JP6399530B1 - pH sensitive liposomes - Google Patents
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Abstract
【課題】リポソームを構成する特定の構成成分の含有比率を調整することで、所定の範囲内における任意のｐＨ条件下でリポソームのゼータ電位をプラスからマイナスへ移行させることのできるｐＨ感受性リポソームを提供する。
【解決手段】リン脂質と、ステロイド類と、アニオン性物質と、両イオン性物質とを、膜構成成分として含み、膜構成成分全体に対して、アニオン性物質を０〜２０質量％、及び前記両イオン性物質を５〜２０質量％含むことを特徴とする。そして、以下の各ｐＨ条件の水性媒体中に分散させたとき、リポソームのゼータ電位が、ｐＨ５以下でプラスであり、ｐＨ８以上でマイナスであり、そして、ｐＨ５〜８の間で、ｐＨ値の増加とともにプラスからマイナスへ移行するようにした。
【選択図】なしProvided is a pH-sensitive liposome capable of shifting the zeta potential of a liposome from plus to minus under an arbitrary pH condition within a predetermined range by adjusting the content ratio of a specific component constituting the liposome. To do.
SOLUTION: A phospholipid, a steroid, an anionic substance, and an amphoteric substance are contained as membrane constituents, and the anionic substance is added in an amount of 0 to 20% by mass with respect to the whole membrane constituents. It contains 5 to 20% by mass of an amphoteric substance. When dispersed in an aqueous medium having the following pH conditions, the zeta potential of the liposome is positive at pH 5 or lower, negative at pH 8 or higher, and increased in pH value between pH 5-8. At the same time, we shifted from positive to negative.
[Selection figure] None
Description
本発明は、ｐＨ感受性リポソームに関し、より詳細には、膜構成成分としてのアニオン性物質と、両イオン性物質とを所定の比率で含むｐＨ感受性リポソームに関する。 The present invention relates to a pH-sensitive liposome, and more particularly to a pH-sensitive liposome containing an anionic substance as a membrane constituent and an amphoteric substance in a predetermined ratio.
リポソームは、生物学的に活性な分子を細胞質内に送達するためのキャリアとして注目されている。リポソームを用いた薬剤送達における主な課題は、通常のリポソームでは膜融合性が低いため、細胞質内へ移行した後で、脂質二分子膜に内包された薬剤の放出が遅いことである。これを解決するため、生理的条件下では安定でありながら、細胞質内に移行した後、酸性条件下で不安定化されるｐＨ感受性リポソームが開発されている。例えば、ホスファチジルエタノールアミン型リン脂質を用いたリポソームは、ホスファチジルエタノールアミン型リン脂質がｐＨに応答して集合構造が転移し、酸性環境（ｐＨ５以下）で内包物を放出することが報告されている（例えば、非特許文献１参照）。 Liposomes are attracting attention as carriers for delivering biologically active molecules into the cytoplasm. The main problem in drug delivery using liposomes is that the release of drugs encapsulated in lipid bilayers is slow after transfer into the cytoplasm because normal liposomes have low membrane fusion. In order to solve this, pH-sensitive liposomes have been developed that are stable under physiological conditions but are destabilized under acidic conditions after moving into the cytoplasm. For example, liposomes using phosphatidylethanolamine-type phospholipids have been reported to release aggregates in an acidic environment (pH 5 or lower) as the aggregate structure of phosphatidylethanolamine-type phospholipids changes in response to pH. (For example, refer nonpatent literature 1).
一方、カチオン性両親媒性分子と、アニオン性両親媒性分子及び両イオン性両親媒性分子の少なくとも１種とを構成脂質として含むリポソームを水性媒体中に分散させたとき、酸性ｐＨ環境下で、該リポソームがプラスのゼータ電位を有し、かつ、塩基性ｐＨ環境下で、該リポソームがマイナスのゼータ電位を有しており、該ゼータ電位が、該分散液のｐＨの増加に伴って、プラスからマイナスへと変化すると、保持していた目的物質が放出されることが報告されている（例えば、特許文献１参照）。 On the other hand, when liposomes containing a cationic amphiphilic molecule and at least one of an anionic amphiphilic molecule and an amphoteric amphiphilic molecule as a constituent lipid are dispersed in an aqueous medium, The liposome has a positive zeta potential and, under a basic pH environment, the liposome has a negative zeta potential, and the zeta potential increases as the pH of the dispersion increases, It has been reported that the target substance that has been held is released when it changes from positive to negative (for example, see Patent Document 1).
しかしながら、このようなｐＨ感受性リポソームは一般的に不安定であるため、水性媒体中におけるゼータ電位がゼロとなるｐＨ値を所望の範囲に設定すること、すなわち、リポソームの膜融合性を、酸性から塩基性までの幅広い範囲内で任意に設定することが難しく、ｐＨ感受性リポソームが有する潜在的な用途への期待に応えられないという問題があった。 However, since such pH-sensitive liposomes are generally unstable, it is necessary to set the pH value at which the zeta potential in an aqueous medium becomes zero in a desired range, that is, to change the membrane fusion property of liposomes from acidic. There is a problem that it is difficult to set arbitrarily within a wide range up to basicity, and it cannot meet the expectations for potential uses of pH-sensitive liposomes.
本発明はかかる課題を解決するためになされたものであって、リポソームを構成する特定の構成成分の含有比率を調整することで、所定の範囲内における任意のｐＨ条件下でリポソームのゼータ電位をプラスからマイナスへ移行させることのできるｐＨ感受性リポソームを提供することにある。 The present invention has been made in order to solve such a problem, and by adjusting the content ratio of specific components constituting the liposome, the zeta potential of the liposome can be adjusted under any pH condition within a predetermined range. The object is to provide a pH-sensitive liposome capable of shifting from plus to minus.
本発明の１つの実施形態に係るｐＨ感受性リポソームは、リン脂質と、ステロイド類と、アニオン性物質と、両イオン性物質とを、膜構成成分として含み、膜構成成分全体に対して、アニオン性物質を０〜２０質量％、及び両イオン性物質を５〜２０質量％含むことを特徴とする。そして、以下の各ｐＨ条件の水性媒体中に分散させたとき、リポソームのゼータ電位が、ｐＨ５以下でプラスであり、ｐＨ８以上でマイナスであり、そして、ｐＨ５〜８の間で、ｐＨ値の増加とともにプラスからマイナスへ移行するようにした。 The pH-sensitive liposome according to one embodiment of the present invention includes a phospholipid, a steroid, an anionic substance, and an amphoteric substance as membrane constituents, and is anionic with respect to the whole membrane constituents. It contains 0 to 20% by mass of the substance and 5 to 20% by mass of the zwitterionic substance. When dispersed in an aqueous medium having the following pH conditions, the zeta potential of the liposome is positive at pH 5 or lower, negative at pH 8 or higher, and increased in pH value between pH 5-8. At the same time, we shifted from positive to negative.
