JP6189839B2 - 照明アレイを備えるレーザ走査顕微鏡 - Google Patents
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Description
画像記録時間を短縮するためのアプローチは、レゾナントスキャナの使用である。この原理によりビデオ速度が達成される。しかしながらレゾナントスキャナは別の欠点を有し、たとえば走査周波数が固定されている。極めて基本的に、走査速度が高い場合にはピクセル時間も非常に短く、そのため試料からの十分な光を検出できるようにするために、この時間における強度も非常に大きくならなければならない。これにより1つのスポットによるLSMの速度が基本的に制限される。
以下に示す本発明は、従来のスキャナにおいて使用するための複数のスポットの形成および検出の問題を解決する。n個のスポットによる走査によって画像記録時間は、1つの個別スポットスキャナにより必要となる時間の1/nに短縮される。フレキシビリティは走査スポットの所定のラスタによってだけ制限される。
欧州特許出願公開第785447号明細書では、フィルタリングのためのレンズアレイが検出部に設けられている。日本特許出願公開第10311950号明細書には、「ピンホールアレイ」としてのホールプレートと共同作用するマイクロレンズアレイが記載されている。米国特許第6028306号明細書でも同様にピンホールアレイが使用される。
・1つのレンズアレイによる複数のスポットの形成
・同じレンズアレイを、複数の検出スポットの平行視準化に使用すること
・使用される立体角を利用した、複数の検出スポットに対する1つの共通のピンホール
・ミニレンズアレイを使用することの結果としての、光線の平行化によるメインカラーフィルタ上の小さな角度スペクトル(このことは、光線が通常の二色性である場合、フィルタのエッジ急峻度を改善する)
検出は、別個の光線路によって行うことも可能である。ピンホール対物レンズと個々のピンホールの代わりに、ピンホールレンズアレイとピンホールアレイが使用される。この実施形態の利点は、チャネル間のクロストークが小さいことである。小さな欠点は手間暇が掛かることであり、付加的なレンズアレイと、とりわけピンホールアレイが必要になる。全てのスポットがそれらのピンホールに中心で当たるようにするため、全ての光線路は互いに正確に整合されなければならない。
以下の参照符号が使用される。
F:ファイバ
KO:ファイバコリメータレンズ
Hft:顕微鏡のメインカラーフィルタ
LA1...n>:nの個別レンズから成るレンズアレイ
L:マルチスポットレンズ
SC:スキャナ
SCO:スキャナ対物レンズ
ZB:中間画像
O:顕微鏡対物レンズ
DE:検出光線路
PHO:ピンホール対物レンズ
PH:個別ピンホール
ZB1、ZB2:中間画像面
DE1..n:n個の個別検出器から成る検出器アレイ
PHA:ピンホールアレイ
MLAPH:ピンホール・マイクロレンズアレイ
MLT:ミニレンズ・テレスコープ
AW:交換コリメータ
Claims (9)
- レーザ走査顕微鏡(LSM)であって、
少なくとも1つの光源であって、照明光線路が、前記少なくとも1つの光源から試料の方向に延びる、前記少なくとも1つの光源と、
試料光、好ましくは蛍光光を検出器構成体に伝達するための少なくとも1つの検出光線路と、
照明光線路と検出光線路とを分離するメインカラーフィルタと、
少なくとも2つのマイクロレンズの光源グリッドを形成するためのマイクロレンズアレイと、
照明光と試料との間に、少なくとも一方向で相対運動を形成するスキャナと、
顕微鏡対物レンズとを備え、
前記レンズアレイが、該照明光線路と該検出光線路との共通部分内に配置され、
前記光源グリッドを用いて励起、散乱および反射のうちの少なくとも一方によって生成され、前記レンズアレイによって視準化された試料光の複数の光線が、検出方向において、異なる角度で単一のピンホールにフォーカスされる、レーザ走査顕微鏡。 - 前記レンズアレイは、前記メインカラーフィルタと前記スキャナとの間に配置されている、請求項1に記載のレーザ走査顕微鏡。
- 照明方向において、前記レンズアレイには、拡張された、好ましくは視準化された光線を形成するための光学系が前置され、
該光線は、該レンズアレイの複数のレンズによってその横断面において捕捉される、請求項1または2に記載のレーザ走査顕微鏡。 - 拡張された光線からミニレンズにより形成された照明スポットを、前記スキャナと走査光学系とを介して、前記顕微鏡対物レンズの前方の中間画像に伝達するための伝達光学系が設けられている、請求項1〜3のいずれか一項に記載のレーザ走査顕微鏡。
- 検出方向において、レンズアレイにより視準化された個別の光線が、第2のレンズ構成体を介して前記単一のピンホールにフォーカスされる、請求項1〜4のいずれか一項に記載のレーザ走査顕微鏡。
- 前記単一のピンホールには、検出器構成体が後置され、
該検出器構成体は、各個別の光線に1つの検出器を割り当てる、請求項1〜5のいずれか一項に記載のレーザ走査顕微鏡。 - 照明方向における前記単一のピンホールの前方には、好ましくはHFTの前方には、視準化された個別の光線を形成するための第3のレンズ構成体が設けられ、
該個別の光線は、前記レンズアレイの個別のレンズに当たる、請求項1〜6のいずれか一項に記載のレーザ走査顕微鏡。 - 前記第3のレンズ構成体は、2つのレンズグリッドから成り、
該2つのレンズグリッドは、個別の光線のテレセントリックな光線路を形成する、請求項7のいずれか一項に記載のレーザ走査顕微鏡。 - 照明部には、シングルスポット照明とマルチスポット照明とを切り替えるための切り替えユニットが設けられている、請求項1〜8のいずれか一項に記載のレーザ走査顕微鏡。
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