JP6780197B2 - 新規成熟心筋細胞マーカー - Google Patents
新規成熟心筋細胞マーカー Download PDFInfo
- Publication number
- JP6780197B2 JP6780197B2 JP2016566449A JP2016566449A JP6780197B2 JP 6780197 B2 JP6780197 B2 JP 6780197B2 JP 2016566449 A JP2016566449 A JP 2016566449A JP 2016566449 A JP2016566449 A JP 2016566449A JP 6780197 B2 JP6780197 B2 JP 6780197B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cardiomyocytes
- cells
- cell
- corin
- group
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 210000004413 cardiac myocyte Anatomy 0.000 title claims description 202
- 239000003550 marker Substances 0.000 title claims description 39
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 254
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 82
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 49
- 102100037293 Atrial natriuretic peptide-converting enzyme Human genes 0.000 claims description 48
- 101710133555 Atrial natriuretic peptide-converting enzyme Proteins 0.000 claims description 48
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 45
- 210000002242 embryoid body Anatomy 0.000 claims description 32
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 32
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims description 29
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 29
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 28
- 210000001778 pluripotent stem cell Anatomy 0.000 claims description 28
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 claims description 24
- 108090000379 Fibroblast growth factor 2 Proteins 0.000 claims description 22
- 230000006698 induction Effects 0.000 claims description 20
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 claims description 19
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 claims description 19
- 102100022936 ATPase inhibitor, mitochondrial Human genes 0.000 claims description 18
- 102100040743 Alpha-crystallin B chain Human genes 0.000 claims description 18
- 102100025422 Bone morphogenetic protein receptor type-2 Human genes 0.000 claims description 18
- 102100023508 Chloride intracellular channel protein 4 Human genes 0.000 claims description 18
- 102100027043 Discoidin, CUB and LCCL domain-containing protein 2 Human genes 0.000 claims description 18
- 101000891982 Homo sapiens Alpha-crystallin B chain Proteins 0.000 claims description 18
- 101000906636 Homo sapiens Chloride intracellular channel protein 4 Proteins 0.000 claims description 18
- 101000911787 Homo sapiens Discoidin, CUB and LCCL domain-containing protein 2 Proteins 0.000 claims description 18
- 102100022337 Integrin alpha-V Human genes 0.000 claims description 18
- 102100036026 Porimin Human genes 0.000 claims description 18
- 102100029163 Ubiquitin carboxyl-terminal hydrolase 14 Human genes 0.000 claims description 18
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 102100021633 Cathepsin B Human genes 0.000 claims description 17
- 102100038909 Caveolin-2 Human genes 0.000 claims description 17
- 102100024108 Dystrophin Human genes 0.000 claims description 17
- 101000898449 Homo sapiens Cathepsin B Proteins 0.000 claims description 17
- 101000740981 Homo sapiens Caveolin-2 Proteins 0.000 claims description 17
- 101001053946 Homo sapiens Dystrophin Proteins 0.000 claims description 17
- 101000595375 Homo sapiens Porimin Proteins 0.000 claims description 17
- 101000841477 Homo sapiens Ubiquitin carboxyl-terminal hydrolase 14 Proteins 0.000 claims description 17
- 102100033762 Proheparin-binding EGF-like growth factor Human genes 0.000 claims description 17
- 101001053942 Saccharolobus solfataricus (strain ATCC 35092 / DSM 1617 / JCM 11322 / P2) Diphosphomevalonate decarboxylase Proteins 0.000 claims description 17
- 108091050446 miR-761 stem-loop Proteins 0.000 claims description 17
- 102000013814 Wnt Human genes 0.000 claims description 16
- 108050003627 Wnt Proteins 0.000 claims description 16
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 16
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 14
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 13
- 102100024505 Bone morphogenetic protein 4 Human genes 0.000 claims description 12
- 229940000406 drug candidate Drugs 0.000 claims description 11
- 230000002107 myocardial effect Effects 0.000 claims description 11
- 108010023082 activin A Proteins 0.000 claims description 10
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 claims description 9
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 claims description 9
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 8
- XVMHQSDMKWQNBK-UHFFFAOYSA-N 2-[[3-(4-fluorophenyl)-4-oxo-6,7-dihydrothieno[3,2-d]pyrimidin-2-yl]sulfanyl]-n-(6-methyl-1,3-benzothiazol-2-yl)acetamide Chemical group S1C2=CC(C)=CC=C2N=C1NC(=O)CSC1=NC=2CCSC=2C(=O)N1C1=CC=C(F)C=C1 XVMHQSDMKWQNBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 206010048610 Cardiotoxicity Diseases 0.000 claims description 6
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 claims description 6
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 claims description 6
- 231100000259 cardiotoxicity Toxicity 0.000 claims description 6
- RHUJMHOIQBDFQR-UHFFFAOYSA-N 2-[[3-(2-methoxyphenyl)-4-oxo-6,7-dihydrothieno[3,2-d]pyrimidin-2-yl]sulfanyl]-n-(6-methyl-1,3-benzothiazol-2-yl)acetamide Chemical compound COC1=CC=CC=C1N1C(=O)C(SCC2)=C2N=C1SCC(=O)NC1=NC2=CC=C(C)C=C2S1 RHUJMHOIQBDFQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 3
- 231100000500 noncardiotoxic Toxicity 0.000 claims description 3
- 239000002340 cardiotoxin Substances 0.000 claims description 2
- 210000004165 myocardium Anatomy 0.000 claims description 2
- 238000010998 test method Methods 0.000 claims description 2
- 102100024785 Fibroblast growth factor 2 Human genes 0.000 claims 5
- 101800001649 Heparin-binding EGF-like growth factor Proteins 0.000 claims 3
- 101000902767 Homo sapiens ATPase inhibitor, mitochondrial Proteins 0.000 claims 3
- 101000762379 Homo sapiens Bone morphogenetic protein 4 Proteins 0.000 claims 3
- 101000934635 Homo sapiens Bone morphogenetic protein receptor type-2 Proteins 0.000 claims 3
- 101001046677 Homo sapiens Integrin alpha-V Proteins 0.000 claims 3
- 101000581981 Homo sapiens Neural cell adhesion molecule 1 Proteins 0.000 claims 3
- 102100027347 Neural cell adhesion molecule 1 Human genes 0.000 claims 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 47
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 description 24
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 24
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 20
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 20
- -1 HBEGF Proteins 0.000 description 18
- 239000005090 green fluorescent protein Substances 0.000 description 18
- 102000003974 Fibroblast growth factor 2 Human genes 0.000 description 17
- 102000013928 Neural cell adhesion molecule 1 Human genes 0.000 description 17
- 108050003738 Neural cell adhesion molecule 1 Proteins 0.000 description 17
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 17
- 101710085568 ATPase inhibitor, mitochondrial Proteins 0.000 description 15
- 101710123022 Integrin alpha-V Proteins 0.000 description 15
- 108010063130 Type II Bone Morphogenetic Protein Receptors Proteins 0.000 description 15
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 15
- 108010073929 Vascular Endothelial Growth Factor A Proteins 0.000 description 14
- 230000008672 reprogramming Effects 0.000 description 14
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 12
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 12
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 12
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 12
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 12
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 11
- 239000007640 basal medium Substances 0.000 description 10
- 230000006870 function Effects 0.000 description 10
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 10
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 10
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 108010049955 Bone Morphogenetic Protein 4 Proteins 0.000 description 9
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 9
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 9
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 description 8
- 102000004144 Green Fluorescent Proteins Human genes 0.000 description 8
- 230000008859 change Effects 0.000 description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 8
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 description 7
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 description 7
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 7
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 7
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 7
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 7
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 description 7
- 238000012413 Fluorescence activated cell sorting analysis Methods 0.000 description 6
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 6
