JP5805202B2 - O−ホスホセリンを生産する微生物およびそれを用いてo−ホスホセリンからl−システインまたはその誘導体を生産する方法 - Google Patents
O−ホスホセリンを生産する微生物およびそれを用いてo−ホスホセリンからl−システインまたはその誘導体を生産する方法 Download PDFInfo
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Description
[本発明1001]
1)内在的ホスホセリンホスファターゼ(SerB)の活性が低下している組換え微生物を培養して、O−ホスホセリン(OPS)を生産するステップと、
2)O−ホスホセリンスルフヒドリラーゼ(OPSS)の存在下またはOPSSを発現する微生物の存在下で、前記ステップ1)のOPSと硫化物とを反応させて、システインまたはその誘導体を生産するステップと
を含む、システインまたはその誘導体の生産方法。
[本発明1002]
前記ホスホセリンホスファターゼが配列番号1または2に記載のアミノ酸配列を有する、本発明1001の方法。
[本発明1003]
酵素活性のレベルが、以下からなる群より選択される技術を用いることによって、低下されている、本発明1001の方法:
酵素をコードする染色体遺伝子の欠失;内在的遺伝子の活性を低下させるための、染色体遺伝子への変異の導入;内在的酵素の活性を低下させるように変異された遺伝子による、染色体遺伝子の置換;内在的遺伝子の活性を低下させるための、遺伝子の調節領域への変異の導入;およびmRNAの翻訳を阻害するための、遺伝子の転写物に相補的なアンチセンスオリゴヌクレオチドの導入。
[本発明1004]
内在的SerBの活性が妨害されている前記組換え微生物が、グリシンまたはセリンを含む培地で培養される、本発明1003の方法。
[本発明1005]
前記培地が、0.1〜10g/Lの量のグリシンを含む、本発明1004の方法。
[本発明1006]
前記培地が、0.1〜5g/Lの量のセリンを含む、本発明1004の方法。
[本発明1007]
前記組換え微生物が、ホスホグリセリン酸デヒドロゲナーゼ(SerA)またはホスホセリンアミノトランスフェラーゼ(SerC)の活性を強化するようにさらに改変されている、本発明1001の方法。
[本発明1008]
前記SerAが、野生型であるか、またはセリンフィードバック阻害に耐性の変異体である、本発明1007の方法。
[本発明1009]
i)前記SerAが、配列番号3〜7に記載のアミノ酸配列からなる群より選択される1つのアミノ酸配列を有し、かつ
ii)SerCが、配列番号8に記載のアミノ酸配列を有する、
本発明1007の方法。
[本発明1010]
前記組換え微生物が、PhnCDE[PhnC(ホスホネート輸送のATP結合要素、EG10713)−PhnD(Pnトランスポーターの周辺質結合タンパク質要素、EG10714)−phnE(アルキルホスホネートABCトランスポーターの膜内在性要素、EG11283)]の活性を低下させるようにさらに改変されている、本発明1001の方法。
[本発明1011]
前記組換え微生物が、アルカリホスファターゼ(PhoA)または酸ホスファターゼ(AphA)の活性を低下させるようにさらに改変されている、本発明1001の方法。
[本発明1012]
前記組換え微生物が、ヌクレオチドトランスヒドロゲナーゼ(PntAB)の活性を強化するようにさらに改変されている、本発明1001の方法。
[本発明1013]
前記組換え微生物が、O−アセチルセリン/システイン排出パーミアーゼ(YfiK)、ホモセリン/ホモセリンラクトン排出タンパク質(RhtB)、およびトレオニン/ホモセリン排出タンパク質(RhtC)からなる群より選択される少なくとも1つの酵素の活性を強化するようにさらに改変されている、本発明1001の方法。
[本発明1014]
酵素活性のレベルが、以下からなる群より選択される技術を用いることによって、強化されている、本発明1007、1012、または1013のいずれかの方法:
酵素をコードする遺伝子のコピー数を増加させること;酵素活性を強化するように、遺伝子の調節領域に変異を導入すること;酵素を強化するように変異された遺伝子によって、染色体遺伝子を置換すること;および酵素活性を強化するように、染色体遺伝子に変異を導入すること。
[本発明1015]
前記組換え微生物が、ホスホグリセリン酸ムターゼアイソザイム(GpmA、GpmI、またはGpmB)からなる群より選択される少なくとも1つの活性を低下させるようにさらに改変されている、本発明1001の方法。
[本発明1016]
前記組換え微生物が、L−セリンデヒドラターゼI(SdaA)の活性を低下させるようにさらに改変されている、本発明1001の方法。
[本発明1017]
前記組換え微生物が、2−アミノ−3−ケトブチレート補酵素Aリガーゼ(Kbl)または転写因子(IclR)の活性を低下させるようにさらに改変されている、本発明1001の方法。
[本発明1018]
前記組換え微生物が、アセチルCoAシンテターゼ(Acs)、酢酸キナーゼ(AckA)−ホスホトランスアセチラーゼ(Pta)、リンゴ酸シンターゼG(GlcB)、リンゴ酸デヒドロゲナーゼ(MaeB)、グルタミン酸デヒドロゲナーゼ(GdhA)、グリオキシル酸カルボリガーゼ(Glc)、タルトロン酸セミアルデヒドレダクターゼ2(GlxR)、およびグリセリン酸キナーゼII(GlxK)からなる群より選択される少なくとも1つの酵素の活性を強化するようにさらに改変されている、本発明1001の方法。
[本発明1019]
Glc、GlxR、およびGlxKからなる群より選択される少なくとも1つの酵素の活性が強化されることにより、前記組換え微生物の糖消費および増殖が改善される、本発明1018の方法。
[本発明1020] 前記組換え微生物が、エシェリキア属(Escherichia)の種またはコリネ型(Coryneform)の細菌である、本発明1001の方法。
[本発明1021]
前記ステップ2)の硫化物が、Na 2 S、NaSH、(NH 4 ) 2 S、H 2 S、Na 2 S 2 O 3 、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される、本発明1001の方法。
[本発明1022]
前記ステップ2)の硫化物が、変換反応で用いられるOPSモル濃度の0.1〜3倍のモル濃度で用いられる、本発明1001の方法。
[本発明1023]
前記ステップ2)のOPSSが、アエロピュルム・ペルニクス(Aeropyrum pernix)、マイコバクテリウム・ツベルクローシス(Mycobacterium tuberculosis)、マイコバクテリウム・スメグマチス(Mycobacterium smegmatis)、およびトリコモナス・バギナリス(Trichomonas vaginalis)からなる群より選択される少なくとも1つの種に由来するものである、本発明1001の方法。
[本発明1024]
前記OPSSが、ステップ2)の変換率が高くなるようにさらに改変されている、本発明1023の方法。
[本発明1025]
前記ステップ2)の変換が、0.001〜2mMのPLP(ピリドキサール−5−リン酸)、0.001〜100mMのDTT(ジチオスレイトール)、およびそれらの組み合わせから選択される補助因子の存在下で行われる、本発明1001の方法。
[本発明1026]
前記システインまたはその誘導体を単離および精製するステップをさらに含む、本発明1001の方法。
[本発明1027]
内在的SerBの活性が低下している、組換え微生物。
[本発明1028]
SerCの活性またはセリンフィードバック阻害に耐性であるSerAの活性を強化するようにさらに改変されている、本発明1027の組換え微生物。
[本発明1029]
PhnCDE、PhoA、およびAphAの中より選択される少なくとも1つの活性を低下させるようにさらに改変されている、本発明1027の組換え微生物。
[本発明1030]
受託番号KCCM11103Pで寄託された、本発明1027の組換え微生物。
本発明のさらなる理解は、例示的に説明する下記の実施例を通じて得ることができるが、本発明を限定するものと理解されてはならない。
コリネバクテリウム・グルタミカム13032は、O−ホスホセリンからL−セリンの合成を触媒する、ホスホセリンホスファターゼをコードするserB遺伝子(配列番号13、EC3.1.3.3)を欠失させることにより改変した。このために、serBの不活性化のための断片が構築された。これに関連し、プライマーは、本発明の組換え菌株13032−ΔserBの作製のために設計された。第一に、コリネバクテリウム・グルタミカム13032のserB配列はNIH GenBankのデータに基づいて得られ、そして、プライマー配列番号22〜27はserB配列を基本として合成された。部位特異的遺伝子破壊(site−specific gene disruption)のために、コリネバクテリウム・グルタミカムにおいて複製されないpDCベクターが使用された。serBのオープンリーディングフレームが内部的に破壊されたpDC−ΔserBプラスミドが構築され、そして、コリネバクテリウム・グルタミカム変異菌株において部位特異的serB遺伝子欠失の生成のために採用された。pDC−ΔserBの内部的遺伝子欠失は鋳型として提供されるコリネバクテリウム・グルタミカムATCC13032のゲノムDNAで、配列番号22および23、そして、配列番号24および25のプライマー対を用いて交差PCR、そして、PCR産物の、pDCベクターへの導入によって生成された。得られた組換えプラスミドにより、電気穿孔法で野生型コリネバクテリウム・グルタミカムを形質転換した(非特許文献20)。プラスミドは、1次組換え(交差)によって染色体に導入され、染色体から本来のserBを切り取るための2次組換え(交差)がこれに続いた。
コリネバクテリウム・グルタミカム13032からserBの欠失でもたらされた、O−ホスホセリンが蓄積されると予想されていた変異菌株CB01−0047は、BHISプレートに塗抹され、そして、30℃の培養器で一晩培養された。その後に、BHISプレート上に現れたコロニーは、表1に示した25mLの力価培地に白金耳を用いて接種され、そして、その後に、30℃で48時間、200rpmで振とうしながら培養された。結果は下記の表2にまとめられている。
3−ホスホグリセレートから3−ホスホヒドロキシピルベートの合成を触媒する酵素である、3−ホスホグリセリン酸デヒドロゲナーゼのそれぞれの変異をコードするコリネバクテリウム・グルタミカム由来の遺伝子serA*(E235K)(配列番号14)およびserA*(197Δ)(配列番号15)が構築された。変異はセリンに対してフィードバック耐性(feedback resistant、FBR)であることが報告された(非特許文献13、特許文献3)。serA*(E235K)は、ATCC13032のゲノムDNAにおける配列番号28〜31のプライマーを用いたソーイングPCR(sewing PCR)によって得られたのに対し、serA*(197Δ)は、配列番号28〜32のプライマー対を用いたPCRによって構築された。こうして得られたPCR産物は、Tblunt−serA*(E235K)およびTblunt−serA*(197Δ)と呼ばれる組換えベクターを構築するために、それぞれのTベクターに挿入された。その後、2つのベクターは、2つの断片serA*(E235K)およびserA*(197Δ)を提供するために、制限酵素EcoRVおよびXbaIで処理された。これら断片は、それぞれ同じ制限酵素で消化したpECCG117−Pcj7−GFP−ターミネーターベクターに挿入された。結果的に、2つの組換えベクターpECCG117−Pcj7−serA*(E235K)、およびpECCG117−Pcj7−serA*(197Δ)が得られた。
実施例3で構築された2つのコリネバクテリウム由来のFBR−serA*プラスミドは、コリネバクテリウム・グルタミカムCB01−0047に導入された。O−ホスホセリン生産能を評価するために、形質転換体はBHISプレートに塗抹され、30℃で一晩培養された。その後に、BHISプレート上に現れたコロニーは、2g/L L−セリンをさらに含む、表1に示した25mLの力価培地に白金耳を用いて接種され、そして、その後に、30℃で48時間、200rpmで振とうしながら培養された。結果は下記の表4にまとめられている。
大腸菌は、O−ホスホセリンからのL−セリンの合成を触媒するホスホセリンホスファターゼをコードするserB遺伝子(配列番号16)を欠失させることにより改変した。欠失変異体大腸菌K12はワンステップの不活性化方法(非特許文献21)により作製し、抗生物質耐性マーカー遺伝子を除去した。serB欠失菌株を作製するために、まず、配列番号33と配列番号34のプライマー対とpKD3プラスミド(非特許文献21; GenBank No. AY048742)を用いてPCR反応を行い、その結果取得したPCR産物をpKD46(非特許文献21; GenBank No. AY048746)を含む大腸菌K12のコンピテント細胞にエレクトロポレーションで導入した。その後、クロラムフェニコール耐性を示す菌株を対象にPCR反応を行い、serBの欠失を確認し、pCP20(非特許文献21)で形質転換して抗生物質耐性マーカーを除去した。得られた変異菌株は、CA07−0012と名付けた。
O−ホスホセリンが蓄積されると予想されるホスホセリンホスファターゼ欠損変異菌株をLBプレートに塗抹した後、33℃の培養器で一晩培養した。LBプレート上に現れたコロニーを、表5に示す25mLの力価培地に1白金耳ずつ接種した後、これを33℃、200rpmで振とうしながら培養器で48時間培養した。その結果を下記の表6にまとめている。
3−ホスホグリセレートから3−ホスホヒドロキシピルベートへの合成を触媒する酵素である3−ホスホグリセリン酸デヒドロゲナーゼ各変異体をコードする大腸菌由来の遺伝子であるserA*(G336V)(配列番号18)、serA*(G336V、G337V)(配列番号19)、serA*(G336V、R338G)(配列番号20)を作製した。変異体は、セリンに対してフィードバック耐性(FBR)であることが報告された(非特許文献11、非特許文献12)。大腸菌の染色体への変異遺伝子の導入は、ソーイングPCRを用いて行った。下記プライマーを用いて、変異が含まれたDNA断片を作製した。
serA(配列番号17、EC1.1.1.95)、serC(配列番号21、EC2.6.1.52)、serA*(G336V)、serA*(G336V、G337V)、およびserA*(G336V、R338G)のクローニングは次のように実施した。serAおよびserCは、大腸菌W3110のゲノムDNAにおけるPCRによって取得し、serA*(G336V)、serA*(G336V、G337V)、およびserA*(G336V、R338G)は実施例7のDNA断片を鋳型としてPCRによって取得した。serAに対してはPCRプライマーは配列番号48および49であり、serCに対しては配列番号50および51であった。PCR産物は、EcoRVおよびHindIIで処理した後、pCL1920ベクター(GenBank No AB236930)に大腸菌のrmfプロモーターが挿入されている組換えpCL−Prmfベクターへとクローニングし、pCL−Prmf−serA、pCL−Prmf−serC、pCL−Prmf−serA*(G336V)、pCL−Prmf−serA*(G336V、G337V)、およびpCL−Prmf−serA*(G336V、R338V)との名称の組換えベクターをそれぞれ作製した。
実施例8で構築された8種のプラスミドでそれぞれCA07−0012を形質転換し、得られた組換え菌種をO−ホスホセリン生産能についてアッセイした。それぞれの菌株をLBプレートに塗抹した後、33℃の培養器で一晩培養した。LBプレートに現れたコロニーを、表8の25mLの力価培地に接種した後、これを33℃、200rpmで振とうしながら培養器で48時間培養した。結果を下記の表9にまとめている。
実施例10で作製されたCA07−0016菌株およびCA07−0016/pCL−Prmf−serA*(G336V)−(RBS)serC菌株のO−ホスホセリン生産能を評価した。それぞれの菌株をLBプレートまたはLB(スペクチノマイシン)プレートに塗抹した後、33℃の培養器で一晩培養した。LBプレートまたはLB(スペクチノマイシン)プレートに現れたコロニーを、表8の25mLの力価培地に1白金耳ずつ接種した後、これを33℃、200rpmで振とうしながら培養器で48時間培養した。結果を下記の表10にまとめている。
ホスホセリンホスファターゼが欠損した菌株において、アルカリホスファターゼをコードするphoA遺伝子および酸ホスファターゼをコードするaphAをさらに欠損させた。phoA遺伝子を欠失させるためのDNA断片は、配列番号55および配列番号56のプライマー対を用いてpkD3プラスミドにおいてPCRを行うことにより取得し、aphA遺伝子を欠失させるためのDNA断片は、配列番号57および配列番号58のプライマー対を用いて前記と同様の方法で取得した。各欠失菌株を作製するための方法は実施例5に記述したのと同様である。phoAとaphAが両方とも欠失した菌株は、pKD46で再度形質転換したphoA欠失菌株のコンピテント細胞に、aphAを欠失させるためのDNA断片をエレクトロポレーションで導入することにより作成した。したがって、クロラムフェニコール耐性を示す細胞株を対象にPCR反応を行い、aphAの欠失を確認し、pCP20で形質転換して抗生物質耐性マーカーを除去した。得られた変異菌株およびその遺伝子型を下記の表11にまとめている。
実施例12で作製された菌株を用いてOPS生産能およびOPS分解不能度をアッセイした。それぞれの菌株をLBプレートまたはLB(スペクチノマイシン)プレートに塗抹した後、33℃の培養器で一晩培養した。LBプレートまたはLB(スペクチノマイシン)プレートに現れたコロニーを、表8の25mLの力価培地に1白金耳ずつ接種した後、これを33℃、200rpmで振とうしながら培養器で72時間培養した。結果を下記の表12にまとめている。OPS分解不能度は、リン酸イオン分析により決定されるリン酸イオンレベルの変化によって評価した。
serB欠損菌株(CA07−0012)は、phnC/phnD/phnEアルキルホスホネートABCトランスポーターをコードするphnCDE、アルカリホスファターゼをコードするphoA、および酸ホスファターゼをコードするaphAをさらに欠失させるように改変した。作製された菌株を下記の表13に提示する。実施例5に記述したワンステップの不活性化方法を利用して欠失変異体を作製した。
実施例14で作製された菌株を用いてOPS生産能をアッセイした。それぞれの菌株をLBプレートまたはLB(スペクチノマイシン)プレートに塗抹した後、33℃の培養器で一晩培養した。LBプレートまたはLB(スペクチノマイシン)プレートに現れたコロニーを、表8の25mLの力価培地に1白金耳ずつ接種した後、これを33℃、200rpmで振とうしながら培養器で72時間培養した。結果を下記の表14にまとめている。
CA07−0022において、3−ホスホグリセリン酸デヒドロゲナーゼをコードするserAを、セリンに対してフィードバック耐性であることが報告されたserA*(G336V)、serA*(G336V、G337V)、またはserA*(G336V、R338G)で染色体上で下記のように置換した。
実施例16で作製された菌株をO−ホスホセリン生産能についてアッセイした。それぞれの菌株をLBプレートまたはLB(スペクチノマイシン)プレートに塗抹した後、33℃の培養器で一晩培養した。LBプレートまたはLB(スペクチノマイシン)プレートに現れたコロニーを、表8の25mLの力価培地に1白金耳ずつ接種した後、これを33℃、200rpmで振とうしながら培養器で48時間培養した。結果を下記の表15にまとめている。
実施例16で作製された菌株であるCA07−0022serA*(G336V)、CA07−0022serA*(G336V、G337V)、CA07−0022serA*(G336V、R338G)に、実施例8で作製されたpCL−Prmf−serCプラスミドをそれぞれ導入した。得られた変異体は、実施例9と同様の方法でO−ホスホセリン生産能を評価した。結果を下記の表16にまとめている。
ピリミジンヌクレオチドトランスヒドロゲナーゼをコードするpntABが上方制御された菌株を作製するために、pntABプロモーターを、変異体loxPシステム(非特許文献24)を用いてtrcプロモーターに交換した。ここでは、配列番号59と配列番号60のプライマー対とpmlox−trc(ref)プラスミドとを用いてPCR反応を行い、その結果得られたPCR産物を、pKD46を含むCA07−0022serA*(G336V)のコンピテント細胞にエレクトロポレーションで導入した。その後、クロラムフェニコール耐性を示す形質転換体を対象にPCR反応を行い、プロモーターの置換を確認した後、pJW168(非特許文献25)で形質転換して抗生物質耐性マーカー遺伝子を除去した。得られた菌株は、CA07−0022serA*(G336V)P(trc)−pntABと名付けた。このPCRに用いたプライマーは、NIH GenBankに登録されているK12 W3110遺伝子(GenBankアクセッション番号AP002223、AP002224)および周辺塩基配列に関する情報に基づいて設計した。
pntABおよびgdhAが上方制御されたOPS生産菌株を作製するために、下記表のように、CA07−0022serA*(G336V)菌株またはCA07−0022serA*(G336V)P(trc)−pntAB菌株を、pCL−P(trc)−serA*(G336V)−serCおよびpCC1BAC−P(ネイティブ)−gdhAを個々にまたは組み合わせによって形質転換した。各形質転換体を33℃の培養器でLBプレートで一晩培養した。コロニーを、表8の25mLの力価培地に1白金耳ずつ接種した後、これを33℃、200rpmで振とうしながら培養器で48時間培養した。
生成されたO−ホスホセリンが細胞外に放出されるためには、適切な排出因子が必要であるが、文献に報告されていない。そこで、本発明者らは、既に報告された多様なトランスポーター遺伝子の中から、O−アセチルセリン/システイン排出タンパク質をコードするydeD、O−アセチルセリン/システイン排出パーミアーゼをコードするyfiK(非特許文献26)、ホモセリン/ホモセリンラクトン排出タンパク質をコードするrhtB、トレオニン/ホモセリン排出タンパク質をコードするRhtC、亜ヒ酸/アンチモナイトトランスポーターをコードするasrB、ロイシン/イソロイシン/バリン輸送サブユニットをコードするlivHMの6種の遺伝子を選択し、クローニングして、評価した。
実施例21で構築された6種のプラスミドで、CA07−0022serA*(G336V)菌株を形質転換し、実施例9と同様の方法でO−ホスホセリンの生産能を評価した。結果を下記の表18に提示する。
CA07−0022serA*(G336V)から、ホスホグリセリン酸ムターゼをコードする遺伝子であるgpmI、gpmA、およびgpmBを単独または組み合わせで欠失させ、それぞれ、CA07−0022serA*(G336V)ΔgpmI、CA07−0022serA*(G336V)ΔgpmA、CA07−0022serA*(G336V)ΔgpmB、CA07−0022serA*(G336V)ΔgpmIΔgpmA、CA07−0022serA*(G336V)ΔgpmAΔgpmB、およびCA07−0022serA*(G336V)ΔgpmIΔgpmAΔgpmB菌株を作製した。gpmA欠失菌株およびgpmB欠失菌株の作製方法は実施例5に記述したとおりであり、gpmAには配列番号75および配列番号76のプライマー対を、gpmBには配列番号81および配列番号82のプライマー対を用いた。gpmI欠失菌株の作製方法は、実施例16に記述したように、pSG76Cベクターを用いて 終止コドンを含むgpmI変異を導入する方法を利用した。終止コドンを含むgpmI変異体は、K12 W3110のゲノムDNAを鋳型として配列番号77〜81のプライマーを用いてsewing PCRにより増幅し、pSG76のSacI/BamHIサイトにクローニングした。
実施例23で作製された菌株を、実施例9で記述したのと同様の方法でOPSの生産能を評価した。結果を下記の表19にまとめている。
CA07−0022serA*(G336V)から、2−アミノ−3−ケトブチレートCoAリガーゼをコードするkbl遺伝子、およびL−セリンデアミナーゼIをコードするsdaA遺伝子を欠失させ、それぞれ、CA07−0022serA*(G336V)Δkbl、およびCA07−0022serA*(G336V)ΔsdaA菌株を得た。kbl欠失菌株およびsdaA欠失菌株の作製方法は実施例5に記述したとおりであり、kblには配列番号83と配列番号84のプライマー対を、sdaAには配列番号85と配列番号86のプライマー対を用いた。
実施例25で作製された菌株を、グリシンを0〜2.5g/Lの量で使用した以外は実施例9の表8に記述されたのと同じ培地条件で培養した場合の、OD、糖消費、およびO−ホスホセリン生産能について評価した。
CA07−0022serA*(G336V)から、転写因子のiclRを欠失させ、CA07−0022serA*(G336V)ΔiclR菌株を作製した。欠失変異菌株は、実施例5の方法と同様に、ワンステップの不活性化方法によって作製し、抗生物質耐性マーカー遺伝子を除去した。iclR欠失菌株の作製には、配列番号87と配列番号88のプライマー対を用いた。
実施例27で作製された菌株を、実施例9で記述したのと同様の方法でOPSの生産能を評価した。
O−ホスホセリン生産菌株においてアセテートの生成および再利用を増加させるために、アセチルCoAシンテターゼをコードするacs、ピルビン酸オキシダーゼモノマーをコードするpoxB、酢酸キナーゼをコードするackA、およびリン酸アセチルトランスフェラーゼをコードするptsをそれぞれ保有する発現プラスミドを構築した。
実施例29で作製された3種のベクターでCA07−0022serA*(G336V)菌株を形質転換し、実施例9と同様の方法でOPS生産能をアッセイした。
リンゴ酸シンターゼAをコードするaceB遺伝子、およびイソクエン酸リアーゼモノマーをコードするaceA遺伝子、ホスホエノールピルビン酸カルボキシキナーゼをコードするpckA遺伝子、リンゴ酸シンターゼGをコードするglcB遺伝子、リンゴ酸デヒドロゲナーゼをコードするmaeB遺伝子をそれぞれ大腸菌で発現できるプラスミドを構築した。
実施例31で作製された4種のプラスミドでCA07−0022serA*(G336V)菌株を形質転換し、実施例9と同様の方法でO−ホスホセリン生産能をアッセイした。
グリオキシレートから3−ホスホグリセレートへの変換に関与する、グリオキシル酸カルボリガーゼをコードするgcl、タルトロン酸セミアルデヒドレダクターゼ2をコードするglxR、およびグリセリン酸キナーゼIIをコードするglxKを下記のようにクローニングした。大腸菌W3110のゲノムDNAを鋳型とし、gclには配列番号103および104のプライマー対を、glxR−glxKには配列番号105〜108のプライマー対を用いてPCRによって取得した。各PCR産物はEcoRVおよびHindIIIで消化した後、pCL1920に大腸菌rmfプロモーターを挿入して構築したpCL−Prmf−GFPベクターのEcoRVおよびHindIII制限酵素サイトにクローニングし、pCL−Prmf−gcl、pCL−Prmf−glxR−glxK、およびpCL−Prmf−glxR−glxK−Prmf−gclの組換えベクターを得た。
実施例33で構築された3種のプラスミドをCA07−0022serA*(G336V)に導入し、実施例9と同様の方法でO−ホスホセリンの生産能を評価した。その結果を下記の表24にまとめている。
CA07−0022serA*(G336V)/pCL−Prmf−serA*(G336V)−serC菌株を、50μg/mLのスペクチノマイシンを含むMMYE寒天プレート(2g/Lのグルコース、2mMの硫酸マグネシウム、0.1mMの塩化カルシウム、6g/Lのピロリン酸ナトリウム、0.5g/Lの塩化ナトリウム、3g/Lのリン酸二水素カリウム、10g/Lの酵母抽出物、18g/Lの寒天)上で33℃、24時間培養した。得られたコロニーを各寒天プレートの領域の1/10から掻き取り、バッフル(baffle)フラスコ中、50μg/mLのスペクチノマイシンを含む種培養培地(10g/Lのグルコース、0.5g/Lの硫酸マグネシウム、3g/Lのリン酸二水素カリウム、10g/Lの酵母抽出物、0.5g/Lの塩化ナトリウム、1.5g/Lの塩化アンモニウム、12.8g/Lのピロリン酸ナトリウム、1g/Lのグリシン)に接種して、30℃で6時間200rpmで振とうしながら培養した。得られた種培養培地は、300mlの本培養培地で満たされた1Lの発酵槽に対して、本培養培地の容積の16%に対応する量で接種し、培養を33℃でpH7.0で行った。本培養培地の組成は下記の表25に示した。
アエロピュルム・ペルニクス、マイコバクテリウム・ツベルクローシス、およびトリコモナス・バギナリスでは、システイン合成の基質として、大腸菌におけるO−アセチルセリン(OAS)とは異なりO−ホスホ−L−セリン(OPS)を用いる酵素であるO−ホスホセリンスルフヒドリラーゼ(OPSS)を有すると報告されている(非特許文献7、非特許文献8、非特許文献9)。前記文献の報告に基づき、本発明者らは、OPSをシステインへと変換する計2種のOPSスルフヒドリラーゼをアエロピュルム・ペルニクスおよびマイコバクテリウム・ツベルクローシスH37Rvから得た。前記2種の酵素のうち、マイコバクテリウム・ツベルクローシスH37Rv由来のOPSS酵素をアミノ酸相同性検索に用いた。その結果、マイコバクテリウム・スメグマチスMC2 155株、ロドコッカス・ジョスティ(Rhodococcus jostii)RHA1、およびノカルジア・ファルシニカ(Nocardia farcinica)IFM10152由来の3種のOPSS酵素を確保した。
O−ホスホセリン(OPS)からシステインへの合成を触媒する能力について、4種の微生物菌種から得たOPSスルフヒドリラーゼをアッセイした。アッセイ条件および方法(cysM酵素アッセイ)については、以前の文献の報告(非特許文献7、非特許文献8、非特許文献9)を参照した。用いた基質の量はmL単位で表す。酵素活性のアッセイ条件は下記の表27にまとめている。
マイコバクテリウム・ツベルクローシスH37Rv由来のOPSS(Mtb−OPSS)は追加的な酵素であるmec+およびcysOの助けによりOPSからシステインへの変換を触媒するが、C末端の5個のアミノ酸が除去された場合、このような追加的な酵素の非存在下でさえ、S2−を有する硫黄源を用いてOPSをシステインに変換させることができると報告されている(非特許文献6)。前記文献の報告に基づいて、硫黄源としてS2−の存在下、OPSを迅速に変換することができるMtb−T(配列番号11)を得た。また、Mtb−OPSSとアミノ酸相同性を示すMsm−OPSS(配列番号9)から、Msm−Tをさらに得た。2種の酵素変異体を保有する発現ベクターを構築した。ここでは、マイコバクテリウム・ツベルクローシスH37Rvおよびマイコバクテリウム・スメグマチスのゲノムDNAを鋳型として、配列番号119、配列番号120、配列番号121、および配列番号122のプライマー対の存在下、pfu PCRを行った。得られたOPSS遺伝子断片はNdeIおよびHindIIIで処理し、同じ制限酵素で消化されたpET28aベクターにクローニングして、組換え発現ベクターpET28a−Mtb−TおよびpET28a−Msm−Tをそれぞれ構築した。この組換え発現ベクターを、大腸菌(DE3)に導入した。2種の変異OPSS酵素の発現は、14%SDS PAGEによって確認した。この2種の変異OPSS酵素の発現および精製は、前記実施例36と同様の条件で行った。その結果、Mtb−T(配列番号11)およびMsm−T(配列番号10)を得た。
C末端の5個のアミノ酸残基が欠失しているマイコバクテリウム・ツベルクローシスH37Rv由来OPSS変異体が、補助的な酵素の非存在下でさえ、S2−基を含有する硫黄源に対する増加した親和性を示すという報告(非特許文献6)に基づいて、Mtb−TおよびMsm−Tを得た。これらは、最終システイン変換率を測定して酵素活性を評価した。酵素活性は、実施例37と同じ条件および方法でアッセイした。生成されたシステインはGaitonde法で定量した。
OPSSのシステイン変換に対する補助因子の影響を調べるために、PLP(ピリドキサール−5'−リン酸)およびDTT(ジチオスレイトール)の存在下または非存在下においてMsm−Tのシステイン変換率を測定した。ここでは、50mM OPSブロスおよび100mM Na2Sを基質として25mM DTTまたは0.2mM PLPの存在下で、37℃で30分間反応させた。生成されたシステインはGaitonde法で定量した。表30から分かるように、PLPとDTTの両方が存在しない場合と比べて、PLPとDTTの両方が存在する場合は、システイン変換率が2.3倍高かった。つまり、PLPとDTTの両方が、変換に対して正の影響を有することが観察された。
Ape−OPSSおよびMsm−Tの、温度によるシステイン変換率を調べた。37℃および60℃での酵素活性を、反応2、5、10、30、および60分後に測定した。反応は100mM Hepes(pH7.4)、5mM OPS、10mM Na2S、0.2mM PLP、および50μg/ml CysMの条件で行った。生成されたシステインの量はGaitonde法で決定した。緩衝液のこの条件では、図2から分かるように、Ape−OPSSが37℃で最も速い初期反応速度を示しただけでなく、60℃でMsm−Tよりも高い反応性を示した。
Ape−OPSSおよびMsm−Tの熱安定性を分析した。酵素をそれぞれOPSブロスで2mg/mLの濃度に希釈し、37℃および60℃で10、30、60、120、および240分間熱処理した。その後、5mM OPS、10mM Na2S、0.2mM PLP、100mM HEPES(pH7.4)の条件で37℃で30分間反応させた。この反応では、10μg/ml Ape−OPSSおよび50μg/ml Msm−Tを用いた。生成されたシステインの量はGaitonde法で測定した。Ape−OPSSは、60℃で4時間熱処理したにもかかわらず、そのインタクトな活性を維持していることが観察されたが、Msm−Tは、37℃では活性を維持したものの、60℃で30分間の熱処理では、50%活性が減少した。この結果を下記の表31に示す。
Ape−OPSSおよびMsm−Tの、pHによるシステイン変換率を調べた。100mM バッファーにおいて、それぞれ50μg/mLの濃度を有するApe−OPSSおよびMsm−Tを、37℃で10分間反応に供した。ここでは、pH6.4/7.0/7.4/8.0のリン酸カリウムバッファー、pH7.0/7.4/8.0/8.5/8.8のTris−HClバッファー、pH8.0/8.5/9.0/10.0の炭酸ナトリウムバッファーを使用した。生成されたシステインの定量はGaitonde法で行った。図3に示されたように、Msm−Tは、バッファーに関係なくpH8.0〜9.0の間で最も高い活性を示した。Ape−OPSSの場合、最も高い活性はリン酸カリウム(pH7.4)で検出され、バッファーごとに最適なpHは異なっていた。
OPSS酵素活性に対するイオンの影響を下記のように調べた。5mM OPS、10mM Na2S、0.2mM PLP、および100mM HEPES(pH7.4)を含む反応混合液において、酵素を、(NH4)2SO4[1、3、5、10、20g/L]、KH2PO4[0.5、1、2、4、8g/L]、またはNH4Cl[0.2、0.5、1、2g/L]の存在下、37℃で30分間の反応に供した。Ape−OPSSおよびMsm−Tはそれぞれ、10μg/mLおよび50μg/mLの濃度で使用した。生成されたシステインの量はGaitonde法で決定した。
各酵素のシステイン合成活性に対する硫黄源の影響を調べるために実験を行った。各酵素(50μg/mL Ape−OPSS、50μg/mL Msm−T)を、5mM OPS、0.2mM PLP、および100mM HEPESを含む反応混合液中、10mM Na2S、NaSH、またはNa2S2O3の存在下、37℃で1時間の反応に供した。生成されたシステインの量はGaitonde法で測定した。Ape−OPSSは、硫黄源としてNa2S2O3を選び、Msm−TはNa2Sを選ぶことが観察された。結果を下記の表34にまとめている。
pET28a−Msm−Tベクターを鋳型とし、配列番号123および124のプライマーを用いてPCRを行った。得られたPCR産物をEcoRVおよびHindIIIで処理し、pCL−P(CJ1)にクローニングして、組換えベクターpCL−P(CJ1)−Msm−Tを構築した。pETシステムとpCL−Pcj1システムとでMsm−Tの発現レベルの差を調べるために、酵素発現のための菌株を作製した。pETシステムはRosetta(DE3)に導入し、pCL−Pcj1システムはK12G菌株を用いた。酵素発現のために、LBプレートから得た単一コロニーを、5mLのLBブロスに接種し、200rpmで振とうしながら37℃で16時間培養した。この培養物を、カナマイシンまたはスペクチノマイシンと0.2%グルコースとを含む新たな25mLのLBブロス(250mL容量のフラスコ)に移し、OD600が0.5〜0.6となるまで培養した。その後直ちに、1mMのIPTGを培地に添加して酵素の発現を誘導した。200rpmで振とうしながら37℃で培養する間、様々な培養時間(8、16、24時間)で酵素の発現レベルを測定した。2つのシステムでの酵素発現レベルは、14%SDS PAGEで分析した(図4)。
Msm−TおよびApe−OPSSの、精製OPSからのシステイン変換率を調べた。OPS発酵ブロスから精製した60mMのOPSを、120mM Na2Sとともに、75μg/mLの各酵素および0.2mMのPLPの存在下、37℃または70℃で30、60、90、および120分間反応させた。Msm−Tは37℃でのみ、Ape−OPSSは37℃と70℃の両方で反応を行った。生成されたシステインの量はGaitonde法で測定した。図5から明らかなように、精製OPS発酵ブロスは、システインへの酵素変換の基質として十分に役に立った。特に、精製OPS発酵ブロスを使用した際、70℃でさえ、Ape−OPSSの変換率は増加した。
OPS発酵ブロスを基質として用いた場合の、酵素の濃度によるMsm−TおよびApe−OPSSのシステイン変換率を測定した。50mMのOPS発酵ブロスを、100mM Na2Sおよび0.2mM PLPの存在下、5μg/mLまたは50μg/mLの各Msm−TおよびApe−OPSSとともに37℃で反応させた。生成されたシステインの量はGaitonde法で測定した。図6から明らかなように、50μg/mLのMsm−Tにおいて最も高い変換率が検出された。加えて、OPS発酵ブロスを基質として使用した際、Msm−Tの活性はApe−OPSSの活性よりも高かった。
Msm−Tの変換率に対するOPS濃度の影響を調べるために、それぞれOPS発酵ブロスに所定量の精製OPSを添加して変換反応を誘導した。酵素は50μgの量で使用した。反応液中のシステインの量はGaitonde法で測定した。Msm−Tは、OPSの濃度が約30g/Lの時に100%もの高い変換率を示した。
Claims (31)
- 1)内在的ホスホセリンホスファターゼ(SerB)の活性が低下している組換え微生物を培養して、O−ホスホセリン(OPS)を生産するステップであって、該組換え微生物がエシェリキア属(Escherichia)の種、エルウィニア属(Erwinia)の種、セラチア属(Serratia)の種、プロビデンシア属(Providencia)の種、コリネバクテリウム属(Corynebacterium)の種またはブレビバクテリウム属(Brevibacterium)の種であるステップと、
2)O−ホスホセリンスルフヒドリラーゼ(OPSS)の存在下またはOPSSを発現する微生物の存在下で、前記ステップ1)のOPSと硫化物とを反応させて、システインを生産するステップと
を含む、システインの生産方法。 - 前記ホスホセリンホスファターゼが配列番号1または2に記載のアミノ酸配列を有する、請求項1に記載の方法。
- 酵素活性のレベルが、以下からなる群より選択される技術を用いることによって、低下されている、請求項1に記載の方法:
酵素をコードする染色体遺伝子の欠失;内在的遺伝子の活性を低下させるための、染色体遺伝子への変異の導入;内在的酵素の活性を低下させるように変異された遺伝子による、染色体遺伝子の置換;内在的遺伝子の活性を低下させるための、遺伝子の調節領域への変異の導入;およびmRNAの翻訳を阻害するための、遺伝子の転写物に相補的なアンチセンスオリゴヌクレオチドの導入。 - 内在的SerBの活性が妨害されている前記組換え微生物が、グリシンまたはセリンを含む培地で培養される、請求項3に記載の方法。
- 前記培地が、0.1〜10g/Lの量のグリシンを含む、請求項4記載の方法。
- 前記培地が、0.1〜5g/Lの量のセリンを含む、請求項4に記載の方法。
- 前記組換え微生物が、ホスホグリセリン酸デヒドロゲナーゼ(SerA)またはホスホセリンアミノトランスフェラーゼ(SerC)の活性を強化するようにさらに改変されている、請求項1に記載の方法。
- 前記SerAが、野生型であるか、またはセリンフィードバック阻害に耐性の変異体である、請求項7に記載の方法。
- i)前記SerAが、配列番号3〜7に記載のアミノ酸配列からなる群より選択される1つのアミノ酸配列を有し、かつ
ii)SerCが、配列番号8に記載のアミノ酸配列を有する、
請求項7に記載の方法。 - 前記組換え微生物が、PhnCDE[phnC(ホスホネート輸送のATP結合要素、EG10713)−phnD(Pnトランスポーターの周辺質結合タンパク質要素、EG10714)−phnE(アルキルホスホネートABCトランスポーターの膜内在性要素、EG11283)]の活性を低下させるようにさらに改変されている、請求項1に記載の方法。
- 前記組換え微生物が、アルカリホスファターゼ(PhoA)または酸ホスファターゼ(AphA)の活性を低下させるようにさらに改変されている、請求項1に記載の方法。
- 前記組換え微生物が、ヌクレオチドトランスヒドロゲナーゼ(PntAB)の活性を強化するようにさらに改変されている、請求項1に記載の方法。
- 前記組換え微生物が、O−アセチルセリン/システイン排出パーミアーゼ(YfiK)、ホモセリン/ホモセリンラクトン排出タンパク質(RhtB)、およびトレオニン/ホモセリン排出タンパク質(RhtC)からなる群より選択される少なくとも1つの酵素の活性を強化するようにさらに改変されている、請求項1に記載の方法。
- 酵素活性のレベルが、以下からなる群より選択される技術を用いることによって、強化されている、請求項7、12、または13のいずれか一項に記載の方法:
酵素をコードする遺伝子のコピー数を増加させること;酵素活性を強化するように、遺伝子の調節領域に変異を導入すること;酵素を強化するように変異された遺伝子によって、染色体遺伝子を置換すること;および酵素活性を強化するように、染色体遺伝子に変異を導入すること。 - 前記組換え微生物が、ホスホグリセリン酸ムターゼアイソザイム(GpmA、GpmI、またはGpmB)からなる群より選択される少なくとも1つの酵素の活性を低下させるようにさらに改変されている、請求項1に記載の方法。
- 前記組換え微生物が、L−セリンデヒドラターゼI(SdaA)の活性を低下させるようにさらに改変されている、請求項1に記載の方法。
- 前記組換え微生物が、2−アミノ−3−ケトブチレート補酵素Aリガーゼ(Kbl)または転写因子(IclR)の活性を低下させるようにさらに改変されている、請求項1に記載の方法。
- 前記組換え微生物が、アセチルCoAシンテターゼ(Acs)、酢酸キナーゼ(AckA)−ホスホトランスアセチラーゼ(Pta)、リンゴ酸シンターゼG(GlcB)、リンゴ酸デヒドロゲナーゼ(MaeB)、グルタミン酸デヒドロゲナーゼ(GdhA)、グリオキシル酸カルボリガーゼ(Glc)、タルトロン酸セミアルデヒドレダクターゼ2(GlxR)、およびグリセリン酸キナーゼII(GlxK)からなる群より選択される少なくとも1つの酵素の活性を強化するようにさらに改変されている、請求項1に記載の方法。
- Glc、GlxR、およびGlxKからなる群より選択される少なくとも1つの酵素の活性が強化されることにより、前記組換え微生物の糖消費および増殖が改善される、請求項18に記載の方法。
- 前記組換え微生物が、エシェリキア属(Escherichia)の種またはコリネ型(Coryneform)の細菌である、請求項1記載の方法。
- 前記ステップ2)の硫化物が、Na2S、NaSH、(NH4)2S、H2S、Na2S2O3、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項1に記載の方法。
- 前記ステップ2)の硫化物が、変換反応で用いられるOPSモル濃度の0.1〜3倍のモル濃度で用いられる、請求項1に記載の方法。
- 前記ステップ2)のOPSSが、アエロピュルム・ペルニクス(Aeropyrum pernix)、マイコバクテリウム・ツベルクローシス(Mycobacterium tuberculosis)、マイコバクテリウム・スメグマチス(Mycobacterium smegmatis)、およびトリコモナス・バギナリス(Trichomonas vaginalis)からなる群より選択される少なくとも1つの種に由来するものである、請求項1に記載の方法。
- 前記OPSSが、野生型のそれと比較して、ステップ2について増加した反応速度を有する改変OPSSである、請求項23に記載の方法。
- 前記ステップ2)の反応が、0.001〜2mMのPLP(ピリドキサール−5−リン酸)、0.001〜100mMのDTT(ジチオスレイトール)、およびそれらの組み合わせから選択される補助因子の存在下で行われる、請求項1に記載の方法。
- 前記システインを単離および精製するステップをさらに含む、請求項1に記載の方法。
- 内在的SerBの活性が低下している組換え微生物であって、SerAまたはSerCの活性がさらに強化され、エシェリキア属(Escherichia)の種、エルウィニア属(Erwinia)の種、セラチア属(Serratia)の種、プロビデンシア属(Providencia)の種、コリネバクテリウム属(Corynebacterium)の種またはブレビバクテリウム属(Brevibacterium)の種である組換え微生物。
- 前記SerAが野生型であるか、または、セリンフィードバック阻害に耐性な変異体である、請求項27に記載の組換え微生物。
- 内在的SerBの活性が低下され、且つ、PhnCDE、PhoA、およびAphAの中より選択される少なくとも1つの酵素の活性がさらに低下された組換え微生物であって、エシェリキア属(Escherichia)の種、エルウィニア属(Erwinia)の種、セラチア属(Serratia)の種、プロビデンシア属(Providencia)の種、コリネバクテリウム属(Corynebacterium)の種またはブレビバクテリウム属(Brevibacterium)の種である組換え微生物。
- 受託番号KCCM11103Pで寄託された組換え微生物。
- 1)内在的ホスホセリンホスファターゼ(SerB)の活性が低下している組換え微生物を培養して、O−ホスホセリン(OPS)を生産するステップであって、該組換え微生物がエシェリキア属(Escherichia)の種、エルウィニア属(Erwinia)の種、セラチア属(Serratia)の種、プロビデンシア属(Providencia)の種、コリネバクテリウム属(Corynebacterium)の種またはブレビバクテリウム属(Brevibacterium)の種であるステップと、
2)O−ホスホセリンスルフヒドリラーゼ(OPSS)の存在下またはOPSSを発現する微生物の存在下で、前記ステップ1)のOPSと硫化物とを反応させて、システインを生産するステップと、
3)ステップ2)で生産されたシステインをシステイン誘導体に変換するステップと
を含む、システイン誘導体の生産方法。
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WO2015108048A1 (ja) | 2014-01-15 | 2015-07-23 | 株式会社新日本科学 | 抗腫瘍作用を有するキラル核酸アジュバンド及び抗腫瘍剤 |
US10322173B2 (en) | 2014-01-15 | 2019-06-18 | Shin Nippon Biomedical Laboratories, Ltd. | Chiral nucleic acid adjuvant having anti-allergic activity, and anti-allergic agent |
JPWO2015108047A1 (ja) | 2014-01-15 | 2017-03-23 | 株式会社新日本科学 | 免疫誘導活性を有するキラル核酸アジュバンド及び免疫誘導活性剤 |
SG10201912897UA (en) | 2014-01-16 | 2020-02-27 | Wave Life Sciences Ltd | Chiral design |
KR101726288B1 (ko) | 2014-07-21 | 2017-04-12 | 한국생명공학연구원 | 페닐아세틸 호모세린 락톤 유도체의 생산 방법 |
KR101677328B1 (ko) | 2014-08-12 | 2016-11-18 | 씨제이제일제당 (주) | O-포스포세린 생산 미생물 및 이를 이용한 o-포스포세린 또는 l-시스테인 생산 방법 |
KR101735935B1 (ko) | 2015-07-20 | 2017-05-16 | 씨제이제일제당 (주) | 퓨트레신 또는 오르니틴 생산 미생물 및 이를 이용한 퓨트레신 또는 오르니틴 생산방법 |
KR101694632B1 (ko) | 2015-09-11 | 2017-01-10 | 씨제이제일제당 (주) | 신규 o-포스포세린 배출 단백질 변이체 및 이를 이용한 o-포스포세린, 시스테인 및 이의 유도체의 생산방법 |
KR101756338B1 (ko) * | 2016-01-15 | 2017-07-10 | 고려대학교 산학협력단 | L-시스테인 생산용 변이미생물 및 이를 이용한 l-시스테인의 제조방법 |
JPWO2018056305A1 (ja) * | 2016-09-21 | 2019-07-04 | 国立大学法人大阪大学 | L−システインの製造方法 |
CN106591209A (zh) * | 2016-12-29 | 2017-04-26 | 廊坊梅花生物技术开发有限公司 | 重组菌株及其制备方法和生产l‑苏氨酸的方法 |
KR101825310B1 (ko) * | 2016-12-29 | 2018-03-15 | 씨제이제일제당 (주) | O-포스포세린을 생산하는 에스케리키아 속 미생물 및 이를 이용한 o-포스포세린 또는 l-시스테인을 생산하는 방법 |
KR102025867B1 (ko) * | 2017-07-13 | 2019-09-27 | 씨제이제일제당 주식회사 | 인산을 발효액 또는 발효 폐액으로부터 회수 및 재사용하는 방법 |
KR20190092950A (ko) | 2018-01-31 | 2019-08-08 | 씨제이제일제당 (주) | 연속식 크로마토그래피 공정을 이용한 천연 l-시스테인 염산염 수화물 결정의 제조 방법 |
KR20190092951A (ko) | 2018-01-31 | 2019-08-08 | 씨제이제일제당 (주) | 연속식 크로마토그래피 공정을 이용한 천연 l-시스테인 결정의 제조 방법 |
CN113728105B (zh) * | 2018-12-26 | 2024-05-28 | 大象株式会社 | 生产l-氨基酸的大肠杆菌突变株或谷氨酸棒状杆菌突变株及利用其的l-氨基酸的生产方法 |
KR102221040B1 (ko) * | 2019-05-09 | 2021-03-03 | 씨제이제일제당 주식회사 | L-아미노산을 생산하는 미생물 및 이를 이용한 l-아미노산을 생산하는 방법 |
EP4053147A4 (en) | 2020-06-09 | 2023-01-25 | CJ Cheiljedang Corporation | O-PHOSPHOSERIN EXPORT PROTEIN VARIANT AND PROCESS FOR THE PREPARATION OF O-PHOSPHOSERIN, CYSTEINE AND A DERIVATIVE THEREOF USING SAME |
KR102414743B1 (ko) | 2020-09-09 | 2022-06-29 | 씨제이제일제당 주식회사 | 신규 o-포스포세린 배출 단백질 및 이를 이용한 o-포스포세린, 시스테인 및 이의 유도체의 생산 방법 |
KR20220163754A (ko) | 2021-06-03 | 2022-12-12 | 씨제이제일제당 (주) | 신규한 YhhS 변이체 및 이를 이용한 O-포스포세린, 시스테인 및 이의 유도체의 생산방법 |
KR20220166947A (ko) | 2021-06-11 | 2022-12-20 | 씨제이제일제당 (주) | 신규한 MdtH 변이체 및 이를 이용한 O-포스포세린, 시스테인 및 이의 유도체의 생산방법 |
KR102654301B1 (ko) * | 2021-06-23 | 2024-04-04 | 씨제이제일제당 주식회사 | NADH:quinone 산화환원효소의 발현이 조절된 재조합 미생물 및 이를 이용한 O-포스포세린, 시스테인 및 이의 유도체의 생산방법 |
KR102688937B1 (ko) * | 2021-12-31 | 2024-07-29 | 씨제이제일제당 주식회사 | O-포스포세린 생산 미생물 및 이를 이용한 o-포스포세린 또는 l-시스테인 생산 방법 |
CN114381417B (zh) * | 2022-03-24 | 2022-06-24 | 中国科学院天津工业生物技术研究所 | 一种提高谷氨酸棒杆菌对抑制物耐受性的方法 |
CN116926102A (zh) * | 2023-07-19 | 2023-10-24 | 天津大学 | 抑制谷氨酸棒杆菌中全局转录调控因子基因glxR的表达生产5-ALA的方法 |
CN117551799B (zh) * | 2024-01-11 | 2024-03-19 | 广东海洋大学 | 用于鰤鱼诺卡氏菌菌株分型的引物组合、多重pcr鉴定方法及应用 |
Family Cites Families (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE19726083A1 (de) | 1997-06-19 | 1998-12-24 | Consortium Elektrochem Ind | Mikroorganismen und Verfahren zur fermentativen Herstellung von L-Cystein, L-Cystin, N-Acetyl-Serin oder Thiazolidinderivaten |
JP3997631B2 (ja) * | 1998-01-12 | 2007-10-24 | 味の素株式会社 | 発酵法によるl−セリンの製造法 |
US6395528B1 (en) * | 2000-01-27 | 2002-05-28 | Ajinomoto Co., Inc. | Phosphoserine phosphatase gene of coryneform bacteria |
DE10044831A1 (de) * | 2000-03-01 | 2002-04-04 | Forschungszentrum Juelich Gmbh | Verbessertes Verfahren zur mikrobiellen Herstellung von L-Serin sowie ein dazu geeigneter genetisch veränderter Mikroorganismus |
US6579705B2 (en) | 2001-04-04 | 2003-06-17 | Consortium Fur Elektrochemische Industrie Gmbh | Process for preparing non-proteinogenic L-amino acids |
RU2275425C2 (ru) * | 2003-11-03 | 2006-04-27 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) | Бактерия, принадлежащая к роду escherichia, - продуцент l-цистеина и способ получения l-цистеина |
DE102004035052A1 (de) * | 2004-07-20 | 2006-02-16 | Basf Ag | Mikroorganismen zur Herstellung von schwefelhaltigen Verbindungen |
KR100620092B1 (ko) | 2004-12-16 | 2006-09-08 | 씨제이 주식회사 | 코리네박테리움 속 세포로부터 유래된 신규한 프로모터서열, 그를 포함하는 발현 카세트 및 벡터, 상기 벡터를포함하는 숙주 세포 및 그를 이용하여 유전자를 발현하는방법 |
BRPI0607939A2 (pt) * | 2005-02-07 | 2010-11-30 | Metabolic Explorer Sa | microorganismo, e, método para a preparação fermentativa de um aminoácido |
JP2006304673A (ja) * | 2005-04-28 | 2006-11-09 | National Institute Of Advanced Industrial & Technology | システイン合成酵素のホスホセリンに対する基質特異性を高める方法 |
AU2006261356A1 (en) * | 2005-06-17 | 2006-12-28 | Microbia, Inc. | Improved amino acid and metabolite biosynthesis |
UA96928C2 (ru) * | 2005-10-26 | 2011-12-26 | Э.И. Дю Пон Де Немур Энд Компани | Ферментативное продуцирование спиртов с четырьмя атомами углерода |
KR100905381B1 (ko) * | 2006-07-28 | 2009-06-30 | 씨제이제일제당 (주) | L-메치오닌 전구체 생산 균주 및 상기 l-메치오닌전구체로부터의 l-메치오닌 및 유기산의 생산방법 |
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