JP6758022B2 - 血管内皮細胞増殖因子受容体阻害ペプチド - Google Patents
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Description
即ち、本発明は、
〔1〕以下のアミノ酸配列を含むペプチド:
Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Xaa6-Xaa7-Xaa8-Xaa9-Xaa10-Xaa11-Xaa12-Xaa13-Xaa14-Xaa15
〔式中、Xaa2はVal又はその誘導体、Xaa6はAsp又はその誘導体、Xaa7はPro又はその誘導体、Xaa8はTrp又はその誘導体、Xaa10はAsn又はその誘導体、Xaa11はGly又はその誘導体、Xaa12はLeu又はその誘導体を表し、Xaa1、Xaa3〜Xaa5、Xaa9、及びXaa13〜Xaa15は、
それぞれ独立に任意のアミノ酸又はその誘導体を表す。〕;
〔2〕Xaa1は、任意のアミノ酸又はそれらの誘導体であり、
Xaa3は、任意のアミノ酸又はそれらの誘導体であり、
Xaa4は、Gly、His、Ser、及びそれらの誘導体から選択され、
Xaa5は、任意のアミノ酸又はそれらの誘導体であり、
Xaa9は、脂肪族アミノ酸及びそれらの誘導体から選択され、
Xaa13は、任意のアミノ酸又はそれらの誘導体であり、
Xaa14は、疎水性アミノ酸及びそれらの誘導体から選択され、
Xaa15は、任意のアミノ酸又はそれらの誘導体である、上記〔1〕に記載のペプチド;
〔3〕Xaa1は、Val、Thr、及びそれらの誘導体から選択され、
Xaa3は、任意のアミノ酸又はそれらの誘導体であり、
Xaa4は、His又はその誘導体であり、
Xaa5は、任意のアミノ酸又はそれらの誘導体であり、
Xaa9は、Val又はその誘導体であり、
Xaa13は、芳香族性アミノ酸又はその誘導体であり、
Xaa14は、Phe、Leu、Ile及びそれらの誘導体から選択され、
Xaa15は、Pro、Ser、及びそれらの誘導体から選択される、上記〔1〕又は〔2〕に記載のペプチド;
〔4〕Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Xaa6-Xaa7-Xaa8が、VVRHTDPW、VVVHTDPW、VVRHNDPW、VVSHPDPW、VVSHHDPW、VVKHSDPW、VVKHPDPW、IVRHPDPW、IVTHSDPW、VVTHSDPW、TVTHTDPW、TVKHTDPW、TVRHTDPW、TVYHSDPW、及びVVVSTDPWからなる群より選択される、上記〔1〕から〔3〕のいずれか1項に記載のペプチド;
〔5〕Xaa9-Xaa10-Xaa11-Xaa12-Xaa13-Xaa14-Xaa15が、VNGLWLR、VNGLWFP、VNGLWFY、VNGLWLW、VNGLWLQ、ANGLWLA、及びVNGLYLDからなる群より選択される、上記〔1〕から〔4〕のいずれか1項に記載のペプチド;
〔6〕Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Xaa6-Xaa7-Xaa8-Xaa9-Xaa10-Xaa11-Xaa12-Xaa13-Xaa14-Xaa15が、HVTHQDPWVNGLWIA、VVSHHDPWVNGLFIA、VVVHADPWVNGLWIQ、VVKHPDPWVNGLYFH、VVQHRDPWVNGLWFP、SVVHSDPWVNGLYLS、AVKHSDPWVNGLYLP、SVTHIDPWVNGLYLP、KVSHFDPWVNGLWLP、TVTHRDPWVNGLILS、QVSHPDPWVNGLILQ、TVYSDDPWVNGLWLR、SVYGLDPWINGLRFV、TVFHTDPWVNGLWIS、TVRHTDPWVNGLWIS、TVKHPDPWVNGLWIS、TVTHSDPWVNGLFLP、VVTHPDPWVNGLFLP、TVTHIDPWVNGLWLP、TVVHADPWVNGLYLP、TVVHSDPWVNGLWLP、TVIHPDPWVNGLWLP、IVSHPDPWVNGLWLP、SVSHPDPWVNGLWLP、EVSHPDPWVNGLWIP、IVYHADPWVNGLWLS、VVRHSDPWVNGLWID、VVYSSDPWVNGLHLT、TVSHPDPWVNGLWIR、TVYHPDPWVNGLWIR、TVWHPDPWVNGLWIY、EVKHPDPWVNGLWIY、TVVHPDPWVNGLWIS、TVRHPDPWVNGLWLS、TVRHPDPWVNGLWFS、TVSHPDPWVNGLWLQ、TVTHPDPWVNGLWLP、TVTHPDPWVNGLYLP、TVYHPDPWVNGLWLP、TVVHPDPWVNGLWLP、TVFHPDPWVNGLWIP、AVTHSDPWVNGLWLP、TVTHSDPWVNGLWFP、EVSHPDPWVNGLWFP、AVSHPDPWVNGLWFP、及びSVVHHDPWVNGLWFPからなる群より選択される、上記〔1〕に記載のペプチド;
〔7〕上記〔1〕から〔6〕のいずれかに1項に記載のペプチドのアミノ酸配列において、1又は数個のアミノ酸が欠失、付加又は置換されているペプチドであって、血管内皮細胞増殖因子受容体VEGFR2に対する阻害活性を有する、ペプチド;
〔8〕以下のアミノ酸配列を含むペプチド:
Xaa16-Xaa17-Xaa18-Xaa19-Xaa20-Xaa21-Xaa22-Xaa23-Xaa24-Xaa25-Xaa26-Xaa27-Xaa28-Xaa29-Xaa30
〔式中、Xaa24はHis又はその誘導体、Xaa25はPro又はその誘導体を表し、Xaa16〜Xaa23及びXaa26〜Xaa30は任意のアミノ酸を表す。〕;
〔9〕Xaa16は、疎水性アミノ酸及びそれらの誘導体から選択され、
Xaa17は、任意のアミノ酸又はそれらの誘導体であり、
Xaa18は、任意のアミノ酸又はそれらの誘導体であり、
Xaa19は、芳香族性アミノ酸及びそれらの誘導体から選択され、
Xaa20は、任意のアミノ酸又はそれらの誘導体であり、
Xaa21は、疎水性の脂肪族アミノ酸及びそれらの誘導体から選択され、
Xaa22は、陽電荷を持つアミノ酸及びそれらの誘導体から選択され、
Xaa23は、疎水性の脂肪族アミノ酸及びそれらの誘導体から選択され、
Xaa26は、疎水性の脂肪族アミノ酸及びそれらの誘導体から選択され、
Xaa27は、電荷を持たない親水性アミノ酸及びそれらの誘導体から選択され、
Xaa28は、疎水性アミノ酸及びそれらの誘導体から選択され、
Xaa29は、任意のアミノ酸又はそれらの誘導体であり、
Xaa30は、任意のアミノ酸又はそれらの誘導体である、上記〔8〕に記載のペプチド;
〔10〕Xaa16は、Ile、Val、及びそれらの誘導体から選択され、
Xaa17は、Gly、Asn、及びそれらの誘導体から選択され、
Xaa18は、任意のアミノ酸又はそれらの誘導体であり、
Xaa19は、芳香族性アミノ酸及びそれらの誘導体から選択され、
