JP5894935B2 - サングリフェリン系化合物 - Google Patents
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Description
本発明は、例えば、C型肝炎ウイルス(HCV)、B型肝炎ウイルス(HBV)、及びヒト免疫不全ウイルス(HIV)などのウイルスによるウイルス感染の治療における、シクロフィリン阻害剤として有用なサングリフェリンアナログに関する。本発明は、特にHCV、HBV、及びHIV感染の治療のための、医学におけるそれらの使用方法、及び筋ジストロフィーなどのミトコンドリア膜透過性遷移孔(mPTP)の阻害が有用な疾病におけるそれらの使用方法も提供する。
(C型肝炎)
C型肝炎ウイルス(HCV)はプラス鎖のRNAウイルスであり、感染は輸血後肝炎の主な原因である。HCVは最もよく見られる慢性の血液由来の感染であり、米国における肝臓疾患による死亡の主な原因である。世界保健機関は、1億7千万人を超えるHCV感染の慢性キャリアがいると推定しており、これは世界の人口の約3%である。治療していないHCV感染患者のうち、約70%〜85%は慢性HCV感染を起こし、そのため肝硬変及び肝細胞癌を起こすリスクが高い。先進国では、肝臓癌の全症例の50〜76%及び全肝臓移植の3分の2は慢性HCV感染によるものである(Mannsら、2007)。
現在の標準治療(SoC)は、24〜48週間のペグ化インターフェロンα(pIFNα)の皮下注射及び抗ウイルス薬リバビリンの経口投薬である。治療の成功は持続性ウイルス陰性化(SVR)により定義されるが、これは治療期間の最後及び6ヶ月後に血清中にHCV RNAが存在しないことにより定義される。SoCに対する全奏効率は、主に遺伝子型及び治療前HCV RNAレベルによる。遺伝子型2及び3の患者は、遺伝子型1に感染している患者よりもSoCに対して、より反応しそうである(Melnikova, 2008; Jacobsonら、2007)。
シクロフィリン(CyP)は、タンパク質のコンフォメーション変化と折りたたみを容易にするペプチジル-プロリルシス-トランスイソメラーゼ活性を示す細胞タンパク質のファミリーである。CyPは、転写調節、免疫応答、タンパク質分泌、及びミトコンドリア機能などの細胞プロセスに関与している。HCVウイルスは、ヒトの感染の間その生活環のためにCyPをリクルートする。元々は、CyPが、RNA複製を促進するHCV非構造的タンパク質NS5B RNAポリメラーゼのRNA結合活性を刺激すると考えられていたが、CyP PPIアーゼ活性の要求を含む、代わりの仮説もいくつか提案されてきた。A及びBを含むCyPの種々のアイソフォームが、HCVの生活環に関与していると考えられている(Yangら、2008; Appelら、2006; Chatterjiら、2009; Gaitherら、2010)。マウス(Colganら、2000)及びヒトT細胞(Braaten及びLuban、2001)においてノックアウトを発生させる能力は、CyPAが細胞の成長及び生存にとって任意であることを示している。類似の結果が、細菌(Herrlerら、1994)、ニューロスポラ(Neurospore)(Tropschugら、1989)、及びサッカロマイセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)(Dolinskiら、1997)におけるCyPAホモログの***により観察された。したがって、CyPの阻害は、HCV感染を治療するための新規で魅力的な宿主標的であり、SVRを高め、耐性の出現を防止し、治療の副作用を低減する目的で、現行のSoC又はSTAT-C薬に対する新しい潜在的な追加物である。
サングリフェリンA(SfA)及びその天然の同族体は、ストレプトマイセス属(Streptomyces sp.)A92-308110(DSM 9954としても知られる)(国際公開第97/02285号参照)により産生される混合非リボソームペプチド/ポリケチドのクラスに属し、シクロフィリンA(CyPA)に対する高い親和性に基づいて元々発見された。SfAは、発酵ブロス中に最も豊富にある成分であり、CsAに比べてCyPAに対しておよそ20倍高い親和性を示す。これは、サングリフェリンがHCVの治療に有用になり得るという示唆をもたらした(国際公開第2006/138507号)。サングリフェリンは、インビトロで試験される場合CsAよりも低い免疫抑制活性を示すことも示された(Sanglierら、1999; Fehrら、1999)。SfAは、CyPAのCsA結合部位に高い親和性で結合する(Kallenら、2005)。
(ヒト免疫不全ウイルス(HIV))
CsA及びDEBIO-025などのシクロフィリン阻害剤は、HIV複製の阻害にも潜在的な効用を示した。シクロフィリン阻害剤は、HIV逆転写の進行/完了の間のCyPAの機能と干渉すると考えられている(Ptakら、2008)。しかし、臨床試験では、DEBIO-025は、それぞれ9名及び2名の患者でHIV-1 RNAレベルを≧0.5及び>1 log10 コピー/mLに低減しただけであり、治療された患者のうち27名はHIV-1 RNAレベルの低下を全く示さなかった(Steynら、2006)。この後で、DEBIO-025はHCV/HIV共感染患者で試験され、HCVに対してより良い効能を示し、HIV臨床試験は中止された(Watashiら、2010参照)。
世界中で3000万人を超える人々がHIV-1に感染しており、毎年300万の新しい症例がある。治療選択は、高活性抗レトロウイルス療法(HAART)の導入と共に劇的に向上した(Schopmanら、2010)。2008年までに、およそ25種の抗レトロウイルス薬がHIV-1の治療用に認可され、9種のヌクレオシド逆転写酵素阻害剤(NRTI)、4種の非-ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤(NNRTI)、9種のプロテアーゼ阻害剤(PI)、1種の融合阻害剤、1種のCCR5阻害剤、及び1種のインテグラーゼ阻害剤(Shafer及びSchapiro、2008)が含まれる。しかし、これらの現行のレジメンはいずれも完全なウイルス排除をもたらさず、それらは重症の副作用をもたらすことがあり、抗ウイルス耐性も未だ大きな懸念である。したがって、特に、シクロフィリン阻害剤の場合のように、認可された薬物がない作用機序クラスにおいて、新しい抗ウイルス療法の必要がいまだ存在する。
B型肝炎はヘパドナウイルス科のDNAウイルスであり、B型肝炎の原因因子である。HCV及びHIVの場合とは異なり、B型肝炎ウイルスに対するシクロフィリン阻害剤の活性の発表された記述は非常に少なかった。Ptakら、2008は、HBVに対するDebio-025の弱い活性(IC50は4.1μM)を記載したが、Xieら、2007はHBVに対するCsAのいくらかの活性(IC50>1.3μg/mL)を記載した。これはHIV及びHCVとは対照的であり、HIV及びHCVではシクロフィリン阻害剤のナノモーラーの抗ウイルス活性の報告が多数ある。
HBVは世界中で4億人を感染させており、ウイルス性慢性肝炎及び肝細胞癌の主な原因である。2008年現在、HBVの治療に認可された薬物が6種ある;インターフェロンアルファ及びペグ化インターフェロンアルファ、3種のヌクレオシドアナログ(ラミブジン、エンテカビル、及びテルビブジン)、及び1種のヌクレオチドアナログ(アデホビルジピボキシル)。しかし、耐性の率の高さ、許容性の低さ、及び起こり得る副作用のため、新しい治療選択が必要とされる(Ferirら、2008)。
ミトコンドリアの高伝導性透過性遷移孔(high conductance permeability transition pores)の開口は、ミトコンドリア透過性遷移(MPT)のオンセットを開始する。これは原因となる事象であり、酸化ストレス、Ca2+毒性、及び虚血/再潅流後の肝細胞における壊死及びアポトーシスをもたらす。シクロフィリン阻害剤によるシクロフィリンD(シクロフィリンFとしても知られる)の阻害は、透過性遷移孔の開口を遮断することが示されており、これらのストレスの後の細胞死を保護する。したがって、シクロフィリンD阻害剤は、筋ジストロフィー、特にウールリッヒ型先天性筋ジストロフィー及びベスレムミオパチー(Millayら、2008、国際公開第2008/084368号、Palmaら、2009)、多発性硬化症(Forteら、2009)、糖尿病(Fujimotoら、2010)、筋萎縮性側索硬化症(Martin 2009)、双極性障害(Kubotaら、2010)、アルツハイマー病(Du及びYan、2010)、ハンチントン病(Perryら、2010)、心筋梗塞後の回復(Gomezら、2007)、及び慢性のアルコール消費(Kingら、2010)など、mPTP開口が関与するとされてきた適応症において有用になり得る。
シクロフィリン阻害剤は、水痘帯状疱疹ウイルス(Ptakら、2008)、A型インフルエンザウイルス(Liuら、2009)、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス並びに他のヒト及びネココロナウイルス(Chenら、2005、Ptakら、2008)、デングウイルス(Kaulら、2009)、黄熱病ウイルス(Qingら、2009)、西ナイルウイルス(Qingら、2009)、西部馬脳炎ウイルス(Qingら、2009)、サイトメガロウイルス(Kawasakiら、2007)、及びワクシニアウイルス(Castroら、2003)などの他のウイルスに対して潜在的な活性を有し、そのためこれらウイルス感染の治療において潜在的な活性を有する。
癌など、他の治療分野におけるシクロフィリン阻害剤及びシクロフィリン阻害の効用についても報告がある(Hanら、2009)。
R1又はR2は、独立に、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アルキルシクロアルキル、アルキルシクロアルケニル、アルケニルシクロアルキル、アルケニルシクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール、アルキルアリール、アルキルヘテロアリール、アルケニルアリール、又はアルケニルヘテロアリールを表し、これらの基のいずれも単環式(monocylic)アリール又は単環式ヘテロアリールにより任意に置換されていてよく;
或いは、R1及び/又はR2は水素を表し;
かつ、アリール又はヘテロアリール基の一部でないR1及び/又はR2の1つ以上の炭素原子は、O、N、及びS(O)pから選択されるヘテロ原子により任意に置換されており、式中pは、0、1、又は2を表し、R1及び/又はR2の1つ以上の炭素原子はカルボニルにより任意に置換されており;
或いは、R1とR2とは結合して、示されている窒素原子を含む飽和又は不飽和の複素環を形成し、かつ該環の1つ以上の炭素原子は、O、N、及びS(O)pから選択されるヘテロ原子により任意に置換されており、式中pは0、1、又は2を表し、該環の1つ以上の炭素原子は任意にカルボニルにより置換されており、該複素環は任意にアリール又はヘテロアリール環に縮合していてよく;
R1及び/又はR2基の1つ以上の炭素原子は、1つ以上のハロゲン原子により任意に置換されていてよく;
R3は、H、-(CO)xアルキルを表し;
R4は、H又はOHを表し;
R5は、H、OH、又は=Oを表し;
nが二重結合を表す場合にR4がHを表す場合を除いて、nは単結合又は二重結合を表し;かつ
mが二重結合を表す場合にR5がHを表す場合を除いて、mは単結合又は二重結合を表し;
xは0又は1を表す)。
冠詞「1つの(a)」及び「1つの(an)」は、1つ又は2つ以上(すなわち、少なくとも1つ)の該冠詞の文法的な対象を意味するように本明細書において使用される。例としては、「1つのアナログ」は、1つのアナログ又は2つ以上のアナログを意味する。
本明細書では、用語「HIV」は、ヒト免疫不全ウイルス、ヒト後天性免疫不全症候群の原因因子を意味する。
本明細書では、用語「HBV」は、B型肝炎ウイルス、ヘパドナウイルス科の環状DNAエンベロープウイルスであり、B型肝炎の原因因子を意味する。
用語「治療」には、予防的処置並びに治療的処置が含まれる。
本発明は、上述のサングリフェリンマクロ環アミドアナログ、これらの化合物の製造方法、及び医学におけるこれらの化合物の使用方法を提供する。
R1及び/又はR2が-アルケニルアリールを表す場合、例にはC2-3アルケニルアリール、例えば-エテニルフェニルがある。
R1及び/又はR2が-アルキルヘテロアリールを表す場合、例にはC1-2アルキルヘテロアリール、例えば-メチルピリジニルがある。
R1及び/又はR2が-アルケニルヘテロアリールを表す場合、例にはC2-3アルケニルヘテロアリール、例えば-エテニルピリジニルがある。
R1及び/又はR2の炭素原子がヘテロ原子により置換される場合、好適にはO又はNにより、特にOにより置換される。
一実施態様において、R1は、単環式アリール若しくは単環式ヘテロアリールにより置換されているアリール若しくはヘテロアリール、-C1-4アルキル、-OC1-4アルキル、-COC1-4アルキル、又は-C2-4アルケニルを表し得る。
R1とR2とが結合した場合に形成される複素環は、典型的には示されている窒素原子のみを含むか、又は1若しくは2個(例えば、1個)の追加のへテロ原子、特に窒素又は酸素原子を含む。
例えば、R1とR2とが結合した場合に形成される環は、モルホリニル又は1,2-オキサジナンでよい。
R1とR2とが結合して、示されている窒素原子を含む飽和又は不飽和の複素環を形成する場合であって、該環の1個以上の炭素原子がO、N、及びS(O)p(式中、pは0、1、又は2を表す)から選択されるヘテロ原子により任意に置換されており、該環の1個以上の炭素原子がカルボニルにより任意に置換されており、該複素環がアリール又はヘテロアリール環に縮合している場合、例はテトラヒドロキノリニルである。
例えば、R1及び/又はR2は-COC1-4アルキル、例えば-COMeを表すことがある。
好適には、R1の炭素原子はカルボニルにより置換されていない。
好適には、R2の炭素原子はカルボニルにより置換されていない。
好適には、R1は水素を表さない。
好適には、R1及びR2は両方とも水素を表さない。
好適には、R2の炭素原子はヘテロ原子により全く置換されていない。
いくつかの実施態様において、R1の炭素原子はヘテロ原子により全く置換されていない。
好適には、R2は、水素、アルキル、又はアルケニルを表す。
或いは、好適には、R1とR2とはそれらが結合している窒素と共に、ピロリジン、ピペリジン、モルホリン、又はピペラジン環などの5員〜7員の複素環を表し、ピペラジンの4窒素がC1-4アルキルにより任意に置換されている。
例えば、R1及び/又はR2部分は、最高6個のハロゲン原子(例えばF原子)、例えば最高3個のハロゲン原子(例えばF原子)により置換され得る。
例示的なハロゲン化されたR1及び/又はR2部分は-CF3である。
或いは、R1及び/又はR2は水素を表し;
アリール又はヘテロアリール基の一部でないR1及び/又はR2の1つ以上の炭素原子は、O、N、及びS(O)pから選択されるヘテロ原子により任意に置換されており、式中pは、0、1、又は2を表し、R1及び/又はR2の1つ以上の炭素原子はカルボニルにより任意に置換されており;
或いは、R1とR2とは結合して、示されている窒素原子を含む飽和又は不飽和の複素環を形成し、かつ該環の1つ以上の炭素原子は、O、N、及びS(O)pから選択されるヘテロ原子により任意に置換されており、式中pは0、1、又は2を表し、該環の1つ以上の炭素原子は任意にカルボニルにより置換されており、該複素環は任意にアリール又はヘテロアリール環に縮合していてよい。
さらなる例示的なR1基には、任意に置換されているピリジニル又は任意に置換されているフェニル、例えば、フェニルにより置換されているフェニルがある。上述の例示的な基は、H、Me、又は-OMeを表すR2とまとめられることがある。
さらなる例示的なR1基には、-O-(任意に置換されているフェニル)又は-O-(任意に置換されているピリジニル)がある。上述の例示的な基は、例えば、H又はMeを表すR2とまとめられることがある。
好適には、nは単結合を表す。
好適には、mは単結合を表す。
好適には、R4はOHを表す。
好適には、R5は=Oを表す。
本発明の好適な実施態様において、C26, 27位の二重結合は、下記の式により表されるとおり、シス形態である。
(a)サングリフェリンA又はサングリフェリンの他の天然のアナログ(例えば、サングリフェリンB)又は変数R3、R4、R5、n、及びmにより示される部位での変動を有するそのアナログのジヒドロキシ化;
(b)1,2-ジオールの酸化開裂によるアルデヒドの生成;及び
(c)前記アルデヒドと、式IIの化合物を利用するホスホン酸エステルカルバニオンなどの安定化されたカルバニオン(又はその標準的な形態)とのカップリング。
このため、本発明の化合物を製造する方法は、式IIの化合物をアルデヒド性マクロ環(式IIIの化合物)と反応させることを含む。
メタノール付加物は、発酵及びブロスからの単離により製造でき、或いはサングリフェリンA(国際公開第97/02285号)から製造できる。
本発明のサングリフェリンマクロ環は、単独又は他の治療剤と組み合わせて投与できる。2種(以上)の薬剤の同時投与により、それぞれのより低い投与量を利用でき、そのため副作用が低減され、効力の向上をもたらすことができ、そのためより高いSVR及び耐性の低減をもたらすことができる。
組成物は、投与の方法により、0.1重量%、好ましくは5〜60%、より好ましくは10〜30重量%の本発明の化合物を含み得る。
医薬として使用するための本発明の化合物;
HCV、HBV、若しくはHIV感染などのウイルス感染(特にRNAウイルス感染)又は筋ジストロフィー、ウールリッヒ型先天性筋ジストロフィー、ベスレムミオパチー、多発性硬化症、糖尿病、筋萎縮性側索硬化症、双極性障害、アルツハイマー病、ハンチントン病、心筋梗塞、若しくは慢性アルコール消費などの他の疾病の治療のための医薬として使用するための本発明の化合物;
本発明の化合物を、医薬として許容し得る希釈剤又は担体と共に含む医薬組成物;
本発明の化合物を、医薬として許容し得る希釈剤又は担体と共に含み、第2又はそれに次ぐ有効成分、特にHCV、HBV、若しくはHIV感染などのウイルス感染又は筋ジストロフィー、ウールリッヒ型先天性筋ジストロフィー、ベスレムミオパチー、多発性硬化症、糖尿病、筋萎縮性側索硬化症、双極性障害、アルツハイマー病、ハンチントン病、心筋梗塞、若しくは慢性アルコール消費の治療に適応される有効成分をさらに含む、医薬組成物;
HCV、HBV、若しくはHIV感染などのウイルス感染(特にRNAウイルス感染)又は筋ジストロフィー、ウールリッヒ型先天性筋ジストロフィー、ベスレムミオパチー、多発性硬化症、糖尿病、筋萎縮性側索硬化症、双極性障害、アルツハイマー病、ハンチントン病、心筋梗塞、若しくは慢性アルコール消費の治療の方法であって、対象に治療上有効な量の本発明の化合物を投与することを含む方法;
HCV、HBV、若しくはHIV感染などのウイルス感染又は筋ジストロフィー、ウールリッヒ型先天性筋ジストロフィー、ベスレムミオパチー、多発性硬化症、糖尿病、筋萎縮性側索硬化症、双極性障害、アルツハイマー病、ハンチントン病、心筋梗塞、若しくは慢性アルコール消費の治療のための医薬の製造のための本発明の化合物の使用。
(材料及び方法)
(菌株及び増殖条件)
BIOT-4253及びBIOT-4370とも称されるサングリフェリン産生株ストレプトマイセス属A92-308110(DSM no 9954、ドイツ、ブラウンシュヴァイクのDSMZから購入)を、オートミール寒天培地、MAM、又はISP2(下記参照)上で28℃で維持する。
121℃、20〜30分加熱により滅菌(オートクレーブ処理)
備考
*消泡剤は、シードフラスコではなく、シード発酵槽にのみ使用
**最終体積を適宜調整して、シード体積とする
121℃、20〜30分加熱により滅菌(オートクレーブ処理)
備考
*最終体積を適宜調整して、シード体積とする
**消泡剤は、フラスコではなく、発酵槽にのみ使用
培養ブロス(1 mL)及び酢酸エチル(1 mL)を加え、15〜30分間混合し、次いで10分間遠心分離する。0.4 mLの有機層を回収し、蒸発乾固させ、次いで0.20 mLのアセトニトリルに再溶解させる。
HPLC条件:
C18 Hyperclone BDS C18 カラム 3μ, 4.6 mm×150 mm
Phenomenex Analytical C18 Security Guard Cartridge(KJ0-4282)を備える
カラム温度50℃
流速1 mL/分
240 nmで紫外モニター
20 μLアリコートを注入
0分:55% B
1.0分:55% B
6.5分:100% B
10.0分:100% B
10.05分:55% B
13.0分:55% B
溶媒Bは、アセトニトリル+0.1%ギ酸である。
これらの条件下でSfAは5.5分に溶離する。
これらの条件下でSfBは6.5分に溶離する。
特記されない限り、反応は全て無水の条件下で、オーブン乾燥させ真空下で冷却したガラス器具中で、乾燥させた溶媒を使用して実施する。反応は、適切な方法、例えば、培養ブロスのモニタリングに関して先に記載された方法を利用して、LC-UV-MSによりモニタリングする。
(HPLC条件)
C18 Hyperclone BDS C18カラム3μ, 4.6 mm×150 mm
Phenomenex Analytical C18 Security Guard Cartridge (KJ0-4282)を備える
カラム温度50℃
流速1 mL/分
210、240、及び254 nmで紫外モニター
0分:10% B
2.0分:10% B
15分:100% B
17分:100% B
17.05分:10% B
20分:10% B
溶媒Aは、水+0.1% ギ酸である。
溶媒Bは、アセトニトリル+0.1% ギ酸である。
MSは、150〜1500amuをスキャンする、スイッチングモード(ポジティブとネガティブの間をスイッチング)で運転する。
(インビトロ分析LC-MS法(例えば、溶解度のアッセイ))
API-4000装置を使用
(HPLC条件):
Ultimate AQ-C18 (2.1×50mm, 3μM)
カラム温度XX℃
流速0.4 mL/分
0.2分:10% B
0.7分:60% B
1.1分:60% B
1.4分:98% B
2.3分:98% B
2.4分:10% B
3.5分:停止
0.3分:10% B
0.9分:95% B
1.9分:95% B
2.0分:10% B
3.0分:停止
溶媒Aは、H2O-0.025% FA-1 mM NH4OACである。
溶媒Bは、MeOH-0.025% FA-1 mM NH4OACである。
遺伝子型1HCVに対する抗ウイルス効能を下記にように試験できる:試験物質の添加の1日前に、HCV遺伝子型1b I389luc-ubi-neo/NS3-3'/5.1レプリコン(Vrolijkら、2003)を含み、細胞増殖培地[10% FCS、1%非必須アミノ酸(11140035)、1% ペニシリン/ストレプトマイシン(15140148)、及び2%ジェネティシン(10131027); Invitrogen社製を補ったDMEM(カタログ番号41965039)]中で1.3〜1.4の比で3〜4日間75cm2の組織培養フラスコ(Techno Plastic Products社製)で継代培養したHuh5.2細胞を回収し、6500細胞/ウェル(100μL/ウェル)の密度で96-ウェル組織培養マイクロタイタープレート(抗代謝効果の評価にはFalcon、Beckton Dickinson社製、抗ウイルス効果の評価にはCulturPlate、Perkin Elmer社製)中で、アッセイ培地(DMEM、10% FCS、1%非必須アミノ酸、1%ペニシリン/ストレプトマイシン)に播種した。マイクロタイタープレートを一晩インキュベートすると(37℃、5% CO2、相対湿度95〜99%)、非コンフルエントな細胞単層を生じる。希釈系列を準備する;各希釈系列を少なくとも二連で実施する。アッセイのセットアップ後に、マイクロタイタープレートを72時間(37℃、5% CO2、相対湿度95〜99%)インキュベートする。
水への溶解度を下記のように試験できる:サングリフェリンアナログの10 mMストック溶液を室温で100% DMSOに調製する。三連の0.01 mLのアリコートを、アンバーバイアル中で、pH 7.3の0.1 M PBS溶液又は100% DMSOにより0.5mLにする。得られた0.2 mM溶液を、IKA(登録商標)vibrax VXRシェーカーで、室温で6時間振盪し、次いで得られた溶液又は懸濁液を2 mLエッペンドルフ管に移し、13200 rpmで30分間遠心分離する。次いで、上清液体のアリコートを上述のLCMS法により分析する。
細胞透過性を下記のように試験できる:被験化合物をDMSOに溶かして10mMにし、次いで緩衝液にさらに希釈して、最終10μM投薬濃度を与える。蛍光マーカールシファーイエローも含めて、膜統合性をモニターする。次いで、被験化合物をCaco-2細胞単層の頂端膜側にアプライし、基底面コンパートメントへの化合物透過を測定する。これを逆方向に実施し(基底面から頂端へ)、能動輸送を調べる。LC-MS/MSを利用して、被験化合物及び標準対照化合物(プロパノロール及びアセブトロールなど)の両方のレベルを定量化する。
インビボアッセイを利用して、化合物のバイオアベイラビリティを測定できる。一般的に、化合物を、静脈内(i.v.)及び経口的(p.o.)の両方で試験動物(例えば、マウス又はラット)に投与し、一定間隔で採血して、薬物の血漿濃度が時間とともに変動する様子を調査する。経時的な血漿濃度の経時変化を利用して、標準モデルを利用して化合物の絶対的なバイオアベイラビリティをパーセンテージとして計算できる。典型的なプロトコルの例を以下に記載する。
マウスに、1、10、又は100 mg/kgの本発明の化合物又は親化合物を、i.v.又はp.o.で投薬する。5分、10分、15分、30分、45分、60分、90分、120分、180分、240分、360分、420分、及び2880分に採血し、試料中の本発明の化合物又は親化合物の濃度をHPLCにより決定する。次いで、血漿濃度の経時変化を利用して、血漿濃度-時間曲線下面積(AUC-体循環に達する未変化の薬物の総量に正比例する)、最大(ピーク)血漿中薬物濃度、最大血漿中薬物濃度が起こる時間(ピーク時間)などのキーパラメーターを誘導できるが、バイオアベイラビリティの正確な決定に利用できる追加の因子には下記がある:化合物の終末半減期、全身クリアランス、定常状態分布容積、及びF%。次いで、これらのパラメーターを、非コンパートメント法又はコンパートメント法により分析して、計算されたバイオアベイラビリティのパーセンテージを与えるが、この種類の方法に関しては、Egorinら、2002、及び該文献の引用文献を参照されたい。
MDR1(P糖タンパク質1)及びMRP2トランスポーターの阻害及び活性化の評価には、Solvo Biotechnology社のインビトロATPアーゼアッセイ(Glavinasら、2003)が利用できる。化合物(0.1、1、10、及び100μM)を、バナジン酸塩の非存在下と存在下の両方で、MDR1又はMRP2膜小胞と共にインキュベートし、潜在的なATPアーゼ活性化を試験する。さらに、トランスポーターATPアーゼ活性の起こりうる阻害を検出するために、ベラパミル/スルファサラジンの存在下で類似のインキュベーションを実施する。ATPアーゼ活性は、無機のリン酸塩を分光測定により定量化して測定する。活性化は、ATPアーゼ活性のバナジン酸感受性増加から計算する。阻害は、ベラパミル/スルファサラジンに媒介されるATPアーゼ活性の低下から決定する。
HIVに対する抗ウイルス効能を下記のとおり試験できる:血液由来のCD4+T-リンパ球及びマクロファージを、既報のとおり単離する(Bobardtら、2008)。簡単に述べると、ヒトPBMCをFicoll-Hypaqueで層状にする(30分間、800g、25℃)ことにより鮮血から精製した。一次ヒトCD4+ T細胞を、抗CD4ダイナビーズによるポジティブ選択及びそれに続くデタッチャビーズを利用する放出により、PBMCから精製した。細胞を、10% FCS、MEMアミノ酸、L-グルタミン、MEMビタミン類、ピルビン酸ナトリウム、及びペニシリンプラスストレプトマイシンを補ったRPMI培地1640(Invitrogen社製)中で培養し、その後、細菌性超抗原ブドウ球菌エンテロトキシンB(SEB; 100 ng/ml)及び他のドナー由来のマイトマイシンCに殺傷されたPBMC(10:1 PBMC:CD4 細胞比)で活性化した。刺激の3日後、細胞を、IL-2を含む培地(200 単位/ml 最終濃度)中で1:2に分けた。次いで、培養物をIL-2培地中で2日ごとに1:2に分け、刺激の7日後にHIVに感染させた。初代ヒトマクロファージを発生させるために、単球をネガティブ選択によりヒトPBMCから精製し、106/mlの細胞濃度で、10% FCS、MEMアミノ酸、L-グルタミン、MEMビタミン、ピルビン酸ナトリウム、及びペニシリン(100単位/ml)、ストレプトマイシン(100 mg/ml)、及び50 ng/mlのリコンビナントヒト顆粒球-マクロファージコロニー刺激因子(GM-CSF)を補ったDMEM中で活性化及び培養し、5% CO2を補った加湿雰囲気中で37℃に維持した。単球誘導マクロファージを得るために、細胞をプラスチックに付着させ、6日間培養して分化させた。
HBVに対する抗ウイルス効能を下記のように試験できる:HepG2 2.2.15細胞を96-ウェルマイクロタイタープレートに播種する。16〜24時間後、HepG2 2.2.15細胞のコンフルエントな単層を洗浄し、三連で種々の濃度の被験化合物(例えば、6回のハーフログ濃度(half-log concentrations))を含む完全培地と替える。3日後、培地を、適切に希釈された被験化合物を含む新鮮な培地に替える。被験物質の最初の投与の6日後、細胞培養物上清を回収し、プロナーゼで処理し、次いで、リアルタイム定量的TaqMan qPCRアッセイに使用する。増幅されたHBV DNAにハイブリダイズするクエンチされた蛍光プローブ分子のエキソヌクレアーゼ分解から生じる蛍光シグナルの増加をモニタリングすることにより、PCR増幅されたHBV DNAをリアルタイムに検出する。各PCR増幅に対して、精製されたHBV DNAの希釈物を使用して、検量線が同時に生成される。抗ウイルス活性は、HBV DNAレベルの低下から計算される(IC50)。次いで、色素取り込みアッセイを利用して、細胞生存率を計算し、それを利用して毒性(TC50)を計算する。治療指数(TI)をTC50/IC50として計算する。
免疫抑制活性を下記のとおり試験した:末梢血単核細胞(PBMC)集団を、ヒストパック上での遠心分離を利用して、2名の正常な関連性のないボランティアドナー(A及びB)の血液から精製した。細胞を計数し、補助剤及び2%ヒトAB血清を含むRPMI培地中で、96ウェルプレート中で1×105細胞/ウェルで播種した。
培養条件は下記のとおりであった:それぞれ6種の異なる濃度での被験物質の存在下又は非存在下の、細胞集団A及びBのみ並びに細胞A及びBの混合集団。化合物を、1-logの増加分で10μM〜0.0001μMの範囲の投与量で試験した。対照ウェルは、被験化合物ウェルに存在するものに相当する濃度のビヒクル(0.5% DMSO)を含んでいた。培養物を三連で96ウェルプレートに確立し、加湿雰囲気中で5% CO2中37℃でインキュベートした。3H-チミジンをアッセイセットアップの6日後に加え、24時間後に採取した。次いで、異なる培養条件の間の増殖のレベルを比較した。
被験化合物の各希釈物がMLR中の増殖を阻害する能力を、阻害パーセンテージとして計算した。これにより、IC50(1分あたりのカウントの50%低減をもたらす被験化合物の濃度)の評価ができた。IC50を計算するために、X軸を対数スケールに変換した。非線形回帰を利用して、平均のデータポイントにフィッティングした。S状の可変の傾きを選択した。
このアッセイを利用してCyp-NS5A複合体の***を測定したが、これはシクロフィリンDとの相互作用の効力を示すのに使用できる。簡単に述べると、リコンビナントGST、GST-CypD、及びCon1 NS5A-Hisタンパク質の産生及び精製を既報のとおり実施した(Chatterjiら、2010)。Nunc MaxiSorb 8-ウェルストリッププレートをGST又はGST-CypDにより4℃で16時間コーティングし、ブロックした。リコンビナントNS5A-His(1 ng/mL)を、50μLの結合緩衝液(20 mM Tris pH 7.9、0.5 M NaCl、10% グリセロール、10 mM DTT、及び1% NP-40)中4℃で16時間ウェルに加えた。次いで、捕捉されたNS5A-Hisを、マウス抗His抗体(1 μg/mL)(抗-6xHis、Clontech社製)及びウサギ抗マウスホースラディッシュペルオキシダーゼホスファターゼ(HRP)抗体(1:1000希釈)を使用して検出した。実験は全て、2つの異なるバッチのリコンビナントCypD及びNS5Aタンパク質を使用して2回行った。
シクロフィリンとの相互作用を分析するための別な方法論が下記のとおり記載される:GST-CypDのトロンビン開裂により生じるリコンビナントCypDのPPIアーゼ活性を、キモトリプシンによるN-スクシニル-Ala-Ala-Pro-Phe-p-ニトロアニリドの加水分解速度を追跡することにより決定した。キモトリプシンはトランス型のペプチドのみを加水分解し、シス型は、その濃度が470 mM LiClを含むトリフルオロエタノールに溶解しているストックを用いることにより最大になるが、その加水分解はシストランス異性化の速度により限定されている。CypDを、選択された被験物質と0.1〜20 nMの薬物濃度範囲を利用して5℃で1時間平衡化させた。ペプチドの添加により反応を開始させ、吸光度の変化を1秒あたり10データポイントで分光測定によりモニターした。加水分解のブランク速度(CypDの非存在下)を、CypDの存在下での速度から引く。酵素反応の初期速度を、吸光度変化の経時変化の一次回帰分析により分析した。
植物培養液は、フォームプラグ付き2Lアーレンマイヤーフラスコ中で、ストレプトマイセス属A92-308110の胞子ストックから0.2 mLを400mLのシード培地SGSに接種することにより調製した。
全ブロス(30 L)を遠心分離により清澄化した。得られた細胞ペレットを酢酸エチルで2回抽出したが(2×10 L)、それぞれオーバーヘッドパドル攪拌機により1時間攪拌し、溶媒をポンプで吸引する前に放置して沈降させることにより抽出した。次いで、酢酸エチル層を合わせ(約20 L)、溶媒を減圧下40℃で除去して、油状の残渣を得た。次いで、この油状残渣を、80:20 メタノール:水(総体積500 mL)に懸濁させ、ヘキサンで2回抽出した(2×500 mL)。次いで、80:20 メタノール:水分画を減圧下で乾燥させると、SfA及びSfBを含む粗製乾燥抽出物を与えた。この抽出物をメタノール(100 ml)に溶解させ、15 gのシリカゲルと混合して乾燥させて粉末とした。該粉末を、100% CHCl3に充填されているシリカゲルカラム(5×20 cm)に入れた。溶離溶媒1リットルごとに、メタノール濃度を段階的に1%ずつ増加させ、250 mlのフラクションを集めた。3リットルの溶媒溶離の後、メタノール濃度を段階的に2%ずつ増加させて8%にした。SfA及び/又はSfBを含むフラクションを合わせて、真空中で蒸発乾固させ、SfA及びSfBを分取HPLCにより精製した。分取HPLCは、下記の時間表で20 ml/分で溶媒A(水)及び溶媒B(アセトニトリル)を流すWaters Xterra Prep MS C18 OBD 10mm(19×250 mm)カラムで行った。
t=0分、55% B
t=4分、55% B
t=30分、100% B
t=32分、100% B
t=36分、55% B
SfAを含むフラクションを合わせて、乾燥させた。
(3.1 26,27-ジヒドロキシサングリフェリン、9の製造)
(18.3 55の合成)
全般的方法に記載されたとおりレプリコンアッセイにおいて化合物を分析した。シクロスポリンA、1、サングリフェリンA、5、及びヒドロキシマクロ環、6を比較として含めた。
pH 7.4のPBSへの化合物の溶解度を、全般的方法に記載されたとおり分析した。シクロスポリンA、1及びサングリフェリンA、5を比較として含めた。
化合物を、全般的方法に記載されたとおり不死化細胞及び一次標的細胞を利用してHIV抗ウイルスアッセイにおいて分析した。シクロスポリンA、1及びサングリフェリンB、7を比較として含めた。
化合物を、全般的方法に記載されたとおりレプリコンアッセイにおいて分析した。シクロスポリンA、1及びサングリフェリンA、7を比較として含めた。
免疫抑制活性は、抗ウイルス療法としての使用には望まれない副作用である。したがって、化合物を、全般的方法に記載されたとおり混合リンパ球反応(MLR)において試験した。シクロスポリンA、1及びサングリフェリンA、5を比較として含めた。
被験化合物とシクロフィリンDとの相互作用を調査するため、全般的方法に記載されたとおり、CypD-NS5A***系を利用した。
サングリフェリンモジュール12の還元ループは、サングリフェリン分子のC17のヒドロキシル基に関与するケトレダクターゼを含む。ラパマイシンモジュール13及びサングリフェリンモジュール6の両方由来の還元ループは、機能的領域の全てを含み、βケト基の完全な処理をもたらしメチレンを生み出す;具体的には、それらは、ケトをヒドロキシル基に還元するケトレダクターゼ、水を除いて二重結合をつくるデヒドラターゼ、及び二重結合をメチレンに還元するエノイルレダクターゼを含む。ベクターpMGo136及びpMGo137は、サングリフェリン生合成用の生合成クラスターのモジュール12の還元ループの、それぞれラパマイシンモジュール13又はサングリフェリンモジュール6由来の還元ループへの置換を操作するベクターである。
ベクターは下記のとおり構築する。
図16に示されるこの2072 bp DNAフラグメント(配列番号1)は、サングリフェリンモジュール12の還元ループの上流に相同領域(Genbank受託番号FJ809786.1公表配列において、およそ86654 bp〜88798 bp)を、追加の配列5'及び3'の両方を共に含み、クローニングを助ける制限酵素配列を組み込んでいる。このフラグメント(配列番号1)は、GenScript(860 センテニアルアベニュー、ピスカタウェイ、ニュージャージー州、08854、アメリカ合衆国)により合成され、GenScriptプロトコルにしたがって、この点を超えてクローニングに関与しない12の保護的フランキング塩基を両側に含んでpUC57中に提供され、プラスミドpMGo128をもたらした。
オリゴMGo013(配列番号2)及びMGo014(配列番号3)を使用し、テンプレートとしてのコスミドpTL3102(Quら、2011)DNA及びKOD Hot Start DNAポリメラーゼを使用して、1994 bp DNAフラグメント(配列番号4)を標準的なPCR反応で増幅した。5'伸長は、制限部位を導入して増幅されたフラグメントのクローニングを促進するように各オリゴにおいて設計した。或いは、ストレプトマイセス属A92-308110 (DSM9954)(BIOT-4370)由来のゲノムDNAを、このPCR反応のテンプレートとして使用して同じDNAフラグメントを与えることも可能であり、又はDNAフラグメントを、例えばGenScript(860 センテニアルアベニュー、ピスカタウェイ、ニュージャージー州、08854、アメリカ合衆国)を利用してDNA合成から得ることも可能であった。生じた1995 bp PCR産物(配列番号4)は、サングリフェリンモジュール12の還元ループの下流に相同領域(genbank受託番号FJ809786.1公表配列において、およそ90415 bp〜92381 bp)を含むが、望ましくない挿入Gが位置1978にある(図17参照;挿入されたGは太字で下線が引いてある)。1995 bp PCR産物(配列番号4)は、SmaIにより直線化され脱リン酸化されたpUC19(New England Biolabs社製)中にクローニングされ、プラスミドpMGo123をもたらした。
モジュール12のサングリフェリン還元ループの上流及び下流相同領域は、下記のとおり一緒にクローニングされる:2065 bp上流領域を、EcoRI及びXhoIによる消化でpMGo128から切除し、1944 bp下流領域を、XhoI及びHindIIIによる消化でpMGo125から切除する。両フラグメントを、pUC19(New England Biolabs社製)がEcoRI及びHindIIIにより消化されるときに生じる大きな骨格フラグメントに、3パート・ライゲーションで一緒にクローニングする。両インサートを含む正しくクローニングされたプラスミドを制限酵素分析により特定し、正しいプラスミドの1つをpMGo130と称する。
プラスミドpMGo136及びpMGo137を、標準的な技術を利用してエシェリキア・コリ(E. Coli)ET12567 pUZ8002中に形質転換し、アプラマイシン(50 μg/mL)、カナマイシン(25 μg/mL)、及びクロラムフェニコール(12.5 μg/mL)を含む2TYプレート上で選別する。生じた株を使用して、アプラマイシン(50 μg/ml)、カナマイシン(25 μg/mL)、及びクロラムフェニコール(12.5 μg/mL)を含む3 mLの液体2TYに接種し、37℃、250rpmで一晩インキュベートする。各培養物の0.8 mLを使用して、50 mL Falcon管中で、アプラマイシン(50 μg/mL)、カナマイシン(25 μg/mL)、及びクロラムフェニコール(12.5 μg/mL)を含む10 mLの液体2TYに接種し、約0.5のOD600nmに達するまで、37℃、250 rpmでインキュベートする。生じた培養物を、4℃、3500 rpmで10分間遠心分離し、遠心分離を利用して10 mLの2TY培地で2回洗浄し、各洗浄後に細胞をペレットにする。生じたペレットを0.5 mLの2TYに再懸濁させ、すぐ使用できるよう氷の上に保つ。このプロセスを、以下に記載するストレプトマイセス胞子の調製の完了と同時になるように時間を合わせる。
良好に胞子形成したパッチのそれぞれの単一の約7mm寒天プラグを使用して、7 mLの滅菌SM25-3培地に接種し、2インチ工程のシェーカーで27℃、200 rpmでインキュベートする。48時間の成長後、各培養物0.7 mLを、5 % HP20樹脂と共に、7 mLのSGP6培地(30 g/L Nutrisoy(きな粉)、60 g/L グリセロール、21 g/L MOPS; pH 6.8)を含む滅菌ファルコン管に移す。培養物を、1インチ工程の振盪インキュベーターで、24℃、300 rpmで5日間成長させてから、採取する。各細菌培養物の0.8 mLを除き、小分けの前に培養物中の樹脂の適切な分散を確実にしながら、2 mLエッペンドルフ管に小分けする。0.8 mLのアセトニトリル及び15 μLのギ酸を加え、管を30分間混合する。混合物を遠心分離により清澄化し、150 μLの抽出物を除いてHPLCバイアルに入れ、HPLCにより分析する。
株の抽出物をHPLCにより分析する。サングリフェリンA及びBを産生した株は、その結果が野生型への復帰を示すので、さらに分析しない。サングリフェリンA及びBの産生を欠き、17-デオキシ-サングリフェリンA及び17-デオキシ-サングリフェリンBの産生と一致するピークを示す株を先に進める。
次いで、17-デオキシサングリフェリンA及び/又はBを産生する株を、実施例1に記載された方法に類似の方法を利用して成長させ、実施例2に記載された方法に類似の方法を利用して化合物を単離し、実施例3に記載された方法に類似の方法を利用してアルデヒドを生成させる。次いで、これを、記載される半合成のためのテンプレートとして使用して、式1の化合物を生成させる。
(中間体146の合成)
明細書及び以下の請求項において、文脈から反対の意味が要求されない限り、「含む(comprise)」という言葉並びに「含む(comprises)」及び「含んでいる(comprising)」などの変形体は、述べられた整数若しくは工程又は整数の群の包含を意味するが、他の整数若しくは工程又は整数若しくは工程の群の排除を意味しないと理解されるだろう。
Claims (15)
- 互変異性体;又はトランスとして示されているC26、27 C=C結合がシスである異性体を含み;かつC-53ケト(存在する場合)及びC-15ヒドロキシル基とメタノールとの組み合わせによりケタールが形成されるメタノール付加物を含む、下記の式(I)の化合物又はその医薬として許容し得る塩:
R1及びR2は、独立に、水素を表すか、又は、単環式アリール若しくは単環式ヘテロアリールにより任意に置換されているアルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アルキルシクロアルキル、アルキルシクロアルケニル、アルケニルシクロアルキル、アルケニルシクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール、アルキルアリール、アルキルヘテロアリール、アルケニルアリール若しくはアルケニルヘテロアリールを表し;
ここで、アリール又はヘテロアリール基の一部でないR1及び/又はR2の1つ以上の炭素原子は、存在する場合、O、N、及びS(O)pから選択されるヘテロ原子により任意に置換されており、式中pは、0、1、又は2を表し、R1及び/又はR2の1つ以上の炭素原子は、存在する場合、カルボニルにより任意に置換されており;
或いは、R1とR2とは結合して、示されている窒素原子を含む飽和又は不飽和の複素環を形成し、かつ該環の1つ以上の炭素原子は、O、N、及びS(O)pから選択されるヘテロ原子により任意に置換されており、式中pは0、1、又は2を表し、該環の1つ以上の炭素原子は任意にカルボニルにより置換されており、該複素環は任意にアリール又はヘテロアリール環に縮合していてよく;
R1及び/又はR2基の1つ以上の炭素原子は、1つ以上のハロゲン原子により任意に置換されていてよく;
R3は、H又は-(CO)xアルキルを表し;
R4は、H又はOHを表し;
R5は、H、OH、又は=Oを表し;
nは単結合又は二重結合を表し、nが二重結合を表す場合、R 4 はHを表し;
mは単結合又は二重結合を表し、mが二重結合を表す場合、R 5 はHを表し;
xは0又は1を表す)。 - R1及びR2が、独立に、水素を表すか、又は、単環式アリール若しくは単環式ヘテロアリールにより任意に置換されているアルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アルキルシクロアルキル、アルキルシクロアルケニル、アルケニルシクロアルキル、アルケニルシクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール、アルキルアリール、アルキルヘテロアリール、アルケニルアリール若しくはアルケニルヘテロアリールを表し;
ここで、アリール又はヘテロアリール基の一部でないR1及び/又はR2の1つ以上の炭素原子は、存在する場合、O、N、及びS(O)pから選択されるヘテロ原子により任意に置換されており、式中pが、0、1、又は2を表し、R1及び/又はR2の1つ以上の炭素原子は、存在する場合、カルボニルにより任意に置換されており;
或いは、R1とR2とが結合して、示されている窒素原子を含む飽和又は不飽和の複素環を形成し、かつ該環の1つ以上の炭素原子が、O、N、及びS(O)pから選択されるヘテロ原子により任意に置換されており、式中pが0、1、又は2を表し、該環の1つ以上の炭素原子が任意にカルボニルにより置換されており、該複素環が任意にアリール又はヘテロアリール環に縮合していてよい、請求項1記載の化合物。 - R1が、単環式アリール若しくは単環式ヘテロアリールにより置換されているアリール若しくはヘテロアリール、-C1-4アルキル、-OC1-4アルキル、-COC1-4アルキル、又は-C2-4アルケニルを表す、請求項2記載の化合物。
- R2が、水素、C1-4アルキル、又はC1-4アルケニルを表す、請求項1〜3のいずれか一項記載の化合物。
- R2が、水素又はC1-4アルキルを表す、請求項4記載の化合物。
- R1とR2とが、それらが結合している窒素と共に、ピロリジン、ピペリジン、モルホリン、又はピペラジン環を含む5員〜7員の複素環を表し、ピペラジンの4窒素がC1-4アルキルにより任意に置換されており、該環内の窒素原子に隣接する炭素原子が任意にカルボニルにより置換されている、請求項2記載の化合物。
- 独立に、又は任意の組み合わせで:
R3が、H又は(CO)xC1-4アルキルを表し、式中xが請求項1で定義されたとおりであり;
nが単結合を表し;
mが単結合を表し;
R4がOHを表し;
R5が=Oを表す、請求項1〜6のいずれか一項記載の化合物。 - xが0を表す、請求項1〜7のいずれか一項記載の化合物。
- 互変異性体;又はトランスとして示されているC26、27 C=C結合がシスである異性体を含み;かつC-53ケト(存在する場合)及びC-15ヒドロキシル基とメタノールとの組み合わせによりケタールが形成されるメタノール付加物を含む、
下記の構造により表されるとおり、R1がOCH3を表し、R2がMeを表し、R3がHを表し、R4がOHを表し、nが単結合を表し、mが単結合を表し、かつ、R5が=Oを表す:
下記の構造により表されるとおり、R1がエチルを表し、R2がエチルを表し、R3がHを表し、R4がOHを表し、nが単結合を表し、mが単結合を表し、かつ、R5が=Oを表す:
下記の構造により表されるとおり、R1が-CHMe2を表し、R2がHを表し、R3がHを表し、R4がOHを表し、nが単結合を表し、mが単結合を表し、かつ、R5が=Oを表す:
下記の構造により表されるとおり、R1がメチルを表し、R2がHを表し、R3がHを表し、R4がOHを表し、nが単結合を表し、mが単結合を表し、かつ、R5が=Oを表す:
下記の構造により表されるとおり、R1がメチルを表し、R2がHを表し、R3がMeを表し、R4がOHを表し、nが単結合を表し、mが単結合を表し、かつ、R5が=Oを表す:
下記の構造により表されるとおり、R1が-CH2CH=CH2を表し、R2がHを表し、R3がHを表し、R4がOHを表し、nが単結合を表し、mが単結合を表し、かつ、R5が=Oを表す:
下記の構造により表されるとおり、R1がメチルを表し、R2がメチルを表し、R3がHを表し、R4がOHを表し、nが結合を表し、mが結合を表し、かつ、R5が=Oを表す:
下記の構造により表されるとおり、R1が-CH2CHMe2を表し、R2が-CH2CHMe2を表し、R3がHを表し、R4がOHを表し、nが単結合を表し、mが単結合を表し、かつ、R5が=Oを表す:
下記の構造により表されるとおり、R1がOCH3を表し、R2がMeを表し、R3がHを表し、R4がOHを表し、nが単結合を表し、mが二重結合を表し、かつ、R5がHを表す:
下記の構造により表されるとおり、R1がOCH3を表し、R2がMeを表し、R3がHを表し、R4がHを表し、nが二重結合を表し、mが単結合を表し、かつ、R5が=Oを表す:
下記の構造により表されるとおり、R1とR2とが共に6員の複素環に結合した-CH2CH2OCH2CH2-を表し、R3がHを表し、R4がOHを表し、nが単結合を表し、mが単結合を表し、かつ、R5が=Oを表す:
下記の構造により表されるとおり、R1が4-ビフェニリルを表し、R2がHを表し、R3がHを表し、R4がOHを表し、nが単結合を表し、mが単結合を表し、かつ、R5が=Oを表す:
下記の構造により表されるとおり、R1がシクロヘキシルを表し、R2がMeを表し、R3がHを表し、R4がOHを表し、nが単結合を表し、mが単結合を表し、かつ、R5が=Oを表す:
下記の構造により表されるとおり、R1とR2とが共に6員の複素環に結合した-OCH2CH2CH2CH2-を表し、R3がHを表し、R4がHを表し、nが単結合を表し、mが単結合を表し、かつ、R5が=Oを表す:
下記の構造により表されるとおり、R1が2-ピリジニルを表し、R2がHを表し、R3がHを表し、R4がOHを表し、nが単結合を表し、mが単結合を表し、かつ、R5が=Oを表す:
下記の構造により表されるとおり、R1がシクロヘキシルを表し、R2がHを表し、R3がHを表し、R4がOHを表し、nが単結合を表し、mが単結合を表し、かつ、R5が=Oを表す:
下記の構造により表されるとおり、R1がOCH3を表し、R2がMeを表し、R3がHを表し、R4がOHを表し、nが単結合を表し、mが単結合を表し、かつ、R5がOHを表す:
- 医薬として使用するための、請求項1〜10のいずれか一項記載の化合物。
- HCV、HBV、又はHIV感染などのウイルス感染の治療のための医薬として使用するための、請求項1〜10のいずれか一項記載の化合物。
- 請求項1〜10のいずれか一項記載の化合物を、医薬として許容し得る希釈剤又は担体と共に含む医薬組成物。
- 請求項1〜10のいずれか一項記載の化合物を、医薬として許容し得る希釈剤又は担体と共に含み、第二の有効成分又はその後の有効成分をさらに含む医薬組成物。
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