JP6458168B2

JP6458168B2 - グレリンｏ−アシルトランスフェラーゼ阻害剤

Info

Publication number: JP6458168B2
Application number: JP2017553922A
Authority: JP
Inventors: スタンリーガルカ，クリストファー; ジェームスヘンブレ，エリック; アランホニグスキミット，ニコラス; アンジェレスマルティネス−グラウ，マリア; ルアノプラザ，ゲマ; ルビオ，アルムデナ
Original assignee: イーライリリーアンドカンパニー
Priority date: 2015-04-15
Filing date: 2016-04-13
Publication date: 2019-01-23
Anticipated expiration: 2036-04-13
Also published as: ES2715763T3; KR20170123693A; AR104672A1; JP2018511630A; AU2016247901A1; CN107428723A; CN107428723B; TWI589574B; US10093651B2; EP3283473B1; EP3283473A1; BR112017017835A2; EA201791992A1; WO2016168222A1; TW201704225A; IL253969A0; CA2976636A1; MX2017013073A; ZA201705675B; US20180086732A1

Description

本発明は、グレリンＯ−アシルトランスフェラーゼ（ＧＯＡＴ）を阻害するために有用な化合物、医薬組成物、及びＧＯＡＴ活性に関連する疾患を治療するための方法に関する。

ＧＯＡＴは、膜結合型Ｏ−アシルトランスフェラーゼ（ＭＢＯＡＴ）ファミリーの酵素に属する。それは、脂肪酸をデスアシルグレリンペプチドのＳｅｒ３残基に転移することによって、デスアシル−グレリン（非アシル型グレリンまたはＵＡＧとしても知られている）を生物学的に活性な形態であるアシル−グレリン（ＡＧ）に変換する。アシル−グレリンは、ヒト及びげっ歯類における食物摂取を増加させ、脂肪分泌を増加させることが示されている。ヒトへのＡＧの注入は、グルコース誘発インスリン分泌を抑制することも示されている。グレリン遺伝子の排除は、高脂肪食餌を与えたｏｂ／ｏｂマウスにおいてインスリン放出を増強して、グルコース不耐性を予防または改善することが示されている。

小分子ＧＯＡＴ阻害剤が文献に報告されている。ＷＯ２０１３／１２５７３２を参照されたい。

しかし、現在の肥満及び糖尿病の治療に対する可変の有効性及び応答を伴う肥満及び糖尿病の蔓延は、患者にとってより多くの治療選択肢が利用可能であることを要する。本発明は、ＧＯＡＴ阻害剤である特定の新規化合物を提供する。このような新しい化合物は、肥満の強力で効果的な治療の必要性に応えることができる。さらに、ＧＯＡＴ阻害剤はまた、体重増加または肥満の治療を目的とした食餌及び／または運動、他の治療薬または治療法に対する補助剤として体重増加または体重の再増加を減少させるのに有用であり得ると考えられている。同様に、ＧＯＡＴ阻害剤は、単独でまたは２型糖尿病のための他の治療と組み合わせて、２型糖尿病の治療に有用であり得る。

本発明は、以下の式の化合物であって、

式中、Ｒは、任意に−ＯＨで置換されている−Ｃ_１〜Ｃ_３アルキル基；−ＯＣ_１〜Ｃ_４アルキル基；ピラゾリル基、オキサゾリル基、チアゾリル基、またはチアジアゾリル基（ここで、ピラゾリル基、オキサゾリル基、またはチアゾリル基は、各々任意に−ＣＨ_３で１〜２回置換されていてもよい）；各々が任意に−Ｃｌで置換されていてもよい、ピリジニル基、ピリダジニル基、またはピラジニル基；及び任意に−ＯＣＨ_３で置換されているフェニル基から選択される、化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。

本発明は、本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩と、１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤とを含む、医薬組成物を提供する。さらなる実施形態では、組成物は、１つ以上の他の治療剤と組み合わせて使用される。

本発明のさらなる態様は、体重増加もしくは体重の再増加を減少させるか、または２型糖尿病もしくは肥満を治療する方法であって、本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩を、それを必要とする患者に投与することを含む方法を提供する。

本発明はまた、特に体重増加もしくは体重の再増加を減少させるためまたは２型糖尿病もしくは肥満の治療のための療法で使用するための、本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する。さらに、本発明は、体重増加もしくは体重の再増加を減少させるのにまたは２型糖尿病もしくは肥満の治療に使用するための、本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する。さらにまた、本発明は、体重増加もしくは体重再増加を減少させるためまたは２型糖尿病もしくは肥満の治療するための医薬の製造における、本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩の使用を提供する。

本発明はさらに、本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩をそれを必要とする患者に投与することを含む、虚血事象の後遺症を治療する方法を提供する。さらなる実施形態において、虚血事象は、心筋虚血または心虚血または脳虚血である。

さらに別の態様において、本発明は、治療に、特に虚血事象の後遺症を治療するために使用するための、本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する。さらにさらに、本発明は、虚血性事象の後遺症の治療に使用するための、本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する。さらに、本発明は、虚血性事象の後遺症を治療するための医薬の製造における、本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩の使用を提供する。さらなる実施形態において、虚血事象は、心筋虚血または心虚血または脳虚血である。

本発明はさらに、本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩を、それを必要とする患者に投与することを含む、嗜癖障害を治療する方法を提供する。さらなる実施形態では、嗜癖障害は、アルコール、喫煙、過食、または不法薬物の使用などの完了行動を含む。

本発明は、本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩を、それを必要とする患者に投与することを含む、嗜癖行動を促進するストレスの結果を改善する方法を提供する。さらなる実施形態では、嗜癖行動は、アルコール、喫煙、過食、または不法薬物の使用などの完了行動を含む。

本発明はまた、治療に、特に嗜癖障害を治療するための、本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する。よりさらには、本発明は、嗜癖障害を治療するのに使用するための、本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する。さらに、本発明は、嗜癖障害を治療するための医薬の製造における、本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩の使用を提供する。さらなる実施形態では、嗜癖障害は、アルコール、喫煙、過食、または不法薬物の使用などの完了行動を含む。

本発明はまた、療法において、特に嗜癖行動を促進するストレスの結果を改善するために使用するための、本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する。さらなる実施形態では、嗜癖障害は、アルコール、喫煙、過食、または不法薬物の使用などの完了行動を含む。さらに、本発明は、嗜癖行動を促進するストレスの結果を改善するのに使用するための、本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する。さらに、本発明は、嗜癖行動を促進するストレスの結果を改善するための医薬の製造における、本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩の使用を提供する。さらなる実施形態では、嗜癖行動は、アルコール、喫煙、過食、または不法薬物の使用などの完了行動を含む。

本発明はまた、本発明の化合物の合成に有用な中間体及びプロセスを包含する。

本明細書で使用する「治療する」（または「治療する」または「治療」）という用語は、既存の症状、状態または障害の進行または重症度を抑制、減速、停止または逆転させることを指す。

本明細書で使用される場合、用語「体重増加を減少させる」は、患者の体重の増加を少なくすることを指す。用語「体重の再増加を減少させる」は、体重減少後に体重のリバウンドを経験している患者の体重の増加を少なくすることを指す。体重の再増加は、食事、運動、行動の変更、または承認された療法によって達成された体重減少の停止後のリバウンド効果に起因する可能性がある。疑義を避けるために、本明細書で使用される場合、体重増加または体重再増加は、食物摂取または食習慣によって誘発された体重増加または体重再増加を指し、体液の蓄積、水分保持による体重、筋肉量、または炎症などの食物摂取に関連する体重増加を指さない。

本明細書で使用される「虚血性事象」とは、器官または身体部分への血液の供給が不十分であることを指す。血流の減少は、冒された器官または身体部分への酸素の供給を減少させる。虚血性事象は、虚血としても知られ得る。当業者は、虚血が身体の様々な器官または部分、例えば心筋虚血または心虚血などの心臓、または脳虚血などの脳に影響し得ることを知るであろう。

本明細書で使用される「嗜癖障害」は、個人が否定的な結果にもかかわらず制御することができない過剰な不適応行動を記載する。本発明に特に関連するものは、アルコール摂取、喫煙、過食、及び不法薬物の使用などの成果のある行動を伴う嗜癖障害である。本発明は、嗜癖障害を有する個体において調節不全である異常なインセンティブ及び報償神経基質を正常化する。ストレスは、しばしば病因及び嗜癖障害の維持における沈降剤である；本発明は、嗜癖行動を促進するストレスの結果を改善する方法を提供する。

本発明の化合物は、反応して薬学的に許容される塩を形成することができる。薬学的に許容される塩及びそれらを調製するための一般的な方法論は、当技術分野において周知である。例えば、Ｐ．Ｓｔａｈｌ，ｅｔａｌ．ＨａｎｄｂｏｏｋｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，ＳｅｌｅｃｔｉｏｎａｎｄＵｓｅ，２^ｎｄＲｅｖｉｓｅｄＥｄｉｔｉｏｎ（Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ，２０１１）、Ｓ．Ｍ．Ｂｅｒｇｅ，ｅｔａｌ．，“ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳａｌｔｓ，”ＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｖｏｌ．６６，Ｎｏ．１，Ｊａｎｕａｒｙ１９７７を参照されたい。

当業者は、本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩が、下記の（Ｉ）に＊で表される少なくとも１つのキラル中心を含むコアを含むことを理解するであろう。

本発明の好ましい化合物は、次式（ＩＩ）：

で表されるものまたはその薬学的に許容される塩である。

当業者は、特定の変数の選択によって、本発明の化合物において追加のキラル中心が生成され得ることを理解するであろう。本発明は、全ての個々のエナンチオマーまたはジアステレオマーならびにラセミ体を含む前記化合物のエナンチオマー及びジアステレオマーの混合物を考慮する。

