JP5643912B1 - Propolis extract and method for producing the same, capsule, and antioxidant - Google Patents

Abstract

【課題】外観特性に優れるプロポリス抽出物及びその製造方法、カプセル、並びに抗酸化剤を提供する。【解決手段】本発明のプロポリス抽出物は、抽出原料としてプロポリス原塊、又はプロポリス原塊から水若しくは親水性有機溶媒を用いた抽出処理後の残渣を使用し、抽出溶媒としてスクワレン、しそ油、ドコサヘキサエン酸、エイコサペンタエン酸、小麦胚芽油、月見草油、及びブドウ油から選ばれる少なくとも一種の油性成分を用いて得られる抽出物を含んでなる。前記抽出溶媒は、スクワレン、しそ油、ドコサヘキサエン酸、及びエイコサペンタエン酸から選ばれる少なくとも一種であって、前記抽出物は、さらに１０℃以下に冷却した後、濾過又は遠心分離により不溶性成分を除去したものであることが好ましい。【選択図】なしProvided are a propolis extract having excellent appearance characteristics, a method for producing the same, a capsule, and an antioxidant. The propolis extract of the present invention uses propolis bulk as an extraction raw material, or a residue after extraction treatment using water or a hydrophilic organic solvent from the propolis bulk, and squalene, perilla oil, It comprises an extract obtained using at least one oily component selected from docosahexaenoic acid, eicosapentaenoic acid, wheat germ oil, evening primrose oil, and grape oil. The extraction solvent is at least one selected from squalene, perilla oil, docosahexaenoic acid, and eicosapentaenoic acid, and the extract is further cooled to 10 ° C. or lower, and then insoluble components are removed by filtration or centrifugation. It is preferable. [Selection figure] None

Description

本発明は、外観特性に優れるプロポリス抽出物及びその製造方法、カプセル、並びに抗酸化剤に関する。   The present invention relates to a propolis extract having excellent appearance characteristics, a method for producing the same, a capsule, and an antioxidant.

プロポリスは、巣の防御及び補強等を目的として、ミツバチが採取した植物の滲出液、新芽、及び樹脂等にミツロウを混ぜて作られる膠状ないしは蝋状の物質である。このプロポリスは、ミツバチが原料として巣箱周辺の種々の植物を採取して生産されるため、多種多様な成分を含有している。   Propolis is a glue-like or wax-like substance made by mixing beeswax into plant exudates, shoots and resins collected by bees for the purpose of defense and reinforcement of the nest. This propolis contains various components because bees are produced by collecting various plants around the nest box as raw materials.

プロポリスは、抗菌効果や抗炎症効果を有していることが古くから知られている。また、プロポリスの主要な生理活性として、抗酸化作用及び免疫賦活作用が知られている。そのため、プロポリスは、医薬品或いは健康食品の素材として古くから用いられてきた。プロポリス中に含まれる有効成分としては、極性の高い有機酸、フラボノイド類、ポリフェノール類、さらには極性の低いテルペノイド類等の非常に多様な種類の有効成分が確認されている。   Propolis has long been known to have antibacterial and anti-inflammatory effects. Antioxidant action and immunostimulatory action are known as main physiological activities of propolis. Therefore, propolis has long been used as a raw material for pharmaceuticals or health foods. As active ingredients contained in propolis, very various kinds of active ingredients such as organic acids with high polarity, flavonoids, polyphenols, and terpenoids with low polarity have been confirmed.

従来より、プロポリスの摂取を容易にするために、生体適用性に優れる抽出溶媒を用いて、プロポリス原塊よりプロポリス抽出物を得る方法が用いられてきた。例えば、特許文献１は、水、親水性有機溶媒、水／親水性有機溶媒の混合液を抽出溶媒として用い、プロポリス原塊からプロポリス抽出物を得る方法について開示する。   Conventionally, in order to facilitate ingestion of propolis, a method of obtaining a propolis extract from a propolis bulk using an extraction solvent having excellent bioapplicability has been used. For example, Patent Document 1 discloses a method of obtaining a propolis extract from a propolis bulk by using water, a hydrophilic organic solvent, and a water / hydrophilic organic solvent mixture as an extraction solvent.

特開２００８−１８４４２７号公報JP 2008-184427 A

ところが、従来の水や親水性有機溶媒を用いて得られるプロポリス抽出物は、乳白色であり、外観特性が優れないという問題があった。
本発明の目的とするところは、外観特性に優れるプロポリス抽出物及びその製造方法、カプセル、並びに抗酸化剤を提供することにある。 However, the propolis extract obtained by using conventional water or a hydrophilic organic solvent has a problem that it is milky white and has poor appearance characteristics.
An object of the present invention is to provide a propolis extract having excellent appearance characteristics, a method for producing the same, a capsule, and an antioxidant.

本発明は、特定の油性成分を抽出溶媒として使用したことにより、外観特性に優れるプロポリス抽出物が得られることを見出したことに基づくものである。
上記目的を達成するために、本発明の一態様では、抽出原料としてプロポリス原塊、又はプロポリス原塊から水若しくは親水性有機溶媒を用いた抽出処理後の残渣を使用し、抽出溶媒としてスクワレン、ドコサヘキサエン酸、及びエイコサペンタエン酸から選ばれる少なくとも一種の油性成分のみを用いて得られる抽出物を含んでなるプロポリス抽出物が提供される。前記抽出物は、さらに１０℃以下に冷却した後、濾過又は遠心分離により不溶性成分を除去したものであることが好ましい。 The present invention is based on the finding that a propolis extract having excellent appearance characteristics can be obtained by using a specific oily component as an extraction solvent.
In order to achieve the above object, in one aspect of the present invention, a propolis bulk is used as an extraction raw material, or a residue after extraction using water or a hydrophilic organic solvent from the propolis bulk is used, and squalene as an extraction solvent , de Kosahekisaen acid, and eicosapentaenoic acid or al propolis extract comprising at least one oil component only an extract obtained using selected is provided. Before Symbol extract was further cooled to 10 ° C. or less, it is preferable that the removal of the insoluble components by filtration or centrifugation.

