JP6506185B2 - 幹細胞への標的組込み - Google Patents
幹細胞への標的組込み Download PDFInfo
- Publication number
- JP6506185B2 JP6506185B2 JP2016014554A JP2016014554A JP6506185B2 JP 6506185 B2 JP6506185 B2 JP 6506185B2 JP 2016014554 A JP2016014554 A JP 2016014554A JP 2016014554 A JP2016014554 A JP 2016014554A JP 6506185 B2 JP6506185 B2 JP 6506185B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cells
- stem cells
- cell
- gene
- sequence
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
- C12N9/22—Ribonucleases RNAses, DNAses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/10011—Adenoviridae
- C12N2710/10311—Mastadenovirus, e.g. human or simian adenoviruses
- C12N2710/10341—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2710/10343—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/15011—Lentivirus, not HIV, e.g. FIV, SIV
- C12N2740/15041—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2740/15043—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2800/00—Nucleic acids vectors
- C12N2800/30—Vector systems comprising sequences for excision in presence of a recombinase, e.g. loxP or FRT
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2830/00—Vector systems having a special element relevant for transcription
- C12N2830/008—Vector systems having a special element relevant for transcription cell type or tissue specific enhancer/promoter combination
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Hematology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
本明細書は、米国仮特許出願第61/212、265(出願日2009年4月9日)および米国仮特許出願第61/269、432(出願日2009年6月24日)を参照によりその全体を説明したものとしてここに含める。
該当なし。
遺伝子に組み込まれた非プロモータレポーター遺伝子である。
系譜特異的または成熟細胞型で発現すると知られている内在性遺伝子に連結することができる。
脱分化に関わる内在性遺伝子に連結する第2の自殺マーカーと一緒に使用する。この実施形態は、薬物療法としてのin vivo幹細胞に関する安全性の懸念を強力に取り組む。
この第1の融合タンパク質は第1のジンクフィンガーDNA結合領域と第1の切断半領域を含み、このジンクフィンガーDNA結合領域は、細胞のゲノム内の対象とする領域の第1の標的部位と結合するように設計されている;(b)細胞内に第2の融合タンパク質を発現させること、ここでこの第2の融合タンパク質は第2のジンクフィンガー結合領域と第2の切断半領域を含み、このジンクフィンガーDNA結合領域は、細胞のゲノム内の対象とする領域の第2の標的部位と結合し、第2の標的部位は第1の標的部位とは異なるように設計されている;および(c)細胞をコード配列に接触させること、ここで第1の融合タンパク質を第1の標的部位に結合させて、また第2の融合タンパク質を第2の標的部位に結合させて、細胞のゲノムが対象とする領域内で切断されるように切断半分領域を設置させ、それによってコード配列を対象とする領域内の細胞のゲノムに標的組込みこまれる。特定の実施形態では、コード配列は、治療上のタンパク質、レポーター遺伝子または陽性または陰性スクリーニングマーカー遺伝子をコードする配列含む。
ならびに(e)細胞を2つのコード配列または系譜特異的または細胞運命レポーター配列、またはこれらの任意の組み合わせに接触させること、ここで第1の融合タンパク質を第1の標的部位に結合させて、また第2の融合タンパク質を第2の標的部位に結合させて、細胞のゲノムが対象とする領域内で切断されるように切断半分領域を設置させ、それによってコード配列または系譜特異的または細胞運命レポーター配列を対象とする領域内の細胞のゲノムに標的組込みこまれる、さらに、第3の融合タンパク質を第3の標的部位に結合させて、また第4の融合タンパク質を第4の標的部位に結合させて、細胞のゲノムが対象とする第2の領域内で切断されるように切断半分領域を設置させ、それによって2つのコード配列または系譜特異的または細胞運命レポーター配列を対象とする領域内の細胞のゲノムに標的組込みこまれる。特定の実施形態では、コード配列は、治療上のタンパク質、レポーター遺伝子または陽性または陰性スクリーニングマーカー遺伝子をコードする配列含む。
本明細書に開示した方法、同様に組成の準備および使用の実施は、その他の指示がなければ、分子生物学、生化学、クロマチン構造および解析、計算化学、細胞培養、組換えDNAおよび関連する分野の通常の技術を、当業者の技術の範囲内として採用する。これらの技術は、文献に十分に説明されている。例えば、Sambrook et al. MOLECULAR CLONING: A LABORATORY MANUAL, Second edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989 and Third edition, 2001; Ausubel et al., CURRENT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY, John Wiley & Sons, New York, 1987 and periodic updates; the series METHODS IN ENZYMOLOGY, Academic Press, San Diego; Wolffe, CHROMATIN STRUCTURE AND FUNCTION, Third edition, Academic Press, San Diego, 1998; METHODS IN ENZYMOLOGY, Vol. 304, “Chromatin” (P.M. Wassarman and A. P. Wolffe, eds.), Academic Press, San Diego, 1999; and METHODS IN MOLECULAR BIOLOGY, Vol. 119, “Chromatin Protocols” (P.B. Becker, ed.) Humana Press, Totowa,1999を参照されたい。
用語「核酸」、「ポリヌクレオチド」および「オリゴヌクレオチド」は、互換的に使用し、直線状または環状の高次構造、かつ単一または二重鎖の型のデオキシリボヌクレオチドまたはリボヌクレオチドポリマーを意味する。本開示の目的のために、これらの用語は、ポリマーの長さについて制限があると解釈されるべきではない。これらの用語は、自然のヌクレオチドの既知の類似体、同様に塩基、糖および/またはリン酸部分(例えば、ホスホロチオエートバックボーン)が修飾されたヌクレオチドを含む。一般に、特定のヌクレオチドの類似体は、塩基対形成特異性を有する;すなわち、Aの類似体はTと塩基対を成す。
非ヒストン性染色体タンパク質を有し、主にDNAおよびタンパク質を含む。真核生物細胞のクロマチンの大部分は、ヌクレオソームの形で存在し、ここでヌクレオソームコアは、
ヒストンH2A、H2B、H3およびH4の内各2ずつからなる八量体に付随するDNA約150塩基対を備え、およびリンカーDNA(可変長は、生物体に依存する)は、クレオソームコアの間に伸びる。ヒストンH1の分子は、一般にリンカーDNAに付随する。本開示の目的のために、用語「クロマチン」とは、原核生物および真核生物ともに細胞のヌクレオプロテインの全ての型を含むことを意味する。細胞のクロマチンは、染色体性およびエピソーム性両方のクロマチンを含む。
対象とする任意の配列を、幹細胞に標的挿入する方法を本明細書に記述する。挿入される配列は、そのレポーター遺伝子発現カセットが幹細胞の特定の分化系列に付随することが知られている遺伝子または遺伝子グループから選択した調節領域から構成される系譜特異的または細胞運命を含む。細胞運命または幹細胞分化のその他のマーカーに関わる遺伝子を含む配列もまた挿入できる。例えば、そのような遺伝子を含む非プロモータコンストラクトを、その遺伝子座の内在性プロモータが遺伝子産物の発現に導くように特定する領域(遺伝子座)に挿入できる。
協調可能なようにレポーター遺伝子に連結している。制御配列に付随するそのようなレポーター遺伝子を例えば、培養細胞内でスクリーンできる。
本明細書に記述のレポーターコンストラクトは、ジンクフィンガーヌクレアーゼ(ZFNs)を用いて細胞のゲノムにうまく組込まれる。ZFNsはジンクフィンガータンパク質(ZFP)およびヌクレアーゼ(切断)ドメインを含む。
