JP5746978B2 - 急性心不全の診断、予知及び/又は予後用バイオマーカー及びその使用 - Google Patents
急性心不全の診断、予知及び/又は予後用バイオマーカー及びその使用 Download PDFInfo
- Publication number
- JP5746978B2 JP5746978B2 JP2011546847A JP2011546847A JP5746978B2 JP 5746978 B2 JP5746978 B2 JP 5746978B2 JP 2011546847 A JP2011546847 A JP 2011546847A JP 2011546847 A JP2011546847 A JP 2011546847A JP 5746978 B2 JP5746978 B2 JP 5746978B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- ahf
- prognosis
- quiesin
- subject
- amount
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/573—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for enzymes or isoenzymes
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/558—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor using diffusion or migration of antigen or antibody
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y108/00—Oxidoreductases acting on sulfur groups as donors (1.8)
- C12Y108/03—Oxidoreductases acting on sulfur groups as donors (1.8) with oxygen as acceptor (1.8.3)
- C12Y108/03002—Thiol oxidase (1.8.3.2)
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54366—Apparatus specially adapted for solid-phase testing
- G01N33/54386—Analytical elements
- G01N33/54387—Immunochromatographic test strips
- G01N33/54388—Immunochromatographic test strips based on lateral flow
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
- G01N2333/902—Oxidoreductases (1.)
- G01N2333/90212—Oxidoreductases (1.) acting on a sulfur group of donors (1.8)
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2560/00—Chemical aspects of mass spectrometric analysis of biological material
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/32—Cardiovascular disorders
- G01N2800/325—Heart failure or cardiac arrest, e.g. cardiomyopathy, congestive heart failure
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/52—Predicting or monitoring the response to treatment, e.g. for selection of therapy based on assay results in personalised medicine; Prognosis
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
本発明は、対象者における疾患又は病状の予知、診断及び/又は予後予測(prognosticating)において使用するための、タンパク質-及び/又はペプチド-ベースのバイオマーカー並びにこれらに特異的に結合する物質に関する。より具体的には、本願は、急性心不全の新たなバイオマーカーとしての特定のタンパク質及び/又はペプチド;該バイオマーカータンパク質及び/又はペプチドの測定に基づいて急性心不全を予知、診断及び/又は予後予測する方法;並びに該タンパク質及び/又はペプチドを測定し、及び/又は前記方法を実施するキット及びデバイスを開示する。
多くの疾患及び病状において、予防的及び/又は治療的処置の好ましい転帰は、疾患又は病状の早期及び/又は正確な予知、診断及び/又は予後と強く相関している。したがって、処置の選択に指針を与える疾患及び病状の早期及び/又は正確な予知、診断及び/又は予後のための追加的で、好ましくは改善された様式に関する継続的な必要性が存在する。
心不全は、先進国における主要な公衆衛生上の問題であり、高齢者における相当な罹患率及び死亡率の原因である。心不全は、通常、呼吸障害の悪化を導く頻発性代償不全により特徴付けられる慢性疾患である。更に、診断の5年後、心不全患者の50%がこの疾患で死亡している。
AHFの共通症状は息切れ(呼吸困難)である。しかし、通常、入院に際して呼吸困難を示す対象者のほんの一部しかAHFに罹患していない。したがって、AHF患者を他の原因による呼吸困難を有する患者と適切に区別するために、迅速、正確で効果的なAHF処置が必要である。
多大な実験及び試験を行った結果、本発明者らは、ポリペプチドであるクイエシンQ6が急性心不全(AHF)の予知、診断及び/又は予後予測に特に有利である新たに実現したバイオマーカーであることを明らかにした。
詳細には、3つの医療センター、200人の被験者(緊急入院に際して呼吸困難を示した対象者並びに慢性心不全(CHF)患者及び年齢が適合する健常コントロールからの見込みサンプルコレクションを含む)の研究において、本発明者らは初めて、クイエシンQ6を、AHFを有さない呼吸困難患者、CHF患者又は健常コントロールと比較したときAHFを有する呼吸困難患者で有意なレベル変化を提示するバイオマーカーとして同定し、その後その正当性を証明した。加えて、本発明者らはまた、クイエシンQ6がAHFの進行のモニタリングに、すなわち、例えば、入院に際して(すなわち処置前)、処置の間及び退院に際して(すなわち処置後)に、例えば呼吸困難患者において、クイエシンQ6レベルを測定することによる、有用なバイオマーカーであり得ることに気付いた。
例えば、AHFを有する呼吸困難患者とAHFを有さない呼吸困難患者との区別について、AUC値(ROC曲線下面積;「ROC」は受信者動作特性の略語である)は、クイエシンQ6がBNP及びNT-プロBNPより高い。AUC値は感度及び特異性の組合せ尺度であり、より高いAUC値(すなわち、1への接近)は一般に当該検査の性能の向上を示す。
加えて、上記のように、BNPマーカー診断は、AHFの正確な診断を確立することができない値100〜400pg/mlに厄介な「グレーゾーン」を有する。BNP「グレーゾーン」のサンプルでのクイエシンQ6マーカーレベルの使用は、AHF呼吸困難患者と非AHF呼吸困難患者との間の明確な区別をもたらした(BNPについてのAUC 0.58に対して、クイエシンQ6についてのメジアンAUC 0.91)。
クイエシンQ6レベルは、本発明において、腎不全とは無関係であることが示された一方、BNP及びNT-プロBNPは、クレアチニンレベルが増加した患者で明らかに上昇する。腎不全は心不全の頻繁な共存症であるので、新たなクイエシンQ6マーカーレベルがクレアチニンレベルと無関係であることは、重要な特徴であり、診断性能に対して大きく影響する。
結果として、1つの観点で、本発明は、対象者において急性心不全(AHF)を予知、診断及び/又は予後予測する方法を提供し、該方法は、その方法の検査段階が前記対象者からのサンプル中のクイエシンQ6量を測定することを含んでなることを特徴とする。疾患又は病状の予知、診断及び/又は予後の方法が、一般に、データを対象者から及び/又は対象者について収集する検査段階を含んでなることは理解される。
(i)対象者からのサンプル中のクイエシンQ6量を測定する工程;
(ii)(i)で測定したクイエシンQ6量を、AHFの既知の予知、診断及び/又は予後を表すクイエシンQ6量参照値と比較する工程;
(iii)(i)で測定したクイエシンQ6量の参照値からの逸脱又は逸脱無しを発見する工程;
(iv)前記逸脱又は逸脱無しの発見を、対象者における特定のAHF予知、診断及び/又は予後に帰する工程
を含んでなり得る。
本明細書中で教示される予知、診断及び/又は予後の方法の別の1つの実施形態において、対象者は、AHFを暗示し得る1以上の症状及び/又は徴候を示していてもよい。例えば、1つの実施形態において、対象者は、呼吸困難を示していてもよい。よって、1つの実施形態において、本方法は、AHFに起因する呼吸困難を示す対象者とAHF以外の又はAHFとは無関係の原因(例えば、COPD又は肺炎)に起因する呼吸困難を示す対象者との区別用であり得る。
本明細書中で教示される予知、診断及び/又は予後の方法の1つの更なる実施形態において、対象者は腎不全を有していてもよい。クイエシンQ6が関与する方法は、そのような対象者について、BNP又はNT-プロBNPを使用する方法より信頼性が高いことが本明細書中で示されている。
(i)上記で教示される予知、診断及び/又は予後の方法を、1時点又は2以上の一連の時点で対象者に適用し、それにより対象者におけるAHFの予知、診断及び/又は予後を該一連の時点で決定し;
(ii)(i)で決定した前記一連の時点での対象者におけるAHFの予知、診断及び/又は予後同士を比較し;そして
(iii)(i)で決定した前記一連の時点での対象者におけるAHFの予知、診断及び/又は予後間の変化の有無を発見することを含んでなる。
結果として、検査段階が、対象者からのサンプル中の、AHFの予知、診断及び/又は予後予測に有用な1以上の他のバイオマーカーの有無及び/又は量の測定を更に含んでなる方法もまた、本明細書中に開示される。
(i)対象者からのサンプル中のクイエシンQ6量並びに前記1以上の他のバイオマーカーの有無及び/又は量を測定する工程;
(ii)(i)の測定値を、クイエシンQ6量並びに前記1以上の他のバイオマーカーの有無及び/又は量についての対象者のプロフィールを確立するために使用する工程;
(iii)(ii)の対象者のプロフィールを、クイエシンQ6量並びに前記1以上の他のバイオマーカーの有無及び/又は量の参照プロフィールと比較する工程(該参照プロフィールは既知のAHF予知、診断及び/又は予後を表す);
(iv)(ii)の対象者のプロフィールの参照プロフィールからの逸脱又は逸脱無しを発見する工程;
(v)前記逸脱又は逸脱無しの発見を、対象者における特定のAHF予知、診断及び/又は予後に帰する工程
を含んでなる。
上記のように、本方法は、他のバイオマーカーについて以前に用いられた公知の手順に従って確立され得るクイエシンQ6量についての参照値を用いてもよい。このような参照値は、本方法内で確立されてもよい(すなわち、本方法の1工程を構成してもよい)し、本方法外で確立されてもよい(すなわち、本方法の工程を構成しないくてもよい)。したがって、本明細書中で教示される方法の1つは、クイエシンQ6量についての参照値を確立する工程を含んでなり得る。ここで、該参照値は、(a)AHF無しの予知若しくは診断又はAHFについての良好な予後を表すか、或いは(b)AHFの予知若しくは診断又はAHFについての不良な予後を表す。
(a)AHF無しの予知若しくは診断又はAHFについての良好な予後を表すか、或いは
(b)AHFの予知若しくは診断又はAHFについての不良な予後を表し、
該方法は、以下:
(i)
(i a)AHFを有さないか又はAHFを有するリスクにないか又はAHFについて良好な予後を有する1以上の対象者からの1以上のサンプル中、或いは
(i b)AHFを有しているか又はAHFを有するリスクにあるか又はAHFについて不良な予後を有する1以上の対象者からの1以上のサンプル中
のクイエシンQ6量を測定し、そして
(ii)
(ii a)(i a)で測定したクイエシンQ6量を、AHF無しの予知若しくは診断を表すか又はAHFについての良好な予後を表す参照値として保存するか、或いは
(ii b)(i b)で測定したクイエシンQ6量を、AHFの予知若しくは診断を表すか又はAHFについての不良な予後を表す参照値として保存する
ことを含んでなる。
(a)AHF無しの予知若しくは診断又はAHFについての良好な予後、或いは
(b)AHFの予知若しくは診断又はAHFについての不良な予後を表し、
該方法は、以下:
(i)
(i a)AHFを有さないか又はAHFを有するリスクにないか又はAHFについて良好な予後を有する1以上の対象者からの1以上のサンプル中、或いは
(i b)AHFを有しているか又はAHFを有するリスクにあるか又はAHFについて不良な予後を有する1以上の対象者からの1以上のサンプル中
のクイエシンQ6量並びに前記1以上の他のバイオマーカーの有無及び/又は量を測定し、
(ii)
(ii a)(i a)の測定値を、クイエシンQ6量並びに前記1以上の他のバイオマーカーの有無及び/又は量のプロフィールの作成に使用するか、或いは
(ii b)(i b)の測定値を、クイエシンQ6量並びに前記1以上の他のバイオマーカーの有無及び/又は量のプロフィールの作成に使用し、
(iii)
(iii a)(ii a)のプロフィールを、AHF無しの予知若しくは診断を表すか又はAHFについての良好な予後を表す参照プロフィールとして保存するか、或いは
(iii b)(ii b)のプロフィールを、AHFの予知若しくは診断を表すか又はAHFについての不良な予後を表す参照プロフィールとして保存する
ことを含んでなる。
本発明は更に、対象者におけるクイエシンQ6のベースライン又は参照値を確立する方法を提供し、ここで該方法は以下:
(i)対象者がAHFに罹患していない種々の時点で対象者からのサンプル中のクイエシンQ6量を測定し、そして
(ii)対象者についてのクイエシンQ6のベースライン又は参照値である対象者の範囲又は平均値を算出する
ことを含んでなる。
呼吸困難はAHFにより引き起こされ得るが、AHF以外又はAHFに無関係の原因、例えばCOPD、肺炎、心房細動、中毒などに起因する他の患者にも存在する。本発明による診断方法は、呼吸困難の徴候を示す患者集団において特に良好に機能し、クイエシンQ6レベルに基づくAHFの特異的診断を可能にする。よって、本発明の上記方法のいずれか1つの好適な実施形態において、対象者は、呼吸困難の徴候を示すか又は心不全の病歴を有する患者集団の一部を形成する。
本明細書中で教示される方法において、クイエシンQ6量並びに/或いは1以上の他のバイオマーカーの有無及び/又は量は、任意の適切な技術、例えば当該分野で公知であり得る技術により測定し得る。
1つの実施形態において、クイエシンQ6量並びに/或いは1以上の他のバイオマーカーの有無及び/又は量は、それぞれ、クイエシンQ6及び/又はそのフラグメントに特異的に結合し得る結合性物質並びに前記1以上の他のバイオマーカーに特異的に結合し得る結合性物質を用いて測定し得る。
1つの更なる実施形態において、クイエシンQ6量並びに/或いは1以上の他のバイオマーカーの有無及び/又は量は、イムノアッセイ技術、例えば直接ELISA、間接ELISA、サンドウィッチELISA、競合ELISA、マルチプレックスELISA、ラジオイムノアッセイ(RIA)又はELISPOT技術を使用して、又は質量分析法を使用して、クロマトグラフィー法を使用して、又は前記方法の組合せを使用して測定する。
1つの実施形態は、対象者におけるAHFの予知、診断及び/又は予後予測のためのキットを提供し、該キットは以下:
(i)対象者からのサンプル中のクイエシンQ6量を測定する手段;及び
(ii)クイエシンQ6量の参照値、又は該参照値を確立する手段(ここで、該参照値はAHFの既知の予知、診断及び/又は予後を表す)