本発明の別の態様では、抽出原料としてプロポリス原塊、又はプロポリス原塊から水若しくは親水性有機溶媒を用いた抽出処理後の残渣を使用し、抽出溶媒としてスクワレン、ドコサヘキサエン酸、及びエイコサペンタエン酸から選ばれる少なくとも一種の油性成分のみを用いて抽出物を得る工程を含むプロポリス抽出物の製造方法が提供される。前記抽出物を得た後、さらに該抽出物を１０℃以下に冷却し、濾過又は遠心分離により不溶性成分を除去する工程を含むことが好ましい。 In another aspect of the present invention, raw propolis mass as raw material for extraction, or from raw propolis mass using residue after extraction with water or a hydrophilic organic solvent, squalene as the extraction solvent, de Kosahekisaen acid, and eicosapentaenoic method for producing a propolis extract comprising the step of obtaining at least one extract only using the oil component selected acid or we are provided. After obtaining the pre Symbol extract, further cooling the extract to 10 ° C. or less, it is preferred to include a step of removing the insoluble components by filtration or centrifugation.

本発明の別の態様では、前記プロポリス抽出物を含有するカプセルが提供される。本発明の別の態様では、前記プロポリス抽出物を有効成分として含有する抗酸化剤が提供される。   In another aspect of the present invention, a capsule containing the propolis extract is provided. In another aspect of the present invention, an antioxidant containing the propolis extract as an active ingredient is provided.

本発明によれば、プロポリス抽出物の外観特性を向上させることができる。   According to the present invention, the appearance characteristics of a propolis extract can be improved.

以下、本発明のプロポリス抽出物を具体化した一実施形態を説明する。
本実施形態のプロポリス抽出物は、抽出溶媒としてスクワレン、しそ油、ドコサヘキサエン酸、エイコサペンタエン酸、小麦胚芽油、月見草油、及びブドウ油（グレープシードオイル）から選ばれる少なくとも一種の油性成分が用いられる。これらの油性成分を単独で使用してもよく、２種以上を組み合わせて使用してもよい。これらの油性成分の中でも、抽出処理後の濾過操作性に優れる観点から、スクワレン、ドコサヘキサエン酸、及びエイコサペンタエン酸が好ましく適用される。 Hereinafter, an embodiment embodying the propolis extract of the present invention will be described.
The propolis extract of the present embodiment uses at least one oily component selected from squalene, perilla oil, docosahexaenoic acid, eicosapentaenoic acid, wheat germ oil, evening primrose oil, and grape oil (grape seed oil) as an extraction solvent. . These oil components may be used alone or in combination of two or more. Among these oily components, squalene, docosahexaenoic acid, and eicosapentaenoic acid are preferably applied from the viewpoint of excellent filtration operability after the extraction treatment.

原料となるプロポリスは、巣の防御及び補強等を目的として、セイヨウミツバチ等のミツバチが採取した植物の滲出液、新芽及び樹皮等に唾液を混ぜて作られる膠状ないしは蝋状の物質である。本実施形態において使用されるプロポリスの産地は、特に限定されず、例えば中国、日本等のアジア諸国、ブラジル、アルゼンチン、ウルグアイ等の南米諸国、ハンガリー、ブルガリア等のヨーロッパ、カナダ等の北米、オーストラリア、ニュージーランド等のオセアニア等を使用することができる。プロポリス原塊は、そのままの形態で抽出原料として使用することができる。また、抽出原料として、プロポリス原塊から水又は親水性有機溶媒を用いた抽出処理後の残渣を使用してもよい。かかる残渣中にも、上記抽出溶媒である油性成分に溶解する有用成分が含まれていることが期待される。親水性有機溶媒としては、例えばエタノール、メタノール、イソプロパノール等の低級アルコール、アセトン、メチルエチルケトン等のケトン類が挙げられる。これらの親水性有機溶媒を単独で使用してもよく、２種以上を組み合わせて使用してもよい。   Propolis as a raw material is a glue-like or wax-like substance made by mixing saliva with plant exudates, shoots and bark etc. collected by bees such as honey bees for the purpose of defense and reinforcement of the nest. The production area of propolis used in the present embodiment is not particularly limited, for example, Asian countries such as China and Japan, South American countries such as Brazil, Argentina and Uruguay, Europe such as Hungary and Bulgaria, North America such as Canada, Australia, Oceania such as New Zealand can be used. The propolis bulk can be used as an extraction raw material in the form as it is. Moreover, you may use the residue after the extraction process using water or a hydrophilic organic solvent from a propolis original lump as an extraction raw material. It is expected that useful components that dissolve in the oily component as the extraction solvent are also contained in the residue. Examples of the hydrophilic organic solvent include lower alcohols such as ethanol, methanol and isopropanol, and ketones such as acetone and methyl ethyl ketone. These hydrophilic organic solvents may be used alone or in combination of two or more.