ジンクフィンガーDNA結合ドメインは選択した配列に結合するように操作することができる。例えば、Beerli et al. (2002) Nature Biotechnol. 20:135−141; Pabo et al. (2001) Ann. Rev. Biochem. 70:313−340; Isalan et al. (2001) Nature Biotechnol. 19:656−660; Segal et al. (2001) Curr. Opin. Biotechnol. 12:632−637; Choo et al. (2000) Curr. Opin. Struct. Biol. 10:411−416を参照。天然に存在するジンクフィンガータンパク質と比較して、操作された(天然には存在しない)ジンクフィンガーDNA結合ドメインは新規の結合特異性を有することができる。一般に、天然には存在しない操作された認識ヘリックス領域は新規の結合特異性がある。操作方法は、限定されるものではないが、合理的設計と種々のタイプの選択を含む。例えば、合理的設計は3塩基連鎖(または4塩基連鎖)ヌクレオチド配列および個別のジンクフィンガーアミノ酸配列を含有したデータベースを使用しており、配列内では3塩基連鎖または4塩基連鎖配列がジンクフィンガーの1つ以上のアミノ酸配列と関連し、これらは特定の3塩基連鎖または4塩基連鎖配列に結合している。例えば、共同出願の米国特許出願第6,453,242および6,534,261号(その全体が、参照により本明細書に援用される)を参照。
さらに、ZFNsはヌクレアーゼ(切断ドメイン、切断半ドメイン)を含む。本明細書で開示する融合タンパク質の切断ドメイン部分をエンドヌクレアーゼまたはエキソヌクレアーゼから取得することができる。切断ドメインが由来する例示的なエンドヌクレアーゼは、限定されるものではないが、制限エンドヌクレアーゼおよびホーミングエンドヌクレアーゼを含む。例えば、2002−2003 Catalogue, New England Biolabs, Beverly, MA; および Belfort et al. (1997) Nucleic Acids Res. 25:3379−3388を参照。DNAを切断するさらなる酵素が知られている(例えば、S1 Nuclease; mung bean nuclease; pancreatic DNase I; micrococcal nuclease; yeast HO endonucleaseを参照。さらにLinn et al. (eds.) Nucleases, Cold Spring Harbor Laboratory Press,1993を参照。)。これらの酵素の内の1つ以上(またはその機能的断片)を切断ドメインおよび断片半ドメインの源として使用できる。
いずれのヌクレアーゼも本明細書で開示する方法で使用できる。例えば、天然に存在するホーミングエンドヌクレアーゼおよびメガヌクレアーゼは認識配列が非常に長いが、ホトサイズのゲノムになれば統計上、一部は存在することが多い。例示的なホーミングエンドヌクレアーゼはI−SceI、I−CeuI、PI−PspI、PI−Sce、I−SceIV、I−CsmI、I−PanI、I−SceII、I−PpoI、I−SceIII、I−CreI、I−TevI、I−TevIIおよびI−TevIIIを含む。これらの認識配列は周知である。さらに、米国特許第5,420,032; 米国特許第6,833,252; Belfort et al. (1997) Nucleic Acids Res. 25:3379-3388; Dujon et al. (1989) Gene 82:115-118; Perler et al. (1994) Nucleic Acids Res. 22, 1125-1127; Jasin (1996) Trends Genet. 12:224-228; Gimble et al. (1996) J. Mol. Biol. 263:163-180; Argast et al. (1998) J. Mol. Biol. 280:345-353 および the New England Biolabs catalogueを参照。
いずれかの適切な手段によって本明細書に掲載のレポーターコンストラクトおよびヌクレアーゼ(例えば、ZFNs)を標的幹細胞に送達してもよい。
本明細書に開示した方法と組成物は幅広い用途が可能である。コード配列(リポーター)に作動可能に連結された内在性遺伝子からのプロモータ(例えば、系譜特異的または細胞運命プロモータ)を含有する1つ以上の配列の幹細胞への標的組込みを内在性遺伝子の発現パターンを同定することに使用することができる。内在性プロモータは幹細胞の細胞運命について特異的分化状態または決定を伴うプロモータであってもよい。特定の実施形態では、挿入された配列は「セーフハーバ」(非必須遺伝子)遺伝子座に組込まれ、それによりゲノムを害することがなく、かつ、周囲の内因性調整配列からの偽性の調整をすることがなく目的の発現をさせることができる。
脂肪細胞特異的リポーターコンストラクトは脂肪細胞脂肪酸結合タンパク質のaP2またはALBPをGFPリポーター配列に作動可能に連結したプロモータ配列により 生成された。例えば、ヒト、マウスおよびニワトリ aP2プロモータ配列を記載し、参照により本明細書において援用するCreaser et al. (1996) Nucleic Acids Res. 24(13):2597−2606を参照。
CCR5遺伝子に相同である配列に隣接するeGFP(PGK−eGFP)のPGKプロモータ駆動発現 またはEPOおよびeGFP(PGK‐mEpo−2A‐eGFP)のいずれかを含有して、レンチウイルスドナーベクター(組込み型または非組込み型)を生成した。図5Aおよび米国特許出願第12/288,847号を参照。
さらに、ヒトMSCs発現mEpをマウスに投与し、かつ、ヘマトクリットに対する効果ならびにEpoの血漿中濃度を測定した。簡単に述べれば、LV‐eGFPまたはLV−mEpo‐2A‐eGFPで修飾した106hMSCsか、Ad.ZFNとIDLVドナー(eGFPまたはmEpo.2AeGFP発現カセット)の両方のいずれかで修飾した107hMSCsのいずれかを用いてNOD/SCIDγCマウスにIP注射した。LV形質導入した細胞がIDLV形質導入した細胞よりも10倍大きな可溶性Epo発現を示すEpo−ELISAに従って注射されたMSCsの数を決定したが、これはIDLVドナーと比べた場合の組込まれたドナーDNAの数の増加が原因とおもわれる。60日の間に末梢血を下顎静脈から採取した。ヘマトクリット値を測定し、血漿Epo値をELISAで測定した。
マウスOCT4遺伝子(POU5F1でも知られる、以下ヒトOCT4という)のヒトオーソログを標的するため、ヒトOCT4遺伝子(表3)の第1イントロンにおける固有な配列を認識する4つのZFN対(下の表2を参照)を設計した。ヒトOCT4を標的としたZFNsを設計し、本質的に、Urnov et al. (2005) Nature 435(7042):646−651, Perez et al (2008) Nature Biotechnology 26(7): 808−816, および米国特許公報 2008/0131962に記述されているプラスミドに組込んだ。
hESCs中でヒトOCT遺伝子座の正確な標的化、内因性プロモータの制御下でのOCT4EX1‐GFPの発現、およびヒトOCT4の発現を機能的にバリデートするために、予想されたOCT4EX1‐eGFP融合タンパク質をOCT4およびeGFPについての抗体を用いてウエスタンブロット解析で確認した(図10C)。簡単に述べれば、hESCsをコラーゲナーゼ処理で(1.5mg/ml)回収し、培地をその後での洗浄および重力による沈降によりフィーダ細胞から分離した。トリプシン処理でhESC由来線維芽細胞を回収した。細胞を遠心分離によりベレット化し、1xPBSで洗浄し、さらに遠心分離により回収した。氷冷噴霧緩衝液(プロテアーゼインヒビターカクテル(Complete Mini, Roche)を添加した50 mM Tris−HCl (pH 7.4), 20% グリセロール, 1 mM EDTA, 150 mM NaCl, 0.5% Triton X−100, 0.02% SDS, 1 mM ジチオスレイトール [DTT], 2 mM phenylmethylsulfonyl fluoride [PMSF])中で細胞を溶解した。氷冷5分後、最終的な[NaCl]を400mMにするために5M NaClを添加した。さらなる氷冷5分後、等容の氷冷水を添加し、遠心分離をすぐに始める前に微量遠心管(14krpm、10min)中で完全に混合した。上清のタンパク質濃度をブラッドフォード法で測定し、4%から12%ビス−トリス勾配ゲル(Invitrogen)を用いて15μgのタンパク質を分離した。PVDF膜に移し、OCT4(マウスモノクローナル抗体、Santa Cruz Biotechnology)およびGFP(Rbt pAB to GFP Abcam ab290−50)抗体で探索後、ZFN処理細胞がOCT4EX1−eGFPタンパク質を様々なレベルで発現した。
部位特異的クローン多様化および後成的サイレンシング効果がなくトランス遺伝子の画定された過剰発現をする信頼性が有り使いやすい発現系の欠如がhESCsにおける過剰発現の研究を阻んでいる。染色体19のAAVS1遺伝子座は先に記述したが、トランス遺伝子サイレンシングが無く多数形質転換され、かつ初代細胞株においてトランス遺伝子を安定的に発現させるのに使用し続けてきた最も良く特徴付けされている遺伝子座を表す(Smith et al. (2008) Stem Cells 26:496−504)。この遺伝子座はアデノ随伴ウイルス(AAVs)に関するウイルス組込み部位として同定されており、プロテインホスファターゼ1(PPP1R12C)の調節サブユニット12Cをコードする遺伝子を妨げる。さらに、アデノ随伴ウイルス遺伝子送達技術を用いてAAVS1遺伝子座で標的されているhESCsが長期間のトランス遺伝子発現を示し、かつ多能性状態を維持した((Smith et al., ibid)。
