JP6461580B2 - スクリーニング装置およびスクリーニング方法 - Google Patents
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この構成によれば、ウエル基板および回収ノズルの位置情報を精度良く検出することができる。
この構成によれば、ウエルの観察領域の基準点と回収ノズルの中心軸とを一致させた状態にアライメントすることができる。
この構成によれば、旋回動作により回収ノズルが細胞回収ポジション、待機ポジションおよび細胞排出ポジション間を簡便且つ確実に移動可能な構成を実現できる。
この構成によれば、回収ノズルとウエル基板の各ウエルとを対向配置することができるので、標的細胞の回収動作を確実に行うことができる。
この構成によれば、載置面移動機構が冷却されるので、載置面移動機構の温度上昇に起因する各機構部の熱伸びの発生を抑制することができる。よって、標的細胞の回収動作を精度良く行うことができる。
例えば、載置面移動機構が細胞回収動作を繰り返すと、載置面移動機構において熱伸びが発生するおそれがある。熱伸びが発生すると、載置面移動機構の位置精度にずれが生じる。
これに対して本発明を採用すれば、載置面移動機構の温度に基づいて載置面移動機構における熱伸びの発生の有無を検出することができる。よって、熱伸びによる載置面移動機構の位置精度のずれを良好に補正することができる。よって、熱伸びの影響を受けることなく、細胞回収動作を行うことができるので、高い細胞回収率を実現できる。
例えば、回収ノズルを移動する移動機構や載置面移動機構は、細胞回収動作を繰り返すことで各機構部の熱伸びが発生するおそれがある。熱伸びが発生すると、アライメントされた回収ノズルおよびウエル基板の位置(アライメント位置)にずれ(変化)が生じるおそれがある。
これに対して本発明を採用すれば、アライメント後に熱伸びが発生してアライメント位置にずれが生じた場合であっても、アライメント位置を補正することができる。よって、回収ノズルおよびウエル基板のアライメントのずれが補正されるので、精度良く細胞回収動作を行うことができ、高い細胞回収率を実現できる。
この構成によれば、ウエル基板および回収ノズルの位置情報を精度良く検出することができる。
この構成によれば、ウエルの観察領域の基準点と回収ノズルの中心軸とを一致させた状態にアライメントすることができる。
この構成によれば、載置面移動機構を冷却することで、載置面移動機構の温度上昇に起因する各機構部の熱伸びの発生を抑制できる。よって、標的細胞の回収動作を精度良く行うことができる。
例えば、載置面移動機構が細胞回収動作を繰り返すと、載置面移動機構において熱伸びが発生するおそれがある。熱伸びが発生すると、載置面移動機構の位置精度にずれが生じる。
これに対して本発明を採用すれば、載置面移動機構の温度に基づいて載置面移動機構における熱伸びの発生の有無を検出することができる。よって、熱伸びによる載置面移動機構の位置精度のずれを良好に補正することができる。よって、熱伸びの影響を受けることなく、細胞回収動作を行うことができるので、高い細胞回収率を実現できる。
例えば、回収ノズルを移動する移動機構や載置面移動機構は、細胞回収動作を繰り返すことで各機構部の熱伸びが発生するおそれがある。熱伸びが発生すると、アライメントされた回収ノズルおよびウエル基板の位置(アライメント位置)にずれ(変化)が生じるおそれがある。
これに対して本発明を採用すれば、アライメント後に熱伸びが発生してアライメント位置にずれが生じた場合であっても、補正ステップにより、アライメント位置を補正できる。よって、回収ノズルおよびウエル基板のアライメントのずれが補正されるので、精度良く細胞回収動作を行うことができ、高い細胞回収率を実現できる。
以下の説明においては、XYZ直交座標系を設定し、このXYZ直交座標系を参照しつつ各部材の位置関係について説明する。水平面内の所定方向をX軸方向、水平面内においてX軸方向と直交する方向をY軸方向、X軸方向及びY軸方向のそれぞれと直交する方向(すなわち鉛直方向)をZ軸方向とする。また、X軸、Y軸、及びZ軸まわりの回転方向をそれぞれ、θX、θY、及びθZ方向とする。