前記溶媒を用いて抽出処理する際、抽出処理前にプロポリス採取時に混入するゴミ等の夾雑物を除去し、粗粉砕することが好ましい。それにより、抽出効率をより向上させることができる。抽出溶媒の使用容量は、抽出原料の質量に対して好ましくは１〜２０倍量、より好ましくは３〜１５倍量である。抽出溶媒の使用容量が１倍量以上の場合には、目的成分の抽出効率をより向上させることができる。抽出溶媒の使用容量が２０倍量以下の場合には、抽出機材及び装置をより小さくすることができ、作業性をより向上させることができる。抽出温度は抽出溶媒の種類により適宜設定されるが、５〜４０℃であることが好ましく、より好ましくは室温環境により近い１５〜３０℃が採用される。抽出温度が５℃以上の場合には、有効成分の抽出率をより向上させることができる。逆に抽出温度が４０℃以下の場合には、ロウ成分の抽出をより抑制することができ、抽出後の濾過性をより向上させることができる。なお、抽出操作は、抽出効率及び抽出率等の観点から、前記抽出温度で攪拌しながら、好ましくは１時間以上、より好ましくは３時間以上行う。そして、上記の抽出条件で有効成分を十分に抽出した後、濾紙濾過、濾過助剤である珪藻土濾過等の濾過処理又は遠心分離処理し、不溶性成分を除去することによりプロポリス抽出物を得ることができる。不溶性成分の除去は、濾過コスト、不溶性成分の除去効率、処理の簡易性の観点から珪藻土濾過が好ましく適用される。   When the extraction process is performed using the solvent, it is preferable to remove impurities such as dust mixed during the propolis collection before the extraction process and coarsely pulverize. Thereby, extraction efficiency can be improved more. The use volume of the extraction solvent is preferably 1 to 20 times, more preferably 3 to 15 times the mass of the extraction raw material. When the use volume of the extraction solvent is 1 or more times, the extraction efficiency of the target component can be further improved. When the use volume of the extraction solvent is 20 times or less, the extraction equipment and apparatus can be made smaller, and workability can be further improved. Although extraction temperature is suitably set with the kind of extraction solvent, it is preferable that it is 5-40 degreeC, More preferably, 15-30 degreeC nearer to room temperature environment is employ | adopted. When extraction temperature is 5 degreeC or more, the extraction rate of an active ingredient can be improved more. Conversely, when the extraction temperature is 40 ° C. or lower, the extraction of the wax component can be further suppressed, and the filterability after extraction can be further improved. The extraction operation is preferably performed for 1 hour or more, more preferably 3 hours or more while stirring at the extraction temperature from the viewpoint of extraction efficiency, extraction rate, and the like. Then, after sufficiently extracting the active ingredient under the above extraction conditions, it is possible to obtain a propolis extract by removing insoluble components by filtering or filtering, such as filter paper filtration, filtration aid diatomaceous earth filtration, etc. it can. For the removal of insoluble components, diatomaceous earth filtration is preferably applied from the viewpoint of filtration cost, insoluble component removal efficiency, and ease of treatment.

前記プロポリス抽出物は、冷蔵（０〜１０℃）保存の環境下における保存性をより向上させるために、さらに該プロポリス抽出物を好ましくは１０℃以下、より好ましくは５℃以下に冷却し、その後、濾過又は遠心分離により不溶性成分を除去してもよい。かかる冷却処理が行われる場合、抽出溶媒としては、好ましくはスクワレン、しそ油、ドコサヘキサエン酸、及びエイコサペンタエン酸から選ばれる少なくとも一種が用いられる。これらの油性成分の中で、冷却後の濾過操作等の不溶性成分の除去性に優れる観点から、スクワレン、ドコサヘキサエン酸、及びエイコサペンタエン酸がより好ましく適用される。または、これらの油性成分の中で、冷却処理後に澄明性に優れる観点から、しそ油及びエイコサペンタエン酸がより好ましく適用される。不溶性成分の除去方法として濾過操作が用いられる場合、操作性の観点から、例えば濾紙濾過、及び珪藻土濾過が適用される。かかる冷却処理及びその後の不溶性成分の除去処理により、プロポリス抽出物を冷蔵保存する環境下においても、白濁を生じることなく、澄明度の高いプロポリス抽出物を得ることができる。上記処理の工程において、冷却時間は、特に限定されないが、作業効率等の観点から、好ましくは１時間以上、より好ましくは３時間以上である。   The propolis extract is preferably further cooled to 10 ° C. or lower, more preferably 5 ° C. or lower, in order to further improve the storage stability in a refrigerated (0 to 10 ° C.) storage environment. Insoluble components may be removed by filtration or centrifugation. When such a cooling treatment is performed, the extraction solvent is preferably at least one selected from squalene, perilla oil, docosahexaenoic acid, and eicosapentaenoic acid. Among these oily components, squalene, docosahexaenoic acid, and eicosapentaenoic acid are more preferably applied from the viewpoint of excellent removability of insoluble components such as filtration after cooling. Or, among these oil components, perilla oil and eicosapentaenoic acid are more preferably applied from the viewpoint of excellent clarity after cooling treatment. When a filtration operation is used as a method for removing insoluble components, for example, filter paper filtration and diatomaceous earth filtration are applied from the viewpoint of operability. By such cooling treatment and subsequent removal treatment of insoluble components, a propolis extract with high clarity can be obtained without causing white turbidity even in an environment where the propolis extract is refrigerated and stored. In the above treatment step, the cooling time is not particularly limited, but is preferably 1 hour or more, more preferably 3 hours or more from the viewpoint of work efficiency and the like.

前記プロポリス抽出物は、例えば冷凍庫（−１５℃以下）のように零下保存の環境下における保存性をより向上させるために、さらに該プロポリス抽出物を好ましくは−５℃以下、より好ましくは−１０℃以下に冷却し、その後、濾過又は遠心分離により不溶性成分を除去してもよい。かかる冷却処理が行われる場合、抽出溶媒としては、上記冷却後の濾過操作等の不溶性成分の除去性及び冷却処理後に澄明性に優れる観点から、スクワレンが好ましく適用される。濾過操作による不溶性成分の除去方法としては、操作性の観点から、例えば濾紙濾過、及び珪藻土濾過が用いられる。上記冷却処理及びその後の不溶性成分の除去処理により、プロポリス抽出物を零下保存する環境下においても、白濁を生じることなく、澄明度の高いプロポリス抽出物を得ることができる。上記処理の工程において、冷却時間は、特に限定されないが、作業効率等の観点から、好ましくは１時間以上、より好ましくは３時間以上である。   The propolis extract is preferably further -5 ° C or less, more preferably -10, in order to further improve the storage stability in an environment of subzero storage such as a freezer (-15 ° C or less). The insoluble component may be removed by cooling to a temperature of 0 ° C. or lower, followed by filtration or centrifugation. When such cooling treatment is performed, squalene is preferably used as the extraction solvent from the viewpoint of excellent removability of insoluble components such as filtration after cooling and excellent clarity after cooling treatment. From the viewpoint of operability, for example, filter paper filtration and diatomaceous earth filtration are used as a method for removing insoluble components by filtration operation. By the cooling treatment and the subsequent removal treatment of insoluble components, a propolis extract with high clarity can be obtained without causing white turbidity even in an environment where the propolis extract is stored under zero. In the above treatment step, the cooling time is not particularly limited, but is preferably 1 hour or more, more preferably 3 hours or more from the viewpoint of work efficiency and the like.