AAVS1遺伝子座がヒトES細胞においての誘導性トランス遺伝子過剰発現系を発生することに使用できるかを調べる。最小CMVプロモータおよび赤色蛍光タンパク質(RFP)cDNA(TetO‐RFP)を駆動するテトラサイクリン応答エレメントで構成する追加的発現カセットを含有するために、先に使用したプロモータなしのAAVS1ドナープラスミドを再設計する。このドナー分子に含有されるものは、3’末端でポリアデニル化シグナルに結合したGFP遺伝子をコードするヌクレオチド配列および5’末端で自己切断2Aペプチドをコードする配列である(図13を参照)。このようにして、GFPの発現は内因性プロモータによって駆動され、かつ、ドナー陽性クローンをスクリーニングすることに使用することができる。ドナーコンストラクトをhES細胞の代行システムとして働くK562細胞に形質移入する。DOXに細胞を反応させるために、M2rtTA逆トランスアクチベーターを伴うレンチウイルスで正しく標的したK562sを形質導入する。RFP発現はDOXの追加およびM2rtTAの存在に依存する。
外因性選択カセットをhESCsおよびhiPSCs中でAAVS1遺伝子座を効果的に標的することに使用することができるという観察により、hESCsおよびhiPSCs中で発現しない遺伝子を修飾することにZFNsを使用することができるかどうかを検討することとした。この点を検討するために、hESCsではなくドーパミン作動性ニューロンなどの分化細胞に発現する転写因子をコードする遺伝子であるPITX3の第1コードエキソンに対して2つのZFN対を生成した。PITX3 ZFNsおよびその標的部位を下記の表6と表7に示す。
第IX因子遺伝子座を標的するように設計したZFNsを下記のように構築した。第IX因子特異的ZFNsおよびその標的部位を下記の表8に示す。
Claims (15)
- トランス遺伝子を含む幹細胞であって、該幹細胞が、該トランス遺伝子がPITX3遺伝子に組み込まれる場合にはドーパミン作動性ニューロンに、あるいは、該トランス遺伝子が第IX因子(FIX)遺伝子に組み込まれる場合には肝細胞に分化したときまたはその間に、該トランス遺伝子が転写または翻訳されるようにトランス遺伝子が幹細胞のゲノムの内因性PITX3の第1コードエキソンまたは第IX因子(FIX)遺伝子に組込まれることを特徴とする、幹細胞。
- 前記トランス遺伝子が、該トランス遺伝子の発現を駆動する系譜特異的または細胞運命プロモータを含む、請求項1に記載の幹細胞。
- 前記トランス遺伝子が、系譜特異的または細胞運命遺伝子の発現が内因性プロモータにより駆動されるように、ゲノムに組込まれる系譜特異的または細胞運命遺伝子を含む、請求項1に記載の幹細胞。
- 前記幹細胞が造血幹細胞、間葉系幹細胞、胚幹細胞、ニューロン幹細胞、筋幹細胞、肝幹細胞、皮膚幹細胞、および誘導多能性幹細胞からなる群から選択される、請求項1から請求項3のいずれかに記載の幹細胞。
- 前記幹細胞が哺乳動物幹細胞である、請求項1から請求項4のいずれかに記載の幹細胞。
- 前記幹細胞がヒト誘導多能性幹細胞(hiPSC)である、請求項5に記載の幹細胞。
- 前記トランス遺伝子が、タンパク質、またはミクロRNAs(miRNAs)、shRNAs、RNAisおよびこれらを組み合せたものからなる群から選択されるRNA産物に転写される配列をコードする、請求項1から請求項6のいずれかに記載の幹細胞。
- 前記トランス遺伝子がリコンビナーゼによって認識される部位を含む配列で隣接される、請求項1から請求項7のいずれかに記載の幹細胞。
- 組み込まれたレポーターコンストラクトをさらに有する請求項1から請求項8のいずれかに記載の幹細胞。
- 選択された細胞型の細胞を単離する方法であって、該方法は、
遺伝子産物が前記選択された細胞型の細胞で発現する、請求項1から請求項9のいずれかに従う幹細胞の集団を培養し、かつ、
前記遺伝子産物を発現する細胞を単離し、それにより前記選択された型の細胞を単離すること、
を含む方法。 - 幹細胞の分化に対する化合物の効果を測定する方法であって、該方法は、
前記化合物の存在下および非存在下で請求項1から請求項9のいずれかに従う幹細胞の第1及び第2の集団を培養し、かつ
前記化合物の存在下で前記遺伝子産物の発現の違いが幹細胞分化に対する化合物の効果を示す、前記第1及び第2の集団における前記遺伝子産物の発現を評価することを含む方法。 - 幹細胞における遺伝子産物を産生する方法であって、該方法は、
請求項1から9のいずれかに従う幹細胞の集団を提供し、かつ、
前記培養された幹細胞の集団が前記遺伝子産物を産生する、幹細胞の集団を培養することを含む方法。 - 機能的な遺伝子産物の発現が減少することを特徴とする疾患を治療するための医薬組成物であって、請求項1から請求項9のいずれか1項に記載の幹細胞の集団を含み、前記幹細胞が前記機能的な遺伝子産物を発現することを特徴とする、医薬組成物。
- 前記疾患が血友病Bであり、かつ、前記機能的な遺伝子産物が第IX因子である、請求項13に記載の医薬組成物。
- トランス遺伝子がプラスミド、線状DNA、アデノウイルスベクターまたはレトロウイルスベクターを用いて前記幹細胞に導入される、請求項10から請求項12のいずれかに記載の方法。
Applications Claiming Priority (4)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US21226509P | 2009-04-09 | 2009-04-09 | |
US61/212,265 | 2009-04-09 | ||
US26943209P | 2009-06-24 | 2009-06-24 | |
US61/269,432 | 2009-06-24 |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2012504674A Division JP6215533B2 (ja) | 2009-04-09 | 2010-04-08 | 幹細胞への標的組込み |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2016136944A JP2016136944A (ja) | 2016-08-04 |
JP6506185B2 true JP6506185B2 (ja) | 2019-04-24 |
Family
ID=42936483
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2012504674A Active JP6215533B2 (ja) | 2009-04-09 | 2010-04-08 | 幹細胞への標的組込み |
JP2016014554A Active JP6506185B2 (ja) | 2009-04-09 | 2016-01-28 | 幹細胞への標的組込み |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2012504674A Active JP6215533B2 (ja) | 2009-04-09 | 2010-04-08 | 幹細胞への標的組込み |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US9834787B2 (ja) |
EP (1) | EP2419511B1 (ja) |
JP (2) | JP6215533B2 (ja) |
AU (1) | AU2010235161B2 (ja) |
CA (1) | CA2756833C (ja) |
WO (1) | WO2010117464A1 (ja) |
Families Citing this family (68)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20120196370A1 (en) | 2010-12-03 | 2012-08-02 | Fyodor Urnov | Methods and compositions for targeted genomic deletion |
ES2933478T3 (es) | 2005-08-03 | 2023-02-09 | Astellas Inst For Regenerative Medicine | Métodos mejorados de reprogramación de células somáticas animales |
CA2798988C (en) | 2010-05-17 | 2020-03-10 | Sangamo Biosciences, Inc. | Tal-effector (tale) dna-binding polypeptides and uses thereof |
JP6018069B2 (ja) | 2010-10-12 | 2016-11-02 | ザ・チルドレンズ・ホスピタル・オブ・フィラデルフィアThe Children’S Hospital Of Philadelphia | 血友病bを治療する方法及び組成物 |
WO2012094321A1 (en) * | 2011-01-03 | 2012-07-12 | Avm Biotechnology, Llc | Personalized production of biologics and method for reprogramming somatic cells |
WO2013010045A1 (en) | 2011-07-12 | 2013-01-17 | Biotime Inc. | Novel methods and formulations for orthopedic cell therapy |
WO2013074999A1 (en) * | 2011-11-16 | 2013-05-23 | Sangamo Biosciences, Inc. | Modified dna-binding proteins and uses thereof |
GB201122458D0 (en) | 2011-12-30 | 2012-02-08 | Univ Wageningen | Modified cascade ribonucleoproteins and uses thereof |
AU2013203832B2 (en) * | 2012-03-13 | 2016-09-15 | Celularity Inc. | Modified erythrocyte precursor cells and uses thereof |
US10704021B2 (en) | 2012-03-15 | 2020-07-07 | Flodesign Sonics, Inc. | Acoustic perfusion devices |