本実施形態のスクリーニング装置は、ウエル基板の各ウエルに収容された試料に対して光を照射し、試料から発する蛍光(光情報)を標識として探索することで、複数のウエルに収容された試料の中から検査対象となる標的細胞を選択的に回収(取得)するための装置である。なお、試料としては、動物細胞;植物細胞;昆虫細胞;酵母等の真菌;大腸菌等の細菌等が挙げられる。本実施形態のスクリーニング装置は、一例として、抗体産生細胞、ハイブリドーマ、サイトカイン産生細胞等の目的の抗体を生産する動物細胞のスクリーニングや目的遺伝子の安定性発現株のスクリーニングに好適に用いられる。スクリーニング対象の動物細胞の直径としては、例えば、卵子で最大200μm程度、神経細胞で、100μm程度、赤血球で10μm程度である。
図1に示すように、本実施形態のスクリーニング装置100は、ベース部1と、制御装置2と、表示装置3と、入力装置4と、ステージ部10と、キャピラリー部20と、光学観察部30と、検出装置60と、を備えている。スクリーニング装置100は、不図示のケースで覆われており、外部からの光や異物(埃やゴミ)の侵入が防止されている。
ベース部1は、スクリーニング装置100の各要素(ステージ部10、キャピラリー部20、光学観察部30および検出装置60)を保持するための剛性を有したフレーム部材である。
制御装置2は、スクリーニング装置100の各要素(ステージ部10、キャピラリー部20、光学観察部30)の駆動を制御するためのものである。また、制御装置2は、検出装置60と電気的に接続されており、検出装置60の検出結果に基づいて、後述のアライメント動作を行う。
表示装置3は、例えば、液晶ディスプレイ等の表示モニターから構成され、光学観察部30における観察画像等を表示する際に使用される。
入力装置4は、例えば、キーボードやマウス等の入力機器から構成され、スクリーニング装置100に対して作業者が所定の情報を入力することが可能である。
図2は、ステージ部10の周辺における概略構成を示す側面図である。
ステージ部10は、図2に示すように、定盤部11と、該定盤部11を移動させる駆動機構12とを有する。定盤部11は、ウエル基板110を載置する載置台を構成する。定盤部11の上面には、作業領域11aと回収領域11bとが設けられる。
本実施形態のウエル基板110は、例えば、サイズが50mm×50mm以下の透光性を有した板状部材(例えば、ガラス基板やプラスチック基板)であって、図3に示すように、試料Mをそれぞれ格納するためのウエルWがX方向とY方向に沿って等間隔でマトリックス状に複数形成されている。各ウエルWは、試料Mを格納するためのものである。各ウエルWの断面形状は、例えば、ほぼU字型の凹部あるいはカップ型の凹部となっている。ウエルWの大きさとしては、特に限定されないが、目的の単一種の細胞等を迅速にスクリーニングする観点からは、試料(標的細胞)1個のみが捕捉され得る大きさであることが好ましい。各ウエルWには、試料Mおよび培養液Lが格納されている。培養液Lとしては、試料(標的細胞)を培養するためのものであれば特に限定されず、例えば、DMEM培地、MEM培地、RPMI1640培地、Fischer's培地等が挙げられる。
図2に戻り、キャピラリー部20は、ノズル21と、ノズル21を保持するアーム22と、駆動機構23と、ノズル位置調整機構25と、を有する。ノズル21は、作業領域11aにおいてウエル基板110(ウエルW)から標的細胞を吸引し、吸引した標的細胞を回収領域11bにおいて放出する。
このような構成に基づき、キャピラリー部20では、ノズル21が旋回、昇降、吸引および排出といった動作を実行可能となっている。
本実施形態において、ノズル21は、図4に示すように、アーム22の回動動作によって、細胞回収ポジションP1、待機ポジション(ホームポジション)P2、洗浄ポジションP3および細胞排出ポジションP4間を移動する。