次に、上記のように構成されたプロポリス抽出物の作用を説明する。
本実施形態のプロポリス抽出物は、特定の油性成分を抽出溶媒として使用したことにより、澄明性が高く、また、所定条件下で保存した場合においても、高い澄明性を維持することができる。したがって、外観特性に優れるプロポリス抽出物を得ることができる。 Next, the effect | action of the propolis extract comprised as mentioned above is demonstrated.
The propolis extract of this embodiment has high clarity by using a specific oily component as an extraction solvent, and can maintain high clarity even when stored under predetermined conditions. Therefore, a propolis extract having excellent appearance characteristics can be obtained.

本実施形態のプロポリス抽出物は、有機酸や桂皮酸誘導体等の有用成分が含有されるため、摂取により、これまでプロポリスにおいて見出されている効能、例えば抗菌効果、抗炎症効果、抗酸化作用、免疫賦活作用等の発揮が期待される。特に、本実施形態のプロポリス抽出物は、優れた抗酸化作用を発揮する。   Since the propolis extract of the present embodiment contains useful components such as organic acids and cinnamic acid derivatives, the effects found in propolis up to now, such as antibacterial effects, anti-inflammatory effects, and antioxidant effects, by ingestion It is expected to exert immunostimulatory action. In particular, the propolis extract of the present embodiment exhibits an excellent antioxidant effect.

本実施形態のプロポリス抽出物の具体的な配合形態としては、飲食品、医薬品及び化粧品等として適用することができる。飲食品に適用する場合、プロポリス抽出物を飲食品そのものとして、又は種々の食品素材又は飲料品素材に配合して使用することができる。飲食品の形態としては、特に限定されず、液状、ゲル状等のいずれであってもよく、また剤形としては、カプセル剤、ドリンク剤のいずれであってもよい。その中でも、外気との接触を抑制することができる観点から、カプセル剤であることが好ましい。より好ましくは、本実施形態のプロポリス抽出物は、高い澄明性を有し、優れた外観特性を発揮する観点から、透明又は半透明のカプセル皮膜により製造されるカプセル剤として適用される。前記飲食品としては、その他の成分としてゲル化剤含有食品、糖類、香料、甘味料、油脂、基材、賦形剤、食品添加剤、副素材、増量剤等を適宜配合してもよい。   As a specific blending form of the propolis extract of the present embodiment, it can be applied as a food / beverage product, a pharmaceutical product and a cosmetic product. When applied to food or drink, the propolis extract can be used as a food or drink itself or by blending it with various food materials or beverage materials. It does not specifically limit as a form of food-drinks, Any of liquid form, a gel form, etc. may be sufficient, and any of a capsule and a drink may be sufficient as a dosage form. Among these, a capsule is preferable from the viewpoint of suppressing contact with outside air. More preferably, the propolis extract of the present embodiment is applied as a capsule produced by a transparent or translucent capsule film from the viewpoint of having high clarity and exhibiting excellent appearance characteristics. As said food-drinks, you may mix | blend gelatinizer containing foodstuffs, saccharides, a fragrance | flavor, a sweetener, fats and oils, a base material, an excipient | filler, a food additive, a subsidiary material, a bulking agent etc. suitably as another component.

本実施形態のプロポリス抽出物を医薬品として使用する場合は、主として服用（経口摂取）により投与される。剤形としては、特に限定されないが、例えば、カプセル剤、液剤等が挙げられる。また、添加剤として賦形剤、基剤、乳化剤、溶剤、安定剤等を配合してもよい。本実施形態のプロポリス抽出物は、澄明性を有し、優れた外観特性を発揮する観点から、透明又は半透明のカプセル皮膜により製造されるカプセル剤として適用される。   When the propolis extract of this embodiment is used as a medicine, it is administered mainly by taking (oral intake). Although it does not specifically limit as a dosage form, For example, a capsule, a liquid agent, etc. are mentioned. Moreover, you may mix | blend an excipient | filler, a base, an emulsifier, a solvent, a stabilizer etc. as an additive. The propolis extract of the present embodiment is applied as a capsule produced by a transparent or translucent capsule film from the viewpoint of having clarity and exhibiting excellent appearance characteristics.

本実施形態のプロポリス抽出物を化粧品に適用する場合、化粧品基材に配合することにより製造することができる。化粧品の形態は、乳液状、クリーム状等のいずれであってもよい。このような化粧品を肌に適用することにより、例えば抗酸化作用等の効能の発揮を得ることができる。化粧品基剤は、一般に化粧品に共通して配合されるものであって、例えば、油分、精製水及びアルコールを主要成分として、界面活性剤、保湿剤、酸化防止剤、増粘剤、抗脂漏剤、血行促進剤、美白剤、ｐＨ調整剤、色素顔料、防腐剤及び香料から選択される少なくとも一種が適宜配合される。   When applying the propolis extract of this embodiment to cosmetics, it can manufacture by mix | blending with a cosmetic base material. The cosmetic product may be in the form of an emulsion or cream. By applying such a cosmetic to the skin, it is possible to obtain an effect such as an antioxidant effect. Cosmetic bases are generally blended in common with cosmetics. For example, oil, purified water, and alcohol as main components, surfactants, moisturizers, antioxidants, thickeners, anti-seborrheic agents. At least one selected from an agent, a blood circulation promoter, a whitening agent, a pH adjuster, a pigment, a preservative, and a fragrance is appropriately blended.

本実施形態のプロポリス抽出物によれば、以下のような効果を得ることができる。
（１）本実施形態では、抽出原料であるプロポリス原塊等から、抽出溶媒としてスクワレン、しそ油、ドコサヘキサエン酸、エイコサペンタエン酸、小麦胚芽油、月見草油、及びブドウ油から選ばれる少なくとも一種の油性成分を用いてプロポリス抽出物を得た。したがって、外観特性に優れるプロポリス抽出物が得られる。例えば、常温付近における保存環境下において、外観特性を低下させる不溶性成分の析出に伴う、白濁等の発生を抑止することができる。 According to the propolis extract of the present embodiment, the following effects can be obtained.
(1) In this embodiment, at least one kind of oil selected from squalene, perilla oil, docosahexaenoic acid, eicosapentaenoic acid, wheat germ oil, evening primrose oil, and grape oil as an extraction solvent from propolis bulk as an extraction raw material Propolis extract was obtained using the ingredients. Therefore, a propolis extract having excellent appearance characteristics can be obtained. For example, it is possible to suppress the occurrence of white turbidity associated with the precipitation of insoluble components that deteriorate the appearance characteristics in a storage environment near room temperature.

