JP6759679B2 - Separator and column - Google Patents

Description

本発明は、分離材及びカラムに関する。 The present invention relates to a separating material and a column.

従来、タンパク質に代表される生体高分子を分離精製する場合、一般的には、多孔質型の合成高分子を母体とするイオン交換体、親水性天然高分子の架橋ゲルを母体とするイオン交換体等が用いられている。上記の多孔質型の合成高分子を母体とするイオン交換体の場合、塩濃度による体積変化が小さいため、カラムに充填してクロマトグラフィーで用いた場合、通液時の耐圧性に優れる傾向がある。しかし、このイオン交換体は、タンパク質等の分離に用いた場合、疎水的相互作用に基づく不可逆吸着等の非特異吸着が起こるため、ピークの非対称化が発生する、又は該疎水的相互作用でイオン交換体に吸着されたタンパク質が吸着されたまま回収できないという問題点がある。 Conventionally, when biopolymers typified by proteins are separated and purified, generally, an ion exchanger based on a porous synthetic polymer and an ion exchange based on a crosslinked gel of a hydrophilic natural polymer are used as a base. The body etc. are used. In the case of the ion exchanger based on the above-mentioned porous synthetic polymer, the volume change due to salt concentration is small, so when it is packed in a column and used for chromatography, it tends to have excellent pressure resistance during liquid passage. is there. However, when this ion exchanger is used for separating proteins and the like, non-specific adsorption such as irreversible adsorption based on hydrophobic interaction occurs, so peak asymmetry occurs, or ions occur due to the hydrophobic interaction. There is a problem that the protein adsorbed on the exchanger cannot be recovered while being adsorbed.

一方、デキストラン、アガロース等の多糖に代表される親水性天然高分子の架橋ゲルを母体とするイオン交換体の場合、タンパク質の非特異吸着が殆どないという利点がある。ところが、このイオン交換体は、水溶液中で著しく膨潤し、溶液のイオン強度による体積変化、及び遊離酸形と負荷形との体積変化が大きく、機械的強度も十分ではないという欠点を有する。特に、架橋ゲルをクロマトグラフィーで使用する場合、通液時の圧力損失が大きく、通液によりゲルが圧密化するといった欠点がある。 On the other hand, in the case of an ion exchanger whose parent is a crosslinked gel of a hydrophilic natural polymer typified by a polysaccharide such as dextran or agarose, there is an advantage that there is almost no non-specific adsorption of proteins. However, this ion exchanger has a drawback that it swells remarkably in an aqueous solution, the volume change due to the ionic strength of the solution, and the volume change between the free acid type and the loaded type are large, and the mechanical strength is not sufficient. In particular, when the crosslinked gel is used for chromatography, there is a drawback that the pressure loss during liquid passage is large and the gel is consolidated by liquid passage.

親水性天然高分子の架橋ゲルが持つ欠点を克服するため、これをいわば「骨格」となる剛直な物質と組み合わせる試みがこれまでになされている（例えば、特許文献１〜７）。 In order to overcome the drawbacks of cross-linked gels of hydrophilic natural polymers, attempts have been made to combine them with a rigid substance that serves as a so-called "skeleton" (for example, Patent Documents 1 to 7).

米国特許第４９６５２８９号明細書U.S. Pat. No. 4,965,289 米国特許第４３３５０１７号明細書U.S. Pat. No. 4,335,017 米国特許第４３３６１６１号明細書U.S. Pat. No. 4,336,161 米国特許第３９６６４８９号明細書U.S. Pat. No. 3,966,489 特開平１−２５４２４７号公報Japanese Unexamined Patent Publication No. 1-254247 米国特許第５１１４５７７号明細書U.S. Pat. No. 5,114,577 特開２００９−２４４０６７号公報Japanese Unexamined Patent Publication No. 2009-244067

しかしながら、従来の分離材は、タンパク質の非特異吸着が多く、かつカラムに充填したときの通液性に劣るという問題がある。 However, the conventional separating material has a problem that it has a large amount of non-specific adsorption of proteins and is inferior in liquid permeability when packed in a column.

そこで、本発明は、タンパク質の非特異吸着が低減され、カラムに充填したときの通液性に優れる分離材を提供することを目的とする。 Therefore, an object of the present invention is to provide a separating material in which non-specific adsorption of a protein is reduced and the liquid permeability is excellent when packed in a column.

本発明の具体的態様を以下に示す。
［１］ 疎水性高分子粒子と、該疎水性高分子粒子の表面の少なくとも一部を被覆する被覆層と、を備え、上記被覆層が、水酸基及び水酸基以外の官能基を有する官能基含有高分子を含む、分離材。
［２］ 上記水酸基以外の官能基が、カルボキシ基、エポキシ基、又はアミノ基である、［１］に記載の分離材。
［３］ 水中での５％圧縮変形弾性率が７０ＭＰａ以上である、［１］又は［２］に記載の分離材。
［４］ カラムに充填した場合、カラム圧０．３ＭＰａのときに通液速度が５００ｃｍ／ｈ以上である、［１］〜［３］のいずれかに記載の分離材。
［５］ 上記疎水性高分子粒子が、スチレン系モノマに由来する構造単位を有する疎水性高分子を含む、［１］〜［４］のいずれかに記載の分離材。
［６］ 上記官能基含有高分子が、多糖類又はその変性体に由来する構造を含む、［１］〜［５］のいずれかに記載の分離材。
［７］ 上記官能基含有高分子が、アガロース又はその変性体に由来する構造を含む、［１］〜［６］のいずれかに記載の分離材。
［８］ 上記官能基含有高分子が、架橋されている、［１］〜［７］のいずれかに記載の分離材。
［９］ 上記疎水性高分子粒子の平均粒径が１０〜５００μｍである、［１］〜［８］のいずれかに記載の分離材。
［１０］ 上記疎水性高分子粒子が多孔構造を有する、［１］〜［９］のいずれかに記載の分離材。
［１１］ ［１］〜［１０］のいずれかに記載の分離材を備えるカラム。 Specific aspects of the present invention are shown below.
[1] A high functional group content including a hydrophobic polymer particle and a coating layer that covers at least a part of the surface of the hydrophobic polymer particle, and the coating layer has a hydroxyl group and a functional group other than the hydroxyl group. Separator containing molecules.
[2] The separating material according to [1], wherein the functional group other than the hydroxyl group is a carboxy group, an epoxy group, or an amino group.
[3] The separating material according to [1] or [2], wherein the 5% compressive deformation elastic modulus in water is 70 MPa or more.
[4] The separating material according to any one of [1] to [3], wherein when the column is filled, the liquid passing speed is 500 cm / h or more when the column pressure is 0.3 MPa.
[5] The separating material according to any one of [1] to [4], wherein the hydrophobic polymer particles contain a hydrophobic polymer having a structural unit derived from a styrene-based monomer.
[6] The separating material according to any one of [1] to [5], wherein the functional group-containing polymer contains a structure derived from a polysaccharide or a modified product thereof.
[7] The separating material according to any one of [1] to [6], wherein the functional group-containing polymer contains a structure derived from agarose or a modified product thereof.
[8] The separating material according to any one of [1] to [7], wherein the functional group-containing polymer is crosslinked.
[9] The separating material according to any one of [1] to [8], wherein the hydrophobic polymer particles have an average particle size of 10 to 500 μm.
[10] The separating material according to any one of [1] to [9], wherein the hydrophobic polymer particles have a porous structure.
[11] A column comprising the separating material according to any one of [1] to [10].

本発明によれば、タンパク質の非特異吸着が低減され、カラムに充填したときの通液性に優れる分離材及び当該分離材を備えるカラムを提供することができる。 According to the present invention, it is possible to provide a separating material in which non-specific adsorption of a protein is reduced and excellent liquid permeability when packed in a column, and a column provided with the separating material.

以下、本発明の好適な実施形態について説明をするが、本発明はこれらの実施形態に何ら限定されるものではない。 Hereinafter, preferred embodiments of the present invention will be described, but the present invention is not limited to these embodiments.

＜分離材＞
本実施形態の分離材は、疎水性高分子粒子と、該疎水性高分子粒子の表面の少なくとも一部を被覆する被覆層と、を備え、上記被覆層が、水酸基及び水酸基以外の官能基を有する官能基含有高分子を含む。なお、例えば、疎水性高分子粒子が多孔構造を有するような態様である場合において、「疎水性高分子粒子の表面」とは、疎水性高分子粒子の外側の表面のみでなく、疎水性高分子粒子の内部における細孔の表面を含むものとする。本実施形態の分離材によれば、タンパク質の非特異吸着が低減されると共に、カラムに充填したときに優れた通液性を有する。また、本実施形態の分離材は、耐久性、耐アルカリ性及び耐圧性にも優れ、カラムに充填したときの吸着量（動的吸着量）も実用上充分に高いと考えられる。 <Separation material>
The separating material of the present embodiment includes hydrophobic polymer particles and a coating layer that covers at least a part of the surface of the hydrophobic polymer particles, and the coating layer contains a hydroxyl group and a functional group other than a hydroxyl group. Includes functional group-containing polymers. For example, in the case where the hydrophobic polymer particles have a porous structure, the “surface of the hydrophobic polymer particles” is not only the outer surface of the hydrophobic polymer particles but also highly hydrophobic. It shall include the surface of the pores inside the molecular particles. According to the separating material of the present embodiment, the non-specific adsorption of the protein is reduced, and the protein has excellent liquid permeability when packed in the column. Further, the separating material of the present embodiment is excellent in durability, alkali resistance and pressure resistance, and it is considered that the adsorption amount (dynamic adsorption amount) when packed in the column is sufficiently high in practical use.

本実施形態の分離材が上述の効果を発揮する理由を、本発明者らは、以下のように推測している。 The present inventors speculate the reason why the separating material of the present embodiment exerts the above-mentioned effect as follows.

本実施形態の分離材は、上記疎水性高分子粒子と、上記被覆層とを備えることにより、疎水性高分子粒子及び上記官能基含有高分子の双方の利点を有すると考えられる。例えば、本実施形態の分離材は、上記疎水性高分子粒子を備えることにより、耐久性、耐アルカリ性及び耐圧性に優れ、かつカラムに充填したときに優れた通液性を発揮すると考えられる。また、本実施形態の分離材は、上記被覆層を備えることにより、タンパク質の非特異吸着が低減されると共に、タンパク質等の吸脱着が起こり易く、同一流速下でのタンパク質等の吸着量（動的吸着量）が大きいと考えられる。 It is considered that the separating material of the present embodiment has the advantages of both the hydrophobic polymer particles and the functional group-containing polymer by providing the hydrophobic polymer particles and the coating layer. For example, it is considered that the separating material of the present embodiment is excellent in durability, alkali resistance and pressure resistance by providing the above-mentioned hydrophobic polymer particles, and exhibits excellent liquid permeability when packed in a column. Further, the separating material of the present embodiment is provided with the above-mentioned coating layer, so that non-specific adsorption of proteins is reduced, and adsorption / desorption of proteins and the like is likely to occur, and the amount of adsorption (movement) of proteins and the like under the same flow velocity. Target adsorption amount) is considered to be large.

（疎水性高分子粒子）
本実施形態に係る疎水性高分子粒子は、疎水性を有する高分子（以下、場合により「疎水性高分子」という）を含む粒子である。疎水性高分子粒子の製造方法に特に制限はないが、例えば、疎水性を有する高分子を形成可能なモノマを重合させる方法が挙げられる。モノマとしては、疎水性を有する高分子を形成可能なものであれば、特に限定されないが、例えば、スチレン系モノマが挙げられる。すなわち、上記疎水性高分子粒子は、例えば、スチレン系モノマに由来する構造単位を有する疎水性高分子を含んでいてもよい。 (Hydrophobic polymer particles)
The hydrophobic polymer particles according to the present embodiment are particles containing a polymer having hydrophobicity (hereinafter, sometimes referred to as “hydrophobic polymer”). The method for producing the hydrophobic polymer particles is not particularly limited, and examples thereof include a method of polymerizing a monomer capable of forming a hydrophobic polymer. The monomer is not particularly limited as long as it can form a hydrophobic polymer, and examples thereof include a styrene-based monomer. That is, the hydrophobic polymer particles may contain, for example, a hydrophobic polymer having a structural unit derived from a styrene-based monomer.

本実施形態に係る疎水性高分子粒子は、多孔構造を有していてもよい。すなわち、本実施形態に係る疎水性高分子粒子は、例えば、疎水性の多孔質高分子粒子であってもよい。多孔質高分子粒子は、例えば、多孔質化剤の存在下でモノマを重合させて得られるポリマを含む粒子であり、従来の懸濁重合、乳化重合等により合成することができる。 The hydrophobic polymer particles according to the present embodiment may have a porous structure. That is, the hydrophobic polymer particles according to the present embodiment may be, for example, hydrophobic porous polymer particles. The porous polymer particles are, for example, particles containing a polymer obtained by polymerizing a monomer in the presence of a porosifying agent, and can be synthesized by conventional suspension polymerization, emulsion polymerization or the like.

