JP5533008B2 - 核酸増幅装置 - Google Patents
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Description
まず、SYBR(登録商標)Green Iを用いるインターカレーター法等が挙げられる。インターカレーター法では、二本鎖DNAに結合することで蛍光を発する性質を有するインターカレーターを用いる。このインターカレーターをPCR反応の過程で生成する二本鎖DNAに結合させ、これに対して励起光を照射することで蛍光が発せられる。この蛍光強度を検出することで、PCR増幅産物の生成量をモニターする。このインターカレーター法では、ターゲットに特異的な蛍光標識プローブを設計・合成する必要がなく、種々のターゲットの測定に簡便に利用できる。
前記核酸増幅反応を行なうウェルを複数備え、
前記ウェルごとに設けられた、個別に加熱温度と加熱時間を制御可能な加熱部と、
前記ウェルごとに設けられた核酸増幅を検出する蛍光検出部と、
前記ウェルごとに設けられた特定波長の光を照射可能な光学手段と、
を少なくとも備え、
前記加熱部及び前記蛍光検出部と、前記光学手段とが、前記ウェルを挟んで対向して配置され、
前記加熱部では、前記蛍光検出部によって検出された核酸増幅量に基づいて各ウェルにおける核酸の増幅率が一定となるように温度制御が行われる核酸増幅装置を提供する。ウェルごとに加熱部と検出部を備えることで、ウェル内での反応をウェルごとに個別に制御できる。
dsDNAからRNAを増幅産物として得るIVT法(In Vitro Transcription);
逆転写酵素のRNaseH活性を用いてRNAをトリミングし、RNAを増幅産物として得るTRC法(Transcription Reverse transcription Concerted amplification);
逆転写酵素等を用いてRNAプロモーターが組み込まれたdsDNAとし、次にRNAポリメラーゼを用いてdsNDAからRNAを増幅産物として得るNASBA法(Nucleic Acid Sequence-Based Amplification);
RNAとDNAのキメラ構造からなるプライマーを利用し、RNAからssDNAを増幅産物として得るSPIA法;
DNAのループ形成を利用し、一定温度でDNAやRNAからdsDNAを増幅産物として得るLAMP法(Loop-Mediated Isothermal Amplification);
複数の酵素を組み合わせて用い、一塩基の違い(SNP)を正確に識別しながらdsDNAからdsDNAを増幅産物として得るSMAP法(SMartAmplification Process);
DNAとRNAが結合した合成キメラ・プライマーを用いて、dsDNAからdsDNAを増幅産物として得るICAN法(Isothermal and Chimeric primer-initiated Amplification of Nucleic acids)等が挙げられる。
11,21 反応基板
12,22 加熱部
13,23 ペルチェ素子
14,24 光源
15,25 導光板
16,26 検出部
17 フィルター膜
18,27 測定基板
Claims (10)
- 核酸増幅反応を行なう核酸増幅装置であって、
前記核酸増幅反応を行なうウェルを複数備え、
前記ウェルごとに設けられた、個別に加熱温度と加熱時間を制御可能な加熱部と、
前記ウェルごとに設けられた核酸増幅を検出する蛍光検出部と、
前記ウェルごとに設けられた特定波長の光を照射可能な光学手段と、
を少なくとも備え、
前記加熱部及び前記蛍光検出部と、前記光学手段とが、前記ウェルを挟んで対向して配置され、
前記加熱部では、前記蛍光検出部によって検出された核酸増幅量に基づいて各ウェルにおける核酸の増幅率が一定となるように温度制御が行われる核酸増幅装置。 - 前記核酸増幅反応は、少なくともPCR(polymerase chain reaction)法により行なわれる請求項1記載の核酸増幅装置。
- 前記核酸増幅反応は、等温で行われる請求項1または2に記載の核酸増幅装置。
- 前記加熱部は、薄膜トランジスタにより形成され、スイッチング制御される請求項1から3のいずれか一項に記載の核酸増幅装置。
- 前記加熱部は、発熱抵抗体により形成され、薄膜トランジスタによりスイッチング制御される請求項1から4のいずれか一項に記載の核酸増幅装置。
- 定温制御するペルチェ素子を備える請求項1から5のいずれか一項に記載の核酸増幅装置。
- 前記光学手段は、特定波長の励起光を発する光源と、前記励起光を各ウェルに導入する導光板と、を少なくとも備える請求項1から6のいずれか一項に記載の核酸増幅装置。
- 前記ウェルと前記蛍光検出部との間に、特定の波長の光を透過するフィルター膜を備える請求項1から7のいずれか一項に記載の核酸増幅装置。
- 前記ウェルと前記導光板との間に、特定の波長の光を透過するフィルター膜を備える請求項7記載の核酸増幅装置。
- 前記光源が、発光ダイオードである請求項7記載の核酸増幅装置。
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