また、特に透明又は半透明のカプセル皮膜により製造されるカプセル剤として適用した場合、優れた外観特性を有するプロポリス抽出物含有カプセル剤を得ることができる。
（２）本実施形態のプロポリス抽出物は、好ましくは、抽出溶媒として、スクワレン、しそ油、ドコサヘキサエン酸、及びエイコサペンタエン酸から選ばれる少なくとも一種を使用し、プロポリス原塊等から抽出物を得た後、さらに冷蔵処理し、濾過又は遠心分離により不溶性成分が除去処理される。かかる処理により、特に冷蔵保存する環境下において、外観特性を低下させる不溶性成分の析出に伴う、白濁等の発生を抑止することができる。 In particular, when applied as a capsule produced by a transparent or translucent capsule film, a propolis extract-containing capsule having excellent appearance characteristics can be obtained.
(2) The propolis extract of the present embodiment is preferably obtained by using at least one selected from squalene, perilla oil, docosahexaenoic acid, and eicosapentaenoic acid as an extraction solvent, and obtaining an extract from propolis bulk Thereafter, it is further refrigerated, and insoluble components are removed by filtration or centrifugation. By such treatment, it is possible to suppress the occurrence of white turbidity accompanying the precipitation of insoluble components that deteriorate the appearance characteristics, particularly in an environment where refrigerated storage is performed.

（３）本実施形態のプロポリス抽出物は、より好ましくは、抽出溶媒として、スクワレンを使用し、プロポリス原塊等から抽出物を得た後、さらに零下処理し、濾過又は遠心分離により不溶性成分が除去処理される。かかる処理により、特に零下保存する環境下において、外観特性を低下させる不溶性成分の析出に伴う、白濁等の発生を抑止することができる。   (3) The propolis extract of this embodiment more preferably uses squalene as an extraction solvent, and after obtaining the extract from the propolis bulk, etc., it is further subjected to subzero treatment, and insoluble components are removed by filtration or centrifugation. Removed. By such treatment, it is possible to suppress the occurrence of white turbidity associated with the precipitation of insoluble components that deteriorate the appearance characteristics, particularly in an environment where the storage is performed under zero.

（４）本実施形態のプロポリス抽出物は、抽出溶媒として、好ましくは、スクワレン、ドコサヘキサエン酸、及びエイコサペンタエン酸が好ましく適用される。したがって、抽出処理後の濾過の操作性をより向上させ、効率的にプロポリス抽出物を得ることができる。   (4) The propolis extract of the present embodiment is preferably applied with squalene, docosahexaenoic acid, and eicosapentaenoic acid as the extraction solvent. Therefore, the operability of filtration after the extraction treatment can be further improved, and a propolis extract can be obtained efficiently.

（５）本実施形態のプロポリス抽出物は、特に好ましくは抗酸化剤として適用される。抗酸化剤として、飲食品、医薬品、化粧品の分野において好ましく適用することができる。   (5) The propolis extract of the present embodiment is particularly preferably applied as an antioxidant. As an antioxidant, it can apply preferably in the field | area of food-drinks, a pharmaceutical, and cosmetics.

なお、上記実施形態は以下のように変更してもよい。
・上記実施形態のプロポリス抽出物は、高い澄明性を有していることから、好ましくは透明又は半透明のカプセル皮膜により製造されるカプセル剤として適用される。カプセル剤としては、ソフトカプセル及びハードカプセルのいずれでもよい。また、胃で崩壊するカプセル剤であっても、腸内で崩壊するよう設計された腸溶性カプセルのいずれであってもよい。 In addition, you may change the said embodiment as follows.
-Since the propolis extract of the said embodiment has high clarity, it is preferably applied as a capsule manufactured with a transparent or translucent capsule film. As a capsule, either a soft capsule or a hard capsule may be used. Further, it may be either a capsule that disintegrates in the stomach or an enteric capsule designed to disintegrate in the intestine.

・上記実施形態のプロポリス抽出物は、これまでプロポリスにおいて見出されている効能、例えば抗菌作用、抗炎症作用、抗酸化作用、免疫賦活作用等の発揮を目的とした剤に適用することができる。しかしながら、上記実施形態のプロポリス抽出物は、これらの効能の発揮を目的とした剤又は使用に限定されるものではない。   -The propolis extract of the above embodiment can be applied to agents aimed at exhibiting the effects found in propolis so far, such as antibacterial action, anti-inflammatory action, antioxidant action, immunostimulatory action, etc. . However, the propolis extract of the above embodiment is not limited to an agent or use for the purpose of exhibiting these effects.

以下に試験例を挙げ、前記実施形態をさらに具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
（試験例１：プロポリス抽出物の製造）
まず、ブラジル産グリーンプロポリス原塊を粉砕機（ABSOLUTE3：大阪ケミカル社製）により５秒程度粉砕し、Test-Sieve（網目間２．８ｍｍ、６．５メッシュ）にて篩にかけて粉末を回収した。これを繰り返し、１ｋｇのプロポリス粉砕物を得た。 Although the test example is given below and the embodiment is described more specifically, the present invention is not limited to these.
(Test Example 1: Production of propolis extract)
First, the green propolis ingot from Brazil was pulverized for about 5 seconds with a pulverizer (ABSOLUTE3: manufactured by Osaka Chemical Co., Ltd.), and sieved with Test-Sieve (2.8 mm between meshes, 6.5 mesh) to collect the powder. This was repeated to obtain 1 kg of propolis pulverized product.

次に、３００ｍＬ容のビーカーに上記プロポリス粉砕物を３０ｇ、及び下記表１に記載される各例の油性成分をそれぞれ１５０ｇずつ加えた。スターラーバーを入れ、室温（２５℃）にて１６時間撹拌しながら抽出処理した。抽出処理後、濾過処理するために、濾過助剤として、珪藻土（SILIKA 600S：中央シリカ社製）を１２ｇずつ各ビーカーへ添加した。   Next, 30 g of the above propolis pulverized product and 150 g of each oil component of each example described in Table 1 were added to a 300 mL beaker. A stir bar was added and extraction was performed with stirring at room temperature (25 ° C.) for 16 hours. After the extraction treatment, 12 g of diatomaceous earth (SILIKA 600S: manufactured by Chuo Silica Co., Ltd.) was added to each beaker as a filter aid for filtration.