US10967298B2 (en) | 2012-03-15 | 2021-04-06 | Flodesign Sonics, Inc. | Driver and control for variable impedence load |
US9950282B2 (en) | 2012-03-15 | 2018-04-24 | Flodesign Sonics, Inc. | Electronic configuration and control for acoustic standing wave generation |
US9458450B2 (en) | 2012-03-15 | 2016-10-04 | Flodesign Sonics, Inc. | Acoustophoretic separation technology using multi-dimensional standing waves |
MX362866B (es) | 2012-05-25 | 2019-02-20 | Univ California | Metodos y composiciones para la modificacion de adn objetivo dirigida por arn y para la modulacion de la transcripcion dirigida por arn. |
US10648001B2 (en) | 2012-07-11 | 2020-05-12 | Sangamo Therapeutics, Inc. | Method of treating mucopolysaccharidosis type I or II |
EP3444342B1 (en) | 2012-07-11 | 2020-05-27 | Sangamo Therapeutics, Inc. | Methods and compositions for the treatment of lysosomal storage diseases |
CA2886684C (en) | 2012-10-10 | 2023-09-19 | Sangamo Biosciences, Inc. | T cell modifying compounds and uses thereof |
US9255250B2 (en) | 2012-12-05 | 2016-02-09 | Sangamo Bioscience, Inc. | Isolated mouse or human cell having an exogenous transgene in an endogenous albumin gene |
PT3138910T (pt) | 2012-12-06 | 2017-10-18 | Sigma Aldrich Co Llc | Modificação e regulação de genoma baseado em crispr |
EP2940127B1 (en) * | 2012-12-28 | 2018-07-25 | Kyoto University | Method for producing induced pluripotent stem cells, cardiomyocytes or precursor cells thereof |
JP2016519652A (ja) | 2013-03-14 | 2016-07-07 | カリブー・バイオサイエンシーズ・インコーポレイテッド | 核酸ターゲティング核酸の組成物および方法 |
WO2014145975A2 (en) | 2013-03-15 | 2014-09-18 | Whitehead Institute For Biomedical Research | Cellular discovery platform for neurodegenerative diseases |
CA2910427C (en) * | 2013-05-10 | 2024-02-20 | Sangamo Biosciences, Inc. | Delivery methods and compositions for nuclease-mediated genome engineering |
KR102238137B1 (ko) * | 2013-09-04 | 2021-04-09 | 다우 아그로사이언시즈 엘엘씨 | 공여자 삽입을 결정하기 위한 작물에서의 신속 표적화 분석 |
CA2926078C (en) * | 2013-10-17 | 2021-11-16 | Sangamo Biosciences, Inc. | Delivery methods and compositions for nuclease-mediated genome engineering in hematopoietic stem cells |
EP3492593B1 (en) * | 2013-11-13 | 2021-08-18 | Children's Medical Center Corporation | Nuclease-mediated regulation of gene expression |
EP3071515A2 (en) | 2013-11-18 | 2016-09-28 | Rubius Therapeutics, Inc. | Synthetic membrane-receiver complexes |
CA2931637C (en) | 2013-12-09 | 2023-10-10 | Sangamo Biosciences, Inc. | Methods and compositions for treating hemophilia |
US9725710B2 (en) | 2014-01-08 | 2017-08-08 | Flodesign Sonics, Inc. | Acoustophoresis device with dual acoustophoretic chamber |
AU2015218576B2 (en) * | 2014-02-24 | 2020-02-27 | Sangamo Therapeutics, Inc. | Methods and compositions for nuclease-mediated targeted integration |
AU2015241422B2 (en) | 2014-04-01 | 2020-12-03 | Rubius Therapeutics, Inc. | Methods and compositions for immunomodulation |
WO2015168022A1 (en) * | 2014-04-27 | 2015-11-05 | The Research Foundation For The State University Of New York | Enamel products and methods of use |
WO2015195547A1 (en) * | 2014-06-16 | 2015-12-23 | University Of Washington | Methods for controlling stem cell potential and for gene editing in stem cells |
EP3161129B1 (en) * | 2014-06-27 | 2019-08-07 | Angiocrine Bioscience, Inc. | Neural cells expressing adenovirus e4orf1, and methods of making and using the same |
US20170136152A1 (en) * | 2014-06-30 | 2017-05-18 | Primegen Biotech Llc | Gonad-derived side population stem cells |
WO2016011059A1 (en) * | 2014-07-14 | 2016-01-21 | President And Fellows Of Harvard College | Drug cocktail analyses using microscale vortex-assisted electroporation |
US20170183644A1 (en) * | 2014-07-14 | 2017-06-29 | President And Fellows Of Harvard College | Drug cocktail analyses using microscale vortex assisted electroporation |
WO2016011381A1 (en) | 2014-07-18 | 2016-01-21 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Reducing cxcr4 expression and/or function to enhance engraftment of hematopoietic stem cells |
US11261453B2 (en) | 2014-09-12 | 2022-03-01 | Whitehead Institute For Biomedical Research | Cells expressing apolipoprotein E and uses thereof |
EP3230460B2 (en) | 2014-12-12 | 2023-11-29 | James Zhu | Methods and compositions for selectively eliminating cells of interest |
KR102571649B1 (ko) * | 2014-12-19 | 2023-08-25 | 앤지오크린 바이오사이언스 인코포레이티드 | 조작된 내피 세포를 포함하는 생체적합성 임플란트 |
JP6800859B2 (ja) | 2015-01-26 | 2020-12-16 | フェイト セラピューティクス,インコーポレイテッド | 造血細胞分化を誘導するための方法および組成物 |