スチレン系モノマとしては、以下のような多官能性モノマ、単官能性モノマ等が挙げられる。 Examples of the styrene-based monomer include the following polyfunctional monomers and monofunctional monomers.

多官能性モノマとしては、例えば、ジビニルベンゼン、ジビニルビフェニル、ジビニルナフタレン、ジビニルフェナントレン等のジビニル化合物が挙げられる。これらの多官能性モノマは、１種を単独で又は２種以上を組み合わせて用いることができる。上記の中でも耐久性、耐酸性、耐アルカリ性に優れる観点から、ジビニルベンゼンが好ましい。 Examples of the polyfunctional monoma include divinyl compounds such as divinylbenzene, divinylbiphenyl, divinylnaphthalene, and divinylphenanthrene. These polyfunctional monomers may be used alone or in combination of two or more. Among the above, divinylbenzene is preferable from the viewpoint of excellent durability, acid resistance, and alkali resistance.

単官能性モノマとしては、例えば、スチレン、ｏ−メチルスチレン、ｍ−メチルスチレン、ｐ−メチルスチレン、α−メチルスチレン、ｏ−エチルスチレン、ｍ−エチルスチレン、ｐ−エチルスチレン、２，４−ジメチルスチレン、ｐ−ｎ−ブチルスチレン、ｐ−ｔ−ブチルスチレン、ｐ−ｎ−ヘキシルスチレン、ｐ−ｎ−オクチルスチレン、ｐ−ｎ−ノニルスチレン、ｐ−ｎ−デシルスチレン、ｐ−ｎ−ドデシルスチレン、ｐ−メトキシスチレン、ｐ−フェニルスチレン、ｐ−クロロスチレン、３，４−ジクロロスチレン等のスチレン及びその誘導体が挙げられる。これらの単官能性モノマは、１種を単独で又は２種以上を組み合わせて用いることができる。上記の中でも、耐酸性及び耐アルカリ性に優れる観点から、スチレンが好ましい。モノマは、カルボキシ基、アミノ基、水酸基、アルデヒド基等の官能基を有するスチレン誘導体であってもよい。 Examples of the monofunctional monoma include styrene, o-methylstyrene, m-methylstyrene, p-methylstyrene, α-methylstyrene, o-ethylstyrene, m-ethylstyrene, p-ethylstyrene, 2,4-. Dimethylstyrene, pn-butylstyrene, pt-butylstyrene, pn-hexylstyrene, pn-octylstyrene, pn-nonylstyrene, pn-decylstyrene, pn-dodecyl Examples thereof include styrene such as styrene, p-methoxystyrene, p-phenylstyrene, p-chlorostyrene, and 3,4-dichlorostyrene and derivatives thereof. These monofunctional monomers may be used alone or in combination of two or more. Among the above, styrene is preferable from the viewpoint of excellent acid resistance and alkali resistance. The monomer may be a styrene derivative having a functional group such as a carboxy group, an amino group, a hydroxyl group or an aldehyde group.

多孔質化剤としては、重合時に相分離を促し、粒子の多孔質化を促進する有機溶媒である脂肪族又は芳香族の炭化水素類、エステル類、ケトン類、エーテル類、アルコール類等が挙げられる。多孔質化剤の具体例は、トルエン、キシレン、シクロヘキサン、オクタン、酢酸ブチル、フタル酸ジブチル、メチルエチルケトン、ジブチルエーテル、１−ヘキサノール、２−オクタノール、デカノール、ラウリルアルコール、シクロヘキサノール、ジエチルベンゼン等を含む。これらの多孔質化材は、１種を単独で又は２種以上を組み合わせて用いることができる。 Examples of the porosifying agent include aliphatic or aromatic hydrocarbons, esters, ketones, ethers, alcohols, etc., which are organic solvents that promote phase separation during polymerization and promote porosification of particles. Be done. Specific examples of the porosifying agent include toluene, xylene, cyclohexane, octane, butyl acetate, dibutyl phthalate, methyl ethyl ketone, dibutyl ether, 1-hexanol, 2-octanol, decanol, lauryl alcohol, cyclohexanol, diethylbenzene and the like. These porous materials may be used alone or in combination of two or more.

上記多孔質化剤の配合量は、モノマ全質量に対して、例えば、０〜２００質量％であってもよい。多孔質化剤の量によって、疎水性高分子粒子の空隙率をコントロールできる。さらに、多孔質化剤の種類によって、疎水性高分子粒子の細孔の大きさ及び形状をコントロールすることができる。 The blending amount of the porosifying agent may be, for example, 0 to 200% by mass with respect to the total mass of the monomer. The porosity of the hydrophobic polymer particles can be controlled by the amount of the porosity agent. Furthermore, the size and shape of the pores of the hydrophobic polymer particles can be controlled by the type of the porosifying agent.

溶媒として使用する水を多孔質化剤とすることもできる。水を多孔質化剤とする場合は、モノマに油溶性界面活性剤を溶解させ、水を吸収することによって、粒子を多孔質化することが可能である。 Water used as a solvent can also be used as a porosifying agent. When water is used as a porosifying agent, the particles can be made porous by dissolving an oil-soluble surfactant in a monomer and absorbing water.

多孔質化に使用される油溶性界面活性剤としては、分岐Ｃ１６〜Ｃ２４脂肪酸、鎖状不飽和Ｃ１６〜Ｃ２２脂肪酸又は鎖状飽和Ｃ１２〜Ｃ１４脂肪酸のソルビタンモノエステル、例えば、ソルビタンモノラウレート、ソルビタンモノオレエート、ソルビタンモノミリステート又はヤシ脂肪酸から誘導されるソルビタンモノエステル；分岐Ｃ１６〜Ｃ２４脂肪酸、鎖状不飽和Ｃ１６〜Ｃ２２脂肪酸又は鎖状飽和Ｃ１２〜Ｃ１４脂肪酸のジグリセロールモノエステル、例えば、ジグリセロールモノオレエート（例えば、Ｃ１８：１（炭素数１８個、二重結合数１個）脂肪酸のジグリセロールモノエステル）、ジグリセロールモノミリステート、ジグリセロールモノイソステアレート又はヤシ脂肪酸のジグリセロールモノエステル；分岐Ｃ１６〜Ｃ２４アルコール（例えば、ゲルベアルコール）、鎖状不飽和Ｃ１６〜Ｃ２２アルコール又は鎖状飽和Ｃ１２〜Ｃ１４アルコール（例えば、ヤシ脂肪アルコール）のジグリセロールモノ脂肪族エーテル；及びこれらの混合物が挙げられる。 Examples of the oil-soluble surfactant used for porosification include sorbitan monoesters of branched C16 to C24 fatty acids, chain unsaturated C16 to C22 fatty acids or chain saturated C12 to C14 fatty acids, such as sorbitan monolaurate and sorbitan. Solbitan monoester derived from monooleate, sorbitan monomillistate or coconut fatty acid; diglycerol monoester of branched C16-C24 fatty acid, chain unsaturated C16-C22 fatty acid or chain saturated C12-C14 fatty acid, eg di Diglycerol monoester of glycerol monooleate (eg, C18: 1 (18 carbons, 1 double bond) fatty acid), diglycerol monomillistate, diglycerol monoisostearate or diglycerol mono of coconut fatty acid Esters; diglycerol monofatty acids of branched C16-C24 alcohols (eg, gelve alcohol), chain unsaturated C16-C22 alcohols or chain saturated C12-C14 alcohols (eg palm fatty alcohols); and mixtures thereof. Can be mentioned.

これらのうち、ソルビタンモノラウレート（例えば、ＳＰＡＮ（スパン、登録商標）２０、好ましくは純度約４０％を超える、より好ましくは純度約５０％を超える、更に好ましくは純度約７０％を超えるソルビタンモノラウレート）；ソルビタンモノオレエート（例えば、ＳＰＡＮ（スパン、登録商標）８０、好ましくは純度約４０％、より好ましくは純度約５０％、更に好ましくは純度約７０％を超えるソルビタンモノオレエート）；ジグリセロールモノオレエート（例えば、純度約４０％を超える、より好ましくは純度約５０％を超える、更に好ましくは純度約７０％を超えるジグリセロールモノオレエート）；ジグリセロールモノイソステアレート（例えば、好ましくは純度約４０％を超える、より好ましくは純度約５０％を超える、更に好ましくは純度約７０％を超えるジグリセロールモノイソステアレート）；ジグリセロールモノミリステート（好ましくは純度約４０％を超える、より好ましくは純度約５０％を超える、更に好ましくは純度約７０％を超えるソルビタンモノミリステート）；ジグリセロールのココイル（例えば、ラウリル基、ミリストイル基等）エーテル；及びこれらの混合物が好ましい。 Of these, sorbitan monolaurate (eg, SPAN® 20, preferably with a purity of more than about 40%, more preferably with a purity of more than about 50%, still more preferably with a purity of more than about 70%. Laurate); sorbitan monooleate (eg, SPAN® 80, preferably sorbitan monooleate with a purity of about 40%, more preferably about 50%, even more preferably greater than about 70%); Diglycerol monooleate (eg, diglycerol monooleate with a purity greater than about 40%, more preferably greater than about 50% purity, even more preferably greater than about 70% purity); diglycerol monoisostearate (eg, greater than about 70% purity). Diglyceride monoisostearates preferably with a purity greater than about 40%, more preferably greater than about 50% purity, even more preferably greater than about 70% purity; diglycerol monomillistate (preferably greater than about 40% purity). , More preferably above about 50% purity, even more preferably above about 70% purity sorbitan monomillistate); cocoyl (eg, lauryl group, myristyl group, etc.) ether of diglycerol; and mixtures thereof.

これらの油溶性界面活性剤は、モノマ全質量に対して、５〜８０質量％の範囲で用いることが好ましい。油溶性界面活性剤の含有量が５質量％以上であると、水滴の安定性が充分となることから、大きな単一孔を形成し易くなる。また、油溶性界面活性剤の含有量が８０質量％以下であると、重合後に疎水性高分子粒子が形状をより保持し易くなる。 These oil-soluble surfactants are preferably used in the range of 5 to 80% by mass with respect to the total mass of the monomer. When the content of the oil-soluble surfactant is 5% by mass or more, the stability of the water droplet is sufficient, so that a large single pore is easily formed. Further, when the content of the oil-soluble surfactant is 80% by mass or less, the hydrophobic polymer particles are more likely to retain their shape after polymerization.

上記重合反応には、水性媒体を用いることもできる。上記水性媒体としては、水、水と水溶性溶媒（例えば、低級アルコール）との混合媒体等が挙げられる。水性媒体には、界面活性剤が含まれていてもよい。界面活性剤としては、アニオン系、カチオン系、ノニオン系及び両性イオン系の界面活性剤のうち、いずれも用いることができる。 An aqueous medium can also be used for the above-mentioned polymerization reaction. Examples of the aqueous medium include water, a mixed medium of water and a water-soluble solvent (for example, a lower alcohol), and the like. The aqueous medium may contain a surfactant. As the surfactant, any of anionic, cationic, nonionic and zwitterionic surfactants can be used.

アニオン系界面活性剤としては、例えば、オレイン酸ナトリウム、ヒマシ油カリ等の脂肪酸油、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリル硫酸アンモニウム等のアルキル硫酸エステル塩、ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム等のアルキルベンゼンスルホン酸塩、アルキルナフタレンスルホン酸塩、アルカンスルホン酸塩、ジオクチルスルホコハク酸ナトリウム等のジアルキルスルホコハク酸塩、アルケルニルコハク酸塩（ジカリウム塩）、アルキルリン酸エステル塩、ナフタレンスルホン酸ホルマリン縮合物、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル硫酸エステル塩、ポリオキシエチレンラウリルエーテル硫酸ナトリウム等のポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸塩及びポリオキシエチレンアルキル硫酸エステル塩が挙げられる。 Examples of the anionic surfactant include fatty acid oils such as sodium oleate and potassium castor oil, alkyl sulfates such as sodium lauryl sulfate and ammonium lauryl sulfate, alkylbenzene sulfonates such as sodium dodecylbenzene sulfonate, and alkylnaphthalene sulfates. Dialkyl sulfosuccinates such as acid salts, alkane sulfonates, sodium dioctyl sulfosuccinate, alkernyl succinate (dipotassium salt), alkyl phosphate ester salts, naphthalene sulfonate formalin condensates, polyoxyethylene alkyl phenyl ether sulfate Examples thereof include salts, polyoxyethylene alkyl ether sulfates such as sodium polyoxyethylene lauryl ether sulfate, and polyoxyethylene alkyl sulfates.

カチオン系界面活性剤としては、例えば、ラウリルアミンアセテート、ステアリルアミンアセテート等のアルキルアミン塩、及びラウリルトリメチルアンモニウムクロライド等の第四級アンモニウム塩が挙げられる。 Examples of the cationic surfactant include alkylamine salts such as laurylamine acetate and stearylamine acetate, and quaternary ammonium salts such as lauryltrimethylammonium chloride.

