JP6204193B2 - 細胞濃縮液の製造方法 - Google Patents
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-
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Description
本発明における細胞懸濁液処理器は、図1に例示されるが、これに限定されるものではない。筒状容器1はストレートな胴部2とその両側の頭部3、ヘッダー部9からなり、頭部3、ヘッダー部9にはろ液出口4が備えられている。このろ液出口は一方に備えられていても、両端に備えられていてもよい。この例ではヘッダー部9に細胞懸濁液入口8a、頭部3には細胞懸濁液出口8bが設けられている。該筒状容器1内部には、装填された中空糸型分離膜の束5と、ヘッダー部9の内部に設けられた中空糸型分離膜の束5を容器内部に固定するとともに中空糸型分離膜の開口端6を形成している樹脂層部7、更に頭部3の内部に設けられたこれと同等の構造を有している。この樹脂層部7および開口端6は、ヘッダー部9(或いは頭部3)に被冠された構造となっており、細胞懸濁液入口8a及び細胞懸濁液出口8bと、ろ液出口4が中空糸型分離膜を構成する壁材により隔てられ、連続しない構造となっている。
ポリエーテルスルホンの中空糸型分離膜〔型式:M2−M02E−300−F1N(Spectrum Laboratories社製)、ろ過面積0.31m2、孔径0.2μm、断面積1.737cm2〕を用いて細胞濃縮検討を行った。2000倍のSEM画像より測定した中空糸分離膜内側の平均孔径は、5.57μmであった。培養したJurkat細胞をRPMI1640培地(10%FBS)に懸濁し、この細胞懸濁液(濃度約2.0×106cells/mL)1500mLから培地をろ過した。通液の条件は、流速200mL/分、初期ろ過速度181mL/m2/分とした。結果、細胞回収率は84%、生存率比97%であった。
実施例1と同様の分離膜を用いた。通液の条件は、流速555mL/分、初期ろ過速度425mL/m2/分とした。結果、細胞回収率は81%、生存率比95%であった。
実施例1と同様の分離膜を用いた。通液の条件は、流速650mL/分、初期ろ過速度250mL/m2/分とした。結果、細胞回収率は92%、生存率比99%であった。
実施例1と同様の分離膜を用いた。通液の条件は、流速830mL/分、初期ろ過速度645mL/m2/分とした。結果、細胞回収率は91%、生存率比99%であった。
実施例1と同様の分離膜を用いた。通液の条件は、流速1000mL/分、初期ろ過速度1290mL/m2/分とした。結果、細胞回収率は93%、生存率比98%であった。
実施例1と同様の分離膜を用いた。通液の条件は、流速360mL/分、初期ろ過速度645mL/m2/分とした。結果、細胞回収率は60%、生存率比98%であった。
実施例1と同様の分離膜を用いた。通液の条件は、流速520mL/分、初期ろ過速度857mL/m2/分とした。結果、細胞回収率は53%、生存率比99%であった。
ポリエーテルスルホンの中空糸型分離膜〔型式:M2−M05E−300−F1N(Spectrum Laboratories社製)、ろ過面積0.31m2、孔径0.5μm、断面積1.737cm2〕を用いて細胞濃縮検討を行った。2000倍のSEM画像より測定した中空糸分離膜内側の平均孔径は、3.86μmであった。培養したJurkat細胞がRPMI1640培地(10%FBS)に懸濁された細胞懸濁液(濃度約2.0×106cells/mL)1500mLから培地をろ過した。通液の条件は、流速660mL/分、初期ろ過速度510mL/m2/分とした。結果、細胞回収率は81%、生存率比93%であった。
実施例6と同様の分離膜を用いた。通液の条件は、流速730mL/分、初期ろ過速度390mL/m2/分とした。結果、細胞回収率は91%、生存率比96%であった。
実施例6と同様の分離膜を用いた。通液の条件は、流速750mL/分、初期ろ過速度1074mL/m2/分とした。結果、細胞回収率は90%、生存率比99%であった。
実施例6と同様の分離膜を用いた。通液の条件は、流速750mL/分、初期ろ過速度1378mL/m2/分とした。結果、細胞回収率は33%、生存率比94%であった。
ポリエーテルスルホンの中空糸型分離膜〔型式:M2−M02E−100−F1N(Spectrum Laboratories社製)、ろ過面積0.105m2、孔径0.2μm、断面積0.588cm2〕を用いて細胞濃縮検討を行った。中空糸は実施例1と同じものを用いた。培養したJurkat細胞がRPMI1640培地(10%FBS)に懸濁された細胞懸濁液(濃度約2.0×106cells/mL)1500mLから、培地をろ過した。通液の条件は、流速600mL/分、初期ろ過速度1002mL/m2/分とした。結果、細胞回収率は102%、生存率比100%であった。