当業者であれば、全てのキラル中心のカーン−インゴルド−プレローグ順位則（Ｒ）または（Ｓ）指定は、特定の化合物の置換パターンに依存して変化することも理解するであろう。単一のエナンチオマーまたはジアステレオマーは、キラル試薬で開始するか、または立体選択的または立体特異的合成技術によって調製することができる。あるいは、単一のエナンチオマーまたはジアステレオマーは、本発明の化合物の合成における任意の都合のよい時点で、標準的なキラルクロマトグラフィーまたは結晶化技術によって混合物から単離することができる。本発明の化合物の単一エナンチオマーは、本発明の好ましい実施形態である。

本発明の化合物は、好ましくは、経口投与のような様々な経路によって投与される医薬組成物として処方される。そのような医薬組成物及びそれを調製するためのプロセスは、当技術分野において周知である。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：ＴｈｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅｏｆＰｈａｒｍａｃｙ（Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ、ｅｔａｌ．、ｅｄｓ．、２１ｓｔｅｄ．、ＭａｃｋＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＣｏ．、２００５）を参照されたい。より特に好ましくは、下式で表される本発明の化合物であって、

式中、Ｒは、任意に−ＯＨで置換されている−Ｃ_１〜Ｃ_３アルキル基；−ＯＣ_１〜Ｃ_４アルキル基；ピラゾリル基、オキサゾリル基、チアゾリル基、またはチアジアゾリル基（ここで、ピラゾリル基、オキサゾリル基、またはチアゾリル基は、各々任意に−ＣＨ_３で１〜２回置換されていてもよい）；各々が任意に−Ｃｌで置換されていてもよい、ピリジニル基、ピリダジニル基、またはピラジニル基；及び任意に−ＯＣＨ_３で置換されているフェニル基から選択される、化合物、またはその薬学的に許容される塩と、１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤とを含む、医薬組成物である。

例示される本発明の化合物は全てＧＯＡＴ阻害剤であるが、ある種の化合物が好ましい。以下の段落では、そのような好ましい種を記載する：
ａ）Ｒが、任意に−ＯＨで置換されている−Ｃ_１〜Ｃ_３アルキル基；−ＯＣ_１〜Ｃ_４アルキル基；ピラゾリル基、オキサゾリル基、チアゾリル基、またはチアジアゾリル基（ここで、ピラゾリル基、オキサゾリル基、またはチアゾリル基は、各々任意に−ＣＨ_３で１〜２回置換されていてもよい）；各々が任意に−Ｃｌで置換されていてもよい、ピリジニル基、ピリダジニル基、またはピラジニル基；
または、任意に−ＯＣＨ_３で置換されているフェニル基である、
ｂ）Ｒが、ピラゾリル基、オキサゾリル基、チアゾリル基、またはチアジアゾリル基（ここで、ピラゾリル基、オキサゾリル基、またはチアゾリル基は、各々任意に−ＣＨ_３で１〜２回置換されていてもよい）；各々が任意に−Ｃｌで置換されていてもよい、ピリジニル基またはピラジニル基；及び任意に−ＯＣＨ_３で置換されているフェニル基である、
ｃ）Ｒは、ピラゾリル基、オキサゾリル基、チアゾリル基、またはチアジアゾリル基（ここで、ピラゾリル基、オキサゾリル基、またはチアゾリル基は、各々任意に−ＣＨ_３で１〜２回置換されていてもよい）である、
ｄ）Ｒは、ピラゾリル基、オキサゾリル基、チアゾリル基、またはチアジアゾリル基（ここで、ピラゾリル基、オキサゾリル基、またはチアゾリル基は、各々任意に−ＣＨ_３で１〜２回置換されていてもよい）である、
ｅ）Ｒは各々が任意に−Ｃｌで置換されていてもよい、ピリジニル基、ピリダジニル基、またはピラジニル基である、
ｆ）Ｒは任意に−ＯＣＨ_３で置換されているフェニル基である、
ｇ）Ｒは任意に−ＯＨ、−ＯＣＨ_３，または−ＯＣ（ＣＨ_３）_３で置換されている−ＣＨ_３である、
ｈ）Ｒは任意に−ＯＨで置換されている−ＣＨ_３である、
ｉ）Ｒは−ＯＣＨ_３または−ＯＣ（ＣＨ_３）_３である、
ｊ）Ｒはピラゾリル基である、
ｋ）Ｒは−ＣＨ_３で置換されているピラゾリル基である、
ｌ）本発明の化合物は遊離塩基である、
ｍ）本発明の化合物において−ＮＣ（Ｏ）Ｒに隣接するメチル置換基は、Ｓ配置にある。

本発明の好ましい実施形態は、以下の式の化合物であって、

式中、Ｒが、任意に−ＯＨで置換されている−Ｃ_１〜Ｃ_３アルキル基；−ＯＣ_１〜Ｃ_４アルキル基；ピラゾリル基、オキサゾリル基、チアゾリル基、またはチアジアゾリル基（ここで、ピラゾリル基、オキサゾリル基、またはチアゾリル基は、各々任意に−ＣＨ_３で１〜２回置換されていてもよい）；各々が任意に−Ｃｌで置換されていてもよい、ピリジニル基、ピリダジニル基、またはピラジニル基；及び任意に−ＯＣＨ_３で置換されているフェニル基から選択される、の化合物、またはその薬学的に許容される塩に関する。

本発明の別の好ましい実施形態は、以下の式の化合物であって、

式中、Ｒが、任意に−ＯＨで置換されている−ＣＨ_３；−ＯＣＨ_３または−ＯＣ（ＣＨ_３）_３；ピラゾリル基、オキサゾリル基、チアゾリル基、またはチアジアゾリル基（ここで、ピラゾリル基、オキサゾリル基、またはチアゾリル基は、各々任意に、−ＣＨ_３で１〜２回置換されていてもよい）；各々が任意に−Ｃｌで置換されていてもよいピリジニル基、ピリダジニル基、またはピラジニル基；及び任意に−ＯＣＨ_３で置換されているフェニル基から選択される、化合物、またはその薬学的に許容される塩に関する。

本発明の別の好ましい実施形態は、以下の式の化合物であって、

式中、Ｒが、ピラゾリル基、オキサゾリル基、チアゾリル基、またはチアジアゾリル基（ここで、ピラゾリル基、オキサゾリル基、またはチアゾリル基は、各々任意に−ＣＨ_３で１〜２回置換されていてもよい）；各々が任意に−Ｃｌで置換されていてもよい、ピリジニル基、ピリダジニル基、またはピラジニル基；及び任意に−ＯＣＨ_３で置換されているフェニル基から選択される、化合物、またはその薬学的に許容される塩に関する。

本発明の別の好ましい実施形態は、以下の式の化合物であって、

式中、Ｒが、ピラゾリル基、オキサゾリル基、チアゾリル基、またはチアジアゾリル基（ここで、ピラゾリル基、オキサゾリル基、またはチアゾリル基は、、各々任意に−ＣＨ_３で１〜２回置換されていてもよい）；各々が任意に−Ｃｌで置換されていてもよい、ピリジニル基またはピラジニル基；及び任意に−ＯＣＨ_３で置換されているフェニル基から選択される、化合物またはその薬学的に許容される塩に関する。

本発明の別の好ましい実施形態は、以下の式の化合物であって、

式中、Ｒが、ピラゾリル基、オキサゾリル基、チアゾリル基、またはチアジアゾリル基（ここで、ピラゾリル基、オキサゾリル基、またはチアゾリル基は、各々任意に−ＣＨ_３で１〜２回置換されていてもよい）から選択される、化合物またはその薬学的に許容される塩に関する。

本発明のさらに好ましい実施形態は、以下の式の化合物であって、

式中、Ｒが、各々が任意に−Ｃｌで置換されていてもよい、ピリジニル基、ピリダジニル基、またはピラジニル基から選択される、化合物、またはその薬学的に許容される塩に関する。

本発明の別の好ましい実施形態は、以下の式の化合物であって、

式中、Ｒが、任意に−ＯＣＨ_３で置換されているフェニル基である、化合物またはその薬学的に許容される塩に関する。

本発明の別の好ましい実施形態は、以下の式の化合物であって、

式中、Ｒが、任意に−ＯＨで置換されている−ＣＨ_３；−ＯＣＨ_３、及び
−ＯＣ（ＣＨ_３）_３から選択される、化合物またはその薬学的に許容される塩に関する。

本発明の別の好ましい実施形態は、以下の式の化合物であって、

式中、Ｒが、任意に−ＯＨで置換されている−ＣＨ_３である、化合物またはその薬学的に許容される塩に関する。

本発明の別の好ましい実施形態は、以下の式の化合物であって、

式中、Ｒが、−ＯＣＨ_３及び−ＯＣ（ＣＨ_３）_３から選択される、化合物またはその薬学的に許容される塩に関する。

本発明の特に好ましい実施形態は、以下の式の化合物、

またはその薬学的に許容される塩に関する。

本発明の別の特に好ましい実施形態は、以下の式の化合物、

またはその薬学的に許容される塩に関する。

本発明のさらに特に好ましい実施形態は、以下の式の化合物に関する。

本発明の化合物は、一般に、広い投与量範囲にわたって有効である。例えば、１日あたりの投与量は、約０．０３〜約３０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲内にある。いくつかの例では、上記範囲の下限を下回る投与量レベルは十分すぎるかもしれないが、他の場合には、より大きな用量が好ましい利益／リスクプロファイルを維持しながら使用され得るので、上記投与量範囲は、本発明の範囲を決して限定するものではない。実際に投与される化合物の量は、治療される状態、選択された投与経路、投与される実際の化合物または化合物、個々の患者の年齢、体重、及び応答、ならびに患者の症状の重症度を含む、関連する状況に照らして、医師によって決定されることが理解されるであろう。

糖尿病及び／または肥満の治療のための薬剤は、糖尿病及び／または肥満の治療のための他の薬剤と組み合わせることができることは、当該技術分野において周知である。本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩は、糖尿病または肥満の他の有効な治療と同時に、または連続的に併用投与することができる。本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩は、肥満手術、例えば胃バイパス手術または調節可能な胃バンディング術、のような承認された医療処置の後に、単独でまたは他の有効な治療と組み合わせて、同時にまたは連続的に投与することができる。