Xaa20は、任意のアミノ酸又はそれらの誘導体であり、
Xaa21は、Ile、Val、及びそれらの誘導体から選択され、
Xaa22は、Lys、Arg、及びそれらの誘導体から選択され、
Xaa23は、Val又はその誘導体であり、
Xaa26は、Ile、Val、及びそれらの誘導体から選択され、
Xaa27は、Ser又はその誘導体であり、
Xaa28は、Leu又はその誘導体であり、
Xaa29は、Glu又はその誘導体であり、
Xaa30は、Pro、芳香族アミノ酸又はその誘導体である、上記〔8〕又は〔9〕に記載のペプチド;
〔11〕Xaa16-Xaa17-Xaa18-Xaa19-Xaa20-Xaa21-Xaa22-Xaa23が、VNGYRVKV、VNGYSIKV、INGYKIKV、IGPYKIRV、IGPYRIRL、YGPYAIKV、IGPYVIKV、IGRFRIKV、LGRWSIKV、IGSFVIRV、IRGFRIRV、VGPYRIRV、VGIYQIRV、IGHYRVKV、及びIGHYRVKVからなる群より選択される、上記〔7〕から〔9〕のいずれか1項に記載のペプチド;
〔12〕Xaa24-Xaa25-Xaa26-Xaa27-Xaa28-Xaa29-Xaa30が、HPISLAP、HPISLSP、HPISLEP、HPISLEY、HPISLEW、HPISLLP、HPVSLEP、HPVSFEP、HPVSLES、HPVSLEY、HPVTLAW、HPVGLWP、及びHPISLERからなる群より選択される、上記〔8〕から〔11〕のいずれか1項に記載のペプチド;
〔13〕Xaa16-Xaa17-Xaa18-Xaa19-Xaa20-Xaa21-Xaa22-Xaa23-Xaa24-Xaa25-Xaa26-Xaa27-Xaa28-Xaa29-Xaa30が、LNGYYVKVHPVSLEP、LNGYRVKVHPISLEP、VGPYAVKVHPISLSP、VGHYRVKVHPISLLP、IGAYKVKVHPISLQP、LGPYRVKVHPISLHF、IGPYLVKVHPVSLHF、IGEYRVKVHPISLAP、IGPYRVKVHPVSLLP、IGIYRVKVHPVSLEP、IGPYAVKVHPVSLEP、IGTWVVKVHPVSLEP、INSYVVKVHPISLEP、ILGYFVKVHPVSLDP、YNGFAVKVHPISLEN、VNGYAVKVHPVSLEP、VNGYIVKVHPVSLEP、IYGFAVKVHPVSLEP、IGIYRVKVHPISLEY、IGIFRVKVHPISLEP、IGIYRVKVHPISLEP、IGRYAVKVHPISLEP、IGPYWVKVHPISLLP、IGPYHVKVHPVSLEP、IGPWFVKVHPVSLEP、IGPYRVKVHPVSLEY、IGPYRVKVHPISLEW、VNGYRVKVHPISLDW、LYGYRVKVHPISLEP、IGIYRVKVHPISLEP、IGPYRVKVHPISLEP、IGPYWVKVHPISLEP、IGPYRVKVHPVSLEP、IGPYRIKVHPVSLEP、VGPYRVKVHPVSLEP、IGPYVVKVHPVSLEP、IGPYRVKVHPVSLEY、IGPYWVKVHPVSLEW、及び、INGYYVKVHPVSLDWからなる群より選択される、上記〔8〕に記載のペプチド;
〔14〕上記〔8〕から〔13〕のいずれかに1項に記載のペプチドのアミノ酸配列において、1又は数個のアミノ酸が欠失、付加又は置換されているペプチドであって、血管内皮細胞増殖因子受容体VEGFR2に対する阻害活性を有する、ペプチド;及び
〔15〕上記〔1〕から〔14〕のいずれか1項に記載のペプチドを含む医薬、に関する。
Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Xaa6-Xaa7-Xaa8-Xaa9-Xaa10-Xaa11-Xaa12-Xaa13-Xaa14-Xaa15…〔I〕
後述する実施例に示されるとおり、本発明者らは、
ClAc-L-Phe-Val-Val-Val-Ser-Thr-Asp-Pro-Trp-Val-Asn-Gly-Leu-Tyr-Ile-Asp-Cys
で表されるペプチド(以下「L1」という。)が、VEGFR2に高特異的に強く結合し、その機能を阻害することを見出した。そして、VEGFR2への結合性の観点から配列を最適化したところ、Xaa2、Xaa6、Xaa7、Xaa8、Xaa10、Xaa11、及びXaa12は、最適化の前後にわたりすべてのペプチドにおいて同一のアミノ酸であることを確認した。したがって、15アミノ酸の中でもこれらの7アミノ酸は、VEGFR2との結合に特に重要であるものと考えられる。
Xaa1:あらゆるアミノ酸及びその誘導体。特にVal又はThr。
Xaa3:あらゆるアミノ酸及びその誘導体。
Xaa4:His、Ser、Gly及びその誘導体。特にHis。
Xaa5:あらゆるアミノ酸及びその誘導体。特にSer、Thr、Proなど。
Xaa9:脂肪族アミノ酸及びその誘導体。Val、Ala、Ileなど。特にVal。
Xaa13:あらゆるアミノ酸及びその誘導体。特に芳香族性アミノ酸。
Xaa14:疎水性アミノ酸及びその誘導体。Leu、Phe、Ileなど。
Xaa15:あらゆるアミノ酸及びその誘導体。特にPro又はSer。
HVTHQDPWVNGLWIA、VVSHHDPWVNGLFIA、VVVHADPWVNGLWIQ、VVKHPDPWVNGLYFH、VVQHRDPWVNGLWFP、SVVHSDPWVNGLYLS、AVKHSDPWVNGLYLP、SVTHIDPWVNGLYLP、KVSHFDPWVNGLWLP、TVTHRDPWVNGLILS、QVSHPDPWVNGLILQ、TVYSDDPWVNGLWLR、SVYGLDPWINGLRFV、TVFHTDPWVNGLWIS、TVRHTDPWVNGLWIS、TVKHPDPWVNGLWIS、TVTHSDPWVNGLFLP、VVTHPDPWVNGLFLP、TVTHIDPWVNGLWLP、TVVHADPWVNGLYLP、TVVHSDPWVNGLWLP、TVIHPDPWVNGLWLP、IVSHPDPWVNGLWLP、SVSHPDPWVNGLWLP、EVSHPDPWVNGLWIP、IVYHADPWVNGLWLS、VVRHSDPWVNGLWID、VVYSSDPWVNGLHLT、TVSHPDPWVNGLWIR、TVYHPDPWVNGLWIR、TVWHPDPWVNGLWIY、EVKHPDPWVNGLWIY、TVVHPDPWVNGLWIS、TVRHPDPWVNGLWLS、TVRHPDPWVNGLWFS、TVSHPDPWVNGLWLQ、TVTHPDPWVNGLWLP、TVTHPDPWVNGLYLP、TVYHPDPWVNGLWLP、TVVHPDPWVNGLWLP、TVFHPDPWVNGLWIP、AVTHSDPWVNGLWLP、TVTHSDPWVNGLWFP、EVSHPDPWVNGLWFP、AVSHPDPWVNGLWFP、及び、SVVHHDPWVNGLWFP。