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 6
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 6
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 6
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 6
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 6
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N puromycin Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1C[C@H](N)C(=O)N[C@H]1[C@@H](O)[C@H](N2C3=NC=NC(=C3N=C2)N(C)C)O[C@@H]1CO RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N 0.000 description 6
- 230000036390 resting membrane potential Effects 0.000 description 6
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 5
- 101001120813 Homo sapiens Myosin regulatory light chain 2, atrial isoform Proteins 0.000 description 5
- 101000629029 Homo sapiens Myosin regulatory light chain 2, ventricular/cardiac muscle isoform Proteins 0.000 description 5
- 101001030243 Homo sapiens Myosin-7 Proteins 0.000 description 5
- 101000694017 Homo sapiens Sodium channel protein type 5 subunit alpha Proteins 0.000 description 5
- 101000597193 Homo sapiens Telethonin Proteins 0.000 description 5
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 description 5
- 102000004058 Leukemia inhibitory factor Human genes 0.000 description 5
- 108090000581 Leukemia inhibitory factor Proteins 0.000 description 5
- 102100026057 Myosin regulatory light chain 2, atrial isoform Human genes 0.000 description 5
- 102100026925 Myosin regulatory light chain 2, ventricular/cardiac muscle isoform Human genes 0.000 description 5
- 102100038319 Myosin-6 Human genes 0.000 description 5
- 101710204027 Myosin-6 Proteins 0.000 description 5
- 102100038934 Myosin-7 Human genes 0.000 description 5
- 102000004912 RYR2 Human genes 0.000 description 5
- 108060007241 RYR2 Proteins 0.000 description 5
- 108091027967 Small hairpin RNA Proteins 0.000 description 5
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 description 5
- 102100027198 Sodium channel protein type 5 subunit alpha Human genes 0.000 description 5
- 102100035155 Telethonin Human genes 0.000 description 5
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 5
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 5
- 230000001146 hypoxic effect Effects 0.000 description 5
- 238000010449 nuclear transplantation Methods 0.000 description 5
- 239000004055 small Interfering RNA Substances 0.000 description 5
- UZOVYGYOLBIAJR-UHFFFAOYSA-N 4-isocyanato-4'-methyldiphenylmethane Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1CC1=CC=C(N=C=O)C=C1 UZOVYGYOLBIAJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 4
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 4
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 4
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 4
- NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N Mytomycin Chemical compound C1N2C(C(C(C)=C(N)C3=O)=O)=C3[C@@H](COC(N)=O)[C@@]2(OC)[C@@H]2[C@H]1N2 NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N 0.000 description 4
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 4
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 4
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 4
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 4
- 206010003119 arrhythmia Diseases 0.000 description 4
- 230000006793 arrhythmia Effects 0.000 description 4
- 210000002459 blastocyst Anatomy 0.000 description 4
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 4
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 4
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 4
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 4
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 4
- 208000019622 heart disease Diseases 0.000 description 4
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 4
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 4
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 4
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 4
- 210000002235 sarcomere Anatomy 0.000 description 4
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- HJCMDXDYPOUFDY-WHFBIAKZSA-N Ala-Gln Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O HJCMDXDYPOUFDY-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 3
- 102100027211 Albumin Human genes 0.000 description 3
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 3
- 239000012583 B-27 Supplement Substances 0.000 description 3
- 239000006145 Eagle's minimal essential medium Substances 0.000 description 3
- 102000003964 Histone deacetylase Human genes 0.000 description 3
- 108090000353 Histone deacetylase Proteins 0.000 description 3
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 3
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 3
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 3
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 3
- 108090000862 Ion Channels Proteins 0.000 description 3
- 102000004310 Ion Channels Human genes 0.000 description 3
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 3
- 239000012580 N-2 Supplement Substances 0.000 description 3
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 3
- 102000004357 Transferases Human genes 0.000 description 3
- 108090000992 Transferases Proteins 0.000 description 3
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 3
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 3
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 3
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 3
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 3
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 3
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 238000003372 electrophysiological method Methods 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 3
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 3
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 3
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 3
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 3
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 210000004263 induced pluripotent stem cell Anatomy 0.000 description 3
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 3
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 3
- 238000001638 lipofection Methods 0.000 description 3
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 3
- 108010082117 matrigel Proteins 0.000 description 3
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 3
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 3
- 230000036284 oxygen consumption Effects 0.000 description 3
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 229950010131 puromycin Drugs 0.000 description 3
- 230000029058 respiratory gaseous exchange Effects 0.000 description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 3
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 3
- 231100000820 toxicity test Toxicity 0.000 description 3
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 3
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 3
- 238000011870 unpaired t-test Methods 0.000 description 3
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 3
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 3
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 3
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- CDOVNWNANFFLFJ-UHFFFAOYSA-N 4-[6-[4-(1-piperazinyl)phenyl]-3-pyrazolo[1,5-a]pyrimidinyl]quinoline Chemical compound C1CNCCN1C1=CC=C(C2=CN3N=CC(=C3N=C2)C=2C3=CC=CC=C3N=CC=2)C=C1 CDOVNWNANFFLFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100038511 AT-rich interactive domain-containing protein 3A Human genes 0.000 description 2
- 108060000903 Beta-catenin Proteins 0.000 description 2
- 102000015735 Beta-catenin Human genes 0.000 description 2
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N Butyric acid Chemical compound CCCC(O)=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 2
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 2
- 208000030453 Drug-Related Side Effects and Adverse reaction Diseases 0.000 description 2
- 102100037362 Fibronectin Human genes 0.000 description 2
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 2
- 102000034615 Glial cell line-derived neurotrophic factor Human genes 0.000 description 2
- 108091010837 Glial cell line-derived neurotrophic factor Proteins 0.000 description 2
- 102000053187 Glucuronidase Human genes 0.000 description 2
- 108010060309 Glucuronidase Proteins 0.000 description 2
- 241001559542 Hippocampus hippocampus Species 0.000 description 2
- 102100039996 Histone deacetylase 1 Human genes 0.000 description 2
- 101000808887 Homo sapiens AT-rich interactive domain-containing protein 3A Proteins 0.000 description 2
- 101001035024 Homo sapiens Histone deacetylase 1 Proteins 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 2
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 2
- 102000004257 Potassium Channel Human genes 0.000 description 2
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 2
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 2
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 2
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 2