を含んでなる。
1つの更なる実施形態は、対象者におけるAHFを予知、診断及び/又は予後予測するためのキットを提供し、該キットは、対象者からのサンプル中のクイエシンQ6量を測定する手段と、対象者からのサンプル中の、AHFの予知、診断及び/又は予後予測に有用な1以上の他のバイオマーカーの有無及び/又は量を測定する手段とを含んでなる。
(i)対象者からのサンプル中のクイエシンQ6量を測定する手段;
(ii)対象者からのサンプル中の、AHFの予知、診断及び/又は予後予測に有用な1以上の他のバイオマーカーの有無及び/又は量を測定する手段;
(iii)任意に、クイエシンQ6量並びに前記1以上の他のバイオマーカーの有無及び/又は量についての対象者のプロフィールを確立する手段;及び
(iv)クイエシンQ6量並びに前記1以上の他のバイオマーカーの有無及び/又は量についての参照プロフィール、又は該参照プロフィールを確立する手段(ここで、該参照プロフィールは既知のAHF予知、診断及び/又は予後を表す)
を含んでなる。
上記キットの1つの更なる実施形態において、クイエシンQ6量並びに/或いは1以上の他のバイオマーカーの有無及び/又は量を測定する手段は、それぞれ、クイエシンQ6及び/又はそのフラグメントに特異的に結合し得る1以上の結合性物質並びに前記1以上の他のバイオマーカーに特異的に結合し得る1以上の結合性物質を含み得る。
1つの実施形態において、前記1以上の結合性物質のいずれか1つは、有利には、固相又は固体支持体に固定され得る。
上記キットの1つの更なる実施形態において、クイエシンQ6量並びに/或いは1以上の他のバイオマーカーの有無及び/又は量を測定する手段は、イムノアッセイ技術、例えば直接ELISA、間接ELISA、サンドウィッチELISA、競合ELISA、マルチプレックスELISA、ラジオイムノアッセイ(RIA)若しくはELISPOT技術を用いてもよいし、又は質量分析技術を用いてもよいし、又はクロマトグラフィー技術を用いてもよいし、前記技術の組合せを用いてもよい。
(a)クイエシンQ6及び/又はそのフラグメントに特異的に結合し得る1以上の結合性物質;
(b)好ましくは、既知量又は既知濃度のクイエシンQ6及び/又はそのフラグメント(例えば、コントロール、標準及び/又はキャリブレータとして使用するため);
(c)好ましくは、クイエシンQ6量の参照値又は該参照値を確立する手段
を含んでなる、AHFの予知、診断及び/又は予後予測のためのキットを開示する。
前記(a)及び/又は(c)の成分は、本明細書中他の箇所で教示されるように、適切に標識化され得る。
(a)クイエシンQ6及び/又はそのフラグメントに特異的に結合し得る1以上の結合性物質;
(b)AHFの予知、診断及び/又は予後予測に有用な1以上の他のバイオマーカーに特異的に結合し得る1以上の結合性物質、ここで、好ましくは、該他のバイオマーカーはBNP、プロBNP、NTプロBNP及びそれらのいずれかのフラグメントからなる群より選択される;
(c)好ましくは、既知量又は既知濃度のクイエシンQ6及び/又はそのフラグメント並びに既知量又は既知濃度の前記1以上の他のバイオマーカー(例えば、コントロール、標準及び/又はキャリブレータとして使用するため);
(d)好ましくは、クイエシンQ6量並びに前記1以上の他のバイオマーカーの有無及び/又は量についての参照プロフィール、或いは該参照プロフィールを確立する手段
を含んでなる、AHFの予知、診断及び/又は予後予測のためのキットを開示する。
前記(a)、(b)及び/又は(c)の成分は、本明細書中他の箇所で教示されるように、適切に標識化され得る
例えば、更なる観点は、以下:
(a)クイエシンQ6及び/又はそのフラグメント、好ましくは既知量又は既知濃度の前記クイエシンQ6及び/又はそのフラグメント;及び
(b)任意に、そして好ましくは、AHFの予知、診断及び/又は予後予測に有用な1以上の他のバイオマーカー、好ましくは既知量又は既知濃度の前記1以上の他のバイオマーカー(好ましくは、前記他のバイオマーカーは、BNP、プロBNP、NTプロBNP及びそれらのいずれかのフラグメントからなる群より選択される)
を含んでなる、タンパク質、ポリペプチド又はペプチドのアレイ又はマイクロアレイに関する。
(a)クイエシンQ6及び/又はそのフラグメントに特異的に結合し得る1以上の結合性物質、好ましくは既知量又は既知濃度の前記結合性物質;及び
(b)任意に、そして好ましくは、AHFの予知、診断及び/又は予後予測に有用な1以上の他のバイオマーカーに特異的に結合し得る1以上の結合性物質、好ましくは既知量又は既知濃度の前記結合性物質(好ましくは、該他のバイオマーカーは、BNP、プロBNP、NTプロBNP及びそれらのいずれかのフラグメントからなる群より選択される)
を含んでなる結合性物質のアレイ又はマイクロアレイに関する。
よって、関連する1つの観点は、以下:
(i)対象者からのサンプルを取得する手段、
(ii)前記サンプル中のクイエシンQ6量を測定する手段、及び
(iii)サンプル中で測定したクイエシンQ6量を視覚化する手段
を含んでなる、対象者からのサンプル中のクイエシンQ6量を測定し得るポータブル検査デバイスを提供する。
1つの実施形態において、前記視覚化手段は、サンプル中のクイエシンQ6量が或る閾値レベルを上回っているか若しくは下回っているか及び/又はサンプル中のクイエシンQ6量がクイエシンQ6量の参照値から逸脱しているか否かを表示することができる。ここで、前記参照値は、(本明細書の他の箇所で教示するように)既知のAHF予知、診断及び/又は予後を表す。よって、1つの実施形態において、前記ポータブル検査デバイスは、適切には、前記参照値又は該参照値を確立する手段もまた含んでなり得る。
1つの実施形態において、ポータブル検査デバイスは、AHF無しの予知若しくは診断を表すか又はAHFについての良好な予後を表す参照値を含んでなるか、或いは該参照値を確立する手段を含んでなり、前記参照値と比較して上昇した対象者からのサンプル中のクイエシンQ6量が、対象者がAHFを有しているか若しくはAHFを有するリスクにあることを示すか又は対象者におけるAHFについての不良な予後を示す。
− 近位端近傍のサンプル適用ゾーン;
− サンプル適用ゾーンに対して遠位の反応ゾーン;及び
− 反応ゾーンに対して遠位の検出ゾーン;
− 任意に、クイエシンQ6タンパク質又はペプチドフラグメントを含んでなるコントロール標準、
を含んでなり、このことにより、前記支持体は、適用ゾーンに適用された流体サンプルの近位端から遠位端への向きのフローを導くキャピラリー特性を有し、
− 任意に、より粘性のサンプルのキャピラリーフローを向上させる流体供給源を含んでなる。
1つの実施形態において、反応ゾーンは、閾値量のクイエシンQ6-特異的結合性分子接合体が検出ゾーンに移動することを防止するに十分な量で、1以上のクイエシンQ6-特異的結合性分子捕捉バンドを追加的に含んでなり得る。代替の実施形態において、前記デバイスは、捕捉したクイエシンQ6-特異的結合性分子接合体の量を閾値と比較する手段を追加的に含んでなる。
これら及び更なる観点並びに好適な実施形態は、以下の章及び添付の特許請求の範囲に記載される。
本明細書中で使用する場合、単数形「a」、「an」及び「the」は、文脈がそうでないことを明示していなければ、単数及び複数の両方の指示対象を含む。
本明細書で使用する場合、用語「含んでなる」及び「から構成される」は、「含む」又は「含有する」と同義であり、非排他的(inclusive)又は非限定的(open-ended)であって、追加の、言及していない部材、要素又は方法工程を排除しない。明らかなことに、用語 含んでなる はまた、その形態の1つとして、完結表現(closed wording)「からなる」を包含する。
本明細書中で使用する用語「約」は、パラメータ、量、時間的期間などのような測定可能な値に言及する場合、そのばらつき/変動が開示発明における実施に適切である限りにおいて、特定値のばらつき及び特定値からの変動、詳細には±10%以下、好ましくは±5%以下、より好ましくは±1%以下、なおより好ましくは±0.1%以下の特定値のばらつき及び特定値からの変動を包含することを意味する。修飾語「約」が言及する値はまた、それ自体具体的に開示され、好ましいものとしても開示されていると理解すべきである。
特に明記しない限り、本発明の開示に使用される全ての用語(技術用語及び科学用語を含む)は、本発明が属する分野における通常の知識を有する者が一般的に理解する意味を有する。更なるガイダンスのために、本発明の教示をより良く理解するための用語の定義が含まれうる。
「急性心不全」又は「急性非代償性心不全」は、緊急治療の必要性をもたらす、異常な心機能に続発性の症状及び徴候の迅速な発症として定義され得る。AHFは、新規に(心機能不全が以前に知られていない患者における急性心不全の新たな発症)又はCHFの急性代償不全として急性に起こり得る。
本研究のような研究では、CHF集団は、CHF患者が急性代償不全を有さず、このため当該研究又は調査に使用される臨床サンプルを採取する時点でEDに対してそのことを説明しない点で、AHF集団と異なり得る。しかし、慢性心不全患者は、容易に代償不全になり、「急性心不全」に至り得る。
本研究のような研究において、心不全を有さない呼吸困難患者の集団は、例えば、AHF集団と同様な症状をEDに対して説明するが、呼吸困難の原因は急性非代償性心不全とは無関係である患者を含んでなり得る。代表例は、COPD又は肺炎の患者である。このような患者は、従来の診断手段を用いる最終診断を特に複雑にし得る基礎心不全の病歴を有していてもよいし、有していなくてもよい。
用語「診断」とは、一般に、症状及び徴候に基づいて及び/又は種々の診断手順の結果から(例えば、診断する疾患又は病状に特徴的な1以上のバイオマーカーの存否及び/又は量を知ることから)対象者における疾患又は病状を認識、決定又は結論付けるプロセス又は行為をいう。
本明細書中で使用する場合、対象者における「AHFの診断」は、特に、対象者がAHFを有していること、よって対象者がAHFを有していると診断されることを意味し得る。対象者における「AHF無しの診断」は、特に、対象者がAHFを有していないこと、よって対象者がAHFを有していないと診断されることを意味し得る。対象者は、本明細書中で教示されるように、AHFを連想させる1以上の従来の症状又は徴候を示すにも関わらず、AHFを有していないと診断され得る。
AHFの良好な予後は、一般に、好ましくは受容可能な期間内での、AHFからの満足のいく部分的な又は完全な回復の予見を包含し得る。AHFの良好な予後は、より通常には、好ましくは所定の期間内での、心不全状態の更なる悪化(worsening又はaggravating)のないことの予見を包含し得る。
AHFの不良な予後は、一般に、低水準の回復及び/又は不満足に遅い回復の予見を包含し得、AHFの回復が実質的にないことやAHFの更なる悪化の予見さえも包含し得る。
本明細書中で使用する用語「対象者」又は「患者」は、代表的には、ヒトを指称するが、非-ヒト動物、好ましくは温血動物、より好ましくは哺乳動物、例えば非-ヒト霊長類、げっ歯類、イヌ科動物、ネコ科動物、ウマ科動物、ヒツジ科動物、ブタ科動物などへの言及も包含し得る。
用語「量(quantigy又はamount)」及び「レベル」は、同義であり、当該分野において広く十分に理解される。本明細書中で使用するこの用語は、特に、サンプル中の分子若しくは分析物の絶対的な定量又はサンプル中の分子若しくは分析物の相対的な定量、すなわち、別の値に対する(例えば、本明細書中で教示される参照値に対する)か若しくはバイオマーカーのベースライン発現を示す値の範囲に対する相対的な定量をいい得る。これらの値又は範囲は、1人の患者又は患者群から取得することができる。
サンプル中の分子又は分析物の相対量は、有利には、前記別の値に対する、例えば本明細書中で教示する参照値に対する、増加若しくは減少として表し得るか又は何倍増若しくは何倍減として表し得る。第1及び第2のパラメータ(例えば、第1及び第2の量)の間の相対的比較の実施は、先ず、前記第1及び第2のパラメータの絶対値を決定してもよいが、そうしないでも済む。例えば、或る測定方法は、前記第1及び第2のパラメータについての定量化可能な読取値(例えば、シグナル強度)を作ることができる。ここで、前記読取値は前記パラメータの値の関数であり、該読取値を直接比較して第1のパラメータ 対 第2のパラメータについての相対値を作ることができ、実際、読取値を先ずそれぞれのパラメータの絶対値に変換する必要はない。
この用語は、それが見出される任意の生物、特に動物、好ましくは脊椎動物、より好ましくは哺乳動物(ヒト及び非-ヒト哺乳動物を含む)、更により好ましくはヒトの前記タンパク質及びポリペプチドを包含する。
この用語は、特に、天然型配列を有する前記タンパク質及びポリペプチド、すなわち、その一次配列が天然に見出されるか又は天然に由来するクイエシンQ6のものと同じである前記タンパク質及びポリペプチドを包含する。当業者は、クイエシンQ6の天然型配列が異なる種間で当該種間での遺伝的分岐(genetic divergence)に起因して異なり得ることを理解する。更に、クイエシンQ6の天然型配列は、所定の種内での通常の遺伝的多様性(変動)に起因して、同種の異なる個体間又は異なる個体内で異なり得る。また、クイエシンQ6の天然型配列は、転写後又は翻訳後修飾に起因して、同種の異なる個体間で又は異なる個体内でさえ異なり得る。したがって、天然に見出されるか又は天然に由来する全てのクイエシンQ6配列を「天然型」とみなす。
例示のクイエシンQ6としては、Uniprot/Swissprot (http://www.expasy.org/)アクセッション番号O00391 (2009年1月20日改訂のエントリーバージョン69;2001年6月1日作成の配列バージョン3)(オルタナティブスプライシングに起因して生じたイソフォーム1(アクセッション番号O00391-1)及びイソフォーム2(O00391-2)を含む)で記載される一次アミノ酸配列を有するヒトクイエシンQ6が挙げられるが、これに限定されない。クイエシンQ6の前記イソフォーム1及び2の配列を、それぞれ図1A (配列番号1)及び図1B (配列番号2)に示す。図2は、前記イソフォーム1及び2の間でのC末端領域の相違を説明する。当業者はまた、前記配列がクイエシンQ6の前駆体のものであり、プロセッシングされて成熟クイエシンQ6から切り離される部分を含み得ることも理解する。例えば、イソフォーム1の配列を参照して、Uniprot/Swissprotエントリーは、アミノ酸1〜29から構成されるシグナルペプチドを特定する。例示のヒトクイエシンQ6もまた、特に、Coppockら,1998 (Genomics 54: 460-468)に記載されている。
本発明の方法、キット及びデバイスの好適な実施形態において、クイエシンQ6タンパク質の検出は、血漿サンプルにおいて行われる。このことは、循環性クイエシンQ6タンパク質が、この循環性形態がクイエシンQ6のイソフォーム1又は2の可溶形態に対応するのか分解産物に対応するかに関わらず、検出されることを意味する。1つの好適な実施形態において、検出されるクイエシンQ6タンパク質又はフラグメントは、膜結合型でも細胞結合型でもない。用語「血漿」は、細胞を含有しないが、栄養素、糖類、タンパク質、ミネラル、酵素などを含有する、血球(赤血球、白血球、血小板など)がその中に懸濁される血液の無色な水状液を定義する。
この用語は、それが見出される任意の生物、特に動物、好ましくは脊椎動物、より好ましくは哺乳動物(ヒト及び非-ヒト哺乳動物を含む)、更により好ましくはヒトに由来するペプチドを包含する。
本明細書中で使用する呼称 プロBNP、NTプロBNP又はBNPは、生物、器官、組織又は細胞の一部を形成するとき、生物学的サンプルの一部を形成するとき、及びそのような供給源から少なくとも部分的に単離されたときのそれぞれのペプチドを包含する。この用語はまた、組換え又は合成手段により製造されたときのペプチドをも包含する。
