JP5849465B2 - Adiponectin production promoter - Google Patents

Description

本発明は、レスベラトロール誘導体を含有するアディポネクチン産生促進剤に関するものである。   The present invention relates to an adiponectin production promoter containing a resveratrol derivative.

現在の社会生活においては、過剰なストレスや食物摂取、運動不足が蔓延している。これらが原因となるメタボリックシンドロームが大きな社会問題になっている。メタボリックシンドロームとは、内蔵脂肪型肥満に加えて高血糖、高血圧、脂質異常のうち二つ以上を併せ持った状態であり、動脈硬化のリスクが高くなる。高血糖状態や高血圧状態が進行すると、糖尿病や高血圧症が発症する。高血糖状態の原因の一つがインスリン抵抗性である。インスリン抵抗性は過剰なインスリンが分泌されつづけることによりインスリン感受性が低下することにより起こる。また肥満は非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）における肝線維化の危険因子の１つであることが明らかになっている。肝線維化は肝硬変や肝臓がんの原因となることが明らかとなっている。   In today's social life, excessive stress, food intake, and lack of exercise are prevalent. Metabolic syndrome caused by these has become a major social problem. Metabolic syndrome is a condition that has two or more of hyperglycemia, hypertension, and lipid abnormalities in addition to built-in fat obesity, and increases the risk of arteriosclerosis. As hyperglycemia and hypertension progress, diabetes and hypertension develop. One cause of hyperglycemia is insulin resistance. Insulin resistance is caused by a decrease in insulin sensitivity due to continued secretion of excess insulin. Obesity has also been shown to be one of the risk factors for liver fibrosis in nonalcoholic steatohepatitis (NASH). Liver fibrosis has been shown to cause cirrhosis and liver cancer.

一方、体内にはこのような疾患を改善する作用を示すホルモンも見出されている。その一つがアディポネクチンである。アディポネクチンは脂肪細胞が特異的に産生するペプチドホルモンであり、その機能から善玉ホルモンと呼ばれている。具体的な機能は、インスリン感受性の亢進、動脈硬化抑制、抗炎症性、心筋肥大抑制など多岐にわたることが報告されている。したがって、脂肪細胞からのアディポネクチンの産生によって体内で発生する様々な疾患を抑制し、健全な身体を維持していると考えられている。   On the other hand, hormones that have an action to improve such diseases have also been found in the body. One of them is adiponectin. Adiponectin is a peptide hormone specifically produced by fat cells and is called a good hormone because of its function. Specific functions have been reported to be diverse, such as insulin sensitivity enhancement, arteriosclerosis suppression, anti-inflammatory properties, and myocardial hypertrophy suppression. Therefore, it is considered that various diseases occurring in the body are suppressed by production of adiponectin from adipocytes, and a healthy body is maintained.

アディポネクチンのメタボリックシンドローム予防効果は多くの報告がされている。例えば、アディポネクチンは筋肉細胞のＡＭＰ（ａｄｅｎｙｌｉｃ ａｃｉｄ）キナーゼを活性化し、グルコースの取り込みと脂肪燃焼を促進することが報告されている（非特許文献１）。さらにアディポネクチンノックアウトマウスでの研究により、このマウスは高脂肪・高蔗糖食を摂取させることで、野生型マウスにくらべ強いインスリン抵抗性を示した。このノックアウトマウスの全身にアディポネクチンを過剰発現させることで、インスリン抵抗性が改善された（非特許文献２）。また高血圧症症例における血管内皮機能と血中アディポネクチン濃度とは正の相関を示し、収縮期血圧と血中アディポネクチン濃度は逆相関することが知られている。実際にアディポネクチンノックアウトマウスに高脂肪・高蔗糖・高塩負荷の餌を摂取させると、野生型よりも高血圧を呈し、さらに内皮依存性血管拡張反応が低下した（非特許文献３）。   There are many reports on the effect of adiponectin on preventing metabolic syndrome. For example, adiponectin has been reported to activate AMP (adenylic acid) kinase in muscle cells and promote glucose uptake and fat burning (Non-patent Document 1). In addition, studies with adiponectin knockout mice showed that these mice showed a higher insulin resistance than wild-type mice when fed with a high-fat and high-sucrose diet. Insulin resistance was improved by overexpressing adiponectin in the whole body of this knockout mouse (Non-patent Document 2). It is also known that vascular endothelial function and blood adiponectin concentration are positively correlated in hypertensive cases, and systolic blood pressure and blood adiponectin concentration are inversely correlated. When adiponectin knockout mice were actually fed high-fat, high-sucrose, high-salt-load foods, they exhibited higher blood pressure than the wild type, and the endothelium-dependent vasodilator response decreased (Non-patent Document 3).

メタボリックシンドロームの進行により動脈硬化の危険性が高まることは良く知られているが、アディポネクチンは動脈硬化の予防効果も報告されている。例えば、動脈硬化の要因として、内皮への単球接着が挙げられる。アディポネクチンは接着分子の抑制を介して単球の接着を抑制している（非特許文献４）。また、血管内での平滑筋細胞の増殖も動脈硬化の一因であるが、アディポネクチンはこの増殖を抑制する（非特許文献５）。さらに、マクロファージにおいては、アディポネクチンが炎症性サイトカインの発現を抑制することで、細胞の泡沫化を抑制することが知られている（非特許文献６）。   It is well known that the progression of metabolic syndrome increases the risk of arteriosclerosis, but adiponectin has also been reported to prevent arteriosclerosis. For example, monocyte adhesion to the endothelium is a factor of arteriosclerosis. Adiponectin suppresses monocyte adhesion through inhibition of adhesion molecules (Non-patent Document 4). In addition, smooth muscle cell proliferation in blood vessels also contributes to arteriosclerosis, but adiponectin suppresses this proliferation (Non-patent Document 5). Furthermore, in macrophages, it is known that adiponectin suppresses foaming of cells by suppressing the expression of inflammatory cytokines (Non-patent Document 6).

アディポネクチンのＮＡＳＨにおける肝線維化の予防効果に関しても報告されている。例えば、アディポネクチンノックアウトマウスに肝線維化誘発剤を投与すると、野生型に比べて線維化が亢進した（非特許文献７）。また現在、肝星細胞の活性化が肝線維化に重要な役割をしていることが考えられているが、肝線維化誘発剤の投与により野生型に比べ活性化した肝星細胞が増加した（非特許文献７）。   Adiponectin has also been reported for its preventive effect on liver fibrosis in NASH. For example, when a hepatic fibrosis inducing agent was administered to adiponectin knockout mice, fibrosis was enhanced compared to the wild type (Non-patent Document 7). Moreover, it is thought that the activation of hepatic stellate cells plays an important role in liver fibrosis, but the number of activated hepatic stellate cells increased compared to the wild type by administration of a hepatic fibrosis inducing agent. (Non-patent document 7).

以上のように脂肪細胞から分泌されるアディポネクチンの有用性から、その産生促進剤の先行技術も報告されている。医薬品においては例えば、チアゾリジンジオン類を有効成分とするアディポネクチン産生強化剤（特許文献１）、天然物においては例えばレスベラトロールを有効成分とするアディポネクチン産生促進剤（特許文献２）、リコピンを有効成分とするアディポネクチン産生促進剤（特許文献３）、クルクミンを有効成分とするアディポネクチン産生増強・促進剤（特許文献４）、ジンゲロールを有効成分とするアディポネクチン産生増強剤（特許文献５）、抽出物においては、プロポリス抽出物を有効成分とするアディポネクチン産生増強剤（特許文献６）、西洋梨の果実またはその抽出物を有効成分とするアディポネクチン増加剤(特許文献７)、また、大豆加水分解物を有効成分とするアディポネクチン分泌促進組成物（特許文献８）などこの他にも数多くの先行技術が報告されている。   As described above, due to the usefulness of adiponectin secreted from adipocytes, prior art of production promoters has been reported. In pharmaceuticals, for example, adiponectin production enhancer containing thiazolidinediones as active ingredients (Patent Document 1), and in natural products, for example, adiponectin production promoter containing resveratrol as active ingredient (Patent Document 2), lycopene as an active ingredient Adiponectin production promoter (Patent Document 3), adiponectin production enhancer / promoter (Patent Document 4) containing curcumin as an active ingredient, adiponectin production enhancer (Patent Document 5) containing gingerol as an active ingredient , An adiponectin production enhancer comprising a propolis extract as an active ingredient (Patent Document 6), an adiponectin increasing agent comprising a pear fruit or its extract as an active ingredient (Patent Document 7), and a soybean hydrolyzate as an active ingredient Where Adiponectin secretion promoting composition (Patent Document 8) It has been reported that a number of prior art to the other.

このようにアディポネクチン産生促進剤の有用性から、このような活性を有する化合物や素材が複数提案されているが、更なる新規素材の開発が望まれている。   As described above, a plurality of compounds and materials having such an activity have been proposed because of the usefulness of the adiponectin production promoter, and further development of new materials is desired.

特開２００７−１９７４２７号公報JP 2007-197427 A 特開２００８−２５５０４０号公報JP 2008-255040 A 特開２００９−２８６７２９号公報JP 2009-286729 A 特開２００５−０６０３０８号公報JP 2005-060308 A 特開２０１１−００１３８６号公報JP 2011-001386 A 特開２０１０−０３７２２１号公報JP 2010-037221 A 特開２０１１−０６３５４３号公報JP 2011-063543 A 特開２００９−２０９０８０号公報JP 2009-209080 A

日薬雑誌，２００３，１２２：２９４−３００Nichikan Magazine, 2003, 122: 294-300 Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄ．，２００３，８：７３１−７３７Nature Med. , 2003, 8: 731-737 Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ，２００３，４２：２３１−２３４Hypertension, 2003, 42: 231-234. Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，１９９９，１００：２４７３−２４７６Circulation, 1999, 100: 2473-2476 Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，２００２，１０５：２８９３−２８９８Circulation, 2002, 105: 2893-2898 Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，２００３，１０３：１０５７−１０６３Circulation, 2003, 103: 1057-1063 Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，２００３，１２５：２７９６−１８０７Gastroenterology, 2003, 125: 2796-1807

本発明者らは、前記の状況を鑑みて、新規なアディポネクチン産生促進剤の探索をした。その結果、新たに作製したレスベラトロール誘導体類が優れたアディポネクチン産生促進作用を有する化合物であることを見出し、本発明を完成するに至った。   In light of the above situation, the present inventors have searched for a novel adiponectin production promoter. As a result, the newly prepared resveratrol derivatives were found to be excellent compounds having adiponectin production promoting action, and the present invention was completed.

したがって、本発明は、優れたアディポネクチン産生促進剤を提供することを目的とする。   Therefore, an object of the present invention is to provide an excellent adiponectin production promoter.

本発明の要旨は、下記式（１）：   The gist of the present invention is the following formula (1):

で示されるレスベラトロール誘導体およびその薬学的に許容可能な塩からなる群より選ばれる１種以上の化合物を含有することを特徴とするアディポネクチン産生促進剤、に関する。
In adiponectin production enhancer characterized by containing one or more compounds selected from resveratrol derivatives and pharmaceutically acceptable salts or Ranaru group represented relates.

本発明のアディポネクチン産生促進剤は、公知の産生促進剤であるレスベラトロールと比べ優れたアディポネクチン産生促進作用を有していることから、新規のアディポネクチン産生促進剤として有用である。   The adiponectin production promoter of the present invention is useful as a novel adiponectin production promoter because it has an adiponectin production promoting action superior to resveratrol, which is a known production promoter.

図１Ａは実施例２で行ったウェスタンブロット解析の結果を示す。左から、（１）ＤＭＳＯ、（２）レスベラトロール、（３）ＵＨＡ９０２１で処理した細胞培養液中のアディポネクチンを検出した結果を示している。図１Ｂは画像解析ソフトにより得られたバンド強度の相対値を算出した結果を示している。FIG. 1A shows the results of Western blot analysis performed in Example 2. From the left, (1) DMSO, (2) resveratrol, (3) The results of detecting adiponectin in a cell culture treated with UHA9021 are shown. FIG. 1B shows the result of calculating the relative value of the band intensity obtained by the image analysis software.

以下、本発明について詳細に説明する。
本発明のアディポネクチン産生促進剤は、下記式（１）： Hereinafter, the present invention will be described in detail.
The adiponectin production promoter of the present invention has the following formula (1):

で示されるレスベラトロール誘導体およびその薬学的に許容可能な塩からなる群より選ばれる１種以上の化合物を含有することを特徴とする。
Characterized in that it contains an in resveratrol derivatives and pharmaceutically acceptable salts or Ranaru least one compound selected from the group indicated.

本発明において、「アディポネクチン産生促進剤」とは、各種疾患の予防・治療効果があるアディポネクチンの脂肪細胞からの産生を促進することができる薬剤をいう。
アディポネクチン産生促進作用は、具体的には、後述の実施例に記載の方法により測定し、公知の化合物であるレスベラトロールの作用と対比することで確認することができる。 In the present invention, the “adiponectin production promoter” refers to a drug that can promote the production of adiponectin from adipocytes, which has the effect of preventing and treating various diseases.
Specifically, the adiponectin production-promoting action can be confirmed by measuring by the method described in the examples below and comparing it with the action of resveratrol, which is a known compound.

前記レスベラトロール誘導体において、炭素−炭素２重結合は、トランスまたはシスであってよく、シス体とトランス体との混合物を含む。   In the resveratrol derivative, the carbon-carbon double bond may be trans or cis, and includes a mixture of a cis isomer and a trans isomer.

前記レスベラトロール誘導体の薬学的に許容可能な塩としては、例えば、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩； マグネシウム塩、カルシウム塩、バリウム塩等のアルカリ土類金属塩； アルミニウム塩；アルミニウムヒドロキシド塩等の金属ヒドロキシド塩； アルキルアミン塩、ジアルキルアミン塩、トリアルキルアミン塩、アルキレンジアミン塩、シクロアルキルアミン塩、アリールアミン塩、アラルキルアミン塩、複素環式アミン塩等のアミン塩； α−アミノ酸塩、ω−アミノ酸塩等のアミノ酸塩；ペプチド塩またはそれらから誘導される第１級、第２級、第３級若しくは第４級アミン塩等が挙げられる。これらの薬理的に許容し得る塩は、単独でまたは２種以上を混合して用いることができる。   Examples of the pharmaceutically acceptable salt of the resveratrol derivative include alkali metal salts such as lithium salt, sodium salt and potassium salt; alkaline earth metal salts such as magnesium salt, calcium salt and barium salt; aluminum salt Metal hydroxide salts such as aluminum hydroxide salts; amines such as alkylamine salts, dialkylamine salts, trialkylamine salts, alkylenediamine salts, cycloalkylamine salts, arylamine salts, aralkylamine salts, heterocyclic amine salts Salts; amino acid salts such as α-amino acid salts and ω-amino acid salts; peptide salts or primary, secondary, tertiary or quaternary amine salts derived therefrom. These pharmacologically acceptable salts can be used alone or in admixture of two or more.

本発明の製造方法では、前駆体としてレスベラトロールを用いる。レスベラトロールにはトランス体とシス体の構造異性体が存在するが、加熱や紫外線によってトランス体とシス体の変換が一部生じる。したがって、レスベラトロールとしては、トランス体でもシス体でも、あるいはトランス体とシス体の混合物であってもよい。レスベラトロールは、ブドウ果皮から抽出・精製した天然由来のものであっても、化学合成された純度の高い化成品であっても良い。天然由来のレスベラトロールを用いる場合は、完全に精製されたものである必要はなく、後述のように所望の生成反応が進み最終的に本発明で用いる前記レスベラトロール誘導体が得られるから、レスベラトロール以外の成分を含む混合物も使用できる。また、レスベラトロールには、塩、エーテル、エステル等の誘導体もあるが、本発明の製造方法では、これらの誘導体も原料として使用することができる。
ただし、前記レスベラトロール誘導体の回収率の観点からは、レスベラトロール換算で１重量％以上含有された混合物が原料として望ましい。
前記レスベラトロールとしては、ブドウ果皮、ピーナッツ等の原料からの抽出物、凍結乾燥品等を使用してもよい。 In the production method of the present invention, resveratrol is used as a precursor. Resveratrol has structural isomers of trans form and cis form, but some conversion of trans form and cis form occurs by heating or ultraviolet rays. Therefore, resveratrol may be a trans isomer, a cis isomer, or a mixture of a trans isomer and a cis isomer. Resveratrol may be a naturally derived product extracted and purified from grape skin, or a chemically synthesized chemical product synthesized with high purity. When using naturally occurring resveratrol, it is not necessary to be completely purified, because the desired production reaction proceeds as described later, and finally the resveratrol derivative used in the present invention is obtained. Mixtures containing ingredients other than resveratrol can also be used. Resveratrol also includes derivatives such as salts, ethers and esters, but these derivatives can also be used as raw materials in the production method of the present invention.
However, from the viewpoint of the recovery rate of the resveratrol derivative, a mixture containing 1% by weight or more in terms of resveratrol is desirable as a raw material.
As said resveratrol, you may use the extract from raw materials, such as grape peel and a peanut, a freeze-dried product, etc.

また、本発明の製造方法では、前駆体としてシナピン酸も必要である。シナピン酸は、天然由来のものであっても、化学合成された純度の高い化成品であっても良い。天然由来のシナピン酸を用いる場合は、完全に精製されたものである必要はなく、後述のように所望の生成反応が進み最終的に本発明の新規レスベラトロール誘導体が得られるのであれば、シナピン酸以外の成分を含む混合物も使用できる。
ただし、前記レスベラトロール誘導体の回収量の観点からは、シナピン酸換算で５重量％以上含有された混合物が原料として望ましい。このような原料としては、例えば、リンゴ果実、穀物等の原料からの抽出物、凍結乾燥品等を使用してもよい。 In the production method of the present invention, sinapinic acid is also required as a precursor. Sinapic acid may be naturally derived or may be a chemically synthesized chemical product with high purity. When using naturally derived sinapinic acid, it is not necessary to be completely purified, as long as the desired production reaction proceeds and finally the novel resveratrol derivative of the present invention is obtained as described below, Mixtures containing ingredients other than sinapinic acid can also be used.
However, from the viewpoint of the recovered amount of the resveratrol derivative, a mixture containing 5% by weight or more in terms of sinapinic acid is desirable as a raw material. As such raw materials, for example, extracts from raw materials such as apple fruits and grains, freeze-dried products, and the like may be used.

本発明では、レスベラトロール、シナピン酸、またはレスベラトロールとシナピン酸との混合物を適切な溶媒に溶解させる。この際、溶媒が水のみであれば、レスベラトロールやシナピン酸の水への溶解度が著しく低いために、水と有機溶媒の混合液や、有機溶媒のみに溶解させればよい。水と有機溶媒の配合比や、有機溶媒の種類については特に制限はなく、レスベラトロールやシナピン酸が十分に溶解すれば良い。中でも、メタノールやエタノールのみの溶媒や、水とメタノール、水とエタノール等の混合液を使用することが、安全性やコスト面から好ましい。新規レスベラトロール誘導体を含む反応後組成物に対して最終的な精製を十分に適用せずにその組成物を食品に使用する場合には、安全性や法規面から溶媒としてエタノールや含水エタノールを使用することが望ましい。
得られるレスベラトロール、シナピン酸、またはレスベラトロールとシナピン酸との混合物を含有する溶液中のレスベラトロールおよびシナピン酸の濃度について特に制限はないが、それぞれの濃度が高いほど、溶媒使用量が少ない等のメリットもあるため、レスベラトロールおよびシナピン酸の濃度は各々の溶媒に対しレスベラトロールおよびシナピン酸がそれぞれ飽和する濃度近くが好ましい。
また、レスベラトロール、シナピン酸は前記溶液中において生成反応前に完全に溶解していなくともよい。例えば、レスベラトロール含有溶液とシナピン酸含有溶液とを混合する場合、それぞれの溶液中のレスベラトロール濃度、シナピン酸濃度がともに飽和濃度以上であっても、混合液とした場合には、飽和濃度近くになるように調整しておけばよい。 In the present invention, resveratrol, sinapinic acid, or a mixture of resveratrol and sinapinic acid is dissolved in a suitable solvent. At this time, if the solvent is only water, the solubility of resveratrol or sinapinic acid in water is extremely low, and therefore, the solvent may be dissolved only in a mixed solution of water and an organic solvent or in an organic solvent. There is no restriction | limiting in particular about the compounding ratio of water and an organic solvent, and the kind of organic solvent, and resveratrol and sinapinic acid should just fully melt | dissolve. Among them, it is preferable from the viewpoint of safety and cost to use a solvent containing only methanol or ethanol, or a mixed solution of water and methanol, water and ethanol, or the like. When the final refining composition containing a new resveratrol derivative is not fully applied to the final product and used in food, ethanol or hydrous ethanol is used as a solvent for safety and legal purposes. It is desirable to use it.
There is no particular limitation on the concentration of resveratrol and sinapinic acid in the solution containing the resulting resveratrol, sinapinic acid, or a mixture of resveratrol and sinapinic acid, but the higher the respective concentration, the more the amount of solvent used Therefore, the concentration of resveratrol and sinapinic acid is preferably close to the concentration at which resveratrol and sinapinic acid are saturated with respect to each solvent.
Resveratrol and sinapinic acid may not be completely dissolved in the solution before the formation reaction. For example, when a resveratrol-containing solution and a sinapinic acid-containing solution are mixed, even if the resveratrol concentration and sinapinic acid concentration in each solution are both equal to or higher than the saturated concentration, Adjustment should be made so that the concentration is close.

次に、前記レスベラトロールおよびシナピン酸を含有する溶液（以下、レスベラトロール、シナピン酸含有溶液）のｐＨを８未満に調整することが好ましい。調整方法として、例えば、レスベラトロール、シナピン酸含有溶液を調製した後にｐＨ調整剤を添加してｐＨを調整しても良いし、前記溶液の調製時に前もって溶媒のｐＨを調整しておいても良い。レスベラトロール、シナピン酸含有溶液の反応開始時のｐＨは８．０以上であれば、他の反応や目的化合物の分解も一方で生じるために、生成される前記レスベラトロール誘導体の回収量が低下する。したがって、反応開始時のｐＨは３以上８未満が望ましい。   Next, it is preferable to adjust the pH of the solution containing resveratrol and sinapinic acid (hereinafter referred to as resveratrol and sinapinic acid-containing solution) to less than 8. As an adjustment method, for example, after preparing a solution containing resveratrol and sinapinic acid, the pH may be adjusted by adding a pH adjusting agent, or the pH of the solvent may be adjusted in advance when preparing the solution. good. If the pH of the resveratrol and sinapinic acid-containing solution at the start of the reaction is 8.0 or more, other reactions and decomposition of the target compound may occur on the other hand. Therefore, the recovered amount of the resveratrol derivative produced is descend. Therefore, the pH at the start of the reaction is desirably 3 or more and less than 8.

本発明では、前記レスベラトロール、シナピン酸含有溶液中に金属塩を添加する。前記金属塩としては、酸性塩、塩基性塩、正塩のいずれでもよく、また、単塩、複塩、錯塩のいずれでもよい。さらに、金属塩は１種類であっても、複数種類の混合物であってもよい。金属塩の例としては、食品添加物として認可されているものが安全性の面で好ましい。例えば、食品に添加することが認められているマグネシウム塩、カルシウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩、亜鉛塩、銅塩等が挙げられる。
また、前記金属塩の混合物としては、例えば、ミネラルプレミックス（田辺製薬株式会社、グルコン酸亜鉛、クエン酸鉄アンモニウム、乳酸カルシウム、グルコン酸銅、リン酸マグネシウムを主成分としたミネラル混合物）のように金属塩を数種類含む物質が挙げられる。また、複数の金属塩を含む混合物として、ミネラルウォーターも挙げることができる。
なお、前記金属塩の含有量としては、前記レスベラトロール誘導体を生成可能な量であればよく、特に限定はない。 In the present invention, a metal salt is added to the resveratrol and sinapinic acid-containing solution. The metal salt may be any of an acid salt, a basic salt, and a normal salt, and may be any of a single salt, a double salt, and a complex salt. Furthermore, the metal salt may be one kind or a mixture of plural kinds. As an example of the metal salt, those approved as food additives are preferable in terms of safety. For example, magnesium salt, calcium salt, sodium salt, potassium salt, zinc salt, copper salt and the like that are permitted to be added to foods can be mentioned.
Moreover, as a mixture of the metal salts, for example, a mineral premix (Tanabe Seiyaku Co., Ltd., a mineral mixture mainly composed of zinc gluconate, ammonium iron citrate, calcium lactate, copper gluconate, and magnesium phosphate) In addition, substances containing several kinds of metal salts are listed. Moreover, mineral water can also be mentioned as a mixture containing a some metal salt.
In addition, as content of the said metal salt, what is necessary is just the quantity which can produce | generate the said resveratrol derivative, and there is no limitation in particular.

次に、金属塩存在下で、レスベラトロール、シナピン酸含有溶液を加熱処理する。この加熱処理により、新規レスベラトロール誘導体の生成反応を行う。生成反応を効率的に進ませるために、レスベラトロール、シナピン酸含有溶液の加熱温度は１１０℃以上に調整することが好ましい。また、使用する溶媒の沸点から考え、加圧加温が望ましい。例えば、開放容器にレスベラトロール、シナピン酸含有溶液を入れ、溶媒の沸点を超える高温で前記容器を加温する、密閉容器にレスベラトロール、シナピン酸含有溶液を入れて前記容器を加温する、レトルト装置やオートクレーブを用いて加圧加温する等、少なくとも部分的に溶液温度が１１０℃以上に達するように加熱することが好ましい。回収効率面から、溶液温度が均一に１１０℃〜１５０℃になることが、さらに好ましい。加熱時間も加熱温度と同様に限られたものではなく、効率的に目的の反応が進行する時間条件とすればよい。特に、加熱時間は加熱温度との兼ね合いによるものであり、加熱温度に応じた加熱時間にすることが望ましい。例えば、１３０℃付近で加熱する場合は、５分〜１２０分の加熱時間が望ましい。また、加熱は、一度でも良いし、複数回に分けて繰り返し加熱しても良い。複数回に分けて加熱する場合、蒸発した溶媒を補うために溶媒を新たに追加して行うことが好ましい。   Next, the resveratrol and sinapinic acid-containing solution is heat-treated in the presence of a metal salt. By this heat treatment, a formation reaction of a novel resveratrol derivative is performed. In order to advance the production reaction efficiently, the heating temperature of the resveratrol and sinapinic acid-containing solution is preferably adjusted to 110 ° C. or higher. Further, considering the boiling point of the solvent to be used, pressure heating is desirable. For example, resveratrol and sinapinic acid-containing solution are put in an open container, and the container is heated at a high temperature exceeding the boiling point of the solvent. Resveratrol and sinapinic acid-containing solution is put in a sealed container and the container is heated. It is preferable to heat the solution so that the solution temperature reaches 110 ° C. or higher, for example, by heating under pressure using a retort device or an autoclave. From the viewpoint of recovery efficiency, it is more preferable that the solution temperature be 110 ° C. to 150 ° C. uniformly. The heating time is not limited as in the case of the heating temperature, and may be a time condition in which the target reaction efficiently proceeds. In particular, the heating time depends on the heating temperature, and it is desirable to set the heating time according to the heating temperature. For example, when heating near 130 ° C., a heating time of 5 minutes to 120 minutes is desirable. Further, the heating may be performed once or may be repeated repeatedly in a plurality of times. In the case of heating in a plurality of times, it is preferable to add a new solvent to supplement the evaporated solvent.

前記加熱処理によるレスベラトロール誘導体の生成反応の終了は、例えば、ＨＰＬＣによる成分分析によりレスベラトロール誘導体の生成量を確認して判断すればよい。   The completion of the resveratrol derivative production reaction by the heat treatment may be judged by, for example, confirming the production amount of the resveratrol derivative by component analysis by HPLC.

得られる反応液中には、本発明で用いるレスベラトロール誘導体が含有されている。
また、安全な原料のみを用いた工程でレスベラトロール誘導体を製造した場合には、前記レスベラトロール誘導体を含む混合物の状態で食品、医薬品または医薬部外品に使用することが可能である。例えば、天然由来のレスベラトロール、シナピン酸を含水エタノール溶媒に溶解し、ミネラルウォーターやミネラルプレミックスを添加して加熱処理した場合には、得られる反応液を食品原料の一つとして使用することが可能である。 The obtained reaction solution contains the resveratrol derivative used in the present invention.
In addition, when a resveratrol derivative is produced by a process using only safe raw materials, the resveratrol derivative can be used in foods, pharmaceuticals, or quasi drugs in the state of a mixture containing the resveratrol derivative. For example, when natural resveratrol and sinapinic acid are dissolved in a water-containing ethanol solvent and heated by adding mineral water or mineral premix, use the resulting reaction solution as one of the food ingredients. Is possible.

また、風味面での改良やさらなる高機能化を望む場合は、前記反応液を濃縮してレスベラトロール誘導体の濃度を高める、あるいは前記反応液を精製しレスベラトロール誘導体の純品を得ることができる。濃縮、精製は、公知の方法で実施可能である。例えば、クロロホルム、酢酸エチル、エタノール、メタノール等を用いた溶媒抽出法や炭酸ガスによる超臨界抽出法等で抽出してレスベラトロール誘導体を濃縮できる。また、カラムクロマトグラフィーを利用して濃縮や精製を施すことも可能である。再結晶法や限外ろ過膜等の膜処理法も適用可能である。   Also, if you want to improve the flavor and enhance the functionality, concentrate the reaction solution to increase the concentration of resveratrol derivative, or purify the reaction solution to obtain a pure product of resveratrol derivative. Can do. Concentration and purification can be performed by a known method. For example, the resveratrol derivative can be concentrated by extraction by a solvent extraction method using chloroform, ethyl acetate, ethanol, methanol or the like, a supercritical extraction method using carbon dioxide gas, or the like. It is also possible to perform concentration and purification using column chromatography. A membrane treatment method such as a recrystallization method or an ultrafiltration membrane can also be applied.

また、前記反応液から式（１）で表されるレスベラトロール誘導体を分離して回収する場合には、カラムクロマトグラフィー、ＨＰＬＣ等を用いてもよい。   Further, when the resveratrol derivative represented by the formula (1) is separated and recovered from the reaction solution, column chromatography, HPLC or the like may be used.

前記濃縮物や精製物を、必要に応じて、減圧乾燥や凍結乾燥して溶媒除去することで、粉末状のレスベラトロール誘導体を得ることができる。   A powdered resveratrol derivative can be obtained by removing the solvent from the concentrate or purified product by drying under reduced pressure or lyophilization, if necessary.

また、得られたレスベラトロール誘導体は、必要に応じて、当該分野で公知の方法により、レスベラトロール誘導体の塩としたり、レスベラトロール誘導体のヒドロキシ基をエーテル化またはエステル化してもよい。   In addition, the obtained resveratrol derivative may be converted to a salt of a resveratrol derivative, or the hydroxy group of the resveratrol derivative may be etherified or esterified by a method known in the art, if necessary.

前記のレスベラトロール誘導体はいずれも、レスベラトロールに比べて、優れたアディポネクチン産生促進作用する。
したがって、本発明は、前記レスベラトロール誘導体を有効成分として含有するアディポネクチン産生促進剤を提供することができる。 Any of the above-mentioned resveratrol derivatives promotes adiponectin production superior to resveratrol.
Therefore, the present invention can provide an adiponectin production promoter containing the resveratrol derivative as an active ingredient.

本発明のアディポネクチン産生促進剤は、前記レスベラトロール誘導体のみであってもよいが、例えば、散剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、細粒剤、顆粒剤等の固形製剤、水剤、懸濁剤、乳剤等の液剤、ゲル剤等に配合される場合にはそれぞれの剤形に応じた任意成分をさらに含有してもよい。また、錠剤、丸剤、顆粒剤、顆粒を含有するカプセル剤の顆粒は、必要により、ショ糖等の糖類、マルチトール等の糖アルコールで糖衣を施したり、ゼラチン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース等でコーティングを施したりすることもできる。また、胃溶性または腸溶性物質のフィルムで被覆してもよい。また、製剤の溶解性を向上させるために、公知の可溶化処理を施すこともできる。常法に基づいて、注射剤、点滴剤に前記レスベラトロール誘導体を配合して使用してもよい。   The adiponectin production promoter of the present invention may be only the resveratrol derivative, for example, solid preparations such as powders, tablets, pills, capsules, fine granules, granules, liquid preparations, suspensions In the case of blending into a liquid agent such as an agent or an emulsion, a gel agent or the like, an optional component corresponding to each dosage form may be further contained. In addition, tablets, pills, granules, and capsules containing granules may be sugar-coated with sugars such as sucrose and sugar alcohols such as maltitol, gelatin, hydroxypropylcellulose, hydroxypropylmethylcellulose as necessary. It can also be applied with a coating. Further, it may be covered with a film of a gastric or enteric substance. Moreover, in order to improve the solubility of a formulation, a well-known solubilization process can also be performed. Based on a conventional method, the resveratrol derivative may be blended with an injection or infusion.

本発明のアディポネクチン産生促進剤を使用する場合、例えば、前記レスベラトロール誘導体の摂取量は、所望の効果が得られるような量であれば特に制限されず、通常その態様、患者の年齢、性別、体質その他の条件、疾患の種類並びにその程度等に応じて適宜選択される。前記レスベラトロール誘導体換算で、１日当たり約０．１ｍｇ〜１，０００ｍｇ程度とするのがよく、これを１日に１〜４回に分けて摂取することができる。   When using the adiponectin production promoter of the present invention, for example, the intake amount of the resveratrol derivative is not particularly limited as long as the desired effect can be obtained. Usually, the aspect, patient age, sex It is appropriately selected depending on the constitution and other conditions, the type of disease and its degree. In terms of the resveratrol derivative, the amount is preferably about 0.1 mg to 1,000 mg per day, which can be taken in 1 to 4 times a day.

また、前記レスベラトロール誘導体は、安全性に優れたものであるので、ヒトに対してだけでなく、例えば、非ヒト動物、例えば、ラット、マウス、モルモット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、サル、チンパンジー等の哺乳類、鳥類、両生類、爬虫類等の治療剤または飼料に配合してもよい。飼料としては、例えばヒツジ、ブタ、ウシ、ウマ、ニワトリ等に用いる家畜用飼料、ウサギ、ラット、マウス等に用いる小動物用飼料、ウナギ、タイ、ハマチ、エビ等に用いる魚介類用飼料、イヌ、ネコ、小鳥、リス等に用いるペットフードが挙げられる。   In addition, since the resveratrol derivative is excellent in safety, not only for humans, for example, non-human animals such as rats, mice, guinea pigs, rabbits, sheep, pigs, cows, horses , Cats, dogs, monkeys, chimpanzees, and other mammals, birds, amphibians, reptiles, etc. As feed, for example, livestock feed used for sheep, pigs, cattle, horses, chickens, etc., feed for small animals used for rabbits, rats, mice, etc., feed for seafood used for eel, Thailand, yellowtail, shrimp, etc., dogs, Pet foods used for cats, small birds, squirrels, etc. are listed.

次に、本発明を実施例に基いて詳細に説明するが、本発明はかかる実施例にのみ限定されるものではない。   EXAMPLES Next, although this invention is demonstrated in detail based on an Example, this invention is not limited only to this Example.

（実施例１：ＵＨＡ９０２１の生成および単離・精製）
トランス−レスベラトロール１ｇ、シナピン酸（和光純薬（株）社製）１ｇをエタノール２０ｍＬに溶解し、ミネラルウォーター２０ｍＬを加えて、レスベラトロール、シナピン酸含有溶液（ｐＨ＝４．９）を得た。このレスベラトロール、シナピン酸含有溶液をオートクレーブにて１３０℃、９０分間加熱した。得られた反応溶液のうち１ｍＬをメタノールにて５０ｍＬにメスアップし、このうち１０μＬをＨＰＬＣにより分析し、ＵＨＡ９０２１の生成を確認した。ＨＰＬＣ分析は、実施例１と同様の条件で行った。 (Example 1: Production, isolation and purification of UHA9021)
1 g of trans-resveratrol and 1 g of sinapinic acid (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) are dissolved in 20 mL of ethanol, 20 mL of mineral water is added, and resveratrol and a sinapinic acid-containing solution (pH = 4.9) are added. Obtained. This resveratrol and sinapinic acid-containing solution was heated in an autoclave at 130 ° C. for 90 minutes. 1 mL of the obtained reaction solution was made up to 50 mL with methanol, and 10 μL of this was analyzed by HPLC to confirm the formation of UHA9021. The HPLC analysis was performed under the same conditions as in Example 1.

得られた反応物からＵＨＡ９０２１を分取ＨＰＬＣにより精製し、常法により乾燥したところ、褐色粉末状の物質であった。   From the obtained reaction product, UHA9021 was purified by preparative HPLC and dried by a conventional method. As a result, it was a brown powdery substance.

高分解能電子イオン化質量分析法にてＵＨＡ９０２１の分子量を測定したところ、測定値は３４８．３９１５であり、理論値との比較から、以下の分子式を得た。
理論値Ｃ２２Ｈ２０Ｏ４（Ｍ⁺）：３４８．３９１８
分子式Ｃ₂₂Ｈ₂₀Ｏ₄ When the molecular weight of UHA9021 was measured by high-resolution electron ionization mass spectrometry, the measured value was 348.3915. From the comparison with the theoretical value, the following molecular formula was obtained.
Theoretical value C22H20O4 (M ⁺ ): 348.3918
Molecular formula C ₂₂ H ₂₀ O ₄

次に、前記ＵＨＡ９０２１を核磁気共鳴（ＮＭＲ）測定に供し、１Ｈ−ＮＭＲ、１３Ｃ−ＮＭＲおよび各種２次元ＮＭＲデータの解析から、前記ＵＨＡ９０２１が前記式（１）で表される構造を有することを確認した。   Next, the UHA9021 is subjected to nuclear magnetic resonance (NMR) measurement, and from the analysis of 1H-NMR, 13C-NMR and various two-dimensional NMR data, the UHA9021 has a structure represented by the formula (1). confirmed.

（実施例２：アディポネクチン産生促進作用の比較）
アディポネクチン産生促進作用を評価するために、３Ｔ３Ｌ１細胞（マウス由来脂肪前駆細胞）を用いて評価を行った。 (Example 2: Comparison of adiponectin production promoting action)
In order to evaluate the adiponectin production promoting action, evaluation was performed using 3T3L1 cells (mouse-derived adipose precursor cells).

試料にはレスベラトロール、本発明品であるＵＨＡ９０２１の２種類を用いた。各試料をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ、和光純薬工業（株）社製）に２ｍＭの濃度で溶解させて試験に使用した。   Two kinds of samples, resveratrol and UHA9021, which is the product of the present invention, were used. Each sample was dissolved in dimethyl sulfoxide (DMSO, manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) at a concentration of 2 mM and used for the test.

培養は、１０％ウシ胎児血清（Ｆｏｅｔａｌ Ｂｏｖｉｎｅ Ｓｅｒｕｍ：ＦＢＳ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ社製）、１％アンチバイオティック−アンチマイコティック（Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ−Ａｎｔｉｍｙｃｏｔｉｃ、ギブコ（ＧＩＢＣＯ）社製）を含むＤｕｌｂｅｃｃｏ‘ｓ ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ ｍｅｄｉｕｍ（ＤＭＥＭ、Ｓｉｇｍａ社製）を用いていった。試験に使用する脂肪細胞は定法に従って調整した。つまり、細胞培養用１０ｃｍディッシュ（日本ＢＤ社製）に３Ｔ３Ｌ１細胞を５×１０⁴ｃｅｌｌｓ／ｍＬで播種して３７℃、５％ＣＯ₂条件下で４８時間培養し、１００％コンフルエントしたものを毎日培地交換しながらさらに４８時間培養した。その後、培地をＡｄｉｐｏＩｎｄｕｃｅｒ Ｒｅａｇｅｎｔ（タカラバイオ社製）付属のインスリン、デキサメタゾン、イソブチルメチルキサンチンをそれぞれ１％、０．５％、０．１％添加した分化用ＤＭＥＭ１０ｍＬに交換し、３７℃、５％ＣＯ₂条件下で４８時間分化・培養したものを使用した。 The culture is 10% fetal bovine serum (manufactured by FBS Biologic industries), 1% antibiotic-antimycotics (manufactured by Gibco (GIBCO)) DMEM, manufactured by Sigma) was used. Adipocytes used in the test were prepared according to a standard method. That is, 3T3L1 cells were seeded at 5 × 10 ⁴ cells / mL in a 10 cm dish for cell culture (manufactured by Nippon BD), cultured at 37 ° C. under 5% CO ₂ for 48 hours, and 100% confluent daily. The culture was further continued for 48 hours while changing the medium. Thereafter, the medium was replaced with 10 mL of differentiation DMEM supplemented with 1%, 0.5% and 0.1% of insulin, dexamethasone and isobutylmethylxanthine attached to AdipoInducer Reagent (manufactured by Takara Bio Inc.), respectively, at 37 ° C., 5% CO What was differentiated and cultured for 48 hours under ₂ conditions was used.

試験は以下のように行った。分化させた脂肪細胞の培地を、インスリン１％を含むＤＭＥＭ（維持培地）に交換し、これに試料を５０μＬ（終濃度１０μＭ）添加し、２日おきに培地交換（化合物含有維持培地）しながら７日間培養した。培養終了後の培地を３０００ｒｐｍで５分間遠心分離した上清をＳＤＳ−ポリアクリルアミド電気泳動に供し、ウェスタンブロット解析を行った。   The test was conducted as follows. The medium of differentiated adipocytes was replaced with DMEM (maintenance medium) containing 1% insulin, and 50 μL (final concentration 10 μM) of the sample was added thereto, and the medium was changed (compound-containing maintenance medium) every two days. Cultured for 7 days. After completion of the culture, the supernatant obtained by centrifuging the medium at 3000 rpm for 5 minutes was subjected to SDS-polyacrylamide electrophoresis and subjected to Western blot analysis.

ＳＤＳ−ポリアクリルアミド電気泳動に供するタンパク質サンプルは、培地上清８μＬにＬａｅｍｍｌｉサンプルバッファー（１０％ドデシル硫酸ナトリウム、１００ｍＭジチオトレイトール、３０％グリセロール、５０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ６．８）２μＬを添加して９６℃で５分間加熱変性させたものを使用した。ゲルには「ミニプロティアンＴＧＸ７．５％Ｇｅｌ」（バイオ・ラッド・ラボラトリーズ（株）製）を使用した。   A protein sample to be subjected to SDS-polyacrylamide electrophoresis was prepared by adding 2 μL of Laemmli sample buffer (10% sodium dodecyl sulfate, 100 mM dithiothreitol, 30% glycerol, 50 mM Tris-HCl, pH 6.8) to 8 μL of the medium supernatant. What was heat denatured at 5 ° C. for 5 minutes was used. As the gel, “Mini-PROTEAN TGX 7.5% Gel” (manufactured by Bio-Rad Laboratories) was used.

変性させた培地サンプルを全量ゲルに供し、２００Ｖ、３０分間電気泳動した。
電気泳動後、セミドライ式ブロッティング装置「ＴＲＡＮＳ−ＢＬＯＴ Ｓ−Ｄ ＳＥＭＩ−ＤＲＹ ＴＲＡＮＳＦＥＲ ＣＥＬＬ」（バイオ・ラッド・ラボラトリーズ（株）製）でＰＶＤＦ膜（ミリポア（株）社製）にブロッティングした。ここから、「Ａｎｔｉ−Ａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎ Ｒａｂｂｉｔ ＩｇＧ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ」（一次抗体、ＣＳＴジャパン社製）と「Ａｎｔｉ−Ｒａｂｂｉｔ ＩｇＧ ＨＲＰ−ｌｉｎｋｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｙ」（二次抗体、ＣＳＴジャパン社製）を用いた抗体反応によってアディポネクチンの検出をいった。得られた検出結果を画像解析ソフト「Ｉｍａｇｅ Ｊ」によってバンド強度を数値化し、その相対値を算出した。これらの結果を図１に示した。 The whole amount of the denatured medium sample was applied to a gel and electrophoresed at 200 V for 30 minutes.
After electrophoresis, it was blotted onto a PVDF membrane (Millipore Corporation) using a semi-dry blotting apparatus “TRANS-BLOT S-D SEMI-DRY TRANSFER CELL” (Bio-Rad Laboratories). From here, an adiponectin by an antibody reaction using “Anti-Adipontin Rabbit IgG monoclonal Antibody” (primary antibody, manufactured by CST Japan) and “Anti-Rabbit IgG HRP-linked Antibody” (secondary antibody, manufactured by CST Japan) I went for detection. The band intensity of the obtained detection result was digitized by image analysis software “Image J”, and the relative value was calculated. These results are shown in FIG.

図１の結果より、ＵＨＡ９０２１においてレスベラトロールよりもアディポネクチン産生量が有意に増強されたことがわかる。
特にコントロールであるＤＭＳＯとのバンド強度の差から、約２．５倍に増強されていることがわかる。 From the results of FIG. 1, it can be seen that the amount of adiponectin production was significantly enhanced in UHA9021 compared to resveratrol.
From the difference in band intensity with DMSO, which is the control in particular, it can be seen that the enhancement is about 2.5 times.

本発明のアディポネクチン産生促進剤は、優れたアディポネクチン酸性促進作用を有するものである。したがって、本発明のアディポネクチン産生促進剤は、低アディポネクチン血症治療剤、メタボリックシンドローム予防または改善剤、インスリン抵抗性予防または改善剤、糖尿病予防または治療剤、高血圧症予防剤または治療剤、動脈硬化予防剤または治療剤、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）およびそれに由来する肝疾患の予防および治療剤としても使用することができる。   The adiponectin production promoter of the present invention has an excellent adiponectin acidity promoting action. Therefore, the adiponectin production promoter of the present invention is a hypoadiponectinemia therapeutic agent, metabolic syndrome prevention or improvement agent, insulin resistance prevention or improvement agent, diabetes prevention or treatment agent, hypertension prevention agent or treatment agent, arteriosclerosis prevention It can also be used as an agent or therapeutic agent, a prophylactic and therapeutic agent for non-alcoholic steatohepatitis (NASH) and liver diseases derived therefrom.

Claims (1)

下記式（１）：

で示されるレスベラトロール誘導体およびその薬学的に許容可能な塩からなる群より選ばれる１種以上の化合物を含有することを特徴とするアディポネクチン産生促進剤。
Following formula (1):

Adiponectin production enhancer characterized by containing resveratrol derivatives and pharmaceutically acceptable salts or Ranaru least one compound selected from the group indicated in.

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