本発明の化合物またはその塩は、当技術分野で公知の様々な手順によって調製することができ、そのいくつかを以下のスキーム、調製及び実施例に例示する。記載された各経路の特定の合成工程は、異なる方法で、または異なるスキームからの工程と組み合わせて、本発明の化合物または塩を調製することができる。以下のスキーム中の各工程の生成物は、抽出、蒸発、沈殿、クロマトグラフィー、ろ過、研和、及び結晶化を含む、当技術分野で周知の従来の方法によって回収することができる。以下のスキームにおいて、他に示されない限り、全ての置換基は、先に定義した通りである。試薬及び出発物質は、当業者に容易に入手可能である。

さらに、以下のスキームに記載される特定の中間体は、１つ以上の窒素保護基を含み得る。可変の保護基は、特定の反応条件及び実施される特定の変換に依存して、それぞれの場合において同じであっても異なっていてもよい。保護及び脱保護の条件は、当業者に周知であり、文献に記載されている“Ｇｒｅｅｎｅ’ｓＰｒｏｔｅｃｔｉｖｅＧｒｏｕｐｓｉｎＯｒｇａｎｉｃＳｙｎｔｈｅｓｉｓ”，ＦｏｕｒｔｈＥｄｉｔｉｏｎ，ＰｅｔｅｒＧ．Ｍ．ＷｕｔｓａｎｄＴｈｅｏｄｏｒａＷ．Ｇｒｅｅｎｅ，ＪｏｈｎＷｉｌｅｙａｎｄＳｏｎｓ，Ｉｎｃ．２００７）。

以下のスキームにおいて、特定の立体化学的中心は不特定のままであり、特定の置換基は、明瞭化のために除去されているが、スキームの教示を限定することを意図するものでは決してない。単一のエナンチオマーまたはジアステレオマーは、キラル試薬で開始するか、立体選択的または立体特異的合成技術によって調製することができる。あるいは、単一のエナンチオマーまたはラセミ体を、選択的結晶化技術またはキラルクロマトグラフィーなどの方法によって、本発明の化合物の合成における任意の都合のよい時点で、標準キラルクロマトグラフィーまたは結晶化技術によって混合物から単離することができる（例えば、Ｊ．Ｊａｃｑｕｅｓ，ｅｔａｌ．，“Ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒｓ，Ｒａｃｅｍａｔｅｓ，ａｎｄＲｅｓｏｌｕｔｉｏｎｓ”，ＪｏｈｎＷｉｌｅｙａｎｄＳｏｎｓ，Ｉｎｃ．，１９８１、及びＥ．Ｌ．ＥｌｉｅｌａｎｄＳ．Ｈ．Ｗｉｌｅｎ，”ＳｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙｏｆＯｒｇａｎｉｃＣｏｍｐｏｕｎｄｓ”，Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，１９９４）。

本発明のいくつかの中間体または化合物は、１つ以上のキラル中心を有することができる。本発明は、全ての個々のエナンチオマーまたはジアステレオマーならびにラセミ体を含む前記化合物のエナンチオマー及びジアステレオマーの混合物を考慮する。少なくとも１つのキラル中心を含む本発明の化合物は、単一のエナンチオマーまたはジアステレオマーとして存在することが好ましい。単一のエナンチオマーまたはジアステレオマーは、キラル試薬で開始するか、立体選択的または立体特異的合成技術によって調製することができる。あるいは、単一のエナンチオマーまたはジアステレオマーを、標準的なキラルクロマトグラフィーまたは結晶化技術によって混合物から単離することができる。いくつかの状況において、エナンチオマーまたはジアステレオマーの溶出順序は、異なるクロマトグラフィーカラム及び移動相のために異なることがあることを当業者は理解するであろう。

特定の略語は以下のように定義される。「ＡＣＮ」はアセトニトリルを指し、「ＢＳＡ」はウシ血清アルブミンを指し、「ＤＣＣ」は１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミドを指し、「ＤＣＭ」はジクロロメタンを指し、「ＤＩＣ」は、ジイソプロピルカルボジイミドを指し、「ＤＩＰＥＡ」は、ジイソプロピルエチルアミンまたはＮ−エチル−Ｎ−イソプロピル−プロパン−２−アミンを指し、「ＤＭＡＰ」はジメチルアミノピリジンを指し、「ＤＭＦ」はジメチルホルムアミドを指し、「ＤＭＳＯ」はジメチルスルホキシドを指し、「ＥＤＣＩ」は、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩を指し、「ＥＤＴＡ」は、エチレンジアミン四酢酸を指し、「ｅｅ」はエナンチオマー過剰を指し、「ＥＬＩＳＡ」は、酵素結合免疫アッセイを指し、「ＥｔＯＡｃ」は酢酸エチルを指し、「ＥｔＯＨ」はエタノールまたはエチルアルコールを指し、「Ｅｘ」は例を指し、「ＦＢＳ」は、ウシ胎仔血清を指し、「ＨＡＴＵ」は、（ジメチルアミノ）−Ｎ、Ｎ−ジメチル（３Ｈ−［１，２，３］トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−３−イルオキシ）メタンイミニウムヘキサフルオロホスフェートを指し、「ＨＯＡｔ」は、１−ヒドロキシ−７−アゾベンゾトリアゾールを指し、「ＨＯＢｔ」は１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物を指し、「ＨＢＴＵ」は、２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェートを指し、「ＨＰＬＣ」は高速液体クロマトグラフィーを指し、「ＨＲＰ」は西洋ワサビペルオキシダーゼを指し、「ＩＣ_５０」は、その薬剤について可能な最大阻害応答の５０％を生じる薬剤の濃度ＩＣ_５０「ＬＣ−ＥＳ／ＭＳ」は、液体クロマトグラフィーエレクトロスプレー質量分析法を指し、「ｍｉｎ」は分または分（ｍｉｎｕｔｅｏｒｍｉｎｕｔｅｓ）を指し、「ＭｅＯＨ」はメタノールまたはメチルアルコールを指し、「ＭＳ」は質量分析法を指し、「ＯＡｃ」はアセテートを指し、「ＰＢＳ」はリン酸緩衝生理食塩水を指し、「ＰＧ」は保護基を指し、「Ｐｒｅｐ」は調製を指し、「ＰＹＢＯＰ（登録商標）」は、ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリピロリジノ−ホスホニウムヘキサフルオロホスフェートを指し、「ＰＹＢＲＯＰ（登録商標）」は、ブロモ−トリス−ピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェートを指し、「ＲＴ」は室温を指し、「ＳＣＸ」は強い陽イオン交換を指し、「ＳＦＣ」は、超臨界流体クロマトグラフィーを指し、「ＳＰＥ」は固相抽出を指し、「ＴＦＡ」はトリフルオロ酢酸を指し、ＴＭＢ」は３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジンを指し、「Ｔ_Ｒ」は保持時間を指す。

以下のスキームにおいて、他に示さない限り、全ての置換基は、先に定義した通りである。試薬及び出発物質は、当業者に容易に入手可能である。他のものは、既知の構造的に類似の化合物の合成に類似する有機及び複素環化学の標準的な技術、ならびに任意の新規手順を含む以下の調製及び実施例に記載の手順によって作製することができる。

スキーム１において、Ｒ^ｘは適切なアミン保護基である。アミン保護基は、当該技術分野において周知であり、かつ認識されており、カルバメート及びアミドを含み得る。当業者であれば、前記保護基を付加して除去するための代替の試薬及び手順を理解するであろう。

化合物（２）は、化合物（１）を、一塩化ヨウ素、Ｉ_２またはＮ−ヨードスクシンイミドなどのハロゲン化剤で処理することによって調製することができる。当業者であれば、ヘテロ芳香族ハロゲン化の多くの方法があることを認識するであろう。さらなる工程において、化合物（４）は、標準的なカップリング条件下、Ｐｄ（ＰＰｈ_３）_２Ｃｌ_２、Ｐｄ（ＯＡｃ）_２またはＰｄ_２（ｄｂａ）_３のようなパラジウム由来の有機金属試薬を利用して、ＣｕＩなどの触媒及びＥｔ_３Ｎ、ＤＩＰＥＡ、Ｋ_２ＣＯ_３、またはＣｓ_２ＣＯ_３などの塩基の存在下で、化合物（２）とアルキン（３）とをカップリングすることによって調製することができる。当業者は、ＣｕまたはＺｎのような金属から誘導される代替的なオルガノ金属試薬が存在することを認識するであろう。あるいは、化合物（３）の対応する遊離アミンを購入し、適切なアミン保護基で保護することができる。化合物（４）は、酸化白金のような遷移金属触媒の存在下での接触水素添加によって還元される。他の水素化触媒は当該技術分野において周知である。例えば炭素担持パラジウムまたはロジウム誘導体はアルキンを還元することが知られている。当業者は、エタノール中でのナトリウムまたは酸中の亜鉛、による処理を含む、アルキン還元のための他の方法があることを認識するであろう。次いで、保護基を、当該技術分野において周知の条件下、例えば酸性または塩基性条件下で除去して、化合物（５）を得ることができる。

化合物（７）は、化合物（５）と化合物（６）とを標準カップリング条件下で反応させることにより合成することができる。当業者は、カルボン酸とアミンとの反応から生じるアミド形成のための多くの方法及び試薬が存在することを認識するであろう。化合物（５）と化合物（６）とのカップリングは、適切なカップリング試薬及び適切なアミン塩基、例えばＤＩＰＥＡまたはトリメチルアミンの存在下で行うことができる。カップリング試薬には、ＤＣＣ、ＤＩＣ、ＥＤＣＩなどのカルボジイミド、ならびにＨＯＢｔ及びＨＯＡｔなどの他のカップリング試薬が含まれる。さらに、ＨＡＴＵ、ＨＢＴＵ、ＰＹＢＯＰ（登録商標）及びＰＹＢＲＯＰ（登録商標）などの非求核性アニオンのウロニウムまたはホスホニウム塩を、より伝統的なカップリング試薬の代わりに使用することができる。ＤＭＡＰなどの添加剤を使用して反応を促進することができる。あるいは、トリエチルアミンまたはピリジンなどの塩基の存在下、化合物（６）の置換アシルクロライドを用いて化合物（５）をアシル化することができる。

