JP5769624B2 - ワクチン - Google Patents
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Description
本発明は、中間リンカーを用いて抗原に結合された粒子抗原送達系を含む、ワクチンおよび免疫原性組成物に関する。
免疫原性を高めた新たな組成物またはワクチンは常に必要とされている。1つの戦略として、任意の所与の抗原に対して免疫応答を惹起することを試み、それを高めるためにアジュバントが使用されてきた。
本発明者らは、粒子抗原送達系と抗原を含み、該抗原と粒子が中間リンカーを用いて結合されているワクチンまたは免疫原性組成物が、粒子と抗原が中間リンカーを用いて結合されていない組成物と比較して高められた免疫応答である免疫応答を誘導することを示した。特に本発明の免疫原性組成物は、高められたCD8+T細胞免疫応答を誘導する。
本明細書における用語「含む(comprising)」、「含む(comprise)」および「含む(comprises)」は、全ての例において、それぞれ、用語「からなる(consisting of)」、「からなる(consist of)」および「からなる(consists of)」と、場合により置換可能であることが本発明者らにより意図される。
粒子送達系は、当技術分野で周知であり(例えばSingh and O’Hagan 2002 Pharmaceutical Research 19(6): 715- 727参照)、水中油型エマルション、マイクロ粒子(O’Hagen & Singh 2003 Expert Rev. Vaccines 2(2): 269-283参照)、免疫刺激複合体(ISCOM)、プロテオソーム、油滴およびリポソームが挙げられる。本明細書で使用される用語「抗原送達粒子」は、粒子抗原送達系の単一粒子を指し、例えば、限定するものではないが、水中油型エマルションの油滴、単一マイクロ粒子またはナノ粒子、単一プロテオソーム、単一油滴、単一リポソーム、ミセル、プロテオソーム、または単一ISCOMが挙げられる。
本発明の特定の実施形態は、中間リンカーを用いて抗原と結合されたリポソーム製剤を含む免疫原性組成物に関する。
本発明の1つの実施形態において、中間リンカーを用いて結合された少なくとも1つの水中油型エマルション中の油滴と少なくとも1つの抗原を含む本発明の免疫原性組成物が提供される。
本発明のある実施形態において、中間リンカーを用いて結合された少なくとも1つのISCOMと少なくとも1つの抗原を含む本発明の免疫原性組成物が提供される。
本発明のある実施形態において、中間リンカーを用いて結合された少なくとも1つのマイクロ粒子と少なくとも1つの抗原を含む本発明の免疫原性組成物が提供される。
本発明のある実施形態において、中間リンカーを用いて結合された少なくとも1つのナノ粒子と少なくとも1つの抗原を含む本発明の免疫原性組成物が提供される。
本発明の他の実施形態において、中間リンカーを用いて少なくとも1つの抗原に結合された本明細書に記載の少なくとも1つの抗原送達粒子を含む組成物であって、当該中間リンカーが少なくとも1対の相補的オリゴヌクレオチドを含む上記組成物が提供される。
本発明の1つの実施形態は、中間リンカーを用いて抗原送達粒子が抗原に結合された免疫原性組成物に関する。特定の実施形態において、中間リンカーは、少なくとも1対の相補的オリゴヌクレオチドを含む。オリゴヌクレオチドは、当業者に公知の任意の方法により抗原および/またはリポソームに結合させることができる。
オリゴヌクレオチド-SH + 抗原-SH → オリゴヌクレオチド-S-S-抗原
代替的な実施形態において、スルフヒドリル基を含む抗原を、ビスマレイミド試薬(例えばBM[PEO]2もしくは3またはDTME)を用いて修飾し、スルフヒドリル(チオール)修飾されたオリゴヌクレオチドへのコンジュゲーションに適したマレイミド活性化抗原を生じさせることができる:
抗原-SH + ビスマレイミド試薬 → マレイミド活性化抗原 + オリゴヌクレオチド-SH
代替的な実施形態において、SBAP、NHS-BA、SIA、SIABおよびスルホ-SIABなどの試薬と反応させることにより、ハロアセチル抗原を得ることができる。その後、結果として得られたハロアセチル抗原を、チオール修飾されたオリゴヌクレオチドにコンジュゲートさせることができる:
オリゴヌクレオチド-SH + 抗原-Br → オリゴヌクレオチド-S-抗原 + HBr
リポソームは、当該リポソームのサイズおよび他の制約(例えば、リポソーム表面のオリゴヌクレオチドの立体障害)に応じて、1つ以上の、例えば1〜100,000個のオリゴヌクレオチドに結合され得る。オリゴヌクレオチドは、当業者に周知の化学的性質を用いてリポソームにコンジュゲートさせることができる。リポソームコンジュゲートおよび誘導体の調製はよく知られている(Bioconjugate techniques. G T. Hermanson: preparation of liposome conjugates and derivatives 528-569頁 (1996)を参照)。ホスファチジルエタノールアミン基を含むリポソームを、ヘテロ二官能性クロスリンカーを用いて活性化し、マレイミド、ヨードアセチルまたはピリジルジスルフィド基を付加することができる。
a. 第1のオリゴヌクレオチドを抗原にコンジュゲートさせるステップ;
b. ステップa)のオリゴヌクレオチドに相補的な第2のオリゴヌクレオチドを抗原送達粒子にコンジュゲートさせるステップ;
c. オリゴヌクレオチドのハイブリダイゼーションを可能とする条件下で、該抗原と抗原送達粒子とを混合するステップ
を含んでなる、上記方法を提供する。
a. 好適な試薬を用いて抗原上の任意の遊離スルフヒドリル基を遮断するステップ;
b. 該抗原にマレイミド基を付加するステップ;
c. 第1のチオール活性化オリゴヌクレオチドを該抗原にコンジュゲートさせるステップ;
d. ステップc)のオリゴヌクレオチドに相補的な第2のチオールオリゴヌクレオチドを、マレイミド活性化リン脂質を含むリポソームにコンジュゲートさせるステップ;
e. 該オリゴヌクレオチドのハイブリダイゼーションを可能とする条件下で、抗原とリポソームとを混合するステップ
を含んでなる、上記方法が提供される。
a. 好適な試薬を用いて抗原上の任意の遊離スルフヒドリル基を遮断するステップ;
b. 該抗原にマレイミド基を付加するステップ;
c. 第1のチオール活性化オリゴヌクレオチドを該抗原にコンジュゲートさせるステップ;
d. ステップc)のオリゴヌクレオチドに相補的な第2のチオールオリゴヌクレオチドを、マレイミド活性化リン脂質を含むISCOMにコンジュゲートさせるステップ;
e. 該オリゴヌクレオチドのハイブリダイゼーションを可能とする条件下で、抗原とISCOMとを混合するステップ
を含んでなる、上記方法が提供される。
a. 好適な試薬を用いて抗原上の任意の遊離スルフヒドリル基を遮断するステップ;
b. 該抗原にマレイミド基を付加するステップ;
c. 第1のチオール活性化オリゴヌクレオチドを該抗原にコンジュゲートさせるステップ;
d. ステップc)のオリゴヌクレオチドに相補的な第2のチオールオリゴヌクレオチドを、マレイミド活性化リン脂質を含む油滴にコンジュゲートさせるステップ;
e. 該オリゴヌクレオチドのハイブリダイゼーションを可能とする条件下で、抗原と油滴とを混合するステップ
を含んでなる、上記方法が提供される。
a. 好適な試薬を用いて抗原上の任意の遊離スルフヒドリル基を遮断するステップ;
b. 該抗原にマレイミド基を付加するステップ;
c. 第1のチオール活性化オリゴヌクレオチドを該抗原にコンジュゲートさせるステップ;
d. ステップc)のオリゴヌクレオチドに相補的な第2のチオールオリゴヌクレオチドを、マレイミド活性化リン脂質を含むマイクロ粒子および/またはナノ粒子にコンジュゲートさせるステップ;
e. 該オリゴヌクレオチドのハイブリダイゼーションを可能とする条件下で、抗原とマイクロ粒子および/またはナノ粒子とを混合するステップ
を含んでなる、上記方法が提供される。
本発明のワクチンまたは免疫原性組成物は、ヒトまたは動物の病原体および/またはヒトまたは動物における病変形成を引き起こす物質に対する免疫応答を誘発し得る抗原を含む。本発明の他の実施形態において、本発明のワクチンまたは免疫原性組成物は、ヒトまたは動物における腫瘍および/もしくは腫瘍抗原または新生物に対する免疫応答を誘発し得る抗原を含む。
本発明の利点は、オリゴヌクレオチドに結合した抗原を、その後、相補的オリゴヌクレオチドに結合した抗原送達粒子に簡単に結合することができる点である。本発明の範囲内には、相補的リンカー成分に結合した抗原送達粒子および抗原を含むキットがある。特定の実施形態において、相補的オリゴヌクレオチドに結合した抗原送達粒子および抗原を含むキットが提供される。本発明のキット中の、相補的オリゴヌクレオチドにコンジュゲートした抗原送達粒子および抗原は、互いにハイブリダイズしていてもよいし、または別々であってもよい(このため宿主への投与前にハイブリダイゼーションを必要とする)。
本発明の他の実施形態において、少なくとも1つの免疫刺激剤または免疫刺激剤の組み合わせをさらに含む、本明細書に実質的に記載されるワクチンまたは免疫原性組成物が提供される。
OM174 (2-デオキシ-6-o-[2-デオキシ-2-[(R)-3-ドデカノイルオキシテトラ-デカノイルアミノ]-4-o-ホスホノ-β-D-グルコピラノシル]-2-[(R)-3-ヒドロキシテトラデカノイルアミノ]-α-D-グルコピラノシルジヒドロゲンホスフェート)、(WO 95/14026)
OM 294 DP (3S,9R)-3--[(R)-ドデカノイルオキシテトラデカノイルアミノ]-4-オキソ-5-アザ-9(R)-[(R)-3-ヒドロキシテトラデカノイルアミノ]デカン-1,10-ジオール,1,10-ビス(ジヒドロゲノホスフェート) (WO 99/64301およびWO 00/0462 )
OM 197 MP-Ac DP (3S-,9R)-3-[(R)-ドデカノイルオキシテトラデカノイルアミノ]-4-オキソ-5-アザ-9-[(R)-3-ヒドロキシテトラデカノイルアミノ]デカン-1,10-ジオール,1-ジヒドロゲノホスフェート 10-(6-アミノヘキサノエート) (WO 01/46127)
などのTLR4アゴニストであると考えられる。
(配列番号1): TCC ATG ACG TTC CTG ACG TT (CpG 1826)
(配列番号2): TCT CCC AGC GTG CGC CAT (CpG 1758)
(配列番号3): ACC GAT GAC GTC GCC GGT GAC GGC ACC ACG
(配列番号4): TCG TCG TTT TGT CGT TTT GTC GTT (CpG 2006)
(配列番号5): TCC ATG ACG TTC CTG ATG CT (CpG 1668)
(配列番号6): TCG ACG TTT TCG GCG CGC GCC G (CpG 5456)
代替的CpGオリゴヌクレオチドは、重要でない欠失または付加を有する上記の配列を含み得る。本発明において用いられるCpGオリゴヌクレオチドは、当技術分野で公知の任意の方法によって合成することができる(例えばEP 468520参照)。好都合なことに、そのようなオリゴヌクレオチドは自動合成装置を利用して合成することができる。
本発明の免疫原性組成物を含むワクチン調製物を用いて、全身または粘膜経路を介して該ワクチンを投与することにより、感染に感受性の哺乳動物を防御または治療することができる。これらの投与としては、筋肉内、腹腔内、皮内もしくは皮下経路を介する注入;または口/消化管、呼吸器もしくは尿生殖器経路への粘膜投与が挙げられる。本発明のワクチンを単回用量として投与することができるが、その成分は同時に共投与してもよいし、または異なる時間に投与してもよい。さらに、本発明のワクチンを、初回(プライミング)用量についてはIM投与、追加用量についてはIN投与することができる。
I- 中間リンカーを介して抗原に結合したリポソームの製剤化。
I.1.1. N-エチルマレイミド(NEM)を用いた抗原(Ag)の-SH基の遮断
p27抗原は、マレイミドと反応し得る内在性SHを含む。このSHとマレイミドとの早期反応を回避するため、これを化学的に遮断した。
8.7mlのSH遮断したp27(NEM修飾したp27)(1.1mg/ml以下)を1時間インキュベートした(室温(RT)、磁気攪拌)(N-[γ-マレイミドブチリルオキシ]スルホスクシンイミドエステル、Pierce)(S-GMBS/p27のモル比6)。副生成物と過剰な試薬は、PD10カラム(Amersham)と、溶出バッファーとしての100mMリン酸塩(pH6.8)を用いて除去した。1mlの画分を回収し、280nmの吸光度でモニターした。マレイミド活性化したp27を含む画分をプールした。タンパク質含量は、ローリー法によって測定した。p27上のマレイミド基の数は、間接エルマン法の用量で測定した(2.4個のマレイミド基が検出された)。S-GMBS N-(ガンマ-マレイミドブチリルオキシ-スクシンイミドエステル)は、一方にスクシンイミド基を、また他方にマレイミド基を含む二官能性試薬である。スクシンイミドは-NH基(例えばタンパク質のアルカリ性アミノ酸の-NH基)と反応し、マレイミドはスルフヒドリル基(-SH)と反応する。
CpG-SHオリゴ(3'末端にチオール基を有する、配列番号4に示される配列のホスホジエステルCpG)をリポソームの表面上に共有結合させるため、POPE-MAL脂質誘導体(極性頭部基に結合したマレイミド基を有するPOPE)を組み込んだ修飾リポソームを調製した。使用した方法(脂質膜水和法)を以下に記載する。
GpCにコンジュゲートしたp27をリポソーム上に結合させ得るようにするため、ハイブリダイゼーションステップは、典型的には以下のとおりに行った。この目的のため、1.5 mlのリポソーム-CpGコンジュゲート(15mg/mlのDOPC)と3mlのp27-GpCコンジュゲート(0.5mg/mlのp27)を、PBSバッファー(pH7.4)中で混合し、37℃で30分間インキュベートした。p27-GpCがDNAハイブリダイゼーションを介してリポソーム-CpG上に特異的結合したことを確認するための対照として、p27-GpCを、表面にCpGオリゴがないリポソームと並行してインキュベートした。
材料および方法
試薬および培地
以下に要約および記載される製剤を使用して、6〜8週齢のC57BL/B6(H2Kb)、雌マウス(10匹/群)にワクチン接種した。このマウスは、14日間の間隔を空けて2回の注射を受け、第4、5および6週目に出血させた(実際の出血日については図4を参照)。マウスの筋肉に、ex-tempo製剤をワクチン接種した(左腓腹筋に最終容量50μlを注射)。SIV-p27タンパク質とアジュバント化p27をコーディングする組換えアデノウイルスを用いた異種プライムブーストを対照群として使用し、このアデノウイルスを5 x 108VPの用量で注射した。この研究設計は図4に示される。
II-1.1.1 ASA含有製剤
有機溶媒中の脂質(卵黄由来または合成ホスファチジルコリンなど)とコレステロールおよび3D-MPLとの混合物を、減圧下(あるいは不活性ガス流下)で乾燥させた。次いで水溶液(リン酸緩衝生理食塩水など)を加え、脂質が全て懸濁されるまで容器を攪拌した。次いで、この懸濁液を、リポソームサイズが約100nmに減少するまで微小流動化した後、0.2μmのフィルターを通して滅菌濾過した。典型的には、コレステロール:ホスファチジルコリン比は1:4(w/w)であり、水溶液を加えて5〜50mg/mlの最終コレステロール濃度を得た。リポソームは100nmの規定サイズを有し、これをSUV(小単層小胞)と呼ぶ。QS21の水溶液をSUVに加えた。PBS組成は、Na2HPO4:8.1 mM;KH2PO4:1.47mM;KCl:2.7mM;NaCl:137mM(pH7.4)であった。この混合物をASAと呼ぶ。ASAをp27抗原の存在下で希釈し、p27、3D-MPLおよびQS21が全て最終濃度100μg/mlとなるようにした。この製剤を「p27+ASA」と表す。
DOTAP含有リポソームを調製するため、クロロホルム中でDOTAP (N-[1-(2,3-ジオレオイルオキシ)プロピル(]-N,N,Nトリメチルアンモニウムメチルスルフェート)とDOPE (ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン)とをモル比1/1で混合し、溶媒を窒素流下で蒸発させて脂質膜を得た。この膜を、50mM Hepesと6%スクロース(pH7.4)を含むバッファーで水和し、DOTAPの最終濃度を20mg/mlとした。得られた小胞を、400nm、次いで100nmのポリカーボネート膜を通して連続的に押出した。
II-1.2.1 PBL単離
血液を眼窩静脈から採取し(マウス1匹当たり50μl、1群当たり10匹のマウス)、RPMI+ヘパリン(LEO)培地中に直接希釈した。lymphoprep勾配(CEDERLANE)を通してPBLを単離した。次いで、細胞を洗浄し、計数し、最後に特別な(ad hoc)希釈で特別な(ad hoc)バッファー中に再懸濁した(下記参照)。
手短に言えば、脾臓の破壊により全細胞を抽出し、次いで細胞を大量のRPMI中で再懸濁した(35ml中に5個の脾臓)。lymphoprep勾配(CEDERLANE)を通して脾臓細胞を単離した。次いで、リンパ球を洗浄し、計数し、最後に、CMCアッセイにおいて標的細胞としてさらに使用するため特別な(ad hoc)希釈で特別な(ad hoc)バッファー中に再懸濁した。
手短に言えば、流入領域リンパ節の破壊によって全細胞を抽出した。これらの細胞を注意深く2回洗浄し、計数し、最後に、CMCアッセイにおいて標的細胞としてさらに使用するため特別な(ad hoc)希釈で特別な(ad hoc)バッファー中に再懸濁した。
II-1.3.1 細胞内サイトカイン染色(ICS)
上記のとおり採取した血液サンプルについてICSを行った。このアッセイは、2つのステップ(ex vivo刺激および染色)を含む。Ex vivoリンパ球刺激は、 5% FCS(Harlan, Holland)、1μg/mlのCD49dとCD28の各抗マウス抗体(BD, Biosciences)、2mM L-グルタミン、1mM ピルビン酸ナトリウム、10μg/ml 硫酸ストレプトマイシン、10単位/mlのペニシリンGナトリウム(Gibco)、10μg/ml ストレプトマイシン、50μM B-MEメルカプトエタノールおよび100X希釈した非必須アミノ酸(これらの添加剤は全てGibco Life technologiesから入手)を補充したRPMI 1640(Biowitaker)である完全培地中で行う。ペプチド刺激は、常に37℃、5% CO2で行った。
Ex vivo刺激のため、5〜10 105PBLを、それぞれ1μg/mlの濃度で存在する、59個の15量体のSIV-p27ペプチド(それぞれ11アミノ酸重複し、Neosystemから購入した様々なMHCクラスI制限ペプチドおよびMHCクラスII制限ペプチドを包含する)のプールを補充した完全培地中で再懸濁した。2時間後、1μg/ml Brefeldin-A(BD, Biosciences)を16時間添加し、全18時間後に細胞を回収した。
刺激の直後、PBLを染色した。手短に言えば、細胞を1回洗浄した後、抗マウス抗体(全てBD, Biosciencesで購入)で染色した。さらなるステップは全て氷上で行った。最初に細胞を、50μlのCD16/32溶液(1/50f.c.、FACSバッファー)中で10分間インキュベートした。50μlのT細胞表面マーカー混合液を加え、(Cp当たり1/100 CD8a、1/100 CD4 APC Cy7)、洗浄前に細胞を20分間インキュベートした。細胞を200μlの透過化/固定化溶液(BD, Biosciences)中で固定および透過処理し、透過化/洗浄バッファー(BD, Biosciences)中で1回洗浄し、4℃にて、抗IFNg-APC、抗TNFa-PEおよび抗IL2-FITCで2時間または一晩染色した。CELLQuestTMソフトウエアを有するFACS CaliburTMを用いてデータを分析し、生きているCD8のゲート内の15000事象が試験ごとに得られた。
In vivoにおける抗原特異的細胞傷害性を評価するため、免疫化したマウスと対照マウスに、抗原特異的標的と非特異的標的標的(比1/1)の混合物を注射した。シンジェニックな脾細胞およびリンパ節細胞に、59個の、全SIV-p27タンパク質を包含する15量体ペプチドの1μg/mlのプールを添加しまたは添加せず、低用量および高用量のCFSEでそれぞれ標識した。示差的標識のため、カルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステル(CFSE;Molecular Probes - Palmoskiら;2002, J. Immunol. 168, 4391-4398)を、0.2μMまたは2.5μMの濃度で用いた。両種の標的を1/1の比でプールし、108標的/mlの濃度で再懸濁した。2回目の注射の21日後に、1匹のマウスにつき200μlの標的混合物を尾静脈に注射した。標的注射の24時間後に屠殺した動物から採取した血液(頸静脈)のFACSR分析によって細胞傷害性を評価した。下記の式を用いて、p27特異的標的細胞の平均溶解率を、抗原陰性対照に対して算出した:
血清学的分析を2回目の注射の2週間後に評価した。マウス(10匹/群)を、後眼窩穿刺により出血させた。
II-2.1 EX VIVOで検出されたサイトカイン産生T細胞(ICS)
図5は、2回目の注射の7日後、異なる群について検出されたサイトカイン産生CD8+T細胞頻度を示す。
図7は、2回目の注射の21日後にin vivoで検出された細胞傷害活性を示す。標的細胞への注射の24時間後にPBLを分析した(詳細については、材料および方法を参照)。p27がDNAハイブリダイゼーションによってリポソームの表面に結合している製剤(P27--GpCCpG-ASA*)は、遊離p27およびASA(p27 + ASA)を含む製剤よりも高い細胞傷害活性を誘導した。対照群(p27-GpC + ASA*、P27 + ASA*、P27 + ASA*-CpG)はいずれも、P27--GpCCpG-ASA*製剤によって誘導された細胞傷害性と同じくらい高いレベルの細胞傷害性は誘導しなかった。カチオン性脂質と結合した抗原を含む製剤((p27-+DOTAP)とASA)、またはカチオン性ポリマーと結合した抗原を含む製剤((p27-+PEI)とASA)を注射したマウスは一匹も、in vivoで検出可能な細胞傷害活性を誘導しなかった。
図8は、2回目の注射の14日後に採取した個々の血清中で検出された抗p27 IgG力価を示す。P27特異的抗体力価は、DNAハイブリダイゼーションを介してリポソームに結合した抗原上で増加する。本発明では、修飾p27とASAを含む製剤(P27-GpC + ASA*)が、抗体応答を改善することができた。カチオン性脂質を含む製剤((p27-+DOTAP)とASA)またはカチオン性ポリマーを含む製剤((p27-+PEI)とASA)を注射した群はいずれも、p27 + ASAの注射を受けたマウスにおいて観察された抗体力価よりも高い抗体力価は誘導しなかった。
Claims (29)
- 少なくとも1つの抗原送達粒子と少なくとも1つの抗原を含み、該抗原と該抗原送達粒子が中間リンカーを用いて結合されている、免疫原性組成物であって、前記中間リンカーが少なくとも1対の相補的オリゴヌクレオチド配列を含み、第1のオリゴヌクレオチドが抗原送達粒子に結合し、第1のオリゴヌクレオチドに相補的な第2のオリゴヌクレオチドが抗原に結合し、抗原が、相補的オリゴヌクレオチドのハイブリダイゼーションを介して抗原送達粒子に結合しており、該抗原送達粒子がリポソームであって、該オリゴヌクレオチドがDNAであり、1つ以上のCpGモチーフを含み、かつ10〜45塩基の長さである、前記免疫原性組成物。
- オリゴヌクレオチドがホスホロチオエート骨格を含む、請求項1に記載の免疫原性組成物。
- 1つ以上のCpGモチーフを含むオリゴヌクレオチド配列が、配列番号4の配列(ODN 2006)を含む、請求項1又は2に記載の免疫原性組成物。
- 1つ以上のオリゴヌクレオチドが、抗原送達粒子および/または抗原への前記オリゴヌクレオチドのコンジュゲーションを容易にするように修飾されている、請求項1〜3のいずれか1項に記載の免疫原性組成物。
- 1つ以上のオリゴヌクレオチドがチオール(SH)基の付加により修飾されている、請求項1〜4のいずれか1項に記載の免疫原性組成物。
- チオール基がオリゴヌクレオチドの3'末端にコンジュゲートしている、請求項5に記載の免疫原性組成物。
- 少なくとも1つの抗原送達粒子が、化学的コンジュゲーションにより第1のオリゴヌクレオチドに結合している、請求項1〜6のいずれか1項に記載の免疫原性組成物。
- 少なくとも1つの抗原が、化学的コンジュゲーションにより第1のオリゴヌクレオチドに相補的な第2のオリゴヌクレオチドに結合している、請求項7に記載の免疫原性組成物。
- 少なくとも1つの抗原が、マレイミドベースの化学的コンジュゲーションによりオリゴヌクレオチドの少なくとも1つに結合している、請求項8に記載の免疫原性組成物。
- 免疫原性組成物が免疫刺激剤を含む、請求項1〜9のいずれか1項に記載の免疫原性組成物。
- 少なくとも1つのリポソームが1つ以上の免疫刺激剤を含む、請求項10に記載の免疫原性組成物。
- 免疫刺激剤が、サポニン、Toll様受容体4(TLR4)リガンド、Toll様受容体7および/または8(TLR7/8)リガンド、Toll様受容体9(TLR9)リガンド、またはそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項10または11のいずれかに記載の免疫原性組成物。
- リポソームが、サポニンおよび/またはTLR4リガンドを含む、請求項11または12のいずれかに記載の免疫原性組成物。
- サポニンがQS21である、請求項12又は13のいずれかに記載の免疫原組成物。
- TLR4リガンドがモノホスホリルリピドAである、請求項12又は13のいずれかに記載の免疫原性組成物。
- 少なくとも1つのリポソームがステロールを含む、請求項1〜15のいずれか1項に記載の免疫原性組成物。
- ステロールがコレステロールである、請求項16に記載の免疫原性組成物。
- 1つ以上の異なる抗原を含む、請求項1〜17のいずれか1項に記載の免疫原性組成物。
- 免疫原性組成物の製造方法であって、以下:
a. 第1のオリゴヌクレオチドを抗原にコンジュゲートさせるステップ;
b. ステップa)のオリゴヌクレオチドに相補的な第2のオリゴヌクレオチドを抗原送達粒子にコンジュゲートさせるステップ;
c. 該オリゴヌクレオチドのハイブリダイゼーションを可能とする条件下で、該抗原と該抗原送達粒子とを混合するステップ
を含んでなり、
該抗原送達粒子がリポソームであって、該オリゴヌクレオチドがDNAであり、1つ以上のCpGモチーフを含み、かつ10〜45塩基の長さである、前記方法。 - 医薬において使用するための、請求項1〜18のいずれか1項に記載の免疫原性組成物。
- 疾患に感受性のまたは罹患しているヒトの予防および/または治療において使用するための、請求項1〜18のいずれか1項に記載の免疫原性組成物。
- 疾患に感受性のまたは罹患しているヒトの予防および/または治療のための医薬の製造における、請求項1〜18のいずれか1項に記載の免疫原性組成物の使用。
- i) オリゴヌクレオチドに結合した少なくとも1つの抗原送達粒子と、ii) i)のオリゴヌクレオチドに相補的なオリゴヌクレオチドに結合した少なくとも1つの抗原とを含むキットであって、
該抗原送達粒子がリポソームであって、該オリゴヌクレオチドがDNAであり、1つ以上のCpGモチーフを含み、かつ10〜45塩基の長さである、前記キット。 - 1つ以上の異なる種類の抗原送達粒子を含む、請求項23に記載のキット。
- 1つ以上の異なる抗原を含む、請求項23または24に記載のキット。
- 1つ以上の異なるオリゴヌクレオチドを含む、請求項23〜25のいずれか1項に記載のキット。
- 1つ以上の免疫刺激剤をさらに含む、請求項23〜26のいずれか1項に記載のキット。
- 少なくとも1つの抗原送達粒子が、相補的オリゴヌクレオチドによるハイブリダイゼーションを介して少なくとも1つの抗原に結合し、または少なくとも1つの抗原が、相補的オリゴヌクレオチドによるハイブリダイゼーションを介して少なくとも1つの抗原送達粒子に結合している、請求項23〜27のいずれか1項に記載のキット。
- 1つまたは複数の抗原送達粒子および1つまたは複数の抗原が、相補的オリゴヌクレオチドによりハイブリダイズしていない、請求項23〜27のいずれか1項に記載のキット。
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