JP5770640B2 - ブタの直接給餌微生物における乳酸菌およびその使用 - Google Patents
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Description
本出願は、米国特許法の119(e)条のもと、2009年1月12日出願の米国仮特許出願第61/143,990号の優先権を主張し、その全体が本明細書中で参考として援用される。
本明細書において、括弧内に第1著者の姓および出版年によって示されている参考文献の完全な文献引用は、特許請求の範囲の直前にある文献目録セクションに見出すことができる。
本発明は、農業に役立つ生物学的方法および製品に関する。より特定的だが排他的ではなく、本発明は乳酸菌、ブタなどの動物に乳酸菌を投与する方法、および乳酸菌を作る方法に関する。
本発明の好ましい実施形態では、例えば以下が提供される:
(項目1)
乳酸菌の16S rRNA遺伝子コード領域の一部分を含むDNA配列であって、前記DNA配列の5’末端は5’AGAGTTTGATYMTGGCTCAG3’の配列を含み、前記DNA配列の3’末端はBfaI、HaeIIIおよびMspIのうちの1つに対する制限酵素認識部位を含み、
前記制限酵素認識部位がBfaIであるとき、前記DNA配列の長さは約99塩基対から約103塩基対、約268塩基対から約273塩基対、約260塩基対から約265塩基対、約279塩基対から約284塩基対、約278塩基対から約282塩基対、または約273塩基対から約277塩基対であり、
前記制限酵素認識部位がHaeIIIであるとき、前記DNA配列の長さは約329塩基対から約334塩基対、約352塩基対から約357塩基対、約277塩基対から約282塩基対、または約335塩基対から約339塩基対であり、
前記制限酵素認識部位がMspIであるとき、前記DNA配列の長さは約188塩基対から約192塩基対である、DNA配列。
(項目2)
直接給餌微生物として用いられ得る1つまたは複数の株を同定する方法であって、前記方法は、
動物の胃腸管からの細菌からDNAを単離する工程と、
前記DNAを増幅する工程と、
前記増幅されたDNAをT−RFLPによって分析してTRFデータを生成する工程と、
前記TRFデータを目的の特徴と相関させる工程と、
前記相関から目的の株を同定する工程と、
前記株中の前記TRFの存在を確認する工程と
を含む、方法。
(項目3)
項目2に記載の方法によって同定された株。
(項目4)
前記株は潜在的プロバイオティクである、項目3に記載の株。
(項目5)
前記株は潜在的病原体である、項目3に記載の株。
(項目6)
項目3に記載の少なくとも1つの株の有効量を動物に投与する工程を含む、方法。
(項目7)
単離されたPediococcus acidilactici株PlJ e3(NRRL B−50101)。
(項目8)
項目7に記載の株と、
単離されたLactobacillus salivarius株o246e 33w(NRRL B−50102)と
を含む、組み合わせ。
(項目9)
単離されたLactobacillus acidophilus株PlB c6(NRRL B−50103)をさらに含む、項目8に記載の組み合わせ。
(項目10)
Lactobacillus acidophilus株PlB c6(NRRL B−50103)、Lactobacillus salivarius株o246e 33w(NRRL B−50102)、Pediococcus acidilactici株o246e 42(NRRL B−50171)、およびPediococcus acidilactici株PlJ e3(NRRL B−50101)の少なくとも1つから選択された、単離株。
(項目11)
項目10に記載の株の1つのすべての判明している特徴を有する、単離株。
(項目12)
キャリアをさらに含む、項目10に記載の株。
(項目13)
Lactobacillus acidophilus株PlB c6(NRRL B−50103)、Lactobacillus salivarius株o246e 33w(NRRL B−50102)、Pediococcus acidilactici株o246e 42(NRRL B−50171)、およびPediococcus acidilactici株PlJ e3(NRRL B−50101)から選択される少なくとも1つの株の有効量を動物に投与する工程を含む、方法。