US10987670B2 (en) | 2015-04-14 | 2021-04-27 | President And Fellows Of Harvard College | Electrode array for vortex-assisted electroporation |
US11021699B2 (en) | 2015-04-29 | 2021-06-01 | FioDesign Sonics, Inc. | Separation using angled acoustic waves |
US11420136B2 (en) | 2016-10-19 | 2022-08-23 | Flodesign Sonics, Inc. | Affinity cell extraction by acoustics |
US11377651B2 (en) | 2016-10-19 | 2022-07-05 | Flodesign Sonics, Inc. | Cell therapy processes utilizing acoustophoresis |
US11708572B2 (en) | 2015-04-29 | 2023-07-25 | Flodesign Sonics, Inc. | Acoustic cell separation techniques and processes |
US11459540B2 (en) | 2015-07-28 | 2022-10-04 | Flodesign Sonics, Inc. | Expanded bed affinity selection |
US11474085B2 (en) | 2015-07-28 | 2022-10-18 | Flodesign Sonics, Inc. | Expanded bed affinity selection |
AU2016348342B2 (en) | 2015-11-04 | 2023-07-06 | Fate Therapeutics, Inc. | Methods and compositions for inducing hematopoietic cell differentiation |
PT3371314T (pt) | 2015-11-04 | 2023-08-31 | Fate Therapeutics Inc | Modificação genómica de células pluripotentes |
WO2017105350A1 (en) * | 2015-12-14 | 2017-06-22 | Cellresearch Corporation Pte Ltd | A method of generating a mammalian stem cell carrying a transgene, a mammalian stem cell generated by the method and pharmaceuticals uses of the mammalian stem cell |
AU2016380836A1 (en) * | 2015-12-30 | 2018-07-12 | Avectas Limited | Vector-free delivery of gene editing proteins and compositions to cells and tissues |
US11214789B2 (en) | 2016-05-03 | 2022-01-04 | Flodesign Sonics, Inc. | Concentration and washing of particles with acoustics |
US11085035B2 (en) | 2016-05-03 | 2021-08-10 | Flodesign Sonics, Inc. | Therapeutic cell washing, concentration, and separation utilizing acoustophoresis |
US10386361B2 (en) * | 2016-06-07 | 2019-08-20 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Long term hematopoietic stem cell specific reporter mouse and uses thereof |
GB201619876D0 (en) * | 2016-11-24 | 2017-01-11 | Cambridge Entpr Ltd | Controllable transcription |
TWI649422B (zh) * | 2016-12-30 | 2019-02-01 | 中國醫藥大學 | 成體多功能嗅幹細胞、其分離方法及其應用 |
MX2019008844A (es) * | 2017-01-26 | 2019-09-10 | Sangamo Therapeutics Inc | Ingenieria de celulas b. |
MX2019010286A (es) | 2017-04-20 | 2019-10-21 | Univ Oregon Health & Science | Correccion de genes humanos. |
JP6959369B2 (ja) * | 2017-06-20 | 2021-11-02 | エヌセイジ コーポレーション | アンジオポエチン−1またはvegfを分泌する幹細胞およびこれを含む心血管疾患の予防または治療用薬学組成物 |
US11834648B2 (en) | 2017-11-06 | 2023-12-05 | Shenzhen Cell Inspire Biotechnology Co., Ltd. | Human induced pluripotent stem cell lines for modeling Alzheimer's disease and usage thereof |
CN114900773A (zh) | 2017-12-14 | 2022-08-12 | 弗洛设计声能学公司 | 声泳***及其操作方法、控制声换能器及声学***的方法 |
CN110389233A (zh) * | 2018-04-18 | 2019-10-29 | 山东博创生物科技有限公司 | 一种用于检测人amh的fn类抗体免疫检测试剂盒 |
WO2020210552A1 (en) * | 2019-04-11 | 2020-10-15 | California Institute Of Technology | Methods and compositions for in vivo gene editing based cell-type-specific cellular engineering |
WO2021028359A1 (en) | 2019-08-09 | 2021-02-18 | Sangamo Therapeutics France | Controlled expression of chimeric antigen receptors in t cells |
KR20230010625A (ko) | 2020-03-11 | 2023-01-19 | 비트 바이오 리미티드 | 간 세포 생성 방법 |
CN111662930A (zh) * | 2020-07-03 | 2020-09-15 | 广东药科大学 | 一种hIL-12p40-MSCs的制备方法及其应用 |
Family Cites Families (84)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4217344A (en) | 1976-06-23 | 1980-08-12 | L'oreal | Compositions containing aqueous dispersions of lipid spheres |
US4235871A (en) | 1978-02-24 | 1980-11-25 | Papahadjopoulos Demetrios P | Method of encapsulating biologically active materials in lipid vesicles |
US4186183A (en) | 1978-03-29 | 1980-01-29 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army | Liposome carriers in chemotherapy of leishmaniasis |
US4261975A (en) | 1979-09-19 | 1981-04-14 | Merck & Co., Inc. | Viral liposome particle |
US4485054A (en) | 1982-10-04 | 1984-11-27 | Lipoderm Pharmaceuticals Limited | Method of encapsulating biologically active materials in multilamellar lipid vesicles (MLV) |
US4501728A (en) | 1983-01-06 | 1985-02-26 | Technology Unlimited, Inc. | Masking of liposomes from RES recognition |
US4946787A (en) | 1985-01-07 | 1990-08-07 | Syntex (U.S.A.) Inc. | N-(ω,(ω-1)-dialkyloxy)- and N-(ω,(ω-1)-dialkenyloxy)-alk-1-yl-N,N,N-tetrasubstituted ammonium lipids and uses therefor |
US4897355A (en) | 1985-01-07 | 1990-01-30 | Syntex (U.S.A.) Inc. | N[ω,(ω-1)-dialkyloxy]- and N-[ω,(ω-1)-dialkenyloxy]-alk-1-yl-N,N,N-tetrasubstituted ammonium lipids and uses therefor |