Xaa16-Xaa17-Xaa18-Xaa19-Xaa20- Xaa21-Xaa22-Xaa23-Xaa24-Xaa25-Xaa26-Xaa27-Xaa28-Xaa29-Xaa30…〔II〕
後述する実施例に示されるとおり、本発明者らは、
MCAB-L-Phe-Ile-Gly-His-Tyr-Arg-Val-Lys-Val-His-Pro-Ile-Ser-Leu-Glu-Arg-Cysで表されるペプチド(以下「BL1」という。)が、VEGFR2に高特異的に強く結合し、その機能を阻害することを見出した。そして、VEGFR2への結合性の観点から配列を最適化したところ、Xaa24及びXaa25は、最適化の前後にわたりすべてのペプチドにおいて同一のアミノ酸であることを確認した。したがって、15アミノ酸の中でもこれらの2アミノ酸は、VEGFR2との結合に特に重要であるものと考えられる。
Xaa16:疎水性アミノ酸、又はそれらの誘導体。特にVal、Ile。
Xaa17:任意のアミノ酸又はその誘導体。特にGly、Asn。
Xaa18:任意のアミノ酸又はその誘導体。Pro、Glyなど。
Xaa19:芳香族性アミノ酸又はその誘導体。
Xaa20:任意のアミノ酸又はその誘導体。Argなど。
Xaa21:疎水性の脂肪族アミノ酸。特にIle、Val。
Xaa22:陽電荷を持つアミノ酸。Lys、Argなど。
Xaa23:疎水性の脂肪族アミノ酸。特にVal。
Xaa26:疎水性の脂肪族アミノ酸。特にVal、Ile。
Xaa27:電荷を持たない親水性アミノ酸。特にSer。
Xaa28:疎水性アミノ酸。特にLeu。
Xaa29:任意のアミノ酸又はその誘導体。特にGlu。
Xaa30:任意のアミノ酸又はその誘導体。特にPro、芳香族アミノ酸。
LNGYYVKVHPVSLEP、LNGYRVKVHPISLEP、VGPYAVKVHPISLSP、VGHYRVKVHPISLLP、IGAYKVKVHPISLQP、LGPYRVKVHPISLHF、IGPYLVKVHPVSLHF、IGEYRVKVHPISLAP、IGPYRVKVHPVSLLP、IGIYRVKVHPVSLEP、IGPYAVKVHPVSLEP、IGTWVVKVHPVSLEP、INSYVVKVHPISLEP、ILGYFVKVHPVSLDP、YNGFAVKVHPISLEN、VNGYAVKVHPVSLEP、VNGYIVKVHPVSLEP、IYGFAVKVHPVSLEP、IGIYRVKVHPISLEY、IGIFRVKVHPISLEP、IGIYRVKVHPISLEP、IGRYAVKVHPISLEP、IGPYWVKVHPISLLP、IGPYHVKVHPVSLEP、IGPWFVKVHPVSLEP、IGPYRVKVHPVSLEY、IGPYRVKVHPISLEW、VNGYRVKVHPISLDW、LYGYRVKVHPISLEP、IGIYRVKVHPISLEP、IGPYRVKVHPISLEP、IGPYWVKVHPISLEP、IGPYRVKVHPVSLEP、IGPYRIKVHPVSLEP、VGPYRVKVHPVSLEP、IGPYVVKVHPVSLEP、IGPYRVKVHPVSLEY、IGPYWVKVHPVSLEW、及び、INGYYVKVHPVSLDW。
本明細書において、「1又は数個のアミノ酸が欠失、付加、若しくは置換されているペプチド」という場合、欠失等されるアミノ酸の個数は、そのペプチドが、VEGFR2阻害活性を有する限り特に限定されないが、例えば、1個、2個、3個、4個、5個等とすることができる。欠失、付加、置換される場所は、ペプチドの末端であっても、中間であってもよく、1ヶ所であっても2ヶ所以上であってもよい。
本明細書において、VEGFR2阻害活性を有するという場合、in vitro又はin vivoにおいて、上記VEGFR2のリン酸化を抑制すること、HUVEC細胞の増殖を抑制又は遅延すること、血管新生を抑制又は遅延等することなどを意味し、これらの効果のうちいずれか一つでも示す場合には、VEGFR2阻害活性を有するという。
次に、第一アミノ酸のα−アミノ基の保護基を脱離させるとともに、主鎖のカルボキシ基以外のすべての官能基が保護された第二のアミノ酸を加え、当該カルボキシ基を活性化させて、第一及び第二のアミノ酸を結合させる。さらに、第二のアミノ酸のα-アミノ基を脱保護し、主鎖のカルボキシ基以外のすべての官能基が保護された第三のアミノ酸を加え、当該カルボキシ基を活性化させて、第二及び第三のアミノ酸を結合させる。これを繰り返して、目的とする長さのペプチドが合成されたら、すべての官能基を脱保護する。
α-アミノ基の保護基としては、ベンジルオキシカルボニル(Cbz又はZ)基、tert−ブトキシカルボニル(Boc)基、フルオレニルメトキシカルボニル(Fmoc)基、ベンジル基、アリル基、アリルオキシカルボニル(Alloc)基等が挙げられる。Cbz基はフッ化水素酸、水素化等によって脱保護でき、Boc基はトリフルオロ酢酸(TFA)により脱保護でき、Fmoc基はピペリジンによる処理で脱保護できる。
α-カルボキシ基の保護は、メチルエステル、エチルエステル、ベンジルエステル、tert−ブチルエステル、シクロヘキシルエステル等を用いることができる。
アミノ酸のその他の官能基として、セリンやトレオニンのヒドロキシ基はベンジル基やtert−ブチル基で保護することができ、チロシンのヒドロキシ基は2−ブロモベンジルオキシカルボニル希やtert−ブチル基で保護する。リジン側鎖のアミノ基、グルタミン酸やアスパラギン酸のカルボキシ基は、α−アミノ基、α−カルボキシ基と同様に保護することができる。
レジンからのペプチド鎖の切断は、TFA、フッ化水素(HF)等の酸で処理することによって行うことができる。
発現ベクターには、DNA複製開始点(ori)、選択マーカー(抗生物質抵抗性、栄養要求性等)、エンハンサー、スプライシングシグナル、ポリA付加シグナル、タグ(FLAG、HA、GST、GFPなど)をコードする核酸等を組み込むこともできる。
形質転換体を常法に従って培養することにより、目的とするペプチドが発現する。培地は、宿主の種類等に応じて適宜選択される。
粗抽出液又は培養上清からの精製も公知の方法又はそれに準ずる方法(例えば、塩析、透析法、限外ろ過法、ゲルろ過法、SDS−PAGE法、イオン交換クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、逆相高速液体クロマトグラフィー等)で行うことができる。
得られたペプチドは、公知の方法又はそれに準ずる方法で遊離体から塩に、又は塩から遊離体に変換してもよい。
主として細胞抽出液を用いるものとしては、例えば、大腸菌抽出液、コムギ胚芽抽出液、ウサギ赤血球抽出液、昆虫細胞抽出液を用いるものが挙げられる。
再構成型無細胞翻訳系は、それぞれ精製したリボソームタンパク質、アミノアシルtRNA合成酵素(ARS)、リボソームRNA、アミノ酸、rRNA、GTP、ATP、翻訳開始因子(IF)、伸長因子(EF)、終結因子(RF)、リボソーム再生因子、その他の翻訳に必要な因子等で構築することができる。
