JP5751708B2 - 核磁気共鳴技法および他の用途のためのエマルジョンを生成するための組成物ならびに方法 - Google Patents
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Description
本出願は、2008年5月3日に出願された米国仮特許出願第61/126,305号および2008年6月17日に出願された米国仮特許出願第61/132,420号の出願日の利益を主張する。これらの出願の全教示は、本明細書において参考として援用される。
多くの生物学的プロセスは、細胞の集団によって実施される。たとえば免疫系の細胞は、血流から炎症または感染範囲に補充されて、罹患部位での免疫細胞の蓄積が生じる。免疫細胞の著しい浸潤は、自己免疫疾患、癌および感染症に罹患した組織に発生することが多い。同様に、移植片拒絶反応は、移植組織に侵入して破壊する宿主免疫細胞に媒介される。骨髄から生じる幹細胞が血流を通じて移動して、損傷組織の再生を補助するという証拠も強まりつつある。
ある態様において、本出願は、ペルフルオロ−15−クラウン−5エーテルまたはPFPEオキシド、乳化剤、界面活性剤共混合物、および添加剤を含む水性組成物を開示する。ある実施形態において、界面活性剤共混合物は70mol%のレシチン、28mol%のコレステロールおよび2mol%のDPPEを含む。ある実施形態において、添加剤はプロピレングリコールである。ある実施形態において、乳化剤は非イオン性可溶化剤でもある。ある実施形態において、乳化剤はグリセロールポリエチレングリコールリシノレエート(ricinoleate)を含む。
本発明は、例えば以下の項目を提供する。
(項目1)
ペルフルオロ−15−クラウン−5エーテルまたはPFPEオキシド、乳化剤、界面活性剤共混合物、および添加剤を含む水性組成物。
(項目2)
前記乳化剤が非イオン性可溶化剤でもある、項目1に記載の水性組成物。
(項目3)
前記乳化剤がグリセロールポリエチレングリコールリシノレエートを含む、項目1に記載の水性組成物。
(項目4)
前記界面活性剤共混合物が70mol%のレシチン、28mol%のコレステロールおよび2mol%のDPPEを含む、項目1に記載の水性組成物。
(項目5)
前記添加剤がプロピレングリコールである、項目1〜4のいずれかに記載の水性組成物。
(項目6)
ペルフルオロ−15−クラウン−5エーテルまたはPFPEオキシドを20%〜50%w/vの範囲で含む、項目1〜5のいずれかに記載の水性組成物。
(項目7)
ペルフルオロ−15−クラウン−5エーテルまたはPFPEオキシドを25%〜35%w/vの範囲で含む、項目6に記載の組成物。
(項目8)
ペルフルオロ−15−クラウン−5エーテルまたはPFPEオキシドを30%〜40%w/vの範囲で含む、項目6に記載の組成物。
(項目9)
ペルフルオロ−15−クラウン−5エーテルまたはPFPEオキシドを35%〜36%w/vの範囲で含む、項目6に記載の組成物。
(項目10)
ペルフルオロ−15−クラウン−5エーテルまたはPFPEオキシドを35.6%w/vで含む、項目6に記載の組成物。
(項目11)
前記乳化剤を1%〜10%w/vの範囲で含む、項目1〜5のいずれかに記載の水性組成物。
(項目12)
前記乳化剤を1%〜5%w/vの範囲で含む、項目11に記載の水性組成物。
(項目13)
前記乳化剤を3%w/vで含む、項目11に記載の水性組成物。
(項目14)
プロピレングリコールを1%〜10%w/vの範囲で含む、項目5に記載の水性組成物。
(項目15)
プロピレングリコールを1%〜5%w/vの範囲で含む、項目5に記載の水性組成物。
(項目16)
プロピレングリコールを2%w/vで含む、項目5に記載の水性組成物。
(項目17)
レシチン、コレステロールおよびDPPEを含む前記界面活性剤共混合物を1%〜10%w/vの範囲で含む、項目4に記載の水性組成物。
(項目18)
レシチン、コレステロールおよびDPPEを含む前記界面活性剤共混合物を1%〜5%w/vの範囲で含む、項目4に記載の水性組成物。
(項目19)
レシチン、コレステロールおよびDPPEを含む前記界面活性剤共混合物を2%w/vで含む、項目4に記載の水性組成物。
(項目20)
35.6%w/vのペルフルオロ−15−クラウン−5エーテル、3.0%w/vの乳化剤、2.0%w/vの、レシチン、コレステロールおよびDPPEを含む界面活性剤共混合物、ならびに2.0%w/vの、プロピレングリコールである添加剤を含む水性組成物。
(項目21)
35.6%w/vのPFPEオキシド、3.0%w/vの乳化剤、2.0%w/vの、レシチン、コレステロールおよびDPPEを含む界面活性剤共混合物、ならびに2.0%w/vの、プロピレングリコールである添加剤を含む水性組成物。
(項目22)
前記乳化剤が非イオン性可溶化剤でもある、項目20または21に記載の水性組成物。
(項目23)
前記乳化剤がグリセロールポリエチレングリコールリシノレエートを含む、項目20または21に記載の水性組成物。
(項目24)
ペルフルオロ−15−クラウン−5エーテルおよびブロックコポリマーを含む水性組成物であって、ペルフルオロ−15−クラウン−5エーテルを10%〜20%w/wの範囲で含み、該ブロックコポリマーを0.1%〜2.0%w/wの範囲で含む、水性組成物。
(項目25)
前記ブロックコポリマーが、PEOを80%の含有率で含むポリ(エチレンオキシド)−ポリ(プロピレンオキシド)−ポリ(エチレンオキシド)(PEO−PPO−PEO)トリ−ブロックコポリマーである、項目24に記載の水性組成物。
(項目26)
ペルフルオロ−15−クラウン−5エーテルを12%〜17%w/wの範囲で含む、項目24に記載の水性組成物。
(項目27)
ペルフルオロ−15−クラウン−5エーテルを15%w/wで含む、項目24に記載の水性組成物。
(項目28)
前記ブロックコポリマーを0.1%〜1.0%w/wの範囲で含む、項目24に記載の水性組成物。
(項目29)
前記ブロックコポリマーを0.6%w/wで含む、項目24に記載の水性組成物。
(項目30)
15%w/wのペルフルオロ−15−クラウン−5エーテルおよび0.6%w/wのブロックコポリマーを含む水性組成物。
(項目31)
前記ブロックコポリマーが、PEOを80%の含有率で含むポリ(エチレンオキシド)−ポリ(プロピレンオキシド)−ポリ(エチレンオキシド)(PEO−PPO−PEO)トリ−ブロックコポリマーである、項目30に記載の水性組成物。
(項目32)
硫酸プロタミンを0.01%〜1.0%w/wの範囲でさらに含む、項目24〜31のいずれかに記載の水性組成物。
(項目33)
硫酸プロタミンを0.01%〜0.5%w/wの範囲で含む、項目32に記載の水性組成物。
(項目34)
硫酸プロタミンを0.01%〜0.1%w/wの範囲で含む、項目32に記載の水性組成物。
(項目35)
硫酸プロタミンを0.04%w/wで含む、項目32に記載の水性組成物。
(項目36)
項目1〜35のいずれか一項に記載の組成物を含むエマルジョン。
(項目37)
直径200nM未満の平均液滴径を有する、項目36に記載のエマルジョン。
(項目38)
4℃〜37℃の範囲の温度で安定である、項目36に記載のエマルジョン。
(項目39)
0.1〜0.2の多分散指数を有する、項目36に記載のエマルジョン。
(項目40)
高エネルギー方法を含む、項目36〜39のいずれか一項に記載のエマルジョンを調製する方法。
(項目41)
前記高エネルギー方法がマイクロフルイダイゼーションである、項目40に記載の方法。
(項目42)
前記高エネルギー方法が超音波処理である、項目40に記載の方法。
(項目43)
細胞を標識する方法であって、フルオロカーボン造影試薬が該細胞と結合するような条件下で、該細胞をエキソビボで項目36に記載のエマルジョンと接触させるステップを含む方法。
(項目44)
被験体内の細胞を検出する方法であって:
a)該被験体に項目36に記載のエマルジョンで標識した細胞を投与するステップと;
b)該被験体の少なくとも一部を核磁気共鳴技法によって検査して、それにより該被験体内の標識細胞を検出するステップと;
を含む方法。
(項目45)
移植レシピエント内の移植細胞を検出する方法であって:
a)移植レシピエントに、その少なくとも一部が項目36に記載のエマルジョンによって標識された移植用細胞を投与するステップと;
b)該被験体の少なくとも一部を核磁気共鳴技法によって検査して、それにより標識細胞を検出するステップと;
を含む方法。
(項目46)
インビボで細胞数を定量する方法であって:
a)被験体に項目36に記載のエマルジョンで標識した細胞を投与するステップと;
b)該被験体の少なくとも一部を核磁気共鳴技法によって検査して、それにより該被験体内の標識細胞を検出するステップと;
c)関心領域(ROI)内の標識細胞の数を定量するステップと;
を含む方法。
(項目47)
インビボで白血球数を定量する方法であって:
a)被験体に項目36に記載のエマルジョンを投与するステップと;
b)該被験体からの末梢血の試料を溢出させて、白血球の有効細胞ローディングを測定するステップと;
c)該被験体の少なくとも一部を核磁気共鳴技法によって検査して、それにより該被験体内の標識細胞を検出するステップと;
d)関心領域(ROI)内の標識細胞の数を定量するステップと;
を含む方法。
(項目48)
細胞ローディングを測定する前に細胞の集団を試料から選別して、該細胞の割合を使用して、ROI内のその集団の標識細胞の数を定量する、項目47に記載の方法。
(項目49)
細胞を標識する方法であって、フルオロカーボン造影試薬が該細胞と結合するような条件下で、該細胞をインビボで項目36に記載のエマルジョンと接触させるステップを含む方法。
(項目50)
被験体内の細胞を検出する方法であって:
a)該被験体に項目36に記載のエマルジョンを投与するステップと;
b)該被験体の少なくとも一部を核磁気共鳴技法によって検査して、それにより該被験体内の標識細胞を検出するステップと;
を含む方法。
(項目51)
組織における酸素の分圧を測定する方法であって、フルオロカーボン造影試薬が該組織と結合するような条件下で、該組織をインビボで項目36に記載のエマルジョンと接触させるステップを含む方法。
(項目52)
組織における血管透過性の上昇を検出する方法であって、フルオロカーボン造影試薬が該組織と結合するような条件下で、該組織をインビボで項目36に記載のエマルジョンと接触させるステップを含む方法。
(項目53)
組織における炎症を検出する方法であって、フルオロカーボン造影試薬が該組織と結合するような条件下で、該組織をインビボで項目36に記載のエマルジョンと接触させるステップを含む方法。
(項目54)
被験体への投与のための標識細胞製剤であって:
a)細胞と;
b)該細胞と結合した項目36に記載のエマルジョンと;
を含む製剤。
1.概要