検出装置60は、図1に示したように、第1検出装置61と、第2検出装置62とを含む。図5(a)は第1検出装置61の概略構成を示す図であり、図5(b)は第2検出装置62の概略構成を示す図である。
発振部61aは、例えば、YAGレーザーから構成される。受光部61bは、例えば、上面110aで反射されて受光部61bに検出光L1が到達するまでの時間や、上面110aによる検出光L1の反射角度等に基づいて、ウエル基板110の高さ(Z方向の座標位置)および平行度に関する情報を取得する。
発振部62aは、例えば、YAGレーザーから構成される。受光部62bは、例えば、先端部21aで遮られることで変化する検出光の受光量(輝度)等に基づいて、ノズル21の先端部21aの高さ(Z方向の座標位置)に関する情報を検出する。
図6は光学観察部30及びその周辺構成の概略図である。
図6に示すように、光学観察部30は、対物レンズユニット31と、接眼レンズ32と、受光部33と、励起光源ユニット34と、照明部39とを備える。
本実施形態において、対物レンズユニット31は、例えば、10倍、20倍、40倍に対応した3つの対物レンズ31a,31b,31cを含む。対物レンズユニット31は、例えばレボルバー式で回転することで、使用する対物レンズ31a,31b,31cを切り替え可能である。
受光部33は、例えば、CCDカメラ等の撮像素子から構成される。受光部33は、撮像画像を制御装置2へと送信する。
ダイクロイックミラー37は、励起光源35からの波長帯域成分の励起光Bを反射し、ウエル基板110からの蛍光Yを透過する光学特性を有する。また、ダイクロイックミラー37は、ウエル基板110から反射光として戻ってくる光(励起光B)についても反射する光学特性を有している。
一方、ウエル基板110で反射された反射光は、再びダイクロイックミラー37で反射されることで励起光源35側に戻るため、受光部33側に入射しない。
スクリーニング装置100は、電源投入された際、イニシャライズ動作を行う。イニシャライズ動作では、例えば、ステージ部10において定盤部11を待機位置(初期位置)まで移動させ、キャピラリー部20においてノズル21の旋回動作、昇降動作、吸引排出動作を行った後に待機位置(待機ポジションP2)まで移動する。これにより、定盤部11およびノズル21が他の機構に干渉することなく正常に動作することが確認されるとともに、定盤部11およびノズル21が基準位置(ホームポジション)で待機した状態となる(原点復帰)。
作業者は、例えば、接眼レンズ32を介してウエルWの観察像を視認しつつ、対物レンズ31aのピント調整を行う。
本実施形態によれば、非接触方式で検出が行われるので、ウエル基板110に接触に伴うダメージを与えることなく、且つ接触に伴う位置ズレを生じさせることなく、ウエル基板110の上面110aの位置情報を高精度で検出できる。
本実施形態によれば、非接触方式で検出を行うので、ノズル21に接触に伴うダメージを与えることなく、且つ接触に伴う位置ズレを生じさせることなく、ノズル21の位置情報を高精度で検出することができる。第2検出装置62は、制御装置2に検出結果を送信する。
以上により、ノズル21の装置内におけるノズル21の先端部21aの高さ方向におけるアライメント(位置決め)が終了する。
図7に示すように、ノズル21のアライメントにおいては、例えば、ノズル21の中心軸(中心を通る軸)C1とウエルWの観察領域の基準点とを一致させる。本実施形態において、ウエルWの観察領域の基準点とは、表示装置3に表示される表示画像(対物レンズユニット31を介して受光部33に受光された画像に相当)Gの中心G1に相当する。
アライメント調整後、ノズル21は待機ポジションP2にて待機する。