これらを含む系には、透析を用いて連続的にエネルギーを供給してもよい。DNAからの転写を併せて行うためにRNAポリメラーゼを含む系としてもよい。市販されている無細胞翻訳系として、大腸菌由来の系としてはロシュ・ダイアグノスティックス社のRTS-100(登録商標)、PGI社のPURESYSTEM(登録商標)等、小麦胚芽抽出液を用いた系としてはゾイジーン社やセルフリーサイエンス社のもの等を使用できる。
無細胞翻訳系によれば、発現産物を精製することなく純度の高い形で得ることができる。
かかるリボザイムとしては、フレキシザイム(flexizyme)(H. Murakami, H. Saito, and H. Suga, (2003), Chemistry & Biology, Vol. 10, 655-662; H. Murakami, D. Kourouklis, and H. Suga, (2003), Chemistry & Biology, Vol. 10, 1077-1084; H. Murakami, A. Ohta, H. Ashigai, H. Suga (2006) Nature Methods 3, 357-359 "The flexizyme system: a highly flexible tRNA aminoacylation tool for the synthesis of nonnatural peptides";N. Niwa, Y. Yamagishi, H. Murakami, H. Suga (2009) Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 19, 3892-3894 "A flexizyme that selectively charges amino acids activated by a water-friendly leaving group";及びWO2007/066627等)が挙げられる。フレキシザイムは、原型のフレキシザイム(Fx)、及び、これから改変されたジニトロベンジルフレキシザイム(dFx)、エンハンスドフレキシザイム(eFx)、アミノフレキシザイム(aFx)等の呼称でも知られる。
特殊アミノ酸の例を下表に示すが、これらに限定されない。なお、表中DBEとCMEは、特殊アミノ酸をフレキシザイムでtRNAに結合させるときのエステルの種類であり、DBEは、3,5-dinitrobenzyl esterを意味し、CMEは、cyanomethyl esterを意味する。
環状化は、ジスルフィド結合、ペプチド結合、アルキル結合、アルケニル結合、エステル結合、チオエステル結合、エーテル結合、チオエーテル結合、ホスホネートエーテル結合、アゾ結合、C-S-C結合、C-N-C結合、C=N-C結合、アミド結合、ラクタム架橋、カルバモイル結合、尿素結合、チオ尿素結合、アミン結合、チオアミド結合などによることができるが、これらに限定されない。
ペプチドを環状化することにより、ペプチドの構造を安定化させ、標的への親和性を高めることができる場合がある。
(A−2)の官能基を有するアミノ酸としては、例えばcysteine、homocysteine、mercaptonorvaline、 mercaptonorleucine、2-amino-7-mercaptoheptanoic acid、2-amino-8-mercaptooctanoic acid、およびこれらのアミノ酸のSH基をいったん保護しておいた後に保護基を脱保護したアミノ酸、およびこれらに対応するD-アミノ酸誘導体などが挙げられる。
環状化方法は、例えば、Kawakami, T. et al., Nature Chemical Biology 5, 888-890 (2009);Yamagishi, Y. et al., ChemBioChem 10, 1469-1472 (2009);Sako, Y. et al., Journal of American Chemical Society 130, 7932-7934 (2008);Goto, Y. et al., ACS Chemical Biology 3, 120-129 (2008);Kawakami T. et al, Chemistry & Biology 15, 32-42 (2008)、WO2008/117833に記載された方法に従って行うことができる。
(B−2)の官能基を有するアミノ酸としては、例えば、azidoalanine、2-amino-4-azidobutanoic acid、azidoptonorvaline、 azidonorleucine、2-amino-7-azidoheptanoic acid、2-amino-8-azidooctanoic acidを用いることができる。また、azidoacetyl化や3-azidopentanoyl化したアミノ酸を用いることもできる。azidoacetyl化アミノ酸としては、N-azidoacetyl-L-alanine、N-azidoacetyl-L-phenylalanine、N-azidoacetyl-L-tyrosine、N-azidoacetyl-L-tryptophan、N-3-(4-pentynoylamido)benzoyl-L-phenylalanine、N-3-(4-pentynoylamido)benzoyl-L-tyrosine、N-3-(4-pentynoylamido)benzoyl-L-tryptophane、β-N-azidoacetyl-L-diaminopropanoic acid、γ-N-azidoacetyl-L-diaminobutyric acid、σ-N-azidoacetyl-L-ornithine、ε-N-azidoacetyl-L-lysine、およびこれらに対応するD-アミノ酸誘導体などが挙げられる。
環状化方法は、例えば、Sako, Y. et al., Journal of American Chemical Society 130, 7932-7934 (2008)、WO2008/117833に記載された方法に従って行うことができる。
(C−2)の官能基を有するアミノ酸としては、5-hydroxytryptophan (WOH)が挙げられる。
環状化方法は、例えば、Yamagishi, Y. et al., ChemBioChem 10, 1469-1472 (2009)、WO2008/117833に記載された方法に従って行うことができる。
(D−2)の官能基を有するアミノ酸としては、例えばcysteine、homocysteine、mercaptonorvaline、 mercaptonorleucine、2-amino-7-mercaptoheptanoic acid、2-amino-8-mercaptooctanoic acid、およびこれらのアミノ酸のSH基をいったん保護しておいた後に保護基を脱保護したアミノ酸、およびこれらに対応するD-アミノ酸誘導体などが挙げられる。
環状化方法は、例えば、WO2012/074129に記載された方法に従って行うことができる。