実施例9と同様の分離膜を用いた。通液の条件は、流速600mL/分、初期ろ過速度1511mL/m2/分とした。結果、細胞回収率は96%、生存率比97%であった。
実施例9と同様の分離膜を用いた。通液の条件は、流速600mL/分、初期ろ過速度2116mL/m2/分とした。結果、細胞回収率は88%、生存率比99%であった。
実施例9と同様の分離膜を用いた。通液の条件は、流速620mL/分、初期ろ過速度3174mL/m2/分とした。結果、細胞回収率は76%、生存率比98%であった。
ポリエチレンの中空糸型分離膜〔型式:PSP−103(旭化成ケミカルズ社製)、ろ過面積0.17m2、孔径0.1μm、断面積1.510cm2〕を用いて細胞濃縮検討を行った。5000倍のSEM画像より測定した中空糸分離膜内側の平均孔径は、0.75μmであった。培養したJurkat細胞がRPMI1640培地(10%FBS)に懸濁された細胞懸濁液(濃度約2.0×106cells/mL)1500mLから培地をろ過した。通液の条件は、流速200mL/分、初期ろ過速度315mL/m2/分とした。結果、細胞回収率は83%、生存率比100%であった。
実施例12と同様の分離膜を用いた。通液の条件は、流速820mL/分、初期ろ過速度1262mL/m2/分とした。結果、細胞回収率は88%、生存率比98%であった。
実施例12と同様の分離膜を用いた。通液の条件は、流速480mL/分、初期ろ過速度1336mL/m2/分とした。結果、細胞回収率は62%、生存率比99%であった。
ポリスルホンの中空糸型分離膜〔型式:M20S−300−01P(Spectrum Laboratories社製)、ろ過面積0.31cm2、孔径0.05μm、断面積1.737cm2〕を用いて細胞濃縮検討を行った。2000倍のSEM画像より測定した中空糸分離膜内側の平均孔径は、2.44μmであった。培養したJurkat細胞がRPMI1640培地(10%FBS)に懸濁された細胞懸濁液(濃度約2.0×106cells/mL)1500mLから培地をろ過した。通液の条件は、流速820mL/分、初期ろ過速度716mL/m2/分とした。結果、細胞回収率は91%、生存率比99%であった。
実施例14と同様の分離膜を用いた。通液の条件は、流速800mL/分、初期ろ過速度1075mL/m2/分とした。結果、細胞回収率は87%、生存率比99%であった。
実施例14と同様の分離膜を用いた。通液の条件は、流速810mL/分、初期ろ過速度1489mL/m2/分とした。結果、細胞回収率は79%、生存率比92%であった。
2.胴部
3.頭部
4.ろ液出口
5.中空糸型分離膜の束
6.開口端(点線部)
7.樹脂層部(斜線部)
8a.細胞懸濁液入口
8b.細胞懸濁液出口
9.ヘッダー部
Claims (9)
- 細胞懸濁液入口、ろ液出口、細胞懸濁液出口、及び、前記細胞懸濁液入口と前記細胞懸濁液出口の間に配置された中空糸型分離膜を備え、内圧ろ過方式である細胞懸濁液処理器を用いる細胞濃縮液の製造方法であって、
前記中空糸型分離膜の内側の孔の平均孔径が0.1μm〜10μmであり、ろ液の初期ろ過速度(mL/m2/分)を中空糸内を流れる細胞懸濁液の線速度(cm/分)で除した値が2.5以下であり、線速度が115cm/分〜1020cm/分であり、かつ、細胞がヒトの細胞である、細胞濃縮液の製造方法。 - 前記細胞懸濁液入口に流入する細胞懸濁液の流速が、200mL/分〜1200mL/分である請求項1に記載の細胞濃縮液の製造方法。
- 前記中空糸型分離膜が合成高分子材料よりなる請求項1又は2に記載の細胞濃縮液の製造方法。
- 前記中空糸型分離膜がポリスルホン系又はポリオレフィン系の高分子材料よりなる請求項1〜3のいずれかに記載の細胞濃縮液の製造方法。
- 前記中空糸型分離膜がポリエーテルスルホン、ポリスルホン、又はポリエチレンからなる請求項1〜4のいずれかに記載の細胞濃縮液の製造方法。
- 前記細胞懸濁液が免疫細胞懸濁液である請求項1〜5のいずれかに記載の細胞濃縮液の製造方法。
- さらに、細胞を洗浄する工程を含む、請求項1〜6のいずれかに記載の細胞濃縮液の製造方法。
- さらに、細胞濃縮液を培地と混合して細胞を増殖させる工程を含む、請求項1〜7のいずれかに記載の製造方法。
- 請求項1〜8のいずれかに記載の方法により細胞濃縮液を製造し、前記細胞濃縮液を、液体窒素を用いて凍結保存する工程を含む、細胞の凍結保存方法。
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