本発明によれば、リポソームを構成する特定の構成成分の含有比率を調整することで、幅広い範囲の任意のｐＨ条件下でリポソームのゼータ電位をプラスからマイナスへ移行させることのできるｐＨ感受性リポソームを提供することができる。 According to the present invention, a pH-sensitive liposome capable of shifting the zeta potential of a liposome from positive to negative under a wide range of arbitrary pH conditions by adjusting the content ratio of a specific component constituting the liposome. Can be provided.
以下、本発明の好適な実施の形態について、以下の順序により説明する。
１． ｐＨ感受性リポソームの成分及び組成
２． ｐＨ感受性リポソームの製造方法
３． ｐＨ感受性とその発現機構
４． 形状、用途又は使用方法
Hereinafter, preferred embodiments of the present invention will be described in the following order.
1. 1. Components and composition of pH sensitive liposomes 2. Method for producing pH-sensitive liposomes 3. pH sensitivity and its expression mechanism Shape, application or usage
［ｐＨ感受性リポソームの成分及び組成］
（膜構成成分）
膜構成成分としては、リン脂質やステロイド類の他、リポソームにｐＨ感受性を付与するためのアニオン性物質及び両イオン性物質等があげられる。以下、順を追って説明する。
[Components and composition of pH-sensitive liposomes]
(Membrane component)
Examples of membrane constituents include phospholipids and steroids, as well as anionic substances and amphoteric substances for imparting pH sensitivity to liposomes. In the following, description will be given in order.
（１）リン脂質
リン脂質は、一般的に、分子内に長鎖アルキル基より構成される疎水基とリン酸基等で構成される親水基を持つ両親媒性物質である。リン脂質としては、例えば、ホスファチジルコリン（レシチン）、ホスファチジルグリセロール、フォスファチジン酸、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリンおよびホスファチジルイノシトールのようなグリセロリン脂質、スフィンゴミエリンのようなスフィンゴリン脂質、カルジオリピンのような天然または合成のジホスファチジル系リン脂質およびこれらの誘導体、さらには、これらを常法に従って水素添加したもの（例えば、水素添加大豆ホスファチジルコリン（ＨＳＰＣ））等を用いることができる。これらのうちでも、ＨＳＰＣ等の水素添加されたリン脂質等が好ましい。リン脂質の量は、膜構成成分全体中、通常、２０質量％以上であり、好ましくは４０質量％以上である。また、その他の膜構成成分の量は、通常、８０質量％以下であり、好ましくは６０質量％以下である。
(1) Phospholipids Generally, phospholipids are amphipathic substances having a hydrophobic group composed of a long-chain alkyl group and a hydrophilic group composed of a phosphate group or the like in the molecule. Phospholipids include, for example, glycerophospholipids such as phosphatidylcholine (lecithin), phosphatidylglycerol, phosphatidic acid, phosphatidylethanolamine, phosphatidylserine and phosphatidylinositol, sphingophospholipids such as sphingomyelin, natural or cardiolipin Synthetic diphosphatidyl phospholipids and derivatives thereof, and those obtained by hydrogenating them according to a conventional method (for example, hydrogenated soybean phosphatidylcholine (HSPC)) can be used. Among these, hydrogenated phospholipids such as HSPC are preferable. The amount of phospholipid is usually 20% by mass or more, preferably 40% by mass or more, based on the entire membrane constituent. Further, the amount of other membrane constituents is usually 80% by mass or less, preferably 60% by mass or less.
（２）ステロイド類
膜の構成成分として、上記リン脂質の他に、ステロイド類をさらに含むことができる。ステロイド類としては、ステロール、胆汁酸、プロビタミンＤ、ステロイドホルモンなど、ペルヒドロシクロペンタノフェナントレンを有する全てのステロイドが挙げられる。中でもステロール類を用いることが好ましい。ステロール類としては、例えば、エルゴステロール、コレステロール等が挙げられる。中でもコレステロールが好ましい。
ステロイド類の含有量は、特に制限されるものではないが、リポソームの構成成分全体に対して、０．０１質量％以上が好ましく、０．０５質量％以上がより好ましく、０．１質量％以上がさらに好ましい。また、３０質量％以下が好ましく、１０質量％以下がより好ましく、５質量％以下がさらに好ましい。ステロイド類は、分子集合体の安定化剤として作用することができる。ステロイド類は１種単独でも２種以上を組み合わせて使用してもよい。
(2) Steroids In addition to the phospholipid, steroids can be further included as a constituent component of the membrane. Examples of steroids include all steroids having perhydrocyclopentanophenanthrene such as sterols, bile acids, provitamin D, steroid hormones and the like. Of these, sterols are preferably used. Examples of sterols include ergosterol and cholesterol. Of these, cholesterol is preferred.
The content of steroids is not particularly limited, but is preferably 0.01% by mass or more, more preferably 0.05% by mass or more, and more preferably 0.1% by mass or more with respect to the total components of the liposome. Is more preferable. Moreover, 30 mass% or less is preferable, 10 mass% or less is more preferable, and 5 mass% or less is further more preferable. Steroids can act as stabilizers for molecular assemblies. Steroids may be used singly or in combination of two or more.
（３）アニオン性物質
リポソームにｐＨ感受性を付与するためのアニオン性物質は、ジアシルグリセロールヘミスクシネート、ジアシルグリセロールヘミマロネート、ジアシルグリセロールヘミグルタレート、ジアシルグリセロールヘミアジペート、ジアシルグリセロールヘミシクロヘキサン-１,４-ジカルボン酸、脂肪酸、例えば、オレイン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、ネルボン酸、ベヘン酸等が挙げられるが、これらに限定はされない。特に、常温で固体の飽和脂肪酸が好ましく、パルミチン酸やステアリン酸が特に好ましい。本明細書において、常温とは１０℃〜３０℃をいう。膜構成成分の全体量に対する上記アニオン性物質の含有割合は、０〜２０質量％であり、２．５質量％以上が好ましく、５質量％以上がさらに好ましい。一方、含有割合の上限は、２０質量％がよく、１５質量％が好ましい。アニオン性物質の含有割合が２０％を超えると膜構成成分を含む水性媒体中で乳化状態を維持することが難しく、白濁、凝集や沈殿が生じて不均質なリポソーム製剤となってしまう。
(3) Anionic substances Anionic substances for imparting pH sensitivity to liposomes are diacylglycerol hemisuccinate, diacylglycerol hemimalonate, diacylglycerol hemiglutarate, diacylglycerol hemiadipate, diacylglycerol hemicyclohexane-1, Examples include 4-dicarboxylic acid, fatty acids such as oleic acid, myristic acid, palmitic acid, stearic acid, nervonic acid, behenic acid, but are not limited thereto. In particular, saturated fatty acids that are solid at room temperature are preferred, and palmitic acid and stearic acid are particularly preferred. In this specification, normal temperature means 10 degreeC-30 degreeC. The content ratio of the anionic substance with respect to the total amount of the membrane constituent components is 0 to 20% by mass, preferably 2.5% by mass or more, and more preferably 5% by mass or more. On the other hand, the upper limit of the content is preferably 20% by mass, and preferably 15% by mass. When the content ratio of the anionic substance exceeds 20%, it is difficult to maintain an emulsified state in an aqueous medium containing a membrane constituent component, resulting in white turbidity, aggregation and precipitation, resulting in a heterogeneous liposome preparation.
