JP5927254B2 - 解析方法 - Google Patents
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Description
一般に、顕微鏡観察における空間分解能εは、下記数式1で表される。
ε=0.61×λ÷NA ・・・(数式1)
(数式1において、λは光の波長であり、NAは開口数である。)
また、観察範囲の直径dは、下記数式2で表される。
d=D÷M ・・・(数式2)
(数式2において、Dは視野数であり、Mは倍率である。なお、視野数は一般に22から26である。)
従来、顕微鏡用対物レンズの焦点距離は国際規格で45mmとされていた。そして、最近では、焦点距離を60mmとする対物レンズが使われはじめている。この焦点距離を前提にしてNAが大きい、つまり空間分解能が高いレンズを設計すると作動距離(WD)は一般には0.5mm程度であり、また長WD設計のものでも8mm程度であった。このような対物レンズを用いた場合、観察範囲は0.5mm径程度である。
NA'=NA÷β ・・・(数式3)
(数式3において、NAは入射開口角(開口数)であり、NA'は射出開口角であり、βは投影倍率である。)
一般の対物レンズにおいて、NA'は高々0.04であり、NA'2は0.0016である。また、現在市販されている一般的な顕微鏡の対物レンズにおける像の明るさ(NA/β)2の値を調査したところ、図4に示すように、0.0005から0.002の範囲であった。
そこで、光量の少ない発光を画像で観察するためには、大きなNAと小さいβの特性を有する対物レンズが必要である。そして、結果的に、当該対物レンズは大口径となる傾向がある。なお、このような対物レンズでは、励起光投影の機能を考慮することなく機能を単純化して設計、製造しやすくすることが求められる。
図10に示すように、図9の画像Aの発光強度と画像Bの発光強度との間に有意差があること、および図9の画像Bの発光強度と画像Cの発光強度との間に有意差があることを、各画像の発光強度のばらつき(画像の発光強度が取り得る範囲)に基づいて定量的に検出することができた。また、図10において図9の画像Aの発光強度は負の値も含むので、図9の画像Aは発光画像観察に適さないことが図10から分かる。したがって、以上の検討から、対物レンズの(NA/β)2の値が0.01以上であれば、充分且つ確実に細胞の発光画像観察を行うことができることが示された。つまり、細胞の発光画像観察に適する対物レンズの(NA/β)2の値は0.01以上であることが示された。
2 対物レンズ
3 集光レンズ
4 CCDカメラ
5 モニタ
Claims (5)
- 単一の細胞の遺伝子発現を解析する解析方法であって、以下の工程を含むことを特徴とする解析方法:
発光タンパク質の遺伝子を細胞に導入する工程、
前記遺伝子を導入した細胞を、開口数(NA)および投影倍率(β)で表される(NA÷β) 2 の値が0.01以上である光学条件下で前記細胞を撮像して発光画像を得る工程、
前記発光画像に基づき画像情報を処理する工程であって、前記細胞に対応する限定された領域の輝度情報を得る工程、
ここで輝度情報は前記ルシフェラーゼ遺伝子の発現量を表す。 - 前記細胞は、培養細胞であり、
さらに該培養細胞を培養する培養工程を含む請求項1に記載の解析方法。 - 前記撮像は、前記培養工程期間中に時系列で実行される請求項2に記載の解析方法。
- 前記細胞は、前記光学条件を満たす対物レンズを有する顕微鏡下に配置される請求項1〜3のいずれか1つに記載の解析方法。
- 前記撮像は遮光された状態で実行される請求項1〜4のいずれか1つに記載の解析方法。
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US5922282A (en) * | 1995-06-07 | 1999-07-13 | Ledley; Robert S. | Super fast tuberculosis diagnosis and sensitivity testing method |
CA2263226C (en) * | 1996-08-16 | 2006-10-10 | Imaging Research, Inc. | A digital imaging system for assays in well plates, gels and blots |
JPH11231224A (ja) * | 1998-02-16 | 1999-08-27 | Olympus Optical Co Ltd | 顕微鏡対物レンズ |
DE60014987T2 (de) * | 1999-02-22 | 2005-11-10 | Matsushita Electric Industrial Co., Ltd., Kadoma | Verfahren zum Nachweis von Bakterien |
JP2000308486A (ja) * | 1999-02-22 | 2000-11-07 | Matsushita Electric Ind Co Ltd | 細菌検出法 |
JP3127244B2 (ja) * | 1999-04-28 | 2001-01-22 | 鹿児島大学長 | 化学発光in situハイブリダイゼーションと免疫組織化学的染色とを組合わせた二重標識検出法 |
JP2001021812A (ja) * | 1999-07-08 | 2001-01-26 | Olympus Optical Co Ltd | 顕微鏡対物レンズ |
AU2884401A (en) * | 2000-01-28 | 2001-08-07 | Asahi Kasei Kabushiki Kaisha | Photothermic transducing spectroscopic analyzer |
US6775567B2 (en) * | 2000-02-25 | 2004-08-10 | Xenogen Corporation | Imaging apparatus |
WO2001073120A1 (fr) * | 2000-03-27 | 2001-10-04 | Olympus Optical Co., Ltd. | Procede de mesure de polymorphisme |
JP2002310894A (ja) * | 2001-04-11 | 2002-10-23 | Japan Science & Technology Corp | 発光観測装置、発光体選別装置、及び発光体の選別方法 |
JP3829252B2 (ja) * | 2001-06-08 | 2006-10-04 | 独立行政法人理化学研究所 | 蛍光蛋白質 |
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JP3766421B2 (ja) * | 2001-07-03 | 2006-04-12 | 株式会社日立製作所 | 生体試料光学測定方法及び生体試料光学測定装置 |
US20030103262A1 (en) * | 2001-09-07 | 2003-06-05 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Multimodal miniature microscope |
US7616985B2 (en) * | 2002-07-16 | 2009-11-10 | Xenogen Corporation | Method and apparatus for 3-D imaging of internal light sources |
JP3786903B2 (ja) * | 2002-07-26 | 2006-06-21 | ザ・ボード・オブ・トラスティーズ・オブ・ザ・レランド・スタンフォード・ジュニア・ユニバーシティ | 哺乳動物中の発光複合体の非侵襲的局在化 |
US7023622B2 (en) * | 2002-08-06 | 2006-04-04 | Dmetrix, Inc. | Miniature microscope objective lens |
JP2004086031A (ja) * | 2002-08-28 | 2004-03-18 | Olympus Corp | 顕微鏡用撮像装置、顕微鏡用撮像方法、及び顕微鏡用撮像プログラム |
JP4429577B2 (ja) * | 2002-09-30 | 2010-03-10 | 株式会社ニコン | 細胞内反応測定装置および細胞内反応測定方法 |
FR2849218B1 (fr) * | 2002-12-20 | 2005-03-04 | Mauna Kea Technologies | Tete optique confocale, notamment miniature, a balayage integre et systeme d'imagerie confocale mettant en oeuvre ladite tete |
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US7338439B2 (en) * | 2003-09-05 | 2008-03-04 | Pentax Corporation | Condensing optical system, confocal optical system, and scanning confocal endoscope |
US7345814B2 (en) * | 2003-09-29 | 2008-03-18 | Olympus Corporation | Microscope system and microscope focus maintaining device for the same |
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