ある態様において、本開示は、細胞をエキソビボで核磁気共鳴造影試薬、たとえばフルオロカーボン造影試薬で標識して、インビボまたはエキソビボで標識細胞を定量するための新規方法および試薬を提供する。標識細胞は、本明細書に記載する方法に従って19F核磁気共鳴技法(たとえばMRI/MRS)によって検出および定量され得る。19F核磁気共鳴技法が生体系にとって優れた撮像ツールであるのは、内因性バックグラウンドシグナルが存在しないためである。フッ素は生物中に存在するとしても、非常に低いレベルで存在し、一般に液体状態核磁気共鳴技法によって検出可能な化学形ではない。これは、微細な解剖学的詳細の描出を提供しながら、特異的な細胞集団の選択的検出ができない、従来の1H MRIとは全く異なる。本明細書で開示するある方法によって、生存対象における標識細胞の分布を描出するための体の全体または一部のスクリーニングが可能となる。19F核磁気共鳴によって検出された標識細胞の正確な解剖学的位置は、たとえば解剖学的詳細を与える1H MRI画像の重畳によって決定され得る。好ましい実施形態において、1H画像は、確実に登録するために19F画像と同じ撮像セッションの間に(対象を移動させずに)に取得される。さらに、本明細書で開示する核磁気共鳴技法は、組織試料、切除した臓器および細胞培養物の場合などの、エキソビボの状況で効果的に利用され得る。本明細書で開示する撮像技術は、多数の生物学的および医学的問題に利用され得る。
主題の方法で使用される造影試薬は、フルオロカーボン、すなわち少なくとも1個の炭素−フッ素結合を含む分子である。本明細書で開示する造影試薬は、19F原子のために、19F MRIおよび他の核磁気共鳴技法、たとえばMRS技法によって検出され得る。ある好ましい実施形態において、フルオロカーボン造影試薬は、以下の特性:1)細胞毒性の低下;2)単純であり、化学シフトアーチファクトを最小化するために、単一の狭い共鳴を理想的に有する、19F NMRスペクトル;3)各分子中に多数のNMR同等フッ素原子を有し、高感度;4)食作用細胞に限定されず、多くの細胞型の効率的な標識を可能にするように製剤される;の1つ以上を有するであろう。好ましくは、造影試薬は、炭素に結合された複数のフッ素、たとえば炭素に結合された5個を超える、10個を超える、15個を超えるまたは20個を超えるフッ素を含む。好ましくは、フッ素の少なくとも4個の、少なくとも8個の、少なくとも12個のまたは少なくとも16個がほぼ同等のNMR化学シフトを有する。
3.細胞および標識化
本明細書に記載する方法は、原核および真核細胞の両方を含む広範囲の細胞、ならびに好ましくは哺乳動物細胞と共に使用され得る。細胞調製の技術は、細胞培養、クローニング、核移植、遺伝子組み換えおよびカプセル封入を含む。
本明細書に記載するように、核磁気共鳴技法を使用して、標識細胞の集団を検出することができる。「検出する」という用語は、特に核磁気共鳴技法によって、標識分子または細胞の存在または非存在を確認するいずれの試みも含む。「検出する」という用語は、定量的測定および2または3次元画像生成を含む、より高度な測定を含むことも意図する。たとえばMRIを使用して、このような細胞の画像が生成され得る。多くの例において、標識細胞は生存対象に投与され得る。細胞の投与後に、対象のある部分、または対象全体をMRIによって検査してMRIデータセットを生成してもよい。他の例では、エマルジョンを直接iv注射して、次に対象を1時点またはそれ以上で撮像する。「データセット」は、本用語が本明細書で使用されるように、対象物質の磁気共鳴プロービング中に収集された生データ、取得パラメータはもちろんのこと、生データから処理、変換または抽出された情報も含むことを意図する。生データは、自由誘導減衰、スピンエコー、刺激エコー、および/または勾配エコーを含む、MRI/MRSによって取得した過渡シグナルを含む。処理情報の例は、対象物質の2次元または3次元画像表現を含む。処理情報は、強度画像、実数および虚数画像成分はもちろんのこと、関連付けられた位相マップ画像も含み得る。抽出情報の別の例は、対象物質中の撮像試薬または19Fシグナルの量または濃度を表現するスコアである。対象物質中の19Fシグナル、およびインプラント前の細胞当りの造影試薬の平均量の校正(エキソビボ標識化の場合)を使用することによって、対象物質中の細胞の絶対数を概算することができる。対象物質に存在する19Fシグナルの量は、多くの方法で表現または計算することができる;たとえば関心領域(ROI)での19Fシグナルの平均シグナル対ノイズ比(SNR)を測定および使用して、標識細胞の存在量が計算され得る。ある実施形態において、19Fシグナルの平均強度、または画像単位もしくはボクセル単位の総和を使用して、標識細胞の存在量が計算され得る。この種類のデータは、対象の単一の領域、たとえば脾臓または標識細胞に特に関連性のある別の臓器にて収集され得る。標識細胞は、対象以外の状況で検査され得る。培養物中で標識細胞を検査することが所望であり得る。ある実施形態において、標識細胞を組織試料または組織培養物内にて添加または産生することができ、したがって標識細胞はこのような状況でも撮像され得る。たとえば移植される臓器、組織または他の細胞物質を造影試薬と接触させて、このような移植物の対象へのインプラント前に標識細胞を産生することができる。
本出願のエマルジョンの投与方法は、当業者に周知である。所望の活性を実現するために、エマルジョンは多様な単位投薬形で投与することができる。用量は、特定のエマルジョンによって変わるであろう。用量も投与方式、患者の全身の健康状況、状態、サイズ、および年齢に応じて変化するであろう。
標識細胞を定量する方法は通例、このような定量を目的として設計されたソフトウェアを動作させ得るコンピュータを活用して実施されるであろう。このようなソフトウェアは、スタンドアロンプログラムであり得るか、または他のソフトウェア、たとえばMRI画像処理ソフトウェアに組み込まれ得る(その全体が参照により本明細書に組み入れられている、US Patent Application No.2007−0253910を参照)。
w/w 重量/重量比
RT 室温
PDI 多分散指数
WFI 注射用水(滅菌)
PSA 液滴径分析
MF マイクロフルイダイザ
物質
ペルフルオロ−15−クラウン−5−エーテル:ExFluor,Inc.Round Rock,TX.
硫酸プロタミン:Sigma P3369ロット番号022K12201 CAS# 53597−25−4 USP試験に適合
プルロニックF68:BASF(ルトロールF68/ポロキサマー188)USP/NFグレード
注射用水:Braun(滅菌/発熱物質を含まない)
コレステロール:Sigma Cholesterol Ph Eur;14606
DPPE: Avanti Polar Lipidsによるジパルミトイルホスファチジルエタノール:16:0 PE 850705P
レシチン(Egg PC):リポイド卵ホスファチジルコリン
クレモホールELP:BASF 10205104 USP/NF グレード
プロピレングリコール:Fagron BV 176947 Ph Eurグレード。
高濃度プレエマルジョンを最初に調製して、滅菌水で希釈して必要な最終濃度に到達させて、最後にMFによって処理して、許容される液滴径(<200nm)および多分散性(<0.15)のエマルジョンを得た。乳化剤および添加剤を使用直前に滅菌水に溶解させた。プルロニックF68溶液を水で100mg/mlに、硫酸プロタミンで20mg/mLに調製した。高濃度プレエマルジョンは、必要な液体すべて(ペルフルオロ−15−クラウン5エーテル油、F68溶液および硫酸プロタミン溶液)を回転剪断機(直径25mmのultra−turraxシャフトを使用)で13500rpmにて2.5分間処理することによって調製した。この最初の混合物を次に、必要な最終濃度まで希釈して、回転剪断機によって1分間再処理した。プレエマルジョンは、M−110Sマイクロフルイダイザ(Microfluidics Corp.)を使用して、MFによってただちに処理した。マイクロフルイダイゼーション処理の間の液圧は>18500psiであり5〜8回別々に通過させること(サイクル)によって小さい液滴径が達成された。ナノエマルジョンを濾過によって滅菌した。生成物は、フィルタホルダ(PALL,Inc.)内の47mm PFR(PTFE、0.22μm)ディスクを使用して濾過した。2〜8ml/分の低流を使用して濾過を正常に実現した。
現在公知の脂質ベースナノエマルジョンを超える安定性上昇および液滴径縮小のために、ペルフルオロ−15−クラウン−5−エーテルの新たな製剤を設計した。この新たな製剤は、クレモホール(登録商標)EL(BASF)をフルオロカーボンの乳化剤として最初に利用する。クレモホールELは非イオン性可溶化剤であり、主成分は、ポリエチレングリコールの脂肪酸エステルと共に疎水性部分となるグリセロール−ポリエチレングリコールリシノレエートであり;より小型の親水性成分は、ポリエチレングリコールおよびエトキシ化グリセロールから成る。脂質成分は、ナノエマルジョン液滴のリポソームコート中に混和されるが、PEGによって立体安定化が確保される。得られたナノエマルジョン液滴は、ペルフルオロ−15−クラウン−5−エーテルコア、リポソームコーティング、およびクレモホールELのPEG部分によって立体的に安定化された表面を有する。立体安定化によって、有効期限およびインビボでのナノエマルジョン安定性が著しく改善された。クレモホールELをエマルジョン製剤に導入することによって実現された改善点を証明するために、以前に報告された手順に従って(WO2006096499)従来技術の製剤(エマルジョン4)を、新たな製剤(エマルジョン3)と並行して調製した。2つのエマルジョンを比較して、結果を下に示す。どちらのエマルジョンも250mLスケールで調製した。
要約すると、リポソームをリポソーム成分の超音波処理によって調製した。高濃度プレエマルジョンを、ペルフルオロ−15−クラウン−5−エーテル/乳化剤1および添加剤を添加することによって調製した;続いて、バッチを最終濃度まで注射用水で希釈して、MFを使用して最終油液滴径まで処理した。
製剤3エマルジョンの有効期間安定性:
エマルジョン3は続いてDLSを受けて、合計6カ月超にわたって脱安定化の徴候について目視検査された。製剤3の安定性データのまとめを図1に示す。製剤3は、目視検査時には不透明で乳白色に見えた;大規模な液滴、凝集体、沈殿または相分離は、追跡中に見られなかった。重要なことに、製剤3エマルジョンの液滴径は、試験を行った他のすべてのエマルジョンと比較すると小さく、最も重要なことには、液滴径およびPDIは、製剤4と比較して劇的に縮小した(WO2006096499)。比較結果を表4に示す。クレモホールELの導入によって、同じ製造条件下でベニバナ油を用いて調製した製剤4と比較して、製剤3の液滴径を劇的に縮小した。
製剤5のエマルジョンは続いてDLSを受けて、合計11カ月にわたって脱安定化の徴候について目視検査された。上述のように、図7は、粒径およびPDIが4〜8℃での貯蔵時に342日後(>11カ月)に不変のままであることを示す。
製剤3の有用性をさらに証明するために、蛍光染料を処理後の製剤3の脂質層に包含させた。この添加によって、19F磁気共鳴および各種の蛍光方法(たとえばフローサイトメトリー、組織学、FACs分析、蛍光顕微鏡など)の両方によって検出できる、「デュアルモダリティ」剤が生成された。幅広く市販されている親油性染料(たとえばジアルキルカルボシアニン、Invitrogen,Inc.)を使用した。たとえば水に溶解せず、脂質の疎水性環境でなければ実質的に蛍光を示さない蛍光染料であるDiI(Molecular Probes)を使用した。DiIを製剤3のリポソームコーティング中に包含させた。蛍光試験によって、製剤のリポソーム部分の中で染料の安定な蛍光が示された(図2)。染料は、エマルジョン脂質コアと結合しない限り、明らかに非蛍光性であった。染料は、低い水溶性のために、ナノエマルジョンと結合したままであり、水または細胞培地での希釈時にその蛍光を維持した。蛍光染料の包含は、図3に示すように製剤3の、液滴径または多分散性に影響せず、血清安定性に影響しなかった。染料は、細胞へのナノエマルジョン取り込みにも負の影響を持っていなかった(データを示さず)。
硫酸プロタミンおよびポリエチルアミンを用いた製剤3および5
ナノエマルジョン3および5は、硫酸プロタミンおよびポリエチルアミンを用いて製剤して、非食細胞への取り込みを改善することもできる。これらのポリアミンは、プレエマルジョン中に包含されて、上述のようにMF処理後にエマルジョン界面活性剤層に混入する。ポリアミンの量は、最適な細胞標識化を実現するように最適化されるであろう。(参照によりその全体が本明細書に組み入れられている、WO2009/009105を参照)。
蛍光ブレンドPFPEアミド(FBPA)は最近、共有コンジュゲート蛍光染料(たとえばボディピー、FITCまたはアレクサ647)を含有することが記載されている。これらの蛍光コンジュゲートPFPE油は、ナノエマルジョンプロセスの間に独自のフルオロカーボン単相として挙動する[詳細については、参照によりその全体が本明細書に組み入れられている、Janjicら、J Am Chem Soc.2008 Mar 5;130(9):2832−41を参照]。蛍光性の製剤3および5は、FBPAを用いて調製され得る。製剤3では、10%v/vのペルフルオロ−15−クラウン−5エーテルをFBPAで置き換えることができる。結果として、製剤5では、10%v/vのPFPEオキシドをFBPAで置き換える。油を慎重に共にブレンドして独自のフルオロカーボン相を得て、次に製剤3および製剤5で記載したようなナノエマルジョン調製手順を受けさせる。界面活性剤共混合物ではなく蛍光染料によって標識されているフルオロカーボン相の利点は、何倍にもなる。第1に、これらの新たな製剤中の蛍光染料は、処理を通じて、細胞標識化の間、そしておそらくインビボで、ナノエマルジョン液滴のフルオロカーボンコア内に残存する。第2に、蛍光シグナルは標識組織または細胞からの19F NMRシグナルに正比例し[Janjicら、J Am Chem Soc.2008 Mar 5;130(9):2832−41]、それゆえ2つの撮像または検出様式(すなわち磁気共鳴および蛍光)での細胞(または組織)間に標識化の差異はない。
製剤3は、図1に示すように、優れた安定性および非常に小さい液滴径(<150nm)を低い多分散性(<0.15)と共に示す。ナノエマルジョンを細胞培養条件下でのインビトロと、げっ歯類への注射時のインビボの両方で安定である。ここで我々は、細胞取り込み、毒性プロフィール、ならびに表現型および活性変化についての標識細胞の評価を含む、製剤3のより詳細な評価を示す。
本明細書で言及したすべての刊行物および特許は、個別の刊行物または特許がそれぞれ参照により組み入れられることが具体的および個別に示されているかのように、参照によりその全体が本明細書に組み入れられている。矛盾のある場合には、本出願が、本明細書のいずれの定義も含めて優先するであろう。
本発明の詳細な実施形態は、本明細書で明示的に開示されているが、上の明細書は例示的であり、制限的ではない。本発明の多くの変形が、本明細書および下の請求項を検討したときに、当業者に明らかになるであろう。本発明の全範囲は、請求項と共に均等物のその全範囲を、および明細書と共にそのような変形を参照して決定されるべきである。
Claims (21)
- ペルフルオロ−15−クラウン−5エーテルまたはPFPEオキシド、乳化剤、界面活性剤共混合物、および添加剤を含む、無細胞水性組成物であって、該ペルフルオロ−15−クラウン−5エーテルまたはPFPEオキシドは、標的部分に結合されない、無細胞水性組成物。
- 前記乳化剤が非イオン性可溶化剤でもある、請求項1に記載の無細胞水性組成物。
- 前記乳化剤がグリセロールポリエチレングリコールリシノレエートを含む、請求項1に記載の無細胞水性組成物。
- 前記界面活性剤共混合物が70mol%のレシチン、28mol%のコレステロールおよび2mol%のDPPEを含む、請求項1に記載の無細胞水性組成物。
- 前記添加剤がプロピレングリコールである、請求項1〜4のいずれかに記載の無細胞水性組成物。
- ペルフルオロ−15−クラウン−5エーテルまたはPFPEオキシドを20%〜50%w/vの範囲で含む、請求項1〜5のいずれかに記載の無細胞水性組成物。
- 前記乳化剤を1%〜10%w/vの範囲で含む、請求項1〜5のいずれかに記載の無細胞水性組成物。
- プロピレングリコールを1%〜10%w/vの範囲で含む、請求項5に記載の無細胞水性組成物。
- レシチン、コレステロールおよびDPPEを含む前記界面活性剤共混合物を1%〜10%w/vの範囲で含む、請求項4に記載の無細胞水性組成物。
- 35.6%w/vのペルフルオロ−15−クラウン−5エーテル、3.0%w/vの乳化
剤、2.0%w/vの、レシチン、コレステロールおよびDPPEを含む界面活性剤共混合物、ならびに2.0%w/vの、プロピレングリコールである添加剤を含む無細胞水性組成物であって、該ペルフルオロ−15−クラウン−5エーテルは、標的部分に結合されない、無細胞水性組成物。 - 35.6%w/vのPFPEオキシド、3.0%w/vの乳化剤、2.0%w/vの、レシチン、コレステロールおよびDPPEを含む界面活性剤共混合物、ならびに2.0%w/vの、プロピレングリコールである添加剤を含む無細胞水性組成物であって、該PFPEオキシドは、標的部分に結合されない、無細胞水性組成物。
- ペルフルオロ−15−クラウン−5エーテルおよびブロックコポリマーを含む無細胞水性組成物であって、ペルフルオロ−15−クラウン−5エーテルを10%〜20%w/wの範囲で含み、該ブロックコポリマーを0.1%〜2.0%w/wの範囲で含み、該ペルフルオロ−15−クラウン−5エーテルは、標的部分に結合されない、無細胞水性組成物。
- 前記ブロックコポリマーが、PEOを80%の含有率で含むポリ(エチレンオキシド)−ポリ(プロピレンオキシド)−ポリ(エチレンオキシド)(PEO−PPO−PEO)トリ−ブロックコポリマーである、請求項12に記載の無細胞水性組成物。
- 15%w/wのペルフルオロ−15−クラウン−5エーテルおよび0.6%w/wのブロックコポリマーを含む無細胞水性組成物であって、該ペルフルオロ−15−クラウン−5エーテルは、標的部分に結合されない、無細胞水性組成物。
- 前記ブロックコポリマーが、PEOを80%の含有率で含むポリ(エチレンオキシド)−ポリ(プロピレンオキシド)−ポリ(エチレンオキシド)(PEO−PPO−PEO)トリ−ブロックコポリマーである、請求項14に記載の無細胞水性組成物。
- 硫酸プロタミンを0.01%〜1.0%w/wの範囲でさらに含む、請求項12〜14のいずれかに記載の無細胞水性組成物。
- 請求項1〜16のいずれか一項に記載の組成物を含む無細胞エマルジョン。
- 直径200nM未満の平均液滴径を有する、請求項17に記載の無細胞エマルジョン。
- 0.1〜0.2の多分散指数を有する、請求項17に記載の無細胞エマルジョン。
- 高エネルギー方法を含む、請求項17〜19のいずれか一項に記載の無細胞エマルジョンを調製する方法。
- 組織における炎症を検出するための無細胞組成物であって、
請求項17に記載の無細胞エマルジョンを含み、
フルオロカーボン造影試薬が該組織と結合することを特徴とする、
無細胞組成物。
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