- 101150086694 SLC22A3 gene Proteins 0.000 description 2
- 206010070863 Toxicity to various agents Diseases 0.000 description 2
- 210000004507 artificial chromosome Anatomy 0.000 description 2
- 210000001106 artificial yeast chromosome Anatomy 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- NIJJYAXOARWZEE-UHFFFAOYSA-N di-n-propyl-acetic acid Natural products CCCC(C(O)=O)CCC NIJJYAXOARWZEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XHBVYDAKJHETMP-UHFFFAOYSA-N dorsomorphin Chemical compound C=1C=C(C2=CN3N=CC(=C3N=C2)C=2C=CN=CC=2)C=CC=1OCCN1CCCCC1 XHBVYDAKJHETMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000635 electron micrograph Methods 0.000 description 2
- 210000001671 embryonic stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000010195 expression analysis Methods 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 2
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 238000010230 functional analysis Methods 0.000 description 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 2
- 210000000688 human artificial chromosome Anatomy 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- 230000004898 mitochondrial function Effects 0.000 description 2
- 229960004857 mitomycin Drugs 0.000 description 2
- 108091027963 non-coding RNA Proteins 0.000 description 2
- 102000042567 non-coding RNA Human genes 0.000 description 2
- 210000004681 ovum Anatomy 0.000 description 2
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 2
- 108020001213 potassium channel Proteins 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 2
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 2
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 2
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 2
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 2
- MSRILKIQRXUYCT-UHFFFAOYSA-M valproate semisodium Chemical compound [Na+].CCCC(C(O)=O)CCC.CCCC(C([O-])=O)CCC MSRILKIQRXUYCT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229960000604 valproic acid Drugs 0.000 description 2
- MNULEGDCPYONBU-WMBHJXFZSA-N (1r,4s,5e,5'r,6'r,7e,10s,11r,12s,14r,15s,16s,18r,19s,20r,21e,25s,26r,27s,29s)-4-ethyl-11,12,15,19-tetrahydroxy-6'-[(2s)-2-hydroxypropyl]-5',10,12,14,16,18,20,26,29-nonamethylspiro[24,28-dioxabicyclo[23.3.1]nonacosa-5,7,21-triene-27,2'-oxane]-13,17,23-trio Polymers O([C@@H]1CC[C@@H](/C=C/C=C/C[C@H](C)[C@@H](O)[C@](C)(O)C(=O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)/C=C/C(=O)O[C@H]([C@H]2C)[C@H]1C)CC)[C@]12CC[C@@H](C)[C@@H](C[C@H](C)O)O1 MNULEGDCPYONBU-WMBHJXFZSA-N 0.000 description 1
- MNULEGDCPYONBU-DJRUDOHVSA-N (1s,4r,5z,5'r,6'r,7e,10s,11r,12s,14r,15s,18r,19r,20s,21e,26r,27s)-4-ethyl-11,12,15,19-tetrahydroxy-6'-(2-hydroxypropyl)-5',10,12,14,16,18,20,26,29-nonamethylspiro[24,28-dioxabicyclo[23.3.1]nonacosa-5,7,21-triene-27,2'-oxane]-13,17,23-trione Polymers O([C@H]1CC[C@H](\C=C/C=C/C[C@H](C)[C@@H](O)[C@](C)(O)C(=O)[C@H](C)[C@@H](O)C(C)C(=O)[C@H](C)[C@H](O)[C@@H](C)/C=C/C(=O)OC([C@H]2C)C1C)CC)[C@]12CC[C@@H](C)[C@@H](CC(C)O)O1 MNULEGDCPYONBU-DJRUDOHVSA-N 0.000 description 1
- MNULEGDCPYONBU-YNZHUHFTSA-N (4Z,18Z,20Z)-22-ethyl-7,11,14,15-tetrahydroxy-6'-(2-hydroxypropyl)-5',6,8,10,12,14,16,28,29-nonamethylspiro[2,26-dioxabicyclo[23.3.1]nonacosa-4,18,20-triene-27,2'-oxane]-3,9,13-trione Polymers CC1C(C2C)OC(=O)\C=C/C(C)C(O)C(C)C(=O)C(C)C(O)C(C)C(=O)C(C)(O)C(O)C(C)C\C=C/C=C\C(CC)CCC2OC21CCC(C)C(CC(C)O)O2 MNULEGDCPYONBU-YNZHUHFTSA-N 0.000 description 1
- MNULEGDCPYONBU-VVXVDZGXSA-N (5e,5'r,7e,10s,11r,12s,14s,15r,16r,18r,19s,20r,21e,26r,29s)-4-ethyl-11,12,15,19-tetrahydroxy-6'-[(2s)-2-hydroxypropyl]-5',10,12,14,16,18,20,26,29-nonamethylspiro[24,28-dioxabicyclo[23.3.1]nonacosa-5,7,21-triene-27,2'-oxane]-13,17,23-trione Polymers C([C@H](C)[C@@H](O)[C@](C)(O)C(=O)[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](C)C(=O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)/C=C/C(=O)OC([C@H]1C)[C@H]2C)\C=C\C=C\C(CC)CCC2OC21CC[C@@H](C)C(C[C@H](C)O)O2 MNULEGDCPYONBU-VVXVDZGXSA-N 0.000 description 1
- 229920002818 (Hydroxyethyl)methacrylate Polymers 0.000 description 1
- JUNHQBJCWZVSAT-BQYQJAHWSA-N (e)-n-hydroxy-3-[1-methyl-4-(4-methylbenzoyl)pyrrol-2-yl]prop-2-enamide Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1C(=O)C1=CN(C)C(\C=C\C(=O)NO)=C1 JUNHQBJCWZVSAT-BQYQJAHWSA-N 0.000 description 1
- PRDFBSVERLRRMY-UHFFFAOYSA-N 2'-(4-ethoxyphenyl)-5-(4-methylpiperazin-1-yl)-2,5'-bibenzimidazole Chemical compound C1=CC(OCC)=CC=C1C1=NC2=CC=C(C=3NC4=CC(=CC=C4N=3)N3CCN(C)CC3)C=C2N1 PRDFBSVERLRRMY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100036657 26S proteasome non-ATPase regulatory subunit 7 Human genes 0.000 description 1
- MNULEGDCPYONBU-UHFFFAOYSA-N 4-ethyl-11,12,15,19-tetrahydroxy-6'-(2-hydroxypropyl)-5',10,12,14,16,18,20,26,29-nonamethylspiro[24,28-dioxabicyclo[23.3.1]nonacosa-5,7,21-triene-27,2'-oxane]-13,17,23-trione Polymers CC1C(C2C)OC(=O)C=CC(C)C(O)C(C)C(=O)C(C)C(O)C(C)C(=O)C(C)(O)C(O)C(C)CC=CC=CC(CC)CCC2OC21CCC(C)C(CC(C)O)O2 MNULEGDCPYONBU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100038049 5'-AMP-activated protein kinase subunit beta-2 Human genes 0.000 description 1
- NMUSYJAQQFHJEW-UHFFFAOYSA-N 5-Azacytidine Natural products O=C1N=C(N)N=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 NMUSYJAQQFHJEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZAYHVCMSTBRABG-UHFFFAOYSA-N 5-Methylcytidine Natural products O=C1N=C(N)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 ZAYHVCMSTBRABG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NMUSYJAQQFHJEW-KVTDHHQDSA-N 5-azacytidine Chemical compound O=C1N=C(N)N=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 NMUSYJAQQFHJEW-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- ZAYHVCMSTBRABG-JXOAFFINSA-N 5-methylcytidine Chemical compound O=C1N=C(N)C(C)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 ZAYHVCMSTBRABG-JXOAFFINSA-N 0.000 description 1
- 230000002407 ATP formation Effects 0.000 description 1
- 241000517645 Abra Species 0.000 description 1
- 102100026656 Actin, alpha skeletal muscle Human genes 0.000 description 1
- 102100021516 Actin-binding Rho-activating protein Human genes 0.000 description 1
- 108010063503 Actinin Proteins 0.000 description 1
- 102000010825 Actinin Human genes 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 102100040124 Apoptosis-inducing factor 1, mitochondrial Human genes 0.000 description 1
- 108091023037 Aptamer Proteins 0.000 description 1
- 102100030401 Biglycan Human genes 0.000 description 1
- 102100026437 Branched-chain-amino-acid aminotransferase, cytosolic Human genes 0.000 description 1
- 102100031172 C-C chemokine receptor type 1 Human genes 0.000 description 1
- 101710149814 C-C chemokine receptor type 1 Proteins 0.000 description 1
- 102100032366 C-C motif chemokine 7 Human genes 0.000 description 1
- AQGNHMOJWBZFQQ-UHFFFAOYSA-N CT 99021 Chemical compound CC1=CNC(C=2C(=NC(NCCNC=3N=CC(=CC=3)C#N)=NC=2)C=2C(=CC(Cl)=CC=2)Cl)=N1 AQGNHMOJWBZFQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000000905 Cadherin Human genes 0.000 description 1
- 108050007957 Cadherin Proteins 0.000 description 1
- 101100257372 Caenorhabditis elegans sox-3 gene Proteins 0.000 description 1
- BMZRVOVNUMQTIN-UHFFFAOYSA-N Carbonyl Cyanide para-Trifluoromethoxyphenylhydrazone Chemical compound FC(F)(F)OC1=CC=C(NN=C(C#N)C#N)C=C1 BMZRVOVNUMQTIN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100022344 Cardiac phospholamban Human genes 0.000 description 1
- 102100040753 Casein kinase II subunit alpha' Human genes 0.000 description 1
- 108010067316 Catenins Proteins 0.000 description 1
- 102000016362 Catenins Human genes 0.000 description 1
- 108090000712 Cathepsin B Proteins 0.000 description 1
- 102000004225 Cathepsin B Human genes 0.000 description 1
- 102000003692 Caveolin 2 Human genes 0.000 description 1
- 108090000032 Caveolin 2 Proteins 0.000 description 1
- 102000006786 Chloride-Bicarbonate Antiporters Human genes 0.000 description 1
- 102100031611 Collagen alpha-1(III) chain Human genes 0.000 description 1
- 102100022640 Collagen alpha-1(XV) chain Human genes 0.000 description 1
- 102100035436 Complement factor D Human genes 0.000 description 1
- 235000019750 Crude protein Nutrition 0.000 description 1
- 229930105110 Cyclosporin A Natural products 0.000 description 1
- PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N Cyclosporin A Chemical compound CC[C@@H]1NC(=O)[C@H]([C@H](O)[C@H](C)C\C=C\C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C1=O PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N 0.000 description 1
- 108010036949 Cyclosporine Proteins 0.000 description 1
- 102100033720 DNA replication licensing factor MCM6 Human genes 0.000 description 1
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 1
- 102100030074 Dickkopf-related protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 108010053187 Diphtheria Toxin Proteins 0.000 description 1
- 102100027272 Dual specificity protein phosphatase 8 Human genes 0.000 description 1
- 108010069091 Dystrophin Proteins 0.000 description 1
- 102000001039 Dystrophin Human genes 0.000 description 1