US5049386A (en) | 1985-01-07 | 1991-09-17 | Syntex (U.S.A.) Inc. | N-ω,(ω-1)-dialkyloxy)- and N-(ω,(ω-1)-dialkenyloxy)Alk-1-YL-N,N,N-tetrasubstituted ammonium lipids and uses therefor |
US4797368A (en) | 1985-03-15 | 1989-01-10 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Adeno-associated virus as eukaryotic expression vector |
US4774085A (en) | 1985-07-09 | 1988-09-27 | 501 Board of Regents, Univ. of Texas | Pharmaceutical administration systems containing a mixture of immunomodulators |
US5422251A (en) | 1986-11-26 | 1995-06-06 | Princeton University | Triple-stranded nucleic acids |
US4837028A (en) | 1986-12-24 | 1989-06-06 | Liposome Technology, Inc. | Liposomes with enhanced circulation time |
US5176996A (en) | 1988-12-20 | 1993-01-05 | Baylor College Of Medicine | Method for making synthetic oligonucleotides which bind specifically to target sites on duplex DNA molecules, by forming a colinear triplex, the synthetic oligonucleotides and methods of use |
US5264618A (en) | 1990-04-19 | 1993-11-23 | Vical, Inc. | Cationic lipids for intracellular delivery of biologically active molecules |
WO1991017424A1 (en) | 1990-05-03 | 1991-11-14 | Vical, Inc. | Intracellular delivery of biologically active substances by means of self-assembling lipid complexes |
US5173414A (en) | 1990-10-30 | 1992-12-22 | Applied Immune Sciences, Inc. | Production of recombinant adeno-associated virus vectors |
US5420032A (en) | 1991-12-23 | 1995-05-30 | Universitge Laval | Homing endonuclease which originates from chlamydomonas eugametos and recognizes and cleaves a 15, 17 or 19 degenerate double stranded nucleotide sequence |
US5356802A (en) | 1992-04-03 | 1994-10-18 | The Johns Hopkins University | Functional domains in flavobacterium okeanokoites (FokI) restriction endonuclease |
US5436150A (en) | 1992-04-03 | 1995-07-25 | The Johns Hopkins University | Functional domains in flavobacterium okeanokoities (foki) restriction endonuclease |
US5487994A (en) | 1992-04-03 | 1996-01-30 | The Johns Hopkins University | Insertion and deletion mutants of FokI restriction endonuclease |
US5792632A (en) | 1992-05-05 | 1998-08-11 | Institut Pasteur | Nucleotide sequence encoding the enzyme I-SceI and the uses thereof |
US5587308A (en) | 1992-06-02 | 1996-12-24 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health & Human Services | Modified adeno-associated virus vector capable of expression from a novel promoter |
US6242568B1 (en) | 1994-01-18 | 2001-06-05 | The Scripps Research Institute | Zinc finger protein derivatives and methods therefor |
ATE310812T1 (de) | 1994-01-18 | 2005-12-15 | Scripps Research Inst | Derivate von zinkfingerproteinen und methoden |
US6140466A (en) | 1994-01-18 | 2000-10-31 | The Scripps Research Institute | Zinc finger protein derivatives and methods therefor |
ATE410518T1 (de) | 1994-03-23 | 2008-10-15 | Univ Ohio | Kompaktnukleinsäure und ihre verabreichung in zellen |
US5585245A (en) | 1994-04-22 | 1996-12-17 | California Institute Of Technology | Ubiquitin-based split protein sensor |
US5639618A (en) | 1994-05-13 | 1997-06-17 | Plurion, Inc. | Method of isolating a lineage specific stem cell in vitro |
GB9824544D0 (en) | 1998-11-09 | 1999-01-06 | Medical Res Council | Screening system |
ATE407205T1 (de) | 1994-08-20 | 2008-09-15 | Gendaq Ltd | Verbesserung in bezug auf bindungsproteine bei der erkennung von dna |
US5789538A (en) | 1995-02-03 | 1998-08-04 | Massachusetts Institute Of Technology | Zinc finger proteins with high affinity new DNA binding specificities |
US6090618A (en) | 1996-10-07 | 2000-07-18 | Arch Development Corporation | DNA constructs and viral vectors comprising a smooth muscle promoter |
US5928914A (en) * | 1996-06-14 | 1999-07-27 | Albert Einstein College Of Medicine Of Yeshiva University, A Division Of Yeshiva University | Methods and compositions for transforming cells |
US5928638A (en) | 1996-06-17 | 1999-07-27 | Systemix, Inc. | Methods for gene transfer |
US5925523A (en) | 1996-08-23 | 1999-07-20 | President & Fellows Of Harvard College | Intraction trap assay, reagents and uses thereof |
GB2338237B (en) | 1997-02-18 | 2001-02-28 | Actinova Ltd | In vitro peptide or protein expression library |
GB9703369D0 (en) | 1997-02-18 | 1997-04-09 | Lindqvist Bjorn H | Process |
US6342345B1 (en) | 1997-04-02 | 2002-01-29 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Detection of molecular interactions by reporter subunit complementation |
GB9710807D0 (en) | 1997-05-23 | 1997-07-23 | Medical Res Council | Nucleic acid binding proteins |
GB9710809D0 (en) | 1997-05-23 | 1997-07-23 | Medical Res Council | Nucleic acid binding proteins |
US5994136A (en) | 1997-12-12 | 1999-11-30 | Cell Genesys, Inc. | Method and means for producing high titer, safe, recombinant lentivirus vectors |
US6410248B1 (en) | 1998-01-30 | 2002-06-25 | Massachusetts Institute Of Technology | General strategy for selecting high-affinity zinc finger proteins for diverse DNA target sites |
AU746454B2 (en) | 1998-03-02 | 2002-05-02 | Massachusetts Institute Of Technology | Poly zinc finger proteins with improved linkers |
US6140081A (en) | 1998-10-16 | 2000-10-31 | The Scripps Research Institute | Zinc finger binding domains for GNN |
US6534261B1 (en) | 1999-01-12 | 2003-03-18 | Sangamo Biosciences, Inc. | Regulation of endogenous gene expression in cells using zinc finger proteins |
US6599692B1 (en) | 1999-09-14 | 2003-07-29 | Sangamo Bioscience, Inc. | Functional genomics using zinc finger proteins |
US7013219B2 (en) | 1999-01-12 | 2006-03-14 | Sangamo Biosciences, Inc. | Regulation of endogenous gene expression in cells using zinc finger proteins |
US6453242B1 (en) | 1999-01-12 | 2002-09-17 | Sangamo Biosciences, Inc. | Selection of sites for targeting by zinc finger proteins and methods of designing zinc finger proteins to bind to preselected sites |
US6794136B1 (en) | 2000-11-20 | 2004-09-21 | Sangamo Biosciences, Inc. | Iterative optimization in the design of binding proteins |
US7257541B1 (en) | 1999-10-08 | 2007-08-14 | I2 Technologies Us, Inc. | System and method for performing a business process in a multi-enterprise, collaborating network |
CA2394850C (en) | 1999-12-06 | 2012-02-07 | Sangamo Biosciences, Inc. | Methods of using randomized libraries of zinc finger proteins for the identification of gene function |
DE60143192D1 (de) | 2000-02-08 | 2010-11-18 | Sangamo Biosciences Inc | Zellen zur entdeckung von medikamenten |
US20020061512A1 (en) | 2000-02-18 | 2002-05-23 | Kim Jin-Soo | Zinc finger domains and methods of identifying same |
AU2001241900A1 (en) * | 2000-03-01 | 2001-09-12 | Amgen Inc. | The identification and use of effectors and allosteric molecules for the alteration of gene expression |
WO2001088197A2 (en) | 2000-05-16 | 2001-11-22 | Massachusetts Institute Of Technology | Methods and compositions for interaction trap assays |
WO2002009733A1 (en) * | 2000-07-27 | 2002-02-07 | The Mclean Hospital Corporation | Cell implantation therapy for neurological diseases or disorders |
JP2002060786A (ja) | 2000-08-23 | 2002-02-26 | Kao Corp | 硬質表面用殺菌防汚剤 |
CN100557016C (zh) * | 2000-12-27 | 2009-11-04 | 爱克西欧詹妮西斯公开股份有限公司 | 用于细胞特异和发育特异性选择分化的胚干细胞、成人干细胞和胚种系细胞的*** |
ES2432118T3 (es) * | 2001-02-14 | 2013-11-29 | Abt Holding Company | Células madre adultas multipotentes, fuentes de estas, métodos para obtenerlas y mantenerlas, métodos de diferenciación de estas, métodos de uso de estas y células derivadas de estas |
EP1367899A4 (en) | 2001-02-14 | 2004-07-28 | Leo T Furcht | TOTIPOTENT ADULT STEM CELLS, SOURCES OF SUCH CELLS, METHODS FOR OBTAINING AND MAINTAINING SAME, METHODS FOR DIFFERENTIATING THESE CELLS, METHODS OF USING SAME, AND CELLS DERIVED FROM THE ABOVE-MENTIONED CELLS |
AU2002258477A1 (en) * | 2001-03-08 | 2002-09-24 | Advanced Cell Technology, Inc. | Use of rna interference for the creation of lineage specific es and other undifferentiated cells and production of differentiated cells in vitro by co-culture |
GB0108491D0 (en) | 2001-04-04 | 2001-05-23 | Gendaq Ltd | Engineering zinc fingers |
WO2002098217A1 (en) * | 2001-06-06 | 2002-12-12 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Method for targeting transcriptionally active loci |
JP2005500061A (ja) | 2001-08-20 | 2005-01-06 | ザ スクリップス リサーチ インスティテュート | Cnnについての亜鉛フィンガー結合ドメイン |
JP4968498B2 (ja) | 2002-01-23 | 2012-07-04 | ユニバーシティ オブ ユタ リサーチ ファウンデーション | ジンクフィンガーヌクレアーゼを用いる、標的化された染色体変異誘発 |
US20030232410A1 (en) | 2002-03-21 | 2003-12-18 | Monika Liljedahl | Methods and compositions for using zinc finger endonucleases to enhance homologous recombination |
AU2003298574B2 (en) | 2002-09-05 | 2008-04-24 | California Institute Of Technology | Use of chimeric nucleases to stimulate gene targeting |
WO2004035748A2 (en) * | 2002-10-16 | 2004-04-29 | Advanced Cell Technology, Inc. | Methods using gene trapped stem cells for marking pathways of stem cell differentiation and making and isolating differentiated cells |
US7888121B2 (en) | 2003-08-08 | 2011-02-15 | Sangamo Biosciences, Inc. | Methods and compositions for targeted cleavage and recombination |
US8409861B2 (en) | 2003-08-08 | 2013-04-02 | Sangamo Biosciences, Inc. | Targeted deletion of cellular DNA sequences |
US7972854B2 (en) | 2004-02-05 | 2011-07-05 | Sangamo Biosciences, Inc. | Methods and compositions for targeted cleavage and recombination |
FR2872170B1 (fr) | 2004-06-25 | 2006-11-10 | Centre Nat Rech Scient Cnrse | Lentivirus non interactif et non replicatif, preparation et utilisations |
WO2006076374A1 (en) | 2005-01-11 | 2006-07-20 | Cognate Therapeutics, Inc. | Bone marrow stromal cells for immunoprotection of transplanted neural stem cells |
US7807464B2 (en) | 2005-05-24 | 2010-10-05 | Whitehead Institute For Biomedical Research | Methods for expansion and analysis of cultured hematopoietic stem cells |
EP1913149A4 (en) | 2005-07-26 | 2009-08-05 | Sangamo Biosciences Inc | TARGETED INTEGRATION AND EXPRESSION OF EXOGENOUS NUCLEIC ACID SEQUENCES |
ES2378333T3 (es) | 2006-05-25 | 2012-04-11 | Sangamo Biosciences, Inc. | Métodos y composiciones para la inactivación de genes |
WO2007139898A2 (en) | 2006-05-25 | 2007-12-06 | Sangamo Biosciences, Inc. | Variant foki cleavage half-domains |
WO2008089396A1 (en) | 2007-01-19 | 2008-07-24 | Invitrogen Corporation | Compositions and methods for genetic manipulation and monitoring of cell lines |
WO2008126083A2 (en) | 2007-04-11 | 2008-10-23 | Technion Research & Development Foundation Ltd. | Methods for identification and selection of human embryonic stem cell derived cells |
ATE489465T1 (de) | 2007-04-26 | 2010-12-15 | Sangamo Biosciences Inc | Gezielte integration in die ppp1r12c-position |
US8936936B2 (en) | 2007-10-25 | 2015-01-20 | Sangamo Biosciences, Inc. | Methods and compositions for targeted integration |
WO2009154686A1 (en) | 2008-05-28 | 2009-12-23 | Sangamo Biosciences, Inc. | Compositions for linking dna-binding domains and cleavage domains |
US9405700B2 (en) | 2010-11-04 | 2016-08-02 | Sonics, Inc. | Methods and apparatus for virtualization in an integrated circuit |
-
2010
- 2010-04-08 AU AU2010235161A patent/AU2010235161B2/en active Active
- 2010-04-08 WO PCT/US2010/001063 patent/WO2010117464A1/en active Application Filing
- 2010-04-08 JP JP2012504674A patent/JP6215533B2/ja active Active
- 2010-04-08 EP EP10761996.7A patent/EP2419511B1/en active Active
- 2010-04-08 CA CA2756833A patent/CA2756833C/en active Active
- 2010-04-08 US US12/798,749 patent/US9834787B2/en active Active
-
2016
- 2016-01-28 JP JP2016014554A patent/JP6506185B2/ja active Active
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
AU2010235161A1 (en) | 2011-10-20 |
EP2419511A4 (en) | 2013-08-28 |
JP2012523232A (ja) | 2012-10-04 |
EP2419511A1 (en) | 2012-02-22 |
EP2419511B1 (en) | 2018-01-17 |
US20110027235A1 (en) | 2011-02-03 |
JP2016136944A (ja) | 2016-08-04 |
CA2756833A1 (en) | 2010-10-14 |
AU2010235161B2 (en) | 2015-01-22 |
CA2756833C (en) | 2019-11-19 |
US9834787B2 (en) | 2017-12-05 |
JP6215533B2 (ja) | 2017-10-18 |
WO2010117464A1 (en) | 2010-10-14 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6506185B2 (ja) | 幹細胞への標的組込み | |
US9833479B2 (en) | Gene correction of SCID-related genes in hematopoietic stem and progenitor cells | |
US9757420B2 (en) | Gene editing for HIV gene therapy | |
US9631187B2 (en) | Methods and compositions for gene correction | |
US10370680B2 (en) | Method of treating factor IX deficiency using nuclease-mediated targeted integration | |
JP6646573B2 (ja) | ヌクレアーゼ媒介ゲノム遺伝子操作のための送達方法および組成物 | |
US8895264B2 (en) | Methods and compositions for modification of the HPRT locus | |
JP2021045166A (ja) | ヌクレアーゼ媒介ゲノム遺伝子操作のための送達方法及び組成物 | |
JP2016518142A (ja) | ヌクレアーゼ媒介ゲノム遺伝子操作のための送達方法および組成物 | |
CA2841541C (en) | Methods and compositions for alteration of a cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (cftr) gene | |
JP2022105621A (ja) | 造血幹細胞および前駆細胞におけるscid関連遺伝子の遺伝子修正 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20170131 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20170317 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20170731 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20171205 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20180301 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20180911 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20190107 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20190108 |
|
A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20190201 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20190226 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20190328 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6506185 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |