JP5932711B2 - 免疫原性PcpAポリペプチドおよびその使用 - Google Patents
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Description
本願は、2006年8月17日に出願された米国特許出願第60/822,715号、2006年9月28日に出願された同第60/827,348号、および2007年5月10日に出願された同第60/917,178号に対する優先権を主張し、米国特許出願第60/822,715号、同第60/827,348号、および同第60/917,178号は、その全体が本明細書中に参考として援用される。
本発明は、国立衛生研究所からの助成金第R01 AI053749号、同第R01 AI21548号、および同第T32 HL 07553号のもと政府の支援によりなされた。政府は、本発明に一定の権利を有し得る。
本発明は、例えば以下の項目を提供する。
(項目1)
Streptococcus pneumoniae血清型6由来の天然型PcpAの1つまたは複数のロイシンに富んだ領域を含む、PcpAの免疫原性フラグメント。
(項目2)
前記フラグメントが配列番号45を含む、項目1に記載の免疫原性フラグメント。
(項目3)
項目2に記載の免疫原性フラグメントおよび薬学的に許容されるキャリアを含む、組成物。
(項目4)
アジュバントをさらに含む、項目3に記載の組成物。
(項目5)
免疫原性Staphylococcusポリペプチドをさらに含む、項目3に記載の組成物。
(項目6)
PspAの免疫原性フラグメント、ニューモリシンまたはこれらの組み合わせをさらに含む、項目3に記載の組成物。
(項目7)
前記組成物は、粘膜表面への投与に好適である、項目3に記載の組成物。
(項目8)
前記組成物は、点鼻薬である、項目7に記載の組成物。
(項目9)
前記組成物は、ネブライザー溶液である、項目7に記載の組成物。
(項目10)
前記組成物は、エアロゾル吸入剤である、項目7に記載の組成物。
(項目11)
項目3に記載の組成物を含む、容器。
(項目12)
前記容器は、鼻噴霧器である、項目11に記載の容器。
(項目13)
前記容器は、ネブライザーである、項目11に記載の容器。
(項目14)
前記容器は、吸入器である、項目11に記載の容器。
(項目15)
被検体においてPcpAに対する抗体を産生する方法であって、項目2に記載の免疫原性フラグメントを前記被検体に投与することを含む、方法。
(項目16)
被検体において肺炎球菌の鼻腔保菌を防止または抑制する方法であって、項目2に記載の免疫原性フラグメントを前記被検体に投与することを含む、方法。
(項目17)
被検体において肺炎球菌感染症の危険性を低下させる方法であって、2に記載の免疫原性フラグメントを前記被検体に投与することを含む、方法。
(項目18)
前記肺炎球菌(pneucococcal)感染症は、髄膜炎である、項目17に記載の方法。
(項目19)
前記肺炎球菌(pneucococcal)感染症は、中耳炎である、項目17に記載の方法。
(項目20)
前記肺炎球菌(pneucococcal)感染症は、肺炎である、項目17に記載
の方法。
(項目21)
前記肺炎球菌(pneucococcal)感染症は、溶血性***である、項目17に記載の方法。
(項目22)
前記免疫原性フラグメントを投与しても、肺炎球菌(peneumococcal)の鼻腔保菌が皆無にならない、項目17に記載の方法。
(項目23)
前記配列番号45のアミノ酸配列と少なくとも90%同一であるアミノ酸配列を含む、単離されたポリペプチド。
Dekker,New York,N.Y.(1983);Morley,Trends in Pharm.Sci,1(2):463−468(1980);Hudson,et al,Int J Pept Prot Res 14:177−185(1979)(−−CH2NH−−,CH2CH2−−);Spatola et al.Life Sci 38:1243−1249(1986)(−−CH H2−−S);Hann,Journal of the Chemical Society:Perkin Transactions 1 pp.307−314(1982)(−−CH−−CH−−,cis and trans);Almquist et al.,J.Med.Chem.23:1392−1398(1980)(−−COCH2−−);Jennings−White et al.,Tetrahedron Lett 23:2533(1982)(−−COCH2−−);欧州特許第0045665号 to Szelke,et al.(1982)(−−CH(OH)CH2−−);Holladay et al.,Tetrahedron.Lett 24:4401−4404(1983)(−−C(OH)CH2−−);およびHruby Life Sci 31:189−199(1982)(−−CH2−−S−−)で確認することができ、少なくとも結合に関する材料について、これらの各々を参照によって本明細書に援用する)を含んでもよい。