ノニオン系界面活性剤としては、例えば、ポリエチレングリコールアルキルエーテル類、ポリエチレングリコールアルキルアリールエーテル類、ポリエチレングリコールエステル類、ポリエチレングリコールソルビタンエステル類、ポリアルキレングリコールアルキルアミン又はアミド類等の炭化水素系ノニオン界面活性剤、シリコンのポリエチレンオキサイド付加物類、ポリプロピレンオキサイド付加物類等のポリエーテル変性シリコン系ノニオン界面活性剤、及びパーフルオロアルキルグリコール類等のフッ素系ノニオン界面活性剤が挙げられる。 Examples of the nonionic surfactant include hydrocarbon-based nonionic surfactants such as polyethylene glycol alkyl ethers, polyethylene glycol alkylaryl ethers, polyethylene glycol esters, polyethylene glycol sorbitan esters, polyalkylene glycol alkylamines and amides. Examples thereof include polyether-modified silicon-based nonionic surfactants such as agents, silicon polyethylene oxide adducts and polypropylene oxide adducts, and fluorine-based nonionic surfactants such as perfluoroalkyl glycols.

両性イオン系界面活性剤としては、例えば、ラウリルジメチルアミンオキサイド等の炭化水素界面活性剤、リン酸エステル系界面活性剤、及び亜リン酸エステル系界面活性剤が挙げられる。 Examples of the amphoteric ion-based surfactant include hydrocarbon surfactants such as lauryldimethylamine oxide, phosphate ester-based surfactants, and phosphite ester-based surfactants.

界面活性剤は、１種を単独で又は２種以上を組み合わせて用いてもよい。上記界面活性剤の中でも、モノマ重合時の分散安定性の観点から、アニオン系界面活性剤が好ましい。 As the surfactant, one type may be used alone or two or more types may be used in combination. Among the above-mentioned surfactants, anionic surfactants are preferable from the viewpoint of dispersion stability during monomer polymerization.

上記重合反応においては、必要に応じて、重合開始剤を添加することもできる。上記重合開始剤としては、例えば、過酸化ベンゾイル、過酸化ラウロイル、オルソクロロ過酸化ベンゾイル、オルソメトキシ過酸化ベンゾイル、３，５，５−トリメチルヘキサノイルパーオキサイド、ｔｅｒｔ−ブチルパーオキシ−２−エチルヘキサノエート、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルパーオキサイド等の有機過酸化物；及び２，２’−アゾビスイソブチロニトリル、１，１’−アゾビスシクロヘキサンカルボニトリル、２，２’−アゾビス（２，４−ジメチルバレロニトリル）等のアゾ系化合物が挙げられる。重合開始剤は、モノマ１００質量部に対して、例えば、０．１〜７．０質量部の範囲で使用することができる。 In the above polymerization reaction, a polymerization initiator may be added if necessary. Examples of the polymerization initiator include benzoyl peroxide, lauroyl peroxide, benzoyl orthochloro peroxide, benzoyl orthomethoxy peroxide, 3,5,5-trimethylhexanoyl peroxide, and tert-butylperoxy-2-ethylhexa. Organic peroxides such as noate, di-tert-butyl peroxide; and 2,2'-azobisisobutyronitrile, 1,1'-azobiscyclohexanecarbonitrile, 2,2'-azobis (2, Examples thereof include azo compounds such as 4-dimethylvaleronitrile). The polymerization initiator can be used in the range of, for example, 0.1 to 7.0 parts by mass with respect to 100 parts by mass of the monomer.

重合温度は、モノマ及び重合開始剤の種類に応じて、適宜選択することができる。重合温度は、２５〜１１０℃が好ましく、５０〜１００℃がより好ましい。 The polymerization temperature can be appropriately selected depending on the type of the monomer and the polymerization initiator. The polymerization temperature is preferably 25 to 110 ° C, more preferably 50 to 100 ° C.

疎水性高分子粒子の合成において、粒子の分散安定性を向上させるために、高分子分散安定剤を用いてもよい。 In the synthesis of hydrophobic polymer particles, a polymer dispersion stabilizer may be used in order to improve the dispersion stability of the particles.

高分子分散安定剤としては、例えば、ポリビニルアルコール、ポリカルボン酸、セルロース類（ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、メチルセルロース等）、及びポリビニルピロリドンが挙げられ、トリポリリン酸ナトリウム等の無機系水溶性高分子化合物も併用することができる。これらのうち、ポリビニルアルコール又はポリビニルピロリドンが好ましい。高分子分散安定剤の添加量は、モノマ１００質量部に対して１〜１０質量部が好ましい。 Examples of the polymer dispersion stabilizer include polyvinyl alcohol, polycarboxylic acid, celluloses (hydroxyethyl cellulose, carboxymethyl cellulose, methyl cellulose, etc.), and polyvinylpyrrolidone, and inorganic water-soluble polymer compounds such as sodium tripolyphosphate. Can be used together. Of these, polyvinyl alcohol or polyvinylpyrrolidone is preferable. The amount of the polymer dispersion stabilizer added is preferably 1 to 10 parts by mass with respect to 100 parts by mass of the monomer.

モノマが単独で重合することを抑えるために、亜硝酸塩類、亜硫酸塩類、ハイドロキノン類、アスコルビン酸類、水溶性ビタミンＢ類、クエン酸、ポリフェノール類等の水溶性の重合禁止剤を用いてもよい。 In order to prevent the monoma from polymerizing alone, a water-soluble polymerization inhibitor such as nitrites, sulfites, hydroquinones, ascorbic acids, water-soluble B vitamins, citric acid, and polyphenols may be used.

上記疎水性高分子粒子の平均粒径は、通液性が更に向上する観点から、１０μｍ以上が好ましい。上記疎水性高分子粒子の平均粒径は、カラムの分離性の観点から、５００μｍ以下が好ましい。これらの観点から、上記疎水性高分子粒子の平均粒径は、例えば、１０〜５００μｍであってもよい。 The average particle size of the hydrophobic polymer particles is preferably 10 μm or more from the viewpoint of further improving the liquid permeability. The average particle size of the hydrophobic polymer particles is preferably 500 μm or less from the viewpoint of column separability. From these viewpoints, the average particle size of the hydrophobic polymer particles may be, for example, 10 to 500 μm.

疎水性高分子粒子の粒径の変動係数（Ｃ．Ｖ．）は、通液性が更に向上する観点から、３〜１５％であることが好ましく、５〜１５％であることがより好ましく、５〜１０％であることが更に好ましい。Ｃ．Ｖ．を低減する方法としては、マイクロプロセスサーバー（株式会社日立製作所製）等の乳化装置により単分散化することが挙げられる。 The coefficient of variation (CV) of the particle size of the hydrophobic polymer particles is preferably 3 to 15%, more preferably 5 to 15%, from the viewpoint of further improving the liquid permeability. It is more preferably 5 to 10%. C. V. As a method of reducing the amount of waste, it is possible to monodisperse with an emulsifying device such as a micro process server (manufactured by Hitachi, Ltd.).

疎水性高分子粒子又は分離材の平均粒径及び粒径のＣ．Ｖ．（変動係数）は、以下の測定法により求めることができる。
１）粒子又は分離材を、超音波分散装置を使用して水（界面活性剤等の分散剤を含む）に分散させ、１質量％の粒子又は分離材を含む分散液を調製する。
２）粒度分布計（シスメックスフロー、シスメックス株式会社製）を用いて、上記分散液中の粒子又は分離材約１万個の画像により平均粒径及び粒径のＣ．Ｖ．（変動係数）を測定する。 C. of the average particle size and particle size of the hydrophobic polymer particles or separating material. V. (Coefficient of variation) can be obtained by the following measurement method.
1) The particles or separating material are dispersed in water (including a dispersant such as a surfactant) using an ultrasonic disperser to prepare a dispersion liquid containing 1% by mass of particles or separating material.
2) Using a particle size distribution meter (Sysmex Flow, manufactured by Sysmex Corporation), images of about 10,000 particles or separating materials in the dispersion liquid show the average particle size and particle size of C.I. V. Measure (coefficient of variation).

疎水性高分子粒子が、多孔構造を有する場合、当該粒子の空隙率（細孔容積）は、疎水性高分子粒子の全体積基準で３０体積％以上７０体積％以下であることが好ましく、４０体積％以上７０体積％以下であることがより好ましい。また、疎水性高分子粒子は、細孔径分布におけるモード径（細孔径分布の最頻値、最大頻度細孔径）が０．１μｍ以上０．５μｍ未満である細孔、すなわちマクロポアー（マクロ孔）を有することが好ましい。疎水性高分子粒子の細孔径分布におけるモード径として、より好ましくは、０．２μｍ以上０．５μｍ未満である。細孔径分布におけるモード径が０．１μｍ以上であると、細孔内に物質が入り易くなる傾向にあり、細孔径分布におけるモード径が０．５μｍ未満であると、比表面積が充分なものになる。これらは上述の多孔質化剤により調整可能である。 When the hydrophobic polymer particles have a porous structure, the porosity (pore volume) of the particles is preferably 30% by volume or more and 70% by volume or less based on the total volume of the hydrophobic polymer particles. More preferably, it is at least 70% by volume. Further, the hydrophobic polymer particles have pores in which the mode diameter (mode of the pore diameter distribution, the most frequent pore diameter) is 0.1 μm or more and less than 0.5 μm, that is, macropores (macropores). It is preferable to have. The mode diameter in the pore size distribution of the hydrophobic polymer particles is more preferably 0.2 μm or more and less than 0.5 μm. When the mode diameter in the pore diameter distribution is 0.1 μm or more, substances tend to enter into the pores easily, and when the mode diameter in the pore diameter distribution is less than 0.5 μm, the specific surface area becomes sufficient. Become. These can be adjusted by the above-mentioned porosifying agent.

疎水性高分子粒子の比表面積は、３０ｍ^２／ｇ以上であることが好ましい。より高い実用性の観点から、比表面積は３５ｍ^２／ｇ以上であることがより好ましく、４０ｍ^２／ｇ以上であることが更に好ましい。比表面積が３０ｍ^２／ｇ以上であると、分離する物質の吸着量が大きくなる傾向にある。 The specific surface area of the hydrophobic polymer particles is preferably 30 m ² / g or more. From the viewpoint of higher practicality, the specific surface area is more preferably 35 m ² / g or more, and further preferably 40 m ² / g or more. When the specific surface area is 30 m ² / g or more, the amount of the substance to be separated tends to be large.

本実施形態に係る疎水性高分子粒子又は分離材の細孔径分布におけるモード径、比表面積及び空隙率は、水銀圧入測定装置（オートポア：株式会社島津製作所製）にて測定した値であり、以下のようにして測定する。試料約０．０５ｇを、標準５ｍＬ粉体用セル（ステム容積０．４ｍＬ）に加え、初期圧２１ｋＰａ（約３ｐｓｉａ、細孔直径約６０μｍ相当）の条件で測定する。水銀パラメータは、装置デフォルトの水銀接触角１３０°、水銀表面張力４８５ｄｙｎｅｓ／ｃｍに設定する。また、細孔径０．１〜３μｍの範囲に限定してそれぞれの値を算出する。 The mode diameter, specific surface area, and porosity in the pore size distribution of the hydrophobic polymer particles or the separating material according to the present embodiment are values measured by a mercury intrusion measuring device (Autopore: manufactured by Shimadzu Corporation), and are as follows. Measure as follows. About 0.05 g of a sample is added to a standard 5 mL powder cell (stem volume 0.4 mL) and measured under the condition of an initial pressure of 21 kPa (about 3 psia, equivalent to a pore diameter of about 60 μm). The mercury parameters are set to the device default mercury contact angle of 130 ° and mercury surface tension of 485 days / cm. Further, each value is calculated by limiting the pore diameter to the range of 0.1 to 3 μm.

（被覆層）
本実施形態に係る被覆層は、水酸基及び水酸基以外の官能基を有する官能基含有高分子を含む。なお、上記官能基含有高分子において、上記官能基は化学結合により高分子に結合している。被覆層がこのようなものであると、イオン交換性又はリガンドとの結合性が付与される。 (Coating layer)
The coating layer according to the present embodiment contains a hydroxyl group and a functional group-containing polymer having a functional group other than the hydroxyl group. In the functional group-containing polymer, the functional group is bonded to the polymer by a chemical bond. When the coating layer is such, ion exchange property or binding property with a ligand is imparted.

上記官能基としては、例えば、カルボキシ基、エポキシ基、アミノ基、４級アンモニウム基、スルホン酸基等が挙げられる。上記官能基は、カルボキシ基、エポキシ基、又はアミノ基であることが好ましい。アミノ基の具体例は、ジエチルアミノエチル（ＤＥＡＥ）基を含む。 Examples of the functional group include a carboxy group, an epoxy group, an amino group, a quaternary ammonium group, a sulfonic acid group and the like. The functional group is preferably a carboxy group, an epoxy group, or an amino group. Specific examples of amino groups include diethylaminoethyl (DEAE) groups.

上記官能基含有高分子は、例えば、下記式（ａ）又は（ｂ）で表される基を含んでいてもよい。 The functional group-containing polymer may contain, for example, a group represented by the following formula (a) or (b).