（４）両イオン性物質
リポソームにｐＨ感受性を付与するための両イオン性物質としては、ラウリルベタイン（ラウリルジメチルアミノ酢酸ベタイン）等のＮ−アルキル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ酸ベタイン；コカミドプロピルベタイン、ラウラミドプロピルベタイン等の脂肪酸アミドアルキル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ酸ベタイン；ココアンホ酢酸ナトリウム、ラウロアンホ酢酸ナトリウム等のイミダゾリン型ベタイン；アルキルジメチルタウリン等のアルキルスルホベタイン；アルキルジメチルアミノエタノール硫酸エステル等の硫酸型ベタイン；アルキルジメチルアミノエタノールリン酸エステル等のリン酸型ベタインを挙げることができる。膜構成成分の全体量に対する上記両イオン性物質の含有割合は、５〜２０質量％であり、７質量％以上が好ましい。一方、含有割合の上限は、２０質量％がよく、１５質量％が好ましい。両イオン性物質の含有割合が２０質量％を超えるとリポソーム（脂質二重膜）構造を保つことが難しい。
(4) Amphoteric Substances As amphoteric substances for imparting pH sensitivity to liposomes, N-alkyl-N, N-dimethylamino acid betaines such as laurylbetaine (lauryldimethylaminoacetic acid betaine); cocamidopropyl betaine Fatty acid amide alkyl-N, N-dimethylamino acid betaines such as lauramidopropylbetaine; imidazoline type betaines such as sodium cocoamphoacetate and sodium lauroamphoacetate; alkylsulfobetaines such as alkyldimethyltaurine; sulfuric acids such as alkyldimethylaminoethanol sulfate Type betaine: Phosphoric acid type betaines such as alkyldimethylaminoethanol phosphates can be mentioned. The content ratio of the zwitterionic substance relative to the total amount of the membrane constituent components is 5 to 20% by mass, and preferably 7% by mass or more. On the other hand, the upper limit of the content is preferably 20% by mass, and preferably 15% by mass. When the content ratio of the zwitterionic substance exceeds 20% by mass, it is difficult to maintain the liposome (lipid bilayer) structure.
（５）その他の添加剤
本発明のｐＨ感受性リポソームは、必要に応じてその他の添加剤を含むことができる。例えば、酸化防止剤として、トコフェロール同族体、即ち、ビタミンＥなどが挙げられる。また、リポソーム表面を修飾する親水性高分子の脂質誘導体は、リポソームの構造安定を損なうものでなければ特に限定されず、例えば、ポリエチレングリコール、デキストラン、プルラン、フィコール、ポリビニルアルコール、合成ポリアミノ酸、アミロース、アミロペクチン、マンナン、シクロデキストリン、ペクチン、カラギーナン、及びこれらの誘導体が挙げられる。中でもポリエチレングリコールおよびポリエチレングリコール誘導体が望ましい。親水性高分子の脂質誘導体の分子量は、２００〜５万程度であることが好ましく、１０００〜１万程度であることがより好ましい。
(5) Other additives The pH-sensitive liposome of the present invention can contain other additives as required. For example, antioxidants include tocopherol homologues, that is, vitamin E. The lipid derivative of the hydrophilic polymer that modifies the liposome surface is not particularly limited as long as it does not impair the structural stability of the liposome. For example, polyethylene glycol, dextran, pullulan, ficoll, polyvinyl alcohol, synthetic polyamino acid, amylose , Amylopectin, mannan, cyclodextrin, pectin, carrageenan, and derivatives thereof. Of these, polyethylene glycol and polyethylene glycol derivatives are desirable. The molecular weight of the lipid derivative of the hydrophilic polymer is preferably about 200 to 50,000, more preferably about 1000 to 10,000.
（内包物質）
本発明のｐＨ感受性リポソームは、水溶性又は脂溶性の種々の目的物質を内包することができる。リポソームに目的物質を保持させる方法は、目的物質の種類等に応じて適宜選択すればよい。例えば目的物質が水溶性薬物の場合には、リポソーム製造時に薬物を水性媒体に溶解させて調製することができる。保持されなかった水溶性薬物はゲルろ過、超遠心分離または限外ろ過膜処理などにより目的物質を保持したリポソームと分離できる。他方、脂溶性薬物の場合には、膜構成成分が有機溶媒に溶けている状態で薬物を混合してリポソームを形成することにより、例えば二分子膜小胞体の疎水部に目的物質を保持させることができる。非限定的な具体例を挙げると、シスプラチンや５−フルオロウラシル等を含む抗がん剤の他、抗酸化剤、抗菌剤、抗炎症剤、血行促進剤、老化防止剤、ホルモン剤、ビタミン剤、ヘモグロビン、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ペプチド、タンパク質、ワクチン、発毛剤、保湿剤、色素類、美白剤、顔料、生理食塩水、水の１または２以上の組み合わせなどがある。
(Inclusion substance)
The pH-sensitive liposome of the present invention can encapsulate various water-soluble or fat-soluble target substances. The method for retaining the target substance in the liposome may be appropriately selected according to the type of the target substance. For example, when the target substance is a water-soluble drug, it can be prepared by dissolving the drug in an aqueous medium at the time of liposome production. The water-soluble drug that has not been retained can be separated from the liposome that retains the target substance by gel filtration, ultracentrifugation, or ultrafiltration membrane treatment. On the other hand, in the case of a fat-soluble drug, the target substance is held in the hydrophobic part of the bilayer vesicle, for example, by forming a liposome by mixing the drug with the membrane constituent dissolved in an organic solvent. Can do. Non-limiting specific examples include anti-cancer agents including cisplatin and 5-fluorouracil, as well as antioxidants, antibacterial agents, anti-inflammatory agents, blood circulation promoters, anti-aging agents, hormone agents, vitamin agents, Examples include hemoglobin, DNA, RNA, peptides, proteins, vaccines, hair growth agents, moisturizers, pigments, whitening agents, pigments, physiological saline, one or more combinations of water.
