JP6460402B2 - コレステロール排出促進用医薬組成物又は食品組成物 - Google Patents

Description

本発明は、食品中のコレステロールの体外排出を促進し、該コレステロールの体内吸収を抑制し得るイネ科植物抽出物に関する。

近年、食の欧米化による摂取エネルギーの増大に伴い、慢性的なエネルギー過剰状態による、肥満、脂肪肝、高脂血症、心血管疾患等の生活習慣病の増加が社会問題となっている。生活習慣病の診断基準の１つとして血中コレステロール値が用いられている。高コレステロールは、生活習慣病、特に高脂血症や心血管疾患の危険因子として知られている。高コレステロール血症等の脂質異常の原因としては、遺伝的要因もあるが、食生活等の生活習慣に起因する場合が少なくない。原因となる食生活の改善や簡便さの観点から、日常の食事を通じてコレステロールを低下させることができれば望ましい。

従来、食物繊維によるコレステロール低下効果が知られている。この効果は、食物繊維により消化管内の胆汁酸濃度が低下することにより、体内のコレステロールから胆汁酸への合成が促進してコレステロールが低下するためとされている。しかしながら食物繊維は嵩がある上に風味が悪いため、日常の食事の中で必要量を継続して摂取するのは困難である。

コレステロール低下作用を有する素材に関し、特許文献１には、グルテンの蛋白分解酵素分解物から得られた不溶性成分が、優れた胆汁酸吸着能を有し、胆汁酸***を促進すると共にコレステロールを低下させる作用を有することが記載されており、該不溶性成分を含むコレステロール低下用組成物並びに該組成物を含有する医薬、飲食品、飼料も記載されている。また特許文献２には、小麦粉又は小麦ふすまの水抽出液を加熱処理によりフィトヘマグルチニンを除去し、更に分子量１万以下の低分子物質を除去して得られた液状組成物又はこれ蒸発乾固して得られる粉末が、中性脂肪の低下作用、総コレステロールの低下作用を有することが記載されている。特許文献１及び２記載発明は、何れも基本的に蛋白質を比較的多く含んでいると考えられ、低蛋白とは言い難いものである。

特開２０１２−１４０３９６号公報 特開平０１−３１２９７５号公報

従来素材のコレステロール低下作用は、必ずしも十分満足のいくものとは限らなかった。食品中のコレステロールの体内吸収抑制効果に優れ、且つ安全で副作用が少なく、医薬品、飲食品、飼料等として利用可能な素材は未だ提供されていない。

本発明は、安全で副作用の少ない、コレステロール排出促進能を有するイネ科植物抽出物に関する。

本発明者らは、前記課題を解決すべく鋭意検討した結果、イネ科植物の一種である小麦ふすまのエタノール抽出物であってアルキルレゾルシノールを含有するものが、コレステロール体外排出促進能（胆汁酸吸着能、胆汁酸−コレステロールミセル形成阻害能）を有し、これを食品と共に摂取することにより、該食品中のコレステロールが糞便と共に体外へ排出されることが促進されることを知見した。

本発明は、前記知見に基づきなされたもので、イネ科植物からアルコールを用いて抽出された、コレステロール排出促進能を有するイネ科植物抽出物である。
また本発明は、前記イネ科植物抽出物を含有する医薬品又は飲食品である。

本発明のイネ科植物抽出物は、コレステロール排出促進能を有し、食品中のコレステロールを糞便と共に体外へ排出することを促進し、それによってコレステロールの体内吸収を効果的に抑制し得る。また、本発明のイネ科植物抽出物は、食経験が豊富な小麦やライ麦などのイネ科植物に含まれている成分を主体とするものであることから、長期間継続的に摂取しても生体に有害な作用をもたらす懸念が少なく、安全性が高く副作用のおそれが少ない。

図１は、コレステロール排出促進作用確認試験における、各マウス群の体重当たりの糞便量を示すグラフである。 図２は、コレステロール排出促進作用確認試験における、各マウス群の糞便中のコレステロール量を示すグラフである。 図３は、胆汁酸吸着能確認試験における、サンプル中のフリーの胆汁酸の量を示すグラフであり、該量が少ないほど、試験対象（実施例のイネ科植物抽出物、ホスファチジルコリン）の胆汁酸吸着能が高いことを示す。 図４は、胆汁酸−コレステロールミセル形成阻害能確認試験における、サンプル中のフリーのコレステロールの量を示すグラフであり、該量が多いほど、試験対象（実施例のイネ科植物抽出物、ホスファチジルコリン）の、胆汁酸とコレステロールとのミセル形成阻害能が高いことを示す。