(E−2)のアミノ酸としては、例えばcysteine、homocysteine、mercaptonorvaline、 mercaptonorleucine、2-amino-7-mercaptoheptanoic acid、2-amino-8-mercaptooctanoic acid、およびこれらのアミノ酸のSH基をいったん保護しておいた後に保護基を脱保護したアミノ酸、およびこれらに対応するD-アミノ酸誘導体などが挙げられる。
上記医薬組成物の投与形態は特に限定されず、経口的投与でも非経口的投与でもよい。非経口投与としては、例えば、筋肉内注射、静脈内注射、皮下注射等の注射投与、経皮投与、経粘膜投与(経鼻、経口腔、経眼、経肺、経膣、経直腸)投与等が上げられる。
医薬組成物中のペプチドは、代謝及び***されやすい性質に鑑みて、各種の修飾を行うことができる。例えば、ポリペプチドにポリエチレングリコール(PEG)や糖鎖を付加して血中滞留時間を長くし、抗原性を低下させることができる。また、ポリ乳酸・グリコール(PLGA)などの生体内分解性の高分子化合、多孔性ヒドロキシアパタイト、リポソーム、表面修飾リポソーム、不飽和脂肪酸で調製したエマルジョン、ナノパーティクル、ナノスフェア等を徐放化基剤として用い、これにポリペプチドを内包させてもよい。経皮投与する場合、弱い電流を皮膚表面に流して角質層を透過させることもできる(イオントフォレシス法)。
製剤化は、例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、溶解剤、溶解補助剤、着色剤、矯味矯臭剤、安定化剤、乳化剤、吸収促進剤、界面活性剤、pH調整剤、防腐剤、抗酸化剤などを適宜使用し、常法により行うことができる。
製剤化に用いられる成分の例としては、精製水、食塩水、リン酸緩衝液、デキストロース、グリセロール、エタノール等薬学的に許容される有機溶剤、動植物油、乳糖、マンニトール、ブドウ糖、ソルビトール、結晶セルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、デンプン、コーンスターチ、無水ケイ酸、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、コラーゲン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシビニルポリマー、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリル酸ナトリウム、アルギン酸ナトリウム、水溶性デキストラン、カルボキシメチルスターチナトリウム、ぺクチン、メチルセルロース、エチルセルロース、キサンタンガム、アラビアゴム、トラガント、カゼイン、寒天、ポリエチレングリコール、ジグリセリン、グリセリン、プロピレングリコール、ワセリン、パラフィン、ミリスチン酸オクチルドデシル、ミリスチン酸イソプロピル、高級アルコール、ステアリルアルコール、ステアリン酸、ヒト血清アルブミン、等が挙げられるがこれらに限定されない。
ペプチドの経粘膜吸収されにくい難吸収性薬物の吸収を改善する吸収促進剤として、ポリオキシエチレンラウリルエーテル類、ラウリル硫酸ナトリウム、サポニン等の界面活性剤;グリココール酸、デオキシコール酸、タウロコール酸等の胆汁酸塩;EDTA、サリチル酸類等のキレート剤;カプロン酸、カプリン酸、ラウリン酸、オレイン酸、リノール酸、混合ミセル等の脂肪酸類;エナミン誘導体、N-アシルコラーゲンペプチド、N-アシルアミノ酸、シクロデキストリン類、キトサン類、一酸化窒素供与体等を用いてもよい。
注射剤は、注射用蒸留水、生理食塩水、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油、アルコール類等を含むことができる。さらに、湿潤剤、乳化剤、分散剤、安定化剤、溶解剤、溶解補助剤、防腐剤等を加えることができる。
実施例に示されるとおり本発明のペプチドはマウスVEGFR2にも結合し、動物用医薬又は試験薬としても有用である。
VEGFR2に結合する環状ペプチドを選択するために、図1Aに示されるTRAP display法によるセレクションを設計した。以下、TRAP display法を簡単に説明するが、T. Ishizawa, T. Kawakami, P. C. Reid, H. Murakami (2013) J. Am. Chem. Soc. 135, 5433-5440に従って行ってもよい。まず、開始アミノ酸とC末端のCys残基との間にランダムな8〜15アミノ酸を挟むペプチドライブラリーをコードする(NNK)8-15の配列を含むDNAライブラリーを作製した。
このDNAライブラリーの転写によって得られたmRNAライブラリーをペプチドライブラリーに翻訳した。翻訳されたぺプチドライブラリーは、それぞれをコードするmRNAにピューロマイシンリンカーを介して提示(display)される。
翻訳する際、開始アミノ酸として、異なる方法でクロロアセトアミド修飾した2種類のフェニルアラニンのアナログ(ClAc-L-Phe及びMCAB-L-Phe。図1B参照)を用い、2種類のペプチドライブラリーを作製した。それぞれのライブラリーは、Metを除いた19種類のタンパク質性アミノ酸と、上記フェニルアラニンのアナログのいずれかを持つ開始tRNA(H. Murakami, A. Ohta, H. Ashigai, H. Suga (2006) Nature Methods 3, 357-359によりFlexizymeを用いて調製)を用いて調製した。これにより、翻訳されたライブラリーにおいて、クロロアセチル基とCys残基の反応により各ペプチドが環状化される。
逆転写反応を行った後に、磁気ビーズに固定したVEGFR2の細胞外ドメインに結合するペプチドを選択し、得られたDNA-環状ペプチド複合体のDNAをPCRで増幅した。このDNAを用いて、再びペプチドライブラリーを調製して同様の操作を行った。この一連の操作を1ラウンドとし、8ラウンドの操作を行った。セレクションの各ラウンドで回収されたcDNA量は、リアルタイムPCRで決定した。また、6ラウンド以降は、選択圧を高めて選択操作を行った。
それぞれのライブラリーから、7ラウンドの選択操作後に、VEGFR2に結合するペプチドが得られた(図2)。
ClAc-L-Phe-Val-Val-Val-Ser-Thr-Asp-Pro-Trp-Val-Asn-Gly-Leu-Tyr-Ile-Asp-Cys(配列番号:136)
MCAB-L-Phe-Ile-Gly-His-Tyr-Arg-Val-Lys-Val-His-Pro-Ile-Ser-Leu-Glu-Arg-Cys(配列番号:137)
続いて、L1及びBL1のC末端をアミド化グリシンとして、標準的なFmoc基を用いた固相合成により合成した。
(1) ClAc-Phe-Val-Val-Val-Ser-Thr-Asp-Pro-Trp-Val-Asn-Gly-Leu-Tyr-Ile-Asp-Cys-Gly(配列番号:138)の合成