［ｐＨ感受性リポソームの製造方法］
本発明のｐＨ感受性リポソームの製造方法は特に制限されるものではなく、公知の方法に準じて製造することができる。例えば、リン脂質と、ステロイド類と、アニオン性物質と、両イオン性物質と、その他の任意成分とを含む混合脂質の粉末もしくは薄膜を水和させ分散させた後、高圧押出し（エクストルージョン）法、超音波照射法、撹拌（ボルテックスミキシング、ホモジナイザー）法、高速攪拌法、フレンチプレス法、凍結融解法、マイクロフルイダイザー法などを用いて、ｐＨ感受性リポソームを製造することができる。あるいは、上記混合脂質を有機溶媒に溶解させた溶液を水相に注入した後、エタノールまたはエーテルなどの有機溶媒を減圧または透析で除去してｐＨ感受性リポソームを製造することもできる。また、上記混合脂質をコール酸ナトリウム、ドデシル硫酸ナトリウム、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ、オクチルグリコシドまたはラウリルエーテルなどの非イオン性界面活性剤と共に水相に分散させてエマルジョンを形成させ、透析によって除去してｐＨ感受性リポソームを製造することもできる。その他、逆相蒸発法、インキュベーション法などを採用してｐＨ感受性リポソームを製造してもよい。
[Method for producing pH-sensitive liposome]
The method for producing the pH-sensitive liposome of the present invention is not particularly limited, and can be produced according to a known method. For example, a mixed lipid powder or thin film containing phospholipids, steroids, anionic substances, zwitterionic substances, and other optional components is hydrated and dispersed, followed by high pressure extrusion (extrusion) method. PH-sensitive liposomes can be produced using an ultrasonic irradiation method, a stirring (vortex mixing, homogenizer) method, a high-speed stirring method, a French press method, a freeze-thaw method, a microfluidizer method, and the like. Alternatively, a pH-sensitive liposome can be produced by injecting a solution obtained by dissolving the above mixed lipid in an organic solvent into an aqueous phase and then removing the organic solvent such as ethanol or ether by decompression or dialysis. In addition, the above mixed lipid is dispersed in an aqueous phase together with a nonionic surfactant such as sodium cholate, sodium dodecyl sulfate, Triton X, octyl glycoside or lauryl ether to form an emulsion, and removed by dialysis to remove pH-sensitive liposomes. Can also be manufactured. In addition, pH-sensitive liposomes may be produced by employing a reverse phase evaporation method, an incubation method, or the like.
なお、好ましい実施形態としては、図１に示す製造方法に基づいて、本発明のｐＨ感受性リポソームを製造することができる。以下、図１を参照しながら、本発明に係るｐＨ感受性リポソームの好ましい製造方法について説明する。 As a preferred embodiment, the pH-sensitive liposome of the present invention can be produced based on the production method shown in FIG. Hereinafter, a preferred method for producing the pH-sensitive liposome according to the present invention will be described with reference to FIG.
ステップＳ０１では、少なくとも１種のジオールと、少なくとも１種のポリオールとを加温条件下に混合し、これらを均質化してジオールとポリールとの混合物を調製する。膜構成成分を溶解するジオールとしては、１，２−アルカンジオール又は１，３−アルカンジオールが好ましい。１，２−アルカンジオール又は１，３−アルカンジオールとしては、１，２−プロパンジオール、１，２−ブタンジオール、１，２−ペンタンジオール、１，２−オクタンジオール、１，２−ヘキサンジオール、１，２−デカンジオール、１，３−ブチレングリコール、１，３−プロパンジオール、プロピレングリコール等が挙げられる。１，２−アルカンジオール又は１，３−アルカンジオールは、一種または二種以上を併用することができる。 In step S01, at least one diol and at least one polyol are mixed under warming conditions, and these are homogenized to prepare a mixture of diol and polyol. The diol that dissolves the film constituents is preferably 1,2-alkanediol or 1,3-alkanediol. As 1,2-alkanediol or 1,3-alkanediol, 1,2-propanediol, 1,2-butanediol, 1,2-pentanediol, 1,2-octanediol, 1,2-hexanediol 1,2-decanediol, 1,3-butylene glycol, 1,3-propanediol, propylene glycol and the like. 1,2-alkanediol or 1,3-alkanediol can be used alone or in combination of two or more.
また、ポリオールは、３価以上のポリオールであり、例えばトレハロース、スクロース、ソルボース、メレジトース、グリセロール、フルクトース、マンノース、マルトース、ラクトース、アラビノース、キシロース、リボース、ラムノース、ガラクトース、グルコース、マンニトール、キシリトール、エリスリトール、スレイトール、ソルビトール、ラフィノース等が挙げられる。好ましくは、ソルビトール、及びグリセロールである。 The polyol is a trivalent or higher polyol, such as trehalose, sucrose, sorbose, melezitose, glycerol, fructose, mannose, maltose, lactose, arabinose, xylose, ribose, rhamnose, galactose, glucose, mannitol, xylitol, erythritol, Examples include thritol, sorbitol, raffinose and the like. Preferably, sorbitol and glycerol are used.
ジオールとポリオールとの混合割合は、膜構成成分を均一に溶解しうる限り特に限定されないが、１：５〜５：１が好ましく、１：２〜２：１がさらに好ましく、ほぼ１：１が最も好ましい。また、ジオールとポリオールとのの使用量は、膜構成成分を溶解しうる限り特に限定されないが、膜構成成分の全質量に対して２０〜１００倍程度、好ましくは３０〜６０倍程度使用することで、生成したｐＨ感受性リポソームを安定化することができる。 The mixing ratio of the diol and the polyol is not particularly limited as long as the film constituents can be uniformly dissolved, but is preferably 1: 5 to 5: 1, more preferably 1: 2 to 2: 1, and almost 1: 1. Most preferred. The amount of the diol and polyol used is not particularly limited as long as the film constituent can be dissolved, but about 20 to 100 times, preferably about 30 to 60 times the total mass of the film constituent. Thus, the generated pH-sensitive liposome can be stabilized.
次に、ステップＳ０２において、均質化した状態の上記混合物に、膜構成成分を添加する。そして、添加した膜構成成分をジオールとポリオールとの混合物に溶解した混合物溶液を調製する。リン脂質等の各成分を別々に添加、混合してもよいが、あらかじめ全ての膜構成成分を混合しておきこれらを上記混合物に添加することが、可溶化の効率を上げるために好ましい。このとき、それぞれの膜構成成分の含有量は、上述した範囲内であれば特に限定されないが、アニオン性物質と両イオン性物質との含有比率が１：１〜１：３の範囲内であることが好ましい。 Next, in step S02, a film constituent component is added to the homogenized mixture. And the mixture solution which melt | dissolved the added film | membrane structural component in the mixture of diol and a polyol is prepared. Each component such as phospholipid may be added and mixed separately, but it is preferable to mix all the membrane constituent components in advance and add them to the mixture in order to increase the solubilization efficiency. At this time, the content of each membrane component is not particularly limited as long as it is within the above-described range, but the content ratio of the anionic substance and the amphoteric substance is in the range of 1: 1 to 1: 3. It is preferable.