コレステロール排出促進能を有する本発明のイネ科植物抽出物は、イネ科植物のアルコール抽出物である。抽出源であるイネ科植物としては、特に制限されないが、例えば、小麦、ライ麦、ライ小麦、大麦、オーツ麦、はと麦、トウモロコシ、ヒエ、アワ、キビ等の穀類が挙げられ、これらの１種を単独で又は２種以上を組み合わせて用いることができる。これらの穀類の中でも特に小麦及びライ麦が好ましい。小麦の種類は特に制限されない。また、抽出源であるイネ科植物は、通常、その頴果を用い、抽出源であるイネ科植物が小麦の場合は、小麦粒を用いる。本発明では、イネ科植物の頴果又はその乾燥物をその粒の形状を維持したまま抽出源として用いても良く、あるいは、頴果又はその乾燥物を切断、粉砕等して得られる細片、粉砕物（粉末）を抽出源として用いても良い。

抽出源であるイネ科植物は、頴果の外皮（果皮、種皮）を含んでいることが好ましい。本発明で抽出源として好ましく用いられるものとして、小麦全粒粉、ライ麦全粒粉、小麦ふすま、ライ麦外皮が挙げられ、特に、入手の容易さや価格等の点から小麦ふすまが好ましい。

イネ科植物の抽出に用いるアルコールとしては、例えば、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール等の１価の低級アルコール（好ましくは炭素原子数１〜４のもの）、及び１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の多価アルコール等の室温（２５℃）で液体であるアルコールが挙げられる。ここでいうアルコールには、アルコールに加えてさらに水、純水、蒸留水、水道水、酸性水、アルカリ水、中性水等の水性成分を含む、含水アルコールが包含される。含水アルコール中のアルコール含有量は、通常７０体積％以上、好ましくは８０体積％以上、より好ましくは９０体積％以上である。これらのアルコールの中でも特に、操作性や環境性の点から、エタノール（含水エタノール）が好ましい。

イネ科植物のアルコールによる抽出方法は特に制限されないが、例えば、小麦粒などの頴果又はその細片若しくは粉砕物をアルコール中に浸漬、攪拌又は還流する方法の他、超臨界流体抽出法等が挙げられる。例えば、小麦ふすまをエタノール（含水エタノール）中に浸漬、攪拌又は還流する方法の場合、抽出温度（エタノールの液温）は好ましくは２〜８０℃、抽出時間は０．５〜７２時間、エタノール使用量は小麦ふすま１００質量部に対し好ましくは５０〜２０００質量部である。

本発明のイネ科植物抽出物は、好ましくはアルキルレゾルシノールを有効成分として含有する。本発明者らの知見によれば、本発明のイネ科植物抽出物が有するコレステロール排出促進能は、下記一般式（Ｉ）で表されるアルキルレゾルシノールの作用によるところが大きい。本発明のイネ科植物抽出物は、下記一般式（Ｉ）で表されるアルキルレゾルシノールの１種又は２種以上を有効成分として含有することが好ましい。本発明のイネ科植物抽出物における下記一般式（Ｉ）で表されるアルキルレゾルシノールの含有量は、コレステロール排出促進効果をより確実に奏させるようにする観点から、本発明のイネ科植物抽出物中、好ましくは７０質量％以上、更に好ましくは８０質量％以上である。下記一般式（Ｉ）で表されるアルキルレゾルシノールの含有量は１００質量％、即ち、本発明のイネ科植物抽出物は下記一般式（Ｉ）で表されるアルキルレゾルシノールのみから構成されていても良い。

前記一般式（Ｉ）におけるＲ₁に関し、炭素原子数１５〜２５の飽和アルキル基としては、代表例として、ｎ−ペンタデシル、ｎ−ヘプタデシル、ｎ−ノナデシル、ｎ−ヘンイコシル、ｎ−トリコシル、ｎ−ペンタコシル、ｎ−ヘプタコシル等の直鎖状のものが挙げられ、これらの他に、分岐状又は環状のものでも良い。これらの中でも、炭素原子数１５〜２３の飽和アルキル基が好ましい。

また、前記一般式（Ｉ）におけるＲ₁に関し、炭素原子数１５〜２５の不飽和アルキル基としては、前記の炭素原子数１５〜２５の飽和アルキル基に対応するものが挙げられる。不飽和アルキル基に含まれる不飽和結合の数及び位置に特に制限はない。