従来、モノクローナル抗体の製造方法としては、ハイブリドーマ法が一般的に用いられてきた。ハイブリドーマ法は、例えば、抗原を免疫したマウスの脾細胞と骨髄腫細胞とを細胞融合させることで自律増殖能を持ったハイブリドーマを作製し、目的の特異性を有するクローンのみをスクリーニングする方法である。当該方法においては、ハイブリドーマ作製の際の融合効率が1/104〜1/105と低く、多くの抗体産生細胞を取り逃しているという欠点がある。
係る欠点に対する解決策として、ハイブリドーマを作製せずに、抗体産生細胞であるB細胞自体を評価する方法が考えられる。しかしながら、B細胞自体は体外で長期間培養できないという問題点があった。本実施形態によれば、簡便にスクリーニングが可能であるため、B細胞の短期培養で目的の抗体産生細胞を選別することができる。
一例として、蛍光タンパク質と目的タンパク質とからなる2種類の融合タンパク質(例えば、タンパク質XとGFPの融合タンパク質、及び、タンパク質YとYFPの融合タンパク質)をコードする遺伝子の安定性発現株のスクリーニングにおいて、制御装置2は、安定性発現株中の蛍光タンパク質から発生される2色の蛍光をリスト化する。2つの目的遺伝子の安定性高発現株を取得したい場合、作業者は、リストの中から、2色の蛍光発光面積が大きい細胞株を選択すればよい。
まず、細胞回収動作を行うノズル21は、第1動作として、待機ポジションP2から細胞回収ポジションP1へと移動する(図4参照)。
第2動作として、ノズル21は細胞回収ポジションP1に位置するウエルW内から試料Mを吸引回収する(図4参照)。
第3動作として、ノズル21は、アーム22の旋回動作によって回収領域11bに設置された回収トレイ13上に移動する(図4参照)。
第4動作として、ノズル21は回収トレイ13の所定の回収用ウエル13aに試料Mを排出する(図4参照)。
第5動作として、ノズル21は、アーム22の旋回動作によって洗浄ポジションP3へと移動し、該洗浄ポジションP3に設置された洗浄液ディップ部24bにディップすることで先端部21aの内部を洗浄する(図4参照)。
第6動作として、ノズル21は、アーム22の旋回動作によって待機ポジションP2へと移動し、該待機ポジションP2に設置された試薬ディップ部24aにて先端部21aを液体にディップさせた状態とする(図4参照)。
以上の6つの動作を繰り返すことで、キャピラリー部20による細胞回収動作が実行される。
よって、ノズル21は細胞回収ポジションP1でウエルWが移動してくるのを待つことなく、上記第2動作以降を迅速に実行できる。
したがって、上記細胞回収動作を短時間で繰り返し行うことができる。
また、制御装置2は、表示装置3の画面に、指定動作(細胞回収動作)が完了(終了)した旨の表示を行う。
続いて、本発明の第2実施形態について説明する。なお、本実施形態において、上記実施形態と共通の構成については同じ符号を付し、その詳細な説明については省略若しくは簡略化する。
例えば、ウエル基板110を移動させる駆動機構12に対し、図9に示すように、該駆動機構12の温度を計測する温度センサー(温度計測部)55を設けるようにしてもよい。
また、スクリーニング装置100は、マニュアル操作時においては、機構が破損するおそれのある動作については機構同士が互いに干渉しないインターロック構造を採用してもよい。この場合において、表示装置3の画面上にインターロック機構により動作しない旨を表示するのが好ましい。
図10に示される本変形例の第2検出装置160は、接触方式によりノズル21の先端部21aの位置を検出する。第2検出装置160は、金属製ノズル用検出部161と、非金属製ノズル用検出部162と、払拭部163と、を備えている。
また、第2検出装置160は、ノズル21の先端部21aの高さ情報を取得する取得位置と、高さ情報を取得しない場合に待機する待機位置との間を移動することでノズル21の細胞回収動作を確実に妨げないようにしてもよい。
Claims (12)
- 試料から発する光情報を標識として探索することで前記試料の中から検査対象となる標的細胞を選択的に取得するスクリーニング装置であって、
前記試料が収容された複数のウエルが設けられたウエル基板を載置する試料台と、