ブフナーロートに濾紙（アドバンテック社製のＮｏ．２）をセットして、各オイル３０ｇを用いて珪藻土５ｇのプレコートを実施し、吸引濾過した（最終的に、各例の油性成分の全量は１８０ｇとなる）。かかる吸引濾過の際の濾過性について下記の基準により評価した。   Filter paper (No. 2 manufactured by Advantech) was set on a Buchner funnel, and 5 g of diatomaceous earth was precoated with 30 g of each oil, and suction filtered (finally, the total amount of oily components in each example was 180 g. Become). The filterability during the suction filtration was evaluated according to the following criteria.

上記のように得られた濾液をプロポリス抽出物として、室温（２５℃）の環境下に３日間放置し、放置後の濾液について、一般的に透過光濁度の測定に用いられる波長６６０ｎｍを測定するとともに、外観特性について以下の基準により評価した。また、プロポリス抽出物中の有効成分である有機酸及び桂皮酸誘導体の含有量を、超高速液体クロマトグラフィ（ＵＨＰＬＣ）を用い、下記条件に従い測定した。結果をそれぞれ表１に示す。   The filtrate obtained as described above was left as a propolis extract in a room temperature (25 ° C.) environment for 3 days, and the filtrate after standing was measured at a wavelength of 660 nm, which is generally used for measurement of transmitted light turbidity. In addition, the appearance characteristics were evaluated according to the following criteria. Moreover, the content of the organic acid and cinnamic acid derivative which are active ingredients in the propolis extract was measured according to the following conditions using ultra high performance liquid chromatography (UHPLC). The results are shown in Table 1, respectively.

＜濾過性＞
濾過処理の際、“５”は、濾過速度が減少することなく流れるように短時間に濾過できる場合、“４”は、濾過速度がやや減少するが流れるように短時間に濾過できる場合、“３”は、濾過速度が減少するが濾過できる場合、“２”は、濾過速度が減少し、濾過に時間を要する場合、“１”は、濾過速度が減少し、途中で濾過できなくなる場合とした。 <Filterability>
In the filtration process, “5” indicates that the filtration can be performed in a short time so that the filtration rate does not decrease, and “4” indicates that the filtration rate can be reduced in a short time so that the filtration rate decreases slightly. “3” indicates that the filtration rate is reduced but filtration is possible, “2” indicates that the filtration rate is reduced and time is required for filtration, “1” indicates that the filtration rate is reduced, and filtration cannot be performed midway. did.

＜澄明性＞
各例の抽出液を５０ｍＬのサンプル瓶に入れ、標準光源下において、目視にて澄明性を評価した。“５”は、優れた澄明性を有する場合、“４”は、やや澄明性が低下する場合、“３”は、僅かに濁っている場合、“２”は、やや濁っている場合、“１”は、濁っている場合として評価した。 <Clarity>
The extract of each example was put into a 50 mL sample bottle, and clarity was evaluated visually under a standard light source. “5” is excellent clarity, “4” is slightly less clear, “3” is slightly cloudy, “2” is slightly cloudy, 1 "was evaluated as a cloudy case.

＜成分含有量＞
プロポリス抽出物中の有効成分として、有機酸（ｐ−クマル酸）、桂皮酸誘導体（アルテピリンＣ，バッカリン、ドルパニン）の４成分に着目し、それらの成分の含有量を、下記ＵＨＰＬＣ条件に従い測定した。 <Component content>
Focusing on the four components of organic acid (p-coumaric acid) and cinnamic acid derivatives (artepiline C, buccalin, dolphin) as active ingredients in propolis extract, the content of these components was measured according to the following UHPLC conditions: .

試料（２０μＬ）にエタノールを加え５０〜１００倍希釈した。これらをフィルター濾過し、分析試料とした。ｐ−クマル酸（４．８ｍｇ）、バッカリン（５．５７ｍｇ）、ドルパニン（３．９８ｍｇ）、アルテピリンＣ（４．８５ｍｇ）をメスフラスコ（２５ｍＬ容）に秤量し、エタノールでメスアップした。これを順次５倍希釈し、検量線作成用の標準溶液とした。得られた結果を用いて、絶対検量法より、プロポリス抽出物中の上記有機酸及び桂皮酸誘導体の合計含有量を測定した。   Ethanol was added to the sample (20 μL) and diluted 50 to 100 times. These were filtered and used as analysis samples. p-Coumaric acid (4.8 mg), buccalin (5.57 mg), dolpane (3.98 mg), artepilin C (4.85 mg) were weighed into a volumetric flask (25 mL volume) and diluted with ethanol. This was sequentially diluted 5-fold to obtain a standard solution for preparing a calibration curve. Using the obtained results, the total content of the organic acid and cinnamic acid derivative in the propolis extract was measured by an absolute calibration method.

＜ＵＨＰＬＣ条件＞
カラム：ＢＥＨ−Ｃ１８カラム（内径２．１ｍｍ×長さ１００ｍｍ）（ウォーターズ社製）、カラム温度：４５℃、注入量：１μＬ、ＰＤＡ：２８０ｎｍ。 <UHPLC conditions>
Column: BEH-C18 column (inner diameter 2.1 mm × length 100 mm) (manufactured by Waters), column temperature: 45 ° C., injection amount: 1 μL, PDA: 280 nm.

溶媒Ａ：水（０．１％リン酸）、溶媒Ｂ：アセトニトリル（０．１％リン酸）。
０分：溶媒Ａを９０％、溶媒Ｂを１０％→１０分：溶媒Ａを０％、溶媒Ｂを１００％（リニアグラジエント）、流速：０．３ｍＬ／分。 Solvent A: water (0.1% phosphoric acid), solvent B: acetonitrile (0.1% phosphoric acid).
0 min: Solvent A 90%, Solvent B 10% → 10 min: Solvent A 0%, Solvent B 100% (linear gradient), Flow rate: 0.3 mL / min.

表１に示されるように、各実施例及び各参考例において抽出溶媒として用いられる油性成分は、澄明性の高く、吸光度の低い着色が少ないプロポリス抽出液が得られることが確認された。一方、各比較例においては、室温保存環境下において、白濁が生じたり、又はＯＤ６６０ｎｍの数値が高く、外観特性が低下することが確認された。 As shown in Table 1, it was confirmed that the oil component used as the extraction solvent in each Example and each Reference Example provides a propolis extract with high clarity and low coloration with low absorbance. On the other hand, in each comparative example, it was confirmed that white turbidity occurred or the numerical value of OD660 nm was high and appearance characteristics were deteriorated in a room temperature storage environment.

（試験例２：プロポリス抽出物の冷却処理後の澄明性の評価）
（Ａ）試験例１において得られたプロポリス抽出物について、４℃の環境下で一晩（１６時間）放置した後、ブフナーロートに濾紙（アドバンテック社製のＮｏ．２）をセットして、吸引濾過を行った。試験試料として、実施例１，３，４、参考例２及び比較例１〜８のプロポリス抽出物を使用した。試験例１と同様の評価基準で、濾過性及び澄明性について評価した。尚、濾過装置は、保存環境温度に調整後に使用した。評価結果を表２に示す。 (Test Example 2: Evaluation of clarity after cooling treatment of propolis extract)
(A) The propolis extract obtained in Test Example 1 was allowed to stand overnight (16 hours) in an environment of 4 ° C., and then a filter paper (No. 2 manufactured by Advantech) was set on the Buchner funnel. Filtration was performed. As test samples, the propolis extracts of Examples 1 , 3, 4 , Reference Example 2 and Comparative Examples 1-8 were used. The filterability and clarity were evaluated according to the same evaluation criteria as in Test Example 1. The filtration device was used after adjustment to the storage environment temperature. The evaluation results are shown in Table 2.

（Ｂ）試験例１において得られたプロポリス抽出物について、−２０℃の環境下で一晩（１６時間）放置した後、ブフナーロートに濾紙（アドバンテック社製のＮｏ．２）をセットして、吸引濾過を行った。試験試料として、実施例１及び比較例１，７のプロポリス抽出物を使用した。試験例１と同様の評価基準で、濾過性及び澄明性について評価した。尚、濾過装置は、保存環境温度に調整後に使用した。測定結果を表２に示す。   (B) About the propolis extract obtained in Test Example 1, after leaving overnight (16 hours) in an environment of −20 ° C., set a filter paper (No. 2 manufactured by Advantech) on a Buchner funnel, Suction filtration was performed. The propolis extracts of Example 1 and Comparative Examples 1 and 7 were used as test samples. The filterability and clarity were evaluated according to the same evaluation criteria as in Test Example 1. The filtration device was used after adjustment to the storage environment temperature. The measurement results are shown in Table 2.

各例のプロポリス抽出物は、４℃の環境下で一晩（１６時間）放置した後は、いずれの試料も白濁が生じていた。表２に示されるように、実施例１，３，４及び参考例２の試験試料は、冷蔵保存後に簡易な濾過処理によって澄明性の高い抽出液が得られることが確認された。表２の各実施例及び参考例２のプロポリス抽出物は、冷蔵保存の環境下においても優れた外観特性が得られることが期待される。一方、各比較例においては、濾過処理しても澄明性の高い抽出液を得ることができなかった。また、各実施例及び参考例２において、濾過処理後においても、有機酸及び桂皮酸誘導体の含有量が、表１に示される常温保存後のプロポリス抽出物と比較して低下することはなかった。 The propolis extract of each example had white turbidity after being allowed to stand overnight (16 hours) in an environment of 4 ° C. As shown in Table 2, it was confirmed that the test samples of Examples 1 , 3 and 4 and Reference Example 2 were able to obtain highly clear extracts by simple filtration after refrigerated storage. Each of the examples in Table 2 and the propolis extract of Reference Example 2 is expected to provide excellent appearance characteristics even in a refrigerated storage environment. On the other hand, in each comparative example, even if it filtered, the extract with high clarity was not able to be obtained. Moreover, in each Example and Reference Example 2 , the content of the organic acid and cinnamic acid derivative did not decrease after filtration, as compared with the propolis extract after storage at room temperature shown in Table 1. .

また、各例のプロポリス抽出物は、−２０℃の環境下で一晩（１６時間）放置した後は、いずれの試料も白濁が生じていた。表２に示されるように、実施例１の試験試料は、零下保存後に簡易な濾過処理によって澄明性の高い抽出液が得られることが確認された。一方、各比較例においては、濾過処理しても澄明性の高い抽出液を得ることができなかった。実施例１のスクワレンを用いたプロポリス抽出物は、零下保存の環境下においても優れた外観特性が得られることが期待される。また、実施例１において、濾過処理後においても、有機酸及び桂皮酸誘導体の含有量が、表１に示される常温保存後のプロポリス抽出物と比較して低下することはなかった。   Moreover, after leaving the propolis extract of each example in the environment of -20 degreeC overnight (16 hours), all samples had white turbidity. As shown in Table 2, it was confirmed that the test sample of Example 1 obtained a highly clear extract by simple filtration after storage under zero. On the other hand, in each comparative example, even if it filtered, the extract with high clarity was not able to be obtained. The propolis extract using the squalene of Example 1 is expected to have excellent appearance characteristics even in an environment of storage under zero. Moreover, in Example 1, even after the filtration treatment, the contents of the organic acid and cinnamic acid derivative did not decrease as compared with the propolis extract after normal temperature storage shown in Table 1.

（試験例３：プロポリス抽出物の抗酸化活性試験）
上記のように得られた実施例１，３，４及び参考例２のプロポリス抽出物について、抗酸化活性について測定した。実施例１は−２０℃保存及び濾過処理後のプロポリス抽出物を使用し、実施例３，４及び参考例２は、４℃保存及び濾過処理後のプロポリス抽出物を使用した。比較対照として、抽出処理前のスクワレン、しそ油、ドコサヘキサエン酸、及びエイコサペンタエン酸の各油性成分を用いた。ブランクとして蒸留水を使用した。 (Test Example 3: Anti-polish activity test of propolis extract)
Antioxidant activity was measured for the propolis extracts of Examples 1 , 3, 4 and Reference Example 2 obtained as described above. Example 1 used a propolis extract after storage at −20 ° C. and filtration , and Examples 3, 4 and Reference Example 2 used a propolis extract after storage at 4 ° C. and filtration. As comparative controls, oily components of squalene, perilla oil, docosahexaenoic acid, and eicosapentaenoic acid before extraction were used. Distilled water was used as a blank.

抗酸化活性は、ラジカル捕捉能試験により測定した。本試験では、ラジカル状態で５１７ｎｍの極大吸収を持つＤＰＰＨ（1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl）が抗酸化物質により還元されて退色することを利用するものである。   Antioxidant activity was measured by a radical scavenging ability test. This test utilizes the fact that DPPH (1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl) having a maximum absorption of 517 nm in a radical state is reduced by an antioxidant and fades.

まず、９６ウェルのプレートに溶媒（２０％ＡｃＯＥｔ／ＥｔＯＨ）を５０μＬずつ分注した。次に、適宜希釈した各濃度の各試料を１００μＬずつ添加した（Ｎ＝２）。ＤＰＰＨ（２０％ＡｃＯＥｔ／ＥｔＯＨ）を５０μＬずつ分注し、反応を開始した。反応開始３０分後にプレートリーダーでＯＤ５２０ｎｍを測定した。この時の値をＡｓとする。ブランクの値として、ＤＰＰＨの代わりに上記各溶媒を加えたウェルも用意し、同様に測定した。この時の値をＡｃとする。上記のように得られた各数値より、吸光度Ａ（Ａ＝Ａｓ−Ａｃ）を求めた。吸光度Ａを用いてGraphPad Prism5（ＭＤＦ社製）を用いて、得られたグラフよりＩＣ₅₀を算出した。結果を表３に示す。 First, 50 μL of a solvent (20% AcOEt / EtOH) was dispensed into a 96-well plate. Next, 100 μL of each sample of each concentration diluted appropriately was added (N = 2). DPPH (20% AcOEt / EtOH) was dispensed in 50 μL aliquots to initiate the reaction. OD520 nm was measured with a plate reader 30 minutes after the start of the reaction. The value at this time is assumed to be As. As a blank value, a well to which each of the above solvents was added instead of DPPH was prepared and measured in the same manner. The value at this time is Ac. Absorbance A (A = As-Ac) was determined from the numerical values obtained as described above. IC ₅₀ was calculated from the obtained graph using GraphPad Prism 5 (manufactured by MDF) using absorbance A. The results are shown in Table 3.

表３に示されるように、スクワレン、しそ油、ドコサヘキサエン酸、及びエイコサペンタエン酸から得られるプロポリス抽出物について、優れた抗酸化活性を有することが確認された。 As shown in Table 3, it was confirmed that the propolis extract obtained from squalene, perilla oil, docosahexaenoic acid, and eicosapentaenoic acid has excellent antioxidant activity.

次に、上記実施形態及び別例から把握できる技術的思想について、それらの効果とともに以下に追記する。
（ａ）前記抽出溶媒は、スクワレンであって、前記抽出物は、さらに−１０℃以下に冷却した後、濾過又は遠心分離により不溶性成分を除去したものである前記プロポリス抽出物。従って、この（ａ）に記載の発明によれば、プロポリス抽出物を零下条件下において保存した場合であっても、澄明性等の外観特性を低下させることがない。 Next, technical ideas that can be grasped from the above-described embodiment and other examples will be described below together with their effects.
(A) The propolis extract, wherein the extraction solvent is squalene, and the extract is further cooled to −10 ° C. or less and then insoluble components are removed by filtration or centrifugation. Therefore, according to the invention described in (a), appearance characteristics such as clarity are not deteriorated even when the propolis extract is stored under subzero conditions.

Claims (6)

抽出原料としてプロポリス原塊、又はプロポリス原塊から水若しくは親水性有機溶媒を用いた抽出処理後の残渣を使用し、
抽出溶媒としてスクワレン、ドコサヘキサエン酸、及びエイコサペンタエン酸から選ばれる少なくとも一種の油性成分のみを用いて得られる抽出物を含んでなるプロポリス抽出物。 Use propolis bulk as an extraction raw material, or a residue after extraction treatment using water or a hydrophilic organic solvent from propolis bulk,
Squalene as the extraction solvent, de Kosahekisaen acid, and eicosapentaenoic acid or al least one propolis extract comprising extract obtained using only oil component selected. 前記抽出物は、さらに１０℃以下に冷却した後、濾過又は遠心分離により不溶性成分を除去したものであることを特徴とする請求項１に記載のプロポリス抽出物。 Before Symbol extract further after cooling to 10 ° C. or less, propolis extract according to claim 1, characterized in that is obtained by removing the insoluble components by filtration or centrifugation. 抽出原料としてプロポリス原塊、又はプロポリス原塊から水若しくは親水性有機溶媒を用いた抽出処理後の残渣を使用し、
抽出溶媒としてスクワレン、ドコサヘキサエン酸、及びエイコサペンタエン酸から選ばれる少なくとも一種の油性成分のみを用いて抽出物を得る工程を含むプロポリス抽出物の製造方法。 Use propolis bulk as an extraction raw material, or a residue after extraction treatment using water or a hydrophilic organic solvent from propolis bulk,
Squalene as the extraction solvent, de Kosahekisaen acid, and a manufacturing method of the propolis extract comprises obtaining an extract by using only at least one oily component selected eicosapentaenoic acid or al. 前記抽出物を得た後、さらに該抽出物を１０℃以下に冷却し、濾過又は遠心分離により不溶性成分を除去する工程を含むことを特徴とする請求項３に記載のプロポリス抽出物の製造方法。 After obtaining the pre Symbol extract, further cooling the extract to 10 ° C. or less, the production of propolis extract according to claim 3, characterized in that it comprises a step of removing the insoluble components by filtration or centrifugation Method. 請求項１又は請求項２に記載のプロポリス抽出物を含有するカプセル。   A capsule containing the propolis extract according to claim 1 or 2. 請求項１又は請求項２に記載のプロポリス抽出物を有効成分として含有する抗酸化剤。   The antioxidant containing the propolis extract of Claim 1 or Claim 2 as an active ingredient.