(項目14)
前記株はPediococcus acidilactici株PlJ e3(NRRL B−50101)である、項目13に記載の方法。
(項目15)
前記株はPediococcus acidilactici株PlJ e3(NRRL B−50101)およびLactobacillus salivarius株o246e 33w(NRRL B−50102)である、項目13に記載の方法。
(項目16)
前記株はPediococcus acidilactici株PlJ e3(NRRL B−50101)、Lactobacillus salivarius株o246e 33w(NRRL B−50102)、およびLactobacillus acidophilus株PlB c6(NRRL B−50103)である、項目13に記載の方法。
(項目17)
前記動物はブタである、項目13に記載の方法。
(項目18)
約1×10 8 合計cfu/ブタ/日から約5×10 10 合計cfu/ブタ/日の前記株または前記複数の株が前記ブタに投与される、項目17に記載の方法。
(項目19)
前記動物は雌ブタである、項目13に記載の方法。
(項目20)
前記雌ブタは授乳中の雌ブタである、項目19に記載の方法。
(項目21)
前記株はPediococcus acidilactici株PlJ e3(NRRL B−50101)、Lactobacillus salivarius株o246e 33w(NRRL B−50102)、およびLactobacillus acidophilus株PlB c6(NRRL B−50103)であり、
前記雌ブタから生まれた(borne to)子ブタにおける体重および1日平均増体量を、前記株を投与されていない雌ブタから生まれた子ブタにおけるそれよりも改善させる工程をさらに含む、項目19に記載の方法。
(項目22)
前記株はPediococcus acidilactici株PlJ e3(NRRL B−50101)、Lactobacillus salivarius株o246e 33w(NRRL B−50102)、およびLactobacillus acidophilus株PlB c6(NRRL B−50103)であり、
前記雌ブタから生まれた同腹仔内の子ブタ体重の変動の増加を、前記株を投与されていない雌ブタから生まれた子ブタにおけるそれよりもよく防ぐ工程をさらに含む、項目19に記載の方法。
(項目23)
前記株はPediococcus acidilactici株PlJ e3(NRRL B−50101)であり、
前記雌ブタから生まれた同腹仔内の子ブタ体重の変動の増加を、前記株を投与されていない雌ブタから生まれた子ブタにおけるそれよりもよく防ぐ工程をさらに含む、項目19に記載の方法。
(項目24)
前記株はPediococcus acidilactici株PlJ e3(NRRL B−50101)であり、
前記雌ブタから生まれた同腹仔内の子ブタ体重の変動を、前記株を投与されていない雌ブタから生まれた子ブタにおけるそれよりも減少させる工程をさらに含む、項目19に記載の方法。
(項目25)
前記動物は生産の哺育フェーズにあるブタであり、前記株はPediococcus acidilactici株o246e 42(NRRL B−50171)である、項目13に記載の方法。
(項目26)
前記株によって前記動物の免疫系を調節する工程をさらに含む、項目13に記載の方法。
(項目27)
直接給餌微生物を調製する方法であって、前記方法は、
(a)液体栄養ブロス中で、Lactobacillus acidophilus株PlB c6(NRRL B−50103)、Lactobacillus salivarius株o246e 33w(NRRL B−50102)、Pediococcus acidilactici株o246e 42(NRRL B−50171)、およびPediococcus acidilactici株PlJ e3(NRRL B−50101)から選択される少なくとも1つの株を生育させる工程と、
(b)前記液体栄養ブロスから前記株を分離して前記直接給餌微生物を形成する工程と
を含む、方法。
(項目28)
前記株はPediococcus acidilactici株PlJ e3 B−50101である、項目27に記載の方法。
本明細書に記載されるのは、目的の株を同定するために有用なTRFである。それらのTRFは、乳酸菌の16S rRNA遺伝子コード領域の部分を含むDNA配列を含むがそれに限定されない。そのDNA配列の5’末端は5’AGAGTTTGATYMTGGCTCAG3’の配列を含み、3’末端はBfaI、HaeIIIおよびMspIのうちの1つに対する制限酵素認識部位を含む。制限酵素認識部位がBfaIであるとき、このDNA配列の長さは約99塩基対から約103塩基対、約268塩基対から約273塩基対、約260塩基対から約265塩基対、約279塩基対から約284塩基対、約278塩基対から約282塩基対、または約273塩基対から約277塩基対である。制限酵素認識部位がHaeIIIであるとき、このDNA配列の長さは約329塩基対から約334塩基対、約352塩基対から約357塩基対、約277塩基対から約282塩基対、または約335塩基対から約339塩基対である。制限酵素認識部位がMspIであるとき、このDNA配列の長さは約188塩基対から約192塩基対である。
末端制限断片(TRF)を用いて同定された乳酸菌の株:Lactobacillus acidophilus PlB c6、L.salivarius o246e 33w、Pediococcus acidilactici o246e 42、およびP.acidilactici PlJ e3も本明細書に記載される。これらの株は、Agricultural Research Service Culture Collection(NRRL),1815 North University Street,Peoria,Illinois,61604に以下のとおりに寄託された。Lactobacillus acidophilus PlB c6は2008年1月18日に寄託されて受入番号NRRL B−50103を受け、L.salivarius o246e 33wは2008年1月18日に寄託されて受入番号NRRL B−50102を受け、Pediococcus acidilactici o246e 42は2008年8月29日に寄託されて受入番号NRRL B−50171を受け、P.acidilactici PlJ e3は2008年1月18日に寄託されて受入番号NRRL B−50101を受けた。本明細書に記載されるTRFによって同定された付加的な株も本発明の範囲内である。
直接給餌微生物(DFM)は、この開示においては「プロバイオティク」と相互交換可能に用いられ、これは上に挙げられる乳酸菌の1つまたは複数の株を含む。DFMに1つまたは複数のキャリアまたはその他の成分が加えられてもよい。DFMは、たとえばトップドレス(top dress)、液体水薬として用いられるかもしくはミルク代替品に加えられる水溶性濃縮物、ゼラチンカプセル、またはゲルなど、さまざまな物理的形状で提供されてもよい。トップドレス形状の実施形態の1つにおいては、凍結乾燥した乳酸菌発酵産物を、たとえば乳清、マルトデキストリン、スクロース、ブドウ糖、石灰石(炭酸カルシウム)、米外皮、酵母培養物、乾燥デンプン、およびケイアルミン酸ナトリウムなどのキャリアに加える。液体水薬またはミルク代替品補給のための水溶性濃縮物の実施形態の1つにおいては、凍結乾燥した乳酸菌発酵産物を、たとえば乳清、マルトデキストリン、スクロース、ブドウ糖、乾燥デンプン、ケイアルミン酸ナトリウムなどの水溶性キャリアに加え、液体を加えて水薬を形成するか、またはこの補給品をミルクもしくはミルク代替品に加える。ゼラチンカプセル形状の実施形態の1つにおいては、凍結乾燥した乳酸菌発酵産物を、たとえば乳清、マルトデキストリン、糖、石灰石(炭酸カルシウム)、米外皮、酵母培養物、乾燥デンプン、および/またはケイアルミン酸ナトリウムなどのキャリアに加える。実施形態の1つにおいては、乳酸菌およびキャリアを分解性のゼラチンカプセルに封入する。ゲル形状の実施形態の1つにおいては、凍結乾燥した乳酸発酵産物を、たとえば植物油、スクロース、二酸化ケイ素、ポリソルベート80、プロピレングリコール、ブチルヒドロキシアニソール、クエン酸、エトキシキン、および人工着色剤などのキャリアに加えてゲルを形成する。
従来の離乳対分離早期離乳の成長成績モデル:
敷地外の分離早期離乳管理条件で飼育したブタと、雌親による出産および飼育が行なわれたのと同じ農場の場所で従来通りに飼育されたブタとの比較を用いて、成長成績における分離を与えるためのモデルを確立した。11組の同腹仔からの88匹の交雑した去勢ブタおよび未経産雌ブタを19日齢で離乳させた。44匹のブタの一方のグループを雌ブタの群から12km離れた分離哺育室に移し、残りのブタは離乳前の場所に位置する哺育施設に移した。各施設において、ブタを16個の囲いの中に割当て、離乳後のday11、18および25に体重および飼料消失を測定して、1日平均増体量(average daily gain:ADG)、1日平均飼料摂取(average daily feed intake:ADFI)、および増体量:飼料を定めた。離乳後のday1、3、11および25にサンプリングのために各施設から4匹のブタを選択して、細胞単離のために大静脈穿刺によって血液サンプルを得てから、ブタを人道的に安楽死させて、微生物分析および免疫細胞単離のための胃腸管組織を得た。下の表1は、従来通り飼育されたブタに比べて、分離早期離乳管理系で飼育されたブタに対して観察された1日平均増体量および1日平均飼料摂取応答が改善したこと(P<0.10)、ならびに研究の終わり(離乳後25日)に分離早期離乳されたブタに対して観察されたブタ体重がより重かったこと(P<0.01)を示す。
屋外対従来の飼育の成長成績モデル:
若いブタの成長成績のより強固な分離を提供するために第2のモデルを確立し、ここでブタは従来の閉じられた分娩施設で飼育されるか、または屋外管理系で出産された。この実験のために各施設で144匹のブタを識別した。従来通り飼育されたブタはインディアナ州に位置し、一方で屋外飼育されたブタはコロラド州に位置した。どちらの施設のブタも類似の遺伝的背景を有した(PIC C−22×PIC280)。6日齢および14日齢ならびに離乳の24時間前(18日齢)の各時間間隔で、各施設すなわち屋外および屋内から6匹のブタをランダムに選択して屠殺し、離乳前の期間の胃腸微生物集団および免疫細胞発生を測定した。各施設からの126匹のブタを19日齢で離乳させて、アーカンソー州に位置する敷地外哺育施設に移動させた。到着すると、各グループからのブタを同じ施設内の別々の部屋に入れて、2グループ間のミクロフローラへの露出を防ぐためにこれらのグループを分離し続けながら、離乳後の期間における成長成績をモニタした。フェーズ1(離乳後のday0から11)、フェーズ2(離乳後のday11から25)、およびフェーズ3(離乳後のday25から39)として定義される各食餌フェーズの終わりに、ブタの体重および飼料消失を定めた。離乳後のday1、3、7、10および24にサンプリングのために各グループから6匹のブタを選択して、細胞単離のために大静脈穿刺によって血液サンプルを得てから、ブタを人道的に安楽死させて、微生物分析および免疫細胞単離のための胃腸管組織を得た。従来の雌ブタ施設で出産されたブタは、屋外施設で飼育されたブタに比べて、離乳時の初期体重が数値的に大きかった(5.18対5.74±0.28;P=0.16)。しかしながら、予め屋外で飼育されたブタは、従来の閉じられた施設で出産されたブタよりも各フェーズの終わりにおける1日平均増体量、1日平均飼料摂取、および体重が大きかった(P<0.01)(下の表2を参照)。
免疫測定およびフローサイトメトリ分析:
血液および胃腸サンプルから免疫細胞を単離し、実施例1および2の両方の成長成績モデルから以下を含む免疫測定値の組を得た:白血球百分率;末梢血単核球増殖およびサイトカイン増殖;胃腸の形態、杯状細胞計数、および空腸組織からの免疫組織化学;ならびに末梢血および空腸組織から単離した細胞に対するフローサイトメトリ分析。細胞単離法および実験手順は過去に科学文献に発表されている(Davis et al.,2004;Brown et al.,2006a;Brown et al.,2006b)。免疫組織化学およびフローサイトメトリ分析に対する免疫細胞サブセットを定めるために用いられた抗体パネルを下の表3に示す。
胃腸細菌の単離および同定:
組織処理。細菌細胞単離のために、食道部、十二指腸、空腸および回腸を含む胃腸部分を回収した。25mLの滅菌洗浄緩衝液(0.3mM KH2PO4、1mM MgSO4、および0.05%システイン塩酸塩、pH7.0)で2回洗浄することによって、各腸部分から管腔材料を取除いた。滅菌鉗子で管部分を横方向に切断し、25mLの滅菌0.1%ペプトン希釈緩衝液によって、あらゆる残りの管腔材料を再び取除いた。腸部分を99mLの滅菌ペプトン希釈緩衝液とともに滅菌whirl−pakバッグに入れ、ストマッカー(stomacher)中で30秒間粉砕して、コロニー形成または粘液に結合している細菌を放出させた。粉砕後の溶液を、腸部分は除いて滅菌250mL遠心管に注ぎ入れた。この細菌細胞含有溶液に対して、13,170×gにて10分間の遠心分離を行なった。その後上清を捨てて、ペレットに10mLの滅菌MRS+10%グリセロールブロスを加え、再懸濁してその後のDNA単離まで−20℃で凍結した。
胃腸細菌の成長成績および免疫特徴に対する相関性:
実施例1および2の両方において同定された細菌集団を、各試験からの成長成績因子および免疫特徴測定値と別々に相関させた。両方の分析に対する方法を説明する:OTUをExcelにエクスポートし、2進文字(0、1)として有/無に変換するか、または定量的な形のままでlog10変換して正規分布を提供した。実験単位として囲いを用いて、各ブタの成績データ(ADG、ADFI、ブタ体重および飼料効率)に対して各データ組をプロットおよび回帰した。各個別のブタから取られた免疫データ結果をlog10変換して、各時点の各個別動物のT−RFLPデータに対して回帰した。これらのデータは2つの基本的なやり方で分析された。第1に、Canoco Software Package(v4.5−Biometris,Wageningen,Netherlands)を用いて、グラフィカルプロットを伴う分類法を適用することで、共同体または集団OTU全体と研究パラメータ(腸部分、成績、免疫因子または管理実行)のそれとの関係を理解した。第2に、個別のOTUを各個別の変数またはパラメータに対して回帰して、直接の単変量関係を定めた。制約付き順序法(Constrained ordinal methods)を適用して、支配変数の存在下でのOTU集団対変数の関係の決定を可能にした。
成長成績との相関に基づくプロバイオティク細菌の同定:
成績基準、特に1日平均増体量、ブタ体重、および1日平均飼料摂取に対するTRFの有意な相関に基づいて、潜在的プロバイオティクスとしての細菌を選択した。実施例1に記載した従来離乳対分離早期離乳管理モデルにおいて、L.acidophilusに関連するTRFは、哺育の初期部分(フェーズ1)における1日平均増体量、哺育期間の3つのフェーズすべてにおけるブタ体重、ならびに初期および後期哺育期間における1日平均飼料摂取に対して最もよく正の相関を示した(P<0.05)(下の表5を参照)。
免疫特徴との相関に基づくプロバイオティク細菌の同定:
ブタの体循環(末梢血)および胃腸管内の免疫集団に特定のTRFを関連付けて相関関係を作り、プロバイオティク細菌の投与が若いブタにおけるこれらの組織の免疫特徴にどのように影響するかを予測できるようにしてもよい。両方の成長モデルからの、特定のTRFに対する正および負の関連を有する免疫集団を下の表10および表11に列挙している。一般的に、潜在的プロバイオティク細菌に関連するTRFは、末梢血および胃腸管における活性化、記憶およびガンマデルタT細胞サブセットに対して正の相関を示した(P≦0.05)。
RAPD PCR分析によるプロバイオティク細菌の株同定:
目的のTRFに対する高いピーク高さをもたらした腸サンプルを、乳酸生成細菌に対して選択的にプレーティングした。コロニーを拾ってブロスに入れ、24時間生育させた時点で、細胞培養液からDNAを単離した。5’−テトラクロロフルオレセイン標識8Fドメインプライマー(5’AGAGTTTGATYMTGGCTCAG3’)および1406Rユニバーサルプライマー(5’ACGGGCGGTGTGTRC3’)のRAPD PCRフィンガープリントを比較することによって、単離体の類似性を評価した。単離体に対して、BfaI、HaeIIIおよびMspIを用いたTRFLPも行なうことによって、それらの単離体が目的のTRFを有することを確認した。目的のTRFは、成績の増加に関連した表5、6、7、および8中のTRFすべてであった。敷地内/敷地外試験および屋内/屋外試験からの、表5および表6におけるTRFのサイズがわずかに異なるのは、Bionumericsソフトウェアにおいて用いた位置許容度および最適化の設定のためであるが、株選択プロセスにおいてはこれらを同じとみなした。表12は、上記のわずかな差を説明するために、TRFの長さおよびTRFの長さプラスマイナス2塩基対によって目的のTRFを示している。1つの乳酸菌株からのTRF配列を別の乳酸菌株からのTRF配列と比べるとき、もしそれらの株が同じTRFを有していれば約90%の配列同一性があるものと発明者らは考えている。
離乳前および離乳後の期間における補給の利益を定めるための、プロバイオティク株の動物テスト:
上に挙げた各種からの1つの株を選択して、これら特定の細菌の存在と若いブタにおける成長成績の改善との関連を検証するための最初の動物テストに供した。Lactobacillus acidophilus PlB c6、Lactobacillus salivarius o246e 33w、およびPediococcus acidilactici PlJ e3を含む3つのプロバイオティク株を選択して、選択されたプロバイオティク株が離乳前および離乳後の生産期間における若いブタの成長成績を改善することの有効性を定めるためのテストに供した。3つの潜在的プロバイオティク株であるLactobacillus acidophilus PlB c6、Lactobacillus salivarius o246e 33w、およびPediococcus acidilactici PlJ e3を、雌ブタの食餌に組み合わせて含ませ、離乳後の子ブタの食餌に個別に含ませた。雌ブタを、処置当り4匹の雌ブタの8つの処置グループに分けて、同腹仔を8つの処置のうちの1つにランダムに割当てて、離乳前および離乳後にプロバイオティク生物を投与する影響、ならびに哺育期間に組み合わせまたは個別で投与する影響を定めた(下の表13を参照)。雌ブタ(離乳前)にはトップドレスした(topdressed);子ブタ(離乳後)に対しては、完全な食料の部分として食餌にDFMを混合した。8つのプロバイオティク処置を処方して、合計cfuが1つの生物に由来するものか3つの選択生物の組み合わせに由来するものかにかかわらず、雌ブタまたはブタに1×109合計cfu/ブタ/日を送達し、複数の生物を用いるときは各生物が(CFUに基づいて)等量含まれるようにした。
授乳の際に雌ブタに3つのプロバイオティク株の組み合わせを補給することによる有益な応答を確認しさらに定めるための動物テスト:
授乳期間に雌ブタにLactobacillus acidophilus PlB c6、Lactobacillus salivarius o246e 33w、およびPediococcus acidilactici PlJ e3の3株のプロバイオティクの組み合わせを給餌することによる有益な応答を、処置当り20個の囲いによる以下の処置配置において、P.acidilactici PlJ e3およびL.salivarius o246e 33wの組み合わせならびにP.acidilactici PlJ e3単独をもテストすることによってこれらの株をさらに評価する第2の研究において確認した:(1)対照食餌、(2)Pediococcus acidilactici PlJ e3、Lactobacillus salivarius o246e 33w、およびLactobacillus acidophilus PlB c6の各々を3.34×108cfu/ブタ/日ずつ含む、合計計数1×109合計cfu/ブタ/日の3種すべての直接給餌微生物株を補給した対照食餌、(3)Pediococcus acidilactici PlJ e3およびLactobacillus salivarius o246e 33wの各々を5.0×108ずつ含む、合計計数1×109の2種の直接給餌微生物株を補給した対照食餌、ならびに(4)1×109のPediococcus acidilactici PlJ e3のみを補給した対照食餌。すべての処置を雌ブタに対してトップドレスした。
生産の哺育フェーズにおける補給の利益を定めるための、プロバイオティク株の動物テスト:
合計480匹のブタを離乳させ、初期体重に基づいてブロックし、合計120個の囲いに4匹のブタ/囲いで収容した。哺育期間の最初の2週間の間、子ブタに6つの食餌処置を投与した(20の囲い/処置)。食餌処置は以下のとおりであった。1)哺育フェーズの最初の2週間、離乳したブタに対照食餌を投与;2)対照食餌に、直接給餌微生物候補生物であるLactobacillus acidophilus,PlB c6を1×109cfu/ブタ/日にて補い、哺育食餌中に2週間投与;3)対照食餌に、直接給餌微生物候補生物であるLactobacillus salivarius,o246e 8を1×109cfu/ブタ/日にて補い、哺育食餌中に2週間投与;4)対照食餌に、直接給餌微生物候補生物であるLactobacillus salivarius,Pl2 i4を1×109cfu/ブタ/日にて補い、哺育食餌中に2週間投与;5)対照食餌に、直接給餌微生物候補生物であるLactobacillus salivarius,o246e 33wを1×109cfu/ブタ/日にて補い、哺育食餌中に2週間投与;6)対照食餌に、直接給餌微生物候補生物であるPediococcus acidilactici,o246e 42を1×109cfu/ブタ/日にて補い、哺育食餌中に2週間投与。
潜在的病原性細菌に対する負の相関に基づくプロバイオティク細菌の同定:
選択されたプロバイオティク株を表す胃腸管内の特定のTRFの存在を、病原体を定めるTRFの存在と関連付けて相関関係を作り、プロバイオティク細菌の投与が若いブタにおけるこれらの組織における病原性生物の存在にどのように影響するかを予測できるようにしてもよい。L.acidophilus(表17)およびL.salivarius(表18)として定められたTRFの存在は、クロストリジウム、マイコバクテリウムおよびパスツレラ菌種として定められたいくつかの病原体を定めるTRFの存在に対して負の相関を示し(P<0.05)、これらのプロバイオティク細菌が胃腸管に存在するときにはこれらの病原体が存在する可能性が低いことを示した。
Claims (21)
- 受入番号NRRL B−50101として寄託された、単離されたPediococcus acidilactici株PlJ e3。
- 請求項1に記載の株と、
受入番号NRRL B−50102として寄託された、単離されたLactobacillus salivarius株o246e 33wと
を含む、組み合わせ。 - 受入番号NRRL B−50103として寄託された、単離されたLactobacillus acidophilus株PlB c6をさらに含む、請求項2に記載の組み合わせ。
- 受入番号NRRL B−50103として寄託されたLactobacillus acidophilus株PlB c6、受入番号NRRL B−50102として寄託されたLactobacillus salivarius株o246e 33w、受入番号NRRL B−50171として寄託されたPediococcus acidilactici株o246e 42、および、受入番号NRRL B−50101として寄託されたPediococcus acidilactici株PlJ e3の少なくとも1つから選択された、単離株。
- キャリアをさらに含む、請求項4に記載の株。
- 受入番号NRRL B−50103として寄託されたLactobacillus acidophilus株PlB c6、受入番号NRRL B−50102として寄託されたLactobacillus salivarius株o246e 33w、受入番号NRRL B−50171として寄託されたPediococcus acidilactici株o246e 42、および、受入番号NRRL B−50101として寄託されたPediococcus acidilactici株PlJ e3から選択される少なくとも1つの株の有効量を非ヒト動物に投与する工程を含む、方法。
- 前記株は、受入番号NRRL B−50101として寄託されたPediococcus acidilactici株PlJ e3である、請求項6に記載の方法。
- 前記株は、受入番号NRRL B−50101として寄託されたPediococcus acidilactici株PlJ e3、および、受入番号NRRL B−50102として寄託されたLactobacillus salivarius株o246e 33wである、請求項6に記載の方法。
- 前記株は、受入番号NRRL B−50101として寄託されたPediococcus acidilactici株PlJ e3、受入番号NRRL B−50102として寄託されたLactobacillus salivarius株o246e 33w、および、受入番号NRRL B−50103として寄託されたLactobacillus acidophilus株PlB c6である、請求項6に記載の方法。
- 前記動物はブタである、請求項6に記載の方法。
- 1×108合計cfu/ブタ/日から5×1010合計cfu/ブタ/日の前記株または前記複数の株が前記ブタに投与される、請求項10に記載の方法。
- 前記動物は雌ブタである、請求項6に記載の方法。
- 前記雌ブタは授乳中の雌ブタである、請求項12に記載の方法。
- 前記株は、受入番号NRRL B−50101として寄託されたPediococcus acidilactici株PlJ e3、受入番号NRRL B−50102として寄託されたLactobacillus salivarius株o246e 33w、および、受入番号NRRL B−50103として寄託されたLactobacillus acidophilus株PlB c6であり、
前記雌ブタから生まれた子ブタにおける体重および1日平均増体量を、前記株を投与されていない雌ブタから生まれた子ブタにおけるそれよりも改善させる工程をさらに含む、請求項12に記載の方法。 - 前記株は、受入番号NRRL B−50101として寄託されたPediococcus acidilactici株PlJ e3、受入番号NRRL B−50102として寄託されたLactobacillus salivarius株o246e 33w、および、受入番号NRRL B−50103として寄託されたLactobacillus acidophilus株PlB c6であり、
前記雌ブタから生まれた同腹仔内の子ブタ体重の変動範囲の増加を、前記株を投与されていない雌ブタから生まれた子ブタにおけるそれよりもよく防ぐ工程をさらに含む、請求項12に記載の方法。 - 前記株は、受入番号NRRL B−50101として寄託されたPediococcus acidilactici株PlJ e3であり、
前記雌ブタから生まれた同腹仔内の子ブタ体重の変動範囲の増加を、前記株を投与されていない雌ブタから生まれた子ブタにおけるそれよりもよく防ぐ工程をさらに含む、請求項12に記載の方法。 - 前記株は、受入番号NRRL B−50101として寄託されたPediococcus acidilactici株PlJ e3であり、
前記雌ブタから生まれた同腹仔内の子ブタ体重の変動範囲を、前記株を投与されていない雌ブタから生まれた子ブタにおけるそれよりも減少させる工程をさらに含む、請求項12に記載の方法。 - 前記動物は生産の哺育フェーズにあるブタであり、前記株は、受入番号NRRL B−50171として寄託されたPediococcus acidilactici株o246e 42である、請求項6に記載の方法。
- 前記株によって前記動物の免疫系を調節する工程をさらに含む、請求項6に記載の方法。
- 直接給餌微生物を調製する方法であって、前記方法は、
(a)液体栄養ブロス中で、受入番号NRRL B−50103として寄託されたLactobacillus acidophilus株PlB c6、受入番号NRRL B−50102として寄託されたLactobacillus salivarius株o246e 33w、受入番号NRRL B−50171として寄託されたPediococcus acidilactici株o246e 42、および、受入番号NRRL B−50101として寄託されたPediococcus acidilactici株PlJ e3から選択される少なくとも1つの株を生育させる工程と、
(b)前記液体栄養ブロスから前記株を分離して前記直接給餌微生物を形成する工程と
を含む、方法。 - 前記株は、受入番号B−50101として寄託されたPediococcus acidilactici株PlJ e3である、請求項20に記載の方法。
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