JP5846523B2 - βグルコシダーゼを発現する大腸菌 - Google Patents
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Description
(a)配列番号2または配列番号4のアミノ酸配列からなるタンパク質;
(b)配列番号2または配列番号4のアミノ酸配列において、1または数個のアミノ酸が欠失、置換または付加されたアミノ酸配列からなるタンパク質であって、かつβグルコシダーゼ活性を有する、タンパク質。
(1)配列番号6、配列番号8、配列番号10、および配列番号12からなる群から選択されるアミノ酸配列からなるタンパク質;
(2)配列番号6、配列番号8、配列番号10、および配列番号12からなる群から選択されるアミノ酸配列において、1または数個のアミノ酸が欠失、置換または付加されたアミノ酸配列からなるタンパク質であって、かつ該タンパク質に融合された該(a)または(b)のタンパク質を大腸菌の表層に提示できる、タンパク質。
(I)配列番号8、配列番号10、および配列番号12からなる群から選択されるアミノ酸配列からなるタンパク質;
(II)配列番号8、配列番号10、および配列番号12からなる群から選択されるアミノ酸配列において、1または数個のアミノ酸が欠失、置換または付加されたアミノ酸配列からなるタンパク質であって、かつ該タンパク質に融合された目的タンパク質またはペプチドを大腸菌の表層に提示できる、タンパク質。
(I)配列番号8、配列番号10、および配列番号12からなる群から選択されるアミノ酸配列からなるタンパク質;
(II)配列番号8、配列番号10、および配列番号12からなる群から選択されるアミノ酸配列において、1または数個のアミノ酸が欠失、置換または付加されたアミノ酸配列からなタンパク質であって、かつ該タンパク質に融合された目的タンパク質またはペプチドを大腸菌の表層に提示できる、タンパク質。
(Ia)配列番号7、配列番号9、および配列番号11からなる群から選択される塩基配列からなるDNA;
(IIa)該(Ia)の塩基配列からなるDNAと相補的な塩基配列からなるDNAとストリンジェントな条件下でハイブリダイズするDNAであって、かつ大腸菌で発現させた際に目的タンパク質またはペプチドを表層提示できるタンパク質をコードする、DNA。
(I)配列番号8、配列番号10、および配列番号12からなる群から選択されるアミノ酸配列からなるタンパク質;
(II)配列番号8、配列番号10、および配列番号12からなる群から選択されるアミノ酸配列において、1または数個のアミノ酸が欠失、置換または付加されたアミノ酸配列からなるタンパク質であって、かつ該タンパク質に融合された該目的のタンパク質またはぺプチドを大腸菌の表層に提示できる、タンパク質;
(Ia)配列番号7、配列番号9、および配列番号11からなる群から選択される塩基配列からなるDNA;
(IIa)該(Ia)の塩基配列からなるDNAと相補的な塩基配列からなるDNAとストリンジェントな条件下でハイブリダイズするDNAであって、かつ大腸菌で発現させた際に目的タンパク質またはペプチドを表層提示できるタンパク質をコードする、DNA。
(i)配列番号8または配列番号10のアミノ酸配列からなるタンパク質;
(ii)配列番号8または配列番号10のアミノ酸配列において、1または数個のアミノ酸が欠失、置換または付加されたアミノ酸配列からなるタンパク質であって、かつ該タンパク質に融合された該目的のタンパク質またはぺプチドを大腸菌の表層に提示できる、タンパク質;
(ia)配列番号7または配列番号9の塩基配列からなるDNA;
(iia)該(ia)の塩基配列からなるDNAと相補的な塩基配列からなるDNAとストリンジェントな条件下でハイブリダイズするDNAであって、かつ大腸菌で発現させた際に目的タンパク質またはペプチドを表層提示できるタンパク質をコードする、DNA。
大腸菌で活性を持つβグルコシダーゼを探索するために、表層提示用プラスミドベクターpHLA(非特許文献1)を用いた。pHLAは、大腸菌表層提示のためのアンカータンパク質であるストレプトマイセス・スブチリス(Streptomyces subtilis)のPgsAを含み、PgsAのC末端側に目的のタンパク質のN末端を融合した融合タンパク質を発現させるためのものである。
クロストリジウム・セルロボランスのゲノムDNAを鋳型として、フォワードプライマー(配列番号27)およびリバースプライマー(配列番号28)を使用してPCRを行って、BglAの遺伝子断片を得た。このBglA遺伝子断片をXhoIおよびBamHIで切断し、XhoIで切断したpHLAに連結した。
サーモビフィダ・フスカYXのゲノムDNAを鋳型として、フォワードプライマー(配列番号35)およびリバースプライマー(配列番号36)を使用してPCRを行い、サーモビフィダ・フスカYX BGL0937(「Tfu0937」)の遺伝子断片を調製した。これをBglIIおよびHindIIIで切断し、HindIIIで切断したpHLAに連結した。
サーモビフィダ・フスカYXのゲノムDNAを鋳型として、フォワードプライマー(配列番号41)およびリバースプライマー(配列番号42)を使用してPCRを行い、サーモビフィダ・フスカYX BGL0937(「Tfu0937」)の遺伝子断片を調製した。これをBglIIおよびHindIIIで切断し、BglIIで切断したpHLAに連結した。
Claims (3)
- 以下の(a)または(b)のタンパク質をコードする遺伝子を含むポリヌクレオチドを含み、該(a)または(b)のタンパク質を発現する大腸菌:
(a)配列番号2のアミノ酸配列からなるタンパク質;
(b)配列番号2のアミノ酸配列において、1または数個のアミノ酸が欠失、置換または付加され、かつ90%以上の同一性を有するアミノ酸配列からなるタンパク質であって、かつβグルコシダーゼ活性を有する、タンパク質。 - 以下の(a)または(b)のタンパク質をコードする遺伝子と、以下の(1)または(2)のタンパク質をコードする遺伝子とを含むポリヌクレオチドを含み、該(a)または(b)のタンパク質を表層提示する大腸菌:
(a)配列番号2または配列番号4のアミノ酸配列からなるタンパク質;
(b)配列番号2または配列番号4のアミノ酸配列において、1または数個のアミノ酸が欠失、置換または付加され、かつ90%以上の同一性を有するアミノ酸配列からなるタンパク質であって、かつβグルコシダーゼ活性を有する、タンパク質;
(1)配列番号6、配列番号8、配列番号10、および配列番号12からなる群から選択されるアミノ酸配列からなるタンパク質;
(2)配列番号6、配列番号8、配列番号10、および配列番号12からなる群から選択されるアミノ酸配列において、1または数個のアミノ酸が欠失、置換または付加され、かつ90%以上の同一性を有するアミノ酸配列からなるタンパク質であって、かつ該タンパク質に融合された該(a)または(b)のタンパク質を大腸菌の表層に提示できる、タンパク質。 - BW25113株またはJCM20137株である、請求項1または2に記載の大腸菌。
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