中間体（７）中の保護基Ｒ^ｘは、酸性条件または塩基性条件のような当該技術分野において周知の条件下で除去することができる。得られたアミン中間体を、化合物（７）の製造において先に記載したものを含む標準的なカップリング条件下で化合物（８）と反応させて式（Ｉ）の化合物を得ることができる。当業者は、トリエチルアミンなどの有機塩基の存在下、またはＤＭＡＰなどの触媒の存在下で酸塩化物と反応させることを含む、脱保護された化合物（７）から式（Ｉ）の化合物を調製する代替方法があるということを認識するであろう。

任意の工程において、式（Ｉ）の化合物の薬学的に許容される塩は、標準条件下で適切な溶媒中、式（Ｉ）の適切な遊離塩基と適切な薬学的に許容される酸との反応により形成することができる。さらに、このような塩の形成は、窒素保護基の脱保護の際に同時に起こり得る。そのような塩の形成は、当該技術分野において周知であり、かつ認識されている。

調製及び実施例
以下の調製及び実施例は、本発明をさらに例示し、本発明の化合物の典型的な合成を表す。試薬及び出発物質は容易に入手可能であるか、または当業者によって容易に合成され得る。調製物及び実施例は、限定ではなく例示として示されており、当業者によって様々な改変がなされ得ることが理解されるべきである。

本発明の化合物のＲまたはＳ配置は、Ｘ線分析及びキラルＨＰＬＣ保持時間との相関などの標準的な技術によって決定することができる。以下の調製と実施例の命名は、一般に、ＭＤＬＡＣＣＥＬＲＹＳ（登録商標）Ｄｒａｗバージョン４．１のＩＵＰＡＣ命名機能（ＩＵＰＡＣｎａｍｉｎｇｆｅａｔｕｒｅ）を使用して実施する。

ＬＣ−ＥＳ／ＭＳは、ＡＧＩＬＥＮＴ（登録商標）ＨＰ１１００液体クロマトグラフィーシステムで実施する。エレクトロスプレー質量分析測定（ポジティブモードで取得）は、ＨＰ１１００ＨＰＬＣに接続された質量選択検出器四重極質量分析（ＭａｓｓＳｅｌｅｃｔｉｖｅＤｅｔｅｃｔｏｒｑｕａｄｒｕｐｏｌｅｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒ）で実施する。ＬＣ−ＭＳ条件（低ｐＨ）：カラム：ＰＨＥＮＯＭＥＮＥＸ（登録商標）ＧＥＭＩＮＩ（登録商標）ＮＸＣ１８２．１×５０ｍｍ３．０ｍ；勾配：３分で５〜１００％Ｂ、次いで１００％Ｂ０．７５分間カラム温度：５０℃±１０℃；流速：１ｍＬ／分；溶媒Ａ：０．１％ギ酸を含む脱イオン水；溶媒Ｂ：０．１％ギ酸を含むＡＣＮ。代替ＬＣ−ＭＳ条件（低ｐＨ）：カラム：ＸＴＥＲＲＡ（登録商標）ＭＳＣ１８カラム２．１×５０ｍｍ、３．５μｍ；勾配：溶媒Ａの５％を０．２５分間、３分で溶媒Ｂの５％から１００％への勾配、及び１００％の溶媒Ｂを０．５分間、または３分で溶媒Ｂの１０％〜１００％及び溶媒Ｂの１００％で０．７５分間カラム温度：５０℃±１０℃；流速：１ｍＬ／分；溶媒Ａ：１０ｍＭ炭酸水素アンモニウムｐＨ９；溶媒Ｂ：ＡＣＮ；波長：２１４ｎｍ。

全ての分取逆相クロマトグラフィーは、質量選択検出器質量分析計及びＬＥＡＰ（登録商標）オートサンプラー／フラクションコレクターを備えたＡＧＩＬＥＮＴ（登録商標）１２００ＬＣ／ＭＳで実施する。高ｐＨ法は、１０×２０ｍｍのガードを備えた７５×３０ｍｍのＰＨＥＮＯＭＥＮＥＸ（登録商標）ＧＥＭＩＮＩ（登録商標）−ＮＸ、５μ粒度カラム上で実施する。流速８５ｍＬ／分。溶離液は、アセトニトリル中の１０ｍＭ重炭酸アンモニウム（ｐＨ１０）である。

ＷａｔｅｒｓＺＱ質量分析計及び２９９９８ダイオードアレイ検出器は、超臨界流体クロマトグラフィー（ＳＦＣ）の間に質量及びＵＶデータを取得するために使用する。補正質量（ｃｏｒｒｅｃｔｍａｓｓ）（エレクトロスプレーイオン化）及びＵＶ吸光度を示す物質が収集される。

調製１
５−ヨード−６−メチル−２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−４−アミン

ＭｅＯＨ（１．４ｍＬ）中の６−メチル−２−トリフルオロメチル−ピリミジン−４−アミン（４．１４ｇ、２３．３７ｍｍｏｌ）を含むフラスコに、ＤＣＭ（２０．１ｍＬ）中のヨウ素一塩化物（４．１４ｇ、２３．３７ｍｍｏｌ）の溶液を加える。混合物を室温で４８時間撹拌する。反応が完了したら、１０％亜硫酸ナトリウム水溶液（２００ｍＬ）を加える。得られた混合物をＥｔＯＡｃ（４×１００ｍＬ）で抽出し、有機相をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、ろ過し、真空下で濃縮して、粗標記化合物を淡黄色固体
（７．０ｇ、９９％）として得る。追加の精製をせずに材料を使用する。ＬＣ−ＥＳ／ＭＳｍ／ｚ３０３．８（Ｍ＋Ｈ）。

調製２
４−［２−［４−アミノ−６−メチル−２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−５−イル］エチニル］ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル

５−ヨード−６−メチル−２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−４−アミン（２．０５ｇ、６．７５ｍｍｏｌ）、４−エチニル−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１．４１ｇ、６．７５ｍｍｏｌ）、ビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）クロライド（２３９ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）及びヨウ化銅（Ｉ）（１３０ｍｇ、０．６８ｍｍｏｌ）を２０ｍＬのマイクロ波バイアルに入った１０ｍＬのＤＭＦ中でスラリーにしそして懸濁液中に窒素を５分間泡立てさせる。トリエチルアミン（１．８８ｍＬ、１３．５ｍｍｏｌ）を添加し、そして混合物にさらに５分間窒素を泡立たせ続ける。混合物を１００℃で６０分間マイクロ波で加熱する。混合物を室温に冷却し、飽和ＮａＣｌ水溶液（５００ｍＬ）に注ぐ。ＤＣＭで抽出し、ＭｇＳＯ_４で有機層を乾燥させ、ろ過し、真空下で濃縮する。得られた残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（５〜３５％ＥｔＯＡｃ：ヘキサン、４５分かけて）により精製する。精製画分を濃縮して乾燥させて、淡黄色固体として標記化合物（１．２５ｇ、４８％）を得る。ＬＣ−ＥＳ／ＭＳｍ／ｚ３８５．２（Ｍ＋Ｈ）。

調製３
ｔｅｒｔ−ブチル４−［２−［４−アミノ−６−メチル−２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−５−イル］エチル］ピペリジン−１−カルボキシレート

ｔｅｒｔ−ブチル４−［２−［４−アミノ−６−メチル−２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−５−イル］エチニル］ピペリジン−１−カルボキシレート（６．２８ｇ、１６．３４ｍｍｏｌ）と酸化白金（ＩＶ）（７４４ｍｇ、３．２７ｍｍｏｌ）とをＥｔＯＨ（１１０ｍＬ）溶液中で合わせる。あるいは、フラスコを排気して水素バルーン下、水素で充填し、系を水素で満たし、室温で１８時間撹拌する。混合物をケイソウ土でろ過し、熱ＥｔＯＨ（３０ｍＬ）、続いて２ＭＮＨ_３／ＭｅＯＨ（２０ｍＬ）ですすいだ。溶液を減圧下で濃縮し、標記化合物（６．１５ｇ、９７％）を白色固体として得る。追加の精製を行うことなく使用する。ＬＣ−ＥＳ／ＭＳｍ／ｚ３８９．２（Ｍ＋Ｈ）。

調製４
６−メチル−５−［２−（４−ピペリジル）エチル］−２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−４−アミン

ｔｅｒｔ−ブチル４−［２−［４−アミノ−６−メチル−２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−５−イル］エチル］ピペリジン−１−カルボキシレート（６．０７ｇ、１５．６３ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（２５ｍＬ）に溶解し、ＴＦＡ（１０ｍＬ、１３２．２５ｍｍｏｌ）を添加する。溶液を室温で４時間撹拌する。減圧下で混合物を濃縮し、得られた残渣をＤＣＭ（１５ｍＬ）に溶解し、ＤＣＭ（１００ｍＬ）、ＭｅＯＨ（１００ｍＬ）で溶離するＳＣＸカラム（５０ｇ）にかけ、所望の物質を２ＭＮＨ_３／ＭｅＯＨ（１００ｍＬ）で溶離する。メタノール性アンモニア画分を蒸発乾固して、標記化合物（４．４ｇ、９７％）をオフホワイトの固体として得た。追加の精製を行うことなく使用する。ＬＣ−ＥＳ／ＭＳｍ／ｚ２８９．２（Ｍ＋Ｈ）。

調製５
６−メチル−５−［２−（４−ピペリジル）エチル］−２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−４−アミン二塩酸塩

イソプロパノール（１．２６Ｌ）の５０℃の溶液にゆっくりとした定常流中で塩化アセチル（１８０．１ｍＬ）を加え、５０℃で３０分間撹拌する。調製３からのｔｅｒｔ−ブチル４−［２−［４−アミノ−６−メチル−２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−５−イル］エチル］ピペリジン−１−カルボキシレート（１８０．１ｇ、４６３．７ｍｍｏｌ）を少量ずつ添加し、１．５時間加熱を続ける。室温に冷却し、ジエチルエーテル（３．６Ｌ）を加える。ろ過により固体を集め、ジエチルエーテル（２×３００ｍＬ）で洗浄する。得られた固体を５０℃の真空オーブン中で一晩乾燥させて、白色の自由流動性粉末として標記化合物（１７４．０ｇ、９８％）を得る。追加の精製を行うことなく使用する。ＬＣ−ＥＳ／ＭＳｍ／ｚ２８９．２（Ｍ＋Ｈ）。

実施例１
ｔｅｒｔ−ブチルＮ−［（１Ｓ）−２−［４−［２−［４−アミノ−６−メチル−２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−５−イル］エチル］−１−ピペリジル］２−オキソ−エチル］カルバメート

６−メチル−５−［２−（４−ピペリジル）エチル］−２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−４−アミン（３．９ｇ、１３．５３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（２０ｍＬ）に溶解し；（２Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）プロパン酸（２．８ｇ、１４．８８ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（７．４６ｇ、５４．１１ｍｍｏｌ）、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（２．６３ｇ、１３．５３ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（７．０８ｍＬ、４０．５８ｍｍｏｌ）を加える。得られた混合物を室温で一晩撹拌する。反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液（５００ｍＬ）に注ぎ、ＤＣＭで抽出する。有機相をＭｇＳＯ_４で乾燥させ、ろ過し、真空下で濃縮し、シリカゲルでのクロマトグラフィー（１０−７５％ＥｔＯＡｃ：ヘキサン、４５分かけて）により精製し、溶媒除去後、標記化合物（４．６６ｇ、７５％）を白色泡状物として得る。ＬＣ−ＥＳ／ＭＳｍ／ｚ４６０．２（Ｍ＋Ｈ）。

実施例１の代替法
ｔｅｒｔ−ブチルＮ−［（１Ｓ）−２−［４−［２−［４−アミノ−６−メチル−２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−５−イル］エチル］−１−ピペリジル］２−オキソ−エチル］カルバメート

［１］ＤＣＭ（１．６Ｌ）中の（６−メチル−５−［（２−（４−ピペリジル）エチル］−２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−４−アミン二塩酸塩（１７０ｇ、４４２．４ｍｍｏｌ）、（２Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）プロパン酸（９２．１ｇ、４８６．６ｍｍｏｌ）の懸濁液にジイソプロピルエチルアミン（３０８．６ｍＬ、１７７０ｍｍｏｌ）を加え、淡黄色の懸濁液を得る。氷浴中で０℃に冷却し、（ジメチルアミノ）−Ｎ、Ｎ−ジメチル（３Ｈ−［１，２，３］トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−３−イルオキシ）メタンイミニウムヘキサフルオロホスフェート（１６７．３ｇ、４４２．４ｍｍｏｌ）を少量ずつ加える。鮮やかな黄色の懸濁液を０℃で３０分間撹拌し、攪拌しながら２時間室温まで温める。減圧下で約１Ｌに濃縮し、反応混合物をＥｔＯＡｃ（１Ｌ）で希釈し、飽和ＮＨ_４Ｃｌ水溶液（約５００ｍＬ）で分配する。有機層を分離し、さらに水層をＥｔＯＡｃ（２×５００ｍＬ）で抽出する。有機相を合わせ、飽和ＮＨ_４Ｃｌ水溶液（４×４００ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液（４００ｍＬ）、水（４００ｍＬ）、飽和ＮａＣｌ水溶液（４００ｍＬ）で洗浄する。ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮し、イソヘキサン（７５０ｍｌ）と共沸させて、追加の精製なしに使用するのに適している、標記化合物（２３７ｇ、９９％）を白色泡状物として得る。ＬＣ−ＥＳ／ＭＳｍ／ｚ４６０．３（Ｍ＋Ｈ）。キラル分析（ＳＦＣＭｉｎｉＧｒａｍ（登録商標）、１５％ＭｅＯＨ／ＣＯ２／０．２％イソプロピルアミン、５ｍＬ／分、１００ｂａｒ、３５℃、２２０ｎｍ）＞９８％ｅｅ。

調製６
（２Ｓ）−２−アミノ−１−［４−［２−［４−アミノ−６−メチル−２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−５−イル］エチル］−１−ピペリジル］プロパン−１−オン

ＤＣＭ（１５０ｍＬ）中にｔｅｒｔ−ブチルＮ−［（１Ｓ）−２−［４−［２−［４−アミノ−６−メチル−２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−５−イル］エチル］−１−ピペリジル］−１−メチル−２−オキソ−エチル］カルバメート（４．６６ｇ、１０．１４ｍｍｏｌ）を溶解させそしてトリフルオロ酢酸（７．６７ｍＬ、１０１．４ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を室温で一晩撹拌する。真空下で溶媒を濃縮し、残留物をＤＣＭ（２０ｍＬ）で再溶解させ、１００ｍＬのＤＣＭ、１００ｍＬのＭｅＯＨで溶離するＳＣＸカラム（５０ｇ）にかけ、所望の物質を２ＭＮＨ_３／ＭｅＯＨ（１００ｍＬ）で溶離する。メタノール性アンモニア画分を蒸発乾固して、標記化合物（３．５８ｇ、９８％）を白色泡状物として得る。追加の精製を行うことなく使用する。ＬＣ−ＥＳ／ＭＳｍ／ｚ３６０．２（Ｍ＋Ｈ）。

実施例２
Ｎ−［（１Ｓ）−２−［４−［２−アミノ−４−メチル−２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−５−イル］エチル］−１−ピペリジル］−１−メチル−２−オキソ−エチル］−２−メチル−ピラゾール−３−カルボキサミド

（２Ｓ）−２−アミノ−１−［４−［２−［４−アミノ−６−メチル−２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−５−イル］エチル］−１−ピペリジル］プロパン−１−オン（５６０ｍｇ、１．５６ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（３ｍＬ）を含有するＤＣＭ（２０ｍＬ）中に溶解し、１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−カルボン酸（２１６ｍｇ、１．７１ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（９６９ｍｇ、６．２３ｍｍｏｌ）、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（３０３ｍｇ、１．５６ｍｍｏｌ）、及びジイソプロピルエチルアミン（１．３６ｍＬ、７．８ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を室温で一晩撹拌する。反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液（２００ｍＬ）に注ぎ、ＤＣＭで抽出する。有機相をＭｇＳＯ_４で乾燥させ、ろ過し、真空下で濃縮し、シリカゲルによるクロマトグラフィー（０〜１０％ＭｅＯＨ：ＤＣＭ３０分かけて）にて精製し、溶媒除去後、白色の泡状物として標記化合物（６６５ｍｇ、９１％）を得る。ＬＣ−ＥＳ／ＭＳｍ／ｚ４６８．０（Ｍ＋Ｈ）。

以下の表１の実施例は、本質的に実施例２に記載の手順に従って、（２Ｓ）−２−アミノ−１−［４−［２−［４−アミノ−６−メチル−２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−５−イル］エチル］−１−ピペリジル］プロパン−１−オン及び適切に置換されているカルボン酸を使用して調製する。

実施例２の代替調製法
Ｎ−［（１Ｓ）−２−［４−［２−アミノ−４−メチル−２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−５−イル］エチル］−１−ピペリジル］−１−メチル−２−オキソ−エチル］−２−メチル−ピラゾール−３−カルボキサミド

［１］氷浴中でＤＣＭ（１．５Ｌ）中に懸濁させた（２Ｓ）−２−アミノ−１−［４−［２−［４−アミノ−６−メチル−２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−５−イル］エチル］−１−ピペリジル］プロパン−１−オン（１６８．０ｇ、３４２．０ｍｍｏｌ）、１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−カルボン酸（６４．７ｇ、５１３．０ｍｍｏｌ）、及びジイソプロピルエチルアミン（２４４．５ｍＬ、１４００ｍｍｏｌ）のスラリーに、内部温度を５〜１０℃に維持しながら、１−プロパンホスホン酸環状無水物（４１０．６ｍＬ、６８３．９ｍｍｏｌ）のゆっくりとした安定した流れを加える。２．５時間以上撹拌しながら室温まで温める。減圧下で約５００ｍＬに濃縮し、得られた残渣をＥｔＯＡｃ（２Ｌ）及び水（１Ｌ）で希釈し；層を分離し；水層をＥｔＯＡｃ（２×４００ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層を飽和ＮＨ_４Ｃｌ（５００ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液（１Ｌ）、水（５００ｍＬ）、飽和ＮａＣｌ水溶液（５００ｍＬ）で洗浄する。有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥させ、ろ過し、減圧下で蒸発させる。得られた残渣を酢酸イソプロピル（１８０ｍＬ）に溶解し、ヘプタン（１Ｌ）で処理し、７０℃で４時間加熱して白色粉末を放出させる。室温に冷却し、ろ過によって固体を集め、９：１ヘプタン：酢酸イソプロピル（１００ｍＬ）、続いてヘプタン（２×１００ｍＬ）で洗浄する。真空オーブン中、４５℃で一晩乾燥させて、標記化合物を白色粉末として得る（１１７ｇ、７３％）。ＬＣ−ＥＳ／ＭＳｍ／ｚ４６８．０（Ｍ＋Ｈ）。

実施例１９
Ｎ−［（１Ｓ）−２−［４−［２−アミノ−４−メチル−２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−５−イル］エチル］−１−ピペリジル］−１−メチル−２−オキソ−エチル］アセトアミド

（２Ｓ）−２−アミノ−１−［４−［２−［４−アミノ−６−クロロ−２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−５−イル］エチル］−１−ピペリジル］プロパン−１−オン（７０ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）、無水酢酸（１８４．１μＬ、１．９５ｍｍｏｌ）、及びＤＣＭ（３．９ｍＬ、０．０５Ｍ）中のＤＭＡＰ（１．２ｍｇ、０．０１ｍｍｏｌ）を使用して、本質的に実施例１に記載の手順に従って、標記化合物（４７．７ｍｇ、６７％）を調製する。ＥＳ／ＬＣ−ＭＳｍ／ｚ４０２．２（Ｍ＋１）。

実施例２０
メチルＮ−〔（１Ｓ）−２−〔４−〔２−〔４−アミノ−６−メチル−２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−５−イル〕エチル〕−１−ピペリジル〕−１−メチル−２−オキソ−エチル］カルバメート

（２Ｓ）−２−アミノ−１−［４−［２−［４−アミノ−６−メチル−２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−５−イル］エチル］−１−ピペリジル］プロパン−１−オン（４３．８ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（３ｍＬ）中に溶解し、ジメチルジカーボネート（２２．０μＬ、１８２．８μｍｏｌ）及びピリジン（３０μＬ、３６５．６μｍｏｌ）を加える。得られた混合物を室温で一晩撹拌し、飽和ＮａＣｌ水溶液（１００ｍＬ）に注ぎ、ＤＣＭ（３×３０ｍＬ）で抽出する。合わせた有機層を０．１ＮＨＣｌ（２×１００ｍＬ）、水（１００ｍＬ）、飽和ＮａＣｌ水溶液（１００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、ろ過し、減圧下で濃縮して、標記化合物をオフホワイトの固体（２２ｍｇ、４３％）として得る。ＬＣ−ＥＳ／ＭＳｍ／ｚ４１８．２（Ｍ＋Ｈ）。

実施例２１
Ｎ−［（１Ｓ）−２−［４−［２−アミノ−４−メチル−２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−５−イル］エチル］−１−ピペリジル］−１−メチル−２−オキソ−エチル］ピリジン−２−カルボキサミド塩酸塩

Ｎ−［（１Ｓ）−２−［４−［２−［４−アミノ−６−メチル−２−（トリフルオロメチル）ピリミジン−５−イル］エチル］−１−ピペリジル］−１−エチル］ピリジン−２−カルボキサミド（６９ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（１ｍＬ）中に溶解し、ＨＣｌ（ジオキサン中１Ｍ、５００ｍＬ）を加える。室温で１０分間撹拌し、次いで真空下で濃縮する。得られた残渣をＤＣＭ（１ｍＬ）、続いてＥｔ_２Ｏ（２ｍＬ）で粉砕する。得られた淡黄色固体をろ過して集め、標記化合物（７４ｍｇ、９８％）を得る。ＬＣ−ＥＳ／ＭＳｍ／ｚ４６５．２（Ｍ＋Ｈ）。

アッセイ
ＧＯＡＴは、ＵＡＧをＡＧに変換する主要な酵素である。ＧＯＡＴ及びグレリンの役割の概説については、ＫｒｉｓｔｙＭ．Ｈｅｐｐｎｅｒｅｔａｌ，ＴｈｅｇｈｒｅｌｉｎＯ−ａｃｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ−ｇｈｒｅｌｉｎｓｙｓｔｅｍ：ａｎｏｖｅｌｒｅｇｕｌａｔｏｒｏｆｇｌｕｃｏｓｅｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，ＣｕｒｒｅｎｔＯｐｉｎｉｏｎｉｎＥｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，Ｄｉａｂｅｔｅｓ＆Ｏｂｅｓｉｔｙ２０１１，１８：５０−５５；ＰｈｉｌｌｉｐＡ．Ｃｏｌｅｅｔａｌ．，ＧｌｕｃｏｓｅａｎｄＷｅｉｇｈｔＣｏｎｔｒｏｌｉｎＭｉｃｅｗｉｔｈａＤｅｓｉｇｎｅｄＧｈｒｅｌｉｎＯＡｃｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅＩｎｈｉｂｉｔｏｒ，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０１０Ｄｅｃｅｍｂｅｒ１７；３３０（６０１１）：１６８９−１６９２．ｄｏｉ：１０．１１２６／ｓｃｉｅｎｃｅ．１１９６１５４，ＭａｔｔｈｉａｓＨ．Ｔｓｃｈｏｐｅｔａｌ．，ＧａｓｔｒｉｃＯ−ａｃｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅａｃｔｉｖａｔｅｓｈｕｎｇｅｒｓｉｇｎａｌｔｏｔｈｅｂｒａｉｎ，ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ．２００８Ａｐｒｉｌ２９；１０５（１７）：６２１３−６２１４、及びＪｅｓｕｓＧｕｔｉｅｒｒｅｚ，ｅｔａｌ．，Ｇｈｒｅｌｉｎｏｃｔａｎｏｙｌａｔｉｏｎｍｅｄｉａｔｅｄｂｙａｎｏｒｐｈａｎｌｉｐｉｄｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ，ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ．，２００８Ａｐｒｉｌ２９，１０５（１７）：６３２０−６３２５を参照されたい。

ＧＯＡＴの役割は、ＧＯＡＴ遺伝子を欠くマウスで観察される表現型によって支持される。したがって、ＧＯＡＴの阻害は、循環ＡＧを低下させ、循環ＵＡＧを上昇させることが期待される。その結果、ＧＯＡＴ阻害剤治療後の総グレリンに対するＡＧの比（ＵＡＧ＋ＡＧ）は減少する。

インビトロ無細胞ヒトＧＯＡＴ酵素アッセイ
ヒトＧＯＡＴ遺伝子（受託番号：ＮＭ＿００１１００９１６）をｐＡＮ５１バキュロウイルス発現ベクターにサブクローニングする。バキュロウイルスストックは、供給業者、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ、ＵＳＡによって提供されたＢａｃ−ｔｏ−Ｂａｃプロトコルに従って調製される。５ｍＬのヒトＧＯＡＴバキュロウイルスストックを、２Ｌ三角フラスコ中、１×１０^６細胞／ｍＬの密度で、ＨｙＱＳＦＸ−Ｉｎｓｅｃｔ（商標）培地（ＨｙＣｌｏｎｅカタログ番号ＳＨ３０２７８．０２）中の５００ｍＬのＳｆ９細胞に添加する。ヒトＧＯＡＴ遺伝子感染Ｓｆ９細胞を含むフラスコを、プレート振とう機上、１２０ｒｐｍ、２８℃で４８時間置く。４８時間のインキュベーション後、細胞を４℃で１０分間、１，０００×ｇで遠心分離する。細胞ペレットを回収し、さらなる処理の準備ができるまで冷凍庫で−８０℃で保存する。

酵素アッセイのためのＧＯＡＴ酵素のミクロソーム膜の調製：
１グラムの細胞ペレットを９ｍＬの冷却した均質化緩衝液（５０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ、２５０ｍＭスクロース、ｐＨ７．５に調整し、０．２μｍＭｉｌｌｉｐｏｒｅフィルターで滅菌ろ過）に懸濁する。細胞懸濁液をＤｏｕｎｃｅガラスホモジナイザーに移す。細胞ペレットを氷上で４０ストロークでホモジナイズする。ホモジネートをＢｅｃｋｍａｎスイングバケットローターで４℃で１０分間３，０００ｒｐｍで遠心分離して、破砕されていない細胞を除去する。上清を回収し、４℃で１時間、４０，０００×ｇで遠心分離する。得られた膜ペレットをＤｏｕｎｃｅガラスホモジナイザーを用いてホモジナイゼーションバッファー中に懸濁させ、アッセイのために冷凍庫に−２０℃で保存する。ヒトＧＯＡＴ酵素膜調製物の長期保存のために、懸濁した膜を−８０℃冷凍庫に保存する。

ヒトＧＯＡＴ酵素アッセイプロトコル：
ＤＭＳＯ中で試験化合物を調製して、０．２ｍＭストック溶液を調製する。原液をＤＭＳＯ中で連続希釈して、９６ウェル丸底プレート中の１０μＭ〜０．５ｎＭの範囲の最終化合物濃度で１０点希釈曲線を得る。アッセイ緩衝液（５０ｍＭトリス中の０．０２％ＴＷＥＥＮ（商標）−２０、ｐＨ７．５／２５０ｍＭスクロース／１ｍｇ／ｍＬＢＳＡ／１０ｍＭＥＤＴＡ）中で酵素及び基質溶液を調製する。対応する低タンパク質結合３８４ウェルプレートの列Ａ〜Ｎの各ウェルに希釈化合物（１μＬ）を加える。ヒトデスアシル−グレリン−ビオチン（ＣＰＣＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＩｎｃ．、最終６．０μＭ）、オクタノイル−コエンザイムＡ（ＣｏＡ）（Ｓｉｇｍａ、最終６０μＭ）、及びＡＧ特異抗体（ＷＯ２００６／０９１３８１）（最終１．０μｇ／ｍＬ）よりなるヒトＧＯＡＴ基質ミックス（１０μＬ）を化合物に添加した。アッセイ緩衝液（９μＬ）中で調製されたＧＯＡＴ−Ｈｉｓ／ｓｆ９酵素調製物を、プレート含有基質及び試験化合物の各ウェルに加えて、最終濃度０．０１μｇ／ｍＬとし、反応を開始させる。穏やかに回転する振動装置で室温で１時間、混合物をインキュベートする。全てのウェルに４Ｍ塩酸グアニジン（２０μＬ）を添加し、混合し、３時間インキュベートして反応を停止する。

ＰＢＳ（４０μＬ）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）ブロッキング緩衝液中の２％熱不活性化ＦＢＳで３時間ブロッキングすることによりＥＬＩＳＡプレート（ＳＴＲＥＰＴＡＶＩＤＩＮＳＰＥＣＴＲＡＰＬＡＴＥＴＭ（商標）３８４、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を調製する。ブロッキング緩衝液をＥＬＩＳＡプレートから吸引し、ブロッキング緩衝液（２３μＬ）を縦列１〜２４、横列Ａ〜Ｎに加える。アシルグレリン標準曲線の横列Ｏ及びＰは取っておく。反応混合物（２μＬ）をＥＬＩＳＡプレートに加える。２．５μＭで始まる０．２Ｍグアニジン塩酸塩を含むブロッキング緩衝液中で連続２倍希釈により１０点標準曲線（ビオチン標識オクタノイルグレリン）を調製する。反応混合物またはビオチン標識ＡＧ標準をＥＬＩＳＡプレートで４℃で一晩インキュベートする。翌日、プレートを洗浄バッファー（０．１％ＴＷＥＥＮ（商標）２０／ＰＢＳ、各洗浄サイクルでウェルあたり１００μＬ）で３回洗浄する。ＡＧ特異的抗体（ＷＯ２００６／０９１３８１）（ブロッキング緩衝液中に０．５μｇ／ｍＬの２５μＬ）を各ウェルに加え、室温で１時間インキュベートする。前の手順と同様に、洗浄バッファーでプレートを３回洗浄する。ブロッキング緩衝液で３０００倍に希釈したプロテインＧ−ＨＲＰ（２５μＬ）（ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｉｏｔｅｃｈ）を添加し、室温で１時間インキュベートする。前の手順と同様に、洗浄バッファーで３回後半を洗浄する。各ウェルにＴＭＢ試薬（２５μＬ）（Ｋｉｒｋｅｇａａｒｄ＆ＰｅｒｒｙＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｉｎｃ．）を添加し、２０分間発色させ、１Ｍリン酸（ウェルあたり２５μＬ）で停止させる。ＥＮＶＩＳＩＯＮ（登録商標）Ｍｕｌｔｉｌａｂｅｌプレートリーダーを使用してプレートを４５０ｎｍで読み取る。適合した標準曲線に対してＡＧレベルを計算し、阻害率を計算する。１０点阻害曲線をプロットし、ＡＣＴＩＶＩＴＹＢＡＳＥ（登録商標）（バージョン７．３．２．１）を用いてＩＣ_５０値を得るために４パラメータロジスティック方程式を当てはめる。

本質的に上記のプロトコルに従い、本明細書の実施例の全ての化合物を試験し、１μＭ未満のインビトロ無細胞ヒトＧＯＡＴ酵素アッセイのＩＣ_５０を示した。以下の本発明の例示化合物を基本的に上記のように試験し、以下の表２に示すように以下の活性を示した。

表２のデータは、表２の化合物がインビトロで精製ＧＯＡＴ酵素活性を阻害することを示している。

化合物処理群及びビヒクル処理群におけるＡＧの比の変化を比較することは、ＧＯＡＴ酵素によるＵＡＧのＡＧへの動的処理に起因するインビボでのＧＯＡＴ酵素阻害の程度を反映する。本明細書のインビボでの薬力学的研究において、ビヒクル及び化合物処理群における血漿及び胃におけるＡＧ及びＵＡＧのレベルは、これら２つの分析物に特異的にＥＬＩＳＡによって測定される。各試料の総グレリンレベルは、これらのＥＬＩＳＡ測定によるＡＧとＵＡＧの合計として計算される。総グレリンに対するＡＧの比は、各試料中のＡＧのレベルを、同じ試料中の総グレリンのレベルで割った値によって定義される。ビヒクル処置群におけるＡＧ、ＵＡＧ、及びＡＧと総グレリンとの比を計算し、１００％として設定する。次いで、化合物で処理した群におけるこれらのパラメーターの相対的変化を計算して、試験化合物の有効性を決定する。

ＧＯＡＴ阻害剤のインビボ用量依存３日ＢＩＤ試験：Ｅ
動物と治療：
９週齢のＨａｒｌａｎ（Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）からのＣ５７ＢＬ／６雄マウスを購入する。１２時間の明／暗サイクル（２２００時間点灯）を備えた温度制御（２４℃）施設でマウスを個別に収容し、標準的な齧歯類用固形飼料（ｄｉｅｔ２０１４、Ｈａｒｌａｎ）及び水に自由にアクセスできるようにする。通常、研究の時点で１０〜１３週齢のマウスを使用する。実験の０日目に、マウスを処置群（Ｎ＝７／群）にランダム化し、各群に同様の平均体重にさせる。１日目及び２日目に、ビヒクル（１％ヒドロキシエチルセルロース、０．２５％ＴＷＥＥＮ（商標）８０、０．０５％の消泡剤）またはビヒクル中で調製した試験化合物を、午前７時及び午後７時に強制経口投与による種々の用量の懸濁液として動物を処置する。３日目に、動物を断食させ、それらをきれいなケージに移し、ビヒクルまたは試験化合物を経口胃管栄養法により午前８時に再び投与する。同じ日の午後１時に、血液を採取するために斬首によって動物を殺す。採血と血漿処理の詳細については、採血と血漿からのグレリンの抽出の項を参照されたい。

採血：
新しく調製した防腐剤（４ｍＭのＰＥＦＡＢＬＯＣ（登録商標）［４−（２−アミノエチル）ベンゼンスルホニルフルオリド塩酸塩］、７２ｍＭＮａＣｌ、５８ｍＭＮａＦ、０．０３２Ｎ塩酸、ｐＨ３．０）６００μＬ（Ｖ_防腐剤として定義）を含む予め秤量したＥＤＴＡチューブに約６００μＬの血液を集め、直ちに混合する。チューブを再度秤量し、氷上に置く。この採血手順を使用して各試料の正確な血液量を正確に決定するために、各マウスの血液の重量は、以下の式を使用して計算される。

げっ歯類の血液の密度は１．０６ｇ／ｍＬと仮定されていることに留意されたい。

採血後１５分以内に、試料を４℃、５０００ｒｐｍで８分間遠心分離する。１Ｎ塩酸（６５μＬ）を含む５ｍＬのガラス管に血漿（６５０μＬ）を除去し、混合し、氷上に置く。

ＳＥＰ−ＰＡＫ（登録商標）カラムによるグレリン抽出：
ＡＧ及びＵＡＧを、ＳＥＰ−ＰＡＫ（登録商標）Ｃ_１８カラムを用いて血漿から抽出し、ＥＬＩＳＡを行う前に干渉を除去する。ＳＥＰ−ＰＡＫ（登録商標）Ｃ_１８カラムによるＡＧ及びＵＡＧペプチドの固相抽出は、真空マニホールド（ＷａｔｅｒｓＣｏｒｐ）または蠕動ポンプを用いて行うことができる。試料ＳＥＰ−ＰＡＫ（登録商標）カラム抽出手順が、個々のマウスから得られた血漿試料に独立して適用される。一般的な抽出プロトコルは以下のように説明される。

ＳＥＰ−ＰＡＫ（登録商標）カラム抽出のプロトコル全体に使用される全ての溶液は、氷冷状態でなければならない。ＳＥＰ−ＰＡＫ（登録商標）カラム（ＷＡＴ０５４９６０、ＷａｔｅｒｓＣｏｒｐ、ＭｉｌｆｏｒｄＭＡ）を９９．９％ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ（１００ｍＬのＡＣＮ／０．１ｍＬのＴＦＡの溶液１ｍＬ）で湿らせる。圧力をかけて流速を約１ｍＬ／分に調整し、カラム床から液体を除去するが、カラムをいつでも乾燥させないようにする。液体がカラムから除去されたら、圧力を止める。３％ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ（水９７ｍＬ、ＡＣＮ３ｍＬ、ＴＦＡ０．１ｍＬ、の１ｍＬ）でカラムを平衡させる。圧力をかけて流速を約１ｍＬ／分に調整し、カラム床から液体を除去するが、カラムを乾燥させない。約６５０μＬの酸性化された血漿（Ｖ_カラムに添加した血漿として定義）を氷冷０．１％ＴＦＡ１．４ｍＬに希釈する。前のステップから希釈された全ての酸性化された血漿をカラムにロードする。圧力をかけて流速を約０．５ｍＬ／分に調整し、試料がカラムを通過し、グレリンペプチドがカラムの樹脂に吸収されるようにする。カラムは乾燥させない。３％ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ（水９７ｍＬ、ＡＣＮ３ｍＬ、ＴＦＡ０．１ｍＬの０．９ｍＬ）で洗浄する。圧力をかけて流速を約１ｍＬ／分に調整して、カラム床から液体を除去するが、カラムを乾燥させない。洗浄をもう２回繰り返す。６０％ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ（水４０ｍＬ、ＡＣＮ６０ｍＬ、ＴＦＡ０．１ｍＬ、の１ｍＬ）で溶出する。各カラムの下に回収チューブを置き、流量を約０．５ｍＬ／分に調整してカラムに液体を押し込み、回収チューブに溶出液を集める。すぐにドライアイスで試料を凍結する。ＥＬＩＳＡアッセイが行われるまで、ｓｐｅｅｄ−ｖａｃ（Ｍｏｄｅｌ＃ＳＣ１１０Ａ、Ｓａｖａｎｔ）で試料を凍結乾燥し、−２０℃で保存する。

グレリンのＥＬＩＳＡアッセイ：
１００μＬの１μｇ／ｍＬの、ＰＢＳ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中のグレリンのアシル化及び非アシル化型の両方の中間ドメインと認識される、抗体（ＷＯ２００５／０２６２１１及びＷＯ２００６／０１９５７７）を用いて、９６ウェルＭＵＬＴＩ−ＡＲＲＡＹ（登録商標）ＭＳＤ（登録商標）プレート（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｅｒｇ、ＭＤ、カタログ番号Ｌ１５ＸＡ−３）をコートする。ウェルの被覆を確実にするためにプレートの側面をタップし、粘着プレートシーラーでシールし、ＲＴで一晩インキュベートする。内容物を捨てて、各ウェルにＰＢＳ（２５μＬ）（ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ、カタログ番号３７５２８）中のＢＬＯＣＫＥＲ（商標）カゼインを添加する。プレートを再シールし、室温で１時間プレートシェーカーに置く。

ＰＢＳ中のＢＬＯＣＫＥＲ（商標）カゼイン中のＳＥＰ−ＰＡＫ（登録商標）Ｃ１８カラム抽出物からの凍結乾燥保存血漿試料を再溶解させ（各試料に４００μＬ、この容量はＶ_再溶解として定義される）、ボルテックスミキサーでよく混合し、４５〜６０分間氷上でインキュベートする。プレートから内容物を捨て、再溶解された血漿試料を各ウェルに２５μＬで加える。８０００ｐｇ／ｍＬで始まり、合計８つの濃度について連続１：４希釈を行うアシルグレリン及び非アシル化グレリン標準曲線を調製する。各ウェルに２５μＬを加えて、調製した標準液をブロックプレートに２連で加える。プレートをシールし、ＲＴにてプレートシェーカー上で２時間インキュベートする。

プレートの内容物を捨て、０．１％ＴＷＥＥＮ（商標）２０（ＰＢＳ−Ｔ）を含むＰＢＳ（１５０μＬ）で３回洗浄する。ＭＳＤ（登録商標）ＳＵＬＦＯ−ＴＡＧ（商標）（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）で標識したアシルグリレリン特異的抗体（ＷＯ２００６／０９１３８１）または非アシル化グレリン特異的抗体（ＷＯ２００６／０５５３４７）を０．０５％ＴＷＥＥＮ（商標）２０を含有する０．２×ブロッカーカゼイン中で０．０５μｇ／ｍＬに希釈する（二次抗体溶液と称する）。最終洗浄液を除去し、ＡＧまたはＵＡＧを特異的に認識する二次抗体溶液（各ウェルに２５μＬ）を加える。プレートを再シールし、プレートシェーカー上で室温で１時間インキュベートし、最後にＰＢＳ−Ｔ（１５０μＬ／ウェル）で３回洗浄する。

最後の洗浄液を捨て、１×ＭＳＤ（登録商標）リードバッファー（１５０μＬ／ウェル）と置き換える。ＭＳＤ（登録商標）ＳＥＣＴＯＲ（登録商標）Ｉｍａｇｅｒ６０００アナライザー（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）を使用して、プレート上の電極に結合したＭＳＤ（登録商標）ＳＵＬＦＯ−ＴＡＧ（商標）ラベルの活性化によって生成された電気化学発光シグナルを読み取る。ＭＳＤ（登録商標）ソフトウェアによって生成されたそれぞれの標準曲線に基づいて、アシルレグリンまたは非アシル化グレリンの濃度を計算する。測定されたアシルグレリンまたは非アシル化グレリンレベルに希釈係数を掛けることによって、各試料の実際の血漿中濃度を決定する。各血漿試料の希釈係数は、以下の式で計算される。

結果：
実施例２の化合物の３日間の投与は、それぞれ０．１、０．３、１、３、及び１０ｍｇ／ｋｇにおいて、血漿ＡＧを４０％、６０％、５６％、６３％、及び６３％減少させ、ＵＡＧをそれぞれ２．１０、２．２２、３．５７、３．４９、及び３．７８倍増加させる（結果は以下の表を参照）。０．１、０．３、１，３、及び１０ｍｇ／ｋｇでの投与は、ビヒクル処置対照動物と比較した場合に、総グレリン比に対するＡＧでそれぞれ５７、６２、７９、８２、及び８２％の減少をもたらす。

結果は、実施例２の化合物がＧＯＡＴノックアウトマウスに示されるように、インビボでＡＧ産生を抑制し、循環中のＵＡＧを上昇させることを実証する。

以下に、本願の当初の特許請求の範囲に記載された発明を付記する。
［１］以下の式の化合物またはその薬学的に許容される塩：

式中、Ｒは、任意に−ＯＨで置換されている−Ｃ _１〜Ｃ _３アルキル基；−ＯＣ _１〜Ｃ _４アルキル基；ピラゾリル基、オキサゾリル基、チアゾリル基、またはチアジアゾリル基（ここで、ピラゾリル基、オキサゾリル基、またはチアゾリル基は、各々任意に−ＣＨ _３で１〜２回置換されていてもよい）；各々が任意に−Ｃｌで置換されていてもよい、ピリジニル基、ピリダジニル基、またはピラジニル基；及び任意に−ＯＣＨ _３で置換されているフェニル基から選択される。
［２］Ｒが、任意に−ＯＨで置換されている−ＣＨ _３；−ＯＣＨ _３または−ＯＣ（ＣＨ _３） _３；ピラゾリル基、オキサゾリル基、チアゾリル基、またはチアジアゾリル基（ここで、ピラゾリル基、オキサゾリル基、またはチアゾリル基は、各々任意に、−ＣＨ _３で１〜２回置換されていてもよい）；各々が任意に−Ｃｌで置換されていてもよいピリジニル基、ピリダジニル基、またはピラジニル基；及び任意に−ＯＣＨ _３で置換されているフェニル基から選択される、［１］に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
［３］Ｒが、ピラゾリル基、オキサゾリル基、チアゾリル基、またはチアジアゾリル基（ここで、ピラゾリル基、オキサゾリル基、またはチアゾリル基は、各々任意に−ＣＨ _３で１〜２回置換されていてもよい）；各々が任意に−Ｃｌで置換されていてもよい、ピリジニル基またはピラジニル基；及び任意に−ＯＣＨ _３で置換されているフェニル基から選択される、［１］または［２］に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
［４］メチル置換基を有する炭素原子の立体配置が以下の（Ｓ）である、

［１］〜［３］のいずれかに記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
［５］以下の式の［１］〜［４］のいずれかに記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。

［６］以下の式の［１］〜［５］のいずれかに記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。

［７］以下の式の［１］〜［６］のいずれかに記載の化合物。

［８］［１］〜［７］のいずれかに記載の化合物またはその薬学的に許容される塩と、１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤とを含む、医薬組成物。
［９］１つ以上の他の治療剤と組み合わされる、［８］に記載の医薬組成物。
［１０］［１］〜［７］のいずれかに記載の化合物またはその薬学的に許容される塩を、それを必要とする患者に投与することを含む、体重増加を減少させる方法。
［１１］［１］〜［７］のいずれかに記載の化合物またはその薬学的に許容される塩を、それを必要とする患者に投与することを含む、体重の再増加を減少させる方法。
［１２］［１］〜［７］のいずれかに記載の化合物またはその薬学的に許容される塩を、それを必要とする患者に投与することを含む、肥満を治療する方法。
［１３］［１］〜［７］のいずれかに記載の化合物またはその薬学的に許容される塩を、それを必要とする患者に投与することを含む、２型糖尿病を治療する方法。
［１４］療法に使用するための、［１］〜［７］のいずれかに記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
［１５］体重増加を減少させるのに使用するための、［１］〜［７］のいずれかに記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
［１６］体重の再増加を減少させるのに使用するための、［１］〜［７］のいずれかに記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
［１７］肥満の治療に使用するための、［１］〜［７］のいずれかに記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
［１８］２型糖尿病の治療に使用するための、［１］〜［７］のいずれかに記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
［１９］体重増加を減少させるための医薬の製造における、［１］〜［７］のいずれかに記載の化合物またはその薬学的に許容される塩の使用。
［２０］体重の再増加を減少させるための医薬の製造における、［１］〜［７］のいずれかに記載の化合物またはその薬学的に許容される塩の使用。
［２１］２型糖尿病を治療するための医薬の製造における、［１］〜［７］のいずれかに記載の化合物またはその薬学的に許容される塩の使用。
［２２］肥満を治療するための医薬の製造における、［１］〜［７］のいずれかに記載の化合物またはその薬学的に許容される塩の使用。

Claims

以下の式の化合物またはその薬学的に許容される塩：

式中、Ｒは、任意に−ＯＨで置換されている−Ｃ_１〜Ｃ_３アルキル基；−ＯＣ_１〜Ｃ_４アルキル基；ピラゾリル基、オキサゾリル基、チアゾリル基、またはチアジアゾリル基（ここで、ピラゾリル基、オキサゾリル基、またはチアゾリル基は、各々任意に−ＣＨ_３で１〜２回置換されていてもよい）；各々が任意に−Ｃｌで置換されていてもよい、ピリジニル基、ピリダジニル基、またはピラジニル基；及び任意に−ＯＣＨ_３で置換されているフェニル基から選択される。
Ｒが、任意に−ＯＨで置換されている−ＣＨ_３；−ＯＣＨ_３または−ＯＣ（ＣＨ_３）_３；ピラゾリル基、オキサゾリル基、チアゾリル基、またはチアジアゾリル基（ここで、ピラゾリル基、オキサゾリル基、またはチアゾリル基は、各々任意に、−ＣＨ_３で１〜２回置換されていてもよい）；各々が任意に−Ｃｌで置換されていてもよいピリジニル基、ピリダジニル基、またはピラジニル基；及び任意に−ＯＣＨ_３で置換されているフェニル基から選択される、請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
Ｒが、ピラゾリル基、オキサゾリル基、チアゾリル基、またはチアジアゾリル基（ここで、ピラゾリル基、オキサゾリル基、またはチアゾリル基は、各々任意に−ＣＨ_３で１〜２回置換されていてもよい）；各々が任意に−Ｃｌで置換されていてもよい、ピリジニル基またはピラジニル基；及び任意に−ＯＣＨ_３で置換されているフェニル基から選択される、請求項１または２に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
メチル置換基を有する炭素原子の立体配置が以下の（Ｓ）である、

請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
以下の式の請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
以下の式の請求項１〜５のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
以下の式の請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物。
請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩と、１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤とを含む、医薬組成物。
１つ以上の他の治療剤と組み合わされる、請求項８に記載の医薬組成物。
療法に使用するための、請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
体重増加を減少させるのに使用するための、請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
体重の再増加を減少させるのに使用するための、請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
肥満の治療に使用するための、請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
２型糖尿病の治療に使用するための、請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
体重増加を減少させるための医薬の製造における、請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩の使用。
体重の再増加を減少させるための医薬の製造における、請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩の使用。
２型糖尿病を治療するための医薬の製造における、請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩の使用。
肥満を治療するための医薬の製造における、請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩の使用。