前記複数のウエルに収容された前記試料の中から前記標的細胞を吸引して回収する回収ノズルと、
前記ウエル基板および前記回収ノズルの位置情報を検出する装置であって、少なくとも前記ウエル基板の検出を非接触方式で行う検出装置と、を備え、
前記検出装置の検出結果に基づいて、前記回収ノズルおよび前記ウエル基板がアライメントされており、
前記検出装置は、前記ウエル基板および前記回収ノズルのそれぞれにおける前記試料台の高さ方向の位置、および、前記ウエル基板の表面の平行度を検出する
スクリーニング装置。 - 前記ウエルの観察領域の基準点と前記回収ノズルの中心軸とを一致させるように、前記回収ノズルの位置を調整するノズル位置調整機構をさらに備える
請求項1に記載のスクリーニング装置。 - 前記回収ノズルを旋回可能に保持するアームが、前記標的細胞の回収動作を行う細胞回収ポジションと、回収した前記標的細胞を排出する細胞排出ポジションと、前記細胞回収ポジションおよび前記細胞排出ポジションの間に設けられた待機ポジションと、の間で前記回収ノズルを移動させる
請求項1又は2に記載のスクリーニング装置。 - 前記試料台は、前記ウエル基板を載置する載置面を移動する載置面移動機構を有する
請求項1〜3のいずれか一項に記載のスクリーニング装置。 - 前記試料台は、前記載置面移動機構を冷却する冷却機構をさらに備える
請求項4に記載のスクリーニング装置。 - 前記載置面移動機構の温度を計測する温度計測部と、
前記温度計測部の計測結果に基づいて、前記載置面移動機構による前記ウエル基板の移動量を補正する補正部と、を備える
請求項4又は5に記載のスクリーニング装置。 - 前記ウエル基板および前記回収ノズルのアライメント位置の変化を検出する検出部と、
前記検出部の検出結果に基づいて、前記アライメント位置を補正する位置補正部と、をさらに備える
請求項1〜5のいずれか一項に記載のスクリーニング装置。 - 試料から発する光情報を標識として探索することで前記試料の中から検査対象となる標的細胞を選択的に取得するスクリーニング方法であって、
前記試料が収容された複数のウエルが設けられたウエル基板を試料台に載置する載置工程と、
前記ウエル基板における前記回収ノズルの位置情報を検出する工程であって、少なくとも前記ウエル基板の検出を非接触方式で行う検出工程と、
前記検出工程の検出結果に基づき、前記ウエル基板と前記複数のウエルに収容された前記試料の中から前記標的細胞を回収する回収ノズルとのアライメントを行うアライメント工程と、
アライメント後の前記回収ノズルを用いて前記標的細胞の回収動作を行う細胞回収工程と、を含み、
前記検出工程では、前記ウエル基板および前記回収ノズルのそれぞれにおける前記試料台の高さ方向の位置、および、前記ウエル基板の表面の平行度を検出する
スクリーニング方法。 - 前記アライメント工程では、前記ウエルの観察領域の基準点と前記回収ノズルの中心軸とを一致させるように、前記回収ノズルを旋回可能に保持するアームを移動する
請求項8に記載のスクリーニング方法。 - 前記細胞回収工程は、前記ウエル基板を載置する載置面を移動する載置面移動機構を冷却する冷却ステップを含む
請求項8又は9に記載のスクリーニング方法。 - 前記細胞回収工程は、前記ウエル基板を載置する載置面を移動する載置面移動機構の温度を計測する温度計測ステップと、前記温度計測ステップの計測結果に基づいて、前記載置面移動機構による前記ウエル基板の移動量を補正する補正ステップと、を含む
請求項8〜10のいずれか一項に記載のスクリーニング方法。 - 前記細胞回収工程は、前記ウエル基板および前記回収ノズルの前記アライメント位置の変化を検出する検出ステップと、
前記検出ステップの検出結果に基づいて、前記アライメント位置を補正する補正ステップと、を含む
請求項8〜10のいずれか一項に記載のスクリーニング方法。
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