JP5903040B2 - 酸化型グルタチオンの結晶およびその製造方法 - Google Patents
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Description
本発明は、例えば健康食品、医薬品、化粧品等の製品、原料もしくは中間体等として有用である酸化型グルタチオンの結晶、および該結晶の製造方法に関する。
酸化型グルタチオンは、還元型グルタチオンと同様の作用を有し、酸化型グルタチオンが有する作用としては、例えば経口投与による肝臓での解毒作用等が知られている（非特許文献１）。そのため、酸化型グルタチオンは、還元型グルタチオンを使用している各種用途に使用することができ、例えば健康食品、医薬品、化粧品等の製品、原料もしくは中間体等として有用である。
酸化型グルタチオンの製造方法としては、発酵法、酵素法等により得られる還元型グルタチオンを含有する水溶液、または酵母エキス溶液等を原料とし、溶液中において還元型グルタチオンを酸化型グルタチオンに変換することで酸化型グルタチオン溶液を得た後、濃縮、希釈等を行うことにより酸化型グルタチオンを含有する水溶液または酵母エキス溶液を得る方法（特許文献１および２）、賦形剤等を添加し、凍結乾燥、噴霧乾燥等により酸化型グルタチオン含有酵母エキス粉末を得る方法（特許文献２）、酸化型グルタチオン含有水溶液にアルコール等を滴下することにより酸化型グルタチオン１水和物の結晶を製造する方法（特許文献３）、酸化型グルタチオン８水和物の結晶を製造する方法（非特許文献２）等が知られている。
しかし、酸化型グルタチオン溶液の凍結乾燥による製造法は不純物の淘汰性が悪く、凍結乾燥に要するエネルギーが多量に必要であり工業化に不向きであることが知られている。一方、噴霧乾燥による製造法では熱に触れることで不純物が増加することが知られている。
また、酸化型グルタチオン８水和物の結晶は、結晶中に含有される水含量が一定せず、安定性が悪い点、結晶を取得するのに３−４日間という長期間を要する点が問題であり、酸化型グルタチオン１水和物の結晶は、針状結晶であり凝集しやすいため結晶分離性が悪いという点、不純物の淘汰性(精製能力)が悪い点、および結晶成長速度が遅い点において改善の余地があることが知られている。
また、酸化型グルタチオン８水和物の結晶は、結晶中に含有される水含量が一定せず、安定性が悪い点、結晶を取得するのに３−４日間という長期間を要する点が問題であり、酸化型グルタチオン１水和物の結晶は、針状結晶であり凝集しやすいため結晶分離性が悪いという点、不純物の淘汰性(精製能力)が悪い点、および結晶成長速度が遅い点において改善の余地があることが知られている。
よって、安定性に優れ、かつ工業的に取り扱い易い酸化型グルタチオンの結晶が求められている。
J. Nutr. Sci., 44, pp613 (1998)
1999 International Union of Crysｔallograpy, pp1538 (1999)
本発明の目的は、例えば健康食品、医薬品、化粧品等の製品、原料もしくは中間体等として有用である酸化型グルタチオンの結晶を提供することおよび大量合成または工業化に適した酸化型グルタチオンの結晶の製造方法を提供することにある。
本発明は、以下の（１）〜（８）に関する。
（１）酸化型グルタチオン・６水和物の結晶。
（２）粉末X線回折において、回折角（２θ）が、８．１２°、９．７０°、１０．６２°、１２．４４°、１４．２０°、１６．２２°、１６．３８°、１７．９０°、１８．９０°、１９．５２°、２０．２６°、２１．３２°、２１．６０°、２２．８２°、２３．３４°、２４．４０°２４．７２°、２４．９８°、２５．５６°、２６．１８°、２６．６８°、２７．２０°、２８．３２°、２９．００°、２９．６６°、３１．０２°、３１．５８°、３２．２０°、３２．７２°、３２．８８°、３４．４８°および４１．５６°にピークを有する酸化型グルタチオン・６水和物の結晶。