市販のRink Amide-ChemMatrix resin (0.60 mmol/g) 0.05 mmol分をペプチド合成機Discoveryの反応槽に入れ、Fmoc/HBTU/HOBt法を用い、固相合成を行なった。Fmocアミノ酸の側鎖保護基はSer、Thr、Asp、TyrにはBut基、Trp、LysにはBoc基、Asn、CysにはTrt基を用いた。得られたPhe-Val-Val-Val-Ser-Thr-Asp-Pro-Trp-Val-Asn-Gly-Leu-Tyr-Ile-Asp-Cys-Gly-resin (0.025 mmol)を2-chloroacetic acid 9.5 mg (0.1 mmol)、HBTU 37.9 mg (0.1 mmol)、HOBt 13.5 mg (0.1 mmol)、DIEA 17.0 μl (0.2 mmol)で処理することでClAc基を導入した。
この樹脂の全て(0.025 mmol)をTFA、水、triisopropylsilane、3,6-dioxa-1,8-octanedithiol (92.5:2.5:2.5:2.5)の混合液1 ml中で室温、1時間攪拌した後、反応溶液にエーテルを加え、白色粉末を析出させ遠心分離後、上清を除き、3分間真空乾燥させた。残渣をDMSO 2.5 mlに溶解後、0.5 M TEAを0.8 ml加え、30分間反応させ環状化させた。得られた粗ペプチドをHPLCにより、0.1% トリフルオロ酢酸を含むアセトニトリル/水の濃度勾配で精製した。
市販のRink Amide-ChemMatrix resin (0.60 mmol/g) 0.05 mmol分をペプチド合成機Discoveryの反応槽に入れ、Fmoc/HBTU/HOBt法を用い、固相合成を行なった。Fmocアミノ酸の側鎖保護基はArgにはPbf基、Ser、Glu、TyrにはBut基、His、CysにはTrt基を用いた。得られたPhe-Ile-Gly-His-Tyr-Arg-Val-His-Pro-Ile-Ser-Leu-Glu-Arg-Cys-Gly-resin (0.025 mmol)を3-(2-chloroacetamido)benzoic acid 21.4 mg (0.1 mmol)、HBTU 37.9 mg (0.1 mmol)、HOBt 13.5 mg (0.1 mmol)、DIEA 17.0 μl (0.2 mmol)で処理することでMCAB基を導入した。
この樹脂の全て(0.025 mmol)をTFA、水、triisopropylsilane、3,6-dioxa-1,8-octanedithiol (92.5:2.5:2.5:2.5)の混合液1 ml中で室温、3時間攪拌した後、反応溶液にエーテルを加え、白色粉末を析出させ遠心分離後、上清を除き、3分間真空乾燥させた。残渣をDMSO 2.5 mlに溶解後、0.5 M TEAを0.8 ml加え、30分間反応させ環状化させた。得られた粗ペプチドをHPLCにより、0.1% トリフルオロ酢酸を含むアセトニトリル/水の濃度勾配で精製した。
合成された環状ペプチドL1及びBL1を用いて、ヒトVEGFR2又はマウスVEGFR2との結合の解離定数をBLI法(ForteBio社)を用いて求めた。VEGFR2とFcとの融合タンパク質をAnti-human IgG Capture Biosensorsに固定し、様々な濃度の環状ペプチドL1又はBL1について解析した。温度は30℃とした。
次に、合成されたペプチドのVEGFR2阻害活性を確認した。初めに、VEGF依存的なVEGFR2自己リン酸化へのペプチドの影響を、VEGFR2を発現するHUVECを用いて調べた。
VEGFR2のリン酸化レベルは、抗total VEGFR2抗体と抗リン酸化VEGFR2抗体を用いて、HUVECのライセートのドットブロッティングにより測定した。
まず、VEGFで刺激した又は刺激していないHUVECのライセートを7.5%SDS-PAGEで分離し、それぞれの抗体で染色した(結果を図4に示す)。これらの抗体によりVEGFの刺激によりリン酸化されたVEGFR2とリン酸化されていないVEGFR2を識別できることが確認できた。
BL1及びL1のいずれも、VEGF刺激によるVEGFR2の自己リン酸化を用量依存的に阻害することが確認された。BL1はIC50=20nM、L1はIC50=50nMであった。
図中rBL1は、BL1の逆配列のペプチドを示す。rBL1にはリン酸化阻害活性は見られなかったことから、ペプチドのアミノ酸の構成成分ではなく配列が重要であることが示唆された。
結果を図6に示す。エラーバーは、±1 s.d.を示す。いずれのペプチドも、HUVECの増殖を阻害することが確認された。L1はIC50=60 nM、BL1はIC50= 60nMであった。一方で、BL1の逆配列のペプチドであるrBL1はHUVECの増殖を抑制しなかった。
37℃で培養し、3日後、6日後、8日後、に同濃度のVEGFとペプチドを補給し、11日後にHUVEC細胞を固定した後、抗CD31抗体で染色して可視化し、同キットの画像解析サービスを利用して解析した。コントロールとして、ペプチドの代わりに血管新生阻害剤Suraminを50μM培地に加えた。
結果を図7に示す。L1投与群では、10μMでSuraminよりも強い血管新生阻害効果が見られた。
L1、BL1が、特異性の高いVEGFR2阻害活性を示すことが確認できたので、次に、L1及びBL1の配列を最適化した。
(L1の最適化)
L1の最適化は、環状化に用いる両端のアミノ酸を除いた15アミノ酸について、C末端側7アミノ酸と、N末端側8アミノ酸を、それぞれランダム化したペプチドライブラリーをコードするDNAライブラリーを作製し、上記〔1〕と同様の方法で環状化ペプチドライブラリーを作製して行った(以下、各ペプチドの環状化に用いられる両端のアミノ酸を除く15アミノ酸残基を、N末端側からXaa1、Xaa2・・・Xaa15とよぶ)。選択されたペプチド配列を、それぞれ図8及び9に示す。
さらに、この結果をもとに、L1のXaa1、Xaa3〜Xaa5、Xaa9、Xaa13〜Xaa15をランダム化したペプチドライブラリーをコードするDNAライブラリーを作製し、上記〔1〕と同様の方法で環状化ペプチドライブラリーを作製して2回目の最適化を行った。2回目の最適化で最終的に選択されたペプチド配列を図10に示す。
図中太線で囲んだ部分は、完全にもとの配列(L1の配列)に収束したものを意味する。この部位の配列は、VEGFR2との結合に必須のものである可能性が高い。点線で囲んだアミノ酸は、完全にもとの配列でないものに収束したものを意味する。この部位のアミノ酸は、もとの配列よりもVEGFR2との結合に適したものである可能性が高い。また、一点鎖線で囲んだアミノ酸は、完全にもとの配列ではないものに置き換わったものを意味する。この部位のアミノ酸は、VEGFR2との結合において重要でないものである可能性が高い。
なお、2回目の最適化の過程では、以下のペプチドも選択された。
