccaagcccaaggacatcctggtgaccgccagaacccccaccgtgacctgcgtggtggtggacctggaccccgagaaccccgaggtgcagatcagctggttcgtggacagcaagcaggtgcagaccgccaacacccagcccagagaggagcagagcaacggcacctacagagtggtgagcgtgctgcccatcggccaccaggactggctgagcggcaagcagttcaagtgcaaggtgaacaacaaggccctgcccagccccatcgaggagatcatcagcaagacccccggccaggcccaccagcccaacgtgtacgtgctgccccccagcagagacgagatgagcaagaacaccgtgaccctgacctgcctggtgaaggacttcttcccccccgagatcgacgtggagtggcagagcaacggccagcaggagcccgagagcaagtacagaatgacccccccccagctggacgaggacggcagctacttcctgtacagcaagctgagcgtggacaagagcagatggcagagaggcgacaccttcatctgcgccgtgatgcacgaggccctgcacaaccactacacccagatcagcctgagccacagccccggcaag
個々の置換重鎖
4F9−VH3 cIgGB[配列番号26]
EVQLVQSGGDLVKPGGSVRLSCVASGFTFSYAMSWVRQAPGKGLQWMGTISDGGSYTHYPDNLMGRFTFSLDTAKNTAYLQLNSLRAEDTAVYYCARESYDGYYVANWGQGTLVTVSSASTTAPSVFPLAPSCGSTSGSTVALACLVSGYFPEPVTVSWNSGSLTSGVHTFPSVLQSSGLYSLSSMVTVPSSRWPSETFTCNVAHPASKTKVDKPVPKRENGRVPRPPDCPKCPAPEMLGGXSVFIFPPKPKDTLLIARTPEVTCVVVXLDPEDPEVQISWFVDGKQMQTAKTQPREEQFXXXYRVVSVLPIGHQDWLKGKQFTCKVNNKXLXSPIERTISKARGQAHQPSVYVLPPSREELSKNTVSLTCLIKDFFPPDIDVEWQSNGQQEPESKYRTTPPQLDEDGSYFLYSKLSVDKSRWQRGDTFICAVMHEALHNHYTQESLSHSPGK
4F9−VH3 cIgGB DNA[配列番号25]
gaggtgcagctggtgcagagcggcggcgacctggtgaagcccggcggcagcgtgagactgagctgcgtggccagcggcttcaccttcagctacgccatgagctgggtgagacaggcccccggcaagggcctgcagtggatgggcaccatcagcgacggcggcagctacacccactaccccgacaacctgatgggcagattcaccttcagcctggacaccgccaagaacaccgcctacctgcagctgaacagcctgagagccgaggacaccgccgtgtactactgcgccagagagagctacgacggctactacgtggccaactggggccagggcaccctggtgaccgtgagcagcgccagcaccaccgcccccagcgtgttccccctggcccccagctgcggcagcaccagcggcagcaccgtggccctggcctgcctggtgagcggctacttccccgagcccgtgaccgtgagctggaacagcggcagcctgaccagcggcgtgcacaccttccccagcgtgctgcagagcagcggcctgtacagcctgagcagcatggtgaccgtgcccagcagcagatggcccagcgagaccttcacctgcaacgtggcccaccccgccagcaagaccaaggtggacaagcccgtgcccaagagagagaacggcagagtgcccagaccccccgactgccccaagtgccccgcccccgagatgctgggcggcnnnagcgtgttcatcttcccccccaagcccaaggacaccctgctgatcgccagaacccccgaggtgacctgcgtggtggtgnnnctggaccccgaggaccccgaggtgcagatcagctggttcgtggacggcaagcagatgcagaccgccaagacccagcccagagaggagcagttcnnnnnnnnntacagagtggtgagcgtgctgcccatcggccaccaggactggctgaagggcaagcagttcacctgcaaggtgaacaacaagnnnctgnnnagccccatcgagagaaccatcagcaaggccagaggccaggcccaccagcccagcgtgtacgtgctgccccccagcagagaggagctgagcaagaacaccgtgagcctgacctgcctgatcaaggacttcttcccccccgacatcgacgtggagtggcagagcaacggccagcaggagcccgagagcaagtacagaaccacccccccccagctggacgaggacggcagctacttcctgtacagcaagctgagcgtggacaagagcagatggcagagaggcgacaccttcatctgcgccgtgatgcacgaggccctgcacaaccactacacccaggagagcctgagccacagccccggcaag
4F9−VH3 cIgGC[配列番号28]
EVQLVQSGGDLVKPGGSVRLSCVASGFTFSYAMSWVRQAPGKGLQWMGTISDGGSYTHYPDNLMGRFTFSLDTAKNTAYLQLNSLRAEDTAVYYCARESYDGYYVANWGQGTLVTVSSASTTAPSVFPLAPSCGSQSGSTVALACLVSGYIPEPVTVSWNSVSLTSGVHTFPSVLQSSGLYSLSSMVTVPSSRWPSETFTCNVAHPATNTKVDKPVAKECECKCNCNNCPCPGCGLLGGXSVFIFPPKPKDILVTARTPTVTCVVVXLDPENPEVQISWFVDSKQVQTANTQPREEQSXXXYRVVSVLPIGHQDWLSGKQFKCKVNNKXLXSPIEEIISKTPGQAHQPNVYVLPPSRDEMSKNTVTLTCLVKDFFPPEIDVEWQSNGQQEPESKYRMTPPQLDEDGSYFLYSKLSVDKSRWQRGDTFICAVMHEALHNHYTQISLSHSPGK
4F9−VH3 cIgGC DNA[配列番号27]
gaggtgcagctggtgcagagcggcggcgacctggtgaagcccggcggcagcgtgagactgagctgcgtggccagcggcttcaccttcagctacgccatgagctgggtgagacaggcccccggcaagggcctgcagtggatgggcaccatcagcgacggcggcagctacacccactaccccgacaacctgatgggcagattcaccttcagcctggacaccgccaagaacaccgcctacctgcagctgaacagcctgagagccgaggacaccgccgtgtactactgcgccagagagagctacgacggctactacgtggccaactggggccagggcaccctggtgaccgtgagcagcgccagcaccaccgcccccagcgtgttccccctggcccccagctgcggcagccagagcggcagcaccgtggccctggcctgcctggtgagcggctacatccccgagcccgtgaccgtgagctggaacagcgtgagcctgaccagcggcgtgcacaccttccccagcgtgctgcagagcagcggcctgtacagcctgagcagcatggtgaccgtgcccagcagcagatggcccagcgagaccttcacctgcaacgtggcccaccccgccaccaacaccaaggtggacaagcccgtggccaaggagtgcgagtgcaagtgcaactgcaacaactgcccctgccccggctgcggcctgctgggcggcnnnagcgtgttcatcttcccccccaagcccaaggacatcctggtgaccgccagaacccccaccgtgacctgcgtggtggtgnnnctggaccccgagaaccccgaggtgcagatcagctggttcgtggacagcaagcaggtgcagaccgccaacacccagcccagagaggagcagagcnnnnnnnnntacagagtggtgagcgtgctgcccatcggccaccaggactggctgagcggcaagcagttcaagtgcaaggtgaacaacaagnnnctgnnnagccccatcgaggagatcatcagcaagacccccggccaggcccaccagcccaacgtgtacgtgctgccccccagcagagacgagatgagcaagaacaccgtgaccctgacctgcctggtgaaggacttcttcccccccgagatcgacgtggagtggcagagcaacggccagcaggagcccgagagcaagtacagaatgacccccccccagctggacgaggacggcagctacttcctgtacagcaagctgagcgtggacaagagcagatggcagagaggcgacaccttcatctgcgccgtgatgcacgaggccctgcacaaccactacacccagatcagcctgagccacagccccggcaag
5F12−VH3 CIgGB[配列番号30]
EVQLVQSGGDLVKPGGSVRLSCVASFTFDYYMNWVRQAPGKGLQWIGRWIFPGSGATYYNERFMGKATISADTAKNTAYMQLNSLRAEDTAVYYCLRSDWDVGDFWGQGTLVTVSSASTTAPSVFPLAPSCGSTSGSTVALACLVSGYFPEPVTVSWNSGSLTSGVHTFPSVLQSSGLYSLSSMVTVPSSRWPSETFTCNVAHPASKTKVDKPVPKRENGRVPRPPDCPKCPAPEMLGGXSVFIFPPKPKDTLLIARTPEVTCVVVXLDPEDPEVQISWFVDGKQMQTAKTQPREEQFXXXYRVVSVLPIGHQDWLKGKQFTCKVNNKXLXSPIERTISKARGQAHQPSVYVLPPSREELSKNTVSLTCLIKDFFPPDIDVEWQSNGQQEPESKYRTTPPQLDEDGSYFLYSKLSVDKSRWQRGDTFICAVMHEALHNHYTQESLSHSPGK
5F12−VH3 CIgGB DNA[配列番号29]
gaggtgcagctggtgcagagcggcggcgacctggtgaagcccggcggcagcgtgagactgagctgcgtggccagcttcaccttcgactactacatgaactgggtgagacaggcccccggcaagggcctgcagtggatcggcagatggatcttccccggcagcggcgccacctactacaacgagagattcatgggcaaggccaccatcagcgccgacaccgccaagaacaccgcctacatgcagctgaacagcctgagagccgaggacaccgccgtgtactactgcctgagaagcgactgggacgtgggcgacttctggggccagggcaccctggtgaccgtgagcagcgccagcaccaccgcccccagcgtgttccccctggcccccagctgcggcagcaccagcggcagcaccgtggccctggcctgcctggtgagcggctacttccccgagcccgtgaccgtgagctggaacagcggcagcctgaccagcggcgtgcacaccttccccagcgtgctgcagagcagcggcctgtacagcctgagcagcatggtgaccgtgcccagcagcagatggcccagcgagaccttcacctgcaacgtggcccaccccgccagcaagaccaaggtggacaagcccgtgcccaagagagagaacggcagagtgcccagaccccccgactgccccaagtgccccgcccccgagatgctgggcggcnnnagcgtgttcatcttcccccccaagcccaaggacaccctgctgatcgccagaacccccgaggtgacctgcgtggtggtgnnnctggaccccgaggaccccgaggtgcagatcagctggttcgtggacggcaagcagatgcagaccgccaagacccagcccagagaggagcagttcnnnnnnnnntacagagtggtgagcgtgctgcccatcggccaccaggactggctgaagggcaagcagttcacctgcaaggtgaacaacaagnnnctgnnnagccccatcgagagaaccatcagcaaggccagaggccaggcccaccagcccagcgtgtacgtgctgccccccagcagagaggagctgagcaagaacaccgtgagcctgacctgcctgatcaaggacttcttcccccccgacatcgacgtggagtggcagagcaacggccagcaggagcccgagagcaagtacagaaccacccccccccagctggacgaggacggcagctacttcctgtacagcaagctgagcgtggacaagagcagatggcagagaggcgacaccttcatctgcgccgtgatgcacgaggccctgcacaaccactacacccaggagagcctgagccacagccccggcaag
5F12−VH3−cIgGC Fc[配列番号32]
EVQLVQSGGDLVKPGGSVRLSCVASFTFDYYMNWVRQAPGKGLQWIGRWIFPGSGATYYNERFMGKATISADTAKNTAYMQLNSLRAEDTAVYYCLRSDWDVGDFWGQGTLVTVSSASTTAPSVFPLAPSCGSQSGSTVALACLVSGYIPEPVTVSWNSVSLTSGVHTFPSVLQSSGLYSLSSMVTVPSSRWPSETFTCNVAHPATNTKVDKPVAKECECKCNCNNCPCPGCGLLGGXSVFIFPPKPKDILVTARTPTVTCVVVXLDPENPEVQISWFVDSKQVQTANTQPREEQSXXXYRVVSVLPIGHQDWLSGKQFKCKVNNKXLXSPIEEIISKTPGQAHQPNVYVLPPSRDEMSKNTVTLTCLVKDFFPPEIDVEWQSNGQQEPESKYRMTPPQLDEDGSYFLYSKLSVDKSRWQRGDTFICAVMHEALHNHYTQISLSHSPGK
5F12−VH3−cIgGC Fc DNA[配列番号31]
gaggtgcagctggtgcagagcggcggcgacctggtgaagcccggcggcagcgtgagactgagctgcgtggccagcttcaccttcgactactacatgaactgggtgagacaggcccccggcaagggcctgcagtggatcggcagatggatcttccccggcagcggcgccacctactacaacgagagattcatgggcaaggccaccatcagcgccgacaccgccaagaacaccgcctacatgcagctgaacagcctgagagccgaggacaccgccgtgtactactgcctgagaagcgactgggacgtgggcgacttctggggccagggcaccctggtgaccgtgagcagcgccagcaccaccgcccccagcgtgttccccctggcccccagctgcggcagccagagcggcagcaccgtggccctggcctgcctggtgagcggctacatccccgagcccgtgaccgtgagctggaacagcgtgagcctgaccagcggcgtgcacaccttccccagcgtgctgcagagcagcggcctgtacagcctgagcagcatggtgaccgtgcccagcagcagatggcccagcgagaccttcacctgcaacgtggcccaccccgccaccaacaccaaggtggacaagcccgtggccaaggagtgcgagtgcaagtgcaactgcaacaactgcccctgccccggctgcggcctgctgggcggcnnnagcgtgttcatcttcccccccaagcccaaggacatcctggtgaccgccagaacccccaccgtgacctgcgtggtggtgnnnctggaccccgagaaccccgaggtgcagatcagctggttcgtggacagcaagcaggtgcagaccgccaacacccagcccagagaggagcagagcnnnnnnnnntacagagtggtgagcgtgctgcccatcggccaccaggactggctgagcggcaagcagttcaagtgcaaggtgaacaacaagnnnctgnnnagccccatcgaggagatcatcagcaagacccccggccaggcccaccagcccaacgtgtacgtgctgccccccagcagagacgagatgagcaagaacaccgtgaccctgacctgcctggtgaaggacttcttcccccccgagatcgacgtggagtggcagagcaacggccagcaggagcccgagagcaagtacagaatgacccccccccagctggacgaggacggcagctacttcctgtacagcaagctgagcgtggacaagagcagatggcagagaggcgacaccttcatctgcgccgtgatgcacgaggccctgcacaaccactacacccagatcagcctgagccacagccccggcaag
個々の置換されていないイヌ化重鎖および軽鎖
4F9−VH3−cIgGA Fc[配列番号34]
EVQLVQSGGDLVKPGGSVRLSCVASGFTFSYAMSWVRQAPGKGLQWMGTISDGGSYTHYPDNLMGRFTFSLDTAKNTAYLQLNSLRAEDTAVYYCARESYDGYYVANWGQGTLVTVSSASTTAPSVFPLAPSCGSTSGSTVALACLVSGYFPEPVTVSWNSGSLTSGVHTFPSVLQSSGLHSLSSMVTVPSSRWPSETFTCNVVHPASNTKVDKPVFNECRCTDTPPCPVPEPLGGPSVLIFPPKPKDILRITRTPEVTCVVLDLGREDPEVQISWFVDGKEVHTAKTQSREQQFNGTYRVVSVLPIEHQDWLTGKEFKCRVNHIDLPSPIERTISKARGRAHKPSVYVLPPSPKELSSSDTVSITCLIKDFYPPDIDVEWQSNGQQEPERKHRMTPPQLDEDGSYFLYSKLSVDKSRWQQGDPFTCAVMHETLQNHYTDLSLSHSPGK
4F9−VH3−cIgGA Fc[配列番号33]
gaggtgcagctggtgcagagcggcggcgacctggtgaagcccggcggcagcgtgagactgagctgcgtggccagcggcttcaccttcagctacgccatgagctgggtgagacaggcccccggcaagggcctgcagtggatgggcaccatcagcgacggcggcagctacacccactaccccgacaacctgatgggcagattcaccttcagcctggacaccgccaagaacaccgcctacctgcagctgaacagcctgagagccgaggacaccgccgtgtactactgcgccagagagagctacgacggctactacgtggccaactggggccagggcaccctggtgaccgtgagcagcgccagcaccaccgcccccagcgtgttccccctggcccccagctgcggcagcaccagcggcagcaccgtggccctggcctgcctggtgagcggctacttccccgagcccgtgaccgtgagctggaacagcggcagcctgaccagcggcgtgcacaccttccccagcgtgctgcagagcagcggcctgcacagcctgagcagcatggtgaccgtgcccagcagcagatggcccagcgagaccttcacctgcaacgtggtgcaccccgccagcaacaccaaggtggacaagcccgtgttcaacgagtgcagatgcaccgacacccccccctgccccgtgcccgagcccctgggcggccccagcgtgctgatcttcccccccaagcccaaggacatcctgagaatcaccagaacccccgaggtgacctgcgtggtgctggacctgggcagagaggaccccgaggtgcagatcagctggttcgtggacggcaaggaggtgcacaccgccaagacccagagcagagagcagcagttcaacggcacctacagagtggtgagcgtgctgcccatcgagcaccaggactggctgaccggcaaggagttcaagtgcagagtgaaccacatcgacctgcccagccccatcgagagaaccatcagcaaggccagaggcagagcccacaagcccagcgtgtacgtgctgccccccagccccaaggagctgagcagcagcgacaccgtgagcatcacctgcctgatcaaggacttctacccccccgacatcgacgtggagtggcagagcaacggccagcaggagcccgagagaaagcacagaatgacccccccccagctggacgaggacggcagctacttcctgtacagcaagctgagcgtggacaagagcagatggcagcagggcgaccccttcacctgcgccgtgatgcacgagaccctgcagaaccactacaccgacctgagcctgagccacagccccggcaag
4F9−VH3 cIgGD Fc[配列番号36]
EVQLVQSGGDLVKPGGSVRLSCVASGFTFSYAMSWVRQAPGKGLQWMGTISDGGSYTHYPDNLMGRFTFSLDTAKNTAYLQLNSLRAEDTAVYYCARESYDGYYVANWGQGTLVTVSSASTTAPSVFPLAPSCGSTSGSTVALACLVSGYFPEPVTVSWNSGSLTSGVHTFPSVLQSSGLYSLSSTVTVPSSRWPSETFTCNVVHPASNTKVDKPVPKESTCKCISPCPVPESLGGPSVFIFPPKPKDILRITRTPEITCVVLDLGREDPEVQISWFVDGKEVHTAKTQPREQQFNSTYRVVSVLPIEHQDWLTGKEFKCRVNHIGLPSPIERTISKARGQAHQPSVYVLPPSPKELSSSDTVTLTCLIKDFFPPEIDVEWQSNGQPEPESKYHTTAPQLDEDGSYFLYSKLSVDKSRWQQGDTFTCAVMHEALQNHYTDLSLSHSPGK
4F9−VH3 cIgGD Fc[配列番号35]
gaggtgcagctggtgcagagcggcggcgacctggtgaagcccggcggcagcgtgagactgagctgcgtggccagcggcttcaccttcagctacgccatgagctgggtgagacaggcccccggcaagggcctgcagtggatgggcaccatcagcgacggcggcagctacacccactaccccgacaacctgatgggcagattcaccttcagcctggacaccgccaagaacaccgcctacctgcagctgaacagcctgagagccgaggacaccgccgtgtactactgcgccagagagagctacgacggctactacgtggccaactggggccagggcaccctggtgaccgtgagcagcgccagcaccaccgcccccagcgtgttccccctggcccccagctgcggcagcaccagcggcagcaccgtggccctggcctgcctggtgagcggctacttccccgagcccgtgaccgtgagctggaacagcggcagcctgaccagcggcgtgcacaccttccccagcgtgctgcagagcagcggcctgtacagcctgagcagcaccgtgaccgtgcccagcagcagatggcccagcgagaccttcacctgcaacgtggtgcaccccgccagcaacaccaaggtggacaagcccgtgcccaaggagagcacctgcaagtgcatcagcccctgccccgtgcccgagagcctgggcggccccagcgtgttcatcttcccccccaagcccaaggacatcctgagaatcaccagaacccccgagatcacctgcgtggtgctggacctgggcagagaggaccccgaggtgcagatcagctggttcgtggacggcaaggaggtgcacaccgccaagacccagcccagagagcagcagttcaacagcacctacagagtggtgagcgtgctgcccatcgagcaccaggactggctgaccggcaaggagttcaagtgcagagtgaaccacatcggcctgcccagccccatcgagagaaccatcagcaaggccagaggccaggcccaccagcccagcgtgtacgtgctgccccccagccccaaggagctgagcagcagcgacaccgtgaccctgacctgcctgatcaaggacttcttcccccccgagatcgacgtggagtggcagagcaacggccagcccgagcccgagagcaagtaccacaccaccgccccccagctggacgaggacggcagctacttcctgtacagcaagctgagcgtggacaagagcagatggcagcagggcgacaccttcacctgcgccgtgatgcacgaggccctgcagaaccactacaccgacctgagcctgagccacagccccggcaag
4F9−VL3−cL−カッパ[配列番号38]
DIVMTQTPLSLSVSPGEPASMSCRASQSISNNLHWYRQKPGQSPQVLVKYASQSISGVPDRFIGSGSGTDFTLRISRVEADDLGVYYCQQSNSWPQTFGQGTKLELKRNDAQPAVYLFQPSPDQLHTGSASVVCLLNSFYPKDINVKWKVDGVIQDTGIQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTMSSTEYLSHELYSCEITHKSLPSTLIKSFQRSECQRVD
4F9−VL3−cL−カッパ[配列番号37]
gacatcgtgatgacccagacccccctgagcctgagcgtgagccccggcgagcccgccagcatgagctgcagagccagccagagcatcagcaacaacctgcactggtacagacagaagcccggccagagcccccaggtgctggtgaagtacgccagccagagcatcagcggcgtgcccgacagattcatcggcagcggcagcggcaccgacttcaccctgagaatcagcagagtggaggccgacgacctgggcgtgtactactgccagcagagcaacagctggccccagaccttcggccagggcaccaagctggagctgaagagaaacgacgcccagcccgccgtgtacctgttccagcccagccccgaccagctgcacaccggcagcgccagcgtggtgtgcctgctgaacagcttctaccccaaggacatcaacgtgaagtggaaggtggacggcgtgatccaggacaccggcatccaggagagcgtgaccgagcaggacagcaaggacagcacctacagcctgagcagcaccctgaccatgagcagcaccgagtacctgagccacgagctgtacagctgcgagatcacccacaagagcctgcccagcaccctgatcaagagcttccagagaagcgagtgccagagagtggac
5F12−VH3−cIgGA Fc[配列番号40]
EVQLVQSGGDLVKPGGSVRLSCVASFTFDYYMNWVRQAPGKGLQWIGRWIFPGSGATYYNERFMGKATISADTAKNTAYMQLNSLRAEDTAVYYCLRSDWDVGDFWGQGTLVTVSSASTTAPSVFPLAPSCGSTSGSTVALACLVSGYFPEPVTVSWNSGSLTSGVHTFPSVLQSSGLHSLSSMVTVPSSRWPSETFTCNVVHPASNTKVDKPVFNECRCTDTPPCPVPEPLGGPSVLIFPPKPKDILRITRTPEVTCVVLDLGREDPEVQISWFVDGKEVHTAKTQSREQQFNGTYRVVSVLPIEHQDWLTGKEFKCRVNHIDLPSPIERTISKARGRAHKPSVYVLPPSPKELSSSDTVSITCLIKDFYPPDIDVEWQSNGQQEPERKHRMTPPQLDEDGSYFLYSKLSVDKSRWQQGDPFTCAVMHETLQNHYTDLSLSHSPGK
5F12−VH3−cIgGA Fc[配列番号39]
gaggtgcagctggtgcagagcggcggcgacctggtgaagcccggcggcagcgtgagactgagctgcgtggccagcttcaccttcgactactacatgaactgggtgagacaggcccccggcaagggcctgcagtggatcggcagatggatcttccccggcagcggcgccacctactacaacgagagattcatgggcaaggccaccatcagcgccgacaccgccaagaacaccgcctacatgcagctgaacagcctgagagccgaggacaccgccgtgtactactgcctgagaagcgactgggacgtgggcgacttctggggccagggcaccctggtgaccgtgagcagcgccagcaccaccgcccccagcgtgttccccctggcccccagctgcggcagcaccagcggcagcaccgtggccctggcctgcctggtgagcggctacttccccgagcccgtgaccgtgagctggaacagcggcagcctgaccagcggcgtgcacaccttccccagcgtgctgcagagcagcggcctgcacagcctgagcagcatggtgaccgtgcccagcagcagatggcccagcgagaccttcacctgcaacgtggtgcaccccgccagcaacaccaaggtggacaagcccgtgttcaacgagtgcagatgcaccgacacccccccctgccccgtgcccgagcccctgggcggccccagcgtgctgatcttcccccccaagcccaaggacatcctgagaatcaccagaacccccgaggtgacctgcgtggtgctggacctgggcagagaggaccccgaggtgcagatcagctggttcgtggacggcaaggaggtgcacaccgccaagacccagagcagagagcagcagttcaacggcacctacagagtggtgagcgtgctgcccatcgagcaccaggactggctgaccggcaaggagttcaagtgcagagtgaaccacatcgacctgcccagccccatcgagagaaccatcagcaaggccagaggcagagcccacaagcccagcgtgtacgtgctgccccccagccccaaggagctgagcagcagcgacaccgtgagcatcacctgcctgatcaaggacttctacccccccgacatcgacgtggagtggcagagcaacggccagcaggagcccgagagaaagcacagaatgacccccccccagctggacgaggacggcagctacttcctgtacagcaagctgagcgtggacaagagcagatggcagcagggcgaccccttcacctgcgccgtgatgcacgagaccctgcagaaccactacaccgacctgagcctgagccacagccccggcaag
5F12−VH3−cIgGD Fc[配列番号42]
EVQLVQSGGDLVKPGGSVRLSCVASFTFDYYMNWVRQAPGKGLQWIGRWIFPGSGATYYNERFMGKATISADTAKNTAYMQLNSLRAEDTAVYYCLRSDWDVGDFWGQGTLVTVSSASTTAPSVFPLAPSCGSTSGSTVALACLVSGYFPEPVTVSWNSGSLTSGVHTFPSVLQSSGLYSLSSTVTVPSSRWPSETFTCNVVHPASNTKVDKPVPKESTCKCISPCPVPESLGGPSVFIFPPKPKDILRITRTPEITCVVLDLGREDPEVQISWFVDGKEVHTAKTQPREQQFNSTYRVVSVLPIEHQDWLTGKEFKCRVNHIGLPSPIERTISKARGQAHQPSVYVLPPSPKELSSSDTVTLTCLIKDFFPPEIDVEWQSNGQPEPESKYHTTAPQLDEDGSYFLYSKLSVDKSRWQQGDTFTCAVMHEALQNHYTDLSLSHSPGK
5F12−VH3−cIgGD Fc[配列番号41]
gaggtgcagctggtgcagagcggcggcgacctggtgaagcccggcggcagcgtgagactgagctgcgtggccagcttcaccttcgactactacatgaactgggtgagacaggcccccggcaagggcctgcagtggatcggcagatggatcttccccggcagcggcgccacctactacaacgagagattcatgggcaaggccaccatcagcgccgacaccgccaagaacaccgcctacatgcagctgaacagcctgagagccgaggacaccgccgtgtactactgcctgagaagcgactgggacgtgggcgacttctggggccagggcaccctggtgaccgtgagcagcgccagcaccaccgcccccagcgtgttccccctggcccccagctgcggcagcaccagcggcagcaccgtggccctggcctgcctggtgagcggctacttccccgagcccgtgaccgtgagctggaacagcggcagcctgaccagcggcgtgcacaccttccccagcgtgctgcagagcagcggcctgtacagcctgagcagcaccgtgaccgtgcccagcagcagatggcccagcgagaccttcacctgcaacgtggtgcaccccgccagcaacaccaaggtggacaagcccgtgcccaaggagagcacctgcaagtgcatcagcccctgccccgtgcccgagagcctgggcggccccagcgtgttcatcttcccccccaagcccaaggacatcctgagaatcaccagaacccccgagatcacctgcgtggtgctggacctgggcagagaggaccccgaggtgcagatcagctggttcgtggacggcaaggaggtgcacaccgccaagacccagcccagagagcagcagttcaacagcacctacagagtggtgagcgtgctgcccatcgagcaccaggactggctgaccggcaaggagttcaagtgcagagtgaaccacatcggcctgcccagccccatcgagagaaccatcagcaaggccagaggccaggcccaccagcccagcgtgtacgtgctgccccccagccccaaggagctgagcagcagcgacaccgtgaccctgacctgcctgatcaaggacttcttcccccccgagatcgacgtggagtggcagagcaacggccagcccgagcccgagagcaagtaccacaccaccgccccccagctggacgaggacggcagctacttcctgtacagcaagctgagcgtggacaagagcagatggcagcagggcgacaccttcacctgcgccgtgatgcacgaggccctgcagaaccactacaccgacctgagcctgagccacagccccggcaag
5F12−VL3−cLカッパ[配列番号44]
DIVMTQTPLSLSVSLGEPASISCRSSRSLLHTNGITYLSWYRQKPGQIPQLLIYQMSNLASGVPDRFSGSGSGTDFTLRISRVEADDAGVYYCAQTLGLPRTFGQGTKVEIKRNDAQPAVYLFQPSPDQLHTGSASVVCLLNSFYPKDINVKWKVDGVIQDTGIQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTMSSTEYLSHELYSCEITHKSLPSTLIKSFQRSECQRVD
5F12−VL3−cLカッパ[配列番号43]
gacatcgtgatgacccagacccccctgagcctgagcgtgagcctgggcgagcccgccagcatcagctgcagaagcagcagaagcctgctgcacaccaacggcatcacctacctgagctggtacagacagaagcccggccagatcccccagctgctgatctaccagatgagcaacctggccagcggcgtgcccgacagattcagcggcagcggcagcggcaccgacttcaccctgagaatcagcagagtggaggccgacgacgccggcgtgtactactgcgcccagaccctgggcctgcccagaaccttcggccagggcaccaaggtggagatcaagagaaacgacgcccagcccgccgtgtacctgttccagcccagccccgaccagctgcacaccggcagcgccagcgtggtgtgcctgctgaacagcttctaccccaaggacatcaacgtgaagtggaaggtggacggcgtgatccaggacaccggcatccaggagagcgtgaccgagcaggacagcaaggacagcacctacagcctgagcagcaccctgaccatgagcagcaccgagtacctgagccacgagctgtacagctgcgagatcacccacaagagcctgcccagcaccctgatcaagagcttccagagaagcgagtgccagagagtggac
マウス抗イヌPDL−1:4F9の可変領域
重鎖:DNA配列[配列番号73]
gaagtgcagctggtggagtctgggggaggcttagtgaagcctggagggtccctgaaactctcctgtgcagcctctggattcactttcagtagctatgccatgtcttgggttcgccagactccggacaagagactggagtgggtcgcaaccattagtgatggtggaagttacacccactaccccgacaatttaatgggccgattcaccatctccagagacaatgccaagaacaacctgtacctgcaaatgagccatctgaagtctgacgacacagccatgtattactgtgcacgagagagctatgatggttactacgtggctaactggggccaagggactctggtcactgtctcagca
重鎖:アミノ酸配列[配列番号74]
EVQLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFTFSSYAMSWVRQTPDKRLEWVATISDGGSYTHYPDNLMGRFTISRDNAKNNLYLQMSHLKSDDTAMYYCARESYDGYYVANWGQGTLVTVSA
軽鎖:DNA配列[配列番号75]
gatattgtgctaactcagtctccagccaccctgtctgtgaatccaggagatagcgtcagtctttcctgcagggccagccaaagtattagcaacaacctacactggtatcaacaaaaatcacatgagtctccaaggcttctcatcaagtatgcttcccagtccatctctgggatcccctccaggttcagtggcagtggatcagggacagatttcactctcagtatcaacagtgtggagactgaagattttggaatgtatttctgtcaacagagtaacagctggcctcagacgttcggtggaggcaccaagctggaaatcaaa
軽鎖:アミノ酸配列[配列番号76]
DIVLTQSPATLSVNPGDSVSLSCRASQSISNNLHWYQQKSHESPRLLIKYASQSISGIPSRFSGSGSGTDFTLSINSVETEDFGMYFCQQSNSWPQTFGGGTKLEIK
マウス抗イヌPDL−1:抗PDL−1 5F12の可変領域
重鎖:DNA配列[配列番号77]
caggtccagctacagcagtctggacctgagctggtgaagcctggggcttcagtgaagatatcctgcaaggcttctggctacaccttcactgactactatatgaattgggtgaaacagaggcctggacagggacttgagtggattggatggatttttcccggaagtggtgctacttactacaatgagaggttcatgggcaaggccacacttactgtggataaatcttccaacacagcctacatgttgttcagtagcctgacctctgaggactctgcggtctatttctgtttaagatctgactgggacgtcggggacttctggggccaaggcaccactctcacagtctcctca
重鎖:アミノ酸配列[配列番号78]
QVQLQQSGPELVKPGASVKISCKASGYTFTDYYMNWVKQRPGQGLEWIGWIFPGSGATYYNERFMGKATLTVDKSSNTAYMLFSSLTSEDSAVYFCLRSDWDVGDFWGQGTTLTVSS
軽鎖:DNA配列[配列番号79]
gatattgtgatgacgcaggctgcattctccaatccagtcactcttggaacatcagcttccatctcctgcaggtctagtaggagtctcctacatactaatggcatcacttatttgtcttggtttctgcagaagccaggccagtctcctcagctcctgatttatcagatgtccaaccttgcctcaggagtcccagacaggttcagtagcagtgggtcaggaactgatttcacactgagaatcagtagagtggaggctgaggatgtgggtatttattactgtgctcaaactctaggacttcctcggacgttcggtggaggcaccaagctggaaatcaaa
軽鎖:アミノ酸配列[配列番号80]
DIVMTQAAFSNPVTLGTSASISCRSSRSLLHTNGITYLSWFLQKPGQSPQLLIYQMSNLASGVPDRFSSSGSGTDFTLRISRVEAEDVGIYYCAQTLGLPRTFGGGTKLEIK
抗イヌPD−L1抗体のエピトープマッピング
抗体とそれらの同族タンパク質抗原との相互作用は、抗体の特定アミノ酸(パラトープ)と標的抗原の特定アミノ酸(エピトープ)の結合を通じて仲介される。エピトープは、免疫グロブリンによる特異的反応を引き起こす抗原性決定基である。エピトープは、抗原の表面上のアミノ酸のグループからなる。目的タンパク質は、異なる抗体により認識されるいくつかのエピトープを含有し得る。抗体により認識されるエピトープは、線状エピトープまたは立体構造エピトープとして分類される。線状エピトープはタンパク質中のアミノ酸の一続きの連続配列により形成されるが、立体構造エピトープは一次アミノ酸配列中では不連続である(例えば遠く離れている)が、3次元タンパク質フォールディングの際には集合するアミノ酸から構成される。
化学的架橋および質量分析検出に基づく方法を使用して、抗イヌPD−L1 mAbにより認識されるエピトープを同定した[CovalX(登録商標) Instrument Incorporated]。イヌPD−L1のエピトープマッピングへのこの技術の適用は、表13中に収載されている示されたmAbにより認識されるエピトープの同定をもたらした。mAb 4F9を使用したイヌPD−L1のエピトープマッピングの結果は、このmAbが配列番号82により表されるアミノ酸配列および配列番号83により表されるアミノ酸配列から構成されるイヌPD−L1の細胞外ドメイン内に位置するエピトープを認識することを示す[表13を参照されたい]。さらには、mAb 5F12を使用したエピトープマッピング実験の結果は、このmAbが配列番号82により表されるアミノ酸配列から構成されるイヌPD−L1の細胞外ドメイン内に位置するエピトープを認識することを示す。注目すべきことに、本明細書中で同定されたイヌPD−L1上のエピトープの位置は、対応するヒトPD−L1について近年報告された位置と合理的に一致しており[Hao et al.,J.Mol.Recognit.28:269−276(2015)]、これは上で与えられた決定へのさらなる信頼を与えるものである。
Claims (16)
- 3つの軽鎖相補性決定領域(CDR):CDR light 1(CDRL1)、CDR light 2(CDRL2)およびCDR light 3(CDRL3);ならびに3つの重鎖CDR:CDR heavy 1(CDRH1)、CDR heavy 2(CDRH2)およびCDR heavy 3(CDRH3)である6つのCDRのセットを含む、イヌのプログラム死リガンド1(イヌPD−L1)と特異性を有して結合する単離された抗体またはその抗原結合断片であって:ここで、6つのCDRのセットは、以下の群から選択され;
(i)
CDRH1は、配列番号13のアミノ酸配列を含み;
CDRH2は、配列番号14のアミノ酸配列を含み;
CDRH3は、配列番号15のアミノ酸配列を含み;
CDRL1は、配列番号16のアミノ酸配列を含み;
CDRL2は、配列番号17のアミノ酸配列を含み;
CDRL3は、配列番号18のアミノ酸配列を含む;及び
(ii)
CDRH1は、配列番号19のアミノ酸配列を含み;
CDRH2は、配列番号20のアミノ酸配列を含み;
CDRH3は、配列番号21のアミノ酸配列を含み;
CDRL1は、配列番号22のアミノ酸配列を含み;
CDRL2は、配列番号23のアミノ酸配列を含み;
CDRL3は、配列番号24のアミノ酸配列を含む;
そして
前記抗体およびその抗原結合断片は、イヌPD−L1と結合し、イヌPD−L1のイヌプログラム死1(PD−1)への結合を遮断する、前記抗体またはその抗原結合断片。 - 抗体がイヌ化抗体である、請求項1の単離された抗体。
- 配列番号66および配列番号68よりなる群から選択されるアミノ酸配列を含むイヌ結晶性フラグメント領域(cFc領域)を含む、請求項2のイヌ化抗体またはその抗原結合断片であって;ここで、1から7個のアミノ酸残基が、P4、D31、N63、G64、T65、A93およびP95よりなる群から選択される指示された位置で置換されている前記イヌ化抗体またはその抗原結合断片。
- 置換される1から7個のアミノ酸残基の置換が、P4A、D31A、N63A、G64A、T65A、A93GおよびP95Aよりなる群から選択される、請求項3のイヌ化抗体。
- 2つのアミノ酸置換D31A及びN63Aを含み、そして、P4、G64、T65、A93及びP95のアミノ酸配列は維持される、請求項4のイヌ化抗体。
- 配列番号62および配列番号64よりなる群から選択されるアミノ酸配列を含むイヌ結晶性フラグメント領域を含む、請求項2のイヌ化抗体またはその抗原結合断片。
- 配列番号45、配列番号46、配列番号47および配列番号48よりなる群から選択されるアミノ酸配列を含むヒンジ領域を含む、請求項6のイヌ化抗体またはその抗原結合断片。
- (i)配列番号26であって、242位のアミノ酸がプロリンであり、269位のアミノ酸がアラニンであり、301位のアミノ酸がアラニンであり、302位のアミノ酸がグリシンであり、303位のアミノ酸がスレオニンであり、331位のアミノ酸がアラニンであり、そして333位のアミノ酸がプロリンである、
(ii)配列番号28であって、240位のアミノ酸がプロリンであり、267位のアミノ酸がアラニンであり、299位のアミノ酸がアラニンであり、300位のアミノ酸がグリシンであり、301位のアミノ酸がスレオニンであり、329位のアミノ酸がアラニンであり、そして331位のアミノ酸がプロリンである、
(iii)配列番号30であって、240位のアミノ酸がプロリンであり、267位のアミノ酸がアラニンであり、299位のアミノ酸がアラニンであり、300位のアミノ酸がグリシンであり、301位のアミノ酸がスレオニンであり、329位のアミノ酸がアラニンであり、そして331位のアミノ酸がプロリンである、および、
(iv)配列番号32であって、238位のアミノ酸がプロリンであり、265位のアミノ酸がアラニンであり、297位のアミノ酸がアラニンであり、298位のアミノ酸がグリシンであり、299位のアミノ酸がスレオニンであり、327位のアミノ酸がアラニンであり、そして329位のアミノ酸がプロリンである、
よりなる群から選択されるアミノ酸配列を含む請求項5のイヌ化抗体またはその抗原結合断片。 - 配列番号34、配列番号36、配列番号40および配列番号42よりなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項7のイヌ化抗体またはその抗原結合断片。
- 配列番号38および配列番号44よりなる群から選択されるアミノ酸配列を含むイヌ軽鎖をさらに含む、請求項2、3、4、5、6、7、8または9のイヌ化抗体またはその抗原結合断片。
- イヌPD−L1に結合する際に前記抗体が配列番号82または配列番号83のアミノ酸配列内の少なくとも1個のアミノ酸に結合し;前記抗体およびその抗原結合断片がイヌPD−L1と結合し、イヌPD−L1のイヌPD−1への結合を遮断する、請求項2、3、4、5、6、7、8、9または10の単離された抗体またはその抗原結合断片。
- 請求項1、2、3、4、5、6、7、8、9、10または11の抗体の軽鎖をコードする、単離された核酸。
- 請求項1、2、3、4、5、6、7、8、9、10または11の抗体の重鎖をコードする、単離された核酸。
- 配列番号13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23および24よりなる群から選択される1または複数のアミノ酸配列をコードする、請求項12または13の単離された核酸。
- 請求項12、13または14の核酸を含む、発現ベクター。
- 請求項1、2、3、4、5、6、7、8、9、10または11の抗体、請求項12、13または14の核酸、請求項15の発現ベクターまたはそれらの任意の組み合わせ、および薬学的に許容される担体または希釈剤を含む、医薬組成物。
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