式（ａ）中、Ｘは、カルボキシ基を含む基を表す。Ｘの具体例は、カルボキシ基で置換されたアルキル基を含む。 In formula (a), X represents a group containing a carboxy group. Specific examples of X include alkyl groups substituted with carboxy groups.

式（ｂ）中、Ｙは、アミノ基を含む基、又はエポキシ基を含む基を示す。Ｙの具体例は、グリシジル基、及びジエチルアミノエチル基を含む。 In formula (b), Y represents a group containing an amino group or a group containing an epoxy group. Specific examples of Y include a glycidyl group and a diethylaminoethyl group.

上記官能基含有高分子は、親水性高分子であってもよい。 The functional group-containing polymer may be a hydrophilic polymer.

上記官能基含有高分子は、親水性が向上する観点から、水酸基を有する高分子又はその変性体に由来する構造を含んでいてもよい。例えば、上記官能基含有高分子は、水酸基を有する高分子又はその変性体から１つ以上の水酸基を除いた構造を有するものであってもよい。水酸基を有する高分子は、１分子中に２個以上の水酸基を有することが好ましく、親水性高分子であることがより好ましい。水酸基を有する高分子としては、例えば、多糖類及びポリビニルアルコールが挙げられる。多糖類としては、例えば、アガロース、デキストラン、セルロース、及びキトサンが挙げられる。すなわち、上記官能基含有高分子は、多糖類又はその変性体に由来する構造を含んでいてもよく、アガロース又はその変性体に由来する構造を含んでいてもよい。 From the viewpoint of improving hydrophilicity, the functional group-containing polymer may contain a structure derived from a polymer having a hydroxyl group or a modified product thereof. For example, the functional group-containing polymer may have a structure in which one or more hydroxyl groups are removed from a polymer having a hydroxyl group or a modified product thereof. The polymer having a hydroxyl group preferably has two or more hydroxyl groups in one molecule, and more preferably a hydrophilic polymer. Examples of the polymer having a hydroxyl group include polysaccharides and polyvinyl alcohol. Examples of polysaccharides include agarose, dextran, cellulose, and chitosan. That is, the functional group-containing polymer may contain a structure derived from a polysaccharide or a modified product thereof, or may contain a structure derived from agarose or a modified product thereof.

水酸基を有する高分子の重量平均分子量（Ｍｗ）は、例えば、１００００〜２０００００程度であってもよい。 The weight average molecular weight (Mw) of the polymer having a hydroxyl group may be, for example, about 1000 to 20000.

水酸基を有する高分子の変性体としては、例えば、水酸基を有する高分子を疎水基で変性したもの（以下、「疎水基変性体」ともいう）が挙げられる。上記官能基含有高分子が、このような変性体に由来する構造を含むと、界面吸着能が向上する傾向にある。疎水基としては、例えば、炭素数１〜６のアルキル基、炭素数６〜１０のアリール基等が挙げられる。炭素数１〜６のアルキル基としては、例えば、メチル基、エチル基、及びプロピル基が挙げられる。炭素数６〜１０のアリール基としては、例えば、フェニル基、及びナフチル基が挙げられる。疎水基は、例えば、水酸基と反応する官能基（例えば、エポキシ基）及び疎水基を有する化合物（例えば、グリシジルフェニルエーテル）を、水酸基を有する高分子と従来公知の方法で反応させることにより、導入することができる。 Examples of the modified polymer having a hydroxyl group include a polymer having a hydroxyl group modified with a hydrophobic group (hereinafter, also referred to as “hydrophobic group modified product”). When the functional group-containing polymer contains a structure derived from such a modified product, the interfacial adsorption ability tends to be improved. Examples of the hydrophobic group include an alkyl group having 1 to 6 carbon atoms and an aryl group having 6 to 10 carbon atoms. Examples of the alkyl group having 1 to 6 carbon atoms include a methyl group, an ethyl group, and a propyl group. Examples of the aryl group having 6 to 10 carbon atoms include a phenyl group and a naphthyl group. The hydrophobic group is introduced, for example, by reacting a functional group (for example, an epoxy group) that reacts with a hydroxyl group and a compound having a hydrophobic group (for example, glycidyl phenyl ether) with a polymer having a hydroxyl group by a conventionally known method. can do.

疎水基変性体において、疎水基変性体を構成する全構成単位の総モル量（疎水基を含有する構成単位及び疎水基を含有しない構成単位のモル量の総和）に対する、疎水基を含有する構成単位の含有割合は、官能基含有高分子を疎水性高分子粒子の表面に吸着させるための疎水的相互作用力の保持と、タンパク質の非特異吸着の抑制とのバランスの観点から、５〜３０％であることが好ましく、１０〜２０％であることがより好ましく、１２〜１７％であることが更に好ましい。 In the hydrophobic group modified product, a configuration containing a hydrophobic group with respect to the total molar amount of all the structural units constituting the hydrophobic group modified product (the total molar amount of the structural unit containing a hydrophobic group and the structural unit not containing a hydrophobic group). The content ratio of the unit is 5 to 30 from the viewpoint of the balance between the retention of the hydrophobic interaction force for adsorbing the functional group-containing polymer on the surface of the hydrophobic polymer particles and the suppression of non-specific adsorption of the protein. It is preferably%, more preferably 10 to 20%, and even more preferably 12 to 17%.

カラム圧の上昇がより抑制される観点から、上記官能基含有高分子は架橋されていてもよい。 The functional group-containing polymer may be crosslinked from the viewpoint of further suppressing the increase in column pressure.

（被覆層の形成方法）
本実施形態に係る被覆層は、例えば、疎水性高分子粒子表面に、水酸基を有する高分子又はその変性体を吸着させる工程（吸着処理工程）と、上記水酸基を有する高分子又はその変性体を架橋する工程（架橋処理工程）と、架橋された水酸基を有する高分子又はその変性体に官能基を導入する工程（官能基導入工程）と、を備える方法により形成できる。以下、これらの工程について、具体的に説明する。 (Method of forming the coating layer)
The coating layer according to the present embodiment is, for example, a step of adsorbing a polymer having a hydroxyl group or a modified product thereof on the surface of hydrophobic polymer particles (adsorption treatment step) and a step of adsorbing the polymer having a hydroxyl group or a modified product thereof. It can be formed by a method including a step of cross-linking (cross-linking treatment step) and a step of introducing a functional group into a polymer having a cross-linked hydroxyl group or a modified product thereof (functional group introduction step). Hereinafter, these steps will be specifically described.

（吸着処理工程）
吸着処理工程においては、例えば、水酸基を有する高分子又はその変性体の溶液に、疎水性高分子粒子を含浸させることにより、疎水性高分子粒子表面に、水酸基を有する高分子又はその変性体を吸着させる。これにより、疎水性高分子粒子表面に、水酸基を有する高分子又はその変性体が固定化される。水酸基を有する高分子又はその変性体の溶液の溶媒としては、水酸基を有する高分子又はその変性体を溶解することのできるものであれば、特に限定されないが、水が最も一般的である。溶媒に溶解させる高分子の濃度は、５〜２０（ｍｇ／ｍＬ）が好ましい。 (Adsorption process)
In the adsorption treatment step, for example, by impregnating a solution of a polymer having a hydroxyl group or a modified product thereof with hydrophobic polymer particles, a polymer having a hydroxyl group or a modified product thereof is formed on the surface of the hydrophobic polymer particles. Adsorb. As a result, a polymer having a hydroxyl group or a modified product thereof is immobilized on the surface of the hydrophobic polymer particles. The solvent for the solution of the polymer having a hydroxyl group or its modified product is not particularly limited as long as it can dissolve the polymer having a hydroxyl group or its modified product, but water is the most common. The concentration of the polymer dissolved in the solvent is preferably 5 to 20 (mg / mL).

含浸方法としては、例えば、水酸基を有する高分子又はその変性体の溶液に疎水性高分子粒子を加えて一定時間放置する方法が挙げられる。含浸時間は疎水性高分子粒子の表面状態によっても変わるが、例えば、疎水性高分子粒子が多孔構造を有する場合でも、通常一昼夜含浸すれば、高分子濃度が多孔質体の内部で外部濃度と平衡状態となる。 Examples of the impregnation method include a method in which hydrophobic polymer particles are added to a solution of a polymer having a hydroxyl group or a modified product thereof and left to stand for a certain period of time. The impregnation time varies depending on the surface condition of the hydrophobic polymer particles. For example, even if the hydrophobic polymer particles have a porous structure, if they are impregnated for a whole day and night, the polymer concentration becomes the external concentration inside the porous body. It will be in equilibrium.

次いで、水、アルコール等の溶媒で洗浄し、未吸着分の水酸基を有する高分子又はその変性体を除去する。 Then, it is washed with a solvent such as water or alcohol to remove the polymer having an unadsorbed hydroxyl group or a modified product thereof.

（架橋処理工程）
架橋処理工程においては、例えば、架橋剤を用いて、疎水性高分子粒子表面に吸着された水酸基を有する高分子又はその変性体を架橋反応させて、これらの架橋体を形成する。当該架橋体は、例えば、水酸基を有する３次元架橋網目構造を有する。 (Crosslinking process)
In the cross-linking treatment step, for example, a cross-linking agent is used to carry out a cross-linking reaction of a polymer having a hydroxyl group adsorbed on the surface of hydrophobic polymer particles or a modified product thereof to form these cross-linked bodies. The crosslinked body has, for example, a three-dimensional crosslinked network structure having a hydroxyl group.

架橋剤としては、例えば、エピクロルヒドリン等のエピハロヒドリン、グルタルアルデヒド等のジアルデヒド化合物、メチレンジイソシアネート等のジイソシアネート化合物、及びエチレングリコールジグリシジルエーテル等のグリシジル化合物などのような水酸基に活性な官能基を２個以上有する化合物が挙げられる。また、水酸基を有する高分子又はその変性体が、例えば、アミノ基を有する化合物（キトサン又はその変性体等）である場合には、ジクロロオクタンのようなジハライド化合物も架橋剤として使用できる。 As the cross-linking agent, for example, two functional groups active on the hydroxyl group such as epihalohydrin such as epichlorohydrin, dialdehyde compound such as glutaraldehyde, diisocyanate compound such as methylene diisocyanate, and glycidyl compound such as ethylene glycol diglycidyl ether are used. Examples thereof include compounds having the above. Further, when the polymer having a hydroxyl group or a modified product thereof is, for example, a compound having an amino group (chitosan or a modified product thereof, etc.), a dihalide compound such as dichlorooctane can also be used as a cross-linking agent.

この架橋反応には通常触媒が用いられる。該触媒は架橋剤の種類に合わせて適宜従来公知のものを用いることができるが、例えば、架橋剤がエピクロルヒドリン等の場合には水酸化ナトリウム等のアルカリが有効であり、ジアルデヒド化合物の場合には塩酸等の鉱酸が有効である。 A catalyst is usually used for this cross-linking reaction. As the catalyst, conventionally known catalysts can be appropriately used according to the type of the cross-linking agent. For example, when the cross-linking agent is epichlorohydrin or the like, an alkali such as sodium hydroxide is effective, and when the cross-linking agent is a dialdehyde compound, it is effective. Mineral acids such as hydrochloric acid are effective.

架橋剤による架橋反応は、通常、水酸基を有する高分子又はその変性体が吸着された疎水性高分子粒子を、適当な媒体中に分散、懸濁させた系に架橋剤を添加することによって行われる。架橋剤の添加量は、水酸基を有する高分子として多糖類を使用した場合、単糖類の１単位を１モルとすると、それに対して、例えば、０．１〜１００モル倍の範囲内で、分離材の性能に応じて選定することができる。架橋剤の添加量が、上記下限値以上であると、被覆層が疎水性高分子粒子上に良好に保持される傾向にある。また、架橋剤の添加量が上記上限値以下であれば、水酸基を有する高分子又はその変性体の反応率が高い場合でも、水酸基を有する高分子又はその変性体の特性が損なわれ難い。 The cross-linking reaction with a cross-linking agent is usually carried out by adding a cross-linking agent to a system in which a polymer having a hydroxyl group or a hydrophobic polymer particle on which a modified product thereof is adsorbed is dispersed and suspended in an appropriate medium. Will be When a polysaccharide is used as the polymer having a hydroxyl group, the amount of the cross-linking agent added is, for example, 0.1 to 100 mol times the separation, assuming that 1 unit of the monosaccharide is 1 mol. It can be selected according to the performance of the material. When the amount of the cross-linking agent added is not more than the above lower limit value, the coating layer tends to be well retained on the hydrophobic polymer particles. Further, when the amount of the cross-linking agent added is not more than the above upper limit value, the characteristics of the polymer having a hydroxyl group or its modified product are not easily impaired even when the reaction rate of the polymer having a hydroxyl group or its modified product is high.