また、前記一般式（Ｉ）におけるＲ₂は水素原子であることが好ましく、また、Ｒ₁はＲ₂に対してパラ位に結合していることが好ましい。

本発明のイネ科植物抽出物に含まれ得るアルキルレゾルシノールの具体例としては、以下のものが挙げられる。
１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−ペンタデシルベンゼン（Ｃ１５：０）
１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−ヘプタデシルベンゼン（Ｃ１７：０）
１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−ノナデシルベンゼン（Ｃ１９：０）
１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−ヘンイコシルベンゼン（Ｃ２１：０）
１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−トリコシルベンゼン（Ｃ２３：０）
１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−ペンタコシルベンゼン（Ｃ２５：０）

本発明のイネ科植物抽出物の好ましい一例として、下記６種類のアルキルレゾルシノールを含有するものが挙げられる。
１）前記一般式（Ｉ）におけるＲ₁が炭素原子数１５の飽和又は不飽和のアルキル基であるアルキルレゾルシノール（以下、ＡＲ１５ともいう）。
２）前記一般式（Ｉ）におけるＲ₁が炭素原子数１７の飽和又は不飽和のアルキル基であるアルキルレゾルシノール（以下、ＡＲ１７ともいう）。
３）前記一般式（Ｉ）におけるＲ₁が炭素原子数１９の飽和又は不飽和のアルキル基であるアルキルレゾルシノール（以下、ＡＲ１９ともいう）。
４）前記一般式（Ｉ）におけるＲ₁が炭素原子数２１の飽和又は不飽和のアルキル基であるアルキルレゾルシノール（以下、ＡＲ２１ともいう）。
５）前記一般式（Ｉ）におけるＲ₁が炭素原子数２３の飽和又は不飽和のアルキル基であるアルキルレゾルシノール（以下、ＡＲ２３ともいう）。
６）前記一般式（Ｉ）におけるＲ₁が炭素原子数２５の飽和又は不飽和のアルキル基であるアルキルレゾルシノール（以下、ＡＲ２５ともいう）。

ＡＲ１５として特に好ましいものは、Ｒ₁が炭素原子数１５の飽和アルキル基、Ｒ₂が水素原子であるものであり、具体的には、１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−ペンタデシルベンゼン（Ｃ１５：０）が挙げられる。
ＡＲ１７として特に好ましいものは、Ｒ₁が炭素原子数１７の飽和アルキル基、Ｒ₂が水素原子であるものであり、具体的には、１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−ヘプタデシルベンゼン（Ｃ１７：０）が挙げられる。
ＡＲ１９として特に好ましいものは、Ｒ₁が炭素原子数１９の飽和アルキル基、Ｒ₂が水素原子であるものであり、具体的には、１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−ノナデシルベンゼン（Ｃ１９：０）が挙げられる。
ＡＲ２１として特に好ましいものは、Ｒ₁が炭素原子数２１の飽和アルキル基、Ｒ₂が水素原子であるものであり、具体的には、１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−ヘンイコシルベンゼン（Ｃ２１：０）が挙げられる。
ＡＲ２３として特に好ましいものは、Ｒ₁が炭素原子数２３の飽和アルキル基、Ｒ₂が水素原子であるものであり、具体的には、１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−トリコシルベンゼン（Ｃ２３：０）が挙げられる。
ＡＲ２５として特に好ましいものは、Ｒ₁が炭素原子数２５飽和アルキル基、Ｒ₂が水素原子であるものであり、具体的には、１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−ペンタコシルベンゼン（Ｃ２５：０）が挙げられる。

本発明のイネ科植物抽出物において、ＡＲ１５、ＡＲ１７、ＡＲ１９、ＡＲ２１、ＡＲ２３及びＡＲ２５の含有量は、コレステロール排出促進能の一層の向上の観点から、それぞれ、下記範囲内にあることが好ましい。
ＡＲ１５の含有量は、本発明のイネ科植物抽出物中、好ましくは０．１〜１０．０質量％、更に好ましくは０．１〜５．０質量％、特に好ましくは０．５〜１．５質量％である。
ＡＲ１７の含有量は、本発明のイネ科植物抽出物中、好ましくは１．０〜２０．０質量％、更に好ましくは５．０〜１５．０質量％、特に好ましくは８．０〜１２．０質量％である。
ＡＲ１９の含有量は、本発明のイネ科植物抽出物中、好ましくは２５．０〜４０．０質量％、更に好ましくは２７．５〜３７．５質量％、特に好ましくは３０．０〜３５．０質量％である。
ＡＲ２１の含有量は、本発明のイネ科植物抽出物中、好ましくは４０．０〜５５．０質量％、更に好ましくは４２．５〜５２．５質量％、特に好ましくは４５．０〜５０．０質量％である。
ＡＲ２３の含有量は、本発明のイネ科植物抽出物中、好ましくは１．０〜１５．０質量％、更に好ましくは２．５〜１２．５質量％、特に好ましくは５．０〜１０．０質量％である。
ＡＲ２５の含有量は、本発明のイネ科植物抽出物中、好ましくは０〜５．０質量％、更に好ましくは０〜２．０質量％、特に好ましくは０〜１．５質量％である。