HVTHQDPWVNGLWIA、VVSHHDPWVNGLFIA、VVVHADPWVNGLWIQ、VVKHPDPWVNGLYFH、VVQHRDPWVNGLWFP、SVVHSDPWVNGLYLS、AVKHSDPWVNGLYLP、SVTHIDPWVNGLYLP、KVSHFDPWVNGLWLP、TVTHRDPWVNGLILS、QVSHPDPWVNGLILQ、TVYSDDPWVNGLWLR、SVYGLDPWINGLRFV、TVFHTDPWVNGLWIS、TVRHTDPWVNGLWIS、TVKHPDPWVNGLWIS、TVTHSDPWVNGLFLP、VVTHPDPWVNGLFLP、TVTHIDPWVNGLWLP、TVVHADPWVNGLYLP、TVVHSDPWVNGLWLP、TVIHPDPWVNGLWLP、IVSHPDPWVNGLWLP、SVSHPDPWVNGLWLP、EVSHPDPWVNGLWIP、IVYHADPWVNGLWLS、VVRHSDPWVNGLWID、及びVVYSSDPWVNGLHLT。
各残基のアミノ酸の傾向を以下に説明する。
Xaa1は、様々なアミノ酸が許容されるが、特にVal又はThrなどが望ましいことが示唆された。
Xaa2は、元の配列と同じValに完全に収束し、ValであることがVEGFR2との結合に必須であることが示唆された。
Xaa3は、特に傾向が見られず、VEGFR2との結合においては重要性が高くないことが示唆された。
Xaa4は、もとの配列ではSerであったのに対し、最適化後の配列ではHisが多かった。したがって、Hisであることが望ましい可能性が高いが、GlyやSerなど他のアミノ酸であっても結合する。
Xaa5は、特に傾向が見られず、VEGFR2との結合においては重要性が高くないことが示唆された。
Xaa6〜Xaa8は、もとの配列と同じAsp-Pro-Trpに完全に収束した。これらの配列はVEGFR2との結合に必須である可能性が高い。
Xaa9は、疎水性の脂肪族アミノ酸であることが望ましいことが示唆された。特にValが望ましいことが示唆された。
Xaa10〜Xaa12は、もとの配列と同じAsn-Gly-Leuに完全に収束した。これらの配列はVEGFR2との結合に必須である可能性が高い。
Xaa13は、もとの配列ではTyrであったのに対し、最適化後の配列ではTrpが多かった。したがって、Trpであることが望ましい可能性が高いが、Ile、Phe、Tyr、Hisであっても結合する。
Xaa14は、Ile、Leu、Pheであり、疎水性アミノ酸であることが望ましいことが示唆された。
Xaa15は、もとの配列ではAspであったが、最適化後の配列では、様々なアミノ酸が許容されていた。特にPro、Serが望ましいことが示唆された。
Xaa1〜Xaa15が上記の特徴を有するペプチドは、L1と同様にVEGFR2阻害活性を有する可能性が高い。
BL1の最適化も、L1と同様に、環状化に用いる両端のアミノ酸を除いた15アミノ酸について、C末端側7アミノ酸と、N末端側8アミノ酸を、それぞれランダム化したペプチドライブラリーをコードするDNAライブラリーを作製し、上記〔1〕と同様の方法で環状化ペプチドライブラリーを作製して行った(以下、各ペプチドの環状化に用いられる両端のアミノ酸を除く15アミノ酸残基を、N末端側からXaa16、Xaa17・・・Xaa30と呼ぶ。)。選択されたペプチド配列を、それぞれ図11及び図12に示す。
さらに、この結果をもとに、BL1のXaa16〜Xaa20、Xaa26、Xaa29〜Xaa30をランダム化したペプチドライブラリーをコードするDNAライブラリーを作製し、上記〔1〕と同様の方法で環状化ペプチドライブラリーを作製して2回目の最適化を行った。2回目の最適化で最終的に選択されたペプチド配列を図13に示す。
図中太線で囲んだ部分は、完全にもとの配列(BL1の配列)に収束したものを意味する。この部位の配列は、VEGFR2との結合に必須のものである可能性が高い。
なお、2回目の最適化の過程では、以下のペプチドも選択された。
LNGYYVKVHPVSLEP、LNGYRVKVHPISLEP、VGPYAVKVHPISLSP、VGHYRVKVHPISLLP、IGAYKVKVHPISLQP、LGPYRVKVHPISLHF、IGPYLVKVHPVSLHF、IGEYRVKVHPISLAP、IGPYRVKVHPVSLLP、IGIYRVKVHPVSLEP、IGPYAVKVHPVSLEP、IGTWVVKVHPVSLEP、INSYVVKVHPISLEP、ILGYFVKVHPVSLDP、YNGFAVKVHPISLEN、VNGYAVKVHPVSLEP、VNGYIVKVHPVSLEP、IYGFAVKVHPVSLEP、IGIYRVKVHPISLEY、IGIFRVKVHPISLEP、IGIYRVKVHPISLEP、IGRYAVKVHPISLEP、IGPYWVKVHPISLLP、IGPYHVKVHPVSLEP、IGPWFVKVHPVSLEP、IGPYRVKVHPVSLEY、IGPYRVKVHPISLEW、及びVNGYRVKVHPISLDW。
各残基のアミノ酸の傾向を以下に説明する。
Xaa16は、疎水性アミノ酸であることが望ましいことが示唆された。Ile、Valが望ましいことが示唆された。
Xaa17は、様々なアミノ酸が許容されるが、特にGly、Asnが多かった。
Xaa18は、特に傾向が見られず、VEGFR2との結合においては重要性が高くないことが示唆された。
Xaa19は、Tyr、Phe、Trpであり、芳香族性アミノ酸であることが望ましいことが示唆された。
Xaa20は、特に傾向が見られず、VEGFR2との結合においては重要性が高くないことが示唆された。
Xaa21は、Ile又はValであり、疎水性の脂肪族アミノ酸であることが望ましいことが示唆された。
Xaa22は、Lys又はArgであり、陽電荷を持つアミノ酸であることが望ましいことが示唆された。
Xaa23は、疎水性の脂肪族アミノ酸であることが望ましいことが示唆された。特にValが多かった。
Xaa24及びXaa25は、との配列と同じHis-Proに完全に収束した。これらの配列はVEGFR2との結合に必須である可能性が高い。
Xaa26は、Val又はIleであり、疎水性の脂肪族アミノ酸であることが望ましいことが示唆された。
Xaa27は、Serが多く、Thr、Glyの場合もあり、電荷を持たない親水性アミノ酸であることが望ましいことが示唆された。
Xaa28は、Leuが多く、Pheの場合もあり、疎水性アミノ酸であることが望ましいことが示唆された。
Xaa29は、様々なアミノ酸が許容されるが、特にGluが多かった。
Xaa30は、様々なアミノ酸が許容されるが、特にProと芳香族アミノ酸が多かった。
Xaa16〜Xaa30が上記の特徴を有するペプチドは、BL1と同様にVEGFR2阻害活性を有する可能性が高い。
Claims (8)
- 以下のアミノ酸配列を含む環状ペプチドであって、Xaa1の一つ上流のアミノ酸と、Xaa15の一つ下流のアミノ酸が互いに結合したペプチド:
Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Xaa6-Xaa7-Xaa8-Xaa9-Xaa10-Xaa11-Xaa12-Xaa13-Xaa14-Xaa15
〔式中、Xaa2はVal又はその誘導体、Xaa6はAsp又はその誘導体、Xaa7はPro又はその誘導体、Xaa8はTrp又はその誘導体、Xaa10はAsn又はその誘導体、Xaa11はGly又はその誘導体、Xaa12はLeu又はその誘導体を表し、Xaa4は、Gly、His、Ser、及びそれらの誘導体から選択され、Xaa9は、脂肪族アミノ酸及びそれらの誘導体から選択され、Xaa13は、芳香族性アミノ酸及びそれらの誘導体から選択され、Xaa1、Xaa3、Xaa5、Xaa14及びXaa15は、それぞれ独立に任意のアミノ酸又はその誘導体を表す。〕。 - 以下のアミノ酸配列を含み、血管内皮細胞増殖因子受容体VEGFR2に結合してその機能を阻害するペプチド:
Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Xaa6-Xaa7-Xaa8-Xaa9-Xaa10-Xaa11-Xaa12-Xaa13-Xaa14-Xaa15
〔式中、Xaa2はVal又はその誘導体、Xaa6はAsp又はその誘導体、Xaa7はPro又はその誘導体、Xaa8はTrp又はその誘導体、Xaa10はAsn又はその誘導体、Xaa11はGly又はその誘導体、Xaa12はLeu又はその誘導体を表し、Xaa4は、Gly、His、Ser、及びそれらの誘導体から選択され、Xaa9は、脂肪族アミノ酸及びそれらの誘導体から選択され、Xaa13は、芳香族性アミノ酸及びそれらの誘導体から選択され、Xaa1、Xaa3、Xaa5、Xaa14及びXaa15は、それぞれ独立に任意のアミノ酸又はその誘導体を表す。〕。 - Xaa4は、His、Ser、及びそれらの誘導体から選択され、
Xaa9は、Val、Ala、及びそれらの誘導体から選択され、
Xaa13は、Trp、Tyr、及びそれらの誘導体から選択され、
Xaa14は、疎水性アミノ酸及びそれらの誘導体から選択される、請求項1又は2に記載のペプチド。 - Xaa1は、Val、Thr、及びそれらの誘導体から選択され、
Xaa4は、His又はその誘導体であり、
Xaa9は、Val又はその誘導体であり、
Xaa14は、Phe、Leu、Ile、及びそれらの誘導体から選択され、
Xaa15は、Pro、Ser、及びそれらの誘導体から選択される、請求項1から3のいずれか1項に記載のペプチド。 - Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Xaa6-Xaa7-Xaa8が、VVRHTDPW(配列番号:1)、VVVHTDPW(配列番号:2)、VVRHNDPW(配列番号:3)、VVSHPDPW(配列番号:4)、VVSHHDPW(配列番号:5)、VVKHSDPW(配列番号:6)、VVKHPDPW(配列番号:7)、IVRHPDPW(配列番号:8)、IVTHSDPW(配列番号:9)、VVTHSDPW(配列番号:10)、TVTHTDPW(配列番号:11)、TVKHTDPW(配列番号:12)、TVRHTDPW(配列番号:13)、TVYHSDPW(配列番号:14)、及びVVVSTDPW(配列番号:15)からなる群より選択される、請求項1から4のいずれか1項に記載のペプチド。
- Xaa9-Xaa10-Xaa11-Xaa12-Xaa13-Xaa14-Xaa15が、VNGLWLR(配列番号:16)、VNGLWFP(配列番号:17)、VNGLWFY(配列番号:18)、VNGLWLW(配列番号:19)、VNGLWLQ(配列番号:20)、ANGLWLA(配列番号:21)、及びVNGLYLD(配列番号:22)からなる群より選択される、請求項1から5のいずれか1項に記載のペプチド。
- Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Xaa6-Xaa7-Xaa8-Xaa9-Xaa10-Xaa11-Xaa12-Xaa13-Xaa14-Xaa15が、HVTHQDPWVNGLWIA(配列番号:23)、VVSHHDPWVNGLFIA(配列番号:24)、VVVHADPWVNGLWIQ(配列番号:25)、VVKHPDPWVNGLYFH(配列番号:26)、VVQHRDPWVNGLWFP(配列番号:27)、SVVHSDPWVNGLYLS(配列番号:28)、AVKHSDPWVNGLYLP(配列番号:29)、SVTHIDPWVNGLYLP(配列番号:30)、KVSHFDPWVNGLWLP(配列番号:31)、TVTHRDPWVNGLILS(配列番号:32)、QVSHPDPWVNGLILQ(配列番号:33)、TVYSDDPWVNGLWLR(配列番号:34)、SVYGLDPWINGLRFV(配列番号:35)、TVFHTDPWVNGLWIS(配列番号:36)、TVRHTDPWVNGLWIS(配列番号:37)、TVKHPDPWVNGLWIS(配列番号:38)、TVTHSDPWVNGLFLP(配列番号:39)、VVTHPDPWVNGLFLP(配列番号:40)、TVTHIDPWVNGLWLP(配列番号:41)、TVVHADPWVNGLYLP(配列番号:42)、TVVHSDPWVNGLWLP(配列番号:43)、TVIHPDPWVNGLWLP(配列番号:44)、IVSHPDPWVNGLWLP(配列番号:45)、SVSHPDPWVNGLWLP(配列番号:46)、EVSHPDPWVNGLWIP(配列番号:47)、IVYHADPWVNGLWLS(配列番号:48)、VVRHSDPWVNGLWID(配列番号:49)、VVYSSDPWVNGLHLT(配列番号:50)、TVSHPDPWVNGLWIR(配列番号:51)、TVYHPDPWVNGLWIR(配列番号:52)、TVWHPDPWVNGLWIY(配列番号:53)、EVKHPDPWVNGLWIY(配列番号:54)、TVVHPDPWVNGLWIS(配列番号:55)、TVRHPDPWVNGLWLS(配列番号:56)、TVRHPDPWVNGLWFS(配列番号:57)、TVSHPDPWVNGLWLQ(配列番号:58)、TVTHPDPWVNGLWLP(配列番号:59)、TVTHPDPWVNGLYLP(配列番号:60)、TVYHPDPWVNGLWLP(配列番号:61)、TVVHPDPWVNGLWLP(配列番号:62)、TVFHPDPWVNGLWIP(配列番号:63)、AVTHSDPWVNGLWLP(配列番号:64)、TVTHSDPWVNGLWFP(配列番号:65)、EVSHPDPWVNGLWFP(配列番号:66)、AVSHPDPWVNGLWFP(配列番号:67)、及びSVVHHDPWVNGLWFP(配列番号:68)からなる群より選択される、請求項1又は2に記載のペプチド。
- 請求項1から7のいずれか1項に記載のペプチドを含む医薬。
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