触媒の使用量としては、架橋剤の種類により異なるが、通常、水酸基を有する高分子として多糖類を使用する場合に、多糖類を形成する単糖類の１単位を１モルとすると、これに対して、例えば、０．０１〜１０モル倍の範囲、好ましくは０．１〜５モル倍の範囲で使用される。 The amount of the catalyst used varies depending on the type of cross-linking agent, but usually when a polysaccharide is used as a polymer having a hydroxyl group, 1 mol of the monosaccharide forming the polysaccharide is assumed to be 1 mol. For example, it is used in the range of 0.01 to 10 mol times, preferably 0.1 to 5 mol times.

例えば、架橋反応条件を温度条件とした場合、反応系の温度を上げ、その温度が反応温度に達すれば架橋反応が生起する。 For example, when the cross-linking reaction condition is a temperature condition, the temperature of the reaction system is raised, and when the temperature reaches the reaction temperature, a cross-linking reaction occurs.

水酸基を有する高分子又はその変性体が吸着された疎水性高分子粒子を分散、懸濁させる媒体は、例えば、高分子成分、架橋剤等を抽出してしまうことなく、かつ、架橋反応に不活性なものであることができる。上記媒体の具体例としては、水、トルエン、ジクロルベンゼン、ニトロメタン等が挙げられる。 The medium for dispersing and suspending the polymer having a hydroxyl group or the hydrophobic polymer particles on which the modified product thereof is adsorbed does not extract the polymer component, the cross-linking agent, etc., and is not resistant to the cross-linking reaction. It can be active. Specific examples of the medium include water, toluene, dichlorobenzene, nitromethane and the like.

架橋反応は、例えば、１〜９０℃の範囲の温度で行ってもよい。また、反応時間は、例えば、１〜３６時間であってもよく、１〜２４時間であってもよく、１〜１０時間であってもよい。 The cross-linking reaction may be carried out at a temperature in the range of 1 to 90 ° C., for example. The reaction time may be, for example, 1 to 36 hours, 1 to 24 hours, or 1 to 10 hours.

架橋度を調整する場合、架橋反応を段階的に行うことができる。例えば、一度架橋反応を行った後、再度架橋反応させることによって、架橋の進行度を調整できる。 When adjusting the degree of cross-linking, the cross-linking reaction can be carried out step by step. For example, the progress of cross-linking can be adjusted by performing the cross-linking reaction once and then performing the cross-linking reaction again.

架橋度は、熱分解による５％重量減少温度を測定し、その値から評価することができる。架橋度が高い場合、重量減少開始温度は高くなり、架橋度が低い場合、重量減少開始温度も低くなる。熱分解による５％重量減少温度は、例えば、示差熱熱重量測定装置を用いて測定できる。 The degree of cross-linking can be evaluated from the value obtained by measuring the 5% weight loss temperature due to thermal decomposition. When the degree of cross-linking is high, the weight reduction start temperature is high, and when the degree of cross-linking is low, the weight loss start temperature is also low. The 5% weight loss temperature due to thermal decomposition can be measured using, for example, a differential thermogravimetric analyzer.

架橋反応終了後、得られた粒子をろ別し、次いで、水、メタノール、エタノール等の親水性有機溶媒で洗浄し、未反応の高分子、懸濁用媒体等を除去する。これにより、疎水性高分子粒子の表面の少なくとも一部に、水酸基を有する高分子又はその変性体の架橋体を含む被覆層が形成された、架橋体被覆粒子を作製できる。 After completion of the cross-linking reaction, the obtained particles are filtered off, and then washed with a hydrophilic organic solvent such as water, methanol or ethanol to remove unreacted polymers, suspension medium and the like. As a result, crosslinked coated particles can be produced in which a coating layer containing a crosslinked polymer having a hydroxyl group or a modified product thereof is formed on at least a part of the surface of the hydrophobic polymer particles.

（官能基導入工程）
官能基導入工程は、上記架橋体に官能基を導入する工程である。上記架橋体に官能基を導入する方法に特に制限はなく、任意の方法を選択できる。上記架橋体に官能基を導入する方法としては、例えば、上記架橋体に官能基を直接導入する方法、及び上記架橋体が有する水酸基を介して官能基を導入する方法が挙げられる。官能基の導入方法に特に制限はなく、官能基の種類等により適宜選択できる。水酸基を介して官能基を導入する方法としては、例えば、ハロゲン化アルキル化合物を用いる方法が挙げられる。なお、水酸基を介して官能基を導入する場合、官能基は、架橋体が有する水酸基のうちの少なくとも一部に導入されていればよい。 (Functional group introduction process)
The functional group introduction step is a step of introducing a functional group into the crosslinked product. The method for introducing a functional group into the crosslinked product is not particularly limited, and any method can be selected. Examples of the method for introducing a functional group into the crosslinked product include a method for directly introducing the functional group into the crosslinked product and a method for introducing the functional group via the hydroxyl group of the crosslinked product. The method for introducing the functional group is not particularly limited, and can be appropriately selected depending on the type of the functional group and the like. Examples of the method for introducing a functional group via a hydroxyl group include a method using an alkyl halide compound. When a functional group is introduced via a hydroxyl group, the functional group may be introduced into at least a part of the hydroxyl groups of the crosslinked product.

ハロゲン化アルキル化合物としては、モノハロゲノ酢酸、モノハロゲノプロピオン酸等のモノハロゲノカルボン酸及びそのナトリウム塩、ジエチルアミノエチルクロライド等のハロゲン化アルキル基を少なくとも１つ有する１級、２級又は３級アミン等が挙げられる。ハロゲン化アルキル化合物は、硫黄化合物、臭化物又は塩化物であってもよい。 Examples of the alkyl halide compound include monohalogenocarboxylic acids such as monohalogenoacetic acid and monohalogenopropionic acid, sodium salts thereof, and primary, secondary or tertiary amines having at least one alkyl halide group such as diethylaminoethyl chloride. Can be mentioned. The alkyl halide compound may be a sulfur compound, bromide or chloride.

官能基として、弱酸性基であるカルボキシ基を導入する方法としては、例えば、上記ハロゲン化アルキル化合物として、モノハロゲノ酢酸、モノハロゲノプロピオン酸等のモノハロゲノカルボン酸又はそのナトリウム塩を反応させる方法が挙げられる。これらハロゲン化アルキル化合物の使用量は、架橋体被覆粒子の全質量に対して、０．２質量％以上であることが好ましい。 Examples of the method for introducing a carboxy group, which is a weakly acidic group, as a functional group include a method of reacting a monohalogenocarboxylic acid such as monohalogenacetic acid or monohalogenopropionic acid or a sodium salt thereof as the above-mentioned alkyl halide compound. Be done. The amount of these alkyl halide compounds used is preferably 0.2% by mass or more with respect to the total mass of the crosslinked coated particles.

官能基としてカルボキシ基を導入する方法は、例えば、上記架橋体が有する水酸基に、エピクロルヒドリン等のハロゲン基含有グリシジル化合物を反応させ、エポキシ基を導入した後、当該エポキシ基に、カルボン酸又はその塩を反応させる方法であってもよい。カルボン酸又はその塩としては、例えば、メルカプトプロピオン酸、及びメルカプト酢酸ナトリウムが挙げられる。 In the method of introducing a carboxy group as a functional group, for example, a halogen group-containing glycidyl compound such as epichlorohydrin is reacted with the hydroxyl group of the crosslinked product to introduce an epoxy group, and then the carboxylic acid or a salt thereof is added to the epoxy group. It may be a method of reacting. Examples of the carboxylic acid or a salt thereof include mercaptopropionic acid and sodium mercaptoacetate.

官能基として、エポキシ基を導入する方法としては、例えば、上記架橋体に、エピハロヒドリン、エチレングリコールジグリシジルエーテル、１，２，３，４−ジエポキシブタン等のエポキシ基含有化合物を反応させる方法が挙げられる。エピハロヒドリンとして好ましいものとしては、エピクロロヒドリン、エピブロモヒドリン、エピヨードヒドリン、β−メチルエピクロロヒドリン、α−メチルエピクロロヒドリン、γ−メチルエピクロロヒドリン等が挙げられる。これらのエポキシ基含有化合物の使用量は、架橋体被覆粒子の全質量に対して０．２質量％以上であることが好ましい。反応条件は、４０〜９０℃で０．５〜１２時間であることが好ましい。 As a method of introducing an epoxy group as a functional group, for example, a method of reacting the crosslinked product with an epoxy group-containing compound such as epihalohydrin, ethylene glycol diglycidyl ether, 1,2,3,4-diepoxybutane is used. Can be mentioned. Preferred epihalohydrins include epichlorohydrin, epibromohydrin, epiiodohydrin, β-methylepichlorohydrin, α-methylepichlorohydrin, γ-methylepichlorohydrin and the like. The amount of these epoxy group-containing compounds used is preferably 0.2% by mass or more with respect to the total mass of the crosslinked coated particles. The reaction conditions are preferably 40 to 90 ° C. for 0.5 to 12 hours.

官能基としてエポキシ基を導入する方法は、例えば、上記架橋体が有する水酸基に、エピクロルヒドリン等のハロゲン基含有グリシジル化合物を反応させる方法であってもよい。 The method for introducing an epoxy group as a functional group may be, for example, a method in which a halogen group-containing glycidyl compound such as epichlorohydrin is reacted with the hydroxyl group of the crosslinked product.

官能基として、アミノ基を導入する方法としては、例えば、上記ハロゲン化アルキル化合物のうち、水素原子の一部が塩素原子に置換されたアルキル基を少なくとも１つ有する、モノ−、ジ−又はトリ−アルキルアミン、モノ−、ジ−又はトリ−アルカノールアミン、モノ−アルキル−モノ−アルカノールアミン、ジ−アルキル−モノ−アルカノールアミン、モノ−アルキル−ジ−アルカノールアミン等を反応させる方法が挙げられる。これらのハロゲン化アルキル化合物の使用量としては、架橋体被覆粒子の全質量に対して０．２質量％以上であることが好ましい。反応条件は、４０〜９０℃で、０．５〜１２時間であることが好ましい。当該方法に用いられるハロゲン化アルキル化合物の具体例は、ジエチルアミノエチルクロライド塩酸塩を含む。 As a method for introducing an amino group as a functional group, for example, among the above alkyl halide compounds, mono-, di- or trie having at least one alkyl group in which a part of hydrogen atom is replaced with chlorine atom. Examples thereof include a method of reacting-alkylamine, mono-, di- or tri-alkanolamine, mono-alkyl-mono-alkanolamine, di-alkyl-mono-alkanolamine, mono-alkyl-di-alkanolamine and the like. The amount of these alkyl halide compounds used is preferably 0.2% by mass or more with respect to the total mass of the crosslinked coated particles. The reaction conditions are preferably 40 to 90 ° C. and 0.5 to 12 hours. Specific examples of the alkyl halide compound used in the method include diethylaminoethyl chloride hydrochloride.

官能基として、強酸性基であるスルホン酸基の導入方法としては、上記架橋体に対してエピクロロヒドリン等のグリシジル化合物を反応させ、亜硫酸ナトリウム、重亜硫酸ナトリウム等の亜硫酸塩又は重亜硫酸塩の飽和水溶液に架橋体被覆粒子を添加する方法等が挙げられる。反応条件は、３０〜９０℃で１〜１０時間であることが好ましい。 As a method for introducing a sulfonic acid group, which is a strongly acidic group, as a functional group, a glycidyl compound such as epichlorohydrin is reacted with the crosslinked product, and a sulfite such as sodium sulfite or sodium bisulfite or a sulfite is obtained. Examples thereof include a method of adding crosslinked coated particles to the saturated aqueous solution of. The reaction conditions are preferably 30 to 90 ° C. for 1 to 10 hours.

また、アルカリ性雰囲気下で、上記架橋体に１，３−プロパンスルトンを反応させる方法によっても、上記架橋体に官能基を導入し得る。１，３−プロパンスルトンは、架橋体被覆粒子の全質量に対して０．４質量％以上使用することが好ましい。反応条件は、０〜９０℃で０．５〜１２時間であることが好ましい。 A functional group can also be introduced into the crosslinked product by reacting the crosslinked product with 1,3-propane sultone in an alkaline atmosphere. It is preferable to use 1,3-propane sultone in an amount of 0.4% by mass or more based on the total mass of the crosslinked coated particles. The reaction conditions are preferably 0 to 90 ° C. for 0.5 to 12 hours.

本実施形態の分離材において、乾燥状態の分離材１ｇ当たりの官能基のモル量（ｍｍｏｌ）は、吸着させるタンパク質のサイズ、分離材の表面積、比重等に応じて適宜調整することが好ましい。 In the separating material of the present embodiment, the molar amount (mmol) of the functional group per 1 g of the separating material in a dry state is preferably appropriately adjusted according to the size of the protein to be adsorbed, the surface area of the separating material, the specific gravity and the like.