ステップＳ０３では、ステップＳ０２で調製した混合物溶液と、あらかじめ８０℃〜８５℃で加温しておいた水性媒体とを混合する。このとき、混合物全体に対する水性媒体の添加量は、膜構成成分がリポソームを形成するための適切な濃度領域となるように調整する。 In step S03, the mixture solution prepared in step S02 is mixed with the aqueous medium that has been heated in advance at 80 to 85 ° C. At this time, the addition amount of the aqueous medium with respect to the whole mixture is adjusted so that the membrane component is in an appropriate concentration region for forming liposomes.
ステップＳ０４では、８０℃〜８５℃で膜構成成分が溶解している水性媒体を、室温付近まで急冷することでリポソームを生成させる。冷却方法は、特に限定されるものではないが、例えば、容器を、冷水を入れた浴槽内に入れる方法の他、容器内に混合物を入れた状態で当該容器を冷蔵庫等に入れる方法などを採用できる。冷却温度は、リポソームが生成する温度であれば限定されるものではない。 In step S04, the aqueous medium in which the membrane constituents are dissolved at 80 ° C. to 85 ° C. is rapidly cooled to around room temperature to generate liposomes. Although the cooling method is not particularly limited, for example, in addition to a method of putting a container in a bathtub containing cold water, a method of putting the container in a refrigerator or the like with a mixture in the container is adopted. it can. The cooling temperature is not limited as long as it is a temperature at which liposomes are generated.
そして、ステップＳ０５では、水性媒体中に白濁した状態で存在するリポソームをろ過やデカンテーションなど任意の方法で回収することができる。 And in step S05, the liposome which exists in the aqueous | water-based medium in the cloudy state can be collect | recovered by arbitrary methods, such as filtration and a decantation.
［ｐＨ感受性とその発現機構］
本実施形態のｐＨ感受性リポソームは、ｐＨ条件の異なる種々の水性媒体中に分散させたとき、そのゼータ電位が、ｐＨ５以下でプラスであり、ｐＨ８以上でマイナスであり、そして、ｐＨ５〜８の間で、ｐＨ値の増加とともにプラスからマイナスへ移行するという性質を有する。
[PH sensitivity and its expression mechanism]
When dispersed in various aqueous media having different pH conditions, the pH-sensitive liposome of this embodiment has a zeta potential that is positive at pH 5 or lower, negative at pH 8 or higher, and between pH 5 and 8. Thus, it has the property of shifting from plus to minus as the pH value increases.
ここで、水性媒体中に分散されたリポソーム粒子の荷電状態の指標として用いたゼータ電位は、粒子から充分に離れて電気的に中性である領域の電位をゼロと定義し、このゼロ点を基準として測った場合の、「滑り面」の電位と定義されている。微粒子の場合、ゼータ電位の絶対値が増加すれば、粒子間の反発力が強くなり粒子の安定性は高くなる。逆に、ゼータ電位がゼロに近くなると、粒子は凝集しやすくなる。そこで、ゼータ電位は分散された粒子の分散安定性の指標として用いられる（北原文雄、古澤邦夫、尾崎正孝、大島広行、「Ｚｅｔａ Ｐｏｔｅｎｔｉａｌゼータ電位：微粒子界面の物理化学」、サイエンティスト社、１９９５）。 Here, the zeta potential used as an indicator of the charge state of liposome particles dispersed in an aqueous medium is defined as zero in a region that is sufficiently neutral from the particle and electrically neutral, and this zero point is defined as zero. It is defined as the potential of the “sliding surface” when measured as a reference. In the case of fine particles, if the absolute value of the zeta potential increases, the repulsive force between the particles becomes stronger and the stability of the particles becomes higher. Conversely, when the zeta potential is close to zero, the particles tend to aggregate. Therefore, the zeta potential is used as an index of the dispersion stability of dispersed particles (Fumio Kitahara, Kunio Furusawa, Masataka Ozaki, Hiroyuki Oshima, “Zeta Potential Zeta Potential: Physical Chemistry of Fine Particle Interface”, Scientist, 1995).
従って、本実施形態のｐＨ感受性リポソームは、表面電荷が、ｐＨ５〜８の間でｐＨ値の増加とともにプラスからマイナスへ移行するという挙動を示すため、リポソーム分散液のｐＨが５以下の酸性条件下で目的物質を保持して安定に存在し、リポソーム分散液のｐＨが５〜８の間でゼータ電位がゼロになるｐＨ条件で不安定となり膜融合を起こして内包物を放出すると考えられる。ゼータ電位の測定方法としては公知の方法を用いることができる。例えば、帯電した粒子が分散している系に、外部から電場をかけると、粒子は電極に向かって泳動（移動）するが、その速度は粒子の荷電に比例するため、その粒子の泳動速度を測定することによりゼータ電位を測定することができる。電気泳動光散乱測定法は、別名レーザードップラー法と呼ばれ、泳動している粒子からの散乱光を観測することによって、ゼータ電位が求められる。 Accordingly, the pH-sensitive liposome of the present embodiment exhibits a behavior in which the surface charge shifts from plus to minus as the pH value increases between pH 5 and 8, so that the pH of the liposome dispersion is 5 or less under acidic conditions. It is considered that the target substance is stably present in the state, and becomes unstable under pH conditions in which the pH of the liposome dispersion is 5 to 8 and the zeta potential becomes zero, causing membrane fusion and releasing the inclusion. A known method can be used as a method for measuring the zeta potential. For example, when an external electric field is applied to a system in which charged particles are dispersed, the particles migrate (move) toward the electrode, but the speed is proportional to the charge of the particles. The zeta potential can be measured by measuring. The electrophoretic light scattering measurement method is also called a laser Doppler method, and the zeta potential is obtained by observing scattered light from the migrating particles.
［形状、用途又は使用方法］
本実施形態のｐＨ感受性リポソームは、水性媒体に分散させたとき、酸性ｐＨ環境下でプラスのゼータ電位を有し、かつ、塩基性ｐＨ環境下でマイナスのゼータ電位を有するといった、従来にないｐＨ応答挙動を示すことができる。近年、遺伝子や核酸誘導体などのマイナスに荷電した物質を細胞内へ導入する研究が行われている。本実施形態のｐＨ感受性リポソームは、ｐＨ５以下の酸性条件下でプラスの表面電荷を有するため、これらの物質を吸着することができ、ｐＨ５〜８の弱酸性から中性条件でこれらの物質を放出して細胞内へ導入するために用いることができる。また、形状についても特に制限はなく、粒子径が１００ｎｍ〜１０μｍの多重層リポソームであっても単層リポソームであってもよい。本実施形態のｐＨ感受性リポソームは、その用途によって適宜粒子径を調整することも可能である。例えば、生体内への投与を目的とするのであれば、２００ｎｍ以下の粒径に調整することが好ましい。具体的な粒子径の調整方法は、エクストルーダーを用いて、孔径の小さいフィルターを通過させることによって、粒子径の調節が可能である。粒子径が１００ｎｍ程度又はそれ以下の小さいサイズの単層リポソームはその大きさが均一であって熱力学的に安定であり、化粧料として用いた場合にも皮膚への浸透性が良好であるといわれている。
[Shape, application or usage]
The pH-sensitive liposome of this embodiment has a positive zeta potential under an acidic pH environment and a negative zeta potential under a basic pH environment when dispersed in an aqueous medium. Response behavior can be shown. In recent years, studies have been conducted to introduce negatively charged substances such as genes and nucleic acid derivatives into cells. Since the pH-sensitive liposome of this embodiment has a positive surface charge under acidic conditions of pH 5 or lower, these substances can be adsorbed, and these substances are released from weakly acidic conditions of pH 5 to 8 under neutral conditions. And can be used for introduction into cells. Moreover, there is no restriction | limiting in particular also about a shape, A monolayer liposome may be sufficient as a multilamellar liposome with a particle diameter of 100 nm-10 micrometers. The particle diameter of the pH-sensitive liposome of the present embodiment can be appropriately adjusted depending on its use. For example, if it is intended for administration into a living body, it is preferable to adjust the particle size to 200 nm or less. As a specific method for adjusting the particle diameter, the particle diameter can be adjusted by passing through a filter having a small pore diameter using an extruder. Small-sized unilamellar liposomes having a particle size of about 100 nm or less are uniform in size and thermodynamically stable, and have good skin permeability even when used as cosmetics. It is said.
以下の実施例は、本発明の１つの態様及び局面を実証し、さらに例示するために記載するものであり、本発明の範囲を限定していると解釈すべきではない。 The following examples are set forth to demonstrate and further illustrate one embodiment and aspect of the present invention and should not be construed as limiting the scope of the invention.
［実施例１］
プロパン−１，２−ジオール１０．０ｇにソルビトール１０．０ｇを加え、８０℃〜８５℃にて汎用撹拌機３５０ｒｐｍにて加温撹拌溶解し、均質化した。加温撹拌しているこの液に、ホスファチジルコリンを含む水添レシチン０．４１ｇ、コレステロール０．０９ｇ、パルミチン酸０．０５ｇ、ラウリルジメチルアミノ酢酸ベタイン０．１ｇを添加し、同様に撹拌溶解した。
[Example 1]
10.0 g of sorbitol was added to 10.0 g of propane-1,2-diol, and the mixture was homogenized by heating and stirring with a general-purpose stirrer at 350 rpm at 80 to 85 ° C. 0.41 g of hydrogenated lecithin containing phosphatidylcholine, 0.09 g of cholesterol, 0.05 g of palmitic acid, and 0.1 g of lauryl dimethylaminoacetic acid betaine were added to this liquid which was heated and stirred, and dissolved in the same manner.
上記で調製した混合物溶液に、予め、８０℃〜８５℃に加温した精製水を１００ｇになるよう加えて撹拌しながら混合し、１〜２時間汎用撹拌機３５０ｒｐｍで撹拌した。加温を停止し、撹拌しながら急冷し、室温程度まで冷却し生成したリポソームをろ過して回収した。 To the mixture solution prepared above, purified water heated to 80 ° C. to 85 ° C. in advance was added to 100 g and mixed with stirring, followed by stirring with a general-purpose stirrer at 350 rpm for 1 to 2 hours. The heating was stopped, the mixture was quenched with stirring, cooled to about room temperature, and the produced liposomes were collected by filtration.
［実施例２］
プロパン−１，２−ジオール１０．０ｇにグリセリン１０．０ｇを加え、８０℃〜８５℃にて汎用撹拌機３５０ｒｐｍにて加温撹拌し、均質化した。加温撹拌しているこの液に、ホスファチジルコリンを含む水添レシチン０．８２ｇ、コレステロール０．１８ｇ、ステアリン酸０．１ｇ、ラウリルジメチルアミノ酢酸ベタイン０．２ｇを添加し、同様に撹拌溶解した。
[Example 2]
10.0 g of glycerol was added to 10.0 g of propane-1,2-diol, and the mixture was homogenized by heating and stirring at 80 to 85 ° C. with a general-purpose stirrer at 350 rpm. 0.82 g of hydrogenated lecithin containing phosphatidylcholine, 0.18 g of cholesterol, 0.1 g of stearic acid, and 0.2 g of lauryldimethylaminoacetic acid betaine were added to this solution which was heated and stirred, and dissolved in the same manner.
上記で調製した混合物溶液に、予め、８０℃〜８５℃に加温した精製水を１００ｇになるよう加えて撹拌しながら混合し、１〜２時間ホモミキサーにて８，０００ｒｐｍで撹拌した。加温を停止し、撹拌しながら急冷し、室温程度まで冷却し生成したリポソームをろ過して回収した。 Purified water heated to 80 ° C. to 85 ° C. was added in advance to 100 g to the mixture solution prepared above and mixed with stirring, and stirred at 8,000 rpm with a homomixer for 1 to 2 hours. The heating was stopped, the mixture was quenched with stirring, cooled to about room temperature, and the produced liposomes were collected by filtration.
［実施例３］
プロパン−１，２−ジオール５．０ｇにグリセリン１０．０ｇを加え、８０℃〜８５℃にて汎用撹拌機５００ｒｐｍにて加温撹拌し、均質化した。加温撹拌しているこの液に、ホスファチジルコリンを含む水添レシチン０．４１ｇ、コレステロール０．０９ｇ、ラウリルジメチルアミノ酢酸ベタイン０．１ｇを添加し、同様に撹拌溶解した。上記で調製した混合物溶液に、予め、８０℃〜８５℃に加温した精製水を１００ｇになるよう加えて撹拌しながら混合し、エクストルーダーで処理した。
[Example 3]
10.0 g of glycerin was added to 5.0 g of propane-1,2-diol, and the mixture was homogenized by heating at 80 to 85 ° C. with a general-purpose stirrer at 500 rpm. 0.41 g of hydrogenated lecithin containing phosphatidylcholine, 0.09 g of cholesterol, and 0.1 g of lauryldimethylaminoacetic acid betaine were added to this solution which was heated and stirred, and similarly dissolved by stirring. Purified water previously heated to 80 ° C. to 85 ° C. was added to the mixture solution prepared above to 100 g, mixed with stirring, and treated with an extruder.
［実施例４］
プロパン−１，２−ジオール３０．０ｇにソルビトール１０．０ｇを加え、８０℃〜８５℃にて汎用撹拌機６００ｒｐｍにて加温撹拌溶解し、均質化した。加温撹拌しているこの液に、ホスファチジルコリンを含む水添レシチン０．４１ｇ、コレステロール０．０９ｇ、ラウリルジメチルアミノ酢酸ベタイン０．２ｇを添加し、同様に撹拌溶解した。上記で調製した混合物溶液に、予め、８０℃〜８５℃に加温した精製水を１００ｇになるよう加えて撹拌しながら混合し、エクストルーダーで処理した。
[Example 4]
10.0 g of sorbitol was added to 30.0 g of propane-1,2-diol, and the mixture was homogenized by heating and stirring with a general-purpose stirrer at 600 rpm at 80 to 85 ° C. 0.41 g of hydrogenated lecithin containing phosphatidylcholine, 0.09 g of cholesterol, and 0.2 g of lauryldimethylaminoacetic acid betaine were added to this solution which was heated and stirred, and dissolved in the same manner. Purified water previously heated to 80 ° C. to 85 ° C. was added to the mixture solution prepared above to 100 g, mixed with stirring, and treated with an extruder.
［実施例５］
１，３−ブチレングリコール１０．０ｇにグリセリン１０．０ｇを加え、８０℃〜８５℃にて汎用撹拌機６００ｒｐｍにて加温撹拌し、均質化する。加温撹拌しているこの液に、ホスファチジルコリンを含む水添レシチン０．４１ｇ、コレステロール０．０９ｇ、パルミチン酸０．０５ｇ、ラウリルジメチルアミノ酢酸ベタイン０．１ｇを添加し、同様に撹拌溶解した。上記で調製した混合物溶液に、予め、８０℃〜８５℃に加温した精製水を１００ｇになるよう加えて撹拌しながら混合し、エクストルーダーで処理した。
[Example 5]
10.0 g of glycerin is added to 10.0 g of 1,3-butylene glycol, and the mixture is homogenized by heating and stirring at 80 ° C. to 85 ° C. with a general-purpose stirrer 600 rpm. 0.41 g of hydrogenated lecithin containing phosphatidylcholine, 0.09 g of cholesterol, 0.05 g of palmitic acid, and 0.1 g of lauryl dimethylaminoacetic acid betaine were added to this liquid which was heated and stirred, and dissolved in the same manner. Purified water previously heated to 80 ° C. to 85 ° C. was added to the mixture solution prepared above to 100 g, mixed with stirring, and treated with an extruder.
［実施例６］
１，３−ブチレングリコール３０．０ｇにソルビトール１０．０ｇを加え、８０℃〜８５℃にて汎用撹拌機６００ｒｐｍにて加温撹拌溶解し、均質化した。加温撹拌しているこの液に、ホスファチジルコリンを含む水添レシチン０．４１ｇ、コレステロール０．０９ｇ、パルミチン酸０．１５ｇ、ラウリルジメチルアミノ酢酸ベタイン０．３ｇを添加し、同様に撹拌溶解した。上記で調製した混合物溶液に、予め、８０℃〜８５℃に加温した精製水を１００ｇになるよう加えて撹拌しながら混合し、エクストルーダーで処理した。
[Example 6]
10.0 g of sorbitol was added to 30.0 g of 1,3-butylene glycol, and the mixture was homogenized by heating with 80 rpm to 85 ° C. with a general-purpose stirrer at 600 rpm. 0.41 g of hydrogenated lecithin containing phosphatidylcholine, 0.09 g of cholesterol, 0.15 g of palmitic acid, and 0.3 g of lauryldimethylaminoacetic acid betaine were added to this liquid which was heated and stirred, and dissolved in the same manner. Purified water previously heated to 80 ° C. to 85 ° C. was added to the mixture solution prepared above to 100 g, mixed with stirring, and treated with an extruder.
［比較例１］
１，３−ブチレングリコール５．０ｇにグリセリン１５．０ｇを加え、８０℃〜８５℃にて汎用撹拌機３５０ｒｐｍにて加温撹拌し、均質化した。加温撹拌しているこの液に、ホスファチジルコリンを含む水添レシチン０．４１ｇ、コレステロール０．０９ｇ、パルミチン酸０．０５ｇを添加し、同様に撹拌溶解した。上記で調製した混合物溶液に、予め、８０℃〜８５℃に加温した精製水を１００ｇになるよう加えて撹拌しながら混合し、１〜２時間後、エクストルーダー処理した。
[Comparative Example 1]
15.0 g of glycerin was added to 5.0 g of 1,3-butylene glycol, and the mixture was homogenized by heating and stirring at 80 to 85 ° C. with a general-purpose stirrer 350 rpm. 0.41 g of hydrogenated lecithin containing phosphatidylcholine, 0.09 g of cholesterol and 0.05 g of palmitic acid were added to this solution which was heated and stirred, and dissolved in the same manner. Purified water heated to 80 ° C. to 85 ° C. was added in advance to 100 g to the mixture solution prepared above and mixed with stirring, and after 1 to 2 hours, an extruder treatment was performed.
［比較例２］
グリセリン１０．０ｇを加え、８０℃〜８５℃にて汎用撹拌機３５０ｒｐｍにて加温撹拌溶解し、均質化した。加温撹拌しているこの液に、ホスファチジルコリンを含む水添レシチン０．８２ｇ、コレステロール０．１８ｇ、パルミチン酸０．０５ｇ、ラウリルジメチルアミノ酢酸ベタイン０．１ｇを添加し、同様に撹拌溶解した。上記で調製した混合物溶液に、予め、８０℃〜８５℃に加温した精製水を１００ｇになるよう加えて撹拌しながら混合し、１〜２時間汎用撹拌機３５０ｒｐｍで撹拌した。加温を停止し、撹拌しながら急冷し、室温程度まで冷却しろ過した。
[Comparative Example 2]
10.0 g of glycerin was added, and the mixture was heated and dissolved with a general-purpose stirrer 350 rpm at 80 ° C. to 85 ° C., and homogenized. 0.82 g of hydrogenated lecithin containing phosphatidylcholine, 0.18 g of cholesterol, 0.05 g of palmitic acid, and 0.1 g of lauryldimethylaminoacetic acid betaine were added to this solution which was heated and stirred, and similarly dissolved by stirring. To the mixture solution prepared above, purified water heated to 80 ° C. to 85 ° C. in advance was added to 100 g and mixed with stirring, followed by stirring with a general-purpose stirrer at 350 rpm for 1 to 2 hours. The heating was stopped, the mixture was quenched with stirring, cooled to about room temperature, and filtered.
［比較例３］
グリセリン１０．０ｇを加え、８０℃〜８５℃にて汎用撹拌機３５０ｒｐｍにて加温撹拌溶解し、均質化した。加温撹拌しているこの液に、ホスファチジルコリンを含む水添レシチン０．８２ｇ、コレステロール０．１８ｇ、パルミチン酸０．０５ｇを添加し、同様に撹拌溶解した。上記で調製した混合物溶液に、予め、８０℃〜８５℃に加温した精製水を１００ｇになるよう加えて撹拌しながら混合し、１〜２時間ホモミキサーを用いて８，０００ｒｐｍで撹拌した。加温を停止し、撹拌しながら急冷し、室温程度まで冷却した。本比較例では、油脂の再析出が多く（乳化力不足と考えられる）、リポソーム作成が不能であった。
[Comparative Example 3]
10.0 g of glycerin was added, and the mixture was heated and dissolved with a general-purpose stirrer 350 rpm at 80 ° C. to 85 ° C., and homogenized. To this liquid which was heated and stirred, 0.82 g of hydrogenated lecithin containing phosphatidylcholine, 0.18 g of cholesterol and 0.05 g of palmitic acid were added and dissolved in the same manner. Purified water heated to 80 ° C. to 85 ° C. was added in advance to 100 g to the mixture solution prepared above and mixed with stirring, followed by stirring at 8,000 rpm for 1 to 2 hours using a homomixer. Heating was stopped, quenched with stirring, and cooled to about room temperature. In this comparative example, reprecipitation of fats and oils was large (considered to be insufficient emulsifying power), and liposome preparation was impossible.
［３］ゼータ電位の測定
上記実施例及び比較例で調製したリポソームの水性分散液を、水酸化カリウム水溶液とリン酸水溶液を使用して種々のｐＨに調整し、２６℃恒温条件下にてマルバーン社製の商品名ゼータサイザーナノシリーズＺＳＰを用いてゼータ電位を測定した。その結果を図２及び３に示す。図２に示したように、実施例１〜６で調製したリポソームは、ｐＨ５以下の水性媒体中ではすべてプラスのゼータ電位を有し、ｐＨ５．４からｐＨ７．６の間でｐＨ値の増加とともにゼータ電位がゼロに近づき、プラスからマイナスへ移行することが分かった。この範囲よりもｐＨが高くなるとゼータ電位がマイナスの値に変化した。これに対し、図３に示したように、比較例１で調製したリポソームは、ｐＨ４以下でわずかにプラスのゼータ電位を示したがゼータ電位の絶対値が小さいためこの領域では極めて不安定であると考えられる。また、比較例２で調製したリポソームはすべてのｐＨでマイナスのゼータ電位を示した。このように、実施例１〜６で調製したリポソームはｐＨ感受性を示すとともに、ｐＨ５以下でゼータ電位の絶対値が大きいため安定して存在しうることが分かった。
[3] Measurement of zeta potential The aqueous dispersions of liposomes prepared in the above examples and comparative examples were adjusted to various pHs using an aqueous potassium hydroxide solution and an aqueous phosphoric acid solution, and Malvern was maintained at 26 ° C under constant temperature conditions. The zeta potential was measured using a trade name Zeta Sizer Nano Series ZSP manufactured by the company. The results are shown in FIGS. As shown in FIG. 2, the liposomes prepared in Examples 1 to 6 all have a positive zeta potential in an aqueous medium having a pH of 5 or lower, and increase in pH value between pH 5.4 and pH 7.6. It was found that the zeta potential approached zero and shifted from positive to negative. When the pH became higher than this range, the zeta potential changed to a negative value. On the other hand, as shown in FIG. 3, the liposome prepared in Comparative Example 1 showed a slightly positive zeta potential at pH 4 or lower, but is extremely unstable in this region because the absolute value of the zeta potential is small. it is conceivable that. Moreover, the liposome prepared in Comparative Example 2 showed a negative zeta potential at all pHs. Thus, it was found that the liposomes prepared in Examples 1 to 6 showed pH sensitivity and could exist stably because the absolute value of the zeta potential was large at pH 5 or lower.
Claims (5)
当該リポソームは、前記膜構成成分全体に対して、前記アニオン性物質を２．５〜１５質量％、及び前記両イオン性物質を５〜２０質量％含み、
前記両イオン性物質が、ラウリルベタイン（ラウリルジメチルアミノ酢酸ベタイン）を含むＮ−アルキル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ酸ベタイン；コカミドプロピルベタイン、ラウラミドプロピルベタインを含む脂肪酸アミドアルキル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ酸ベタイン；ココアンホ酢酸ナトリウム、ラウロアンホ酢酸ナトリウムを含むイミダゾリン型ベタイン；アルキルジメチルタウリンを含むアルキルスルホベタイン；アルキルジメチルアミノエタノール硫酸エステルを含む硫酸型ベタイン；及びアルキルジメチルアミノエタノールリン酸エステルを含むリン酸型ベタインからなる群より選択される少なくとも１つであり、
前記リポソームを以下の各ｐＨ条件の水性媒体中に分散させたとき、前記リポソームのゼータ電位が、ｐＨ５以下でプラスであり、ｐＨ８以上でマイナスであり、そして、ｐＨ５〜８の間で、ｐＨ値の増加とともにプラスからマイナスへ移行することを特徴とする、ｐＨ感受性リポソーム。 And phospholipids, and steroids, and an anionic substance, and a zwitterionic substance, viewed contains as a membrane component, the membrane component, 1,2-propanediol, 1,3-butylene glycol, or mixtures thereof A pH-sensitive liposome obtained by dissolving a diol comprising a diol and a tri- or higher-valent polyol comprising a sorbitol, glycerol, or a mixture thereof in a solvent and then dispersing the solution in an aqueous medium ,
The liposome contains 2.5 to 15 % by mass of the anionic substance and 5 to 20% by mass of the zwitterionic substance with respect to the entire membrane component,
The zwitterionic substance is N-alkyl-N, N-dimethylamino acid betaine containing lauryl betaine (lauryldimethylaminoacetic acid betaine); fatty acid amide alkyl-N, N-dimethyl containing cocamidopropyl betaine and lauramidopropyl betaine Amino acid betaine; sodium cocoamphoacetate, imidazoline type betaine containing sodium lauroamphoacetate; alkylsulfobetaine containing alkyldimethyltaurine; sulfate type betaine containing alkyldimethylaminoethanol sulfate ester; and phosphate type containing alkyldimethylaminoethanol phosphate ester At least one selected from the group consisting of betaines;
When the liposome is dispersed in an aqueous medium having the following pH conditions, the zeta potential of the liposome is positive at pH 5 or less, negative at pH 8 or more, and between pH 5 and 8, at a pH value. PH-sensitive liposomes, which shift from positive to negative with an increase in pH.
The pH-sensitive liposome according to claim 4, wherein the saturated fatty acid solid at normal temperature is palmitic acid or stearic acid.
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