本発明のイネ科植物抽出物は、ＡＲ１５、ＡＲ１７、ＡＲ１９、ＡＲ２１、ＡＲ２３及びＡＲ２５以外の他のアルキルレゾルシノールの１種以上を含有していても良い。この他のアルキルレゾルシノールとしては、例えば、前記一般式（Ｉ）におけるＲ₁が炭素原子数２７の飽和又は不飽和のアルキル基であるアルキルレゾルシノール（以下、ＡＲ２７ともいう）が挙げられる。ＡＲ２７として特に好ましいものは、Ｒ₁が炭素原子数２７の飽和アルキル基、Ｒ₂が水素原子であるものであり、具体的には、１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−ヘプタコシルベンゼン（Ｃ２７：０）が挙げられる。

本発明のイネ科植物抽出物は、コレステロール排出促進能を有するアルキルレゾルシノールの含有率が高いことが好ましく、斯かる観点から、イネ科植物からアルコールを用いて抽出された抽出物は、分配クロマトグラフィー等によって精製するか、あるいは常法により濃縮・蒸発乾固することが好ましい。イネ科植物のアルコール抽出物の精製に用いる分配クロマトグラフィーとしては、例えば、移動相として非水系溶媒を用いる順相クロマトグラフィー法が挙げられ、オープンカラム法、中圧カラム法、高速液体クロマトグラフィー等の公知の方法を適宜選択することができる。

イネ科植物のアルコール抽出物の分配クロマトグラフィーにおける移動相としては、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール等の１価の低級アルコール（好ましくは炭素原子数１〜４のもの）、及び１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の多価アルコール等の室温（２５℃）で液体であるアルコール；ジエチルエーテル、プロピルエーテル等のエーテル；酢酸ブチル、酢酸エチル等のエステル；アセトン、エチルメチルケトン等のケトン；ヘキサン；塩化メチレン；アセトニトリル；並びにクロロホルム等が挙げられ、これら溶媒の１種を単独で又は２種以上を組み合わせて用いることができる。複数の溶媒を組み合わせて移動相とする場合、分配クロマトグラフィーの実施中（イネ科植物のアルコール抽出物の精製中）において、複数の溶媒の混合比を一定にするイソクラクティックモードでも良く、あるいは該混合比を変化させるグラジエントモードでも良い。また、分配クロマトグラフィーにおける担体としては、目的とする有効成分を担持−放出できる担体であればいずれも用いることができるが、一般的にはシリカゲル、ポリアクリルアミドゲル、デキストランゲル等を挙げることができる。イネ科植物のアルコール抽出物の分配クロマトグラフィーにおける検出波長は、１７０〜３２０ｎｍであれば良く、好ましくは１９０〜２８０ｎｍである。

本発明のイネ科植物抽出物は、蛋白質を含んでいないか又は蛋白質を含んでいてもその含有量が比較的少ない、低蛋白なものである。特に、抽出源であるイネ科植物が小麦ふすまである場合、それから抽出されたイネ科植物抽出物は、蛋白質の含有量が非常に少ない低蛋白性である。本発明のイネ科植物抽出物における蛋白質の含有量は、抽出源であるイネ科植物の種類等にもよるが、本発明のイネ科植物抽出物中、好ましくは５質量％以下、更に好ましくは２質量％以下である。本発明のイネ科植物抽出物は低蛋白であるため、蛋白質の摂取量を制限する必要がある腎臓疾患患者等にも好適である。

本発明のイネ科植物抽出物は、そのコレステロール排出促進能を活かし、ヒト又は動物用の医薬品、飲食品、飼料等として、あるいはそれらを製造するために使用することができる。本発明のイネ科植物抽出物の形態は特に制限されず、例えば、イネ科植物のアルコール抽出物（前記一般式（Ｉ）で表されるアルキルレゾルシノール）を含む液状物（液体又は半液体）、該液状物中の液媒体（アルコール又は含水アルコール）を蒸発乾固して得られる乾固物又はその粉末、該乾固物又はその粉末をエタノール等のアルコールに溶解してなるアルコール溶液等が挙げられる。本発明はまた、前記本発明のイネ科植物抽出物を含有する医薬品、飲食品及び飼料を提供する。

本発明の医薬品、即ちコレステロール排出促進剤は、前記本発明のイネ科植物抽出物を有効成分として含有する血清コレステロール低下剤又は高コレステロール血症治療薬であり得る。また、本発明の医薬品は、経口及び非経口投与を含む任意の剤型で投与され得る。経口投与のための剤型としては、錠剤、被覆錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤のような固形製剤、あるいはエリキシロール、シロップ及び懸濁液のような液体製剤が挙げられる。非経口投与のための剤型としては、注射、輸液、経皮、経粘膜、経鼻、経腸、吸入、坐剤、ボーラス等が挙げられる。

本発明の飲食品又は飼料は、前記本発明のイネ科植物抽出物を有効成分として含有し、且つコレステロールの体外排出促進効果（体内吸収抑制効果）を企図して、その旨を表示した機能性飲食品、病者用飲食品、特定保健用飲食品、家畜用飼料、ペットフード等であり得る。本発明の飲食品又は飼料の形態は、特に限定されないが、例えば、飲料の形態としては、茶飲料、コーヒー飲料、乳飲料、果汁飲料、炭酸飲料、アルコール飲料、清涼飲料等が挙げられ、食品又は飼料の形態としては、固形、半固形又は液状であり得、錠剤形態、丸剤形態、カプセル形態、液剤形態、シロップ形態、粉末形態、顆粒形態等が挙げられる。具体的な食品の形態としては、パン類、麺類、ゼリー状食品や各種スナック類、焼き菓子、ケーキ類、チョコレート、ガム、飴、タブレット、カプセル、スープ類、乳製品、冷凍食品、インスタント食品、サプリメント、その他加工食品、調味料及びそれらの材料等が挙げられる。

本発明の医薬品、飲食品又は飼料は、必要に応じて、前記本発明のイネ科植物抽出物（前記一般式（Ｉ）で表されるアルキルレゾルシノール）以外の他の成分、例えば、他の有効成分及び／又は通常利用される添加物若しくは担体を含有していても良い。
医薬品の場合、前記他の成分としては、例えば、他の薬効成分、美容成分、栄養成分、ならびに賦形剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、界面活性剤、水溶性高分子、希釈剤、浸透圧調整剤、ｐＨ調整剤、乳化剤、防腐剤、緩衝剤、安定化剤、酸化防止剤、増粘剤、紫外線吸収剤、活性増強剤、着色剤、甘味料、矯味剤、矯臭剤、酸味料等が挙げられ、これらの１種を単独で又は２種以上を組み合わせて用いることができる。
飲食品又は飼料の場合、前記他の成分としては、例えば、他の飲食品材料、栄養成分、美容成分、他の機能性素材ならびに溶剤、油、軟化剤、乳化剤、防腐剤、安定剤、酸化防止剤、着色剤、保湿剤、増粘剤、光沢剤、甘味料、香料等の添加物等が挙げられ、これらの１種を単独で又は２種以上を組み合わせて用いることができる。

本発明の医薬品、飲食品又は飼料における前記本発明のイネ科植物抽出物（前記一般式（Ｉ）で表されるアルキルレゾルシノール）の摂取量は、それらの剤型や形態により異なるが、医薬品、飲食品及び飼料のいずれの場合も一日あたり０．０１ｇ〜１０ｇとなるように摂取することが好ましい。

本発明には、下記＜１＞ないし＜３＞の形態が含まれる。
＜１＞イネ科植物からアルコールを用いて抽出されたイネ科植物抽出物を含み、飲食品又は飼料に添加して使用される、コレステロールの体外排出促進能を有する飲食品又は飼料用添加剤。
＜２＞イネ科植物からアルコールを用いて抽出されたイネ科植物抽出物を生体（哺乳動物）に投与することによりコレステロールの体外排出を促進する方法。
＜３＞イネ科植物からアルコールを用いて抽出されたイネ科植物抽出物を食物に配合して生体（哺乳動物）に摂取させることにより、該食物中のコレステロールを糞便と共に体外へ排出することを促進する方法。

以下、実施例及び試験例を挙げて、本発明を更に詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例及び試験例により制限されるものではない。

〔実施例〕
下記＜抽出精製法＞により、前記一般式（Ｉ）で表されるアルキルレゾルシノールを含有するイネ科植物抽出物（小麦抽出物）を得た。このイネ科植物抽出物の組成は次の通り。
・１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−ペンタデシルベンゼン（Ｃ１５：０）１．２質量％。
・１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−ヘプタデシルベンゼン（Ｃ１７：０）１０．９質量％。
・１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−ノナデシルベンゼン（Ｃ１９：０）３３．９質量％。
・１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−ヘンイコシルベンゼン（Ｃ２１：０）４６．４質量％。
・１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−トリコシルベンゼン（Ｃ２３：０）７．５質量％。
・１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−ペンタコシルベンゼン（Ｃ２５：０）０．１質量％。

＜抽出精製法＞
小麦ふすまに質量で５倍量のエタノールを添加して、６００ｒｐｍ、室温の条件で、１６時間撹拌抽出した。抽出物を濾過して不要物を除きエタノール抽出液を回収した後、エタノールを留去し、小麦ふすまのエタノール抽出物を得た。次いで、このエタノール抽出物を中圧クロマトグラフィーによって精製した。中圧クロマトグラフィー条件は下記の通りである。溶出開始後３１〜３６分に出現するピーク成分を回収して、溶媒留去し、前記一般式（Ｉ）で表されるアルキルレゾルシノールを含有するイネ科植物抽出物を得た。
（中圧クロマトグラフィーの条件）
・カラム：シリカゲル（インジェクトカラム３Ｌ、ハイフラッシュカラム５Ｌ、６０Å、４０μｍ、山善株式会社製）
・移動相：ヘキサン／酢酸エチル混合溶媒（体積比）＝９０／１０にて９分、８０／２０にて１５分、６０／４０にて１６分
・検出波長：２５４ｎｍ

尚、前記＜抽出精製法＞における小麦ふすまのエタノール抽出物の精製は、中圧クロマトグラフィーに代えて、ＨＰＬＣによって行うこともできる。その場合、エタノール抽出物にメタノールを添加して該エタノール抽出物の濃度が２００μｇ／ｍｌのメタノール添加液を調製し、該メタノール添加液を、孔径０．４５μｍのフィルターを通過させ、その通過分を、ＨＰＬＣの試料とする。ＨＰＬＣの条件は下記の通り。
（ＨＰＬＣの条件）
・カラム：シリカゲル（ＯＤＳ−８０Ａ、５μｍ、４．６×２５０ｍｍ、ジーエルサイエンス株式会社製）
・ガードカラム：ＯＤＳ−８０Ａ、５μｍ、４．６×５０ｍｍ、
・カラム温度：３０℃
・移動相：メタノール１００％
・検出波長：２１５ｎｍ

〔試験例１〕
実施例のイネ科植物抽出物について、下記試験により、高脂肪高ショ糖食負荷マウスのコレステロールへの影響を調べた。その結果を図１及び図２に示す。図１及び図２中、ＮＤは、普通食を摂餌したマウス群、ＨＦＨＳＤは、高脂肪高ショ糖食を摂餌したマウス群、ＨＦＨＳＤＡＲは、実施例のイネ科植物抽出物が添加された高脂肪高ショ糖食を摂餌したマウス群である。

＜コレステロール排出促進作用確認試験＞
普通食（ＮＤ）として、ＡＩＮ９３Ｍ（ミルクカゼイン使用）（オリエンタル酵母工業株式会社製）、高脂肪高ショ糖食（ＨＦＨＳＤ）として、Ｆ２ＨＦＨＳＤ（オリエンタル酵母工業株式会社製）を用意し、また別途、ＨＦＨＳＤに実施例のイネ科植物抽出物を０．５質量％添加したもの（ＨＦＨＳＤＡＲ）を用意した。C57BL/6JJmsSlc系統のマウス（４週齢の雄性、日本エスエルシー株式会社）を明期１２時間、暗期１２時間の明暗サイクル下（0:00点灯、12:00消灯）で２週間馴化飼育した後、これらのマウスをＮＤ摂餌群（全６ゲージで各ゲージ２匹）と、ＨＦＨＳＤ摂餌群（全６ゲージで各ゲージ２匹）と、ＨＦＨＳＤＡＲ摂餌群（全６ゲージで各ゲージ２匹）との３群に分け、１０週間自由摂食させた。その自由摂食期間後、各ゲージ中の１日分の全糞便を回収し、回収した糞便を乾燥機により４０℃で１６時間乾燥して乾燥糞便とした。５０μmol/ＬのＮａＣｌを０．２ｍｌ用意し、これに乾燥糞便０．１ｇを加えて懸濁させ、その懸濁液に２ｍｌのエタノールを加えて、ホモゲナイザーで乾燥糞便を粉砕した。この乾燥糞便の粉砕は、乾燥糞便を含む懸濁液の液温を８０℃に加温しつつこれを激しく振盪させることで行った。乾燥糞便の粉砕後、懸濁液を５８００×ｇで１５分間遠心し、その上清を採取し蒸発させて得た残渣に、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ-１００を２０質量％含有するイソプロパノールを０．２ｍｌ加えて該残渣の溶解液を得、Ｋｉｔ（和光純薬）を用いて該溶解液中のコレステロール量を測定した。

図１は、コレステロール排出促進作用確認試験における、各マウス群の体重当たりの糞便量（平均値）を示すグラフであり、図１中、ＮＤ（普通食摂餌群）は、平均値０．００７７１、標準誤差０．０００３７であり、ＨＦＨＳＤ（高脂肪高ショ糖食摂餌群）は、平均値０．００８４８、標準誤差０．０００３５であり、ＨＦＨＳＤＡＲ（実施例のイネ科植物抽出物が添加された高脂肪高ショ糖食摂餌群）は、平均値０．００８４８、標準誤差０．０００３９であった。
図２は、同試験における、各マウス群の糞便中のコレステロール量（平均値）を示すグラフであり、図２中、ＮＤは、平均値１２．９３７、標準誤差０．５０４であり、ＨＦＨＳＤは、平均値３０．５２０、標準誤差１．１８１あり、ＨＦＨＳＤＡＲは、平均値４２．０６７、標準誤差２．７１５であった。

図１から明らかなように、ＮＤ摂餌群、ＨＦＨＳＤ摂餌群及びＨＦＨＳＤＡＲ摂餌群の各群間で体重当たりの糞便量に実質的な差は無かった。またＨＦＨＳＤＡＲ摂餌群において、糞便中の胆汁酸量は増加していなかった。
これを踏まえて図２を見ると、ＨＦＨＳＤ摂餌群の糞便中のコレステロール量がＮＤ摂餌群のそれに比べて有意に増加していることから、ＨＦＨＳＤの継続的な摂取がコレステロールの体内吸収の原因となり得ることが明らかである。これは、ＨＦＨＳＤとして用いたＦ２ＨＦＨＳＤに、ＮＤとして用いたＡＩＮ９３Ｍには含まれていない牛脂及びラードが含まれていることに起因するものと推察される。
これに対し、図２から明らかなように、ＨＦＨＳＤＡＲ摂餌群の糞便中のコレステロール量はＨＦＨＳＤ摂餌群のそれに比べて有意に増加しており、このことから、ＨＦＨＳＤＡＲに含まれる実施例のイネ科植物抽出物がコレステロール排出促進作用を有することが明らかである。

〔試験例２〕
実施例のイネ科植物抽出物について、下記試験により、胆汁酸吸着能を評価した。その結果を図３に示す。尚、図３において、＊＊（アスタリスクが２つ）は、アスタリスクが付いていないもの（イネ科植物抽出物の添加量０ｍｇ、０.１ｍｇ、１ｍｇ）との間における有意差が有意水準ｐ＜０．０１で認められたことを示す。

＜胆汁酸吸着能確認試験＞
ＰＢＳ（ｐＨ７.４）及び胆汁酸（タウロコール酸）と、実施例のイネ科植物抽出物又はホスファチジルコリンとを含有する５種類の混合液を調製した。調製した混合液は、何れもＰＢＳの濃度０．１Ｍ及び胆汁酸の濃度２ｍＭで共通するが、イネ科植物抽出物の添加量が異なっており、該添加量は０ｍｇ、０.１ｍｇ、１ｍｇ、１０ｍｇ、２０ｍｇの５種類である。イネ科植物抽出物の添加量が０ｍｇの混合液には、ホスファチジルコリンをその濃度が０．６ｍＭとなるように添加した。
各混合液を超音波処理し、３７℃で２時間インキュベーションした後、室温（２５℃）にて回転数１３５００ｒｐｍで１５分間遠心分離し、その遠心分離後の上清を回収し、シリンジフィルター（０.２２μｍ）で濾過して濾液と残渣とに分け、該濾液中の胆汁酸の濃度（他の成分と結合していないフリーの胆汁酸の濃度）を測定した。各混合液につき４つのサンプルを用意し、各サンプルについて胆汁酸濃度を測定した（ｎ＝４）。

図３から明らかなように、実施例のイネ科植物抽出物の添加量が１０ｍｇ以上の系は、該添加量が１ｍｇ以下の系及びホスファチジルコリンが添加された系と比べて、他の成分と結合していないフリーの胆汁酸の濃度が有意に減少した。これは、胆汁酸に対して実施例のイネ科植物抽出物が一定量以上存在すると、両者の結合によるミセルの形成が促進され、そのミセルは前記混合液中で沈殿して前記残渣に含まれ、前記濾液から除かれることを示している。この結果から、実施例のイネ科植物抽出物が胆汁酸と結合する能力（胆汁酸吸着能）を有することが示唆された。実施例のイネ科植物抽出物において、胆汁酸と結合するのはアルキルレゾルシノールであると考えられる。

〔試験例３〕
実施例のイネ科植物抽出物について、下記試験により、胆汁酸−コレステロールミセル形成阻害能を評価した。その結果を図４に示す。尚、図４において、＊（アスタリスクが１つ）は、アスタリスクが付いていないもの（イネ科植物抽出物の添加量０ｍｇ、０.１ｍｇ、１ｍｇ）との間における有意差が有意水準ｐ＜０．０５で認められたことを示し、＊＊（アスタリスクが２つ）は、アスタリスクが付いていないものとの間における有意差が有意水準ｐ＜０．０１で認められたことを示す。

＜胆汁酸−コレステロールミセル形成阻害能確認試験＞
ＰＢＳ（ｐＨ７.４）及び胆汁酸（タウリルコール酸）と、実施例のイネ科植物抽出物又はホスファチジルコリンとを含有する６種類の混合液を調製した。調製した混合液は、何れもＰＢＳの濃度１５ｍＭ及び胆汁酸の濃度６．６ｍＭで共通するが、イネ科植物抽出物の添加量が異なっており、該添加量は０ｍｇ、０.１ｍｇ、１ｍｇ、４ｍｇ、８ｍｇ、１０ｍｇの６種類である。イネ科植物抽出物の添加量が０ｍｇの混合液には、ホスファチジルコリンをその濃度が２．４ｍＭとなるように添加した。
各混合液を超音波処理し、３７℃で１６時間インキュベーションした後、室温（２５℃）にて回転数１３５００ｒｐｍで１５分間遠心分離し、その遠心分離後の上清を回収し、シリンジフィルター（０.２２μｍ）で濾過して濾液と残渣とに分け、該濾液中のコレステロールの濃度（他の成分と結合していないフリーのコレステロールの濃度）を測定した。各混合液につき４つのサンプルを用意し、各サンプルについてコレステロール濃度を測定した（ｎ＝４）。

図４から明らかなように、実施例のイネ科植物抽出物の添加量が４ｍｇ以上の系は、該添加量が１ｍｇ以下の系及びホスファチジルコリンが添加された系と比べて、他の成分と結合していないフリーのコレステロールの濃度が有意に増加した。これは、胆汁酸に対して実施例のイネ科植物抽出物が一定量以上存在すると、胆汁酸とコレステロールとの結合によるミセルに取り込まれないコレステロールが増加することを示している（胆汁酸−コレステロールミセルは、前記混合液中で沈殿して前記残渣に含まれ、前記濾液から除かれる）。つまり、胆汁酸に対して実施例のイネ科植物抽出物が一定量以上存在すると、胆汁酸と該イネ科植物抽出物との結合によるミセルの形成が促進される一方で、胆汁酸とコレステロールとの結合によるミセルの形成が阻害されるということであり、その結果として、コレステロールの体外排出が促進されると考えられる。実施例のイネ科植物抽出物において、胆汁酸−コレステロールミセルの形成を阻害しているのはアルキルレゾルシノールであると考えられる。

Claims (4)

1. 小麦ふすまのアルコール抽出物を有効成分として含有するコレステロール排出促進用医薬組成物又は食品組成物。
2. アルキルレゾルシノールを含有する請求項１に記載のコレステロール排出促進用医薬組成物又は食品組成物。
3. 下記一般式（Ｉ）で表されるアルキルレゾルシノールを含有する請求項１又は２に記載のコレステロール排出促進用医薬組成物又は食品組成物。
   
4. 前記アルコール抽出物における蛋白質の含有量が５質量％以下である請求項１〜３のいずれか一項に記載のコレステロール排出促進用医薬組成物又は食品組成物。