- 102100023226 Early growth response protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 101150099612 Esrrb gene Proteins 0.000 description 1
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010014612 Follistatin Proteins 0.000 description 1
- 102000016970 Follistatin Human genes 0.000 description 1
- 102000003817 Fos-related antigen 1 Human genes 0.000 description 1
- 108090000123 Fos-related antigen 1 Proteins 0.000 description 1
- 102000027587 GPCRs class F Human genes 0.000 description 1
- 108091008884 GPCRs class F Proteins 0.000 description 1
- 102100033512 GTP:AMP phosphotransferase AK3, mitochondrial Human genes 0.000 description 1
- 102100021337 Gap junction alpha-1 protein Human genes 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 206010071602 Genetic polymorphism Diseases 0.000 description 1
- 102100028972 HLA class I histocompatibility antigen, A alpha chain Human genes 0.000 description 1
- 102100028976 HLA class I histocompatibility antigen, B alpha chain Human genes 0.000 description 1
- 108010075704 HLA-A Antigens Proteins 0.000 description 1
- 108010058607 HLA-B Antigens Proteins 0.000 description 1
- 102000006354 HLA-DR Antigens Human genes 0.000 description 1
- 108010058597 HLA-DR Antigens Proteins 0.000 description 1
- 102100031624 Heat shock protein 105 kDa Human genes 0.000 description 1
- 102100028515 Heat shock-related 70 kDa protein 2 Human genes 0.000 description 1
- 229920002971 Heparan sulfate Polymers 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100036284 Hepcidin Human genes 0.000 description 1
- 108010036115 Histone Methyltransferases Proteins 0.000 description 1
- 102000011787 Histone Methyltransferases Human genes 0.000 description 1
- 102100026265 Histone-lysine N-methyltransferase ASH1L Human genes 0.000 description 1
- 101001136696 Homo sapiens 26S proteasome non-ATPase regulatory subunit 7 Proteins 0.000 description 1
- 101000742799 Homo sapiens 5'-AMP-activated protein kinase subunit beta-2 Proteins 0.000 description 1
- 101000834207 Homo sapiens Actin, alpha skeletal muscle Proteins 0.000 description 1
- 101000677807 Homo sapiens Actin-binding Rho-activating protein Proteins 0.000 description 1
- 101000614487 Homo sapiens Adenylate kinase 4, mitochondrial Proteins 0.000 description 1
- 101000890622 Homo sapiens Apoptosis-inducing factor 1, mitochondrial Proteins 0.000 description 1
- 101001126865 Homo sapiens Biglycan Proteins 0.000 description 1
- 101000766268 Homo sapiens Branched-chain-amino-acid aminotransferase, cytosolic Proteins 0.000 description 1
- 101000797758 Homo sapiens C-C motif chemokine 7 Proteins 0.000 description 1
- 101000620629 Homo sapiens Cardiac phospholamban Proteins 0.000 description 1
- 101000892015 Homo sapiens Casein kinase II subunit alpha' Proteins 0.000 description 1
- 101000993285 Homo sapiens Collagen alpha-1(III) chain Proteins 0.000 description 1
- 101000899935 Homo sapiens Collagen alpha-1(XV) chain Proteins 0.000 description 1
- 101000737554 Homo sapiens Complement factor D Proteins 0.000 description 1
- 101001018484 Homo sapiens DNA replication licensing factor MCM6 Proteins 0.000 description 1
- 101000864646 Homo sapiens Dickkopf-related protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 101001057604 Homo sapiens Dual specificity protein phosphatase 8 Proteins 0.000 description 1
- 101001049697 Homo sapiens Early growth response protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000998053 Homo sapiens GTP:AMP phosphotransferase AK3, mitochondrial Proteins 0.000 description 1
- 101000894966 Homo sapiens Gap junction alpha-1 protein Proteins 0.000 description 1
- 101000866478 Homo sapiens Heat shock protein 105 kDa Proteins 0.000 description 1
- 101000985806 Homo sapiens Heat shock-related 70 kDa protein 2 Proteins 0.000 description 1
- 101001021253 Homo sapiens Hepcidin Proteins 0.000 description 1
- 101000785963 Homo sapiens Histone-lysine N-methyltransferase ASH1L Proteins 0.000 description 1
- 101000975421 Homo sapiens Inositol 1,4,5-trisphosphate receptor type 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000840566 Homo sapiens Insulin-like growth factor-binding protein 5 Proteins 0.000 description 1
- 101001055333 Homo sapiens Intraflagellar transport protein 20 homolog Proteins 0.000 description 1
- 101000977692 Homo sapiens Iroquois-class homeodomain protein IRX-6 Proteins 0.000 description 1
- 101001027192 Homo sapiens Kelch-like protein 41 Proteins 0.000 description 1
- 101000917824 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor II-b Proteins 0.000 description 1
- 101001098256 Homo sapiens Lysophospholipase Proteins 0.000 description 1
- 101000669513 Homo sapiens Metalloproteinase inhibitor 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000929655 Homo sapiens Monoacylglycerol lipase ABHD2 Proteins 0.000 description 1
- 101000946889 Homo sapiens Monocyte differentiation antigen CD14 Proteins 0.000 description 1
- 101001009683 Homo sapiens Neuronal membrane glycoprotein M6-a Proteins 0.000 description 1
- 101000637249 Homo sapiens Nexilin Proteins 0.000 description 1
- 101000973211 Homo sapiens Nuclear factor 1 B-type Proteins 0.000 description 1
- 101001095308 Homo sapiens Periostin Proteins 0.000 description 1
- 101000595669 Homo sapiens Pituitary homeobox 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000586618 Homo sapiens Poliovirus receptor Proteins 0.000 description 1
- 101000610781 Homo sapiens Proteasome subunit alpha type-2 Proteins 0.000 description 1
- 101000934826 Homo sapiens Protein bassoon Proteins 0.000 description 1
- 101000688348 Homo sapiens Protein phosphatase 1 regulatory subunit 14C Proteins 0.000 description 1
- 101001082138 Homo sapiens Pumilio homolog 2 Proteins 0.000 description 1
- 101001076867 Homo sapiens RNA-binding protein 3 Proteins 0.000 description 1
- 101001096072 Homo sapiens Regenerating islet-derived protein 3-gamma Proteins 0.000 description 1
- 101001051706 Homo sapiens Ribosomal protein S6 kinase beta-1 Proteins 0.000 description 1
- 101000691459 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase N2 Proteins 0.000 description 1
- 101000709238 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase SIK1 Proteins 0.000 description 1
- 101000795185 Homo sapiens Thyroid hormone receptor-associated protein 3 Proteins 0.000 description 1
- 101000976959 Homo sapiens Transcription factor 4 Proteins 0.000 description 1
- 101000596771 Homo sapiens Transcription factor 7-like 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000635958 Homo sapiens Transforming growth factor beta-2 proprotein Proteins 0.000 description 1
- 101000652472 Homo sapiens Tubulin beta-6 chain Proteins 0.000 description 1
- 101000939399 Homo sapiens UBX domain-containing protein 2A Proteins 0.000 description 1
- 101000608584 Homo sapiens Ubiquitin-like modifier-activating enzyme 5 Proteins 0.000 description 1
- 101000777245 Homo sapiens Undifferentiated embryonic cell transcription factor 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000841505 Homo sapiens Uridine-cytidine kinase 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000638886 Homo sapiens Urokinase-type plasminogen activator Proteins 0.000 description 1
- 101000622304 Homo sapiens Vascular cell adhesion protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000808011 Homo sapiens Vascular endothelial growth factor A Proteins 0.000 description 1
- 101000860430 Homo sapiens Versican core protein Proteins 0.000 description 1
- 101000803403 Homo sapiens Vimentin Proteins 0.000 description 1
- 101000650148 Homo sapiens WD repeat domain phosphoinositide-interacting protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000759255 Homo sapiens Zinc finger protein 148 Proteins 0.000 description 1
- 101000723750 Homo sapiens Zinc finger protein 23 Proteins 0.000 description 1
- 101000734339 Homo sapiens [Pyruvate dehydrogenase (acetyl-transferring)] kinase isozyme 4, mitochondrial Proteins 0.000 description 1
- 101000919269 Homo sapiens cAMP-responsive element modulator Proteins 0.000 description 1
- ZGSXEXBYLJIOGF-ALFLXDJESA-N IWR-1-endo Chemical compound C=1C=CC2=CC=CN=C2C=1NC(=O)C(C=C1)=CC=C1N1C(=O)[C@@H]2[C@H](C=C3)C[C@H]3[C@@H]2C1=O ZGSXEXBYLJIOGF-ALFLXDJESA-N 0.000 description 1
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 1
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 1
- 102100024037 Inositol 1,4,5-trisphosphate receptor type 2 Human genes 0.000 description 1
- 102100029225 Insulin-like growth factor-binding protein 5 Human genes 0.000 description 1
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 1
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- 102100026220 Intraflagellar transport protein 20 homolog Human genes 0.000 description 1
- 102100023527 Iroquois-class homeodomain protein IRX-6 Human genes 0.000 description 1
- 102100037644 Kelch-like protein 41 Human genes 0.000 description 1
- 101150072501 Klf2 gene Proteins 0.000 description 1
- 108700021430 Kruppel-Like Factor 4 Proteins 0.000 description 1
- 108010085895 Laminin Proteins 0.000 description 1