本実施形態の分離材は、イオン交換担体として好適に使用し得る。また、本実施形態の分離材は、アフィニティ精製、タンパク質の静電的相互作用による分離等にも好適に使用し得る。例えば、タンパク質を含む混合溶液の中に本実施形態の分離材を添加し、静電的相互作用によりタンパク質だけを分離材に吸着させた後、該分離材を溶液からろ別し、塩濃度の高い水溶液中に添加すれば、分離材に吸着しているタンパク質を容易に脱離、回収できる。また、本実施形態の分離材は、カラムクロマトグラフィー（例えば、液体クロマトグラフィー）において、使用することも可能である。より具体的には、本実施形態の分離材は、例えば、アフィニティークロマトグラフィー分野（特に抗体医薬品精製の分野）にも好適に利用できる。 The separating material of the present embodiment can be suitably used as an ion exchange carrier. Further, the separating material of the present embodiment can be suitably used for affinity purification, separation by electrostatic interaction of proteins, and the like. For example, the separating material of the present embodiment is added to a mixed solution containing a protein, and only the protein is adsorbed on the separating material by electrostatic interaction, and then the separating material is filtered off from the solution to obtain a salt concentration. When added to a high aqueous solution, the protein adsorbed on the separating material can be easily desorbed and recovered. The separating material of the present embodiment can also be used in column chromatography (for example, liquid chromatography). More specifically, the separating material of the present embodiment can be suitably used, for example, in the field of affinity chromatography (particularly in the field of antibody drug purification).

本実施形態の分離材を用いて分離できる生体高分子としては、水溶性物質が好ましい。具体的には、血清アルブミン、免疫グロブリン等の血液タンパク質などのタンパク質、生体中に存在する酵素、バイオテクノロジーにより生産されるタンパク質生理活性物質、ＤＮＡ、生理活性をするペプチド等の生体高分子などであり、好ましくは分子量が２００万以下、より好ましくは５０万以下である。また、公知の方法に従い、タンパク質の等電点、イオン化状態等によって、分離材の性質、条件等を選ぶ必要がある。公知の方法としては、例えば、特開昭６０−１６９４２７号公報等に記載の方法が挙げられる。 As the biopolymer that can be separated using the separating material of the present embodiment, a water-soluble substance is preferable. Specifically, it is a protein such as blood protein such as serum albumin and immunoglobulin, an enzyme existing in the living body, a protein bioactive substance produced by biotechnology, a DNA, and a biopolymer such as a peptide having physiological activity. Yes, preferably the molecular weight is 2 million or less, more preferably 500,000 or less. In addition, it is necessary to select the properties, conditions, etc. of the separating material according to the isoelectric point, ionization state, etc. of the protein according to a known method. As a known method, for example, the method described in JP-A-60-169427 can be mentioned.

本実施形態の分離材は、疎水性高分子粒子１ｇ当たり３０〜６００ｍｇの被覆層を備えると好ましい。被覆層の量は熱分解の重量減少等で測定することができる。 The separating material of the present embodiment preferably includes a coating layer of 30 to 600 mg per 1 g of the hydrophobic polymer particles. The amount of the coating layer can be measured by weight reduction of thermal decomposition or the like.

本実施形態の分離材の水中での５％圧縮変形弾性率（湿潤状態での５％圧縮変形弾性率）は、例えば、７０ＭＰａ以上であってもよく、７５ＭＰａ以上であってもよく、８０ＭＰａ以上であってもよい。 The 5% compressive deformation elastic modulus of the separating material of the present embodiment in water (5% compressive deformation elastic modulus in a wet state) may be, for example, 70 MPa or more, 75 MPa or more, or 80 MPa or more. It may be.

本明細書において、分離材の水中での５％圧縮変形弾性率（分離材が５％圧縮変形したときの圧縮弾性率、５％Ｋ値ともいう）は、以下の方法により算出された値をいう。
微小圧縮試験機（Ｆｉｓｈｅｒ製）を用いて、室温（２０〜２５℃）条件にて荷重負荷速度１ｍＮ／秒で、四角柱の平滑な端面（５０μｍ×５０μｍ）により、予め水中に浸漬させた分離材を５０ｍＮまで圧縮したときの荷重及び圧縮変位を測定する。得られた測定値から、分離材が５％圧縮変形したときの圧縮弾性率（５％Ｋ値）を下記式により求める。また、上記測定中の変位量が最も大きく変化する点の荷重を破壊強度（ｍＮ）とする。
５％Ｋ値（ＭＰａ）＝（３／２^１／２）・Ｆ・Ｓ^−３／２・Ｒ^−１／２
Ｆ：分離材が５％圧縮変形したときの荷重（ｍＮ）
Ｓ：分離材が５％圧縮変形したときの圧縮変位（ｍｍ）
Ｒ：分離材の半径（ｍｍ） In the present specification, the 5% compressive elastic modulus of the separating material in water (also referred to as the compressive elastic modulus when the separating material is 5% compressively deformed) is a value calculated by the following method. Say.
Separation by pre-immersing in water with a smooth end face (50 μm × 50 μm) of a quadrangular prism at a load-loading speed of 1 mN / sec at room temperature (20 to 25 ° C.) using a microcompression tester (manufactured by Fisher). The load and compressive displacement when the material is compressed to 50 mN are measured. From the obtained measured values, the compressive elastic modulus (5% K value) when the separating material is compressionally deformed by 5% is calculated by the following formula. Further, the load at the point where the displacement amount during the measurement changes most is defined as the fracture strength (mN).
5% K value (MPa) = (3/2 ^1/2 ) ・ F ・ S ^-3/2・ R- ^{1 / 2}
F: Load (mN) when the separating material is compressed and deformed by 5%
S: Compressive displacement (mm) when the separating material is compressed and deformed by 5%
R: Radius of separating material (mm)

本実施形態の分離材は、カラムに充填した場合、カラム圧０．３ＭＰａのときに通液速度が５００ｃｍ／ｈ以上であることが好ましい。カラムクロマトグラフィーでタンパク質の分離を行う場合、タンパク質溶液等の通液速度としては、一般に４００ｃｍ／ｈ以下の範囲であるが、本実施形態の分離材を使用した場合は、通常のタンパク質分離用の分離材よりも速い通液速度５００ｃｍ／ｈ以上で使用することができる。なお、本明細書における通液速度とは、φ７．８×３００ｍｍのステンレスカラムに本実施形態の分離材を充填し、液を通した際の通液速度を表す。 When the separating material of the present embodiment is packed in a column, it is preferable that the liquid passing speed is 500 cm / h or more when the column pressure is 0.3 MPa. When protein is separated by column chromatography, the flow rate of the protein solution or the like is generally in the range of 400 cm / h or less, but when the separating material of the present embodiment is used, it is used for normal protein separation. It can be used at a liquid passing speed of 500 cm / h or more, which is faster than that of the separating material. The liquid passing speed in the present specification represents the liquid passing speed when the separating material of the present embodiment is filled in a stainless steel column having a diameter of 7.8 × 300 mm and the liquid is passed through.

分離材の、平均細孔径、比表面積等は、疎水性高分子粒子の原料、多孔質化剤、水酸基を有する高分子等を適宜選択することによって、調整することができる。 The average pore size, specific surface area, etc. of the separating material can be adjusted by appropriately selecting a raw material for hydrophobic polymer particles, a porosifying agent, a polymer having a hydroxyl group, and the like.

本実施形態の分離材には、上記官能基を介して又は上記官能基とは別に、例えば、リガンド（例えば、プロテインＡ）又はイオン交換基を導入することもできる。リガンド又はイオン交換基が更に導入された分離材は、例えば、アフィニティ精製、イオン交換精製等の用途に好適に使用し得る。 For example, a ligand (for example, protein A) or an ion exchange group can be introduced into the separating material of the present embodiment via the functional group or separately from the functional group. The separating material further introduced with the ligand or the ion exchange group can be suitably used for applications such as affinity purification and ion exchange purification.

本実施形態のカラムは、本実施形態の分離材を備えるものである。本実施形態のカラムは、例えば、カラムに本実施形態の分離材を充填することで製造できる。カラムに本実施形態の分離材を充填する方法は特に制限されるものではなく、例えば、公知の方法を採用することができる。 The column of the present embodiment includes the separating material of the present embodiment. The column of the present embodiment can be produced, for example, by filling the column with the separating material of the present embodiment. The method of filling the column with the separating material of the present embodiment is not particularly limited, and for example, a known method can be adopted.

以下、本発明を実施例により説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。 Hereinafter, the present invention will be described with reference to Examples, but the present invention is not limited to these Examples.

（実施例１）
（疎水性の多孔質高分子粒子の合成）
５００ｍＬの三口フラスコに、モノマとしての純度９６％のジビニルベンゼン（新日鉄住金株式会社製、商品名：ＤＶＢ９６０）１６ｇ、多孔質化剤としてのヘキサノール１６ｇ及びジエチルベンゼン１６ｇ、並びに開始剤としての過酸化ベンゾイル０．６４ｇをポリビニルアルコール（０．５質量％）分散剤水溶液に混合して、混合液を得た。得られた混合液を、マイクロプロセスサーバーを使用して乳化した後、得られた乳化液をフラスコに移し、８０℃のウォーターバスで加熱しながら、撹拌機を用いて約８時間撹拌して粒子を得た。得られた粒子をろ別して、更にアセトンで洗浄し、疎水性の多孔質高分子粒子１を得た。得られた多孔質高分子粒子１の粒径をフロー型粒径測定装置で測定し、平均粒径を算出した。結果を表１に示す。 (Example 1)
(Synthesis of hydrophobic porous polymer particles)
In a 500 mL three-necked flask, 16 g of divinylbenzene (manufactured by Nippon Steel & Sumitomo Metal Corporation, trade name: DVB960) with a purity of 96% as a monoma, 16 g of hexanol and 16 g of diethylbenzene as a porosifying agent, and benzoyl peroxide 0 as an initiator. .64 g was mixed with an aqueous solution of polyvinyl alcohol (0.5 mass%) dispersant to obtain a mixed solution. The obtained mixed solution is emulsified using a microprocess server, and then the obtained emulsion is transferred to a flask and stirred with a stirrer for about 8 hours while heating in a water bath at 80 ° C. to obtain particles. Got The obtained particles were separated by filtration and further washed with acetone to obtain hydrophobic porous polymer particles 1. The particle size of the obtained porous polymer particles 1 was measured with a flow type particle size measuring device, and the average particle size was calculated. The results are shown in Table 1.

（水酸基を有する高分子への疎水基の導入）
アガロース水溶液（濃度２質量％）４８０ｍＬに水酸化ナトリウム０．９８ｇ、及びグリシジルフェニルエーテル４．９０ｇを投入して６０℃で６時間反応させ、アガロースにフェニル基を導入した。得られた変性アガロースをイソプロピルアルコールで再沈殿させ、洗浄した。変性アガロースの疎水基含有量を下記方法により算出したところ、１４．２％であった。 (Introduction of hydrophobic groups into polymers with hydroxyl groups)
0.98 g of sodium hydroxide and 4.90 g of glycidyl phenyl ether were added to 480 mL of an aqueous agarose solution (concentration: 2% by mass) and reacted at 60 ° C. for 6 hours to introduce a phenyl group into agarose. The obtained modified agarose was reprecipitated with isopropyl alcohol and washed. The hydrophobic group content of the modified agarose was calculated by the following method and found to be 14.2%.

（変性アガロースの疎水基含有量の評価）
乾燥状態の粉末アガロース（変性されていないアガロース）と、揮発分０．１質量％未満まで乾燥させた変性アガロースとをそれぞれ７０℃の純水に溶解させ、０．０５質量％の水溶液サンプルを調製した。 (Evaluation of hydrophobic group content of modified agarose)
A dry powdered agarose (unmodified agarose) and a modified agarose dried to a volatile content of less than 0.1% by mass are each dissolved in pure water at 70 ° C. to prepare a 0.05% by mass aqueous solution sample. did.

分光光度計により各水溶液の２６９ｎｍの吸光度を測定して濃度を求め、下記式より疎水基含有量を算出した。
・疎水基含有量（％）＝（Ｃ_ＡＧ／（Ｃ_ＨＡＧ＋Ｃ_ＡＧ））×１００
・Ｃ_ＡＧ：変性されているアガロース構成単位の濃度（ｍｍｏｌ／Ｌ）
＝Ａ／ε_ＧＰＥ×１０００
・Ｃ_ＨＡＧ：変性されていないアガロース構成単位の濃度（ｍｍｏｌ／Ｌ）
＝（変性されてないアガロース構成単位の濃度（ｇ／Ｌ）／アガロース構成単位（３０６ｇ／ｍｏｌ））×１０００
・Ａ：疎水基導入アガロースの真の吸光度
＝疎水基を導入したアガロースの吸光度−変性されていないアガロースの吸収
・ε_ＧＰＥ：グリシジルフェニルエーテルの吸光係数
＝１３７２（Ｌ／（ｍｏｌ・ｃｍ））
・変性されていないアガロースの吸収＝変性されてないアガロースの吸光度×（変性アガロースのサンプル濃度（ｍｍｏｌ／Ｌ）／変性されてないアガロースのサンプル濃度（ｍｍｏｌ／Ｌ））
・変性されてないアガロース構成単位の濃度（ｇ／Ｌ）＝変性アガロースのサンプル濃度（質量％）×１０−変性されているアガロース構成単位の濃度（ｇ／Ｌ）
・変性されているアガロース構成単位の濃度（ｇ／Ｌ）＝（Ｃ_ＡＧ×変性されているアガロース構成単位（４５６ｇ／ｍｏｌ））／１０００ The absorbance of each aqueous solution at 269 nm was measured with a spectrophotometer to determine the concentration, and the hydrophobic group content was calculated from the following formula.
Hydrophobic group content (%) = (C _AG / (C _HAG + C _AG )) × 100
_CAG : Concentration of denatured agarose constituent units (mmol / L)
= A / ε _GPE x 1000
C _HAG : Concentration of unmodified agarose building blocks (mmol / L)
= (Concentration of unmodified agarose constituent unit (g / L) / agarose constituent unit (306 g / mol)) × 1000
-A: True absorbance of hydrophobic group-introduced agarose = Absorbance of hydrophobic group-introduced agarose-Absorption of _unmodified agarose-ε _GPE : Absorption coefficient of glycidylphenyl ether = 1372 (L / (mol · cm))
-Absorption of unmodified agarose = Absorbance of unmodified agarose x (Sample concentration of modified agarose (mmol / L) / Sample concentration of unmodified agarose (mmol / L))
-Concentration of unmodified agarose constituent unit (g / L) = Sample concentration of modified agarose (% by mass) x 10-Concentration of modified agarose constituent unit (g / L)
-Concentration of modified agarose constituent unit (g / L) = ( _CAG x modified agarose constituent unit (456 g / mol)) / 1000

（水酸基を有する高分子の変性体の粒子へのコーティング）
２０ｍｇ／ｍＬの変性アガロース水溶液に多孔質高分子粒子１を７０ｍＬ／粒子ｇの濃度で投入し、５５℃で２４ｈ撹拌して、多孔質高分子粒子１に変性アガロースを吸着させた。次いで、変性アガロースを吸着させた多孔質高分子粒子１をろ別して、更に熱水で洗浄した。 (Coating of modified polymer particles with hydroxyl groups)
The porous polymer particles 1 were added to a 20 mg / mL modified agarose aqueous solution at a concentration of 70 mL / particle g, and the mixture was stirred at 55 ° C. for 24 hours to allow the modified agarose to be adsorbed on the porous polymer particles 1. Next, the porous polymer particles 1 on which the modified agarose was adsorbed were separated by filtration and further washed with hot water.

（コーティングした水酸基を有する高分子の変性体の架橋）
多孔質高分子粒子１の表面及び細孔内部に吸着した変性アガロースを次のようにして架橋した。変性アガロースが吸着した粒子１０ｇを０．４Ｍ水酸化ナトリウム水溶液に分散させ、０．０２Ｍエピクロロヒドリンを添加し、２４時間室温にて撹拌した。その後、２質量％の熱ドデシル硫酸ナトリウム水溶液で洗浄後、純水で更に洗浄し、乾燥させることで、変性アガロースの架橋体を被覆層として有する架橋体被覆粒子を得た。 (Crosslinking of modified polymer with coated hydroxyl group)
The modified agarose adsorbed on the surface of the porous polymer particles 1 and inside the pores was crosslinked as follows. 10 g of particles adsorbed with modified agarose were dispersed in a 0.4 M aqueous sodium hydroxide solution, 0.02 M epichlorohydrin was added, and the mixture was stirred at room temperature for 24 hours. Then, it was washed with 2 mass% hot sodium dodecyl sulfate aqueous solution, further washed with pure water, and dried to obtain crosslinked particles having a crosslinked body of modified agarose as a coating layer.

（タンパク質の非特異吸着能の評価）
得られた架橋体被覆粒子０．２ｇを、ＢＳＡ（Ｂｏｖｉｎｅ Ｓｅｒｕｍ Ａｌｂｕｍｉｎ）濃度２４ｍｇ／ｍＬのＴｒｉｓ−塩酸緩衝液（ｐＨ８．０）２０ｍＬに加え、２４時間室温で撹拌した。その後、遠心分離で上澄み液を採取し、分光光度計で上澄み液の２８０ｎｍの吸光度を測定することによって求めた上澄み液のＢＳＡ濃度より、粒子に吸着したＢＳＡ量を算出した。粒子１ｍＬあたりのＢＳＡ量吸着量が、１ｍｇ以下である場合を「Ａ」、１ｍｇ超５ｍｇ未満である場合を「Ｂ」、５ｍｇ以上である場合を「Ｃ」として評価した。結果を表１に示す。 (Evaluation of non-specific adsorption capacity of protein)
0.2 g of the obtained crosslinked coated particles was added to 20 mL of Tris-hydrochloric acid buffer (pH 8.0) having a BSA (Bovine Serum Albumin) concentration of 24 mg / mL, and the mixture was stirred at room temperature for 24 hours. Then, the supernatant was collected by centrifugation, and the amount of BSA adsorbed on the particles was calculated from the BSA concentration of the supernatant obtained by measuring the absorbance of the supernatant at 280 nm with a spectrophotometer. The amount of BSA adsorbed per 1 mL of particles was evaluated as "A" when it was 1 mg or less, "B" when it was more than 1 mg and less than 5 mg, and "C" when it was 5 mg or more. The results are shown in Table 1.

（カルボキシ基の導入）
得られた架橋体被覆粒子（乾燥質量１ｇ）を、０．４Ｍの水酸化ナトリウム水溶液１０ｍＬに加えた後、エピクロロヒドリン０．６ｇを更に加え、室温で撹拌しながら３時間反応させた。反応終了後、粒子をろ別し、５００ｍＬの水で洗浄して、架橋体にエポキシ基を導入した。次いで、粒子に、水１０ｍＬ、及び１Ｍのメルカプト酢酸ナトリウム水溶液１０ｍＬを加え、室温で２４時間撹拌し、反応させた。反応終了後、粒子をろ別し、１０００ｍＬの水で洗浄して、架橋体にカルボキシ基を導入した。これにより本実施形態の分離材を得た。なお、本実施例における官能基導入剤は、メルカプト酢酸ナトリウムである。 (Introduction of carboxy group)
The obtained crosslinked coated particles (dry mass 1 g) were added to 10 mL of a 0.4 M aqueous sodium hydroxide solution, and then 0.6 g of epichlorohydrin was further added, and the mixture was reacted at room temperature for 3 hours with stirring. After completion of the reaction, the particles were filtered off and washed with 500 mL of water to introduce an epoxy group into the crosslinked product. Next, 10 mL of water and 10 mL of a 1 M aqueous sodium mercaptoacetate solution were added to the particles, and the mixture was stirred at room temperature for 24 hours to react. After completion of the reaction, the particles were filtered off and washed with 1000 mL of water to introduce a carboxy group into the crosslinked product. As a result, the separating material of the present embodiment was obtained. The functional group-introducing agent in this example is sodium mercaptoacetate.

（カルボキシ基量の測定）
得られた分離材の官能基量を以下のように測定した。湿潤状態の分離材０．５ｇに、０．１Ｎの塩酸水溶液２０ｇを加え、室温で３０分撹拌した。撹拌後の分離材を吸引してろ別し、さらに、水５００ｍＬで洗浄し、洗浄液のｐＨが５以上であることを確認した。洗浄後の分離材に０．５Ｍの塩化ナトリウム水溶液１０ｇを加え、室温で３０分撹拌した。撹拌後の分離材の懸濁液を０．０１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ７を終点として滴定することにより、乾燥状態の分離材１ｇ当たりのカルボキシ基のモル量（ｍｍｏｌ）を測定した。この結果を官能基密度（ｍｍｏｌ／粒子ｇ）として、表１に示す。 (Measurement of carboxy group amount)
The amount of functional groups of the obtained separating material was measured as follows. To 0.5 g of the wet separating material, 20 g of a 0.1 N hydrochloric acid aqueous solution was added, and the mixture was stirred at room temperature for 30 minutes. The separated material after stirring was sucked and filtered, and further washed with 500 mL of water, and it was confirmed that the pH of the washing liquid was 5 or more. 10 g of a 0.5 M aqueous sodium chloride solution was added to the separated material after washing, and the mixture was stirred at room temperature for 30 minutes. The suspension of the separated material after stirring was titrated with a 0.01 N aqueous sodium hydroxide solution starting at pH 7, and the molar amount (mmol) of carboxy groups per 1 g of the separated material in a dry state was measured. This result is shown in Table 1 as the functional group density (mmol / particle g).

（リガンドの固定化）
得られた分離材０．０９ｇに、プロテインＡを０．０２ｇ、ＷＳＣ（１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩）を０．０２ｇ、及びｐＨ５．８に調整した５０ｍＭのＰＢＳを２ｍｌ加えたのち、室温で２４時間撹拌した。その後、粒子をろ別及び洗浄することによりリガンド固定化粒子を得た。 (Ligand immobilization)
To 0.09 g of the obtained separating material, 0.02 g of protein A, 0.02 g of WSC (1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide hydrochloride), and 50 mM adjusted to pH 5.8. After adding 2 ml of PBS, the mixture was stirred at room temperature for 24 hours. Then, the particles were filtered and washed to obtain ligand-immobilized particles.

（リガンド固定化量の算出）
２４時間撹拌後の反応溶液から粒子をろ別した後、所定濃度の粒子を含む試料を調製した。当該試料の吸光度（２８０ｎｍ）を測定し、予め作成した検量線により、リガンド固定化量を算出した。結果を表１に示す。 (Calculation of ligand immobilization amount)
The particles were filtered off from the reaction solution after stirring for 24 hours, and then a sample containing the particles having a predetermined concentration was prepared. The absorbance (280 nm) of the sample was measured, and the amount of ligand immobilized was calculated from a calibration curve prepared in advance. The results are shown in Table 1.

（水中での５％圧縮変形弾性率の算出）
得られた分離材の水中での５％圧縮変形弾性率を以下のようにして算出した。結果を表１に示す。 (Calculation of 5% compressive deformation elastic modulus in water)
The 5% compressive deformation elastic modulus of the obtained separating material in water was calculated as follows. The results are shown in Table 1.

微小圧縮試験機（Ｆｉｓｈｅｒ製）を用いて、室温（２０〜２５℃）条件にて荷重負荷速度１ｍＮ／秒で、四角柱の平滑な端面（５０μｍ×５０μｍ）により、予め水中に浸漬させた分離材を５０ｍＮまで圧縮したときの荷重及び圧縮変位を測定する。得られた測定値から、分離材が５％圧縮変形したときの圧縮弾性率（５％Ｋ値）を下記式により求めることができる。また、上記測定中の変位量が最も大きく変化する点の荷重を破壊強度（ｍＮ）とする。 Separation by pre-immersing in water with a smooth end face (50 μm × 50 μm) of a quadrangular prism at a load-loading speed of 1 mN / sec at room temperature (20 to 25 ° C.) using a microcompression tester (manufactured by Fisher). The load and compressive displacement when the material is compressed to 50 mN are measured. From the obtained measured values, the compressive elastic modulus (5% K value) when the separating material is compressionally deformed by 5% can be obtained by the following formula. Further, the load at the point where the displacement amount during the measurement changes most is defined as the fracture strength (mN).

５％Ｋ値（ＭＰａ）＝（３／２^１／２）・Ｆ・Ｓ^−３／２・Ｒ^−１／２
Ｆ：分離材が５％圧縮変形したときの荷重（ｍＮ）
Ｓ：分離材が５％圧縮変形したときの圧縮変位（ｍｍ）
Ｒ：分離材の半径（ｍｍ） 5% K value (MPa) = (3/2 ^1/2 ) ・ F ・ S ^-3/2・ R- ^{1 / 2}
F: Load (mN) when the separating material is compressed and deformed by 5%
S: Compressive displacement (mm) when the separating material is compressed and deformed by 5%
R: Radius of separating material (mm)

（カラム特性評価）
得られた分離材を、濃度３０質量％のスラリー（溶媒：メタノール）として、φ７．８×３００ｍｍのステンレスカラムに、１５分充填した。その後、カラムに流速を変えながら水を通し、流速とカラム圧との関係を測定し、０．３ＭＰａ時の通液速度（線流速）を測定した。結果を表１に示す。 (Column characterization)
The obtained separating material was filled in a stainless column having a diameter of 7.8 × 300 mm as a slurry (solvent: methanol) having a concentration of 30% by mass for 15 minutes. Then, water was passed through the column while changing the flow velocity, the relationship between the flow velocity and the column pressure was measured, and the liquid passing velocity (linear flow velocity) at 0.3 MPa was measured. The results are shown in Table 1.

（実施例２）
実施例１と同様にして、架橋体被覆粒子を作製した。 (Example 2)
Crosslinked coated particles were produced in the same manner as in Example 1.

（カルボキシ基の導入）
得られた架橋体被覆粒子（乾燥質量１ｇ）を、０．４Ｍの水酸化ナトリウム水溶液１０ｍＬに加えた後、エピクロロヒドリン０．６ｇを更に加え、室温で撹拌しながら３時間反応させた。反応終了後、粒子をろ別し、５００ｍＬの水で洗浄して、架橋体にエポキシ基を導入した。次いで、粒子に、水酸化ナトリウム５ｇを水１５ｍＬに溶解させた水酸化ナトリウム水溶液１５ｍＬと、メルカプトプロピオン酸５ｇとを加え、室温で２４時間撹拌し、反応させた。反応終了後、粒子をろ別し、１０００ｍＬの水で洗浄して、架橋体にカルボキシ基を導入した。これにより本実施形態の分離材を得た。なお、本実施例における官能基導入剤は、メルカプトプロピオン酸である。 (Introduction of carboxy group)
The obtained crosslinked coated particles (dry mass 1 g) were added to 10 mL of a 0.4 M aqueous sodium hydroxide solution, and then 0.6 g of epichlorohydrin was further added, and the mixture was reacted at room temperature for 3 hours with stirring. After completion of the reaction, the particles were filtered off and washed with 500 mL of water to introduce an epoxy group into the crosslinked product. Next, 15 mL of an aqueous sodium hydroxide solution in which 5 g of sodium hydroxide was dissolved in 15 mL of water and 5 g of mercaptopropionic acid were added to the particles, and the mixture was stirred at room temperature for 24 hours to react. After completion of the reaction, the particles were filtered off and washed with 1000 mL of water to introduce a carboxy group into the crosslinked product. As a result, the separating material of the present embodiment was obtained. The functional group-introducing agent in this example is mercaptopropionic acid.

また、実施例１と同様にして、平均粒径、タンパク質の非特異吸着能、カルボキシ基量（官能基密度）、水中での５％圧縮変形弾性率、及びカラム特性（通液速度）を評価した。また、実施例１と同様にして、リガンドの固定化を行い、リガンド固定化量を算出した。結果を表１に示す。 Further, in the same manner as in Example 1, the average particle size, non-specific adsorption ability of protein, carboxy group amount (functional group density), 5% compressive deformation elastic modulus in water, and column characteristics (liquid flow rate) were evaluated. did. Further, the ligand was immobilized in the same manner as in Example 1, and the amount of ligand immobilized was calculated. The results are shown in Table 1.

（実施例３）
実施例１と同様にして、架橋体被覆粒子を作製した。 (Example 3)
Crosslinked coated particles were produced in the same manner as in Example 1.

（エポキシ基の導入）
得られた架橋体被覆粒子（乾燥質量１ｇ）を、０．４Ｍの水酸化ナトリウム水溶液１０ｍＬに加えた後、エピクロロヒドリン０．６ｇを更に加え、室温で撹拌しながら３時間反応させた。反応終了後、粒子をろ別し、５００ｍＬの水で洗浄し、架橋体にエポキシ基を導入した。これにより本実施形態の分離材を得た。 (Introduction of epoxy group)
The obtained crosslinked coated particles (dry mass 1 g) were added to 10 mL of a 0.4 M aqueous sodium hydroxide solution, and then 0.6 g of epichlorohydrin was further added, and the mixture was reacted at room temperature for 3 hours with stirring. After completion of the reaction, the particles were filtered off, washed with 500 mL of water, and an epoxy group was introduced into the crosslinked product. As a result, the separating material of the present embodiment was obtained.

（エポキシ基量の測定）
得られた分離材の官能基量を以下のように測定した。湿潤状態の分離材０．５ｇに水１０ｇ，１Ｎの塩酸水溶液１ｇ加え、７０℃で１時間撹拌し、反応させた。反応後、０．１Ｎ水酸化ナトリウムで中和滴定することにより、乾燥状態の分離材１ｇ当たりのエポキシ基のモル量（ｍｍｏｌ）を測定した。この結果を官能基密度（ｍｍｏｌ／粒子ｇ）として、表１に示す。 (Measurement of epoxy group amount)
The amount of functional groups of the obtained separating material was measured as follows. To 0.5 g of the wet separating material, 10 g of water and 1 g of a 1N aqueous hydrochloric acid solution were added, and the mixture was stirred at 70 ° C. for 1 hour to react. After the reaction, the molar amount (mmol) of the epoxy group per 1 g of the separating material in a dry state was measured by neutralization titration with 0.1N sodium hydroxide. This result is shown in Table 1 as the functional group density (mmol / particle g).

（リガンドの固定化）
得られた分離材０．０９ｇに、プロテインＡを０．０２ｇ、及びｐＨ１０の０．５Ｍ炭酸バッファー（和光純薬工業社製の炭酸水素ナトリウム及び炭酸ナトリウムと、ＲＯ水とで調製）を２ｍＬ加え、３０℃で２４時間撹拌した。その後、粒子をろ別及び洗浄することによりリガンド固定化粒子を得た。 (Ligand immobilization)
To 0.09 g of the obtained separating material, 0.02 g of protein A and 2 mL of 0.5 M carbonate buffer (prepared with sodium hydrogen carbonate and sodium carbonate manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd. and RO water) at pH 10 are added. , 30 ° C. for 24 hours. Then, the particles were filtered and washed to obtain ligand-immobilized particles.

（リガンド固定化量の算出）
２４時間撹拌後の反応溶液から粒子をろ別した後、所定濃度の粒子を含む試料を調製した。当該試料の吸光度（２８０ｎｍ）を測定し、予め作成した検量線により、リガンド固定化量を算出した。結果を表１に示す。 (Calculation of ligand immobilization amount)
The particles were filtered off from the reaction solution after stirring for 24 hours, and then a sample containing the particles having a predetermined concentration was prepared. The absorbance (280 nm) of the sample was measured, and the amount of ligand immobilized was calculated from a calibration curve prepared in advance. The results are shown in Table 1.

また、実施例１と同様にして、平均粒径、タンパク質の非特異吸着能、水中での５％圧縮変形弾性率、及びカラム特性（通液速度）を評価した。結果を表１に示す。 Further, in the same manner as in Example 1, the average particle size, the non-specific adsorption ability of the protein, the 5% compressive deformation elastic modulus in water, and the column characteristics (liquid passing rate) were evaluated. The results are shown in Table 1.

（実施例４）
実施例１と同様にして、架橋体被覆粒子を作製した。 (Example 4)
Crosslinked coated particles were produced in the same manner as in Example 1.

（アミノ基の導入）
得られた架橋体被覆粒子（乾燥質量２０ｇ）を、５Ｍの水酸化ナトリウム水溶液２００ｍＬに加え、室温で１時間放置した。別途、ジエチルアミノエチルクロライド塩酸塩の所定量（１０ｇ）を２００ｍＬ添加し、水溶液の温度を７０℃まで上げ、撹拌しながら２時間反応させた。反応終了後、ろ過、水／エタノール（体積比５／１）で３回洗浄し、架橋体にジエチルアミノエチル（ＤＥＡＥ）基を導入した。これにより本実施形態の分離材を得た。 (Introduction of amino group)
The obtained crosslinked coated particles (dry mass 20 g) were added to 200 mL of a 5 M aqueous sodium hydroxide solution and allowed to stand at room temperature for 1 hour. Separately, 200 mL of a predetermined amount (10 g) of diethylaminoethyl chloride hydrochloride was added, the temperature of the aqueous solution was raised to 70 ° C., and the reaction was carried out for 2 hours with stirring. After completion of the reaction, the mixture was filtered and washed 3 times with water / ethanol (volume ratio 5/1), and a diethylaminoethyl (DEAE) group was introduced into the crosslinked product. As a result, the separating material of the present embodiment was obtained.

（アミノ基量の測定）
得られた分離材の官能基量を以下のように測定した。湿潤状態の分離材０．５ｇを０．１Ｎ水酸化ナトリウム２０ｍＬに１時間浸漬し、室温で撹拌した。その後、溶液のｐＨが７以下となるように水で洗浄を行った。洗浄後の分離材を０．１Ｎ塩酸２０ｍＬに浸漬し、１時間撹拌させた。撹拌後の分離材をろ別後、塩酸水溶液を中和滴定することにより、乾燥状態の分離材１ｇ当たりのアミノ基のモル量（ｍｍｏｌ）を測定した。この結果を官能基密度（ｍｍｏｌ／粒子ｇ）として、表１に示す。 (Measurement of amino group amount)
The amount of functional groups of the obtained separating material was measured as follows. 0.5 g of the wet separating material was immersed in 20 mL of 0.1N sodium hydroxide for 1 hour and stirred at room temperature. Then, it was washed with water so that the pH of the solution became 7 or less. The separated material after washing was immersed in 20 mL of 0.1N hydrochloric acid and stirred for 1 hour. The separated material after stirring was filtered off, and then the aqueous hydrochloric acid solution was neutralized and titrated to measure the molar amount (mmol) of amino groups per 1 g of the separated material in a dry state. This result is shown in Table 1 as the functional group density (mmol / particle g).

また、実施例１と同様にして、平均粒径、タンパク質の非特異吸着能、水中での５％圧縮変形弾性率、及びカラム特性（通液速度）を評価した。結果を表１に示す。 Further, in the same manner as in Example 1, the average particle size, the non-specific adsorption ability of the protein, the 5% compressive deformation elastic modulus in water, and the column characteristics (liquid passing rate) were evaluated. The results are shown in Table 1.

（比較例１）
市販のアガロース粒子（Ｃａｐｔｏ ＤＥＡＥ（ＧＥヘルスケア製、商品名））をそのまま分離材として用い、実施例１と同様に、平均粒径、タンパク質の非特異吸着能、水中での５％圧縮変形弾性率、及びカラム特性（通液速度）を評価した。結果を表１に示す。 (Comparative Example 1)
Commercially available agarose particles (Capto DEAE (manufactured by GE Healthcare, trade name)) are used as they are as a separating material, and as in Example 1, average particle size, non-specific adsorption capacity of protein, and 5% compressive deformation modulus in water. The rate and column characteristics (liquid flow rate) were evaluated. The results are shown in Table 1.

（比較例２）
多孔質高分子粒子１をそのまま分離材として用い、実施例１と同様に、平均粒径、タンパク質の非特異吸着能、水中での５％圧縮変形弾性率、及びカラム特性（通液速度）を評価した。結果を表１に示す。 (Comparative Example 2)
Porous polymer particles 1 are used as they are as a separating material, and the average particle size, non-specific adsorption ability of protein, 5% compressive deformation elastic modulus in water, and column characteristics (liquid flow rate) are obtained as in Example 1. evaluated. The results are shown in Table 1.

表１の結果から、実施例１〜４の分離材は、タンパク質の非特異吸着が低減され、カラムに充填したときの通液性に優れていることがわかる。また、実施例１〜４の分離材は、水中での５％圧縮変形弾性率も高いことがわかる。 From the results in Table 1, it can be seen that the separating materials of Examples 1 to 4 have reduced non-specific adsorption of proteins and are excellent in liquid permeability when packed in a column. It can also be seen that the separating materials of Examples 1 to 4 have a high 5% compressive deformation elastic modulus in water.

Claims (6)

疎水性高分子粒子と、
該疎水性高分子粒子の表面の少なくとも一部を被覆する被覆層と、を備え、
前記被覆層が、水酸基及び水酸基以外の官能基を有する官能基含有高分子を含み、
前記水酸基以外の官能基が、カルボキシ基、エポキシ基、又はアミノ基であり、
水中での５％圧縮変形弾性率が７０ＭＰａ以上であり、
前記疎水性高分子粒子が、スチレン系モノマに由来する構造単位を有する疎水性高分子を含み、
前記官能基含有高分子が、架橋されている、分離材。 Hydrophobic polymer particles and
A coating layer that covers at least a part of the surface of the hydrophobic polymer particles is provided.
The coating layer, see containing a functional group-containing polymer having a functional group other than hydroxyl group and a hydroxyl group,
The functional group other than the hydroxyl group is a carboxy group, an epoxy group, or an amino group.
The 5% compressive deformation elastic modulus in water is 70 MPa or more.
The hydrophobic polymer particles contain a hydrophobic polymer having a structural unit derived from a styrene-based monomer.
A separating material in which the functional group-containing polymer is crosslinked . 前記官能基含有高分子が、多糖類又はその変性体に由来する構造を含む、請求項１に記載の分離材。 The separating material according to claim 1, wherein the functional group-containing polymer contains a structure derived from a polysaccharide or a modified product thereof. 前記官能基含有高分子が、アガロース又はその変性体に由来する構造を含む、請求項１又は２に記載の分離材。 The separating material according to claim 1 or 2 , wherein the functional group-containing polymer contains a structure derived from agarose or a modified product thereof. 前記疎水性高分子粒子の平均粒径が１０〜５００μｍである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の分離材。 The separating material according to any one of claims 1 to 3 , wherein the hydrophobic polymer particles have an average particle size of 10 to 500 μm. 前記疎水性高分子粒子が多孔構造を有する、請求項１〜４のいずれか一項に記載の分離材。 The separating material according to any one of claims 1 to 4 , wherein the hydrophobic polymer particles have a porous structure. 請求項１〜５のいずれか一項に記載の分離材を備えるカラム。 A column comprising the separating material according to any one of claims 1 to 5 .