NP_002512の配列を図3A(配列番号3)に、NP_002512からのプロBNPの例示配列を図3B(配列番号4)に示す。例示のヒトNTプロBNPペプチドとしては、前記NIH Entrez Proteinアクセッション番号NP_002512で記載されているナトリウム利尿ペプチド前駆体Bプレプロタンパク質配列のアミノ酸27位〜102位のペプチドが挙げられるが、これに限定されない。NP_002512からのNTプロBNPの例示配列を図3Cに示す(配列番号5)。例示のヒトBNPペプチドとしては、前記NIH Entrez Proteinアクセッション番号NP_002512で記載されているナトリウム利尿ペプチド前駆体Bプレプロタンパク質配列のアミノ酸103位〜134位のペプチドが挙げられるが、これに限定されない。NP_002512からのBNPの例示配列を図3Dに示す(配列番号6)。ヒトプレプロBNP由来ペプチド(プロBNP、NTプロBNP及びBNPを含む)の更なる例証については、Sudohら,1989 (Biochem Biophys Res Commun 159: 1427-1434)も参照。臨床実務におけるナトリウム利尿ペプチドレベルの使用に関しては、Maiselら,2008 (Eur J Heart Fail 10(9): 824-39)及びMillerら,2007 (Biomarkers Med 1(4): 503-512)もまた参照。
1つの実施形態において、クイエシンQ6及びそのフラグメント、又はプロBNP、NTプロBNP、BNP及びそのフラグメントは、ヒトであり得る。すなわち、その一次配列は、天然に存在するヒトクイエシンQ6及びそのフラグメント又はプロBNP、NTプロBNP、BNP及びそのフラグメントの一次配列又はそれらの中に存在する対応する一次配列と同じであり得る。よって、この関係で限定詞「ヒト」は、起源又は供給源よりむしろ、それぞれのタンパク質、ポリペプチド、ペプチド又はフラグメントの一次配列に関する。例えば、このようなタンパク質、ポリペプチド、ペプチド又はフラグメントは、ヒト対象者のサンプル中に存在していてもよいし、該サンプルから単離されていてもよく、又は他の手段(例えば、組換え発現、無細胞翻訳又は非生物学的ペプチド合成により)取得してもよい。
1つの実施形態において、クイエシンQ6のフラグメントは、成熟全長クイエシンQ6(例えば、イソフォーム1又は2)と比較して、N-末端及び/又はC-末端が1〜約20アミノ酸、例えば、1〜約15アミノ酸、又は1〜約10アミノ酸、又は1〜約5アミノ酸だけ短縮化されていてもよい。
1つの実施形態において、プロBNP、NTプロBNP又はBNPのフラグメントは、プロBNP、NTプロBNP又はBNPと比較して、N-末端及び/又はC-末端が1〜約20アミノ酸、例えば1〜約15アミノ酸、又は1〜約10アミノ酸、又は1〜約5アミノ酸だけ短縮化されていてもよい。例示として、バイオマーカーとして有用なプロBNP、NTプロBNP及びBNPフラグメントは、WO 2004/094460に開示されている。
例えば、このようなタンパク質分解は、適切な物理的、化学的及び/又は酵素的因子により、例えば、プロテイナーゼ、好ましくはエンドプロテイナーゼにより、すなわちタンパク質、ポリペプチド又はペプチド鎖で内部切断するプロテアーゼにより行なわれてもよい。適切なエンドプロテイナーゼの非限定的なリストには、セリンプロテイナーゼ(EC 3.4.21)、スレオニンプロテイナーゼ(EC 3.4.25)、システインプロテイナーゼ(EC 3.4.22)、アスパラギン酸プロテイナーゼ(EC 3.4.23)、メタロプロテイナーゼ(EC 3.4.24)及びグルタミン酸プロテイナーゼが含まれる。
例示の非限定的エンドプロテイナーゼとしては、トリプシン、キモトリプシン、エラスターゼ、Lysobacter enzymogenesエンドプロテアーゼLys-C、Staphylococcus aureusエンドプロテアーゼGlu-C(エンドペプチダーゼV8)又はClostridium histolyticumエンドプロテイナーゼArg-C(クロストリパイン)が挙げられる。更なる公知の酵素又は未同定の酵素も使用し得る;当業者は、所望のペプチド形態を獲得するために、切断特異性及び頻度に基づいて、適切なプロテアーゼを選択することができる。
他に、化学試剤をタンパク質分解に使用してもよい。例えば、CNBrはMetで切断することができ;BNPS-skatoleはTrpで切断することができる。
処理条件、例えば、タンパク質濃度、酵素又は化学試剤濃度、pH、緩衝液、温度、時間は、用いる酵素又は化学試剤に依存して、当業者が決定することができる。
特定の成分(例えば、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド又はそのフラグメント)に言及するときの用語「単離(された)」は、一般に、その成分が、その天然環境の1以上の他の成分から分離して存在していること−例えば、該他の成分から分離されているか又は該他の成分から分離して調製されていること−をいう。例えば、単離されたヒト又は動物タンパク質、ポリペプチド、ペプチド又はフラグメントは、それが天然に存在するヒト又は動物の身体から分離して存在する。
本明細書を通じて使用される用語「特異的に結合する」は、物質(本明細書中で「特異的-結合性物質」とも指称される)が、他のランダムな分子若しくは無関係な分子を実質的に排除して、任意に構造的に関連する他の分子をも実質的に排除して、1以上の所望の分子又は分析物に、例えば1以上の興味対象のタンパク質、ポリペプチド若しくはペプチド又はそのフラグメントに結合することを意味する。
好ましくは、物質は、意図する標的に、KA ≧ 1×106 M-1、より好ましくはKA ≧ 1×107 M-1、尚より好ましくはKA ≧ 1×108 M-1、更により好ましくはKA ≧ 1×109 M-1、尚更により好ましくはKA ≧ 1×1010 M-1又はKA ≧ 1×1011 M-1(ここで、KA = [SBA_T]/[SBA][T]、SBAは特異的結合性物質を示し、Tは意図する標的を示す)の結合親和定数(KA)で結合し得る。KAの決定は、当該分野で公知の方法により、例えば、平衡透析及びScatchardプロット分析を用いて行うことができる。
本明細書中で使用する場合、用語「抗体」はその最も広義の意味で使用され、一般には任意の免疫学的結合性物質をいう。この用語は、具体的には、インタクトなモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、少なくとも2つのインタクトな抗体から形成される多価(例えば、二価、三価又はそれ以上の価)及び/又は多特異性抗体(例えば、二特異性又はそれ以上の特異性の抗体)、並びに所望の生物学的活性(特に、興味対象の抗原に特異的に結合する能力)を示す限りにおいて抗体フラグメント及びそのようなフラグメントの多価及び/又は多特異性複合物を包含する。用語「抗体」は、免疫化を含んでなる方法により生成される抗体を含むのみならず、興味対象の抗原上のエピトープに特異的に結合し得る少なくとも1つの相補性決定領域(CDR)を含んで作製される任意のポリペプチド、例えば組換え発現ポリペプチドもまた含む。よって、この用語は、インビトロで作製されるかインビボで産生されるかに関わらず、前記のような分子に適用される。
1つの実施形態において、抗体は、ポリクローナル抗体、例えば抗血清又はそれから精製された(例えばアフィニティー精製された)免疫グロブリンであり得る。
別の1つの好適な実施形態において、抗体は、モノクローナル抗体又はモノクローナル抗体の混合物であり得る。モノクローナル抗体は、特定の抗原又は抗原内の特定のエピトープをより高い選択性及び再現性で標的することができる。
例として、モノクローナル抗体は、Kohlerら,1975 (Nature 256: 495)により最初に記載されたハイブリドーマ法により作製してもよく、組換えDNA法(例えば、米国特許第4,816,567号のような)により作製してもよいが、これらに限定されない。モノクローナル抗体はまた、ファージ抗体ライブラリから、例えばClacksonら,1991(Nature 352: 624-628)及びMarksら,1991 (J Mol Biol 222: 581-597)により記載される技術を用いて単離されてもよい。
用語 抗体 は、任意の動物種、好ましくは脊椎動物種(例えば、トリ及び哺乳動物を含む)を起源とする抗体又は該動物種に由来する1以上の部分を含んでなる抗体を包含する。限定されないが、抗体はニワトリ、シチメンチョウ、ガン若しくはガチョウ、アヒル若しくはカモ、ホロホロ鳥、ウズラ又はキジであり得る。限定されないが、抗体はまた、ヒト、ネズミ(例えば、マウス、ラットなど)、ロバ、ウサギ、ヤギ、ヒツジ、モルモット、ラクダ(例えば、Camelus bactrianus及びCamelus dromaderius)、ラマ(例えば、Lama paccos、Lama glama又はLama vicugna)又はウマであり得る。
ポリクローナル抗体及びモノクローナル抗体並びにそれらのフラグメントの製造方法は当該分野で周知であり、組換え抗体又はそのフラグメントの製造方法も同様である(例えば、Harlow及びLane,「Antibodies: A Laboratory Manual」,Cold Spring Harbour Laboratory, New York, 1988;Harlow及びLane,「Using Antibodies: A Laboratory Manual」, Cold Spring Harbour Laboratory, New York, 1999, ISBN 0879695447;「Monoclonal Antibodies: A Manual of Techniques」,Zola編, CRC Press 1987, ISBN 0849364760;「Monoclonal Antibodies: A Practical Approach」,Dean & Shepherd編, Oxford University Press 2000, ISBN 0199637229;Methods in Molecular Biology, vol. 248: 「Antibody Engineering: Methods and Protocols」, Lo編, humana Press 2004, ISBN 1588290921を参照)。
(任意に提示キャリアに付着されていてもよい)本明細書中に教示されるクイエシンQ6フラグメントを用いて(すなわち、免疫抗原として用いて)、動物、例えば非-ヒト動物(例えば、実験動物又は家禽)を免疫する方法も提供される。免疫及び免疫血清からの抗体試剤の調製は、それ自体周知であり、本明細書の他の箇所で言及した文献に記載されている。免疫する動物には、任意の動物種、好ましくは温血種、より好ましくは脊椎動物種(例えば、トリ及び哺乳動物を含む)が包含され得る。限定されないが、抗体はニワトリ、シチメンチョウ、ガン若しくはガチョウ、アヒル若しくはカモ、ホロホロ鳥、ウズラ又はキジであり得る。限定されないが、抗体はまた、ヒト、ネズミ(例えば、マウス、ラットなど)、ロバ、ウサギ、ヤギ、ヒツジ、モルモット、ラクダ、ラマ又はウマであり得る。
本明細書中で教示した免疫により取得されたか又は取得され得る免疫血清は、本明細書中に開示されたクイエシンQ6フラグメントの1以上に特異的に結合する抗体試剤を生じさせるに特に有用であり得る。
本発明はまた、(a)本明細書中で教示される1以上のクイエシンQ6フラグメントに結合するが、(b)クイエシンQ6及び/又は他のフラグメントには実質的に結合しない、特異的結合性物質を選択する方法を教示する。好都合には、この方法は、(b)の下で、所望でないクイエシンQ6分子と交差反応又は交差結合する結合性物質を抜き取るか又は除去することに基づき得る。このような抜き取りは、種々の親和性分離法(例えば、アフィニティークロマトグラフィー、親和性固相抽出、親和性磁性抽出など)によって、当該分野で公知のように容易に実施し得る。
例えば、このような方法には、イムノアッセイ法、質量分析法若しくはクロマトグラフィー法又はそれらの組合せが含まれ得る。
用語「イムノアッセイ」とは、一般に、例えばサンプル中の1以上の興味対象の分子又は分析物を検出するための公知の方法をいう。ここで、興味対象の分子又は分析物に関するイムノアッセイの特異性は、特異的結合性物質(一般には抗体)と興味対象の分子又は分析物との間の特異的結合により与えられる。
イムノアッセイ技術には、直接ELISA(酵素結合免疫吸着アッセイ)、間接ELISA、サンドウィッチELISA、競合ELISA、マルチプレックスELISA、ラジオイムノアッセイ(RIA)、ELISPOT技術及び当該分野で公知の他の類似技術が含まれるが、これらに限定されない。これらイムノアッセイ法の原理は、当該分野で公知である(例えばJohn R. Crowther,「The ELISA Guidebook」,第1版,Humana Press 2000, ISBN 0896037282)。
更に、質量分析法がバイオマーカーの測定に適切である。
一般に、ペプチドの質量、好ましくは断片化及び/又は選択したペプチドの(部分的)アミノ酸配列に関する正確な情報を取得することができる任意の質量分析(MS)技術(例えば、タンデム質量分析ではMS/MS;ポストソース分解ではTOF MS)が本明細書中で有用である。適切なペプチドMS及びMS/MS技術及びシステムは、それ自体周知であり(例えば、Methods in Molecular Biology, vol. 146: 「Mass Spectrometry of Proteins and Peptides」,Chapman編, Humana Press 2000, ISBN 089603609x;Biemann 1990. Methods Enzymol 193: 455-79;又はMethods in Enzymology, vol. 402: 「Biological Mass Spectrometry」,Burlingame編, Academic Press 2005, ISBN 9780121828073を参照)、本明細書中で使用し得る。
1つの実施形態において、質量分析によるバイオマーカーの検出及び定量には、多重反応モニタリング(MRM)、例えば、とりわけKuhnら,2004 (Proteomics 4: 1175-86)により記載されたものが含まれ得る。
1つの実施形態において、MSペプチド分析法は、有利には、例えば下記に記載されるクロマトグラフィー法その他の方法のような、上流のペプチド又はタンパク質の分離法又は断片化法と組み合わされ得る。
本明細書中で使用するクロマトグラフィーは、好ましくはカラムクロマトグラフィー(すなわち、固定相がカラム中に堆積又は詰められている)、好ましくは液体クロマトグラフィー、より好ましくはHPLCであり得る。クロマトグラフィーの詳細は当該分野で周知であるが、更なるガイダンスのためには、例えばMeyer M., 1998, ISBN: 047198373X及び「Practical HPLC Methodology and Applications」, Bidlingmeyer, B. A., John Wiley & Sons Inc., 1993を参照。
1つの実施形態において、クロマトグラフィー(一次元、二次元又は三次元クロマトグラフィーを含む)は、更なるペプチド分析法、例えば本明細書中の他の箇所に記載されるような下流の質量分析との組合せで、ペプチド断片化法として使用し得る。
本開示においてバイオマーカーの測定のために、上記の分析方法のいずれかと任意に組み合せて、更なるペプチド又はポリペプチドの分離法、同定法又は定量法を使用し得る。このような方法としては、限定されないが、化学抽出分配、等電点電気泳動(IEF)(キャピラリ等電点電気泳動(CIEF)、キャピラリ等速電気泳動(CITP)、キャピラリ通電クロマトグラフィー(CEC)などを含む)、一次元ポリアクリルアミドゲル電気泳動(PAGE)、二次元ポリアクリルアミドゲル電気泳動(2D-PAGE)、キャピラリゲル電気泳動(CGE)、キャピラリゾーン電気泳動(CZE)、ミセル動電クロマトグラフィー(MEKC)、フリーフロー電気泳動(FFE)などが挙げられる。
例えば、別の参照値は、AHFを有するリスク(例えば、異常に上昇したリスク)の予知 対 AHFを有するリスク無し又は通常のリスクの予知を表し得る。別の1つの例では、別の参照値は、AHFを有する異なる程度のリスクの予知を表し得る。
更なる1つの例では、別の参照値は、AHFの診断 対 AHF無しの診断(例えば、健常、CHF又はAHFからの回復の診断など)を表すことがある。別の1つの例では、別の参照値は、種々の重篤度のAHFの診断を表し得る。
更に別の1つの例では、別の参照値は、AHFについての良好な予後 対 AHFについての不良な予後を表し得る。更なる1つの例では、別の参照値は、AHFについて様々に(varyingly)好ましい又は好ましくない予後を表し得る。
クイエシンQ6量についての参照値は、他のバイオマーカーについて以前に使用された公知の手順に従って確立され得る。
例えば、特定のAHF予知、診断及び/又は予後についてのクイエシンQ6量の参照値は、前記特定のAHF予知、診断及び/又は予後により特徴付けられる(すなわち、前記AHFの予知、診断及び/又は予後が当てはまる)一個体又は個体集団からのサンプル中のクイエシンQ6量を決定することによって確立され得る。このような集団は、限定されないが、≧2、≧10、≧100、又は数百以上でさえある個体を含んでなり得る。
1つの実施形態において、本明細書中で意図されるような参照値は、クイエシンQ6の絶対量を知らせ得る。別の実施形態において、検査した対象者からのサンプル中のクイエシンQ6量は、(例えば、増減又は何倍増減に関して)参照値と直接比較して決定され得る。有利には、このことにより、クイエシンQ6のそれぞれの絶対量を先ず決定する必要なく、対象者からのサンプル中のクイエシンQ6量と参照値との比較(換言すれば、参照値に関する、対象者からのサンプル中のクイエシンQ6の相対的量の測定)が可能になり得る。
心不全又は他の心血管障害を有する患者において、バイオマーカーは、しばしば、臨床状態を追跡するために使用される。例えば、BNP又はNT-プロBNPレベルは、New York Heart Association Class (NYHAC)の症状分類体系に従う。症状の障害が大きいほど、同一群内の患者の平均BNPレベルは高い。しかし、クラス対応範囲は、広範な基礎原因疾患に順応するために非常に大きい。
マーカーは、症状(の出現、悪化又は改善)の変化無しに顕著に変動、増加又は減少し得る。そのような事象において、マーカー変化は、症状の変化に先行し、症状変化より高感度の尺度になる。治療的介入をより早く開始することができ、症状の悪化を待っているより効果的であり得る。症状は、(限定されないが):息切れ、下肢の浮腫、心悸亢進、疲労などであり得る。より良性の病状での早期介入は自宅で安全に実施され得る。このことは、緊急治療室での重度に悪化した患者の治療からの大幅な改善である。
したがって、本発明はまた、或る患者におけるクイエシンQ6マーカーレベルの有意な変化(臨床状態の変化(悪化又は改善)を示す)を決定する方法又はアルゴリズムを提供する。
1つの実施形態において、本方法は、そのような参照値を確立する工程を含み得る。1つの実施形態において、本キット及びデバイスは、特定のAHF予知、診断及び/又は予後についてのクイエシンQ6量の参照値を確立する手段を含み得る。この手段は、例えば、前記特定のAHF予知、診断及び/又は予後により特徴付けられる1以上の個体からの1以上のサンプル(例えば、別個の又はプールしたサンプル)を含んでなり得る。
第1の値の第2の値からの「逸脱(又は、ズレ;deviation)」は、一般に、いずれの方向(例えば、増加:第1の値>第2の値;又は減少:第1の値<第2の値)も、いずれの程度の変化も包含し得る。
例えば、逸脱は、限定されないが、比較がなされる第2の値に対し、第1の値の少なくとも約10%(約0.9倍以下)又は少なくとも約20%(約0.8倍以下)又は少なくとも約30%(約0.7倍以下)又は少なくとも約40%(約0.6倍以下)又は少なくとも約50%(約0.5倍以下)又は少なくとも約60%(約0.4倍以下)又は少なくとも約70%(約0.3倍以下)又は少なくとも約80%(約0.2倍以下)又は少なくとも約90%(約0.1倍以下)の減少を包含し得る。
例えば、逸脱は、限定されないが、比較がなされる第2の値に対し、第1の値の少なくとも約10%(約1.1倍以上)又は少なくとも約20%(約1.2倍以上)又は少なくとも約30%(約1.3倍以上)又は少なくとも約40%(約1.4倍以上)又は少なくとも約50%(約1.5倍以上)又は少なくとも約60%(約1.6倍以上)又は少なくとも約70%(約1.7倍以上)又は少なくとも約80%(約1.8倍以上)又は少なくとも約90%(約1.9倍以上)又は少なくとも約100%(約2倍以上)又は少なくとも約150%(約2.5倍以上)又は少なくとも約200%(約3倍以上)又は少なくとも約500%(約6倍以上)又は少なくとも約700%(約8倍以上)などの増加を包含し得る。
1つの更なる実施形態において、観察された変化が所定の閾値又はカットオフを超える場合、逸脱と結論付けられる。このような閾値又はカットオフは、予知、診断及び/又は予後の方法の選択された感度及び/又は特異性、例えば、少なくとも50%又は少なくとも60%又は少なくとも70%又は少なくとも80%又は少なくとも85%又は少なくとも90%又は少なくとも95%の感度及び/又は特異性を提供するように、当該分野で周知のように選択し得る。
対象者からのサンプル中のクイエシンQ6量と或るAHF予知、診断及び/又は予後を表す参照値との間に逸脱を発見したとき、該逸脱は、対象者におけるAHFの予知、診断及び/又は予後が該参照値によって表されるものとは異なるとの結論を示すか又は該結論に帰され得る。
対象者からのサンプル中のクイエシンQ6量と或るAHF予知、診断及び/又は予後を表す参照値との間に逸脱を発見しないとき、該逸脱が無いことは、対象者におけるAHFの予知、診断及び/又は予後が該参照値によって表されるものと実質的に同じであるという結論を示すか又は該結論に帰され得る。
2以上の異なるバイオマーカーが対象者において決定されるとき、それぞれの有無及び/又は量は、バイオマーカープロフィールとして共に表され得る。測定された各バイオマーカーについての値は、該プロフィールの一部をなす。本明細書中で使用する場合、用語「プロフィール」は、興味対象の病状に、例えば特定のAHF予知、診断及び/又は予後に関連する独特な特徴又は特性を表す任意のデータ組を含む。この用語は、一般に、とりわけ核酸プロフィール、例えば遺伝子型プロフィール(興味対象の病状と関連する1以上の遺伝子の遺伝子型を表す遺伝子型データ組)、遺伝子コピー数プロフィール(興味対象の病状に関連する1以上の遺伝子の増幅又は欠失を表す遺伝子コピー数データ組)、遺伝子発現プロフィール(興味対象の病状に関連する1以上の遺伝子のmRNAレベルを表す遺伝子発現データ組)、DNAメチル化プロフィール(興味対象の病状に関連する1以上の遺伝子のDNAメチル化レベルを表すメチル化データ組)、並びにタンパク質、ポリペプチド又はペプチドプロフィール、例えばタンパク質発現プロフィール(興味対象の病状と関連する1以上のタンパク質のレベルを表すタンパク質発現データ組)、タンパク質活性化プロフィール(興味対象の病状と関連する1以上のタンパク質の活性化又は不活化を表すデータ組)、タンパク質修飾プロフィール(興味対象の病状と関連する1以上のタンパク質の修飾を表すデータ組)、タンパク質切断プロフィール(興味対象の病状と関連する1以上のタンパク質のタンパク質分解性切断を表すデータ組)、並びにこれらの任意の組合せを包含する。
よって、例えば、独特な参照プロフィールは、AHFを有するリスク(例えば、異常に上昇したリスク)の予知 対 AHFを有する通常のリスク又はリスク無しの予知を表し得る。別の1つの例では、独特な参照プロフィールは、AHFを有するリスクの種々の程度の予知を表し得る。
更なる1つの例では、独特な参照プロフィールは、AHFの診断 対 AHF無しの診断(例えば、健常、CHF又はAHFからの回復などの診断)を表すことができる。別の1つの例では、独特な参照プロフィールは、種々の重症度のAHFの診断を表し得る。
更に別の例では、独特な参照プロフィールは、AHFについての良好な予後 対 AHFについての不良な予後を表し得る。更なる1つの例では、独特な参照プロフィールは、AHFについての種々の好ましいか又は好ましくない予後を表し得る。
例えば、特定のAHF予知、診断及び/又は予後についてのクイエシンQ6量並びに1以上の他のAHF-関連バイオマーカーの有無及び/又は量の参照プロフィールは、前記特定のAHF予知、診断及び/又は予後によって特徴付けられる(すなわち、前記AHFの予知、診断及び/又は予後が当てはまる)1個体又は個体集団からのサンプル中でプロフィールを決定することにより確立し得る。このような集団は、限定されないが、≧2、≧10、≧100又は数百以上の個体さえ含んでなり得る。
よって、例示として、AHFの診断 対 AHF無しの診断についての参照プロフィールは、それぞれAHFを有していると診断されたか又はAHFを有していないと診断された1個体又は個体集団からのサンプル中でバイオマーカープロフィールを決定することによって確立し得る。
1つの実施形態において、本方法は、そのような参照プロフィールを確立する工程を含み得る。1つの実施形態において、本キット及びデバイスは、特定のAHF予知、診断及び/又は予後についての参照プロフィールを確立する手段を含み得る。このような手段は、例えば、前記特定のAHF予知、診断及び/又は予後によって特徴付けられる1以上の個体からの1以上のサンプル(例えば、別個の又はプールされたサンプル)を含んでなり得る。
サンプルプロフィールと或るAHF予知、診断及び/又は予後を代表する参照プロフィールとの間に逸脱を発見すると、該逸脱は、前記対象者におけるAHFの予知、診断及び/又は予後が参照プロフィールによって代表されるものとは異なるとの結論を示しているか又は該結論に帰され得る。
サンプルプロフィールと或るAHF予知、診断及び/又は予後を代表する参照プロフィールとの間に逸脱を発見しないとき、該逸脱が無いことは、前記対象者におけるAHFの予知、診断及び/又は予後が参照プロフィールによって代表されるものと実質的に同じであるとの結論を示しているか又は該結論に帰され得る。
キット又はデバイスは、臨床セッティングにおいてはベッドサイドデバイスの形態であり得、或いは緊急救命チームのセッティングにおいては、例えば救急車その他の救急救命移動手段の装置若しくはチームの装置の一部として又は応急処置キットの一部としてであり得る。診断キット又はデバイスは、医師、応急救助者(first-aid helper)又は看護士を補助して、観察中の患者が急性心不全を発症しているかどうかを決定することができ、その後適切な行為又は処置を行うことができる。
a)対象者からサンプルを取得する手段
b)前記サンプル中のクイエシンQ6マーカーの量を測定し、前記サンプル中のクイエシンQ6マーカー量が或る閾値レベル又は値を下回っているのか又は上回っているのか(このことが、対象者が急性心不全に罹患しているのか否かを示す)を視覚化する手段又はデバイス
を含んでなる。
本発明の実施形態のいずれかにおいて、キット又はデバイスは、c)人が急性心不全に罹患しているのか否かを示す、医師、病院の救急部又は応急処置所と直接連絡する手段を追加的に含んでなることができる。
用語「閾値レベル又は値」又は「参照値」は、同義語として互換的に使用され、本明細書で定義されるとおりである。この用語はまた、高度に類似する疾患状態を有する個々の患者又は患者群において決定される或る範囲のベースライン(例えば「乾燥重量(dry weight)」)値であり得る。
本発明のキットにおいて、対象者からサンプルを取得する手段(a)は、当該分野で公知の対象者からサンプルを取得する任意の手段であり得る。例えば血液サンプルを取得するための例は当該分野で公知であり、任意の種類の指又は皮膚プリック又はランセットベースのデバイスであり得る。これらは、基本的には、皮膚に穴を開け、皮膚から放出される血液小滴を生じさせる。尿サンプルを使用するとき、対象者からサンプルを取得する手段は、当該分野で公知の家庭用妊娠検査で使用されるもののような吸収ストリップの形態であり得る。同様に、唾液サンプルは、当該分野で公知の綿球(mount swab)を用いて取得し得る。採血デバイス又は他の採取デバイスの例は、例えば、米国特許第4,802,493号、同4,966,159号、同第5,099,857号、同6,095,988号、同5,944,671号、同4,553,541号、同3,760,809号、同5,395,388号、同5,212,879号、同5,630,828号、同5,133,730号、同4,653,513号、同5,368,047号、同5,569,287号、同4,360,016号、同5,413,006号及び米国出願公開2002/1 11565、同2004/0096959、同2005/143713、同2005/137525、同2003/01 53900、同2003/0088191、WO9955232、WO2005/049107、WO2004/060163、WO02/056751、WO02/1 00254、WO2003/022330、WO2004/066822、WO97/46157、WO0l12330、WO2004/039429又はEP0364621、EP0078724、EP1212138、EP0081975又はEP0292928に与えられる。
別の1つの実施形態において、本発明は試剤ストリップを含んでなるデバイスを提供する。このような試剤ストリップは、サンプルで湿らせたとき分析物の存在下に色変化を生じ及び/又は前記サンプル中の当該タンパク質の濃度を示す、1以上の検査パッドを含んでなる。
本発明のキットの1つの好適な実施形態において、サンプル(b)中のタンパク質の量を測定する手段又はデバイス(1)は固体支持体(7)であり、該固体支持体は近位端(2)及び遠位端(3)を有し、以下:
− 近位端近傍のサンプル適用ゾーン(4)、
− サンプル適用ゾーン(4)に対して遠位の反応ゾーン(5)、及び
− 反応ゾーン(5)に対して遠位の検出ゾーン(6)
を含んでなり(これにより、該支持体は、適用ゾーンに適用された流体サンプルの近位端から遠位端への向きのフローを導くキャピラリー特性を有する)、
− 任意に、前記手段又はデバイスは、例えばコンテナ、点滴ピペット又はバイアル中に、粘性サンプルがストリップを通ってより容易に流動することを可能にする流体の供給源も含んでなる。
サンプルは、サンプル適用ゾーン(4)に適用されると、キャピラリーフローにより反応ゾーン(5)へ向かって移動する。サンプル中に存在するクイエシンQ6が標識クイエシンQ6結合性分子接合体と反応し、そうして形成された複合体がキャピラリーフローにより検出ゾーン(6)へ運ばれる。検出ゾーン(6)は、その上にクイエシンQ6結合性分子が不可逆的に固定されており、複合体を捕捉し固定化する。これにより、接合体の局所的な濃縮を生じ、視覚化が可能になる。
本明細書に記載されるような2つのゾーン(5及び6)(一方のゾーンは非固定接合体を有し、他方のゾーンは固定された捕捉抗体を有する)は、一般に、重ならない。それらは、バンドの無い固体支持体の介在ギャップ有り又は無しで、隣接して配置され得る。バンドは、固体支持体上に、試剤が固定される必要があるかないかに依存して、任意の手段、例えば吸収、吸着、被覆、共有結合又は乾燥により配置され得る。
サンプル中のクイエシンQ6タンパク質の量が或る閾値レベル又は値を下回っているか又は上回っているかを決定する別の可能性は、サンプル中に存在する全てのクイエシンQ6タンパク質を捕捉する一次捕捉抗体を、固相に結合されると或るシグナル又は色を発生する標識二次抗体と組み合せて使用することである。次いで、色又はシグナルの強度は参照の色又はシグナルチャートと比較され得る。シグナル強度が或る閾値シグナルを上回ると、検査は陽性である(すなわちAHFが切迫している)ことを示す。或いは、色又はシグナルの量又は強度は、例えば光吸収センサ又は光照射メータを含んでなる電子デバイスで測定することができる。これにより、生成されたシグナル強度又は色吸収の数値が得られ、その数値は、閾値を下回っていれば陰性結果の形で、閾値を上回っていれば陽性結果の形で対象者に提示され得る。
この実施形態は、患者におけるクイエシンQ6レベルを経時的にモニターするときに該当する。
或いは、参照値は、AHFに罹患している対象者において決定することができる。この参照値は、個人的なクイエシンQ6「リスクレベル」、すなわちAHF事象に曝されているか又は間もなく曝されることを示すクイエシンQ6レベルを示す。このリスクレベルは、疾患進行のモニタリング又は処置効果の評価に関して興味深い。リスクレベルと比較してのクイエシンQ6レベルの減少は、患者が快方に向かっている病状を示す。
類似の検査もまた、例えば乳ガン検出用及び心臓リスクの家庭検査を考慮したCRP-タンパク質レベル検出用に知られている。後者の検査は、検査結果の検査機関への送付を包含し、そこで結果が技術専門家又は医療専門家により解釈される。このような患者病状の電話又はインターネットベースの診断は、当然のことながら、ほとんどのキットで可能であり、推奨される。なぜならば、検査結果の解釈はしばしば、検査の実施より重要であるからである。サンプル中に存在するタンパク質レベルの数値を提供する上記のような電子デバイスを使用するとき、この値は、当然のことながら、電話、携帯電話、衛生電話、電子メール、インターネットその他の通信手段で容易に通信でき、急性心不全に罹患していることを病院、医師又は応急処置チームに警告することができる。このようなシステムの非限定的例は、米国特許第6,482,156号に開示されている。
図14A及びBは、本発明の検査ストリップの1つの好適な実施形態を示す。ストリップ(1)は近位端(2)及び遠位端(3)を含む。サンプル適用ゾーン(4)は近位端(2)に設けられ、反応ゾーン(5)はそれに隣接し、検出ゾーン(6)は遠位端(3)近傍にある。サンプルは、固体支持体(7)上、適用ゾーン(4)に配置され、毛管作用により検出ゾーン(6)へ移行される。サンプル適用ゾーン(4)の領域を除き固体支持体(7)の片面又は両面を覆う保護層(8)を備えていてもよい。この保護層は、サンプル及びストリップの化学成分を汚染及び蒸発から保護する。固体支持体(7)のサンプル適用ゾーン(4)と毛管接触する1以上の吸収パッド(9)が、必要に応じて、サンプルを吸収及び放出し得る;このパッド(9)は、代表的には、サンプル適用ゾーン(4)と同じか又は反対の固体支持体(7)表面に配置される。図14Bにおいて、吸収パッド(9)はサンプル適用ゾーン(4)の部分である。1以上の他の吸収パッド(9')が、固体支持体(7)の検出ゾーン(6)に毛管接触して、いずれの捕捉バンド(11)、(14)に対しても遠位に配置され得る。これらパッド(9')は、固体支持体を通過した流体を吸収し得る;このパッド(9')は、代表的には、サンプル適用ゾーン(4)と同じか又は反対の固体支持体(7)表面に配置される。固体支持体(7)は、毛管作用特性を有する任意の適切な材料から作製され得、上記のものと同じ特性を有し得る。これは、物質(例えば非固定化クイエシンQ6結合性分子)を支持することもできるべきであり、該物質は、水和したとき、毛管作用による流体フローによって、固体支持体を横切って移動することができる。
クイエシンQ6結合性分子接合体には、検出が容易となるように、検出剤が結合又は付着していてもよい。ラボ検出剤の例としては、限定されないが、発光標識;色素のような比色標識;蛍光標識;又は電気活性剤(例えば、フェロシアン化物)のような化学標識;酵素;放射活性標識;又は高周波標識が挙げられる。より一般的には、検出剤は粒子である。本発明の実施に有用な粒子の例としては、限定されないが、コロイド金粒子;コロイドイオウ粒子;コロイドセレン粒子;コロイド硫酸バリウム粒子;コロイド硫酸鉄粒子;ヨウ素酸金属粒子;ハロゲン化銀粒子;シリカ粒子;コロイド金属(含水)酸化物粒子;コロイド硫化金属粒子;コロイドセレン化鉛粒子;コロイドセレン化カドミウム粒子;コロイド金属リン酸塩粒子;コロイド金属フェライト粒子;有機層又は無機層で被覆した上記コロイド粒子のいずれか;タンパク質又はペプチド分子;リポソーム;又はポリスチレンラテックスビーズのような有機ポリマーラテックス粒子が挙げられる。好ましい粒子は、コロイド金粒子である。コロイド金は、G. Frens, 1973 Nature Physical Science, 241:20 (1973)に概説される方法のような任意の従来手段により作られ得る。代替法は、米国特許第5,578,577号、同第5,141,850号;同第4,775,636号;同第4,853,335号;同第4,859,612号;同第5,079,172号;同第5,202,267号;同第5,514,602号;同第5,616,467号;同第5,681,775号に記載され得る。
1以上のコントロールバンド(12)が固体支持体(7)上に存在してもよい。例えば、非固定化ペプチド(12)がサンプル適用ゾーン(4)に存在し得る。このペプチドは、クイエシンQ6結合性分子のいずれのバンド(13)及び(14)とも交差反応しない。サンプルを適用すると、該サンプルは反応ゾーン(5)に向かって移動する。そこには、抗-ペプチド抗体接合体が配置されており(13)、ペプチド-抗体複合体が形成される。該複合体は、検出ゾーン(6)に向かって移動し、そこには抗-ペプチド抗体の捕捉バンド(14)が固体支持体上に固定されており、これが該複合体を濃縮して視覚化を可能にする。コントロール捕捉バンド(14)は、クイエシンQ6捕捉バンド(11)とは別個に位置し、したがって、陽性反応は、アッセイが正しく機能したときに、検出反応とは別個に観察することができる。
アッセイの間、サンプルからのクイエシンQ6とクイエシンQ6結合性分子接合体とは、固体支持体(7)上で結合して濃縮する。この結合により、固体支持体(7)の背景色を超えて視覚化され得る化合物の濃縮が生じる。化合物は、反応及び検出ゾーンに結合した抗体、検出剤、その他の粒子を含む上記化合物の組合せから形成され得る。実施される特定のアッセイに基づいて、反応及び検出ゾーンは、線形又は非線形であり得る適切なダイナミックレンジを達成するように選択して提供され得る。
サンプル中のクイエシンQ6の存在及び/又は濃度は、クイエシンQ6結合性分子が固定されているチップを使用する表面プラズモン共鳴(SPR)、蛍光共鳴エネルギー転移(FRET)、生物発光共鳴エネルギー転移(BRET)、蛍光消光、蛍光偏光測定又は当該分野で公知のその他の手段により測定することができる。記載された結合アッセイのいずれも、サンプル中のクイエシンQ6の存在及び/又は濃度を決定するために使用することができる。そうするために、使用する結合アッセイに適切に、クイエシンQ6結合性分子をサンプルと反応させ、クイエシンQ6濃度を測定する。アッセイを検証及び較正するため、種々の濃度の標準クイエシンQ6及び/又はクイエシンQ6結合性分子を使用するコントロール反応を実施することができる。固相アッセイを用いる場合、インキュベーション後、洗浄工程を行って未結合のクイエシンQ6を除去する。所定の標識に適切なように結合クイエシンQ6を測定する(例えば、シンチレーションカウンティング、蛍光、抗体-色素など)。定性的な結果が望ましい場合、コントロール及び異なる濃度は必要ないかもしれない。当然のことながら、クイエシンQ6及びクイエシンQ6結合性分子の役割は、切り替わり得る;当業者は、クイエシンQ6結合性分子が種々の濃度のサンプルに適用されるように方法を適合させ得る。
本発明の1つの観点によれば、クイエシンQ6結合性分子は、別の物質(例えばプローブ結合性パートナー)での検出を可能にするタグで標識される。このタグは、例えば、ビオチン、ストレプトアビジン、his-タグ、mycタグ、マルトース、マルトース結合性タンパク質又は結合性パートナーを有する当該分野で公知の任意の種類のタグであり得る。プローブ:結合性パートナーの組合せに利用できる組の例は、任意であり、例えばビオチン:ストレプトアビジン、his-タグ:金属イオン(例えばNi2+)、マルトース:マルトース結合性タンパク質を含む。
本明細書中で規定される試剤ストリップは、以下のように使用される。簡潔には、本発明の試剤ストリップの1以上の検査パッド領域をサンプル中に浸漬させるか、又は少量のサンプルを試剤ストリップに検査パッド領域上で適用する。視覚的に又は反射率測定により分析することができる発色が、短時間のうちに、通常0.5〜10分以内に、試剤ストリップ上で起こる。クイエシンQ6との反応に際しての検査パッド上の試剤領域の色変化は、好ましくは、患者サンプル中のクイエシンQ6濃度に正比例する。検査パッド上で発色する色強度は、視覚的に又は例えば反射率ベースの読取器により決定されてもよい。検査パッド領域での発色を参照の色と比較して、サンプル中に存在するクイエシンQ6量の推定値を決定する。検査パッド上で発色する色強度を、補正因子の適用により決定した或る範囲のクイエシンQ6濃度に対応する少なくとも1つ、好ましくは少なくとも2つの標準色斑と比較する。
別の1つの実施形態において、本発明はまた、サンプル中のクイエシンQ6の存在を測定する検査パッドに関する。好ましくは、該検査パッドは、クイエシンQ6と相互作用して測定可能な応答、好ましくは視覚的に又は装置により測定可能な応答を生じることができる試剤組成物が組み込まれたキャリアマトリクスを含んでなる。別の好適な実施形態において、本発明は、試剤ストリップ上、好ましくは本明細書に規定する試剤ストリップ上での使用のための、本明細書の規定による検査パッドを提供する。
本キット中の特異的結合性物質、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、バイオマーカーなどは、種々の形態、例えば、凍結乾燥形態、溶液中の遊離形態又は固相上に固定化された形態であり得る。これらは、例えば、マルチウェルプレート中に又はアレイ若しくはマイクロアレイとして提供されてもよいし、或いは別個に及び/又は個別に包装されていてもよい。これらは、本明細書中に教示されるように適切に標識されていてもよい。前記キットは、例えば、イムノアッセイ、ELISAアッセイ、質量分析アッセイなどのような本発明のアッセイ法の実施に特に適切であり得る。
上記の観点及び実施形態は以下の非限定的例によって更に支持される。
実施例1:AHFの新たなバイオマーカーの発見のためのMASSTERMIND発見プラットフォーム
MASSTERMIND実験セットアップ
バイオマーカー発見のために、本発明者らは、以前に公表したCOFRADICTM技術プラットフォーム(とりわけ、WO 02/077016及びGevaertら,2003, Nat Biotechnol 21(5): 566-9に実質的に記載されたもの)を使用するタンパク質レベルの質量分析による検出を用いて、タンパク質発現の変化を分析した。
市販のアフィニティー-ベースクロマトグラフィーカラム(例えばAgilent Technologies)を使用して、全ての血漿サンプルから最も豊富なタンパク質を枯渇させた。ウェスタンブロット分析を使用して、アルブミン及び免疫グロブリンG(IgG)の枯渇効率を検証した。サンプルは、MASStermind分析用に、標準のN-末端COFRADIC手順に従って調製した。サンプル及びコントロールは、全てのトリプシン切断ペプチドのC末端での18O/16Oのトリプシン媒介組込みによって区別して標識した。N-末端ペプチドの選別後、NanoLC分離及びその後のMALDI標的上への直接スポッティングを行った。MALDI-TOF/TOF装置を使用してMSスペクトルを作成した。社内で開発したバイオインフォマティクスツール(例えば、ピーク認識及び脱同位体(deisotoping)、分析物と参照との間の比の決定、クラスタリング、サンプル間整列(inter-sample alignment)及び広範なサンプル品質制御のためのツール)を用いて、MSスペクトルを分析した。一旦、全てのサンプルを整列させ、品質を制御した後に、統計分析を開始した。
2つの集団を弁別する差別的特徴(又はペプチド)について選択するために、2つの異なる統計尺度を適用した:一基準分類(one-rule classifier)及びマイクロアレイの有意性分析(Significance Analysis of Microarrays;SAM)分析。概念上、差別的特徴を見出す最も単純な機械学習技術は、一基準分類である。この方法では、形式「比<Xであれば、クラス=A、そうでなければクラス=B」という単純なルールが各特徴について作成される。データについてのこのルールの性能は、leave-one-out cross-validationにより決定される。この分析で低い誤差率を示す特徴は、首位のバイオマーカー候補である。SAM (Tusherら,2001, PNAS 98: 5116-5121)は、False Discovery Rate (FDR)を制御しつつ、最も差別的な特徴を選択する方法である。この方法は、元来は、マイクロアレイ実験での使用のために開発され、Pronotaのデータマトリクスに適用可能であることが証明されている。一基準分類に優るこの方法の主たる利点は、これが、両クラス間の比の差が減少し始め、実験からのランダムノイズが候補マーカーの実際のレベルを不明瞭にし始めたとき、依然として有用な傾向を取り出すことが可能であることである。SAMは、2クラスのサンプル間の特徴の比の相対的差異を算出する。このスコアの有意性を推定するため、全サンプルのクラス割当の順序を変えて再スコア付けすることによって帰無分布を推定する。これにより、偶然によって同定されたタンパク質又は遺伝子産物の割合であるfalse discovery rate(FDR)の信頼性のある推定が得られる。MSシグナルの強度及び欠測値(missing value)について最適に説明するため、異なるデータサブセットに対して、これら値についての種々のカットオフを用いて完全なSAM分析を行った。全ての結果を最終報告にまとめた。
MASSTERCLASS実験セットアップ
MASSterclassアッセイは最終段階(end-stage)のペプチド定量系として安定な同位体を用いる標的化タンデム質量分析を使用する(多重反応モニタリング(MRM)及び単一反応モニタリング(SRM)とも呼ばれる)。標的化ペプチドは、興味対象の特異タンパク質に特異的(すなわち、プロテオティピック(proteotypic))である。すなわち、ペプチドの測定量は、元のサンプル中のタンパク質の量に直接関係する。複合サンプル中のバイオマーカー定量に必要とされる特異性及び感度に到達するためには、ペプチド分画を最終段階の定量工程より前に行う。
− 血漿/血清サンプル
− ProteoPrepスピンカラム(Sigma Aldrich)を用いる抗-アルブミン抗体及び抗-IgG抗体でのアフィニティー捕捉を使用するヒトアルブミン及びIgGの涸渇(タンパク質レベルでの複雑性の低減)
− 既知量のアイソトープ標識ペプチドのスパイキング。このペプチドは、興味対象のプロテオティピックペプチドと同じアミノ酸配列を有する(代表的には、1つのアイソトープ標識アミノ酸がその中に組み込まれて、質量差を生じている)。分子質量に基づく最終段階の定量工程の間を除きプロセス全体の間、該標識ペプチドは、内因性ペプチドと同一の化学的及びクロマトグラフィー的挙動を有する。
− トリプシン消化物。涸渇血清/血漿サンプル中のタンパク質を、トリプシンを用いてペプチドに消化する。この酵素は、リジン又はアルギニンのC-末端側にプロリンが存在する場合を除き、リジン及びアルギニンのC-末端でタンパク質を切断する。消化の前に、タンパク質を煮沸により変性させる。これによって、タンパク質分子は、37℃にて16時間のインキュベーションの間、トリプシン活性が接近可能になる。
− 第2のペプチド-ベース分画:フェニルHPLC (XBridge Phenyl;Waters)は、ペプチドを、ペプチド配列中に存在するアミノ酸の疎水性及び芳香性に従って分離する。バックエンド(back-end)C18分離との直交性は、上昇したpH値(pH10)でカラムを稼動することによって達成される。Gilarら,2005, J Sep Sci 28(14): 1694-1703により証明されているように、pHは、RP-HPLCにおけるペプチド選択性を変化させる遥かに最も強烈なパラメータである。興味対象の各ペプチドは、フェニルカラムから、合成ペプチドホモログを用いるタンパク質アッセイ開発の間に決定される特定の保持時間で溶出する。サンプル分離のバッチ処理前に9つの標準ペプチドの混合物を分離する外部コントロール系の使用により、保持時間のシフトを補正するための画分採集の調整が可能になる。分画の程度は、サンプル中のタンパク質濃度及び該サンプルの複雑性に依存する。
− モニターするペプチドのm/zと該ペプチドのモニターするフラグメントのm/zとの組合せは、トランジッションと呼ばれる。このプロセスは、1回の実験の間に複数のトランジッションについて行うことができる。内因性ペプチド(分析物)及びその対応するアイソトープ標識合成ペプチド(内部標準)の両方が、同じ保持時間で溶出し、同じLC-MS/MS実験で測定される。
− MASSterclassの読取値は、分析物に特異的なピーク下面積と合成アイソトープ標識アナログ(内部標準)に特異的なピーク下面積との間の比によって規定される。MASSterclass読取値は、サンプル中の元々のタンパク質濃度に直接関連する。したがって、MASSterclass読取値は、種々のサンプル間及びサンプル群間で比較することができる。
− 結合/平衡緩衝液として20mM NH4HCO3を使用した以外は、製造業者のプロトコルに従って、25μLの血漿を、ヒトアルブミン及びIgG (ProteoPrepスピンカラム;Sigma Aldrich)の涸渇に供する。
− 涸渇サンプル(225μL)を15分間95℃にて変性させ、氷上で直ぐに冷却する。
− 500fmolのアイソトープ標識ペプチド(カスタムメイド「Heavy AQUA」ペプチド;Thermo Scientific)をサンプル中にスパイクする。
− 20μgトリプシンをサンプルに加え、16時間37℃にて消化する。
− 消化サンプルを先ず溶媒A(0.1%ギ酸)中で1/8希釈し、次いで250amol/μLのアイソトープ標識された興味対象の全ペプチド(カスタムメイド「Heavy AQUA」ペプチド;Thermo Scientific)を含有する同じ溶媒中で1/20希釈した。
− 逆相NanoLCをMRM/SRMモードのオンラインMS/MSと併せて使用して20μLの最終希釈物を分離した:
− カラム:PepMap C18、75μm I.D.×25cm L, 100Å孔径、5μm粒子サイズ
− 溶媒A:0.1%ギ酸
− 溶媒B:80%アセトニトリル、0.1%ギ酸
− 勾配:30分;2%〜55%溶媒B
− MRMモードのMS/MS:方法は、分析物及び合成標識ペプチドのトランジッションを含有する。
− 使用したトランジッションは、タンパク質アッセイ開発の間に実験的に決定して選択した。
− 興味対象のペプチドの決定した保持時間の3分前から始まり該保持時間の3分後に終わる期間、興味対象のトランジッションの各々を測定した。これにより、確実に、各ピークが少なくとも15のデータ点を有した。
− LCQuanソフトウェア(Thermo Scientific)を使用して生データを分析し定量した:同じC18保持時間での分析物(=クイエシンQ6ペプチド)ピーク下面積及び内部標準(標識合成クイエシンQ6ペプチド)ピーク下面積を、自動ピーク検出により決定した。これらを手作業で照合した。
− MASSterclass読取値は、分析物ピーク面積と内部標準ピーク面積との比により規定した。
測定した比はペプチドの示差量である。換言すれば、比は、規格化したペプチド濃度である。ペプチド濃度は、質量分析計で測定した比に比例する。
特異タンパク質の診断正確性を決定するために統計分析を行う。そうするため、サンプルクラスを2つ一組で比較する。分析は、2つのサンプル集団を弁別するタンパク質の能力を規定する。
受信者動作特性(ROC)曲線の曲線下面積(AUC)を測定することによって、特異タンパク質の診断正確性を決定した(Sullivan Pepe M, The statistical evaluation of medical tests for classification and prediction. 1993 Oxford University Press New York)。ノンパラメトリックアプローチ、すなわちブートストラッピング(Efron B, Tibshirani RJ. Nonparametric confidence intervals. An introduction to the bootstrap. Monographs on statistics and applied probability. 1993;57:75-90 Chapman & Hall New York)を使用して、AUCの推定値及び信頼区間も計算した。臨床変量及び疾患背景に対するマーカーレベルの依存性を、χ2検定及びウィルコクソンの順位和検定を用いて分析した(Cleophas T.J.,ら,2006, Statistics Applied to Clinical Trials, Springer)。
MASStermindプロテオミック発見プラットフォームを使用して、患者血漿において直接、豊富性が低い新規なAHFタンパク質バイオマーカー候補を発見した。救急部への入院時に10人のAHF患者から先を見越して採集し、退院直前にも採集した連続血漿サンプルを、健常個体から採集した年齢及び性別が適合するコントロールサンプルと共に分析した(図4)。AHF患者のタンパク質プロフィールを入院時と退院時で比較することにより、治療モニタリング及び退院決定のためのバイオマーカー候補がもたらされる一方、AHF患者と健常適合コントロールとの比較により、診断正確性を改善する新たなバイオマーカー候補が提供される。
MASStermind手順後、AHF集団と健常集団とを及び/又は入院サンプルと退院サンプルとを弁別する示差的特徴を、種々の統計学的尺度により選択した(SAM及び一基準分類)。3群間で一貫したレベル変化を示す100を超えるタンパク質を同定した。そのうち60%までが古典的血漿タンパク質のウィンドウに入らない。クイエシンQ6は、AHF-健常比較についての高いSAM及び一基準分類スコアに基づいて選択した。全て同じ傾向を示す、クイエシンQ6の3つの異なるペプチドを同定した:AHF患者(入院時及び退院時)で、より高いレベル及び健常コントロール対象者で、より低いレベル(図5を参照)。メジアン倍差(Median fold difference)は、全てのペプチドについて1.5〜2倍である。
この3つの特異クイエシンQ6ペプチドは全て、当該タンパク質のN-末端細胞外領域に位置し、よって両クイエシンイソフォームに対応し得る(図1及び2)。
4A:臨床サンプルは、3つの異なる医療センターで、4つの異なる集団から先を見越して採集した:
− 救急部(ED)を受診した急性心不全に関連する呼吸困難患者、入院時(A)及び退院直前(B)にサンプル採取
− EDに受診した急性心不全とは無関係の呼吸困難患者(D)
− 安定な慢性心不全患者(C)
− 年齢及び性別が適合する健常ボランティア(H)
含まれる全ての患者について、包括的症例記録ファイル(CRF)は、医学的背景、入院診断及び投薬についての詳細を完備した。
図6は、各集団の40サンプルにおいてMASSterclassにより測定したクイエシンQ6の相対レベルを説明する。診断的問題について、AHF患者の退院時のレベルは関連性が低いので、残りの分析については排除した。AHF患者間のメジアンクイエシンQ6レベルは、AHFを有さない呼吸困難患者より1.5倍高かった。全ての患者集団においてサンプルの50%を表す四分位範囲は、1.5倍未満である。対照的に、AHF患者とD患者との間でのBNPについてのメジアン倍差はずっと大きく8倍までであるが、四分位範囲はこれら集団において8倍でもある。顕著なことに、D患者におけるクイエシンQ6レベルは、安定なCHF患者及び健常コントロールにおけるレベルに非常に匹敵している一方、BNPについてはAHF患者とCHF患者との間に有意差はない。
図6中のボックスプロットは、文献のデータと一致して、BNPが急性心不全のマーカーというよりむしろ心不全のマーカーであることを示す。これは、緊急のAHF診断に関して重大な問題を構成する。なぜなら、BNPレベルは、HF背景を有する患者において既に上昇しているからである。対照的に、クイエシンQ6は、AHF患者 対 安定なCHF患者の間で有意で一貫した差異を確かに示す;CHF患者におけるレベルは、健常対象者におけるレベルに匹敵する。よって、ROC曲線分析もまた、AHF患者と安定な慢性心不全患者との弁別におけるクイエシンQ6の遥かに優れた性能を証明している:メジアンAUC:0.83、BNPについての0.65と比較(図8)。よって、クイエシンQ6は、基礎の心不全病歴に依存しない急性心不全事象の特異マーカーである。
含まれる全ての患者について、包括的症例記録ファイル(CRF)は、医学的背景、入院診断及び投薬についての詳細を完備した(表1)。
実施可能な新たなAHF診断ツールを得るためには、良好な全体的診断性能に加えて、現在使用されている標準バイオマーカーを超える付加価値を示すことが鍵となる。性別、年齢、ボディマスインデックス、腎臓機能、心不全の病歴及び他の心臓疾患の病歴のような幾つかの因子が、循環性ナトリウム利尿ペプチドレベルに影響することが示されている。したがって、上記パラメータに依存しないマーカーは、迅速なAHF診断に追加的価値を有する。150人の呼吸困難患者及び80人の安定なCHF患者のこのデータセットにより、種々の臨床パラメータに対するクイエシンQ6の依存性についての最初の洞察が可能になる。
クイエシンQ6及び(NT-プロ)BNPレベルに対する臨床変量及び疾患背景の影響を、χ2統計量及びウィルコクソン順位和検定を用いて分析した。年齢、腎不全(クレアチニンレベルに基づく)、左心室駆出率、入院時診断、心不全及び冠動脈疾患の病歴並びにCOPD/喘息共存症(全てナトリウム利尿ペプチドレベルに影響することが知られている)を調べた。表4に、クイエシンQ6及び(NT-プロ)BNPの最も重要な関連性をまとめる。呼吸困難集団におけるAHF/AHF無しの診断以外、クイエシンQ6は列挙したパラメータのいずれとも有意な関連性を検出されない。このことは、クイエシンQ6レベルが、現行のデータセットにおいて、心臓の急性代償不全以外のいずれのパラメータによっても影響されないことを示唆している。
図13は、AHF集団、呼吸困難非-AHF集団及び安定なCHF集団において、MASSterclassにより測定したクイエシンQ6の相対的レベルを説明する。AHF患者間のメジアンクイエシンQ6レベルは、AHFを有さない呼吸困難患者より1,5倍高かった。顕著なことに、呼吸困難非AHF患者におけるクイエシンQ6レベルは、安定なCHF患者におけるレベルに非常に匹敵している一方で、BNPのベースラインレベルは、安定なCHF患者で上昇している。
Claims (43)
- 対象者における急性心不全(AHF)の診断、予知及び/又は予後予測を補助するデータの取得方法であって、該方法の検査段階が、対象者からのサンプル中のクイエシンQ6量を測定することを含んでなる方法。
- 以下の工程:
(i)対象者からのサンプル中のクイエシンQ6量を測定する工程;
(ii)(i)で測定したクイエシンQ6量を、既知のAHF診断、予知及び/又は予後を表すクイエシンQ6量参照値と比較する工程;
(iii)(i)で測定したクイエシンQ6量の参照値からの逸脱又は逸脱無しを発見する工程;
を含んでなる請求項1に記載の方法。 - AHF無しの診断又は予知を表すか又はAHFについての良好な予後を表す参照値と比較して対象者からのサンプル中の上昇したクイエシンQ6量が、対象者がAHFを有しているか若しくはAHFを有するリスクにあることを示すか、又は対象者におけるAHFについての不良な予後を示す、請求項1又は2に記載の方法。
- 感度及び/又は特異性が少なくとも80%である請求項1〜3のいずれか1項に記載の方法。
- 対象者が、AHFである可能性を示す1以上の症状及び/又は徴候を示している請求項1〜4のいずれか1項に記載の方法。
- 対象者が呼吸困難を示している請求項1〜5のいずれか1項に記載の方法。
- AHFを有しているか又はAHFを有するリスクにある対象者と、慢性心不全(CHF)を有しているか又はCHFを有するリスクにある対象者とを区別するための請求項1〜6のいずれか1項に記載の方法。
- 対象者が心不全の病歴を有している請求項1〜7のいずれか1項に記載の方法。
- (i)請求項1〜8のいずれか1項に記載の方法を、1時点又は2以上の一連の時点で対象者のサンプルに適用し、それにより対象者におけるAHFの診断、予知及び/又は予後を補助するデータを該一連の時点で取得し;
(ii)(i)で取得した前記一連の時点でのデータを比較し;そして
(iii)(i)で取得した前記一連の時点でのデータ間の変化の有無を発見する
ことを含んでなる、対象者におけるAHFの診断、予知及び/又は予後を補助するデータの変化をモニターする方法。 - 対象者におけるAHFの診断、予知及び/又は予後を補助するデータの変化が該対象者の内科療法の経過中にモニターされる請求項9に記載の方法。
- 対象者からのサンプル中の、AHFの診断、予知及び/又は予後予測に有用な1以上の他のバイオマーカーの有無及び/又は量を測定することを更に含んでなる請求項1〜10のいずれか1項に記載の方法。
- 以下の工程:
(i)対象者からのサンプル中のクイエシンQ6量並びに前記1以上の他のバイオマーカーの有無及び/又は量を測定する工程;
(ii)(i)の測定値を、クイエシンQ6量並びに前記1以上の他のバイオマーカーの有無及び/又は量についての対象者のプロフィールの確立に使用する工程;
(iii)(ii)の対象者のプロフィールを、クイエシンQ6量並びに前記1以上の他のバイオマーカーの有無及び/又は量の参照プロフィールと比較する工程であって、該参照プロフィールが既知のAHF診断、予知及び/又は予後を表す、工程;
(iv)(ii)の対象者のプロフィールの参照プロフィールからの逸脱又は逸脱無しを発見する工程;
を含んでなる請求項11に記載の方法。 - AHFの診断、予知及び/又は予後予測に有用な前記他のバイオマーカーがB型ナトリウム利尿ペプチド(BNP)、プロ-B型ナトリウム利尿ペプチド(プロBNP)、アミノ末端プロ-B型ナトリウム利尿ペプチド(NTプロBNP)及びそれらのいずれかのフラグメントからなる群より選択される請求項11又は12に記載の方法。
- 以下:
(i)
(i a)AHFを有さないか、又はAHFを有するリスクにないか、又はAHFについて良好な予後を有する1以上の対象者からの1以上のサンプル中、或いは
(i b)AHFを有しているか、又はAHFを有するリスクにあるか、又はAHFについて不良な予後を有する1以上の対象者からの1以上のサンプル中
のクイエシンQ6量を測定し、そして
(ii)
(ii a)(i a)で測定したクイエシンQ6量を、AHF無しの診断若しくは予知を表すか又はAHFについての良好な予後を表す参照値として保存するか、或いは、
(ii b)(i b)で測定したクイエシンQ6量を、AHFの診断若しくは予知を表すか又はAHFについての不良な予後を表す参照値として保存する
ことを含んでなる、
(a)AHF無しの診断若しくは予知、又はAHFについての良好な予後を表すか、或いは
(b)AHFの診断若しくは予知、又はAHFについての不良な予後を表す、
クイエシンQ6量についての参照値を確立する方法。 - 以下:
(i)
(i a)AHFを有さないか、又はAHFを有するリスクにないか、又はAHFについて良好な予後を有する1以上の対象者からの1以上のサンプル中、或いは
(i b)AHFを有しているか、又はAHFを有するリスクにあるか、又はAHFについて不良な予後を有する1以上の対象者からの1以上のサンプル中
のクイエシンQ6量並びに1以上の他のバイオマーカーの有無及び/又は量を測定し、
(ii)
(ii a)(i a)の測定値を、クイエシンQ6量並びに前記1以上の他のバイオマーカーの有無及び/又は量のプロフィールの作成に使用するか、或いは、
(ii b)(i b)の測定値を、クイエシンQ6量並びに前記1以上の他のバイオマーカーの有無及び/又は量のプロフィールの作成に使用し、
(iii)
(iii a)(ii a)のプロフィールを、AHF無しの診断若しくは予知を表すか又はAHFについての良好な予後を表す参照プロフィールとして保存するか、或いは、
(iii b)(ii b)のプロフィールを、AHFの診断若しくは予知を表すか又はAHFについての不良な予後を表す参照プロフィールとして保存する
ことを含んでなる、クイエシンQ6量並びにAHFの診断、予知及び/又は予後予測に有用な1以上の他のバイオマーカーの有無及び/又は量についての参照プロフィールであって、
(a)AHF無しの診断若しくは予知、又はAHFについての良好な予後を表すか、或いは
(b)AHFの診断若しくは予知、又はAHFについての不良な予後を表す、
参照プロフィールを確立する方法。 - AHFの診断、予知及び/又は予後予測に有用な前記他のバイオマーカーがB型ナトリウム利尿ペプチド(BNP)、プロ-B型ナトリウム利尿ペプチド(プロBNP)、アミノ末端プロ-B型ナトリウム利尿ペプチド(NTプロBNP)及びそれらのいずれかのフラグメントからなる群より選択される、請求項15に記載の方法。
- (i)対象者がAHFに罹患していない種々の時点で対象者からのサンプル中のクイエシンQ6量を測定し、そして
(ii)対象者についてのクイエシンQ6のベースライン又は参照値である数値範囲又は平均値を算出する
ことを含んでなる、対象者におけるクイエシンQ6のベースライン又は参照値を確立する方法。 - 対象者がヒトである請求項1〜17のいずれか1項に記載の方法。
- 対象者が、AHF、COPD若しくは肺炎により引き起こされた呼吸困難の徴候を示す患者集団、又は心不全共存症に罹患した患者集団の一部である請求項1〜18のいずれか1項に記載の方法。
- 心不全共存症が糖尿病、冠動脈疾患、喘息、COPD及び/又は慢性腎疾患である請求項19に記載の方法。
- クイエシンQ6量並びに/或いは1以上の他のバイオマーカーの有無及び/又は量が、それぞれ、クイエシンQ6及び/又はそのフラグメントに特異的に結合し得る結合性物質並びに前記1以上の他のバイオマーカーに特異的に結合し得る結合性物質を用いて測定される請求項1〜20のいずれか1項に記載の方法。
- クイエシンQ6量並びに/或いは1以上の他のバイオマーカーの有無及び/又は量が、直接ELISA、間接ELISA、サンドウィッチELISA、競合ELISA、マルチプレックスELISA、ラジオイムノアッセイ(RIA)若しくはELISPOT技術のようなイムノアッセイ技術、又は質量分析法、又はクロマトグラフィー法、又は前記方法の組合せを用いて測定される請求項1〜21のいずれか1項に記載の方法。
- 参照値が請求項14〜22のいずれかに従って決定される請求項1〜12のいずれか1項に記載の方法。
- 対象者からのサンプル中のクイエシンQ6量を測定する手段を含んでなる、対象者におけるAHFの診断、予知及び/又は予後予測のためのキット。
- (i)対象者からのサンプル中のクイエシンQ6を測定する手段;及び
(ii)既知のAHF診断、予知及び/又は予後を表すクイエシンQ6量の参照値、或いは該参照値を確立する手段
を含んでなる請求項24に記載のキット。 - 対象者からのサンプル中のAHFの診断、予知及び/又は予後予測に有用な1以上の他のバイオマーカーの有無及び/又は量を測定する手段を更に含んでなる請求項24又は25に記載のキット。
- 前記他のバイオマーカーがBNP、プロBNP、NTプロBNP及びそれらのいずれかのフラグメントからなる群より選択される請求項26に記載のキット。
- 以下:
(i)対象者からのサンプル中のクイエシンQ6量を測定する手段;
(ii)対象者からのサンプル中の前記1以上の他のバイオマーカーの有無及び/又は量を測定する手段;
(iii)任意に、クイエシンQ6量並びに前記1以上の他のバイオマーカーの有無及び/又は量についての対象者のプロフィールを確立する手段;及び
(iv)既知のAHF診断、予知及び/又は予後を表す、クイエシンQ6量並びに前記1以上の他のバイオマーカーの有無及び/又は量についての参照プロフィール、又は該参照プロフィールを確立する手段
を含んでなる請求項26又は27に記載のキット。 - クイエシンQ6量並びに/或いは1以上の他のバイオマーカーの有無及び/又は量を測定する手段が、それぞれ、クイエシンQ6及び/又はそのフラグメントに特異的に結合し得る1以上の結合性物質並びに前記1以上の他のバイオマーカーに特異的に結合し得る1以上の結合性物質を含んでなる請求項24〜28のいずれか1項に記載のキット。
- 結合性物質が抗体、アプタマー、タンパク質、ペプチド、ペプチド擬似物質又は小分子である請求項29に記載のキット。
- ポータブルデバイスとして構成されている請求項24〜30のいずれか1項に記載のキット。
- ポータブルデバイスがベッドサイドデバイスである請求項31に記載のキット。
- (a)クイエシンQ6及び/若しくはそのフラグメント;及び
(b)AHFの診断、予知及び/又は予後予測に有用な1以上の他のバイオマーカー
を含んでなる、対象者におけるAHFを診断、予知及び/又は予後予測するための、タンパク質、ポリペプチド又はペプチドのアレイ又はマイクロアレイ。 - クイエシンQ6及び/又はそのフラグメントが既知量又は既知濃度で含まれる請求項33に記載のタンパク質、ポリペプチド又はペプチドのアレイ又はマイクロアレイ。
- 1以上の他のバイオマーカーが既知量又は既知濃度で含まれる請求項33又は34に記載のタンパク質、ポリペプチド又はペプチドのアレイ又はマイクロアレイ。
- 1以上の他のバイオマーカーがBNP、プロBNP、NTプロBNP及びそれらのいずれかのフラグメントからなる群より選択される請求項33〜35のいずれか1項に記載のタンパク質、ポリペプチド又はペプチドのアレイ又はマイクロアレイ。
- (a)クイエシンQ6及び/又はそのフラグメントに特異的に結合し得る1以上の結合性物質;及び
(b)AHFの診断、予知及び/又は予後予測に有用な1以上の他のバイオマーカーに特異的に結合し得る1以上の結合性物質、
を含んでなる、対象者におけるAHFを診断、予知及び/又は予後予測するための、結合性物質のアレイ又はマイクロアレイ。 - 前記クイエシンQ6及び/又はそのフラグメントに特異的に結合し得る結合性物質が既知量又は既知濃度で含まれる請求項37に記載の結合性物質のアレイ又はマイクロアレイ。
- 前記他のバイオマーカーに特異的に結合し得る結合性物質が既知量又は既知濃度で含まれる請求項37又は38に記載の結合性物質のアレイ又はマイクロアレイ。
- 前記他のバイオマーカーがBNP、プロBNP、NTプロBNP及びそれらのいずれかのフラグメントからなる群より選択される請求項37〜39のいずれか1項に記載の結合性物質のアレイ又はマイクロアレイ。
- (i)対象者からサンプルを取得する手段と、
(ii)前記サンプル中のクイエシンQ6量を測定する手段と、
(iii)サンプル中で測定したクイエシンQ6量を視覚化する手段と
(iv)既知のAHF診断、予知及び/又は予後を表すクイエシンQ6量の参照値、或いは該参照値を確立する手段
を含んでなり、前記視覚化手段が、サンプル中のクイエシンQ6量が前記参照値から逸脱しているのかしていないのかを表示することができる、対象者におけるAHFを診断、予知及び/又は予後予測するためのポータブル検査デバイス。 - AHF無しの診断若しくは予知又はAHFについての良好な予後を表す参照値を含んでなるか、又は該参照値を確立する手段を含んでなり、該参照値と比較して対象者からのサンプル中のクイエシンQ6の上昇した量が、対象者はAHFを有しているか若しくはAHFを有するリスクにあることを示すか、又は対象者におけるAHFについての不良な予後を示す、請求項41に記載のポータブル検査デバイス。
- 検出可能な標識を任意に含んでなる単離クイエシンQ6又はそのフラグメントの、請求項1〜23のいずれか1項に記載の方法におけるコントロール、標準物質又は較正物質としての使用。
Applications Claiming Priority (7)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US14858509P | 2009-01-30 | 2009-01-30 | |
EP09151816 | 2009-01-30 | ||
US61/148,585 | 2009-01-30 | ||
EP09151816.7 | 2009-01-30 | ||
EPPCT/EP2009/063690 | 2009-10-19 | ||
EP2009063690 | 2009-10-19 | ||
PCT/EP2010/051016 WO2010086380A1 (en) | 2009-01-30 | 2010-01-28 | Biomarker for diagnosis, prediction and/or prognosis of acute heart failure and uses thereof |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2012516436A JP2012516436A (ja) | 2012-07-19 |
JP2012516436A5 JP2012516436A5 (ja) | 2013-02-14 |
JP5746978B2 true JP5746978B2 (ja) | 2015-07-08 |
Family
ID=42077625
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2011546847A Expired - Fee Related JP5746978B2 (ja) | 2009-01-30 | 2010-01-28 | 急性心不全の診断、予知及び/又は予後用バイオマーカー及びその使用 |
Country Status (7)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US20110275536A1 (ja) |
EP (1) | EP2391892B1 (ja) |
JP (1) | JP5746978B2 (ja) |
AU (1) | AU2010209763B2 (ja) |
CA (1) | CA2746128C (ja) |
DK (1) | DK2391892T3 (ja) |
WO (1) | WO2010086380A1 (ja) |
Families Citing this family (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP5746978B2 (ja) | 2009-01-30 | 2015-07-08 | マイカーティス エヌ.ヴェ.MyCartis NV | 急性心不全の診断、予知及び/又は予後用バイオマーカー及びその使用 |
US20110251094A1 (en) | 2010-04-13 | 2011-10-13 | Pronota N.V. | Biomarkers for hypertensive disorders of pregnancy |
US20130116151A1 (en) * | 2010-07-08 | 2013-05-09 | Pronota N.V. | Biomarker for hypertensive disorders of pregnancy |
KR101297309B1 (ko) * | 2011-10-14 | 2013-08-16 | 서울대학교산학협력단 | 폐암 진단용 조성물 및 폐암 진단키트 |
KR102633621B1 (ko) | 2017-09-01 | 2024-02-05 | 벤 바이오사이언시스 코포레이션 | 진단 및 치료 모니터링용 바이오마커로서의 당펩티드의 식별 및 용도 |
Family Cites Families (65)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3760809A (en) | 1971-10-22 | 1973-09-25 | Damon Corp | Surgical lancet having casing |
US4360016A (en) | 1980-07-01 | 1982-11-23 | Transidyne General Corp. | Blood collecting device |
US4553541A (en) | 1981-03-23 | 1985-11-19 | Becton, Dickinson And Co. | Automatic retractable lancet assembly |
FR2515339A1 (fr) | 1981-10-28 | 1983-04-29 | Marteau D Autry Eric | Pipette de precision a deplacement positif |
DE3274422D1 (en) | 1981-12-14 | 1987-01-15 | Nicholas H Maganias | Device and method for allergy testing |
US4966159A (en) | 1981-12-14 | 1990-10-30 | Maganias Nicholas H | Allergy test strip |
US4802493A (en) | 1981-12-14 | 1989-02-07 | Maganias Nicholas H | Device and method for allergy testing |
US4816567A (en) | 1983-04-08 | 1989-03-28 | Genentech, Inc. | Recombinant immunoglobin preparations |
GB8331514D0 (en) | 1983-11-25 | 1984-01-04 | Janssen Pharmaceutica Nv | Visualization method |
US4653513A (en) | 1985-08-09 | 1987-03-31 | Dombrowski Mitchell P | Blood sampler |
US5514602A (en) | 1986-06-09 | 1996-05-07 | Ortho Diagnostic Systems, Inc. | Method of producing a metal sol reagent containing colloidal metal particles |
EP0292928A3 (de) | 1987-05-25 | 1990-09-12 | Eftag Entstaubungs- Und Fördertechnik Ag | Mittel zur Erkennung einer allergischen Reaktion und seine Verwendung in einem Diagnostizierverfahren sowie Vorrichtung zur Verwendung desselben |
DE3887145T2 (de) | 1987-05-29 | 1994-04-28 | North Sydney Area Health Serv | Medizinische Testvorrichtung. |
US5120643A (en) | 1987-07-13 | 1992-06-09 | Abbott Laboratories | Process for immunochromatography with colloidal particles |
US4853335A (en) | 1987-09-28 | 1989-08-01 | Olsen Duane A | Colloidal gold particle concentration immunoassay |
US4859612A (en) | 1987-10-07 | 1989-08-22 | Hygeia Sciences, Inc. | Metal sol capture immunoassay procedure, kit for use therewith and captured metal containing composite |
GB8800702D0 (en) | 1988-01-13 | 1988-02-10 | Nycomed As | Test method & reagent kit therefor |
US5202267A (en) | 1988-04-04 | 1993-04-13 | Hygeia Sciences, Inc. | Sol capture immunoassay kit and procedure |
US5108889A (en) | 1988-10-12 | 1992-04-28 | Thorne, Smith, Astill Technologies, Inc. | Assay for determining analyte using mercury release followed by detection via interaction with aluminum |
ES2035210T3 (es) | 1988-10-21 | 1993-04-16 | Eppendorf-Netheler-Hinz Gmbh | Dispositivo para accionar pipetas. |
US5079172A (en) | 1988-11-04 | 1992-01-07 | Board Of Trustees Operating Michigan State University | Method for detecting the presence of antibodies using gold-labeled antibodies and test kit |
US5141850A (en) | 1990-02-07 | 1992-08-25 | Hygeia Sciences, Inc. | Porous strip form assay device method |
US5270163A (en) | 1990-06-11 | 1993-12-14 | University Research Corporation | Methods for identifying nucleic acid ligands |
US6027944A (en) | 1990-11-22 | 2000-02-22 | Applied Research Systems Ars Holding Nv | Capillary-fill biosensor device comprising a calibration zone |
US5133730A (en) | 1991-05-15 | 1992-07-28 | International Technidyne Corporation | Disposable-retractable finger stick device |
US5726010A (en) | 1991-07-31 | 1998-03-10 | Idexx Laboratories, Inc. | Reversible flow chromatographic binding assay |
FR2696110B1 (fr) | 1992-09-28 | 1994-12-09 | Gilson Medical Electronics Sa | Perfectionnement à une piquette de prélèvement et de distribution de volumes réglables de liquides. |
JP2630197B2 (ja) | 1993-04-28 | 1997-07-16 | 株式会社ニッショー | 血液吸出器具 |
US5871452A (en) | 1993-07-02 | 1999-02-16 | Rachman Scientific, Inc. | Skin test applicator |
US5395388A (en) | 1993-11-15 | 1995-03-07 | Schraga; Steven | Single unit lancet device |
JP3393920B2 (ja) | 1993-12-09 | 2003-04-07 | 富士写真フイルム株式会社 | 微量定容採血点着用具 |
US6206829B1 (en) | 1996-07-12 | 2001-03-27 | First Opinion Corporation | Computerized medical diagnostic and treatment advice system including network access |
US6107045A (en) | 1994-06-30 | 2000-08-22 | Oklahoma Medical Research Foundation | Antibodies to lipoproteins and apolipoproteins and methods of use thereof |
AU6248796A (en) | 1995-05-19 | 1996-11-29 | Universal Health-Watch, Inc. | Rapid self-contained assay format |
US5681775A (en) | 1995-11-15 | 1997-10-28 | International Business Machines Corporation | Soi fabrication process |
US5630828A (en) | 1996-04-17 | 1997-05-20 | International Techndyne Corporation | Low cost disposable lancet |
US5613978A (en) | 1996-06-04 | 1997-03-25 | Palco Laboratories | Adjustable tip for lancet device |
US6001658A (en) | 1996-09-13 | 1999-12-14 | Diagnostic Chemicals Limited | Test strip apparatus and method for determining presence of analyte in a fluid sample |
US6086545A (en) | 1998-04-28 | 2000-07-11 | Amira Medical | Methods and apparatus for suctioning and pumping body fluid from an incision |
US6095988A (en) | 1998-09-04 | 2000-08-01 | Greer Laboratories, Inc. | Autoloader and skin testing system |
US6511814B1 (en) | 1999-03-26 | 2003-01-28 | Idexx Laboratories, Inc. | Method and device for detecting analytes in fluids |
EP1212138B1 (en) | 1999-08-17 | 2005-06-08 | TTP LabTech Ltd | Sampling/dispensing device with plunger and housing set onto plunger |
US6974706B1 (en) | 2003-01-16 | 2005-12-13 | University Of Florida Research Foundation, Inc. | Application of biosensors for diagnosis and treatment of disease |
GB0030929D0 (en) | 2000-12-19 | 2001-01-31 | Inverness Medical Ltd | Analyte measurement |
WO2002056751A2 (en) | 2001-01-22 | 2002-07-25 | Roche Diagnostics Gmbh | Lancet device having capillary action |
JP4300029B2 (ja) | 2001-03-22 | 2009-07-22 | プロノタ・エヌブイ | ゲルフリー定性及び定量的プロテオーム分析のための方法及び装置、ならびにその使用 |
AU2002315179A1 (en) | 2001-06-12 | 2002-12-23 | Pelikan Technologies, Inc. | Blood sampling device with diaphragm actuated lancet |
EP1404235A4 (en) | 2001-06-12 | 2008-08-20 | Pelikan Technologies Inc | METHOD AND DEVICE FOR A LANZETTING DEVICE INTEGRATED ON A BLOOD CARTRIDGE CARTRIDGE |
US6881203B2 (en) | 2001-09-05 | 2005-04-19 | 3M Innovative Properties Company | Microneedle arrays and methods of manufacturing the same |
CN100349629C (zh) | 2001-09-12 | 2007-11-21 | 贝克顿迪肯森公司 | 用于药物传送的微针为基础的笔装置和使用该装置的方法 |
US20030109067A1 (en) | 2001-12-06 | 2003-06-12 | Immunetech, Inc. | Homogeneous immunoassays for multiple allergens |
ES2244680T3 (es) * | 2002-01-11 | 2005-12-16 | 8 Sens Biognostic Ag | Procedimiento para detectar analitos en muestras por medio de analisis. |
US7004928B2 (en) | 2002-02-08 | 2006-02-28 | Rosedale Medical, Inc. | Autonomous, ambulatory analyte monitor or drug delivery device |
AU2003284870A1 (en) | 2002-10-29 | 2004-05-25 | Palco Labs, Inc. | Single-use lancet device |
DE60332043D1 (de) | 2002-12-30 | 2010-05-20 | Roche Diagnostics Gmbh | Kapillarrohr-spitzen-design zur unterstützung des blutflusses |
WO2004066822A2 (en) | 2003-01-29 | 2004-08-12 | Roche Diagnostics Gmbh | Integrated lancing test strip |
JP2006527190A (ja) | 2003-04-17 | 2006-11-30 | サイファージェン バイオシステムズ インコーポレイテッド | ナトリウム利尿ペプチドに関連したポリペプチド、並びにこれらの同定および使用法 |
US20050152836A1 (en) * | 2003-05-22 | 2005-07-14 | Euan Ashley | Diagnostic markers and pharmacological targets in heart failure and related reagents and methods of use thereof |
EP1633250A2 (en) | 2003-06-04 | 2006-03-15 | Georgia Tech Research Corporation | Drilling microneedle device |
JP2007511318A (ja) | 2003-11-18 | 2007-05-10 | ナノ パス テクノロジーズ リミテッド | 改良された挿入システム及びマイクロニードルを摺動させるための方法 |
US7476546B2 (en) | 2004-11-15 | 2009-01-13 | University Of North Dakota | Method for single oxygen atom incorporation into digested peptides using peptidases |
US8153376B2 (en) | 2006-09-25 | 2012-04-10 | Universiteit Maastricht | Means and methods for diagnosing and/or treating a subject at risk of developing heart failure |
US7749773B2 (en) | 2006-10-11 | 2010-07-06 | Day Alan R | Device for detection of molecules in biological fluids |
US20100190686A1 (en) * | 2007-06-22 | 2010-07-29 | The University Of Georgia Research Foundation | Novel secreted proteins of adipocytes for diagnostic purposes |
JP5746978B2 (ja) | 2009-01-30 | 2015-07-08 | マイカーティス エヌ.ヴェ.MyCartis NV | 急性心不全の診断、予知及び/又は予後用バイオマーカー及びその使用 |
-
2010
- 2010-01-28 JP JP2011546847A patent/JP5746978B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2010-01-28 WO PCT/EP2010/051016 patent/WO2010086380A1/en active Application Filing
- 2010-01-28 DK DK10704524.7T patent/DK2391892T3/en active
- 2010-01-28 CA CA2746128A patent/CA2746128C/en not_active Expired - Fee Related
- 2010-01-28 US US13/141,061 patent/US20110275536A1/en not_active Abandoned
- 2010-01-28 AU AU2010209763A patent/AU2010209763B2/en not_active Ceased
- 2010-01-28 EP EP10704524.7A patent/EP2391892B1/en not_active Not-in-force
-
2016
- 2016-08-19 US US15/242,044 patent/US10114021B2/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US20170010265A1 (en) | 2017-01-12 |
AU2010209763A8 (en) | 2011-09-01 |
AU2010209763A1 (en) | 2011-06-30 |
JP2012516436A (ja) | 2012-07-19 |
US10114021B2 (en) | 2018-10-30 |
CA2746128C (en) | 2020-07-28 |
US20110275536A1 (en) | 2011-11-10 |
AU2010209763B2 (en) | 2016-05-12 |
CA2746128A1 (en) | 2010-08-05 |
EP2391892B1 (en) | 2017-01-18 |
DK2391892T3 (en) | 2017-04-24 |
EP2391892A1 (en) | 2011-12-07 |
WO2010086380A1 (en) | 2010-08-05 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5714019B2 (ja) | 急性心不全の診断、予知及び/又は予後用バイオマーカー及びその使用 | |
JP6009595B2 (ja) | 腎機能障害、糸球体濾過速度、呼吸困難、急性心不全、左心室肥大、心線維症、子癇前症、妊娠関連蛋白尿のバイオマーカーとしてのltbp2 | |
US10114021B2 (en) | Biomarker for diagnosis, prediction and/or prognosis of acute heart failure and uses thereof | |
CA2858455A1 (en) | Ltbp2 as a biomarker for lung injury | |
US9791457B2 (en) | Biomarkers for hypertensive disorders of pregnancy |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20121218 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20121218 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20130611 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20130612 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20130904 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20130911 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20140624 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20140922 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20140930 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20141211 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20150421 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20150511 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5746978 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |