JP5660867B2 - 色素成分の測定方法及び測定用試薬 - Google Patents
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Description
光学的手法としては、吸光度測定による比色法が広く用いられている。一般的な比色法は、定量対象となる成分を試薬や酵素と反応させ、反応前後における吸光度変化を測定するというものであり、例えば特許文献1には、ビリルビンを測定するために、試料にビリルビンオキシターゼを作用させそれにより生じる変化を光学的に測定する方法が記載されている。
(a)試料中の色素成分を定量する分析方法であって、定量対象とする色素成分の測定波長と重複または近接する波長に吸収を持つ、定量対象とする色素成分以外の色素成分を退色させるが、定量対象とする色素成分は退色させない物質を含有する試薬を添加する工程を含む、前記分析方法。
(c)試料が生体試料である、(a)または(b)に記載の分析方法。
(d)定量対象とする色素成分がβカロテンである、(a)〜(c)のいずれかに記載の分析方法。
(e)定量対象とする色素成分以外の色素成分が、ビリルビンである、(d)に記載の分析方法。
(g)生体試料が、ウシ由来である、請求項(c)〜(f)のいずれか一項に記載の分析方法。
(i)定量対象とする色素成分が、βカロテンである、(h)に記載の試薬。
(k)定量対象とする色素成分以外の色素成分を退色させるが、定量対象とする色素成分は退色させない物質が、過酸化水素、次亜塩素酸ナトリウム、過ホウ酸ナトリウム、過硫酸アンモニウムおよび過硫酸カリウムからなる群から選択される1種又は2種以上である、(h)〜(j)のいずれかに記載の試薬。
(m)(b)〜(g)のいずれかに記載の分析方法に用いる試薬であって、定量対象とする色素成分を退色させる物質を含有する、前記試薬。
(n)定量対象とする色素成分がβカロテンである、(m)に記載の試薬。
(p)定量対象とする色素成分を退色させる物質が亜硝酸ナトリウムである、(o)に記載の試薬。
(s)定量対象とする色素成分がβカロテンである、(q)または(r)に記載の試薬セット。
(t)定量対象とする色素成分以外の色素成分が、ビリルビンである、(q)〜(s)のいずれかに記載の試薬セット。
(u)定量対象とする色素成分以外の色素成分を退色させるが、定量対象とする色素成分は退色させない物質が過酸化水素であり、定量対象とする色素成分を退色させる物質が亜硝酸ナトリウムである、(q)〜(t)のいずれかに記載の試薬セット。
(v)自動分析装置を用いる、(a)〜(g)のいずれかに記載の方法。
したがって、本発明により、βカロテンのような色素成分の測定を容易に行えるようになり、家畜の健康状態や栄養状態の把握のために検査を必要とする現場に、大いに貢献するものである。
定量対象とする色素成分としては、あらゆる色素成分が対象となり得るが、例えばリコピン、βカロテン等が挙げられる。
定量対象とする色素成分の濃度(μg/dL)=(吸光度A×(S+R1)/T−吸光度B)×C
S:検体量、R1:第一試薬量、T:全反応液量、C:標準液濃度(μg/dL)
定量対象とする色素成分の濃度(μg/dL)=((吸光度A×(S+R1)/T−吸光度B)×T)/(E1% cm×S)×106
S:検体量、R1:第一試薬量、T:全反応液量、E1%cm:吸光係数(1%)
本発明によるβカロテンの測定は、U−3200形、U−3300形などの分光光度計、H−7170S形、H−7180形、BM−1650形などの汎用型自動分析装置などで行うことができる。
以下に示す条件で、各種物質がβカロテン及びビリルビンを退色させるかを調査した。
検体βカロテン標準液279μg/100ml(水溶性バイオカロテン 協和発酵バイオ(株)製を生理食塩水に溶解して調製)
ビリルビン標準液 2.6mg/100ml(ビリルビン標準液 関東化学(株)製を精製水で希釈して調製)
測定にはJCA-BM1650形自動分析装置を使用した。また、酸化還元電位の測定は、マルチ水質計MM60Rにより測定した。
試薬組成を表1、測定条件を表2、測定結果を表3に示す。
以下に示す条件で、以下に示す検体の測定を行った。
検体:830μg/100mL βカロテン標準液を10段階に希釈したもの 測定試薬の組成を、表4に示す。
測定にはJCA-BM1650自動分析装置を使用した。測定パラメーターは表2と同様である。
図1に示すようにβカロテンの濃度に依存して吸光度変化量が増加することが確認された。
以下に示す条件で、ウシ血清中のβカロテンの測定を行い、対照法(HPLC)法との比較を行った。
測定試薬の組成は、表4と同様である。
測定にはJCA-BM1650自動分析装置を使用した。測定パラメーターは表2と同様である。
対照法のHPLC法は、「平成13年度 家畜保健衛生所年報 第43回岐阜県家畜保健衛生業績発表会全文 ビタミンA、βカロチンおよびビタミンE定量のための血清(血漿)処理方法の検討」に記載の方法で行った。測定結果を図2に示す。
以下に示す条件で、第一試薬と第二試薬との組み合わせに対する、第二試薬とβカロテンとの反応性ついて調査した。測定には、H−7170S形自動分析装置を使用した。試薬組成を表5、測定条件を表6、測定結果を表7に示す。
Claims (15)
- 試料中のβカロテンを定量する分析方法であって、過酸化水素、次亜塩素酸ナトリウム、過ホウ酸ナトリウム、硫酸銅(II)五水和物、バナジン酸アンモニウム、過硫酸アンモニウムおよび過硫酸カリウムからなる群から選択される1種又は2種以上の物質を含有する試薬を添加する工程を含む、前記分析方法。
- さらに、βカロテンを退色させる物質を含有する試薬を添加する工程を含む、請求項1に記載の分析方法。
- 試料が生体試料である、請求項1または2に記載の分析方法。
- 生体試料が、血清および/または血漿である請求項3に記載の分析方法。
- 生体試料が、ウシ由来である、請求項3または4に記載の分析方法。
- 試料中のβカロテンを定量する分析方法に用いるための試薬であって、過酸化水素、次亜塩素酸ナトリウム、過ホウ酸ナトリウム、硫酸銅(II)五水和物、バナジン酸アンモニウム、過硫酸アンモニウムおよび過硫酸カリウムからなる群から選択される1種又は2種以上の物質を含有する、前記試薬。
- 物質が、過酸化水素、次亜塩素酸ナトリウム、過ホウ酸ナトリウム、過硫酸アンモニウムおよび過硫酸カリウムからなる群から選択される1種又は2種以上である、請求項6に記載の試薬。
- 物質が、過酸化水素である、請求項7に記載の試薬。
- 請求項2〜5のいずれか一項に記載の分析方法に用いる試薬であって、βカロテンを退色させる物質を含有する、前記試薬。
- βカロテンを退色させる物質が、亜硝酸ナトリウム、過ヨウ素酸ナトリウムおよびN−ブロモスクシンイミドからなる群から選択される1種又は2種以上である、請求項9に記載の試薬。
- βカロテンを退色させる物質が亜硝酸ナトリウムである、請求項10に記載の試薬。
- 試料中のβカロテンを定量する分析方法に用いるための試薬セットであって、過酸化水素、次亜塩素酸ナトリウム、過ホウ酸ナトリウム、硫酸銅(II)五水和物、バナジン酸アンモニウム、過硫酸アンモニウムおよび過硫酸カリウムからなる群から選択される1種又は2種以上の物質を含有する第一試薬、およびβカロテンを退色させる物質を含有する第二試薬を含む、前記試薬セット。
- 試料が生体試料である、請求項12に記載の試薬セット。
- 第一試薬に含有される物質が過酸化水素であり、βカロテンを退色させる物質が亜硝酸ナトリウムである、請求項12または13に記載の試薬セット。
- 自動分析装置を用いる、請求項1〜5のいずれか一項に記載の方法。
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