（３）酸化型グルタチオン含有水溶液を１５℃以下に冷却することにより酸化型グルタチオン・６水和物の結晶を析出させた後、該水溶液から酸化型グルタチオン・６水和物の結晶を採取することを特徴とする上記（１）または（２）の酸化型グルタチオン・６水和物の結晶の製造方法。
（４）１５℃以下の酸化型グルタチオン含有水溶液にアルコール類およびケトン類からなる群より選ばれる溶媒を添加または滴下する工程を含むことを特徴とする上記（１）または（２）の酸化型グルタチオン・６水和物の結晶の製造方法。
（５）１５℃以下の酸化型グルタチオン含有水溶液にメタノール、エタノール、ｎ−プロパノールおよびイソプロピルアルコールからなる群より選ばれる溶媒を添加または滴下する工程を含むことを特徴とする上記（１）または（２）の酸化型グルタチオン・６水和物の結晶の製造方法。
（６）１５℃以下の酸化型グルタチオン含有水溶液にメタノールを添加または滴下する工程を含むことを特徴とする上記（１）または（２）の酸化型グルタチオン・６水和物の結晶の製造方法。
（７）酸化型グルタチオン含有水溶液が、酸化型グルタチオンを含有する溶液を合成吸着樹脂処理またはイオン交換樹脂処理することにより得られる水溶液である上記（３）〜（６）のいずれかの製造方法。
（８）上記（３）〜（７）のいずれかの製造方法により得られる酸化型グルタチオン・６水和物の結晶。
（１）酸化型グルタチオン・６水和物の結晶。
（２）粉末X線回折において、回折角（２θ）が、８．１２°、９．７０°、１０．６２°、１２．４４°、１４．２０°、１６．２２°、１６．３８°、１７．９０°、１８．９０°、１９．５２°、２０．２６°、２１．３２°、２１．６０°、２２．８２°、２３．３４°、２４．４０°２４．７２°、２４．９８°、２５．５６°、２６．１８°、２６．６８°、２７．２０°、２８．３２°、２９．００°、２９．６６°、３１．０２°、３１．５８°、３２．２０°、３２．７２°、３２．８８°、３４．４８°および４１．５６°にピークを有する酸化型グルタチオン・６水和物の結晶。
（３）酸化型グルタチオン含有水溶液を１５℃以下に冷却することにより酸化型グルタチオン・６水和物の結晶を析出させた後、該水溶液から酸化型グルタチオン・６水和物の結晶を採取することを特徴とする上記（１）または（２）の酸化型グルタチオン・６水和物の結晶の製造方法。
（４）１５℃以下の酸化型グルタチオン含有水溶液にアルコール類およびケトン類からなる群より選ばれる溶媒を添加または滴下する工程を含むことを特徴とする上記（１）または（２）の酸化型グルタチオン・６水和物の結晶の製造方法。
（５）１５℃以下の酸化型グルタチオン含有水溶液にメタノール、エタノール、ｎ−プロパノールおよびイソプロピルアルコールからなる群より選ばれる溶媒を添加または滴下する工程を含むことを特徴とする上記（１）または（２）の酸化型グルタチオン・６水和物の結晶の製造方法。
（６）１５℃以下の酸化型グルタチオン含有水溶液にメタノールを添加または滴下する工程を含むことを特徴とする上記（１）または（２）の酸化型グルタチオン・６水和物の結晶の製造方法。
（７）酸化型グルタチオン含有水溶液が、酸化型グルタチオンを含有する溶液を合成吸着樹脂処理またはイオン交換樹脂処理することにより得られる水溶液である上記（３）〜（６）のいずれかの製造方法。
（８）上記（３）〜（７）のいずれかの製造方法により得られる酸化型グルタチオン・６水和物の結晶。
本発明により、例えば健康食品、医薬品、化粧品等の製品、原料もしくは中間体等として有用である酸化型グルタチオンの結晶およびその製造方法が提供される。
本発明において、酸化型グルタチオンの溶液としては、酸化型グルタチオンを含有する溶液であればいずれでもよいが、例えば特公昭４４−２３９号公報、特公昭４６−４７５５号公報、特公昭４６−２８３８号公報、または特開昭６１−７４５９５号公報等に記載の方法に準じて、合成法、発酵法または酵母からの抽出法により得られる還元型グルタチオンを、還元型グルタチオンを含有する反応液のまま、または例えば精製した溶液、凍結乾燥粉末等として取得し、取得した還元型グルタチオンを、特開平５−１４６２７９号公報、または特開平７−１７７８９６号公報等に記載の方法に準じて、例えば酸素、過酸化水素、アスコルビン酸を酸化する酵素等で酸化することにより得られる酸化型グルタチオンを含有する水溶液、培養液、酵母からの抽出液、および除菌液等があげられる。
酸化型グルタチオン含有水溶液としては、酸化型グルタチオンを含有する水溶液であればいずれでもよいが、溶解成分中の酸化型グルタチオンの純度が５０％以上である水溶液が好ましく、さらには７０％以上である水溶液がより好ましい。該水溶液は、例えばメタノール、エタノール、イソプロピルアルコール、ｎ−プロパノール等のアルコール類、アセトン、メチルエチルケトン等のケトン類等、他の有機溶媒を含んでいてもよい。該水溶液中の水の含量としては、２０％以上が好ましい。具体的には、例えば酸化型グルタチオンの溶液（該酸化型グルタチオンの溶液は、上記酸化型グルタチオンの溶液と同義である）を前処理することにより調製される水溶液等があげられる。
該前処理法としては、例えば膜処理、ゲル濾過処理、活性炭処理、イオン交換樹脂処理、合成吸着樹脂処理、キレート樹脂処理、溶媒沈殿等、好ましくは活性炭処理、イオン交換樹脂処理、合成吸着樹脂処理、溶媒沈殿等があげられ、中でも合成吸着樹脂処理またはイオン交換樹脂処理がより好ましく、これらの処理法は適宜組み合わせてもよい。
また、酸化型グルタチオン含有水溶液としては、含有される酸化型グルタチオンの濃度が５０〜７００ｇ／Ｌである水溶液が好ましい。中でも１００〜４００ｇ／Ｌである水溶液が好ましく、これらは、適宜例えば濃縮等により調製される。
また、酸化型グルタチオン含有水溶液としては、含有される酸化型グルタチオンの濃度が５０〜７００ｇ／Ｌである水溶液が好ましい。中でも１００〜４００ｇ／Ｌである水溶液が好ましく、これらは、適宜例えば濃縮等により調製される。
水混和性有機溶媒としては、水と混和する性質を有する有機溶媒であればいずれでもよいが、好ましくは、例えばメタノール、エタノール、イソプロピルアルコール、ｎ−プロパノール等のアルコール類、アセトン、メチルエチルケトン等のケトン類等があげられる。
合成吸着樹脂としては、例えば非極性で多孔質の吸着樹脂等があげられ、具体的にはダイヤイオンＨＰシリーズ（例えば、ＨＰ１０、ＨＰ２０、ＨＰ２１、ＨＰ３０、ＨＰ４０、ＨＰ５０等；三菱化学製）、ダイヤイオンＳＰ８００シリーズ（例えば、ＳＰ８００、ＳＰ８２５、ＳＰ８５０、ＳＰ８７５等；三菱化学製）、ダイヤイオンＳＰ２００シリーズ（例えば、ＳＰ２０５、ＳＰ２０６、ＳＰ２０７、ＳＰ２０７ＳＳ等；三菱化学製）、アンバーライトＸＡＤシリーズ（例えば、ＸＡＤ４、ＸＡＤ７ＨＰ、ＸＡＤ１６、ＸＡＤ１６００等；ローム アンド ハース社製）等があげられる。中でも、ＳＰ２０７が好ましい。
合成吸着樹脂としては、例えば非極性で多孔質の吸着樹脂等があげられ、具体的にはダイヤイオンＨＰシリーズ（例えば、ＨＰ１０、ＨＰ２０、ＨＰ２１、ＨＰ３０、ＨＰ４０、ＨＰ５０等；三菱化学製）、ダイヤイオンＳＰ８００シリーズ（例えば、ＳＰ８００、ＳＰ８２５、ＳＰ８５０、ＳＰ８７５等；三菱化学製）、ダイヤイオンＳＰ２００シリーズ（例えば、ＳＰ２０５、ＳＰ２０６、ＳＰ２０７、ＳＰ２０７ＳＳ等；三菱化学製）、アンバーライトＸＡＤシリーズ（例えば、ＸＡＤ４、ＸＡＤ７ＨＰ、ＸＡＤ１６、ＸＡＤ１６００等；ローム アンド ハース社製）等があげられる。中でも、ＳＰ２０７が好ましい。
イオン交換樹脂としては、例えば強塩基性アニオン交換樹脂、弱塩基性アニオン交換樹脂、強酸性カチオン交換樹脂、弱酸性カチオン交換樹脂等があげられる。
強塩基性アニオン交換樹脂としては、例えばダイヤイオンＰＡシリーズ（例えば、ＰＡ３０６、ＰＡ３１２、ＰＡ４１２等；三菱化学製）等があげられ、弱塩基性アニオン交換樹脂としては、例えばダイヤイオンＷＡシリーズ（例えば、ＷＡ１０、ＷＡ２０、ＷＡ３０等；三菱化学製）等があげられる。
強塩基性アニオン交換樹脂としては、例えばダイヤイオンＰＡシリーズ（例えば、ＰＡ３０６、ＰＡ３１２、ＰＡ４１２等；三菱化学製）等があげられ、弱塩基性アニオン交換樹脂としては、例えばダイヤイオンＷＡシリーズ（例えば、ＷＡ１０、ＷＡ２０、ＷＡ３０等；三菱化学製）等があげられる。
強酸性カチオン交換樹脂としては、例えばアンバーライトＩＲシリーズ（例えば、１２４Ｎａ、２５２Ｎａ等；オルガノ社製）、ダウエックス（例えば、ＸＵＳ−４０２３２．０１等；ダウケミカル社製）等があげられ、弱酸性カチオン交換樹脂としては、例えばアンバーライトＩＲＣシリーズ（例えば、ＩＲＣ−５０、ＩＲＣ−７０等；ローム アンド ハース社製）等があげられる。
次に、酸化型グルタチオン・６水和物の結晶の製造方法の一例について詳細に説明する。
１．酸化型グルタチオン含有水溶液の調製
特開平５−１４６２７９号公報、または特開平７−１７７８９６号公報等に記載の方法に準じて、還元型グルタチオンを、例えば酸素、過酸化水素、アスコルビン酸を酸化する酵素等で酸化し、酸化型グルタチオンを含有する水溶液、培養液、酵母からの抽出液、除菌液等を得る。これを溶解成分中の酸化型グルタチオンの純度が例えば５０％以上、好ましくは７０％以上になるように必要に応じて前処理に付すことができる。
１．酸化型グルタチオン含有水溶液の調製
特開平５−１４６２７９号公報、または特開平７−１７７８９６号公報等に記載の方法に準じて、還元型グルタチオンを、例えば酸素、過酸化水素、アスコルビン酸を酸化する酵素等で酸化し、酸化型グルタチオンを含有する水溶液、培養液、酵母からの抽出液、除菌液等を得る。これを溶解成分中の酸化型グルタチオンの純度が例えば５０％以上、好ましくは７０％以上になるように必要に応じて前処理に付すことができる。
前処理した溶液または未処理の溶液を、含有される酸化型グルタチオンの濃度が例えば５０〜７００ｇ／Ｌ、好ましくは１００〜４００ｇ／Ｌとなるように、濃縮することにより酸化型グルタチオン含有水溶液を得る。また、前処理した溶液または未処理の溶液を凍結乾燥により粉末とし、得られた粉末を同様の濃度となるように水に溶解することによっても酸化型グルタチオン含有水溶液を得ることができる。このとき、粉末として市販の酸化型グルタチオンを用いてもよい。
酸化型グルタチオン含有水溶液を得るための前処理法としては、例えば膜処理、ゲル濾過処理、活性炭処理、イオン交換樹脂処理、合成吸着樹脂処理、キレート樹脂処理（キレート樹脂処理に使用するキレート樹脂としては、例えば、デュオライトＣ４６７；住友化学工業（株）製等があげられる）、溶媒沈殿等、好ましくは活性炭処理、イオン交換樹脂処理、合成吸着樹脂処理、キレート樹脂処理、溶媒沈殿等があげられ、中でも合成吸着樹脂処理またはイオン交換樹脂処理がより好ましく、これらの処理法は適宜組み合わせてもよい。
さらに具体的には、例えば、酸化型グルタチオンを含有する水溶液、培養液、酵母からの抽出液、除菌液等を合成吸着樹脂、好ましくはＳＰ２０７に通塔し、水または水混和性有機溶媒（該水混和性有機溶媒は前記と同義である）を単独でもしくは２種以上を混合して溶出液とし、分離精製を行うか、または、酸化型グルタチオンを含有する水溶液、培養液、酵母からの抽出液、除菌液等を架橋度１２％以上の強酸性カチオン交換樹脂（Ｈ＋型）、好ましくはＳＫ１１２またはＳＫ１１６に通塔後、さらに架橋度４％以下の強酸性カチオン交換樹脂（Ｈ＋型）、好ましくはＳＫ１０２またはＸＵＳ−４０２３２．０１に通塔して、各々水または水混和性有機溶媒（該水混和性有機溶媒は前記と同義である）単独のもしくはこれら２種以上を混合した溶出液、アンモニア水溶液、塩化ナトリウム水溶液等で溶出して分離精製を行うことにより高純度の酸化型グルタチオン含有水溶液を調製することができる。
原料である還元型グルタチオンとしては、市販品を用いるかまたは既知の方法（例えば、特公昭４４−２３９号公報、特公昭４６−４７５５号公報、特公昭４６−２８３８号公報、または特開昭６１−７４５９５公報等に記載の方法）に準じて、合成法、発酵法または酵母からの抽出法により得られる還元型グルタチオンを含有する水溶液、精製した溶液もしくは凍結乾燥粉末を用いることができる。
２．酸化型グルタチオン・６水和物の結晶の製造方法
１．で得られた酸化型グルタチオン含有水溶液を、必要に応じて塩酸もしくは硫酸、または水酸化ナトリウム水溶液等でｐＨ値が例えば２．５〜３．５となるように調整した後、該水溶液を−２０〜１５℃、好ましくは０〜１０℃の間の温度に１分間〜４８時間、より好ましくは１〜２４時間静置または攪拌することにより冷却晶析を行う。また当該温度に１分間〜４８時間、好ましくは１〜２４時間かけて下げることでも同様に晶析することができる。
２．酸化型グルタチオン・６水和物の結晶の製造方法
１．で得られた酸化型グルタチオン含有水溶液を、必要に応じて塩酸もしくは硫酸、または水酸化ナトリウム水溶液等でｐＨ値が例えば２．５〜３．５となるように調整した後、該水溶液を−２０〜１５℃、好ましくは０〜１０℃の間の温度に１分間〜４８時間、より好ましくは１〜２４時間静置または攪拌することにより冷却晶析を行う。また当該温度に１分間〜４８時間、好ましくは１〜２４時間かけて下げることでも同様に晶析することができる。
また、冷却晶析を行う際に酸化型グルタチオン含有水溶液にアルコール類、およびケトン類から選ばれる溶媒を添加また滴下することによっても酸化型グルタチオン・６水和物の結晶を析出させることもできる。
アルコール類の溶媒としては、エタノール、プロパノール、n-プロパノールおよびイソポロピルアルコール等をあげることができ、ケトン類の溶媒としては、アセトンおよびメチルエチルケトン等をあげることができる。
アルコール類の溶媒としては、エタノール、プロパノール、n-プロパノールおよびイソポロピルアルコール等をあげることができ、ケトン類の溶媒としては、アセトンおよびメチルエチルケトン等をあげることができる。
上記溶媒の添加量はとしては、酸化型グルタチオン含有水溶液１に対して、０．１〜１００倍、好ましくは０．１〜１０倍、より好ましくは０．１〜３倍の添加量をあげることができる。また滴下する場合は、１分〜１０時間、好ましくは１〜７時間かけて上記の量の溶媒を滴下することができる。
冷却晶析を行う際、溶媒を添加または滴下するしないにかかわらず、必要に応じて種晶を添加してもよい。種晶の添加量としては0．001〜５０g/L、好ましくは０．０１〜５g/Lの濃度になるように添加でき、滴下する場合は最終濃度が上記の濃度になるように滴下することができる。
冷却晶析を行う際、溶媒を添加または滴下するしないにかかわらず、必要に応じて種晶を添加してもよい。種晶の添加量としては0．001〜５０g/L、好ましくは０．０１〜５g/Lの濃度になるように添加でき、滴下する場合は最終濃度が上記の濃度になるように滴下することができる。
析出した結晶を、例えば遠心濾過、デカンテーション等を用いて分離し、水または水混和性有機溶剤で結晶を洗浄後、減圧下または通風下で取得した結晶を乾燥することにより、酸化型グルタチオン・６水和物の結晶を得ることができる。また、さらに洗浄、乾燥、再結晶等の操作を行うことによりさらに精製することもできる。
上記製造方法で得られる酸化型グルタチオン６水和物の結晶は、各種水混和性有機溶媒との付加物として得られることもあるが、これら各種水混和性有機溶媒との付加物も本願の結晶に含有される。
上記製造方法で得られる酸化型グルタチオン６水和物の結晶は、各種水混和性有機溶媒との付加物として得られることもあるが、これら各種水混和性有機溶媒との付加物も本願の結晶に含有される。
また、上記製造方法で得られる酸化型グルタチオン・６水和物の結晶には、異なった結晶形または異なった粒度のものが存在する場合もあり、これらが単独でまたは混合物として得られることもあるが、これら異なった結晶形または異なった粒度のものの単独または混合物も本願の結晶に含有される。
次に、本発明の酸化型グルタチオンの結晶の保存安定性（吸湿性）を試験例により具体的に説明する。
試験例：酸化型グルタチオン・６水和物の結晶と酸化型グルタチオン凍結乾燥粉末との吸湿性の比較
実施例３で得られた酸化型グルタチオン・６水和物の結晶と参考例１で得られた酸化型グルタチオン凍結乾燥粉末について、２３℃、常圧、湿度７０％の条件下での吸湿性を追跡した。 その結果、参考例１で得られた酸化型グルタチオン凍結乾燥粉末は、著しく吸湿し、２日後には潮解した。これに対して、実施例３で得られた酸化型グルタチオン・６水和物の結晶では、含有水分量の変化はほとんどみられず、極めて安定であることが判った。
次に、本発明の酸化型グルタチオンの結晶の保存安定性（吸湿性）を試験例により具体的に説明する。
試験例：酸化型グルタチオン・６水和物の結晶と酸化型グルタチオン凍結乾燥粉末との吸湿性の比較
実施例３で得られた酸化型グルタチオン・６水和物の結晶と参考例１で得られた酸化型グルタチオン凍結乾燥粉末について、２３℃、常圧、湿度７０％の条件下での吸湿性を追跡した。 その結果、参考例１で得られた酸化型グルタチオン凍結乾燥粉末は、著しく吸湿し、２日後には潮解した。これに対して、実施例３で得られた酸化型グルタチオン・６水和物の結晶では、含有水分量の変化はほとんどみられず、極めて安定であることが判った。
酸化型グルタチオン・６水和物の結晶の製造（１）
参考例１で得られた酸化型グルタチオン凍結乾燥粉末（３．０ｇ）を水に溶解し、酸化型グルタチオン含有水溶液（３０ｍＬ、酸化型グルタチオン含有濃度：1００ｇ／Ｌ）を調製した。この水溶液を５℃で４８時間静置して、結晶を析出させた。析出した結晶を濾過により分離して、通風乾燥することにより酸化型グルタチオン・６水和物の結晶（１．０ｇ）を得た。なお、該結晶が６水和物であることは、単結晶Ｘ線構造解析によっても確認した。
参考例１で得られた酸化型グルタチオン凍結乾燥粉末（３．０ｇ）を水に溶解し、酸化型グルタチオン含有水溶液（３０ｍＬ、酸化型グルタチオン含有濃度：1００ｇ／Ｌ）を調製した。この水溶液を５℃で４８時間静置して、結晶を析出させた。析出した結晶を濾過により分離して、通風乾燥することにより酸化型グルタチオン・６水和物の結晶（１．０ｇ）を得た。なお、該結晶が６水和物であることは、単結晶Ｘ線構造解析によっても確認した。
以下、取得された酸化型グルタチオン・６水和物の物理化学的性質を示す。
水和数：６水和物
融点：１９１℃
粉末X線回折[回折角(２θ°)、（）内は相対強度比（Ｉ／Ｉ０）を示す]：８．１２°（１００）、９．７０°（３３）、１０．６２°（４３）、１２．４４°（１４）、１４．２０°（１３）、１６．２２°（７１）、１６．３８°（２２）、１７．９０°（１８）、１８．９０°（９）、１９．５２°（７６）、２０．２６°（１７）、２１．３２°（１３）、２１．６０°（２２）、２２．８２°（４１）、２３．３４°（２６）、２４．４０°（３４）、２４．７２°（２３）、２４．９８°（３３）、２５．５６°（１２）、２６．１８°（１８）、２６．６８°（３４）、２７．２０°（９）、２８．３２°（１２）、２９．００°（１３）、２９．６６°（１１）、３１．０２°（１０）、３１．５８°（１０）、３２．２０°（９）、３２．７２°（１１）、３２．８８°（１２）、３４．４８°（１８）および４１．５６°（１３）
上記で得られた酸化型グルタチオン・６水和物の飽和溶解度を酸化型グルタチオン・１水和物と比較した結果を表１に示す。
水和数：６水和物
融点：１９１℃
粉末X線回折[回折角(２θ°)、（）内は相対強度比（Ｉ／Ｉ０）を示す]：８．１２°（１００）、９．７０°（３３）、１０．６２°（４３）、１２．４４°（１４）、１４．２０°（１３）、１６．２２°（７１）、１６．３８°（２２）、１７．９０°（１８）、１８．９０°（９）、１９．５２°（７６）、２０．２６°（１７）、２１．３２°（１３）、２１．６０°（２２）、２２．８２°（４１）、２３．３４°（２６）、２４．４０°（３４）、２４．７２°（２３）、２４．９８°（３３）、２５．５６°（１２）、２６．１８°（１８）、２６．６８°（３４）、２７．２０°（９）、２８．３２°（１２）、２９．００°（１３）、２９．６６°（１１）、３１．０２°（１０）、３１．５８°（１０）、３２．２０°（９）、３２．７２°（１１）、３２．８８°（１２）、３４．４８°（１８）および４１．５６°（１３）
上記で得られた酸化型グルタチオン・６水和物の飽和溶解度を酸化型グルタチオン・１水和物と比較した結果を表１に示す。
酸化型グルタチオン・６水和物の結晶の製造（２）
参考例１で得られた酸化型グルタチオン凍結乾燥粉末（１０．０ｇ）を水に溶解し、酸化型グルタチオン含有水溶液（３３ｍＬ、酸化型グルタチオン含有濃度：３００ｇ／Ｌ）を調製した。この水溶液を５℃に冷却し、実施例１で得られた結晶（０．１ｇ）を種晶として添加した。この溶液にメタノール（６６ｍＬ）を５時間かけて添加し、晶析を行った。晶析液を１時間熟成した後、析出した結晶を濾過により分離して、通風乾燥することにより酸化型グルタチオン・６水和物の結晶（８．５ｇ）を得た。
参考例１で得られた酸化型グルタチオン凍結乾燥粉末（１０．０ｇ）を水に溶解し、酸化型グルタチオン含有水溶液（３３ｍＬ、酸化型グルタチオン含有濃度：３００ｇ／Ｌ）を調製した。この水溶液を５℃に冷却し、実施例１で得られた結晶（０．１ｇ）を種晶として添加した。この溶液にメタノール（６６ｍＬ）を５時間かけて添加し、晶析を行った。晶析液を１時間熟成した後、析出した結晶を濾過により分離して、通風乾燥することにより酸化型グルタチオン・６水和物の結晶（８．５ｇ）を得た。
酸化型グルタチオンの結晶の製造（３）
特開昭６１−７４５９５号公報の実施例２に記載の方法に準じて得られた還元型グルタチオンを含有する水溶液を、特開平５−１４６２７９号公報に記載の方法に準じて、水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ７．５に調整した後、系内に酸素を吹き込んで酸化し、酸化型グルタチオン含有水溶液（４８．１Ｌ、酸化型グルタチオン含有濃度：１８．０ｇ／Ｌ）を得た。
特開昭６１−７４５９５号公報の実施例２に記載の方法に準じて得られた還元型グルタチオンを含有する水溶液を、特開平５−１４６２７９号公報に記載の方法に準じて、水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ７．５に調整した後、系内に酸素を吹き込んで酸化し、酸化型グルタチオン含有水溶液（４８．１Ｌ、酸化型グルタチオン含有濃度：１８．０ｇ／Ｌ）を得た。
該水溶液を硫酸でｐＨ３．０に調整した後、除菌処理して酸化型グルタチオンの除菌液（５５．５Ｌ、酸化型グルタチオン含有濃度：１４．４ｇ／Ｌ）を得た。この除菌液をダイヤイオンＳＫ１１６（２２Ｌ）に通塔した後、ダウエックスＸＵＳ−４０２３２．０１（１３Ｌ）に通塔することで酸化型グルタチオンを吸着させ、アンモニア水溶液（２０Ｌ、濃度：２ｍｏｌ／Ｌ）で酸化型グルタチオン溶出させた。
該溶出液をダイヤイオンＳＫ１１６（７Ｌ）に通塔することによりフリー化、およびアンモニアの除去を行い、酸化型グルタチオン含有水溶液（１９Ｌ、酸化型グルタチオン含有濃度：３５．４ｇ／Ｌ）を取得した。該水溶液に活性炭（１３０ｇ）を添加し、４０℃で１時間攪拌した後、濾過により活性炭を除去した。得られた濾液を、２．２４Ｌ（酸化型グルタチオン含有濃度：３００ｇ／Ｌ）まで濃縮した後、５℃まで冷却した。
該濃縮液に実施例１に記載の方法に準じて得られる結晶（１３ｇ）を種晶として添加した後、メタノール（４．６Ｌ）を５時間かけて添加し、晶析を行った。析出した結晶を濾過により分離し、通風乾燥することにより酸化型グルタチオン・６水和物の結晶（６１０ｇ）を得た。
参考例１
酸化型グルタチオン凍結乾燥粉末の取得
特開平５−１４６２７９号公報に記載の方法に準じて得られた還元型グルタチオン４．８ｇを水（２４ｍＬ）に溶解し、得られた還元型フルタチオン含有水溶液を水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ７．５に調整した後、硫酸銅存在下で攪拌した。反応液をダイヤイオンＳＫ１１６（３２ｍＬ）およびデュオライトＣ４６７（４ｍＬ、住友化学工業（株）製）に通塔し、処理液を濃縮して酸化型グルタチオン含有水溶液（１１ｍＬ、酸化型グルタチオン含有濃度：３００ｇ／Ｌ）を得た。この水溶液を凍結乾燥して、酸化型グルタチオンの凍結乾燥粉末３．０ｇを得た。
該濃縮液に実施例１に記載の方法に準じて得られる結晶（１３ｇ）を種晶として添加した後、メタノール（４．６Ｌ）を５時間かけて添加し、晶析を行った。析出した結晶を濾過により分離し、通風乾燥することにより酸化型グルタチオン・６水和物の結晶（６１０ｇ）を得た。
参考例１
酸化型グルタチオン凍結乾燥粉末の取得
特開平５−１４６２７９号公報に記載の方法に準じて得られた還元型グルタチオン４．８ｇを水（２４ｍＬ）に溶解し、得られた還元型フルタチオン含有水溶液を水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ７．５に調整した後、硫酸銅存在下で攪拌した。反応液をダイヤイオンＳＫ１１６（３２ｍＬ）およびデュオライトＣ４６７（４ｍＬ、住友化学工業（株）製）に通塔し、処理液を濃縮して酸化型グルタチオン含有水溶液（１１ｍＬ、酸化型グルタチオン含有濃度：３００ｇ／Ｌ）を得た。この水溶液を凍結乾燥して、酸化型グルタチオンの凍結乾燥粉末３．０ｇを得た。
本発明により、例えば健康食品、医薬品、化粧品等の製品、原料もしくは中間体等として有用である酸化型グルタチオンの結晶および大量合成または工業化に適した酸化型グルタチオンの結晶の製造方法が提供される。
Claims (7)
- 酸化型グルタチオン・６水和物の結晶。
- 粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ）が、８．１２°、９．７０°、１０．６２°、１２．４４°、１４．２０°、１６．２２°、１６．３８°、１７．９０°、１８．９０°、１９．５２°、２０．２６°、２１．３２°、２１．６０°、２２．８２°、２３．３４°、２４．４０°、２４．７２°、２４．９８°、２５．５６°、２６．１８°、２６．６８°、２７．２０°、２８．３２°、２９．００°、２９．６６°、３１．０２°、３１．５８°、３２．２０°、３２．７２°、３２．８８°、３４．４８°および４１．５６°にピークを有する酸化型グルタチオン・６水和物の結晶。
- 酸化型グルタチオン含有水溶液を１５℃以下に冷却することにより酸化型グルタチオン・６水和物の結晶を析出させた後、該水溶液から酸化型グルタチオン・６水和物の結晶を採取することを特徴とする請求項１または２記載の酸化型グルタチオン・６水和物の結晶の製造方法。
- １５℃以下の酸化型グルタチオン含有水溶液にアルコール類およびケトン類からなる群より選ばれる溶媒を添加または滴下する工程を含むことを特徴とする請求項１または２記載の酸化型グルタチオン・６水和物の結晶の製造方法。
- １５℃以下の酸化型グルタチオン含有水溶液にメタノール、エタノール、ｎ−プロパノールおよびイソプロピルアルコールからなる群より選ばれる溶媒を添加または滴下する工程を含むことを特徴とする請求項１または２記載の酸化型グルタチオン・６水和物の結晶の製造方法。
- １５℃以下の酸化型グルタチオン含有水溶液にメタノールを添加または滴下する工程を含むことを特徴とする請求項１または２記載の酸化型グルタチオン・６水和物の結晶の製造方法。
- 酸化型グルタチオン含有水溶液が、酸化型グルタチオンを含有する溶液を合成吸着樹脂処理またはイオン交換樹脂処理することにより得られる水溶液である請求項３から６のいずれかに記載の製造方法。
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