al.,J.Infect.Immun,188:339−48(2003);Ogunniyi et al.,Infect.Immun.68:3028−33(2000))。したがって、PcpAまたは免疫原性フラグメントを含む組成物は任意に、PcpA、PspAまたはニューモリシンの第2の免疫原性フラグメントまたはその組み合わせを含んでもよい。これらの参考文献については、その中に教示されているタンパク質の組み合わせ方法および投与方法のため参照によってその全体を本明細書に援用する。
PcpAは、肺感染症および致死性の敗血症に対する保護作用を惹起する。
S.pneumoniaeの臨床的に重要な菌株にはpcpAが存在する。pcpAのLRR領域をはさんだプライマー(BGP1とBGP2)を用いてPCRにより、pcpAの存在を調べた。調査対象の23株(表2および表3)それぞれで約1500bpフラグメントが得られた。これら菌株のうち8つは、過去25年以内に単離されている臨床菌株で、7価コンジュゲートワクチンがカバーする7種のよく見られる莢膜型の代表的な菌株である(図1)。残りの12株は、ゲノム多様性プロジェクト(http://genome.microbio.uab.edu/strep/info/)の一環として構築された一連の菌株から選択されたS.pneumoniaeのセットである。このプロジェクトは、S.pneumoniaeの幅広い多様性をカバーするため一連の菌株を選択している。これら12株については、MLSTデータに基づき広く多岐にわたるように選択した。4株は重篤な侵襲性疾患の患者由来、5株は無症候性保菌者由来で、2株については疾患/定着が不明であり、1株は世界的な抗生物質耐性クローン由来であった。これらの菌株は、世界の様々な領域における12種の莢膜型の典型である。
PcpAの粘膜免疫は肺感染を防止する。
PcpAの皮下または鼻腔内免疫により惹起される抗体。
肺細胞への付着にはPcpAが必要である。
受動防御モデル。
PcpAおよびニューモリシンによる保護作用
ニューモリシン(Ply)は、肺感染に対してある程度の保護作用を惹起し得るもう1つのタンパク質である(Briles et al.,J.Infect.Dis.188:339−48(2003))。ニューモリシンおよびPcpAはともに、タンパク質ベースの肺炎球菌ワクチンの候補物質であるため、この2つのタンパク質について、免疫源として併用した場合、どちらかを単独で使用するよりも肺感染に対する保護作用が高まるかどうかを判定した。マウスにPcpA5μg、ニューモリシン5μgまたはPcpA5μgとニューモリシン5μgを3回免疫した。最初の2回の注射ではalumを用い、3回目の注射ではタンパク質単独で行った。今回使用したニューモリシンは、野生型ニューモリシンであった。図13は、ニューモリシンが肺感染に対して、PcpAが惹起するのと類似の保護作用を惹起することを示す。PcpAとニューモリシンを組み合わせると、ニューモリシン単独の場合よりも保護作用が著しく高まった。こうしたデータから、PcpAおよびニューモリシンを併用することで保護作用が得られることが示唆される。
他の肺炎球菌に対する交差防御。
Streptococcus pneumoniae血清型6由来の組換えPcpAのクローニングおよび発現。
5’−TAGCCTCGAGTTAACCTTTGTCTTTAACCCAACCAACTACTCCCTGATTAG−3’(配列番号43)および
5’−CTAATGAACCACATATGGCAGATACTCCTAGTTCGGAAGTAATC−3’(配列番号44)
を用いた。実施例1に記載されているようにPCR反応を行った。PCRプライマーに制限エンドヌクレアーゼ部位NdeIおよびXhoIを導入した。PcpAΔSPΔCBDをコードする得られた1335塩基対フラグメントは、どちらかの末端にNdeIおよびXhoI部位を含んでいた。増幅したフラグメントをゲル精製し、NdeIおよびXhoIで消化してから、このpcpA遺伝子フラグメントを、強力なT7プロモーターおよび翻訳シグナルを用いてpET−30aベクター(ノバゲンインク,マディソン,ウィスコンシン州)のNdeI部位とXhoI部位の間にライゲートした(図14)。DNAシーケンシングの結果、組換えプラスミドpJMS87は、pcpA遺伝子フラグメントΔSPΔCBD1335bpを含むことが確認された。プラスミドpJMS87をタンパク質製造のためE.coli株BL21(DE3)に形質転換した。IPTGで誘導して、このE.coli株に天然のシグナルペプチド(ΔSP)およびC末端コリン結合ドメイン(ΔCBD)を欠損しているPcpAタンパク質を発現させた。SDS−PAGE解析でこの発現タンパク質を確認した。
PcpAΔSPΔCBDの免疫は、敗血症モデルの肺炎に対して保護作用を惹起する。
PcpAΔSPΔCBDの免疫は、肺炎に対する保護作用を惹起する。
(配列表)
Claims (22)
- 天然型PcpAのN末端領域を含むPcpAの免疫原性ポリペプチドであって、該免疫原性ポリペプチドは、コリン結合性のアンカー配列を欠き、そして該N末端領域は、配列番号41または配列番号45のアミノ酸配列と少なくとも90%同一であるアミノ酸配列を含むか、あるいは該N末端領域は、配列番号1、配列番号2、配列番号3、配列番号4、配列番号41または配列番号45を含む、免疫原性ポリペプチド。
- 前記N末端領域が配列番号45を含む、請求項1に記載の免疫原性ポリペプチド。
- 配列番号41または配列番号45のアミノ酸配列と少なくとも90%同一であるアミノ酸配列からなる免疫原性ポリペプチド。
- 請求項1〜3のいずれか一項に記載の免疫原性ポリペプチドおよび薬学的に許容されるキャリアを含む組成物。
- アジュバントをさらに含む、請求項4に記載の組成物。
- 免疫原性Staphylococcusポリペプチドをさらに含む、請求項4に記載の組成物。
- PspAの免疫原性ポリペプチドまたはニューモリシンの免疫原性ポリペプチドあるいはこれらの組み合わせをさらに含む、請求項4に記載の組成物。
- 前記組成物は、粘膜表面への投与に好適である、請求項4に記載の組成物。
- 前記組成物は、点鼻薬、ネブライザー溶液またはエアロゾル吸入剤である、請求項8に記載の組成物。
- 請求項9に記載の組成物を含む容器。
- 被験体においてPcpAに特異的な抗体を生成するための組成物であって、請求項1〜3のいずれか一項に記載の免疫原性ポリペプチドを含む、組成物。
- 被験体において肺炎球菌感染症の危険性を軽減させるための組成物であって、請求項1〜3のいずれか一項に記載の免疫原性ポリペプチドを含む、組成物。
- 被験体において肺炎球菌感染症を防止するための組成物であって、請求項1〜3のいずれか一項に記載の免疫原性ポリペプチドを含む、組成物。
- 被験体において肺炎球菌の鼻腔保菌を防止または軽減させるための組成物であって、請求項1〜3のいずれか一項に記載の免疫原性ポリペプチドを含む、組成物。
- 前記肺炎球菌感染症は髄膜炎である、請求項12または13のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記肺炎球菌感染症は中耳炎である、請求項12または13のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記肺炎球菌感染症は肺炎である、請求項12または13のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記肺炎球菌感染症は溶血性尿毒素である、請求項12または13のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記肺炎球菌感染症は敗血症である、請求項12または13のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記組成物は、経口投与、非経口投与、筋肉内投与、腹腔内投与、経皮投与または局所投与に好適である、請求項4に記載の組成物。
- 請求項1〜3のいずれか一項に記載の免疫原性ポリペプチドに特異的に結合する抗体または抗体フラグメント。
- 前記組成物を投与しても、肺炎球菌の鼻腔保菌が皆無にならない、請求項14に記載の組成物。
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