- 102100029205 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor II-b Human genes 0.000 description 1
- 102100037611 Lysophospholipase Human genes 0.000 description 1
- 101710151321 Melanostatin Proteins 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102100039364 Metalloproteinase inhibitor 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100036617 Monoacylglycerol lipase ABHD2 Human genes 0.000 description 1
- 102100035877 Monocyte differentiation antigen CD14 Human genes 0.000 description 1
- 241000711408 Murine respirovirus Species 0.000 description 1
- 101100310657 Mus musculus Sox1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100310648 Mus musculus Sox17 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100257376 Mus musculus Sox3 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100038895 Myc proto-oncogene protein Human genes 0.000 description 1
- 101710135898 Myc proto-oncogene protein Proteins 0.000 description 1
- 102000005604 Myosin Heavy Chains Human genes 0.000 description 1
- WRKPZSMRWPJJDH-UHFFFAOYSA-N N-(6-methyl-1,3-benzothiazol-2-yl)-2-[(4-oxo-3-phenyl-6,7-dihydrothieno[3,2-d]pyrimidin-2-yl)thio]acetamide Chemical compound S1C2=CC(C)=CC=C2N=C1NC(=O)CSC1=NC=2CCSC=2C(=O)N1C1=CC=CC=C1 WRKPZSMRWPJJDH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700026495 N-Myc Proto-Oncogene Proteins 0.000 description 1
- 108050000637 N-cadherin Proteins 0.000 description 1
- 102100030124 N-myc proto-oncogene protein Human genes 0.000 description 1
- 101150072008 NR5A2 gene Proteins 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 102100030394 Neuronal membrane glycoprotein M6-a Human genes 0.000 description 1
- 102400000064 Neuropeptide Y Human genes 0.000 description 1
- 102100031801 Nexilin Human genes 0.000 description 1
- 102100037369 Nidogen-1 Human genes 0.000 description 1
- 102100022165 Nuclear factor 1 B-type Human genes 0.000 description 1
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 description 1
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 102100040557 Osteopontin Human genes 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 102100037765 Periostin Human genes 0.000 description 1
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 1
- 102100036090 Pituitary homeobox 2 Human genes 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 108010022233 Plasminogen Activator Inhibitor 1 Proteins 0.000 description 1
- 102100039418 Plasminogen activator inhibitor 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100029740 Poliovirus receptor Human genes 0.000 description 1
- 101710134981 Porimin Proteins 0.000 description 1
- 208000000418 Premature Cardiac Complexes Diseases 0.000 description 1
- 102100040364 Proteasome subunit alpha type-2 Human genes 0.000 description 1
- 102100025364 Protein bassoon Human genes 0.000 description 1
- 102100024145 Protein phosphatase 1 regulatory subunit 14C Human genes 0.000 description 1
- 108010067787 Proteoglycans Proteins 0.000 description 1
- 229930185560 Pseudouridine Natural products 0.000 description 1
- PTJWIQPHWPFNBW-UHFFFAOYSA-N Pseudouridine C Natural products OC1C(O)C(CO)OC1C1=CNC(=O)NC1=O PTJWIQPHWPFNBW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100027352 Pumilio homolog 2 Human genes 0.000 description 1
- 102100025902 RNA-binding protein 3 Human genes 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 238000011530 RNeasy Mini Kit Methods 0.000 description 1
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 1
- 238000010240 RT-PCR analysis Methods 0.000 description 1
- 101100247004 Rattus norvegicus Qsox1 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100037886 Regenerating islet-derived protein 3-gamma Human genes 0.000 description 1
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 description 1
- 102100039643 Rho-related GTP-binding protein Rho6 Human genes 0.000 description 1
- 101710199571 Rho-related GTP-binding protein Rho6 Proteins 0.000 description 1
- 102100024908 Ribosomal protein S6 kinase beta-1 Human genes 0.000 description 1
- 108091006259 SLC4A3 Proteins 0.000 description 1
- 102100034201 Sclerostin Human genes 0.000 description 1
- 108050006698 Sclerostin Proteins 0.000 description 1
- 102100026180 Serine/threonine-protein kinase N2 Human genes 0.000 description 1
- 102100032771 Serine/threonine-protein kinase SIK1 Human genes 0.000 description 1
- 101150001847 Sox15 gene Proteins 0.000 description 1
- 101710168942 Sphingosine-1-phosphate phosphatase 1 Proteins 0.000 description 1
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 1
- 102000002154 T-Lymphoma Invasion and Metastasis-inducing Protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 108010001288 T-Lymphoma Invasion and Metastasis-inducing Protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 208000001871 Tachycardia Diseases 0.000 description 1
- 101150111019 Tbx3 gene Proteins 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 1
- 102100029689 Thyroid hormone receptor-associated protein 3 Human genes 0.000 description 1
- 101710120037 Toxin CcdB Proteins 0.000 description 1
- 102100023489 Transcription factor 4 Human genes 0.000 description 1
- 101710150448 Transcriptional regulator Myc Proteins 0.000 description 1
- 102100030737 Transforming growth factor beta-2 proprotein Human genes 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 102100030303 Tubulin beta-6 chain Human genes 0.000 description 1
- 102100029784 UBX domain-containing protein 2A Human genes 0.000 description 1
- 101710091086 Ubiquitin carboxyl-terminal hydrolase 14 Proteins 0.000 description 1
- 102100039197 Ubiquitin-like modifier-activating enzyme 5 Human genes 0.000 description 1
- 102100031278 Undifferentiated embryonic cell transcription factor 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100029150 Uridine-cytidine kinase 2 Human genes 0.000 description 1
- 102100031358 Urokinase-type plasminogen activator Human genes 0.000 description 1
- 102100023543 Vascular cell adhesion protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100039037 Vascular endothelial growth factor A Human genes 0.000 description 1
- 108010051583 Ventricular Myosins Proteins 0.000 description 1
- 102100028437 Versican core protein Human genes 0.000 description 1
- 102100035071 Vimentin Human genes 0.000 description 1
- QYKIQEUNHZKYBP-UHFFFAOYSA-N Vinyl ether Chemical class C=COC=C QYKIQEUNHZKYBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 102100027543 WD repeat domain phosphoinositide-interacting protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 230000004156 Wnt signaling pathway Effects 0.000 description 1
- KLGQSVMIPOVQAX-UHFFFAOYSA-N XAV939 Chemical compound N=1C=2CCSCC=2C(O)=NC=1C1=CC=C(C(F)(F)F)C=C1 KLGQSVMIPOVQAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100023442 Zinc finger protein 148 Human genes 0.000 description 1
- 102100028395 Zinc finger protein 23 Human genes 0.000 description 1
- 102100034825 [Pyruvate dehydrogenase (acetyl-transferring)] kinase isozyme 4, mitochondrial Human genes 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 108010076089 accutase Proteins 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 150000003926 acrylamides Chemical class 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 210000001789 adipocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 210000004436 artificial bacterial chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 229960002756 azacitidine Drugs 0.000 description 1
- WGDUUQDYDIIBKT-UHFFFAOYSA-N beta-Pseudouridine Natural products OC1OC(CN2C=CC(=O)NC2=O)C(O)C1O WGDUUQDYDIIBKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 210000004703 blastocyst inner cell mass Anatomy 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 208000006218 bradycardia Diseases 0.000 description 1
- 230000036471 bradycardia Effects 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 210000004958 brain cell Anatomy 0.000 description 1
- 102100029387 cAMP-responsive element modulator Human genes 0.000 description 1
- 239000000801 calcium channel stimulating agent Substances 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 1
- 231100000457 cardiotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001451 cardiotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000021164 cell adhesion Effects 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 1
- 239000002771 cell marker Substances 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 108010008846 chordin Proteins 0.000 description 1
- 102000006533 chordin Human genes 0.000 description 1
- 239000003593 chromogenic compound Substances 0.000 description 1
- 229960001265 ciclosporin Drugs 0.000 description 1
- CQIUKKVOEOPUDV-UHFFFAOYSA-N citrinine Natural products OC1=C(C(O)=O)C(=O)C(C)=C2C(C)C(C)OC=C21 CQIUKKVOEOPUDV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GKTWGGQPFAXNFI-HNNXBMFYSA-N clopidogrel Chemical compound C1([C@H](N2CC=3C=CSC=3CC2)C(=O)OC)=CC=CC=C1Cl GKTWGGQPFAXNFI-HNNXBMFYSA-N 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 238000012136 culture method Methods 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 210000005258 dental pulp stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- XEYBRNLFEZDVAW-ARSRFYASSA-N dinoprostone Chemical compound CCCCC[C@H](O)\C=C\[C@H]1[C@H](O)CC(=O)[C@@H]1C\C=C/CCCC(O)=O XEYBRNLFEZDVAW-ARSRFYASSA-N 0.000 description 1
- 229960002986 dinoprostone Drugs 0.000 description 1
- 239000003968 dna methyltransferase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000009509 drug development Methods 0.000 description 1
- 230000027721 electron transport chain Effects 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 108010048367 enhanced green fluorescent protein Proteins 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 210000002907 exocrine cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 210000004700 fetal blood Anatomy 0.000 description 1
- 210000002458 fetal heart Anatomy 0.000 description 1
- 108091006047 fluorescent proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000004907 flux Effects 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 229960002989 glutamic acid Drugs 0.000 description 1
- 229960002743 glutamine Drugs 0.000 description 1
- 239000003572 glycogen synthase kinase 3 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000010005 growth-factor like effect Effects 0.000 description 1
- 210000002768 hair cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- 229960003444 immunosuppressant agent Drugs 0.000 description 1
- 230000001861 immunosuppressant effect Effects 0.000 description 1
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 1
- 101150111214 lin-28 gene Proteins 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 210000005265 lung cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000002826 magnetic-activated cell sorting Methods 0.000 description 1
- 230000005389 magnetism Effects 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003697 methyltransferase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 108091072810 miR-294 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091076076 miR-295 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091030789 miR-302 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091070501 miRNA Proteins 0.000 description 1
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 238000001000 micrograph Methods 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006540 mitochondrial respiration Effects 0.000 description 1
- 239000002829 mitogen activated protein kinase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000472 morula Anatomy 0.000 description 1
- 210000000663 muscle cell Anatomy 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- FMURUEPQXKJIPS-UHFFFAOYSA-N n-(1-benzylpiperidin-4-yl)-6,7-dimethoxy-2-(4-methyl-1,4-diazepan-1-yl)quinazolin-4-amine;trihydrochloride Chemical compound Cl.Cl.Cl.C=12C=C(OC)C(OC)=CC2=NC(N2CCN(C)CCC2)=NC=1NC(CC1)CCN1CC1=CC=CC=C1 FMURUEPQXKJIPS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JJEDWBQZCRESJL-DEDYPNTBSA-N n-[(e)-(5-methylfuran-2-yl)methylideneamino]-2-phenoxybenzamide Chemical compound O1C(C)=CC=C1\C=N\NC(=O)C1=CC=CC=C1OC1=CC=CC=C1 JJEDWBQZCRESJL-DEDYPNTBSA-N 0.000 description 1
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 1
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 1
- 108010008217 nidogen Proteins 0.000 description 1
- 102000045246 noggin Human genes 0.000 description 1
- 108700007229 noggin Proteins 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- URPYMXQQVHTUDU-OFGSCBOVSA-N nucleopeptide y Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC(O)=CC=1)C1=CC=C(O)C=C1 URPYMXQQVHTUDU-OFGSCBOVSA-N 0.000 description 1
- 229930191479 oligomycin Natural products 0.000 description 1
- MNULEGDCPYONBU-AWJDAWNUSA-N oligomycin A Polymers O([C@H]1CC[C@H](/C=C/C=C/C[C@@H](C)[C@H](O)[C@@](C)(O)C(=O)[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](C)C(=O)[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](C)/C=C/C(=O)O[C@@H]([C@@H]2C)[C@@H]1C)CC)[C@@]12CC[C@H](C)[C@H](C[C@@H](C)O)O1 MNULEGDCPYONBU-AWJDAWNUSA-N 0.000 description 1
- 229940094443 oxytocics prostaglandins Drugs 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000000149 penetrating effect Effects 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 210000005059 placental tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000000419 plant extract Substances 0.000 description 1
- 108010093374 pneumococcal purpura-producing principle Proteins 0.000 description 1
- 229920000724 poly(L-arginine) polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 1
- 108010011110 polyarginine Proteins 0.000 description 1
- 230000000379 polymerizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- XEYBRNLFEZDVAW-UHFFFAOYSA-N prostaglandin E2 Natural products CCCCCC(O)C=CC1C(O)CC(=O)C1CC=CCCCC(O)=O XEYBRNLFEZDVAW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UQOQENZZLBSFKO-POPPZSFYSA-N prostaglandin J2 Chemical compound CCCCC[C@H](O)\C=C\[C@@H]1[C@@H](C\C=C/CCCC(O)=O)C=CC1=O UQOQENZZLBSFKO-POPPZSFYSA-N 0.000 description 1
- 150000003180 prostaglandins Chemical class 0.000 description 1
- PTJWIQPHWPFNBW-GBNDHIKLSA-N pseudouridine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1C1=CNC(=O)NC1=O PTJWIQPHWPFNBW-GBNDHIKLSA-N 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000004043 responsiveness Effects 0.000 description 1
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 239000011435 rock Substances 0.000 description 1
- JUVIOZPCNVVQFO-UHFFFAOYSA-N rotenone Natural products O1C2=C3CC(C(C)=C)OC3=CC=C2C(=O)C2C1COC1=C2C=C(OC)C(OC)=C1 JUVIOZPCNVVQFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940080817 rotenone Drugs 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 1
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 description 1
- 210000004927 skin cell Anatomy 0.000 description 1
- MFBOGIVSZKQAPD-UHFFFAOYSA-M sodium butyrate Chemical compound [Na+].CCCC([O-])=O MFBOGIVSZKQAPD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 210000001988 somatic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000021595 spermatogenesis Effects 0.000 description 1
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000012916 structural analysis Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 230000006794 tachycardia Effects 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 229920000208 temperature-responsive polymer Polymers 0.000 description 1
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- RTKIYFITIVXBLE-QEQCGCAPSA-N trichostatin A Chemical compound ONC(=O)/C=C/C(/C)=C/[C@@H](C)C(=O)C1=CC=C(N(C)C)C=C1 RTKIYFITIVXBLE-QEQCGCAPSA-N 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 108700026220 vif Genes Proteins 0.000 description 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0652—Cells of skeletal and connective tissues; Mesenchyme
- C12N5/0657—Cardiomyocytes; Heart cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6881—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for tissue or cell typing, e.g. human leukocyte antigen [HLA] probes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
- C12N15/1034—Isolating an individual clone by screening libraries
- C12N15/1072—Differential gene expression library synthesis, e.g. subtracted libraries, differential screening
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2503/00—Use of cells in diagnostics
- C12N2503/02—Drug screening
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2506/00—Differentiation of animal cells from one lineage to another; Differentiation of pluripotent cells
- C12N2506/02—Differentiation of animal cells from one lineage to another; Differentiation of pluripotent cells from embryonic cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/106—Pharmacogenomics, i.e. genetic variability in individual responses to drugs and drug metabolism
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/158—Expression markers
Description
一方、分化誘導された細胞が心筋細胞であるか否かを見極めるための指標として、これまで複数のマーカー遺伝子が同定されてきた。例えば、心筋細胞に対する表面マーカーとして、CD166(ALCM)(非特許文献4)、N-cadherin(特許文献3または非特許文献5)、VCAM1(特許文献4)などが報告されているが、成熟心筋細胞に特異的なマーカー遺伝子については報告がなされていない。
[1]CORIN、NCAM1、CRYAB、HBEGF、DMD、ATPIF1、CAV2、ITGAV、DCBLD2、CLIC4、BMPR2、CTSB、TMEM123、USP14およびMIR761からなる群から選択される少なくとも一つのマーカーが陽性であることを指標として、心筋細胞を含有する細胞集団から成熟心筋細胞を抽出する工程を含む、心筋細胞の製造方法。
[2]前記マーカーが、CORINである、[1]に記載の方法。
[3]心筋細胞を含有する細胞集団に含まれる細胞のうち、前記マーカーの発現量が上位50%以内である細胞が成熟心筋細胞として抽出される、[1]または[2]に記載の方法。
[4]心筋細胞を含有する細胞集団に含まれる細胞のうち、前記マーカーの発現量が上位33%以内の細胞が成熟心筋細胞として抽出される、[3]に記載の方法。
[5]前記心筋細胞がヒト心筋細胞である、[1]から[4]のいずれかに記載の方法。
[6]前記心筋細胞を含有する細胞集団が、多能性幹細胞から分化誘導された心筋細胞を含有する細胞集団である、[1]から[5]のいずれかに記載の方法。
[7]前記多能性幹細胞が、ES細胞またはiPS細胞である、[6]に記載の方法。
[8]前記心筋細胞への分化誘導が、胚様体を形成する工程を含む、[6]または[7]に記載の方法。
[9]前記心筋細胞への分化誘導が、サイトカインを含有する培地で胚様体を培養する工程を含む、[8]に記載の方法。
[10]前記サイトカインが、アクチビンA、BMP4(bone morphogenetic protein 4)、bFGF (basic fibroblast growth factor)、VEGF (vascular endothelial growth factor)およびWnt阻害剤からなる群から選択される少なくとも一つのサイトカインである、[9]に記載の方法。
[11]前記心筋細胞への分化誘導が、下記の工程を含む、[10]に記載の方法。
(1)多能性幹細胞から胚様体を形成する工程、
(2)(1)の工程で得られた胚様体をアクチビンA、BMP4およびbFGFを含有する培養液中で培養する工程、
(3)(2)の工程で得られた胚様体を解離する工程、
(4)(3)の工程で得られた細胞をVEGFおよびWnt阻害剤を含有する培養液中で培養して胚様体に再凝集させる工程、および
(5)(4)の工程で得られた胚様体をVEGFおよびbFGFを含有する培養液中で培養する工程。
[12]前記Wnt阻害剤が、IWP-3またはIWP-4である、[11]に記載の方法。
[13]前記心筋細胞への分化誘導の工程(5)において、乳酸を含み、グルコースを含まない培養液中で培養する期間を含む、[11]または[12]に記載の方法。
[14]薬剤候補物質の心毒性を試験する方法であって、
(A)[1]から[13]のいずれかに記載の方法により作製された成熟心筋細胞と候補物質とを接触させる工程、および
(B)前記工程(A)の接触後に心筋細胞が正常な機能を維持した場合、当該候補物質を心毒性を有さない薬剤として同定する工程
を含む、方法。
[15]前記心筋細胞の正常な機能が、電気生理学的に正常な機能である、[14]に記載の方法。
[16]CORIN、NCAM1、CRYAB、HBEGF、DMD、ATPIF1、CAV2、ITGAV、DCBLD2、CLIC4、BMPR2、CTSB、TMEM123、USP14およびMIR761からなる群から選択される少なくとも一つを検出する試薬を含む、成熟心筋細胞抽出キット。
[17]CORINを検出する試薬を含む、[16]に記載のキット。
[18]前記心筋細胞がヒト心筋細胞である、[16]または[17]に記載のキット。
[19]下記の工程(1)〜(5)によって多能性幹細胞から心筋細胞を含有する細胞集団を得ること、および得られた細胞群からCORIN、NCAM1、CRYAB、HBEGF、DMD、ATPIF1、CAV2、ITGAV、DCBLD2、CLIC4、BMPR2、CTSB、TMEM123、USP14およびMIR761からなる群から選択される少なくとも一つのマーカーが陽性であることを指標として心筋細胞を含有する細胞集団から成熟心筋細胞を抽出することを含む、心筋細胞の製造方法。
(1)多能性幹細胞から胚様体を形成する工程、
(2)(1)の工程で得られた胚様体をアクチビンA、BMP4およびbFGFを含有する培養液中で培養する工程、
(3)(2)の工程で得られた胚様体を解離する工程、
(4)(3)の工程で得られた細胞をVEGFおよびWnt阻害剤を含有する培養液中で培養して胚様体に再凝集させる工程、および
(5)(4)の工程で得られた胚様体をVEGFおよびbFGFを含有する培養液中で培養する工程。
また、「成熟心筋細胞」はMYH7、MYL2、MYL7、TCAP、SCN5AおよびRYR2から選択される1以上のマーカーの発現によって特徴づけられる。
本発明で心筋細胞を含有する細胞集団を得るために使用可能な多能性幹細胞は、生体に存在するすべての細胞に分化可能である多能性を有し、かつ、増殖能をも併せもつ幹細胞であり、それには、以下のものに限定されないが、例えば、胚性幹(ES)細胞、***幹細胞(「GS細胞」)、胚性生殖細胞(「EG細胞」)、人工多能性幹(iPS)細胞、核移植により得られるクローン胚由来の胚性幹(ntES)細胞などが含まれる。好ましい多能性幹細胞は、ES細胞、iPS細胞およびntES細胞である。
ES細胞は、ヒトやマウスなどの哺乳動物の初期胚(例えば胚盤胞)の内部細胞塊から樹立された、多能性と自己複製による増殖能を有する幹細胞である。
***幹細胞は、精巣由来の多能性幹細胞であり、***形成のための起源となる細胞である。この細胞は、ES細胞と同様に、種々の系列の細胞に分化誘導可能であり、例えばマウス胚盤胞に移植するとキメラマウスを作出できるなどの性質をもつ(M. Kanatsu-Shinohara et al. (2003) Biol. Reprod., 69:612-616; K. Shinohara et al. (2004), Cell, 119:1001-1012)。神経膠細胞系由来神経栄養因子(glial cell line-derived neurotrophic factor (GDNF))を含む培養液で自己複製可能であるし、またES細胞と同様の培養条件下で継代を繰り返すことによって、***幹細胞を得ることができる(竹林正則ら(2008),実験医学,26巻,5号(増刊),41〜46頁,羊土社(東京、日本))。
胚性生殖細胞は、胎生期の始原生殖細胞から樹立される、ES細胞と同様な多能性をもつ細胞であり、LIF、bFGF、幹細胞因子(stem cell factor)などの物質の存在下で始原生殖細胞を培養することによって樹立しうる(Y. Matsui et al. (1992), Cell, 70:841-847; J.L. Resnick et al. (1992), Nature, 359:550-551)。
人工多能性幹(iPS)細胞は、特定の初期化因子を、DNA又はタンパク質の形態で体細胞に導入することによって作製することができる、ES細胞とほぼ同等の特性、例えば分化多能性と自己複製による増殖能を有する体細胞由来の人工の幹細胞である(K. Takahashi and S. Yamanaka (2006) Cell, 126:663-676; K. Takahashi et al. (2007), Cell, 131:861-872; J. Yu et al. (2007), Science, 318:1917-1920; Nakagawa, M.ら,Nat. Biotechnol. 26:101-106 (2008);国際公開WO 2007/069666)。初期化因子は、ES細胞に特異的に発現している遺伝子、その遺伝子産物もしくはnon-coding RNAまたはES細胞の未分化維持に重要な役割を果たす遺伝子、その遺伝子産物もしくはnon-coding RNA、あるいは低分子化合物によって構成されてもよい。初期化因子に含まれる遺伝子として、例えば、Oct3/4、Sox2、Sox1、Sox3、Sox15、Sox17、Klf4、Klf2、c-Myc、N-Myc、L-Myc、Nanog、Lin28、Fbx15、ERas、ECAT15-2、Tcl1、beta-catenin、Lin28b、Sall1、Sall4、Esrrb、Nr5a2、Tbx3等が例示され、これらの初期化因子は、単独で用いても良く、組み合わせて用いても良い。初期化因子の組み合わせとしては、WO2007/069666、WO2008/118820、WO2009/007852、WO2009/032194、WO2009/058413、WO2009/057831、WO2009/075119、WO2009/079007、WO2009/091659、WO2009/101084、WO2009/101407、WO2009/102983、WO2009/114949、WO2009/117439、WO2009/126250、WO2009/126251、WO2009/126655、WO2009/157593、WO2010/009015、WO2010/033906、WO2010/033920、WO2010/042800、WO2010/050626、WO 2010/056831、WO2010/068955、WO2010/098419、WO2010/102267、WO 2010/111409、WO 2010/111422、WO2010/115050、WO2010/124290、WO2010/147395、WO2010/147612、Huangfu D, et al. (2008), Nat. Biotechnol., 26: 795-797、Shi Y, et al. (2008), Cell Stem Cell, 2: 525-528、Eminli S, et al. (2008), Stem Cells. 26:2467-2474、Huangfu D, et al. (2008), Nat Biotechnol. 26:1269-1275、Shi Y, et al. (2008), Cell Stem Cell, 3, 568-574、Zhao Y, et al. (2008), Cell Stem Cell, 3:475-479、Marson A, (2008), Cell Stem Cell, 3, 132-135、Feng B, et al. (2009), Nat Cell Biol. 11:197-203、R.L. Judson et al., (2009), Nat. Biotech., 27:459-461、Lyssiotis CA, et al. (2009), Proc Natl Acad Sci U S A. 106:8912-8917、Kim JB, et al. (2009), Nature. 461:649-643、Ichida JK, et al. (2009), Cell Stem Cell. 5:491-503、Heng JC, et al. (2010), Cell Stem Cell. 6:167-74、Han J, et al. (2010), Nature. 463:1096-100、Mali P, et al. (2010), Stem Cells. 28:713-720に記載の組み合わせが例示される。
一方、DNAの形態の場合、例えば、ウイルス、プラスミド、人工染色体などのベクター、リポフェクション、リポソーム、マイクロインジェクションなどの手法によって体細胞内に導入することができる。ウイルスベクターとしては、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター(以上、Cell, 126, pp.663-676, 2006; Cell, 131, pp.861-872, 2007; Science, 318, pp.1917-1920, 2007)、アデノウイルスベクター(Science, 322, 945-949, 2008)、アデノ随伴ウイルスベクター、センダイウイルスベクター(WO 2010/008054)などが例示される。また、人工染色体ベクターとしては、例えばヒト人工染色体(HAC)、酵母人工染色体(YAC)、細菌人工染色体(BAC、PAC)などが含まれる。プラスミドとしては、哺乳動物細胞用プラスミドを使用しうる(Science, 322:949-953, 2008)。ベクターには、核初期化物質が発現可能なように、プロモーター、エンハンサー、リボゾーム結合配列、ターミネーター、ポリアデニル化サイトなどの制御配列を含むことができるし、さらに、必要に応じて、薬剤耐性遺伝子(例えばカナマイシン耐性遺伝子、アンピシリン耐性遺伝子、ピューロマイシン耐性遺伝子など)、チミジンキナーゼ遺伝子、ジフテリアトキシン遺伝子などの選択マーカー配列、緑色蛍光タンパク質(GFP)、βグルクロニダーゼ(GUS)、FLAGなどのレポーター遺伝子配列などを含むことができる。また、上記ベクターには、体細胞への導入後、初期化因子をコードする遺伝子もしくはプロモーターとそれに結合する初期化因子をコードする遺伝子を共に切除するために、それらの前後にLoxP配列を有してもよい。
この他にも、血清を含有しない培地を用いて培養する方法も例示される(Sun N, et al. (2009), Proc Natl Acad Sci U S A. 106:15720-15725)。さらに、樹立効率を上げるため、低酸素条件(0.1%以上、15%以下の酸素濃度)によりiPS細胞を樹立しても良い(Yoshida Y, et al. (2009), Cell Stem Cell. 5:237-241またはWO2010/013845)。
nt ES細胞は、核移植技術によって作製されたクローン胚由来のES細胞であり、受精卵由来のES細胞とほぼ同じ特性を有している(T. Wakayama et al. (2001), Science, 292:740-743; S. Wakayama et al. (2005), Biol. Reprod., 72:932-936; J. Byrne et al. (2007), Nature, 450:497-502)。すなわち、未受精卵の核を体細胞の核と置換することによって得られたクローン胚由来の胚盤胞の内部細胞塊から樹立されたES細胞がnt ES(nuclear transfer ES)細胞である。nt ES細胞の作製のためには、核移植技術(J.B. Cibelli et al. (1998), Nature Biotechnol., 16:642-646)とES細胞作製技術(上記)との組み合わせが利用される(若山清香ら(2008),実験医学,26巻,5号(増刊), 47〜52頁)。核移植においては、哺乳動物の除核した未受精卵に、体細胞の核を注入し、数時間培養することで初期化することができる。
本発明における心筋細胞を含む細胞集団への分化誘導方法として、例えばLaflamme MAらにより報告された方法により、多能性幹細胞から心筋細胞を製造することができる(Laflamme MA & Murry CE, Nature 2011, Review)。この他にも特に特定されないが、例えば、人工多能性幹細胞を浮遊培養により細胞塊(胚様体)を形成させて心筋細胞を製造する方法、BMPシグナル伝達を抑制する物質の存在下で心筋細胞を製造する方法(WO2005/033298)、Activin AとBMPを順に添加させて心筋細胞を製造する方法(WO2007/002136)、カノニカルWntシグナル経路の活性化を促す物質の存在下で心筋細胞を製造する方法(WO2007/126077)、人工多能性幹細胞からFlk/KDR陽性細胞を単離し、シクロスポリンAの存在下で心筋細胞を製造する方法(WO2009/118928)などが例示される。
この工程においては、コロニーを形成した多能性幹細胞を解離して単細胞にしたのちに胚様体を形成させることが好ましい。多能性幹細胞を解離させる工程においては、互いに接着して集団を形成している細胞を個々の細胞に解離(分離)させる。多能性幹細胞を解離させる方法としては、例えば、力学的に解離する方法、プロテアーゼ活性とコラゲナーゼ活性を有する解離溶液(例えば、Accutase(商標)およびAccumax(商標)など)またはコラゲナーゼ活性のみを有する解離溶液を用いた解離方法が挙げられる。好ましくは、プロテアーゼ活性とコラゲナーゼ活性を有する解離溶液(特に好ましくは、Accumax)を用いて多能性幹細胞を解離する方法が用いられる。
本工程において用いる培養液は、動物細胞の培養に用いられる培地を基礎培地へアクチビンA、BMP4およびbFGFを添加することにより調製することができる。基礎培地としては、例えばIMDM培地、Medium 199培地、Eagle's Minimum Essential Medium (EMEM)培地、αMEM培地、Dulbecco's modified Eagle's Medium (DMEM)培地、Ham's F12培地、RPMI 1640培地、Fischer's培地、Neurobasal Medium(ライフテクノロジーズ)、StemPro34(Invitrogen)およびこれらの混合培地などが包含される。培地には、血清が含有されていてもよいし、あるいは無血清でもよい。必要に応じて、培地は、例えば、アルブミン、トランスフェリン、Knockout Serum Replacement(KSR)(ES細胞培養時のFBSの血清代替物)、N2サプリメント(Invitrogen)、B27サプリメント(Invitrogen)、脂肪酸、インスリン、コラーゲン前駆体、微量元素、2-メルカプトエタノール、1-チオールグリセロールなどの1つ以上の血清代替物を含んでもよいし、脂質、アミノ酸、L-グルタミン、Glutamax(Invitrogen)、非必須アミノ酸、ビタミン、増殖因子、低分子化合物、抗生物質、抗酸化剤、ピルビン酸、緩衝剤、無機塩類などの1つ以上の物質も含有し得る。好ましい基礎培地は、トランスフェリン、1-チオールグリセロール、L-グルタミン、アスコルビン酸を含有するStemPro34である。
本発明において、胚様体を解離する方法は工程(1)で説明したのと同様の方法を用いることができる。
本工程の培養においては、工程(1)で説明したのと同様に、表面が細胞接着性を向上させる目的で人工的に処理されていない培養容器、もしくは、人工的に接着を抑制する処理した培養容器を用いて浮遊培養させることが好ましい。
BMP阻害剤としては、Chordin、Noggin、Follistatin、などのタンパク質性阻害剤、Dorsomorphin (すなわち、6-[4-(2-piperidin-1-yl-ethoxy)phenyl]-3-pyridin-4-yl-pyrazolo[1,5-a]pyrimidine)、その誘導体 (P. B. Yu et al. (2007), Circulation, 116:II_60; P.B. Yu et al. (2008), Nat. Chem. Biol., 4:33-41; J. Hao et al. (2008), PLoS ONE, 3(8):e2904)およびLDN193189(すなわち、4-(6-(4-(piperazin-1-yl)phenyl)pyrazolo[1,5-a]pyrimidin-3-yl)quinoline)が例示される。
TGFβ阻害剤としては、TGFβの受容体への結合からSMADへと続くシグナル伝達を阻害する物質であり、受容体であるALKファミリーへの結合を阻害する物質、またはALKファミリーによるSMADのリン酸化を阻害する物質が挙げられ、例えば、Lefty-1(NCBI Accession No.として、マウス:NM_010094、ヒト:NM_020997が例示される)、SB431542、SB202190(以上、R.K.Lindemann et al., Mol. Cancer, 2003, 2:20)、SB505124 (GlaxoSmithKline)、 NPC30345、SD093、 SD908、SD208 (Scios)、LY2109761、LY364947、 LY580276 (Lilly Research Laboratories)、A83-01(WO 2009146408) およびこれらの誘導体などが例示される。
本工程において用いる培養液は、動物細胞の培養に用いられる培地を基礎培地へVEGFおよびbFGFを添加することにより調製することができる。基礎培地としては、例えばIMDM培地、Medium 199培地、Eagle's Minimum Essential Medium (EMEM)培地、αMEM培地、Dulbecco's modified Eagle's Medium (DMEM)培地、Ham's F12培地、RPMI 1640培地、Fischer's培地、Neurobasal Medium(ライフテクノロジーズ)、StemPro34(Invitrogen)およびこれらの混合培地などが包含される。培地には、血清が含有されていてもよいし、あるいは無血清でもよい。必要に応じて、培地は、例えば、アルブミン、トランスフェリン、Knockout Serum Replacement(KSR)(ES細胞培養時のFBSの血清代替物)、N2サプリメント(Invitrogen)、B27サプリメント(Invitrogen)、脂肪酸、インスリン、コラーゲン前駆体、微量元素、2-メルカプトエタノール、1-チオールグリセロールなどの1つ以上の血清代替物を含んでもよいし、脂質、アミノ酸、L-グルタミン、Glutamax(Invitrogen)、非必須アミノ酸、ビタミン、増殖因子、低分子化合物、抗生物質、抗酸化剤、ピルビン酸、緩衝剤、無機塩類などの1つ以上の物質も含有し得る。好ましい基礎培地は、トランスフェリン、1-チオールグリセロール、L-グルタミン、アスコルビン酸を含有するStemPro34である。
本発明においては、本発明のマーカーを用いて抽出された成熟心筋細胞を用いて、薬剤候補物質が心毒性を有するか否かを調べることができる。心毒性の試験は、当分野における技術常識に基づいて、任意の方法を用いて行うことができる。本発明における試験は、例えば、電気生理学的手法または毒性マーカー遺伝子の発現解析などに基づいて行うことができる。電気生理学的な手法としては、例えば、パッチクランプ試験などが挙げられるがこれらに限定されない。また、毒性マーカー遺伝子の発現解析に用いられる毒性マーカー遺伝子としては、例えば、ABHD2、CCR1、GJA1、NEXN、PSMD7、TGFB2、VIM、ABRA、CD14、GPM6A、NFIB、PUM2、THRAP3、WIPI1、ACTA1、CFD、HAMP、PDK4、PVR、TIAM1、ZNF148、AIFM1、COL15A1、HSPA2、PKN2、RBM3、TIMP1、ZNF23、AK3、COL3A1、HSPH1、PLA2G4A、REG3G、TUBB6、 ASH1L、CREM、IFT20、PLAU、RND1、TXNIP、ATP5J、CSNK2A2、IGFBP5、PLN、RPS6KB1、UBA5、BCAT1、DUSP8、IL6、POSTN SERPINE1 UBXN2A、BGN、EGR1、ITPR2、PPBP、SIK1、UCK2、 BSN、FCGR2B、KBTBD10、PPP1R14C、SLC4A3、UCP1、BTG2、FHL1、KBTBD5、PRKAB2、SPP1、VCAN、CCL7、FOSL1、MCM6、PSMA2、TCF4、VEGFAなどが挙げられる。毒性マーカー遺伝子の測定および解析は、例えば、TruSeq ターゲットRNA発現解析−Cardiotoxityパネル(イルミナ社、Catalog ID:RT-202-1009)を用いて、上記遺伝子群を標的とすることにより行うことができる。
薬剤候補物質を接触させた成熟心筋細胞において、正常な機能、好ましくは電気生理的に正常な機能が維持された場合に、当該化合物が心毒性を有さない薬剤として同定することができる。一方、例えば、薬剤候補物質を接触させた成熟心筋細胞における電位変化の持続時間と接触させなかった成熟心筋細胞における電位変化の持続時間を比較して、薬剤候補物質を接触させた成熟心筋細胞における電位変化の持続時間が延長した場合に、当該薬剤候補物質は心毒性を有すると判定することができる。
心筋細胞を含有する細胞集団より心筋細胞の抽出または検出を行うために使用される試薬としては、CORIN、NCAM1、CRYAB、HBEGF、DMD、ATPIF1、CAV2、ITGAV、DCBLD2、CLIC4、BMPR2、CTSB、TMEM123、USP14またはMIR761に特異的親和性を有する試薬であれば何でもよく、抗体、アプタマー、ペプチドまたは特異的に認識する化合物などを用いることができ、好ましくは、抗体もしくはその断片である。
また、これらのマーカーの遺伝子発現を調べる場合は、これらのマーカー遺伝子にハイブリダイズするプライマーやプローブを使用することができる。
以下に実施例を挙げて本発明をより具体的に説明するが、本発明がこれらに限定されないことは言うまでもない。
多能性幹細胞
多能性幹細胞として、次のiPS細胞株、201B7株およびMYH6-GFPレポーターを有する201B7株(以下、MYH6-GFPレポーター株と言う。)を用いて実験を行った。201B7株は、Takahashi K, et al. Cell. 131: 861-72, 2007に記載の方法により作製された。MYH6-GFPレポーター株は、PiggyBacトランスポゾンシステム(System Biosciences, Inc.)を用いて、201B7株に、MYH6(myosin heavy chain 6)プロモーターの下流にEGFPカセットを作動可能に連結したベクターを導入することにより行われた。201B7株およびMYH6-GFPレポーター株の培養は、従来の方法で行われた (Takahashi K, et al. Cell. 131: 861-72, 2007およびNakagawa M, et al. Nat Biotechnol. 26: 101-6, 2008)。
MYH6-GFPレポーター株をCTK solution(ReproCELL)で2分処理後、溶液を除去し、続いてAccumax(Innovative Cell Technologies)で5分処理し、ピペッティングによりシングルセルへと解離した。遠心分離により培地を除去し、得られた細胞を1wellあたり2500 cells/wellにて低接着96wellディッシュ(Corning)へ播種し、1% L-Glutamine、150μg/mL Transferrin、50μg/mL Ascorbic Acid(sigma)、3.9×10-3%MTG、10μM Rock inhibitorおよび2ng/mL BMP4(R&D)、0.50% Matrigel(Growth Factor Reduced)を添加したSTEMPRO 34中、37℃・5%酸素条件下にて培養して、胚様体(以下、EBと言う。)を形成させた(day0)。
上記の心筋細胞誘導法により、MYH6-GFPレポーター株をday9、day21およびday30までそれぞれ分化誘導させた。day9、day21およびday30のそれぞれの細胞と分化誘導前のMYH6-GFPレポーター株について、シングルセルRNA seq解析を行い、それぞれの細胞集団についてそれらを平均したものをバルクデータとした。続いて、下記の4つの基準を元に、すべての基準を満たす遺伝子を同定した。
1.Day 21,30の心筋細胞 > Day 9の心筋細胞、Fold Change (FC) > 2.0
2.Day21,30の心筋細胞 > iPS細胞(MYH6-GFPレポーター株)、FC>5.0
3.成体心臓 > 胎児心臓、FC > 2.0
4.成体心臓 > 他の組織(肝臓、腎臓および脳) 、FC>5.0
実施例1において新規な成熟心筋細胞マーカーとして同定されたCORINが、実際に成熟心筋細胞の抽出に有効であるかについて詳細に調べた。簡潔には、実施例1の心筋細胞誘導法により分化させたday30のMYH6-GFPレポーター株について、既知の心筋細胞マーカーであるMYH6の発現を代替するGFPおよびCORINを指標として、FACSにより解析を行った。FACS解析は、FACS Arial II cell sorter (BD Biosciences)を用いて行った。その結果、GFPおよびCORINのいずれの発現量も高い細胞群(High群)とGFPの発現量は高いが、CORINの発現量が低い細胞群(Low群)を確認した。さらに、High群およびLow群をFACS Arial II cell sorterを用いて選別した(図1(A))。High群は、CORINの発現量が上位33%の細胞とし、Low群は、CORINの発現量が下位33%の細胞として選別した。
得られたHigh群およびLow群について、心筋細胞マーカー(MYH7、MYL2、MYL7、TCAP、SCN5AおよびRYR2)の相対的な発現量を測定することにより、心筋細胞の成熟度を調べた。発現量の測定は、定量的RT-PCRにより行った。簡潔には、RNeasy Mini Kit (Qiagen)を用いて、細胞からmRNAを単離した。得られた全RNAのうち1μgを鋳型として、Superscript III reverse transcriptase (Invitrogen)を用いて逆転写によりcDNAを合成した。定量的RT-PCR解析は、Power SYBR Green qPCR mastermix (Invitrogen)を用いて、StepOne real-time PCR system (ABI)により測定した。その結果、調べられたいずれの心筋細胞マーカーについても、Low群よりもHigh群において高い発現量を示すことが見出された(図1(B))。これは、High群が相対的に成熟した心筋細胞の細胞群であることを示唆している。
実施例1において新規な成熟心筋細胞マーカーとして同定されたCORINが、一部改変を行った心筋細胞誘導法により得られた心筋細胞群から成熟心筋細胞の抽出が可能であるか否かを検討した。当該一部改変とは、簡潔には、実施例1の心筋細胞誘導法のday23-27において、グルコース不含、乳酸添加した培養液中で培養する工程を加えたことである。day30のMYH6-GFPレポーター株を既知の心筋細胞マーカー(TNT)を指標としてFACS解析を行ったところ、94.7%の細胞がTNT陽性であり、心筋細胞へ分化していることが示された(図3(B))。なお、FACS解析は、実施例2と同様にFACS Arial II cell sorter (BD Biosciences)を用いて行った。
<形態解析>
iPS細胞から分化誘導して30日目の心筋細胞を2次元培養ディッシュに再播種した後、顕微鏡を用いて観察したところ、図4のように、CORIN-High群はCORIN-Low群と比較して大きい細胞サイズを示した。
iPS細胞から分化誘導して30日目の心筋細胞をフィブロネクチンコートディッシュに再播種し、その3日後に細胞切片を作製し、透過型電子顕微鏡(H-7650, Hitachi)で解析した結果、図5および6に示すように、CORIN-High群は明確に配列されたサルコメア構造を示し、CORIN-Low群と比較してサルコメアの幅は顕著に長かった。
ミトコンドリア機能を調べるため、iPS細胞から分化誘導して30日目の心筋細胞(20000個)をフィブロネクチンでコートされたアッセイウェル(Seahorse Bioscience)に播種し、播種3日後、酸素消費速度(OCR)をSeahorse BioscienceのXF24細胞外フラックスアナライザーで計測した。その結果、図7に示すように、CORIN-High群は高い酸素消費速度を示し、電子伝達系の活性も高いことが分かった。
Claims (20)
- CORINが陽性であることを指標として、心筋細胞を含有する細胞集団から成熟心筋細胞を抽出する工程を含む、心筋細胞の製造方法。
- さらに、NCAM1、CRYAB、HBEGF、DMD、ATPIF1、CAV2、ITGAV、DCBLD2、CLIC4、BMPR2、CTSB、TMEM123、USP14およびMIR761からなる群から選択される少なくとも一つのマーカーが陽性であることを指標とする、請求項1に記載の方法。
- 心筋細胞を含有する細胞集団に含まれる細胞のうち、CORINの発現量が上位50%以内の細胞が成熟心筋細胞として抽出される、請求項1または2に記載の方法。
- 心筋細胞を含有する細胞集団に含まれる細胞のうち、CORINの発現量が上位33%以内の細胞が成熟心筋細胞として抽出される、請求項3に記載の方法。
- 前記心筋細胞がヒト心筋細胞である、請求項1から4のいずれか1項に記載の方法。
- 前記心筋細胞を含有する細胞集団が、多能性幹細胞から分化誘導された心筋細胞を含有する細胞集団である、請求項1から5のいずれか1項に記載の方法。
- 前記多能性幹細胞が、ES細胞またはiPS細胞である、請求項6に記載の方法。
- 前記心筋細胞への分化誘導が、胚様体を形成する工程を含む、請求項6または7に記載の方法。
- 前記心筋細胞への分化誘導が、サイトカインを含有する培地で胚様体を培養する工程を含む、請求項8に記載の方法。
- 前記サイトカインが、アクチビンA、BMP4、bFGF、VEGFおよびWnt阻害剤からなる群から選択される少なくとも一つのサイトカインである、請求項9に記載の方法。
- 前記心筋細胞への分化誘導が、下記の工程を含む、請求項10に記載の方法。
(1)多能性幹細胞から胚様体を形成する工程、
(2)(1)の工程で得られた胚様体をアクチビンA、BMP4およびbFGFを含有する培養液中で培養する工程、
(3)(2)の工程で得られた胚様体を解離する工程、
(4)(3)の工程で得られた細胞をVEGFおよびWnt阻害剤を含有する培養液中で培養して胚様体に再凝集させる工程、および
(5)(4)の工程で得られた胚様体をVEGFおよびbFGFを含有する培養液中で培養する工程。 - 前記Wnt阻害剤が、IWP-3またはIWP-4である、請求項11に記載の方法。
- 前記心筋細胞への分化誘導の工程(5)において、乳酸を含み、グルコースを含まない培養液中で培養する期間を含む、請求項11または12に記載の方法。
- 薬剤候補物質の心毒性を試験する方法であって、
(A)請求項1から13のいずれか1項に記載の方法により作製された成熟心筋細胞と候補物質とを接触させる工程、および
(B)前記工程(A)の接触後に心筋細胞が正常な機能を維持した場合、当該候補物質を心毒性を有さない薬剤として同定する工程
を含む、方法。 - 前記心筋細胞の正常な機能が、電気生理学的に正常な機能である、請求項14に記載の方法。
- CORINを検出する試薬を含む、成熟心筋細胞抽出キット。
- さらに、NCAM1、CRYAB、HBEGF、DMD、ATPIF1、CAV2、ITGAV、DCBLD2、CLIC4、BMPR2、CTSB、TMEM123、USP14およびMIR761からなる群から選択される少なくとも一つを検出する試薬を含む、請求項16に記載のキット。
- 前記心筋細胞がヒト心筋細胞である、請求項16または17に記載のキット。
- 下記の工程(1)〜(5)によって多能性幹細胞から心筋細胞を含有する細胞集団を得ること、および得られた細胞群からCORINが陽性であることを指標として心筋細胞を含有する細胞集団から成熟心筋細胞を抽出することを含む、心筋細胞の製造方法。
(1)多能性幹細胞から胚様体を形成する工程、
(2)(1)の工程で得られた胚様体をアクチビンA、BMP4およびbFGFを含有する培養液中で培養する工程、
(3)(2)の工程で得られた胚様体を解離する工程、
(4)(3)の工程で得られた細胞をVEGFおよびWnt阻害剤を含有する培養液中で培養して胚様体に再凝集させる工程、および
(5)(4)の工程で得られた胚様体をVEGFおよびbFGFを含有する培養液中で培養する工程。 - さらに、NCAM1、CRYAB、HBEGF、DMD、ATPIF1、CAV2、ITGAV、DCBLD2、CLIC4、BMPR2、CTSB、TMEM123、USP14およびMIR761からなる群から選択される少なくとも一つのマーカーが陽性であることを指標とする、請求項19に記載の方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2014262906 | 2014-12-25 | ||
JP2014262906 | 2014-12-25 | ||
PCT/JP2015/086044 WO2016104614A1 (ja) | 2014-12-25 | 2015-12-24 | 新規成熟心筋細胞マーカー |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPWO2016104614A1 JPWO2016104614A1 (ja) | 2017-10-05 |
JP6780197B2 true JP6780197B2 (ja) | 2020-11-04 |
Family
ID=56150627
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2016566449A Active JP6780197B2 (ja) | 2014-12-25 | 2015-12-24 | 新規成熟心筋細胞マーカー |
Country Status (4)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20170349883A1 (ja) |
EP (1) | EP3252149A4 (ja) |
JP (1) | JP6780197B2 (ja) |
WO (1) | WO2016104614A1 (ja) |
Families Citing this family (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2018139548A1 (ja) * | 2017-01-26 | 2018-08-02 | 国立大学法人大阪大学 | 幹細胞の中胚葉系細胞への分化誘導用培地および中胚葉系細胞の製造方法 |
JP2018143144A (ja) | 2017-03-03 | 2018-09-20 | パナソニック株式会社 | ヒト由来iPS細胞から分化した心筋細胞においてβミオシン重鎖を効率的に産生させる方法 |
JP2020099202A (ja) * | 2017-04-12 | 2020-07-02 | Agc株式会社 | 分化細胞スフェロイドの製造方法 |
Family Cites Families (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2012162741A1 (en) * | 2011-06-01 | 2012-12-06 | Monash University | Enrichment of cardiomyocytes |
JP6373253B2 (ja) * | 2012-07-17 | 2018-08-15 | 国立大学法人京都大学 | 新規心筋細胞マーカー |
JP6429280B2 (ja) * | 2013-05-14 | 2018-11-28 | 国立大学法人京都大学 | 効率的な心筋細胞の誘導方法 |
-
2015
- 2015-12-24 WO PCT/JP2015/086044 patent/WO2016104614A1/ja active Application Filing
- 2015-12-24 JP JP2016566449A patent/JP6780197B2/ja active Active
- 2015-12-24 EP EP15873182.8A patent/EP3252149A4/en not_active Withdrawn
- 2015-12-24 US US15/539,485 patent/US20170349883A1/en not_active Abandoned
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US20170349883A1 (en) | 2017-12-07 |
EP3252149A4 (en) | 2018-09-12 |
WO2016104614A1 (ja) | 2016-06-30 |
JPWO2016104614A1 (ja) | 2017-10-05 |
EP3252149A1 (en) | 2017-12-06 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US20230114089A1 (en) | Method for inducing dopaminergic neuron progenitor cells | |
KR102312123B1 (ko) | 도파민 생산 신경전구세포의 제조방법 | |
US9074188B2 (en) | Cardiomyocyte- and/or cardiac progenitor cell-proliferating agent and method for proliferating cardiomyocytes and/or cardiac progenitor cells | |
EP2998391B1 (en) | Efficient myocardial cell induction method | |
EP2985344A1 (en) | Method for inducing alveolar epithelium progenitor cells | |
EP2938721B1 (en) | Method for inducing astrocytes | |
US10240126B2 (en) | Induced pluripotent stem cell selection method and method for inducing differentiation to blood cells | |
US10150949B2 (en) | Cardiomyocyte marker | |
JP6845500B2 (ja) | 骨格筋前駆細胞の製造方法 | |
JP6612736B2 (ja) | 心筋細胞の選別方法 | |
JP6090937B2 (ja) | 新規ドーパミン産生神経前駆細胞マーカー | |
JP6025067B2 (ja) | 新規心筋細胞マーカー | |
JP6780197B2 (ja) | 新規成熟心筋細胞マーカー | |
WO2023153464A1 (ja) | 多能性幹細胞から中脳底板領域の神経系細胞への分化における、培養液中の細胞の分化能を判定する方法 | |
WO2022102742A1 (ja) | 骨格筋系譜細胞および骨格筋幹細胞の高効率純化用細胞表面マーカーおよびその利用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20181219 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20200121 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20200316 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20200825 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20200914 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6780197 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |